Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-07-25T13:02:29Z No. of bitstreams: 1 Neurisvan Ramos Guerra.pdf: 506781 bytes, checksum: 5f3717d4e83a80c6435609c31fc492be (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-25T13:02:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Neurisvan Ramos Guerra.pdf: 506781 bytes, checksum: 5f3717d4e83a80c6435609c31fc492be (MD5) Previous issue date: 2013-02-20 / Trypanosoma vivax determines losses in production of ruminants related to morbidity, decline in production, reproductive problems and also mortality. The objective of this study was to determine the diagnosis of Trypanosoma (Dutonella) vivax in cattle of different regions of Pernambuco State, Brazil, through the techniques of Indirect Immunofluorescence Assay (IFA) and Polymerase Chain Reaction (PCR). Firstly, it was performed a serology of 2,053 serum samples from bovine herds from different counties in the state of Pernambuco. From these results the counties with the highest frequency by IFA test were selected and a total of 127 bovine blood samples were collected for molecular analysis by PCR. The results of IFAT showed 13.93% (286/2,053) of positive animals for IgG antibodies against Trypanosoma vivax. The amplification by PCR revealed positivity of 44.88% (57/127). These results suggest that Pernambuco state is an area endemic for Trypanosoma vivax being considered an enzootic instability area. On the other hand, PCR was effective in the diagnosis of Trypanosoma vivax in cattle blood, being an indispensable tool for studies epidemiological. / Trypanosoma vivax determina prejuízos à produção de ruminantes, relacionados com a morbidade, queda na produção, problemas reprodutivos além de mortalidade. O presente trabalho teve como objetivo realizar o diagnóstico de Trypanosoma (Dutonella) vivax em bovinos das diferentes Mesorregiões do Estado de Pernambuco, Brasil, através das técnicas de Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI) e da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR). Iniciamente foi realizada sorologia de 2.053 amostras de soro sanguíneo de bovinos provenientes de rebanhos de municípios do estado de Pernambuco. A partir destes resultados foram selecionados os municípios com maiores frequências de anticorpos em cada mesorregião do Estado de Pernambuco e foram coletadas um total de 127 amostras de sangue bovino para análise molecular através da PCR. À sorologia, 13,93% (286/2.053) dos animais foram reagentes para anticorpos IgG anti-Trypanosoma vivax. Já na PCR foi obtida uma positividade de 44,88% (57/127). Esses resultados sugerem que o estado de Pernambuco é área endêmica para Trypanosoma vivax, apresentando-se como área de instabilidade enzoótica e que a PCR mostrou-se eficiente no diagnóstico da infecção por Trypanosoma vivax em sangue de bovinos, sendo uma ferramenta indispensável para estudos epidemiológicos.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:13:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese paula rogerio fernandes.pdf: 1613821 bytes, checksum: 51e95ba0a0870ec6f2dac8e6b7f10cf8 (MD5) Previous issue date: 2010-02-26 / One of the main causes of reproductive failure in cattle is infection by the protozoan Neospora caninum (Phylum Apicomplexa, Family Sarcocystidae). The bovine neosporosis is characterized by an asymptomatic infection in the non pregnant cow; however, during pregnancy, the vertical transmission of the parasite is responsible for the maintenance of the infection for successive generations. The highest frequency of infection occurs in the dairy production system and in the intensive management of animal breeding, with most of the available data for N. caninum related to Bos taurus, even for beef cattle. Thus, the presence of N. caninum has been little studied in Bos indicus. In Goiás, the prevalence of N. caninum is 29.61% in beef cattle and 30.4% in dairy cattle. As the prevalence of infection in adults should have a positive correlation to the incidence of fetal infection, this study aimed to evaluate the occurrence of vertical transmission of N. caninum in zebuine fetuses of various ages, obtained from females slaughtered in a slaughterhouse in the municipality of Senador Canedo, Goiás. For that, the serological analysis of abdominal fluid and molecular and histopathological analysis in tissue samples (brain, heart and liver) were performed. The fetal age was estimated by the measurement of crown-rump length. A total of 195 fetal fluids was randomly collected and tested by IFAT with a cut-off point of 1:16. 585 tissue samples were submitted to nested-PCR analysis of ITS-1 rRNA region and to histopathology. The results were related to the fetal age (first, second and third stages of pregnancy). Anti-N. caninum antibodies were detected in 12 (6.15%) fetal fluids, with IFAT titers observed at 1:64 (n=1), 1:128 (n=2), 1:512 (n=3), 1:1024 (n=5) and 1:2048 (n=1). The presence of the parasite was detected by PCR in 40 (20.5%) fetuses. On histopathological examination, 82 (42.05%) fetuses had characteristic and consistent lesions, compatible with protozoan infection, characterized by encephalitis, myocarditis and hepatitis with mononuclear cell infiltrates, with or without necrosis. Comparing the different gestational ages, there was a greater number of positive reactions by IFAT, PCR and compatible histopathological lesions in the sixth and seventh month of pregnancy. From the total of 585 tissue samples examined, 56 were positive, being 12 at serology and 44 (35 brains, seven hearts and two livers) at PCR from 45 fetuses. In histopathology, 10 samples (three brains, six hearts and one liver) showed characteristic lesions of protozoan infection such as N. caninum. The DNA from six PCR positive fetuses was analyzed by microsatellite markers for genetic characterization of isolates of N. caninum, demonstrating the existence of genetic profiles different from other isolates of the world and of Brazil infecting zebuine animals. The results confirm the occurrence of vertical transmission of N. caninum, the diagnosis of infection in zebuine fetuses, the need of association of techniques for determining fetal neosporosis and characterization of different regional isolates circulating in zebu herd from Goiás. / Uma das principais causas mundiais de falhas reprodutivas em bovinos é a infecção pelo protozoário Neospora caninum (Filo Apicomplexa, Família Sarcocystidae). A neosporose bovina é caracterizada por infecção assintomática na fêmea não prenhe, no entanto, durante a gestação, a transmissão vertical do parasito é a responsável pela manutenção da infecção por gerações sucessivas. A maior freqüência da infecção ocorre no sistema de produção leiteiro e no manejo intensivo de criação dos animais, sendo a maioria dos dados disponíveis para N. caninum referentes a Bos taurus, mesmo para gado de corte. Assim, a presença de N. caninum tem sido pouco estudada em Bos indicus. Em Goiás, a prevalência de N. caninum é de 29,61% em gado de corte e 30,4% em leite. Como a prevalência da infecção em adultos deve ter correlação positiva com a incidência da infecção fetal, objetivou-se avaliar a ocorrência da transmissão vertical de N. caninum em fetos zebuínos de variadas idades, obtidos de fêmeas abatidas em um frigorífico no município de Senador Canedo, Goiás. Para tanto, realizaram-se análise sorológica em líquidos toráco-abdominais e análises molecular e histopatológica em amostras teciduais (cérebro, coração e fígado). A idade fetal foi determinada a partir da distância entre a região occipital e a base da cauda. Um total de 195 líquidos fetais foi colhido aleatoriamente e testado por RIFI com um ponto de corte de 1:16. Foram submetidas 585 amostras de tecidos à análise pela nested-PCR da região ITS-1 rRNA e à histopatologia. Os resultados encontrados foram relacionados com a idade fetal (primeiro, segundo e terceiro estágios gestacionais). Anticorpos anti-N. caninum foram detectados em 12 (6,15%) líquidos fetais, com titulação observada a 1:64 (n=1), 1:128 (n=2), 1:512 (n=3), 1:1024 (n=5) e 1:2048 (n=1). Foi detectada a presença do parasito por PCR em 40 (20,5%) fetos. No exame histopatológico, 82 (42,05%) fetos apresentaram lesões características e consistentes com infecção por protozoário, caracterizadas por encefalite, miocardite e hepatite com infiltrado mononuclear, com ou sem necrose. Na comparação entre as diferentes idades gestacionais, observaram-se maior número de reações positivas por RIFI, PCR e lesões compatíveis por histopatológico, no sexto e sétimo mês de gestação. Do total das 585 amostras de tecidos examinadas, 56 foram positivas, sendo 12 na sorologia e 44 (35 cérebros, sete corações e dois fígados) na PCR, provenientes de 45 fetos. No histopatológico, 10 amostras (três cérebros, seis corações e um fígado) apresentaram lesões características de infecção por protozoários como o N. caninum. O DNA de seis fetos PCR positivos foi submetido à análise por marcadores microssatélites para a caracterização genética dos isolados de N. caninum presentes, demonstrando a existência de perfis genéticos diferentes de outros isolados do mundo e do Brasil infectando zebuínos. Os resultados obtidos comprovam a ocorrência da transmissão vertical de N. caninum, o diagnóstico da infecção em fetos zebuínos, a necessidade de associação de técnicas para a determinação da neosporose fetal e a caracterização de diferentes isolados regionais circulantes no rebanho zebuíno de Goiás.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:31:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_regina_celis_pereira_reiniger.pdf: 329158 bytes, checksum: 6caf8cc77973c7a12a10801deeda4e26 (MD5) Previous issue date: 2008-05-15 / The presence of anti-Babesia bovis and anti-B. bigemina immunoglobulins (IgG class) were evaluated, by indirect fluorescent antibody test, in bovine sera from a naturally tick-infected beef cattle herd. Samples were collected from 31 heifers, from 13 to 24 months of age, from a farm located South of Rio Grande do Sul, Brazil. Blood samples were monthly collected followed by observing the presence of Boophilus microplus ticks in cattle. Climatic data were also observation. Mean temperature and relative humidity showed to be higher than their climate normal (1971-2000), allowing constant tick infestations throughout the year. Serologic tests showed that 100% of the animals remained positive for B. bigemina during the experimental period. For B. bovis, however, this condition was only reached from 17 months of age onwards, after the classical third tick generation infestation (autumn). These results showed that the enzootic stability was maintained in this farm, as observed earlier when these same animals were monitored in their first year of age. This epidemiological condition being unusual for this region. The experimental animals showed lower anti-B. bovis (P=0,0002) and anti-B. bigemina (P<0,0001) specific-immunoglobulins when compared to their first year averages. Anti-B. bigemina specific-immunoglobulins were significantly higher than anti-B. bovis specific-immunoglobulins (P=0,0001). These results reveal a situation of enzootic stability in geographical areas early described as of enzootic instability for cattle babesiosis, and provide information to better understand the high frequency of B. bovis outbreaks in this region. / Avaliou-se, através da reação de imunofluorescência indireta, a presença de imunoglobulinas (classe IgG) anti-Babesia bovis e anti-Babesia bigemina no soro de 31 bovinos de um rebanho de corte naturalmente infectado, dos 13 aos 24 meses de vida, em uma propriedade localizada ao sul do Rio Grande do Sul. As coletas mensais de sangue foram acompanhadas de observação da presença do Boophilus microplus, bem como de dados climatológicos durante o ano do experimento. A temperatura e a umidade relativa do ar mantiveram-se superiores às normais ao longo do ano, favorecendo a constância do carrapato no rebanho. A sorologia revelou que 100% dos bovinos mantiveram-se positivos para B. bigemina durante todo o período experimental, enquanto para B. bovis, esse índice só foi obtido a partir dos 17 meses de idade, após a infestação pela terceira geração de carrapatos (outono). Isso revela que foi mantida a situação de estabilidade enzoótica na propriedade, constatada durante o primeiro ano de vida destes animais, o que é atípico para região. Os bovinos mantiveram títulos de anticorpos significativamente inferiores aos observados durante o seu primeiro ano de vida, tanto para B. bovis (P=0,0002) como para B. bigemina (P<0,0001). A titulação de anticorpos para B. bigemina foi significativamente (P=0,0001) superior à verificada para B. bovis. Os resultados obtidos revelam a existência de situação de estabilidade enzoótica em uma área de instabilidade enzoótica para a babesiose bovina, e fornece subsídios para o entendimento da maior freqüência de casos clínicos causados por B. bovis na região.

Foram testadas, com o teste não treponêmico VDRL e com o teste treponêmico imunoenzimático de competição, 23.531 amostras de soros, coletados em todas as regiões do Brasil, com o objetivo de verificar o comportamento do teste imunoenzimático treponêmico na triagem de amostras. A prevalência obtida foi de 0,63% com o VDRL e de 0,84% para o teste imunoenzimático. A análise dos dados foi feita comparando-se os resultados dos dois testes com os resultados do teste treponêmico de imunofluorescência indireta (FTA-ABS), considerado como teste de referência. No total, 1120 amostras foram submetidas ao teste FTA-ABS, incluindo todas as que foram reagentes em qualquer um dos testes de triagem e 872 amostras negativas. Amostras com resultados discordantes entre os testes foram submetidas a um teste imunoenzimático do tipo Western blot. Nas amostras por nós estudadas, o teste imunoenzimático apresentou sensibilidade de 89,95% e especificidade de 99,78%, muito superior aos 55,11% de sensibilidade e 97,43% de especificidade que encontramos para o VDRL. Os resultados dos testes detectaram positividade em amostras diferentes portanto, recomendamos utilizar a associação dos dois testes, como método de triagem, quando se trata de populações de baixa prevalência. Resultados preliminares do Western blot sugerem a participação doas proteínas de 43 kD, 17 kD e 15,5 kD na reação de ELISA treponêmico competitivo. / The VDRL, a non treponemal test, and a treponemal competitive ELISA were used to test 23,531 serum samples, collected from conscript men throughout Brazil, with the objective of assessing the performance of the competitive ELISA on the screening of serum samples. The VDRL showed a prevalence of 0.63% contrasting with a 0.84% prevalence showed by the competitive ELISA. The results obtained with the two tests were then compared to those obtained by fluorescent treponemal antibody absorption (FTA-ABS) test which is considered the gold standard method for detection of antibodies for syphilis. A total number of 1,120 samples, which included all that were reagent in at least one of the screening test plus 872 that were negative in both tests, were submitted to the FTA_ABS test. In addition, some of the samples that presented discrepant results between the two tests studied were also submitted to the Western blot test. The results of the screening tests showed an 89.95% sensitivity and a 99.78% specificity for the competitive ELISA, which are much higher than the 55.11% sensitivity and 97.43% specificity presented by the VDRL. Also, the tests detected positivity in different samples. In conclusion, we recommended the use in tandem of both tests as screening for syphilis antibodies in low prevalence populations. In addition, the results of the Western blot seemed to suggest the positivity of the ELISA becoming non reactive after treatment of the patient and that the 43 kD, 17 kD and 15 kD proteins are the main proteins involved in the ELISA competitive reaction.

A infecção pelo herpesvírus humano tipo 8 (HHV-8) tem sido associada ao sarcoma de Kaposi (SK) iatrogênico, que acomete pacientes imunossuprimidos e/ou transplantados renais. Em populações consideradas saudáveis, a soroprevalência para o HHV-8 varia de 1% a 8%. O presente trabalho buscou: determinar a prevalência e os títulos de anticorpos anti-HHV-8 em pacientes com insuficiência renal crônica (IRC), submetidos ou não à terapia renal substitutiva (TRS) do Hospital do Rim e Hipertensão e Casa da Diálise da UNIFESP e da Santa Casa de Misericórdia de São Paulo e, comparar os resultados obtidos com outras populações da mesma região geográfica, porém de outras categorias de risco para adquirir doenças infecciosas. Soros de 805 pacientes: 295 em hemodiálise, 54 em diálise peritoneal e 456 em acompanhamento ambulatorial, sem TRS, foram testados quanto à presença de anticorpos anti-HHV-8, de fase latente e lítica da replicação viral, por meio de técnicas de imunofluorescência indireta (IFI) LANA e Lítico, padronizadas na Seção de Imunologia do Instituto Adolfo Lutz. Os resultados obtidos foram analisados em relação a dados clínicos, epidemiológicos e laboratoriais usando o teste do qui-quadrado ou exato de Fisher para as variáveis categóricas e os testes de Mann Whitney ou Kruskal Wallis para as variáveis contínuas. Foi encontrada soropositividade ao HHV-8 em 18,0% dos pacientes com IRC, dos quais 18,3% nos pacientes em TRS e 17,7% nos pacientes sem TRS, não havendo diferença significante entre os grupos. As variáveis que estiveram relacionadas à sorologia positiva ao HHV-8 foram: transplante prévio (p<0,001) e doenças sexualmente transmissíveis (p=0,003), com destaque para a sífilis (p=0,021). As demais variáveis não mostraram associação estatística embora tenha havido maior número de amostras HHV-8 soropositivas com o avançar da idade. Em relação ao tipo e ao título de anticorpos detectados, houve mais amostras com sorologia positiva para anticorpos Lítico e maiores títulos de anticorpos LANA. A comparação dos resultados dos pacientes com IRC e outras populações de São Paulo revelou taxa semelhante de prevalência de anticorpos anti-HHV-8 na população com HIV/Aids (20,4%), considerada de alto risco para esta infecção viral. Por outro lado, a prevalência detectada na população com IRC (18,0%) foi inferior às obtidas em pacientes com SK epidêmico (89,3%), SK clássico (100,0%) e SK endêmico (87,5%), e superior a outras populações sem SK: pacientes com deficiência mental e/ou física (1,6%) e profissionais da área da saúde (1,1%). Em todos os grupos analisados houve maior número de amostras com sorologia positiva para HHV-8 de fase lítica, e maiores títulos de anticorpos LANA, exceção feita aos profissionais da área da saúde. Maiores títulos de anticorpos LANA foram detectados nos pacientes com SK. Não foram encontradas outras associações significantes. Os resultados obtidos permitem concluir que os pacientes com IRC têm alta prevalência de anticorpos anti-HHV-8, comparável aos indivíduos com HIV/Aids dessa região geográfica. Ainda, sugerem que se devam acompanhar os pacientes HHV-8 soropositivos com vistas a monitorar os títulos de anticorpos LANA e verificar se estes têm valor prognóstico. Caso isto venha a ser confirmado, sugere-se a introdução da sorologia para o HHV-8 na bateria de exames do pré-transplante renal. / Human herpesvirus 8 (HHV-8) infection is frequently associated with Kaposi\'s sarcoma (KS) in immunodeficient and renal transplanted patients. The HHV-8 seroprevalence in healthy populations varies from 1% to 8%. The present study aimed to determine the HHV-8 seroprevalence and antibodies titers in chronic kidney disease (CKD) patients with or without substitutive kidney therapy (SKT) attended at Hospital do Rim e Hipertensão and Casa da Diálise of UNIFESP, and at Santa Casa de Misericórdia de São Paulo. Secondarly, to compare the serological results with those obtained from populations of the same geographic region, presenting other risk factors for acquiring infectious diseases. Serum samples were collected from 805 CKD patients: 295 under hemodialysis, 54 under peritoneal dialysis, and 456 in ambulatorial assistance without SKT. Latent and Lytic HHV-8 antibodies were searched using indirect immunofluorescence assays that were standardized at Immunology Department of Instituto Adolfo Lutz. Chi-Square test and/or Fisher\'s exact test were performed for comparing categorical variables including epidemiological, clinical and laboratorial data, and HHV-8 serum status. Continuos variables associated with HHV-8 antibodies titers were compared using Mann Whitney or Kruskal Wallis tests. An overall HHV-8-seropositivity of 18.0% was detected in CKD patients: 18.3% in patients under SKT and 17.7% in patients without SKT. Since no difference was detected in HHV-8-seropositivity among patients, they were considered as a unique group for subsequent analysis. A strong association between HHV-8-seropositivity and previous transplant was detected (p<0.001), along with an association with others sexually transmitted diseases (p=0.003), with emphasis for syphilis (p=0.021). In addition, no other data was associated with HHV-8-seropositivity, although higher proportions of HHV-8-seropositivity were detected in samples from elderly persons. In addition, more HHV-8 Lytic antibodies positive samples, and higher titers of LANA antibodies were detected. HHV-8 seroprevalence obtained from CKD patients was similar to the HHV-8 prevalence detected among HIV/Aids patients (20.4%), who were considered a high-risk group for this viral infection. On the other hand, the HHV-8 seroprevalence of CKD patients (18.0%) was lower than the prevalence of patients with epidemic KS (89.3%), classic KS (100.0%) and endemic KS (87.5%), and higher than the patients with mental and/or physical deficiency (1.6%) and health professionals (1.1%). All analyzed groups had more HHV-8-seropositive samples for Lytic antibodies and higher titers of LANA antibodies, with exception for the health professionals. The highest LANA antibodies titers were found among KS patients groups. No other association was found. In conclusion, the obtained results points out CKD patients as a high prevalent population for HHV-8 infection, similar to HIV/Aids patients from the same geographic area. As far, it suggests that HHV-8 seropositive CKD patients should be followed up in order to verify whether LANA antibodies titers have prognostic value. In confirming this hypothesis, it may propose to include the use of HHV-8 serology in the screening testing in kidney pre-transplant.

Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-05-15T11:40:13Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_AvaliacaoSorologicaMolecular.PDF: 971805 bytes, checksum: 7836f84ab3ed16c96797b58541a7d7cc (MD5) / Approved for entry into archive by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2017-05-16T20:06:24Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_AvaliacaoSorologicaMolecular.PDF: 971805 bytes, checksum: 7836f84ab3ed16c96797b58541a7d7cc (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-16T20:06:24Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_AvaliacaoSorologicaMolecular.PDF: 971805 bytes, checksum: 7836f84ab3ed16c96797b58541a7d7cc (MD5) Previous issue date: 2016-02-29 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Com o objetivo de analisar a ocorrência de Toxoplasma gondii em búfalos da Ilha de Marajó através de método sorológico e molecular, foram coletadas amostras de sangue e tecido cerebral de 100 búfalos. Os soros sanguíneos foram submetidos à Reação de Imunofluorescência indireta (RIFI), utilizando a diluição 1:64 como ponto de corte para T. gondii, essas amostras foram testadas para detectar a presença de anticorpos IgG anti-T. gondii. Para confirmar a presença do gene B1 de T. gondii no material gênomico de sangue e tecido cerebral, as amostras foram submetidas à amplificação por reação em cadeia pela polimerase (Nested-PCR). Dentre os soros de búfalos testados, 14 (14%) foram reagentes contra o T. gondii pela técnica da RIFI, enquanto que as amostras de sangue e tecido cerebral testados 4 (4%) foram amplificados o DNA de T. gondii pela técnica da PCR, sendo 3 (3%) em amostras de sangue e 1(1%) em amostras de tecido cerebral. Apesar da baixa ocorrência de anticorpos IgG anti-T. gondii em soro de búfalos, pode-se concluir que a infecção por este protozoário encontra-se presente em búfalos criados na Ilha de Marajó, além disso, foi possível a detectar o material genômico do T. gondii, em amostras de sangue e tecido cerebral desses animais, havendo assim, a necessidade de mais pesquisas, utilizando a técnica molecular no diagnóstico da toxoplasmose uma vez que, a detecção do bioagente em búfalos torna ainda mais relevante à importância desses animais na cadeia epidemiológica da toxoplasmose como prováveis fontes de infecção principalmente para o ser humano. / In order to analyze the occurrence of Toxoplasma gondii in buffalo Marajó Island by serological and molecular method, blood samples and brain tissue of 100 buffaloes were collected. Blood sera were tested by indirect immunofluorescence assay (IFA) using a 1:64 dilution as the cutoff point for T. gondii, these samples were tested for the presence of antibodies IgG anti-T. gondii. To confirm the presence of T. gondii B1 gene in genomic material of blood and brain tissue samples were subjected to amplification by polymerase chain reaction (nested PCR). Among the tested sera buffaloes, 14 (14%) were reactive against T. gondii by the IFA technique, while blood samples and brain tissue tested 4- (4%) were amplified DNA by the technique of T. gondii PCR, 3 (3%) in blood samples and 1 (1%) in brain tissue samples. Despite the low occurrence of antibodies anti-T. gondii in serum buffalo, it can be concluded that infection by this parasite is present in buffalo breed in Marajo, moreover, it was possible to detect the genomic material of T. gondii in blood samples and brain tissue these animals, thus there is the need for further research, using the molecular technique for the diagnosis of toxoplasmosis since the detection of the bioagent buffaloes becomes even more relevant to the importance of these animals in the epidemiological cycle of toxoplasmosis as possible sources of infection primarily for the human being.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:58Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-02-21Bitstream added on 2014-06-13T19:57:07Z : No. of bitstreams: 1 seki_mc_me_jabo.pdf: 576519 bytes, checksum: d22961f6b04eb42b3628b080392fb7c3 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O presente trabalho, primeiro estudo sobre clamidiose felina no Brasil, teve o objetivo de pesquisar a presença direta e indireta de Chlamydophila (elis em gatos domésticos provenientes de cinco municípios da região nordeste do estado de São Paulo. Adicionalmente, correlacionar os dados de ficha clínica com os resultados positivos obtidos nos três testes laboratoriais utilizados, ou seja, reação em cadeia pela polimerase (PCR), reação de imunotluorescência indireta (RI FI) e reação de fixação do complemento (RFC). O grupo experimental final foi constituído de 151 animais, dos quais 73 eram provenientes de gatis, 18 de clínica/hospitais veterinários e 60 de abrigos públicos para animais. Das 151 amostras de suabes de conjuntiva submetidas à PCR, em 6,0% (9/151) foi encontrado DNA de C. (elis. Anticorpos anti-Chlamydiaceae foram detectados em 72,1% (106/147) das amostras de soros submetidas à RIFI. Em somente 9,4% (10/106) dos soros positivos à RIFI, foram detectados anticorpos fixadores do complemento, revelando que a RFC, embora específica, apresenta baixa sensibilidade quando utilizada na pesquisa de anticorpos anti-Chlamydiaceae em gatos domésticos. Foi também observado que gatos provenientes de gatis, animais com idade maior que um ano e inferior a seis anos, bem como as fêmeas, estão mais predispostos a soroprevalência para C.felis pela RIFI. Entretanto, tais resultados não foram observados nos animais PCR positivo. Ademais, pode-se verificar uma estreita relação entre as presenças de DNA clamidial e de anticorpos anti-Chlamydiaceae em gatos domésticos brasileiros aos dados das fichas clínica relacionados à doença do trato respiratório superior, a secreção ocular e a conjuntivite. / This work, first study about feline chlamydiosis in Brazil, had the objective to evaluate the direct and indirect presence to Chlamydophila felis in domestic cats coming trom tive cities of northeast of São Paulo state. Additionally, relate informations of clinical records with positives results get in the three laboratories tests used, whatever, complement fixation test (CFT), immunofluorescende assay (IFI) and Polymerase Chain Reaction (PCR). Experimental group had 151 animais, witch 73 coming from catteries, 18 coming trom veterinary clinicallhospital and 60 coming from public animal shelters. From 151 samples of conjunctival swabs submitled to PCR, in 6% (9/151) were detect DNA of C.felis. Anti-Chlamydophila antibodies were detect in 72,1%(106/147) of samples of serum submitted to IFI. In just 9,4% (10/106) of the positive serums in IFI, had complement fixation antibodies, detected by CFT. The CFT, although specific, presented low sensibility when to use to research of anti-Chlamydiaceae antibodies in domestic cats. In cats from catteries, animais between one and six year, and female were more predispose to a presence of antibodies anti-Chlamydophila by IFI. However, these results were not observed in animais PCR positive. Thus, was observed a relationship between the presence of chlamydial DNA and antibodies anti-Chlamydiaceae in Brazilian domestic cats, added with informations of clinical records, like with upper respiratory tract disease, ocular discharge and conjunctivitis.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The aim of this study was to evaluate the natural infection of chickens of extensive breeding of an area considered endemic for spotted fever in the state of Rio Grande do Sul through serological survey, as well as to perform the experimental infection by Rickettsia parkeri these birds. In the first study, 300 blood samples were collected and the sera were tested by indirect immunofluorescence assay (IFA) to identify the presence of anti-Rickettsia spp. antibodies. The occurrence of anti-Rickettsia spp. antibodies observed was 1.33% (4/300), with titers ranging from 64 to 256 for R. parkeri, Rickettsia rickettsii and/or Rickettsia bellii. In the second step, was performed the experimental infection by R. parkeri. 64 chickens were used divided into eight groups which were inoculated with different amounts of the agent by several routes of administration. Group 1 (G1) - inoculated with 2,5 x 105 Vero cells infected with R. parkeri (1 ml) intramuscular (IM); G2 5,0 x 105 Vero cells infected with R. parkeri (2 ml) IM, G3 - 1 ml of inoculum subcutaneously (SC); G4 - 2 ml of inoculum SC; G5 - 1 ml of the inoculum intraperitoneally (IP); G6 - 2 ml of inoculum IP, and G7 and G8 1 ml and 2 ml of culture medium Vero cells IM respectively (negative control groups). The sera of chickens were evaluated at 3, 7, 14 and 21 days post infection (PI) by IFA, to verify the dynamics of antibodies in acute and chronic infection. To identify the multiplication of R. parkeri in tissues during the same period PI, PCR was performed from fragments of spleen and lung of chickens euthanized. Birds of G4 and G3, in order of importance, had the highest average antibody showing the highest levels at seven and 14 days PI. G2, G4 and G6 showed higher mean antibody compared to G1, G3 and G5 respectively, considering the infection dose-dependent. Rickettsial DNA was not detected in the tissues evaluated. The results of both studies suggest that chickens of extensive breeding from endemic area searched do not participate as a reservoir and/or amplifier host in the epidemiology of spotted fever of region and based in the experimental infection, it was verified that birds seroconverted by the challenge by R. parkeri, but no replication of the agent in the tissues analyzed, nor the presence of rickettsemia. / Este estudo teve como objetivo avaliar a infecção natural de galinhas de criação extensiva de uma área considerada endêmica para a febre maculosa no estado do Rio Grande do Sul através de pesquisa sorológica, bem como realizar a infecção experimental por Rickettsia parkeri nessas aves. No primeiro estudo, foram coletadas 300 amostras de sangue e os soros foram testados pela reação de imunofluorescência indireta (RIFI) para identificar a presença de anticorpos anti-Rickettsia spp. A ocorrência de anticorpos anti-Rickettsia spp. observada foi de 1,33% (4/300), com títulos variando de 64 a 256 para R. parkeri, Rickettsia rickettsii e/ou Rickettsia bellii. Na segunda etapa, foi realizada a infecção experimental por R. parkeri, o qual foram utilizadas 64 galinhas caipiras divididas em oito grupos, onde foram inoculadas diferentes quantidades do agente por diversas vias de administração. Grupo 1 (G1) - inoculado com 2,5 x 105 células Vero infectadas por R. parkeri (1 ml) via intramuscular (IM); G2 5,0 x 105 células Vero infectadas por R. parkeri (2 ml) via IM; G3 - 1 ml do inóculo via subcutânea (SC); G4 - 2 ml de inóculo via SC; G5 - 1 ml do inóculo via intraperitoneal (IP); G6 - 2 ml de inóculo via IP, e o G7 e G8 - 1 e 2 ml de meio de cultivo de células Vero via IM respectivamente (grupos controles negativos). Os soros das aves foram avaliados aos 3, 7, 14 e 21 dias pós infecção (PI) por meio de RIFI, para avaliar a dinâmica de anticorpos em infecção aguda e crônica. Para identificar a multiplicação de R. parkeri nos tecidos, no mesmo período PI, foi realizado o PCR a partir de fragmentos de baço e pulmão colhidos das galinhas eutanasiadas. As aves do G4 e G3, em ordem de importância, apresentaram as maiores médias de anticorpos apresentando os níveis mais elevados aos sete e 14 dias PI. Os grupos G2, G4 e G6 apresentaram médias de anticorpos superiores comparado ao G1, G3 e G5 respectivamente, sendo considerada a infecção dose-dependente. Não foi detectado DNA rickettsial nos tecidos avaliados. Os resultados de ambos os estudos sugerem que as galinhas de criação extensiva da área endêmica pesquisada não participaram como reservatório e/ou hospedeiro amplificador na epidemiologia da febre maculosa na região e baseado na infecção experimental, verificou-se que as aves soroconverteram mediante o desafio por R. parkeri, porém não houve a multiplicação do agente nos tecidos analisados, bem como a presença de rickettsemia.

In Brazil, the few studies conducted have used viral etiology, in general, traditional methods (imunofluorescense techniques and and viral cultures) in hospitalized children. The purpose of the present study was to investigate the presence of respiratory viruses using indirect immunofluorescence techniques and the reverse transcription followed by polymerase chain reaction in nasopharyngeal aspirates of children with acute respiratory disease attendet in public institutions of primary and secondary care in the city of Uberlândia. Between february, 2008 to may, 2010 were obtained a convenience sample, nasopharyngeal aspirates from children under five years old with symptoms of acute respiratory disease, attended at Unidade Básica de Saúde da Família - Granada 1, Unidade de Atendimento Integrado-Pampulha and in Clinica Infantil Don Bosco in Uberlândia. Acute respiratory disease was defined by the presence of coryza, coughing, breathing difficulties and/or sibilance, with or without fever. The indirect immunofluorescence techniques and the reverse transcription followed by polymerase chain reaction were used to test for the presence of respiratory viruses. A total of 43 children (53,5% male and 46,5% female) between two and 60 months of age (average: 18,3 months; median 15 months; DP±16). The clinical diagnosis for admission was common cold for 23 children (53,4%), tracheobronchitis in four (9,3%); pneumonia in 12 (28%) and bronchiolitis in four (9,3%). At least one respiratory virus was detected in 22 (51,1%) of the samples. A total of 26 viruses were identified. Ten (38,4%) samples were positive for the respiratory syncytial virus; ten (38,4%) for rhinovirus, three (11,5%) for parainfluenzavirus; two (7,7%) for adenovirus and one (3,8%) for influenzavirus. Co-infection occurred in three of the samples. The indirect immunofluorescence techniques identified nine (21,0%) and the reverse transcription followed by polymerase chain reaction 19 (44,1%) of the respiratory viruses. The rhinovirus and respiratory syncytial virus were the respiratory virus most prevalent in children with acute respiratory disease in public institutions of primary and secondary care. The use of molecular method permitted a two fold increase in the capacity for detection of the viral agent collected from the nasopharyngeal aspirates. / No Brasil, os poucos estudos conduzidos com o objetivo de verificar a etiologia viral das doenças respiratórias agudas utilizaram, em geral, métodos tradicionais (imunofluorescência e cultura viral) em crianças hospitalizadas. O objetivo geral do presente estudo foi investigar a presença de vírus respiratórios por meio das técnicas de imunofluorescência indireta e da transcrição reversa seguida da reação em cadeia da polimerase em aspirados de nasofaringe de crianças com doença respiratória aguda atendidas em serviços públicos de atenção primária e secundária na cidade de Uberlândia, MG. Entre fevereiro de 2008 a maio de 2010 foram obtidos, por meio de uma amostra de conveniência, aspirados de nasofaringe de crianças menores de cinco anos com sintomas de doença respiratória aguda, atendidas na Unidade Básica de Saúde da Família - Granada 1, Unidade de Atendimento Integrado-Pampulha e Clínica Infantil Dom Bosco Uberlândia. Doença respiratória aguda foi definida pela presença de coriza, tosse, dificuldade para respirar ou sibilância, com ou sem febre. A imunofluorescência e a transcrição reversa seguida da reação em cadeia da polimerase foram utilizadas para testar a presença de vírus respiratórios. Partiparam do estudo 43 crianças (53,5% do gênero masculino e 46,5% gênero feminino) com idade entre dois a 60 meses (média = 18,3 meses; mediana = 15 meses; DP=±16). O diagnóstico clínico à admissão foi de resfriado comum em 23 crianças (53,4%), traqueobronquite, em quatro (9,3%), pneumonia, em doze (28%) e bronquiolite, em quatro (9,3%). Pelo menos um vírus respiratório foi detectado em 22 (51,1%) amostras, sendo que 26 vírus foram identificados. Dez (38,4%) amostras foram positivas para o vírus respiratório sincicial, dez (38,4%) para o rinivirus, três (11,5%) para o parainfluenzavírus; duas (7,7%) para adenovírus e uma (3,8%), para o influenzavírus. A presença de co-infecção ocorreu em três amostras. A imunofluorescência identificou nove (21%) e a transcrição reversa seguida da reação em cadeia da polimerase dezenove (44,1%) vírus respiratórios. O rinovírus e o vírus respiratório sincicial foram os vírus mais prevalentes em crianças com doença respiratória aguda em serviços de atenção primária e secundária. A utilização de método molecular permitiu dobrar a capacidade de detecção de agente viral nos aspirados de nasofaringe. / Mestre em Ciências da Saúde

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:07:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Marcelo Sales Guimaraes.pdf: 3899079 bytes, checksum: 38f856923d6a5606a0da0a5054c4e8f9 (MD5) Previous issue date: 2011-02-24 / Bovine neosporosis is a parasitic disease of cosmopolitan distribution, caused by the obligatory intracellular cyst forming protozoan Neospora caninum (Phylum Apicomplexa, family Sarcocystidae). It has a strong association with bovine abortion, being N. caninum protozoan considered the most important for this species. The main route of transmission is vertical, determining the endemic-type neosporosis in cattle. Brazilian local breeds as Curraleiro and Pantaneiro present hardiness and resistance to adverse conditions, e.g. poor nutrition and microbiological challenges, as predominant characteristics. The conservation program of such breeds has encouraged studies aiming at a greater knowledge of these animals peculiarities. The purpose of this study was to assess the seroprevalence of these breeds for N. caninum and the occurrence of vertical transmission in herds, evaluating the importance of bovine neosporosis for these herds. Five farms in the state of Goiás and one in the state of Mato Grosso do Sul, with Curraleiro and Pantaneiro herds, respectively, were observed. Blood was collected from females at reproductive age and their offspring before colostrum intake, if possible. If it was not possible, blood was periodically collected from the offspring (five collections) until about ten months of age. A total of 358 animals was examined, 249 (198 females and 51 calves) Curraleiros and 109 (62 females and 47 calves) Pantaneiros. Seropositivity to N. caninum was evaluated by using the indirect immunofluorescence (cutoff &#8805; 1:200) and ELISA (HerdChek® IDEXX Laboratories) (cutoff S/P &#8805; 0.50). The total incidence of seropositives was 47,49% (170/358), 51% (127/249) Curraleiro and 39,45% (43/109) Pantaneiro. One hundred percent of the farms observed presented seropositive animals. The highest titer was 1:25600. The overall vertical transmission rate observed in herds was 51% (95%, CI 37%-64%), being 48% (95%, CI 30%-66%) in Curraleiro and 54% (95%, CI 35%-73%) in Pantaneiro. There was no statistically significant association between breed or titer of the cows and the occurrence of vertical transmission (OR 0,79; CI 0,27-2,34 95%). A low-moderate agreement was found between the two diagnostic techniques used (&#954; = 0.34). Thus, N. caninum is present in Curraleiro and Pantaneiro cattle breeds, with significant rates of seropositivity and vertical transmission. Although widely distributed, N. caninum does not seem to cause problems in Curraleiro and Pantaneiro herds, as abortion problems are rare and females have good fertility, within the constraints of the breed. / A neosporose bovina é uma enfermidade parasitária causada pelo protozoário intracelular obrigatório Neospora caninum (filo Apicomplexa, família Sarcocystidae), formador de cistos. Enfermidade de distribuição cosmopolita, a neosporose apresenta forte associação com o abortamento bovino, sendo N. caninum considerado o protozoário mais importante para essa espécie. A principal rota de transmissão é a vertical determinando a neosporose do tipo endêmica nos rebanhos. Raças locais brasileiras como o gado Curraleiro e Pantaneiro apresentam como características preponderantes a rusticidade e resistência às condições adversas tais como carência nutricional e desafios microbiológicos. O programa de conservação destas raças incentivou estudos que visam o maior conhecimento das particularidades destes animais. A proposta deste trabalho foi avaliar a soropositividade destas raças para N. caninum e a ocorrência de transmissão vertical nos rebanhos, permitindo determinar a importância da neosporose bovina nestes rebanhos. Cinco propriedades criadoras de Curraleiro (estado de Goiás) e uma criadora de Pantaneiro (estado de Mato Grosso do Sul) foram acompanhadas. Foi colhido sangue das fêmeas em idade reprodutiva e de suas crias antes da ingestão do colostro, quando possível. Quando não, foi colhido sangue das crias periodicamente (cinco colheitas) até em torno dos dez meses de idade. Um total de 358 animais foi analisado, sendo 249 (198 fêmeas e 51 bezerros) Curraleiros e 109 (62 fêmeas e 47 bezerros) Pantaneiros. Avaliou-se a soropositividade para N. caninum por meio das técnicas de imunofluorescência indireta (ponto de corte &#8805; 1:200) e ELISA indireto (HerdChek® IDEXX Laboratories) (ponto de corte S/P &#8805; 0,50). A ocorrência total de soropositivos foi 47,49% (170/358), com 51% (127/249) do gado Curraleiro e 39,45% (43/109) do gado Pantaneiro soropositivo. Cem por cento das propriedades acompanhadas apresentaram animais positivos. O maior título encontrado foi de 1:25600. A taxa de transmissão vertical geral observada nos rebanhos foi de 51% (95%, IC 37%-64%), sendo de 48% (95%, IC 30%-66%) no gado Curraleiro e de 54% (95%, IC 35%-73%) no Pantaneiro. Não houve associação estatisticamente significativa entre título ou raça das mães e ocorrência de transmissão vertical (OR 0,79; IC 0,27-2,34 95%). Uma concordância moderada-baixa foi verificada entre as duas técnicas de diagnóstico utilizadas (&#954; = 0,34). Assim, N. caninum está presente nos rebanhos bovinos das raças Curraleiro e Pantaneiro, com consideráveis taxas de soropositividade e transmissão vertical. Embora amplamente distribuído, N. caninum parece não representar problema nos rebanhos Curraleiro e Pantaneiro, visto que problemas de abortamento são raros e as fêmeas apresentam boa fertilidade, dentro das limitações das raças.