Orientador: Jane Megido / Banca: Hélio Langoni / Banca: Maria Luiza Carrieri / Banca: Marcos Bryan Heinemann / Banca: Paulo Eduardo Brandão / Resumo: O controle da raiva é mundialmente reconhecido como um dos grandes desafios mundiais. As diferentes variantes virais isoladas das diversas espécies animais apresentam características imunogênicas distintas assim como na sequência de nucleotídeos, o que permite sua classificação em variantes e genótipos. Além disso, diferenças na patogenicidade também foram observadas através de inoculação experimental em camundongos e cultivo celular. Os mecanismos pelos quais o vírus rábico (RABV) infecta um indivíduo e se perpetua na natureza ainda não foram totalmente esclarecidos. Entretanto alguns fatores que levam ao sucesso da infecção já foram estabelecidos, entre os mais importantes podemos citar a capacidade de induzir a apoptose das células de defesa e preservar a integridade e funcionalidade dos neurônios. Estes eventos são mediados por citocinas que regulam diversos genes envolvidos nesse complexo processo ainda pouco compreendido. Considerando a diversidade de linhagens virais circulantes e a complexidade dos eventos envolvidos na neuroinvasão do RABV o presente projeto avaliou os genes mais importantes envolvidos na expressão gênica do processo de resposta immune inata e adaptativa após infecção e avaliou a patogenicidade de diferentes amostras virais através da inoculação experimental em camundongos SPF (Specific Pathogen Free) realizando a quantificação viral por qRT-PCR e imunofluorescência das amostras coletadas / Abstract: Rabies control is considered a worldwide challenge. Different virus strains (RABV) are isolated from different species, they have distinct immunogenic characteristics as well in their nucleotides sequence, allowing their classification into variants and genotypes. Furthermore, differences in pathogenicity have also been observed through experimental inoculation in mice and cell cultures. The mechanisms by which RABV infects an individual and perpetuated the infection in nature have not been fully clarified. However some factors that lead to successful infection are already established, among the most important we can mention the ability to induce apoptosis of T cells and maintain the integrity and functionality of neurons. These events are mediated by cytokines that regulate several genes involved in this complex process still poorly understood. Considering the diversity of viral strains circulating and the complexity of events involved in the neuroinvasiveness of RABV this project aims to study the gene expression pathway, innate and adaptative immune response and pathogenicity of different virus strain by means of experimental inoculation in mice, clinical evaluation and avaliating viral replication by DFA and qRT-PCR / Doutor

Orientadores: Angela Maria Moraes, Ronaldo Zucatelli Mendonça, Thomas Noll / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Quimica / Made available in DSpace on 2018-08-09T05:00:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Batista_FabianaReginaXavier_D.pdf: 3826216 bytes, checksum: 4aa1d7076a6bcbd23c7d0dcbd794541c (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: Células embrionárias de dípteros como as de Drosophila melanogaster S2 estão sendo utilizadas com sucesso na expressão de diversas proteínas recombinantes. Em comparação a células de mamíferos, este sistema de expressão mostra-se capaz de realizar modificações pós-tradução na complexidade requerida, apresentando maior facilidade de cultivo. O objetivo deste trabalho foi formular um meio de cultura livre de soro e de outras fontes de proteínas de origem animal, que proporcionasse o crescimento de células S2, aplicável a linhagens transfectadas (S2AcGPV2) produtoras da glicoproteína G do vírus da raiva (GPV). Para tal, foi empregado o meio basal IPL-41 e avaliados os efeitos das concentrações de glicose, frutose, lactose, glutamina, metionina e tirosina, do hidrolisado de leveduras yeastolate, do agente Pluronic F68, assim como de uma emulsão lipídica, sobre a concentração de células viáveis e a viabilidade celular. Em adição, foram avaliadas a velocidade específica de crescimento, a produtividade celular e a produção de GPV nas formulações testadas. Os ensaios foram realizados primeiramente em frascos do tipo schott, e, após a obtenção da formulação do meio de cultura mais adequada, realizaram-se ensaios cinéticos, em maior escala, em frascos do tipo spinner, nos quais se pode estudar a influência da concentração de oxigênio dissolvido e do pH no cultivo. Durante o estudo foram empregados dois modos de operação de cultivo, batelada e batelada alimentada. Nos estudos enfocando a formulação do meio de cultura, verificou-se que o meio IPL-41 suplementado com 10 g/L de glicose, 0,5 g/L de frutose, 2 g/L de lactose, 3,5 g/L de glutamina, 0,6 g/L de tirosina, 1,48 g/L de metionina, 6 g/L de yeastolate, 1 % de emulsão lipídica e 0,05 % de Pluronic F68 mostrou-se como o mais adequado para a obtenção de elevadas concentrações celulares (superiores a 300 x 105 células/mL). Com esta formulação, foram realizados os ensaios em frascos spinner, no sistema Cellferm-pro®. Neste sistema as células S2AcGPV2 atingiram a maior concentração (368 x105 células/mL) e o maior teor de GPV (9,39 ng/106 células) quando mantidas na concentração de 40 % de oxigênio dissolvido e pH 6,3. A avaliação do metabolismo celular mostrou que asparagina, serina, prolina, glutamina, glicose e a maltose foram os principais nutrientes consumidos e que alanina, lactato e amônia foram os principais metabólitos produzidos / Abstract: Drosophila melanogaster Schneider 2 cells have been used with success to produce several recombinant proteins. This expression system presents several advantages when compared with mammalian cells expression system, and usually provide an adequate postradutional protein processing, being easier to culture. The aim of this work was to produce an animal component-free medium for S2 cells growth, and also for transfected cells (S2AcGPV2) producing the G glycoprotein from rabies virus (GPV). The basal IPL-41 medium was used and the effects of supplements glucose, fructose, lactose, glutamine, methionine, tyrosine, yeastolate ultrafiltrate, Pluronic F68 and lipid emulsion on viable cell concentration and cellular viability were evaluated. In addition, the cell specific growth rate, cellular productivity and GPV production were analyzed in the formulations studied. The experiments were carried out in schott flasks, as well as in spinner flasks. The effects of dissolved oxygen concentration and pH were evaluated in spinner flasks. During the study, batch and fed- batch mode operation were used. In the studies focusing media formulation developed, IPL-41 supplemented with 10 g/L of glucose, 0.5 g/L of fructose, 2 g/L of lactose, 3.5 g/L of glutamine, 0.6 g/L of tyrosine, 1.48 g/L of methionine, 6 g/L of yeastolate, 1 % of lipid emulsion and 0.05 % of Pluronic F68 provided high cell density (above 300 x105 cells/mL). In the experiments performed in spinner flasks, using the Cellferm-pro® system, S2AcGPV2 cells reached the highest cell concentration (368 x105 cells/mL) and protein content (9.39 ng/106 cells), at 40 % of dissolved oxygen concentration and pH of 6.3. The cell metabolism shown that, amino acids as asparagine, serine, proline, glutamine, and carbohydrates as glucose and maltose were consumed. The main metabolities produced were alanine, ammonia and lactate / Doutorado / Desenvolvimento de Processos Biotecnologicos / Doutor em Engenharia Química

Submitted by Hellen Luz (hellencrisluz@gmail.com) on 2017-09-20T15:56:14Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_NeuropatologiaExperimentalInduzida.pdf: 11978675 bytes, checksum: 42960f5934592c55ca43814444848b98 (MD5) / Rejected by Irvana Coutinho (irvana@ufpa.br), reason: Aguardar as orientações on 2017-10-10T16:50:18Z (GMT) / Submitted by Hellen Luz (hellencrisluz@gmail.com) on 2017-10-17T18:01:26Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_NeuropatologiaExperimentalInduzida.pdf: 11978675 bytes, checksum: 42960f5934592c55ca43814444848b98 (MD5) / Approved for entry into archive by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2017-11-23T16:49:31Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_NeuropatologiaExperimentalInduzida.pdf: 11978675 bytes, checksum: 42960f5934592c55ca43814444848b98 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-11-23T16:49:32Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_NeuropatologiaExperimentalInduzida.pdf: 11978675 bytes, checksum: 42960f5934592c55ca43814444848b98 (MD5) Previous issue date: 2011-04-14 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Muitos esforços têm sido dedicados para o entendimento da neuropatogênese das encefalites virais a partir de trabalhos experimentais. Porém, poucos estudos investigaram a neuropatologia experimental de rabdovírus amazônicos, como a induzida pelos vírus Itacaiunas e Curionopolis, recentemente agrupados em um novo gênero denominado Bracorhabdovirus, proposto para a família Rhabdoviridae. Esses vírus apresentam tropismo por neurônios do SNC de camundongos neonatos infectados experimentalmente, entretanto, pouco se conhece a respeito da resposta imune do SNC contra esses agentes. O presente trabalho analisou aspectos da resposta imune de células residentes do SNC de camundongos neonatos, após infecção experimental pelos vírus Itacaiunas e Curionopolis, in vivo e in vitro. Para alcançar esses objetivos, foram utilizadas técnicas histoquímica e imunohistoquímica para detecção de microglias ativadas e astrócitos, respectivamente, em secções de cérebros de camundongos infectados. A quantificação das células ativadas foi realizada em regiões do hipocampo, utilizando técnicas estereológicas. Além disso, foi investigada a expressão de citocinas pró e antiinflamatórias produzidas por células do SNC em cultivos primários infectados com os vírus Itacaiunas e Curionopolis por ensaios imunoenzimáticos (ELISA), a partir de sobrenadantes de co-culturas enriquecidas de microglias/neurônios e de astrócitos/neurônios. Foi também analisada a expressão de óxido nítrico por citoquímica utilizando o reagente DAF-FM diacetato (4-amino-5-methylamino-2,7′-difluorofluorescein diacetate). Os resultados mostraram que cérebros de camundongos infectados com os vírus Curionopolis 2d.p.i. e Itacaiunas 4 e 7d.p.i. apresentaram discreta ativação microglial, porém, em camundongos infectados com o vírus Curionopolis 5d.p.i houve intensa ativação. A imunohistoquímica revelou marcação de poucos astrócitos em animais infectados com os vírus Curionopolis 2d.p.i e Itacaiunas 4 e 7d.p.i. no hipocampo. Por outro lado, nos camundongos infectados com Curionopolis 5d.p.i., houve aumento de astrócitos, principalmente na região da fissura hipocampal. Os resultados obtidos a partir dos ensaios imunoenzimáticos mostraram que houve grande produção de IL-12p40 nas culturas de células do SNC infectadas com os vírus, 48 e 96h.p.i. Baixos níveis de TGF-β foram detectados após 48 horas de infecção com os vírus em estudo, no entanto, observou-se aumento da expressão dessa citocina após 96h.p.i. Também foi demonstrado, com 48 horas de infecção, baixos níveis da citocina IL-10, aumentando após 96 horas para ambos os vírus, principalmente nas co-culturas enriquecidas de microglias/neurônios infectados pelo vírus Itacaiunas. Culturas de células do SNC infectadas com os vírus Itacaiunas 48 e 96h.p.i. e Curionopolis 48h.p.i. mostraram discreta produção de óxido nítrico, porém houve aumento nessa produção em culturas infectadas com o vírus Curionopolis 96h.p.i. Esses resultados sugerem que há predominância de uma resposta pró-inflamatória nos tempos iniciais da infecção para ambos os vírus e uma tentativa de modulação dessa resposta com a produção de citocinas antiinflamatórias nos tempos tardios. / Experimental studies are making many efforts to understand the neuropathogenesis of viral encephalitis. However, a few is known about the Central Nervous System (CNS) response against amazonic rhabdovirus. The virus Itacaiunas e Curionopolis were classified preliminary as members of the Rhabdoviridae family. It was suggested for these virus to be included in a new genus, Bracorhabdovirus. They are neurotropic virus and little is known about the inflammatory response of the CNS against these virus. This study examined aspects of the immune response of newborn mice CNS resident cell after experimental infection by Itacaiunas and Curionopolis virus, in vivo and in vitro. To achieve these goals, histochemical and immunohistochemical techniques were used to detect activated microglia and astrocytes, respectively, in sections of the brains of infected mice. The quantification of these cells were performed in hippocampal regions using stereological techniques. Furthermore, was investigated the expression of proinflammatory and anti-inflammatory cytokines produced by CNS cells in primary cultures infected with virus Itacaiunas and Curionopolis by using enzyme immunoassay (ELISA) from supernatants co-cultures enriched of microglia/neurons and astrocytes/neurons. The expression of nitric oxide was also analyzed by using cytochemical reagent DAF-FM diacetate (4-amino-5-methylamine-2,7-difluorofluorescein-diacetate). As a result, age matched control animals of each group did not present activated microglia or astrocytosis, as well as, both Curionopolis and Itacaiunas infected subjects early after the inoculation (2d.a.i. and 4d.a.i respectively). However at 5th d.a.i., Curionopolis infections significant increase in the number of activated microglias and reactive astrocytes were detected whereas at the 7th d.a.i. after Itacaiunas infection only minimal activation of microglia and reactive astrocytosis was detected. The results from immunoassays showed great production of IL-12p40 in cultures of CNS cells infected with both virus, 48 and 96 hours after infection (h.a.i.). Low levels of TGF-β and IL-10 were detected after 48 hours of infection with both virus, however, was observed increased expression of this cytokines after 96 hours. CNS cell cultures infected with Curionopolis virus 48h.p.i. and Itacaiunas virus 48 and 96h.a.i. showed a slight production of nitric oxide, but it was increased in cultures infected with Curionopolis virus 96h.a.i. These results suggest that the proinflammatory response is dominant in both virus, however, it seems that the anti-inflammatory cytokines try to modulate the inflammatory response of the late days pos-inoculation.

Orientador: José Rafael Modolo / Banca: Luciana Maria Lunardi Campos / Banca: Luiz Carlos de Souza / Resumo: Neste trabalho foi elaborado questionário e o mesmo foi aplicado à uma parcela da população (cerca de 8%) que se dirigia aos postos de vacinação durante as Campanhas de Vacinação contra raiva nos municípios de Botucatu e Lençóis Paulista, ambas realizadas no ano de 2003. Questionário que abordava assuntos como a higiene do proprietário no trato com o cão. Também buscava-se informações sobre a posse responsável do proprietário para com seu animal de estimação. E por fim avaliava o grau de informação da população sobre a raiva, doença cujo controle é alcançado vacinando-se os uma parcela significativa de cães e gatos de uma região. Quando das 18 questões analisadas, verificou-se alguns pontos onde os conhecimentos dos entrevistados não traduziam as atitudes corretas em relação aos procedimentos saudáveis no relacionamento com seus animais. Em relação ao conhecimento sobre a raiva e os procedimentos adotados perante as hipóteses levantadas pelo questionário, as respostas atingiram níveis satisfatórios. Os resultados obtidos fornecerão subsídios para se identificar deficiências e se planejar medidas de educação em saúde, aplicáveis a diferentes extratos populacionais, abordando os temas discutidos aqui, de maneira acessível. / Abstract: In this report a questionnaire was elaborated and applied in one part of the population (about 8%) who went to vaccination places during the campaigns against rabies in Botucatu and Lençóis Paulista, both achieved in the 2003. The questionnaire which approached subjects such the hygiene of the owner in the treatment with his dog. It was also looked for information about the responsible ownership of his pet. And at last it was evaluated the degree of knowledge of the population about rabies, disease which control is reached vaccinating a significant number of cats and dogs of a region .Some points were detected among the eighteen questions analysed, where the interviewers knowledge didnþt translate the correct attitudes related to healthy procedures in the relationship with their animals. In relation to the knowledge about rabies and the procedures adopted over the raised hypotheses from the questionnaire, the answers reached satisfactory levels. The results obtained will provide subsidies to identify deficiencies and plan measurements of Education in health, applied in different populations, approaching the subjects discussed here, in an accessible way. / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:17Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-02-08Bitstream added on 2014-06-13T20:08:21Z : No. of bitstreams: 1 frias_dfr_me_jabo.pdf: 647256 bytes, checksum: 56a7d9c80f805156699c273aa7a7a23c (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Um elevado número de tratamentos anti-rábicos profiláticos são efetuados, anualmente, em pessoas envolvidas em agravos com animais. Assim, este trabalho objetivou avaliar os registros e a conduta de profilaxia anti-rábica humana no Município de Jaboticabal, de 2000 a 2006, analisando as informações das fichas de atendimento e a distribuição geográfica dos agravos. Os dados foram tabulados em Excel e analisados com softwares EpiInfo e MapInfo. Também foi calculado o custo direto com as vacinas anti-rábicas humanas. Em 3056 fichas analisadas, computou-se um agravo para cada 160 habitantes, com maior ocorrência em residências e nos bairros da região central da cidade, e incremento de casos nos meses de janeiro, julho, agosto e dezembro. A faixa etária mais atingida foi de 0 a 15 anos, destacando-se o sexo masculino. Com relação à espécie animal envolvida, a canina foi a responsável pela maioria dos agravos, sendo 67,5% dos cães e 22,2% dos gatos declarados vacinados; os cães estavam sadios em 77,8% dos casos. Das pessoas agredidas, 81,6% receberam profilaxia pós-exposição, num total de 7.108 doses de vacina e a um custo aproximado de R$179.105,14. A análise detalhada dos dados, aliada ao fato de Jaboticabal ser considerada região controlada para a raiva, permitem questionar que 1.720 pessoas podem ter recebido vacina sem necessidade. Uma maior atenção deve ser dispensada aos registros de atendimento a agravos por animais, e uma análise acurada e mais criteriosa destes deve ser feita para que os tratamentos sejam instituídos adequadamente. Como a maioria dos acidentes ocorre em residências, portanto com cães e gatos domiciliados e vacinados, recomendam-se programas educativos para promoverem a posse responsável e o conhecimento dos cuidados que as pessoas devem ter com seus animais de estimação. / A large number of rabies post-exposure treatment is annually given to humans attacked by animals. This study was aimed to evaluate the records and the conduct of rabies prophylaxis in humans, in the municipality of Jaboticabal, from 2000 to 2006, through the analysis of patients´ records and geographic distribution of the accidents. The data were arranged in Excel® spreadsheets and were further analysed by EpiInfo® and MapInfo®. Also, the direct costs of given vaccines were calculated. From 3,056 patient´s cards, it was observed 1 animal attack per 160 inhabitants, with higher occurence in residences, central neighborhoods and concentration of attacks in the months of January, July, August and December. The most affected age group was that of 0-15 years old, with predominance in males. As to animal species, dogs were responsible for causing the majority of accidents. 67.5% of dogs and 22.2% of cats had already been vaccinated before attacking. In 77.8% of occurences, the dogs were healthy. As to attacked humans, 81.6% of them received post-exposure prophylaxis, totalizing 7,108 antirabies vaccine doses at an approximate cost of R$179.105,14. Thorough data analysis and the fact that Jaboticabal lies in a rabies controlled region allow to question the administration of post-exposure vaccination in 1,720 persons. More attention should be payed to filling out and interpreting patient´s records correctly, so that treatments can be properly established. As most attacks happen in the residences, where cats and dogs are usually domiciled and vaccinated, it is essencial to develop educational programs that promote responsible pet ownership and adequate pet handling and care.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:17Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-02-12Bitstream added on 2014-06-13T20:27:44Z : No. of bitstreams: 1 gabriel_fhl_me_botfmvz.pdf: 438014 bytes, checksum: dc671194fcc943ed26a4c47198491747 (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / Neste trabalho foi elaborado questionário e o mesmo foi aplicado à uma parcela da população (cerca de 8%) que se dirigia aos postos de vacinação durante as Campanhas de Vacinação contra raiva nos municípios de Botucatu e Lençóis Paulista, ambas realizadas no ano de 2003. Questionário que abordava assuntos como a higiene do proprietário no trato com o cão. Também buscava-se informações sobre a posse responsável do proprietário para com seu animal de estimação. E por fim avaliava o grau de informação da população sobre a raiva, doença cujo controle é alcançado vacinando-se os uma parcela significativa de cães e gatos de uma região. Quando das 18 questões analisadas, verificou-se alguns pontos onde os conhecimentos dos entrevistados não traduziam as atitudes corretas em relação aos procedimentos saudáveis no relacionamento com seus animais. Em relação ao conhecimento sobre a raiva e os procedimentos adotados perante as hipóteses levantadas pelo questionário, as respostas atingiram níveis satisfatórios. Os resultados obtidos fornecerão subsídios para se identificar deficiências e se planejar medidas de educação em saúde, aplicáveis a diferentes extratos populacionais, abordando os temas discutidos aqui, de maneira acessível. / In this report a questionnaire was elaborated and applied in one part of the population (about 8%) who went to vaccination places during the campaigns against rabies in Botucatu and Lençóis Paulista, both achieved in the 2003. The questionnaire which approached subjects such the hygiene of the owner in the treatment with his dog. It was also looked for information about the responsible ownership of his pet. And at last it was evaluated the degree of knowledge of the population about rabies, disease which control is reached vaccinating a significant number of cats and dogs of a region .Some points were detected among the eighteen questions analysed, where the interviewers knowledge didnþt translate the correct attitudes related to healthy procedures in the relationship with their animals. In relation to the knowledge about rabies and the procedures adopted over the raised hypotheses from the questionnaire, the answers reached satisfactory levels. The results obtained will provide subsidies to identify deficiencies and plan measurements of Education in health, applied in different populations, approaching the subjects discussed here, in an accessible way.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:18Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-12-12Bitstream added on 2014-06-13T20:35:37Z : No. of bitstreams: 1 lopes_mc_me_araca.pdf: 187442 bytes, checksum: e5c382aecfe4bb38f157a656bfad5f2a (MD5) / As análises antigênica e genética são ferramentas importantes para o estudo da epidemiologia da raiva em uma região. A recuperação e reisolamento viral a partir de amostras conservadas por longos períodos em temperatura de congelamento é essencial para estudos retrospectivos. Porém, o tempo de conservação, associado a repetidos ciclos de congelamento e descongelamento, promove uma perda significativa na viabilidade do vírus, condição esta que pode ser contornada com a utilização de técnicas de biologia molecular, como a RT-PCR. Com o objetivo de verificar a viabilidade e detectar o RNA do vírus rábico, 95 amostras com diagnóstico positivo e armazenadas por 4 a 13 anos a –20 e –80ºC foram avaliadas por inoculação intracerebral em camundongos e RT-PCR. Apenas 33,6% (32/95) das amostras inoculadas em camundongos foram positivas, enquanto que a RTPCR detectou o genoma viral em 65,3% (62/95). Houve diferença estatisticamente significativa (p<0,0001) na viabilidade das amostras e na detecção do genoma viral na amostras armazenadas por mais de 10 anos, sendo a porcentagem de positividade de 22,1% e 59,7%, respectivamente. O presente estudo confirma a importância da RT-PCR na detecção do genoma viral em amostras conservadas por longo período de tempo, incluindo aquelas em estado visível de decomposição. / The antigenic and genetic analyses are important tools for retrospective study of rabies epidemiology in a region. The recovery and viral re-isolation from samples conserved for long periods in freezing temperature are essential for these studies. However, time conservation, associated with temperature variations, causes a significative virus viability loss. On the other hand, molecular tools, such as RT-PCR, can overcome this condition. For this purpose, 95 positive samples stored for 4 to 13 years at -20 and -80ºC were evaluated by intracerebral inoculation in mice and RT-PCR. Of this total, only 33,6% (32/95) had been positive in the intracerebral inoculation, while RT-PCR detected the viral genoma in 65.3% (62/95). It had a significant difference (p>0,0001) in the viability of the samples and the detention of the viral genoma from those samples store for more than 10 years and the percentage of positivity reached 22,1% and 59,7%, respectively. The present study confirms the importance of the RT-PCR technique for detection of viral genoma in old samples, including those in apparent state of decomposition.

Orientador: Luzia Helena Queiroz da Silva / Banca: Avelino Albas / Banca: Silvana Regina Favaretto Lazarini / Resumo: As análises antigênica e genética são ferramentas importantes para o estudo da epidemiologia da raiva em uma região. A recuperação e reisolamento viral a partir de amostras conservadas por longos períodos em temperatura de congelamento é essencial para estudos retrospectivos. Porém, o tempo de conservação, associado a repetidos ciclos de congelamento e descongelamento, promove uma perda significativa na viabilidade do vírus, condição esta que pode ser contornada com a utilização de técnicas de biologia molecular, como a RT-PCR. Com o objetivo de verificar a viabilidade e detectar o RNA do vírus rábico, 95 amostras com diagnóstico positivo e armazenadas por 4 a 13 anos a -20 e -80ºC foram avaliadas por inoculação intracerebral em camundongos e RT-PCR. Apenas 33,6% (32/95) das amostras inoculadas em camundongos foram positivas, enquanto que a RTPCR detectou o genoma viral em 65,3% (62/95). Houve diferença estatisticamente significativa (p<0,0001) na viabilidade das amostras e na detecção do genoma viral na amostras armazenadas por mais de 10 anos, sendo a porcentagem de positividade de 22,1% e 59,7%, respectivamente. O presente estudo confirma a importância da RT-PCR na detecção do genoma viral em amostras conservadas por longo período de tempo, incluindo aquelas em estado visível de decomposição. / Abstract: The antigenic and genetic analyses are important tools for retrospective study of rabies epidemiology in a region. The recovery and viral re-isolation from samples conserved for long periods in freezing temperature are essential for these studies. However, time conservation, associated with temperature variations, causes a significative virus viability loss. On the other hand, molecular tools, such as RT-PCR, can overcome this condition. For this purpose, 95 positive samples stored for 4 to 13 years at -20 and -80ºC were evaluated by intracerebral inoculation in mice and RT-PCR. Of this total, only 33,6% (32/95) had been positive in the intracerebral inoculation, while RT-PCR detected the viral genoma in 65.3% (62/95). It had a significant difference (p>0,0001) in the viability of the samples and the detention of the viral genoma from those samples store for more than 10 years and the percentage of positivity reached 22,1% and 59,7%, respectively. The present study confirms the importance of the RT-PCR technique for detection of viral genoma in old samples, including those in apparent state of decomposition. / Mestre

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:30:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_Adaue_banca.pdf: 296840 bytes, checksum: 0cd98d8b2ca7a1306c82e4b8319d9e71 (MD5) Previous issue date: 2012-06-01 / The use of orthodontic devices has been associated with an increase in dental biofilm retention. In this study, the effect of hydrophobic coatings, based on (fluorinated or not) organo-silanes, on the reduction of the contact angle and early biofilm retention in orthodontic devices was tested. Two different types of hydrophobic were tested: hydrophobic solution 1 (SH1), obtained by dilution of 2.5% of hexadecyl-triethoxy-silane in ethanol, and hydrophobic solution 2 (SH2), composed of 2.5% of perfluorodecyl-triethoxy-silane diluted in dimethyl sulfoxide. The solutions were applied in ceramic and stainless steel substrates and, via sol-gel process and crosslinking, siloxane networks were formed on the surface of the devices. The effect of the coatings was evaluated in two stages. In the first stage, aiming the characterization of the surface, the water contact angle was analyzed. Stainless steel and polycrystalline alumina plates were prepared, previously applying or not alumina sandblasting as surface treatment. A significant increase in contact angle was observed with the application of both hydrophobic solutions in both substrates, with the sandblasting allowing formation of super-hydrophobic surface in the ceramic substrate (contact angle up to 155o), while hydrophobic surfaces were obtained in the steel substrate (contact angle up to 123o). In the second phase, the effect of the hydrophobic coating on the biofilm retention in orthodontic brackets was evaluated using a microscosm model. Orthodontic brackets were previously prepared according to the surface treatments that showed the best results in the phase 1 (SH1 for steel, SH2 for ceramic). The effect of the coatings on the biofilm formation was evaluated in periods of 12h and 24h (controls: uncoated substrates and sandblasted substrates). The results showed that the hydrophobic coatings did not result in significant effect in biofilm retention for the time 12h, whereas all coating treatments significantly reduced the biofilm retention in the metal and ceramic brackets compared with the control groups. A significant exponential reduction in biofilm retention at 24h was associated with the increase in contact angle. It can be concluded that application of (super)-hydrophobic crosslinked coatings via sol-gel process on the surface of orthodontic metal and ceramic brackets reduced the surface wetting of the surfaces in contact with water and had a significant effect on the retention of dental biofilm after 24h / O uso de dispositivos ortodônticos tem sido associado ao aumento da retenção de biofilme dentário. Neste estudo, foi testado o efeito de coberturas hidrófobas,baseadas em organo-silanos (flourados ou não), no aumento do ângulo de contato e redução de acúmulo de biofilme inicial em dispositivos ortodônticos. Dois tipos diferentes de soluções hidrófobas foram testadas: solução hidrófoba 1 (SH1), obtida pela diluição de 2,5% de hexadecil-trietóxi-silano em etanol, e solução hidrófoba 2 (SH2), composta por 2,5% de perfluorodecil-trietóxi-silano diluído em dimetilsulfóxido. As soluções foram aplicadas em substratos cerâmico e de aço inox e, via processo sol-gel e reticulação, foram formadas redes siloxanas na superfície dos dispositivos. O efeito das coberturas foi avaliado em duas etapas. Na primeira etapa, buscando a caracterização da superfície, foi analisado o ângulo de contato com água. Placas de aço inox e alumina policristalina foram preparadas, aplicando ou não jateamento prévio das superfícies com partículas de alumina. Foi observado aumento significativo do ângulo de contato com a aplicação das duas soluções hidrófobas em ambos substratos, sendo que o jateamento do substrato propiciou a formação de superfície superhidrófoba no substrato cerâmico (ângulo de contato de até 155o), enquanto superfícies hidrófobas foram obtidas no substrato aço (ângulo de contato até 123o). Na segunda fase do trabalho, avaliou-se o efeito da cobertura no acúmulo de biofilme em braquetes ortodônticos, através de modelo de microcosmos. Braquetes ortodônticos foram previamente preparados conforme os tratamentos de superfície que apresentaram melhores resultados na primeira fase (SH1 para aço, SH2 para cerâmica). Foi avaliado o efeito da cobertura na formação de biofilme em períodos de 12h e 24h (controles: substratos não-recobertos e substratos jateados). Os resultados mostraram que as coberturas hidrófobas não resultaram em efeito significativo no acúmulo de biofilme no tempo 12h, entretanto todos os tratamentos de cobertura reduziram de forma significativa o acúmulo de biofilme sobre os braquetes metálicos e cerâmicos comparados aos grupos controle no período 24h. Foi observada relação de redução exponencial significativa entre ângulo de contato e acúmulo de biofilme para o tempo 24h. Dessa forma, conclui-se que a aplicação de coberturas (super)-hidrófobas reticuladas via processo sol-gel na superfície de dispositivos ortodônticos metálicos e cerâmicos reduziu o molhamento das superfícies em contato com a água e teve efeito significativo na retenção de biofilme bucal sobre esses dispositivos após 24h

Made available in DSpace on 2016-01-26T18:55:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao_Final_Mestrado_LUIS.pdf: 605028 bytes, checksum: 6ca4c3db0bd66eea45bbf1d31830b978 (MD5) Previous issue date: 2007-02-28 / The effect of Matricaria chamomilla CH12 (Fator Estresse®) and number of doses of rabies vaccines on the humoral immune response in cattle were evaluated through rabies neutralizing antibody titers. Sixty cattle were randomly divided into four groups: animals from FEV1 and FEV2 received Matricaria chamomilla CH12 (Fator Estresse®) mixed with mineral salt, and animals from groups V1 and V2 received only mineral salt. Cattle from group FEV2 and V2 were immunized with two rabies vaccine doses on days 0 and 30, respectively; cattle from groups FEV1 and V1 were vaccinated only once on day 0. The results obtained show that no significant difference was found among neutralizing-antibody titers between groups treated and not treated with Matricaria chamomilla CH12; antibody titers were significantly higher in cattle immunized with two rabies vaccine doses; 93.3% of the animals vaccinated only once had antibody titers < 0.5 UI/mL sixty days after commencing vaccination. In conclusion, the use of Matricaria chamomilla CH12 added to mineral salt does not change humoral immune response in cattle, and two vaccine doses are suggested forachieving antibody titers in protective level (&#8805; 0.5UI/mL). / Objetivou-se avaliar o efeito da Matricaria chamomilla CH12 (Fator Estresse®) e do número de doses de vacina na resposta imune humoral em bovinos por meio dos títulos de anticorpos anti-rábicos. Sessenta bovinos foram divididos randomicamente em quatro grupos: os animais dos grupos FEV1 e FEV2 receberam Matricaria chamomilla CH12 (Fator Estresse®) misturados no sal mineral e os bovinos dos grupos V1 e V2 receberam somente sal. Nos bovinos dos grupos FEV2 e V2 aplicaram-se duas doses de vacina anti-rábica nos dias 0 e 30, respectivamente; enquanto que os bovinos dos grupos FEV1 e V1 foram vacinados somente no dia 0. Os resultados obtidos mostram diferença não significativa nos títulos de anticorpos anti-rábicos entre os grupos tratados ou não com Matricaria chamomilla CH12 (Fator Estresse®); os títulos de anticorpos aumentaram significativamente nos animais que foram imunizados com duas doses de vacina; 93,3% dos animais que receberam uma dose de vacina comercial apresentaram títulos de anticorpos < 0,50 UI/mL sessenta dias após a vacinação. Conclui-se que, a Matricaria chamomilla CH12 adicionada ao sal mineral não aumentou a resposta imune humoral em bovinos e é necessário a aplicação de duas doses de vacina para os bovinos obter títulos protetores de anticorpos.