Made available in DSpace on 2016-03-10T13:18:19Z (GMT). No. of bitstreams: 2 fernanda_cortes_ioc_dout_2014.pdf: 5719125 bytes, checksum: 6db914d863efd13cbfcacc7296b02027 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2016-01-13 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A pandemia do HIV-1 é a infecção emergente mais importante das últimas décadas. O desenvolvimento de uma vacina é colocado como a melhor estratégia para o controle da pandemia. No entanto, entre os candidatos vacinais que evoluíram para testes clínicos de eficácia, apenas um mostrou resultados positivos, mas com uma modesta eficácia (31,2%). Além da busca por uma vacina eficiente contra a infecção pelo HIV-1, o desenvolvimento de estratégias para se atingir a cura também é essencial. Considerando esses dois objetivos principais, diversos fatores são colocados como obstáculos, sendo a enorme diversidade genética do HIV-1 e a falta de correlatos de proteção contra a doença ou a infecção, os pontos centrais e nos quais focamos nossa atenção. No primeiro trabalho, foi avaliada a resposta de células T frente a peptídeos derivados de sequências consensos e sequências de isolados virais mais próximos ao consenso (CVI) dos três subtipos prevalentes no Brasil, B, C e F1 e do grupo M. O estudo incluiu 32 indivíduos infectados com o HIV-1, subtipo B (n = 13), subtipo C (n = 11) e subtipo F1 (n = 8). As respostas específicas frente a Gag e Nef foram avalidas usando o ensaio de ELISpot IFN-\03B3. Peptídeos baseados nas sequências CVI apresentaram capacidade de redução da distância genética e de detecção da resposta de células T similar ao observado para as sequências consenso Em geral, o nível de reatividade cruzada entre os subtipos B e F1 foi maior do que entre os subtipos B e C ou entre os subtipos C e F1. Esses resultados sugerem que o obstáculo imposto pela diversidade genética no desenho de vacinas é dependente dos subtipos envolvidos. No segundo trabalho foi avaliada a resposta de células T de indivíduos controladores da replicação viral frente aos peptídeos consenso, derivados do primeiro estudo. Além disso, foi feita uma avaliação de fatores genéticos e imunológicos nesse grupo de controladores. O estudo incluiu três grupos de controladores: 1) Controladores de Elite (EC, n=7) com carga viral (CV) <80 cópias/mL em todos os pontos; 2) Controladores de Elite com Blips (EEC, n=5) com CV>80 cópias/mL em apenas 30% dos pontos e 3) Controladores Virêmicos (VC, n=7) com CV <5.000 cópias/mL e >80 cópias/mL em mais de 30% dos pontos. Indivíduos infectados pelo HIV-1 não tratados (NC) ou em tratamento antirretroviral (HAART) e indivíduos não infectados pelo HIV-1 foram analisados como controles. A coorte de controladores foi enriquecida em alelos protetores HLA-B, B*27 e B*57, mas não foi observada diferenças significativas entre os três grupos de controladores. O DNA viral circular (2-LTR) foi detectado nos EEC (3/5) e nos VC (6/7), mas não nos EC Uma frequência maior de células T CD8+ ativadas foi observada em EEC e VC quando comparada a indivíduos não infectados. Os EC demonstraram uma resposta de células T de menor magnitude frente a Gag/Nef e uma proporção de anticorpos IgG anti-HIV significativamente menor (P < 0,05) que os grupos de EEC, VC e NC. Esses resultados demonstram que EEC e VC são capazes de montar uma resposta imune específica mais forte frente a estímulos do HIV-1, mas paralelamente, apresentam maiores níveis de ativação imune, translocação microbiana e maior reservatório viral, quando comparados aos EC. Esses resultados destacam a heterogeneidade dos indivíduos capazes de controlar a replicação viral e reforçam a necessidade de uma classificação mais precisa de indivíduos infectados pelo HIV-1 com diferentes níveis de controle / The HIV - 1 pandemic bas been the most relevant infections that has emerged in the last decades. V accine developmen t has been considered as the best strategy to control th is pandemi c, h owever, the candidate vaccines that have evolved to the stage of efficacy clinical trials , only one presented positive results and even that with very modest efficacy (31,2%). As such, s trategies to find a cure is essential though has been hindered by several obstacles such as t he enormous genetic diversity of HIV - 1 and lack of correlates of protection against disease or infection . These two obstacles were investigated in the present stu dy by evaluating the T cell response against peptides based on consensus and closest viral isolate sequences (CVI) from the three prevalent subtypes in Brazil, B, C and F1 and from group M consensus. The study included 32 subjects infected with HIV - 1 subty pe B (n = 13), C (n = 11), and F1 (n = 8). Gag and Nef - specific T cell responses were evaluated by IFN - γ - ELISpot assay. Peptides based on CVI sequences were similar to consensus in both reducing genetic distance and detecting T cell responses . Overall, the level of cross - subtype response between su btypes B and F1 was higher than between subtype C and B or C and F1. Our results suggest that the barrier of genetic diversity in HIV - 1 group M for vaccine design may be dependent on the subtypes involved. The second study evaluated the T cell response fr om controllers against peptides derivate d from the first study. In addition , we performed an evaluation of the genetics and immunologic patterns in this cohort of controllers. The study included three controller groups: 1) Elite Controllers (EC, n = 7) wit h VL <80 copies/mL in all determinations; 2) Ebbing Elite Controllers (EEC, n = 5) with transient viremia (blips); and 3) Viremic Controllers (VC, n = 7) with plasma viremia <5,000 copies/mL. HIV - 1 infected subjects u ntreated non - controllers (NC), patients under suppressive HAART and HIV - 1 negative healthy individuals were also analyzed as controls. This cohort was enriched by the protective HLA - B alleles B*27 and B*57, but no significant differences were observed among distinct groups of controllers. 2 - LTR circles were detected in EEC (3/5) and VC (6/7) , but not in EC. A higher frequency of activated CD8 + T cells was observed in EEC and VC than in HIV negative subjects. EC displayed a weaker Gag/Nef IFN - γ T cell response and a significantly lower proportion (p < 0.05) of anti - HIV IgG antibodies than EEC, VC and NC groups. These data showed that EEC and VC are able to mount a stronger HIV - specific immune response, but experience increases in the level of immune activation, microbial translocation and size of the HIV - 1 DNA reservoir compared to EC. These results highlight the heterogeneity of the HIV controllers and reinforce the needs for a precise classification of patients with different levels of viral suppression.

Made available in DSpace on 2016-04-04T12:35:27Z (GMT). No. of bitstreams: 2 rafaella_reis_ioc_mest_2014.pdf: 1575570 bytes, checksum: 5c1e218abcd29ee34857d52a4ba58b7a (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A Síndrome de Wiskott-Aldrich (WAS) é uma imunodeficiência associada a infecções recorrentes, câncer e autoimunidade. Ela é causada por mutações no gene que codifica a molécula WASP (\201CWiskott-Aldrich syndrome protein\201D), envolvida na reorganização do citoesqueleto de actina em células de origem hematopoiética. Camundongos deficientes em Wasp (WKO) apresentam migração leucocitária e proliferação linfocitária deficientes, e desenvolvem colite. Esse processo inflamatório está associado a eventos de imunodesregulação importantes, como participação exacerbada de células Th2 e diminuição de células T regulatórias (Treg) no timo e baço desses animais. Assim, esse trabalho visa caracterizar as células Treg tímicas e avaliar os mecanismos potencialmente relacionados à diminuição dessas células no timo de camundongos WKO. Nas análises de CD25 e CD122, importantes para a diferenciação de células Treg, observamos uma diminuição na expressão de CD25 na população de células CD4+CD8-Foxp3+, além de uma diminuição no número percentual dessa população. As células Treg tímicas de animais WKO apresentaram níveis normais de CD122 e de moléculas de ativação, mas mostraram uma diminuição na expressão da molécula funcional CD39, responsável pela hidrólise tecidual de ATP Saliente-se ainda que estudos sobre a morte celular ex-vivo, a transmigração in vitro mediada por S1P e a localização intratímica de células Treg não revelaram diferenças significativas na comparação entre animais WKO e seus controles. De forma interessante, precursores tímicos de células Treg CD4+CD8-CD25+Foxp3- também se apresentaram diminuídos em WKO, assim como as células Treg Helios+. Além disso, observamos um aumento importante na expressão basal de pSTAT-5 nas células Treg nos camundongos WKO e também nos precursores dessas células. Nossos resultados indicam uma participação importante da proteína Wasp no desenvolvimento de células Treg tímicas, mas apontam para a necessidade de estudos mais detalhados sobre os mecanismos envolvidos na geração deficiente de células Treg em camundongos WKO / The Wiskott - Aldrich syndrome (WAS) is an immunodeficiency associated with recurrent infections, malignancies and autoimmunity. It is caused by mutations in the gene encoding WASP (Wiskott - Aldrich syndrome protein), a molecule involved in the actin cytoskel eton rearrangements in hematopoietic cells. Wasp deficient mice (WKO) show impaired leukocyte migration and lymphocyte proliferation, and also develop colitis. This inflammatory process is associated with important immunodysregulation events, such as exac erbated participation of Th2 cells and decreased numbers of regulatory T cells (Treg) in the thymus and spleen of these animals. Thus, this study aims to characterize the thymic Treg cells and evaluate the potential mechanisms involved in the decreased num ber of these cells in the thymus of WKO mice. In the analysis of CD25 and CD122, important molecules for the differentiation of Treg cells, we observed a decreased expression of CD25 in the CD4 + CD8 - Foxp3 + cells, and a decrease in the percentage number of t his population. WKO Treg cells showed normal levels of CD122 and activation molecules, but present a decreased expression of the functional marker CD39, molecule responsible for ATP hydrolysis in the tissues. Also, it is important to point out that studies about ex vivo cell death, S1P - mediated in vitro transmigration and intratymic localization of Treg cells revealed no significant differences between WKO animals and their controls. Interestingly, both CD4 + CD8 - CD25 + Foxp3 - Treg precursors and Helios + Treg c ells are reduced in WKO thymus. More over, we also observed an important increase in the basal expression of pSTAT - 5 in Treg cells of WKO mice and their precursors. Altogether, our results indicate an important role of Wasp in thymic Treg cell development, and point to the necessity of further studies on the mechanisms involved in the generation of Treg cells in WKO mice.

Made available in DSpace on 2016-05-11T12:56:38Z (GMT). No. of bitstreams: 2 leonardo_ruivo_ioc_mest_2016.pdf: 2337878 bytes, checksum: 69b7ee821ee7eed53dca00b82150fc69 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2016 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Alterações no perfil de glicosilação de proteínas, células e tecidos têm sido utilizadas como marcadores biológicos para processos fisiológicos e patológicos. Glicoconjugados contendo o ácido siálico (Neu5Ac) estão envolvidas em interações celulares e parasito-hospedeiro, tráfego de linfócitos e regulação do sistema imune. O Trypanosoma cruzi, agente etiológico da doença de Chagas (DC), expressa em sua superfície e libera no plasma do hospedeiro, uma enzima restrita ao gênero Trypanosoma, a trans-sialidase (TS). Esta é capaz de transferir Neu5Ac de moléculas doadoras e realocá-las em moléculas na superfície do parasito ou sialilar glicoproteínas de células do hospedeiro. A molécula CD43 é um importante aceptor de Neu5Ac em células T e um provável sítio de ação da TS. Na infecção experimental pelo T. cruzi, as células T CD8+ apresentam, majoritariamente, perfis segregados (i) perforina+ (Pfn+), com ação citotóxica, ou (ii) interferon-gama+ (IFN\03B3+), com perfil inflamatório. Estas células estão diferencialmente compartimentalizadas e atuam de forma antagônica, enquanto as Pfn+ se acumulam na inflamação cardíaca e contribuem para a injúria tecidual, as IFN\03B3+ estão majoritariamente na periferia (sangue e baço) e atuam de forma benéfica. Neste trabalho, propomos que na infecção pelo T. cruzi há alterações de glicofenótipos em proteínas séricas e subpopulações de linfócitos T CD8+ funcionalmente segregadas. Camundongos C57BL/6 foram infectados pela cepa Colombiana do T. cruzi e analisados clinicamente. O glicofenótipo de proteínas séricas foi analisado por espectrometria de massas (MALDI-TOF) e o glicofenótipo de tecido cardíaco e de células do baço foi analisado usando lectinas por histoquímica e citometria de fluxo, respectivamente Não detectamos modificação no perfil glicosídico em proteínas séricas em animais infectados. Observamos, no tecido cardíaco, reduzida marcação para a lectina Peanut agglutinin (PNA), aumento para Sambucus nigra (SNA) e não alteração para Maackia amurensis (MAL) em células musculares e inflamatórias. Notamos nas fases aguda (42 dpi) e crônica (120 dpi) aumento na frequência de células PNA+ nas células T CD8+CD43+ e CD4+CD43+, redução no percentual de células SNA+ nas células T CD8+ e CD4+ e diminuição na proporção de células MAL+ nas células T CD4+ e CD8+CD4+. Células T CD8+ totais ou CD8+PNA+ apresentaram perfis semelhantes de ativação (CD44+CD62L-), migração (LFA-1+CCR5+ ou LFA-1+CCR1+) e funcionalidade (Pfn+, Pfn+IFN\03B3+ ou IFN\03B3+). Em 120 dpi, detectou-se enriquecimento de células CD8+PNA+IFN\03B3+ no baço. Assim, durante a DC experimental, células T CD8+PNA+ apresentam-se ativadas e com potencial de migrar e exercer atividade inflamatória (IFN\03B3+), contudo estas não foram detectadas em tecido cardíaco. Resta-nos esclarecer se estas células não migram para este tecido, acumulando-se na periferia, ou se ao entrarem no tecido cardíaco têm seu glicofenótipo alterado ou morrem de modo seletivo. Embora nossos achados não permitam a identificação de biomarcadores de natureza glicosídica de progressão e/ou gravidade da DC, abrem perspectivas para explorar outros modelos experimentais de infecção e para estudos sobre a compartimentalização de células fenotipicamente distintas e funcionalmente relacionadas à proteção contra a injúria cardíaca na infecção pelo T. cruzi / Changes in glycosylation profile of proteins, cells and tissues have been used as biological markers of physiological and pathological processes. Glicoconjugates containing sialic acid (Neu5Ac) are involved in cell and host-parasite interactions, lymphocyte traffic and regulation of the immune system. Trypanosoma cruzi, the causative agent of Chagas disease (CD), expresses on the surface and releases in the host plasma, a restricted enzyme to the genus Trypanosoma, the trans-sialidase (TS). This enzyme transfers Neu5Ac from donor molecules and relocates them on parasite surface molecules or sialylates glycoproteins of the host cells. The CD43 molecule is a major acceptor of Neu5Ac on T cells and a target site for TS. In experimental T. cruzi infection, CD8+ T cells have, mostly, segregated profiles (i) perforin+ (Pfn+) with cytotoxic action, or (ii) interferon-gamma+ (IFN\03B3+), with inflammatory profile. These cells are differentially compartmentalized and play antagonistic roles, while the Pfn+ cells accumulate in cardiac inflammation and contribute to tissue injury, the IFN\03B3+ are, mostly, at the periphery (blood and spleen) and play a beneficial role. In the present study, we propose that in T. cruzi infection there are glycophenotype changes in serum proteins and subpopulations of functionally segregated CD8+ T lymphocytes. C57BL/6 mice were infected with the Colombian strain of T. cruzi and analyzed for clinical changes. The glycophenotype of serum proteins was analyzed by mass spectrometry (MALDI-TOF) and glycophenotypes of the cardiac tissue and splenic cells were analyzed using a lectin-based immunohistochemistry and flow cytometry, respectively In infected mice, we did not detect changes in glycoside profile of serum proteins. In the cardiac tissue, we observed reduced staining for the lectin Peanut agglutinin (PNA), increased for Sambucus nigra (SNA) and no alterations for Maackia amurensis (MAL) in muscle and inflammatory cells. In the acute (42 dpi) and chronic (120 dpi) phases, we noticed increased frequency of PNA+ cells among CD8+CD43+ and CD4+CD43+ T cells, reduced percentage of SNA+ cells among CD8+ and CD4+ T cells and decreased proportion of MAL+ cells among CD4+ and CD8+CD4+ T cells. Total and PNA+ CD8+ T cells showed similar profiles of activation (CD44+CD62L-), migration (LFA-1+CCR5+ cells or LFA-1+CCR1+) and functionality (Pfn+, Pfn+IFN\03B3+ or IFN\03B3+). At 120 dpi, there is an enrichment in IFN\03B3+ cells among splenic CD8+PNA+. Thus, in experimental CD PNA+ CD8+T cells are activated and potentially able to migrate towards heart tissue and show inflammatory profile (IFN\03B3+); however, PNA+ cells were not detected in this tissue. It remains to be clarified whether these cells do not migrate to this tissue, accumulating in peripheral tissues, or whether they enter the cardiac tissue but have their glycophenotype modified or selectively dye. Although, our finds do not allow identifying glycosidic biomarkers of progression and/or severity of CD, they open new pathways to be explored using other experimental models of infection and studying the compartmentalizationof phenotypically and functionally distinct cells associated with detrimental or protective role in heart injury in T. cruzi infection

Introdução: Desde a década de 1970, quando se observou que a transfusão pré-transplante renal diminuía a rejeição ao enxerto, o efeito transfusion-related immunomodulation (TRIM) vem sendo estudado, não havendo, ainda, um entendimento completo de seu mecanismo. Recentemente, a descrição das células T reguladoras (TREG) trouxe novas possibilidades de compreensão desse fenômeno, com grande implicação terapêutica. Objetivos: Avaliar a proporção de células TREG antes e após a transfusão de concentrado de hemácias em uma amostra de pacientes clínicos não imunossuprimidos e correlacionar os resultados com o volume transfundido e o tempo de estocagem do sangue. Métodos: Pacientes com diversas patologias clínicas e com indicação de transfusão de concentrado de hemácias foram recrutados consecutivamente. Após assinatura do consentimento informado, o número de células TREG pré e pós-transfusão foi avaliado, bem como sua correlação com o número de unidades transfundidas e o tempo de estocagem. Resultados: Observou-se um aumento estatisticamente significativo na proporção de células TREG (CD4+, CD25+, FOXP3+) 72 horas após a transfusão (p=0,003). Tal aumento mostrou correlação com o número de unidades transfundidas, mas não com o tempo de estocagem (p=0,017 e 0,49, respectivamente). Conclusão: O aumento do numero de células TREG parece estar presente após transfusão de hemácias não leucodepletadas mesmo em uma amostra heterogênea, o que reforça sua importância clínica. A influência do número de unidades mas não do tempo de estocagem corrobora estudos anteriores. O mecanismo molecular do efeito TRIM, bem como seu impacto clínico em um cenário real, ainda precisam ser melhor avaliados. / Background: Transfusion-related immunomodulation (TRIM) has been the subject of research since the 1970s, when transfusion before kidney transplantation was found to decrease the rates of allograft rejection, but the mechanisms underlying this effect have yet to be fully elucidated. The recent description of regulatory T cells (TREG) has paved the way for a new understanding of this phenomenon, with major therapeutic implications. Objectives: To assess the levels of TREG cells before and after transfusion of packed red blood cells in a clinical sample of non-immunosuppressed patients and to correlate findings with the volume of blood transfused and length of storage. Methods: Patients with a variety of clinical conditions and with an indication for transfusion of packed red blood cells were recruited consecutively. After providing informed consent, pre- and post-transfusion TREG levels were measured, and their correlation with number of units transfused and length of storage was assessed. Results: There was a significant increase in the levels of TREG cells (CD4+/CD25+/FOXP3+) within 72 hours of transfusion (p=0.003). This increase correlated with the number of units transfused, but not with length of storage (p=0.017 and 0.49, respectively). Conclusion: An increase in TREG cell levels appears to follow transfusion of non-leukoreduced packed red blood cells even in a heterogeneous sample, which highlights the clinical relevance of this phenomenon. The influence of number of transfused units, but not of length of storage, on the results corroborates the findings of previous non-clinical studies. Further research is warranted to better investigate the molecular mechanism of the TRIM effect, as well as its clinical impact in real-world settings.

Objetivo: Avaliar a freqüência das células T reguladoras (Tregs) em crianças com diagnóstico novo de Púrpura Trombocitopênica Imune (PTI) e a sua associação com a contagem de plaquetas na ocasião, comparando os achados com os de controles saudáveis. Pacientes e Métodos: Foi realizado um estudo caso-controle, no qual foram incluídos 19 pacientes com diagnóstico novo de PTI e 19 controles. Para cada um dos casos, foram coletadas quatro amostras de sangue em períodos distintos, sendo eles ao diagnóstico – antes da instituição de qualquer terapêutica – e após um, três e seis meses do mesmo. Para os controles, utilizou-se amostra de sangue de 19 pacientes saudáveis, coletadas eletivamente. Em todas as amostras de sangue foi realizada contagem de plaquetas através de hemograma e avaliação dos linfócitos Tregs (CD4+ CD25+ Foxp3) por citometria de fluxo. Resultados: A idade média ao diagnóstico de PTI foi de 6,53 ± 4,14 anos. Dos 17 pacientes tratados, 13 receberam apenas corticosteróide oral e quatro pacientes receberam corticosteróide e imunoglobulina endovenosa associada em algum momento do tratamento. Em relação à evolução da doença, 14 crianças apresentaram remissão completa, duas remissão e três PTI crônica. Houve diferença estatisticamente significativa no número de plaquetas entre os grupos caso e controle nas amostras 1 e 4. Não houve diferença significativa na contagem de Tregs entre os casos e os controles em nenhum momento de coleta. Não foi encontrada correlação estatisticamente significativa entre Tregs e o número de plaquetas entre os casos e os controles, nem nos pacientes do grupo caso ou do grupo controle analisados separadamente. Não houve diferença na contagem de células Tregs entre os grupos de pacientes crônicos e não crônicos. Conclusão: Os achados deste estudo não nos permitiu evidenciar correlação estatisticamente significativa entre Tregs e o número de plaquetas nos grupos caso e controle. As células T CD4+ CD25+ Foxp3 (Tregs) parecem não desempenhar um papel crucial na regulação da auto-imunidade em pacientes pediátricos com diagnóstico de PTI, provavelmente, devido à existência de outros mecanismos responsáveis pela auto-imunidade em crianças, ainda não identificados. / Objective: To assess the frequency of regulatory T cells (Tregs) in children with a new diagnosis of Immune Thrombocytopenic Purpura (ITP), and its association with the counts of platelets on the occasion, and compare with healthy controls. Patients and Methods: A case-control study was conducted, in which 19 patients with new diagnosis of ITP and 19 controls were included. For each case, four blood samples were collected at different point times, that is, at the diagnosis – before the establishment of any treatment – and after one, three and six months. For the controls, electively collected blood samples from 19 healthy patients were used. For all blood samples, platelets were counted through a CBC and assessment of Treg lymphocytes (CD4+ CD25+ Foxp3) by flow cytometry. Results: The mean age at the ITP diagnosis was 6.53 ± 4.14 years. Of 17 treated patients, 13 received oral corticosteroid only, and four patients received corticosteroid and associated intravenous human immunoglobulin at some point in the treatment. Regarding the disease course, 14 children showed full remission, two partial remission, and three chronic ITP. There was a statistically significant difference in the number of platelets between the case and control groups in the samples 1 and 4. There was no significant difference in the counts of Tregs between cases and controls at any collection time. No statistically significant correlation was found between Tregs and number of platelets between cases and controls, neither in patients in the case group nor in the control group who were analyzed separately. There was no difference in the counts of Treg cells between the groups of chronic and non-chronic patients. Conclusion: The findings of this study did not show any statistically significant correlation between Tregs and number of platelets in the case and control groups. The T cells CD4+ CD25+ Foxp3 (Tregs) seems did not play a key role in the regulation of self-immunity in pediatric patients diagnosed with ITP. Other mechanisms, which aren’t still identified, are likely to account for self-immunity in children.

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandarego@gmail.com) on 2015-03-27T15:45:24Z No. of bitstreams: 1 Tese_ICS_Thiago Marconi de Souza Cardoso.pdf: 2610900 bytes, checksum: 39ec1903c01809723208857851e6be48 (MD5) / Approved for entry into archive by Delba Rosa (delba@ufba.br) on 2015-03-30T12:07:56Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_ICS_Thiago Marconi de Souza Cardoso.pdf: 2610900 bytes, checksum: 39ec1903c01809723208857851e6be48 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-30T12:07:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_ICS_Thiago Marconi de Souza Cardoso.pdf: 2610900 bytes, checksum: 39ec1903c01809723208857851e6be48 (MD5) / CNPq / Introdução: A leishmaniose cutânea (LC) causada por Leishmania braziliensis é caracterizada por uma forte resposta tipo Th1, que está envolvida no desenvolvimento das lesões. Em áreas endêmicas de transmissão de L.braziliensis, indivíduos que apresentam reação de hipersensibilidade tardia positiva para antígeno de leishmania (SLA) e sem história atual ou passada de doença são considerados como tendo uma infecção subclínica (SC). Esses indivíduos produzem menos IFN- e TNF-α em comparação com pacientes com LC e os mecanismos pelos quais os indivíduos SC controlam a infecção ainda não são compreendidos Objetivo: O objetivo deste estudo é caracterizar o papel de células T CD8+ na infecção SC e em pacientes com LC. Materiais e Métodos: Os monócitos isolados a partir de células mononucleares do sangue periférico (CMSP) de indivíduos LC e SC foram infectados com L.braziliensis e co-cultivadas com células T CD8+. A avaliação da infecção de monócitos, marcadores citotóxicos e a apoptose de células alvo foi realizada por citometria de fluxo (FACS). A frequência de células T e a produção intracelular de IFN- após estimulação com SLA foi avaliada por FACS. A avaliação da granzima B (GrB) nos sobrenadantes de co-cultura foi realizada por ELISA Resultados: Apesar de não haver diferença na frequência de células T CD4+ e CD8+ entre indivíduos SC e pacientes com LC, após estimulo com SLA observou-se que células T CD8+ são a principal fonte de IFN- em indivíduos SC. Os monócitos de indivíduos SC foram menos susceptíveis à infecção do que os monócitos de LC. As células T CD8+ de pacientes com LC apresentaram um maior efeito citotóxico sobre monócitos infectados em comparação com células T CD8+ de indivíduos SC. Além disso, a produção de GrB por células T CD8+ foi superior em LC do que em indivíduos SC Conclusão: Esses resultados sugerem que enquanto em indivíduos SC as células T CD8+ apresentam funções inflamatórias associadas a bom prognóstico, nos pacientes com LC estas células parecem estar mais envolvidas na patologia.

A utilização da terapia antiretroviral, atualmente mais amplamente acessível, implica na permanência da identificação da resistência viral e monitoramento da doença como itens importantes em adultos e pacientes pediátricos infectados pelo vírus da imunodeficiência humana tipo 1. Os principais marcadores da infecção por HIV-1, utilizados no monitoramento da infecção e curso da doença, são as contagens de células T CD4+ e a carga viral. Ambos são úteis como parâmetros indicadores para o início da terapia e na avaliação de sua eficácia. Além disto, a sua associação a testes de genotipagem para a identificação de mutações de resistência viral, pode auxiliar na indicação da conduta clínica mais adequada. No presente estudo, analisamos os valores da carga viral e taxas de linfócitos T CD4+ e CD8+ na avaliação do status imunológico de 25 crianças com indicação para a terapia antiretroviral, condicionando o regime terapêutico aos resultados do teste de genotipagem. A identificação dos subtipos virais foi feita por análise filogenética e a genotipagem incluiu a análise dos genes protease e transcriptase reversa do HIV-1. Dezoito amostras foram agrupadas no subtipo viral B e três no subtipo F1; cepas recombinantes também foram observadas, sendo uma BF, duas BD e uma DF. Dezoito crianças apresentaram mutações conferindo resistência viral aos inibidores da transcriptase reversa análogos de nucleosídeo e sete crianças apresentaram resistência aos inibidores não-análogos, com seis relatando resistência a nevirapina, delavirdina e efavirenz. Além disto, duas crianças, nas quais a terapia havia sido descontinuada dois a três anos antes da avaliação do teste de genotipagem, apresentaram as mutações K101E, K103N e G190A, conferindo resistência às três drogas. As mutações mais frequentes para o gene da transcriptase reversa foram observadas nos codons M41L, M184V e T215FY. Entretanto, dez crianças apresentaram relevante número de mutações de resistência viral, variando entre cinco a dez, que conferiram resistência a no mínimo quatro e até onze drogas antiretrovirais. Para o gene da protease, as mutações de resistência mais comuns foram observadas nos codons M46I, D30N e I54LV. Treze crianças apresentaram resistência viral a, no mínimo, duas e até 12 drogas. A adequação da terapia antiretroviral altamente potente (HAART), de acordo com o padrão de resistência viral, permitiu observar aumento dos valores de células T CD4+ em 12 dos 25 pacientes pediátricos, demonstrando melhoria na sua condição de imunodeficiência associada ao HIV. Decréscimos importantes da carga viral foram observados em 17 crianças, com níveis indetectáveis de RNA HIV alcançados em 13 delas, sendo 11 com linhagens virais resistentes a múltiplas drogas. O desenvolvimento de linhagens virais resistentes é uma das principais razões da falha terapêutica. Mesmo considerando outros fatores causais, tais como aderência, metabolismo e níveis adequados das drogas, a identificação do perfil de resistência viral é um importante fator na conduta para a adequação de esquemas terapêuticos, dando suporte ao uso racional das drogas antiretrovirais em programas de tratamento. / With antiretroviral therapy becoming more widely available nowadays, Human Immunodeficiency Virus type 1 resistance identification and monitoring of disease remains of great importance in adults and infected children. The major HIV-1 infection markers usually used for monitoring viral infection and disease course are CD4+ T cell counts or percentages and HIV viral load. Both of them are helpful indicating when to start therapy and evaluating its efficacy. Also, their association with genotyping tests to identify viral resistant mutations may help clinicians for the most adequate clinical conduct. In the present study, we assessed HIV-1 viral load and CD4+ and CD8+ T lymphocyte rates for the immunological status evaluation of 25 antiretroviral-treated children managing therapeutic regimens according to genotyping test results. Drug resistance evaluation was done using genotyping covering protease and reverse transcriptase genes. Additionally, all of the 25 vertically HIV-1 infected children were assessed for viral subtyping throughout phylogenetic analysis. Eighteen samples clustered at B subtype and three clustered at F1 subtype; one BF, two BD and one DF recombinant strains were also observed. Eighteen children presented, at least, one mutation conferring resistance to the nucleoside reverse transcriptase inhibitors, and seven children presented resistance to the non-nucleoside inhibitors, with six resistant to all three drugs, nevirapine, delavirdine, and efavirenz. In addition, two children in whom the therapy had been discontinued two to three years before testing presented K101E, K103N, and G190A mutations conferring resistance to the all three drugs. Reverse transcriptase gene mutations were more frequently observed at codons M41L, M184V, and T215FY. However, ten children presented an important number of viral resistance mutations, ranging from five to ten mutations, conferring resistance to at least four to up to eleven antiretroviral drugs. Protease gene mutations were more frequently seen at codons M46I, D30N, and I54LV. Thirteen children presented viral resistance to at least two to up to twelve drugs. The management of the highly active antiretroviral therapy (HAART) according to viral resistance in our group of pediatric patients allowed an increase in CD4+ T cell counts and/or percentage in 12 of the 25 children, showing an improvement in their HIV-associated immunodeficiency status. Important viral burden declines were observed in 17 children, and HIV RNA undetectable levels were reached in 13 of them. Among these 17 children, 11 were multi-drug resistant. The development of resistant viral strains is one of the main reasons for failure of antiretroviral therapy. Even considering other causal factors such as compliance of the patient, metabolism of drugs and drug levels, viral resistance profile identification is an important factor in the management of therapeutic regimens, supporting the rational use of antiretroviral drugs by treatment programs.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:24Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-07-24Bitstream added on 2014-06-13T19:04:08Z : No. of bitstreams: 1 000735718.pdf: 2141423 bytes, checksum: 581a76413b45fc590a05b11af8c88bbc (MD5) / O câncer colorretal (CCR) um dos principais tipos de tumor em todo mundo. Em alguns casos observa-se forte influência hereditária em seu desenvolvimento nas formas familiares, enquanto que na maioria dos pacientes (85%) essa doença se apresenta na forma esporádica, cuja origem é multifatorial, com grande influência da alimentação, tabagismo e etilismo, além de processos inflamatórios crônicos. Seu tratamento convencional consiste em intervenção cirúrgica acompanhada de terapias com doses elevadas de drogas citotóxicas. Apesar dessa intervenção radical, recidivas em pacientes com CCR são muito freqüentes, apontando para a necessidade de abordagens mais efetivas e para a possibilidade de combinação de diferentes formas de tratamento. Dada a importância do CCR como problema de saúde pública e da possibilidade de modulação do sistema imunológico dos pacientes, o presente trabalho é apresentado em dois capítulos, sendo o primeiro uma revisão de literatura sobre a doença propriamente dita, abordando os tratamentos empregados, a influência da resposta inflamatória em sua gênese e o papel da resposta imunológica na doença. Essa revisão foi redigida de acordo com as normas da revista Cancer Science. O segundo capítulo, redigido seguindo as normas da revista Cancer Immunology, Immunotherapy, refere-se ao desenvolvimento do estudo experimental, no qual foi avaliada a eficiência funcional de células dendríticas (DCs) humanas transfectadas com RNA total de células tumorais pré-tratadas com concentrações não tóxicas ou efetiva mínima de 5-fluorouracil (5-FU). Os resultados obtidos indicam que a transfecção das DCs com RNA de células tumorais expostas à droga aumenta sua capacidade de apresentação de antígenos alogênicos aos linfócitos T e de indução de resposta tumor-específica (geração in vitro de linfócitos T citotóxicos e produção de INF-γ). Esse achado mostra... / Colorectal cancer (CRC) is one of the most frequent tumor types worldwide, mainly in developed countries, and can be classified as inheritedfamilial (25%) or sporadic (75%) forms, which suggest an important relationship of gene-gene and gene-environment interactions in the development of the disease. CRC is characterized by genetic and epigenetic alterations, and is histologically featured by the infiltration of inflammatory cells among malignant and stromal cells. The most common inflammatory cells in tumor tissue are neutrophils, mast cells, natural killer cells, macrophages and dendritic cells as well as lymphocytes. However, the presence of these cells in CRC can both be associated with cancer inhibition and tumor progression, since the development a chronic inflammatory response can be a predisposal condition for the development of this type of cancer. Considering these multifactorial aspects of CRC development, in this review we present data on the main genetic and epigenetic aspects, and the influence of diet and inflammation on tumor progression. Moreover, we discuss the importance of dendritic cells on CRC immunological responsiveness and their use as therapeutic vaccine for cancer immunotherapy

Orientador: Ramon Kaneno / Banca: Ângela Maria VC Soares / Banca: Denise Fecchio / Banca: Andréa Vanessa Domeneghini / Banca: Silvia B. Mazzon / Resumo: O câncer colorretal (CCR) um dos principais tipos de tumor em todo mundo. Em alguns casos observa-se forte influência hereditária em seu desenvolvimento nas formas familiares, enquanto que na maioria dos pacientes (85%) essa doença se apresenta na forma esporádica, cuja origem é multifatorial, com grande influência da alimentação, tabagismo e etilismo, além de processos inflamatórios crônicos. Seu tratamento convencional consiste em intervenção cirúrgica acompanhada de terapias com doses elevadas de drogas citotóxicas. Apesar dessa intervenção radical, recidivas em pacientes com CCR são muito freqüentes, apontando para a necessidade de abordagens mais efetivas e para a possibilidade de combinação de diferentes formas de tratamento. Dada a importância do CCR como problema de saúde pública e da possibilidade de modulação do sistema imunológico dos pacientes, o presente trabalho é apresentado em dois capítulos, sendo o primeiro uma revisão de literatura sobre a doença propriamente dita, abordando os tratamentos empregados, a influência da resposta inflamatória em sua gênese e o papel da resposta imunológica na doença. Essa revisão foi redigida de acordo com as normas da revista Cancer Science. O segundo capítulo, redigido seguindo as normas da revista Cancer Immunology, Immunotherapy, refere-se ao desenvolvimento do estudo experimental, no qual foi avaliada a eficiência funcional de células dendríticas (DCs) humanas transfectadas com RNA total de células tumorais pré-tratadas com concentrações não tóxicas ou efetiva mínima de 5-fluorouracil (5-FU). Os resultados obtidos indicam que a transfecção das DCs com RNA de células tumorais expostas à droga aumenta sua capacidade de apresentação de antígenos alogênicos aos linfócitos T e de indução de resposta tumor-específica (geração in vitro de linfócitos T citotóxicos e produção de INF-γ). Esse achado mostra ... / Abstract: Colorectal cancer (CRC) is one of the most frequent tumor types worldwide, mainly in developed countries, and can be classified as inheritedfamilial (25%) or sporadic (75%) forms, which suggest an important relationship of gene-gene and gene-environment interactions in the development of the disease. CRC is characterized by genetic and epigenetic alterations, and is histologically featured by the infiltration of inflammatory cells among malignant and stromal cells. The most common inflammatory cells in tumor tissue are neutrophils, mast cells, natural killer cells, macrophages and dendritic cells as well as lymphocytes. However, the presence of these cells in CRC can both be associated with cancer inhibition and tumor progression, since the development a chronic inflammatory response can be a predisposal condition for the development of this type of cancer. Considering these multifactorial aspects of CRC development, in this review we present data on the main genetic and epigenetic aspects, and the influence of diet and inflammation on tumor progression. Moreover, we discuss the importance of dendritic cells on CRC immunological responsiveness and their use as therapeutic vaccine for cancer immunotherapy / Doutor

Made available in DSpace on 2015-05-22T12:38:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000468627-Texto+Completo-0.pdf: 868809 bytes, checksum: da322f4444f2d9e11e6d453c3af66303 (MD5) Previous issue date: 2015 / Tooth movement in response to orthodontic forces is results from remodeling changes that affect the periodontal ligament and the bone surrounding teeth. This movement may be faster or slower depending on the physical characteristics of the force applied and the biological response induced, and is characterized by zones of compression and tension on the periodontal ligament. Knowledge about the tissue changes generated in this process is essential to plan the movement of teeth and their adjoining structures into a new position without any damage to tissues. In this study, the literature was reviewed to improve our understanding of the cellular, biochemical and molecular phenomena that affect the structures of the periodontal ligament (PL), as well as the alveolar bone surrounding the tooth and involved in the tooth movement that is induced in the process. The purpose of our systematic review was to evaluate studies about cytokines in gingival fluid (GF) during orthodontic treatment, summarize the patterns of cytokine regulation that have been more frequently studied and discuss their clinical implications.Additionally, we investigated changes in immunological and bone modulators in response to the application of orthodontic forces. For that purpose, GF of teeth that were involved in maxillary expansion was evaluated qualitatively to measure interleukin concentrations and their predictive value as a market of inflammatory response intensity and bone turnover during orthodontic movement. The purpose of this investigation was to evaluate whether the force applied on the PL during maxillary expansion affected the composition of the gingival crevicular fluid (GCF), specifically the level of IL-17 on the sides where tension and compression were applied. GCF samples were collected from the mesiobuccal and mesiolingual areas of 32 molars of 16 patients aged 7 to 14 years who had to undergo maxillary expansion.These patients started orthodontic treatment sometime between 2012 and 2013 at the School of Dentistry of the Pontifícia Universidade Católica do Rio Grande do Sul (PUCRS), Porto Alegre, Brazil. Metal bands were placed around the permanent maxillary first molars to hold a modified Hyrax expander. One of the investigators collected clinical data about the sites listed above during activation of the expander. An enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was used to detect interleukin levels. The sites were examined to measure IL-17 before the device was placed and at 1, 7 and 14 days of active use of the expander. The forces applied resulted in an increase in IL-17 expression in periodontal tissues one day after the application of tension and compression at both measurement sites. IL-17 levels tended to be higher (p ≤ 0. 05) seven days after the Hyrax screw was activated. From that time to the fourteenth day, there was a tendency to a decrease in IL-17 levels (p ≤ 0. 05). We concluded that there was an increase in IL-17 expression at both tension and compression sites in response to force application. / O movimento dentário promovido por forças ortodônticas é baseado em alterações remodeladoras que ocorrem no ligamento periodontal e no osso que circundam os dentes. Este movimento pode ocorrer de forma mais rápida ou lenta, dependendo das características físicas da força aplicada e da resposta biológica induzida e é caracterizado por criação de zonas de compressão e tensão no ligamento periodontal. O conhecimento das alterações teciduais geradas é essencial para o planejamento do movimento do dente e de suas estruturas anexas para uma nova posição, sem danos aos tecidos.Neste estudo, uma revisão de literatura teve como objetivo possibilitar a compreensão dos fenômenos celulares, bioquímicos e moleculares que ocorrem nas estruturas do ligamento periodontal (PDL) e, também do osso alveolar ao redor do dente e que estão envolvidos na movimentação dentária induzida.A revisão sistemática teve como objetivo avaliar estudos sobre citocinas no fluido gengival (GCF) durante o tratamento ortodôntico, resumindo os padrões de regulação das citocinas mais estudadas e explorar suas implicações clínicas.Além disso, foram investigadas alterações dos moduladores imunológicos e ósseos em resposta a aplicação da força ortodôntica. Para tanto o fluido gengival de dentes submetidos ao procedimento de expansão maxilar foi avaliado qualitativamente verificando concentrações de interleucinas e seu valor preditivo como marcador da intensidade da resposta inflamatória e turnover ósseo na movimentação ortodôntica. O objetivo da investigação foi avaliar se a força aplicada sobre o ligamento periodontal durante a expansão maxilar se reflete na composição do Fluido do Sulco Gengival (FSG), mais especificamente no nível de interleucina IL-17 dos lados de tensão ou compressão. As amostras do FSG foram coletadas das regiões mesiovestibulares e mésiopalatinas de 32 molares de 16 pacientes com idade entre 7 a 14 anos, que tinham necessidade de expansão maxilar. Estes pacientes iniciaram o tratamento ortodôntico durante o período compreendido entre 2012 e 2013, na Faculdade de Odontologia da Pontifícia Universidade Católica do Rio Grande do Sul (PUCRS). Eles receberam anéis nos primeiro molares permanentes superiores para a confecção de um aparelho disjuntor de Hyrax modificado. Os dados clínicos foram coletados por um investigador nas regiões supracitadas durante o período de ativação do aparelho.Empregando-se o ensaio imunoenzimático (ELISA) foram detectados os níveis da interleucina. Os locais foram analisados para IL-17 antes da colocação do aparelho, 1, 7 e 14 dias de uso ativo do aparelho. As forças empregadas resultaram em um aumento da expressão de IL-17 nos tecidos periodontais após um dia de aplicação em ambos os lados, de tensão e compressão. Os níveis de IL-17 tenderam a ser maiores (p ≤ 0,05) após sete dias de ativação do parafuso. Deste momento, até o décimo quarto dia, observou-se uma tendência para diminuição dos níveis de IL-17 (p ≤ 0,05). Concluiu-se que houve um aumento na expressão de IL-17 em ambos os locais, de tensão e compressão, em resposta à aplicação de força.