Made available in DSpace on 2014-06-12T15:53:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2006 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Lippia alba (Mill.) N. E. Brown (Verbenaceae), amplamente distribuída em todo o território brasileiro, é conhecida popularmente como erva cidreira e utilizada na medicina popular como analgésica, febrífuga, antiinflamatória, antigripal e nas afecções hepáticas. Plantas cultivadas na horta medicinal do Laboratório de Fitoterapia da Empresa Pernambucana de Pesquisa Agropecuária (IPA) foram utilizadas na produção de extratos brutos, para os quais atividades antimicrobiana, citotóxica, antitumoral e antiinflamatória foram avaliadas. Os testes de atividade antimicrobiana foram realizados frente a bactérias Gram-positivas, Gram-negativas, álcool-ácido resistente, fungo filamentoso e levedura. A atividade citotóxica de extratos clorofórmico da raiz e etanólico das folhas, foi avaliada frente à linhagem celular HeLa (derivada de adenocarcinoma de cérvix humano). A DL50 foi determinada para extratos clorofórmicos da raiz e etanólicos das folhas e estes extratos testados para avaliação de ação antitumoral, frente ao Sarcoma 180, e ação antiinflamatória, pelo método do bolsão de ar, em camundongos albinos suíços (Mus musculus). Os resultados foram expressos como médias ± desvios padrão e médias ± erro padrão médio e para a análise estatística dos dados foi utilizado o teste de análise de variância (ANOVA), com intervalo de confiança de 95% (p<0,05). Extratos clorofórmico, acetônico e etanólico da raiz foram ativos frente à Micrococcus luteus, Bacillus subtilis, Stapylococcus aureus, Candida albicans e Monilia sitophila e extratos hexânicos, etanólicos e metanólicos da folhas inibiram apenas M. luteus. Extratos etanólicos das folhas e clorofórmicos da raiz, não exibiram citotoxicidade frente à linhagem celular HeLa (p<0,01). No experimento de toxidez aguda, em camundongos, o extrato etanólico da raiz apresentou DL50 igual a 460mg/kg e o extrato clorofórmico da raiz apresentou DL50 igual a 1146mg/kg. Os extratos etanólico das folhas e clorofórmico da raiz não apresentaram atividade antitumoral frente ao Sarcoma 180 (p<0,05). Quando testados para atividade antiinflamatória apresentaram atividades significativas (p<0,05) com inibição do processo inflamatório equivalente a 35,1% para o extrato etanólico da folha e 58,7% para o extrato clorofórmico da raiz. Compostos com ação antimicrobiana e antiinflamatória, estão presentes principalmente em extratos brutos das raízes e folhas de L. alba. Embora estes extratos não tenham exibido citotoxidade frente as célula HeLa, estudos de citotoxicidade anteriores realizados para estes extratos frente as linhagens celulares HEp-2 e NCI-H292, indicam que o uso medicinal da espécie deve ser feito com precaução

Juvenile silver fish (Rhamdia quelen) were exposed to the essential oil of Lippia alba (L. alba) and transported in plastic bags for different periods (5, 6 and 7 h) yielding final different oxygen levels. The biomarkers of oxidative stress, lipoperoxidation (LPO), catalase (CAT), superoxide dismutase (SOD), and glutathione-S-transferase (GST) were measured in the liver, gills and brain of the fish. The juveniles were assigned to 6 different treatment groups according to the presence or not of the essential oil of L. alba in water (10 μL/L) and the length of transportation, which determined the final concentration of dissolved oxygen inside the bags: Five hours: hyperoxia (13.25 ± 0.35 mg/L O2); hyperoxia with L. alba (11.27 ± 0.22 mg/L O2); Six hours: normoxia (7.35 ± 0.35 mg/L O2); normoxia with L. alba (7.29 ± 0.40 mg/L O2); Seven hours: hypoxia (2.29 ± 0.36 mg/L O2); hypoxia with L. alba (3.82 ± 0.7 mg/L O2). The addition of essential oil of L. alba causes an increase of LPO in the tissues exposed to hyperoxia and a reduction of GST in the fish kept under hyperoxia and hypoxia as compared to those under normoxia. In the tissues there is a reduction of LPO and GST and an increase of SOD in the specimens under hypoxia and a reduction of GST in those under hyperoxia with the oil. These results suggest that the presence of the essential oil of L. alba improves the redox state in the evaluated tissues, both under hyperoxia and under hypoxia. / Juvenis de jundiá (Rhamdia quelen) foram expostos ao óleo essencial de Lippia alba (L. alba) e transportados em sacos plásticos por períodos diferentes (5, 6 e 7 h) produzindo diferentes concentrações finais de oxigênio. Os biomarcadores de estresse oxidativo, lipoperoxidação (LPO), catalase (CAT), superóxido dismutase (SOD), e glutationa-S-transferase (GST) foram mensurados em fígado, brânquias e cérebro de peixes. Os juvenis foram separados em 6 grupos de tratamento diferentes de acordo com a presença ou não do óleo essencial de L. alba na água (10 μL/L) e o tempo de transporte, o qual determinou a concentração final de oxigênio dissolvido no interior dos sacos: Cinco horas: hiperóxia (13.25 ± 0.35 mg/L O2); hiperóxia com L. alba (11.27 ± 0.22 mg/L O2); Seis horas: normóxia (7.35 ± 0.35 mg/L O2); normóxia com L. alba (7.29 ± 0.40 mg/L O2); Sete horas: hipóxia (2.29 ± 0.36 mg/L O2); hipóxia com L. alba (3.82 ± 0.7 mg/L O2). A adição do óleo essencial de L. alba causou um aumento da LPO nos tecidos expostos a hiperóxia e uma redução da GST nos peixes mantidos sob hiperóxia e hipóxia comparado aqueles sob normóxia. Nos tecidos houve uma redução da LPO e GST e um aumento da SOD nas espécies sob hipóxia e uma redução da GST naqueles sob hiperóxia com óleo. Estes resultados sugerem que a presença do óleo essencial de L. alba melhora o estado redox nos tecidos avaliados, ambos sob hiperóxia e sob hipóxia.

CoordenaÃÃo de AperfeÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / This work aimed to isolate and identify endophytic fungi associated to three chemotypes of Lippia alba (Mill.) NE Brown found in Brazilian Northeast and investigate the potential of these fungi in the production of volatile organic compounds (VOCs) and in front biotransformation to organic substrates. In addition, there was a comparative study of the chemical composition of the leaves three chemotypes of L. alba detected both in essential oils obtained by hydrodistillation as the volatile constituents obtained by solid phase microextraction (SPME). The analysis and identification of volatile constituents was performed by gas chromatography coupled to mass spectrometry (GC-MS). The GC-MS data of the samples obtained by hydrodistillation and SPME were subjected to multivariate data analysis, which provided principal component analysis charts (PCA) and hierarchical cluster analysis (HCA), where it was observed that the methodology used obtaining volatile compounds can influence the classification of chemotypes made based on volatile chemically L. alba reported in the literature. The essential oils obtained from the leaves of the three chemotypes of L. alba were tested against nematicide activity, where the essential oil chemotype II had a higher potential nematicide (LD50 = 71.30 ppm). Of the six endophytic fungi isolated from L. alba leaves, only the fungi Colletotrichum sp. (chemotypes I and II) and Scopulariopsis fusca were able to produce VOCs considerably; and wherein the &#61538;&#61485;linalool and &#61538;&#61485;caryophyllene compounds produced by S. fusca have also been detected in the chemical composition leaves from L. alba chemotype I, where the fungus was isolated. The study of VOCs also pointed a biocatalytic potential for endophytic fungi from L. alba. This potential was investigated using (R)-carvona and (R)-limonene as substrates. Variables such as time and culture medium were investigated in both experiments, and the biotransformation of (R)-carvona by strains of L. alba isolated endophytes resulted in the production of three derivatives, among which one of them has not yet been reported in the literature as a product of biotransformation of carvone. Since the biotransformation of (R) led to the production of limonene nine derivatives among which four have not been reported in the literature as the limonene biotransformation products. / Este trabalho teve como objetivo principal isolar e identificar fungos endofÃticos associados a trÃs quimiotipos de Lippia alba (Mill.) N. E. Brown encontrados no Nordeste brasileiro e investigar o potencial desses fungos na produÃÃo de compostos orgÃnicos volÃteis (COVs) e na biotransformaÃÃo frente a substratos orgÃnicos. AlÃm disso, realizou-se um estudo comparativo entre a composiÃÃo quÃmica das folhas de trÃs quimiotipos de L. alba detectada tanto nos Ãleos essenciais obtidos por hidrodestilaÃÃo quanto nos constituintes volÃteis obtidos por microextraÃÃo em fase sÃlida (MEFS). A anÃlise e identificaÃÃo dos constituintes volÃteis foi realizada por cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massa (CG-EM). Os dados de CG-EM das amostras obtidas por hidrodestilaÃÃo e por MEFS foram submetidos à anÃlise multivariada de dados, que forneceu grÃficos de anÃlise de componente principal (ACP) e anÃlise de agrupamento hierÃrquico (AAH), onde foi possÃvel observar que a metodologia utilizada na obtenÃÃo dos compostos volÃteis pode influenciar a classificaÃÃo dos quimiotipos feita com base na constituiÃÃo quÃmica volÃtil de L. alba relatada na literatura. Os Ãleos essenciais obtidos das folhas dos trÃs quimiotipos de L. alba foram testados frente a atividade nematicida, onde o Ãleo essencial do quimiotipo II apresentou maior potencial nematicida (DL50 = 71,30 ppm). Dos seis fungos endofÃticos isolados das folhas de L. alba, somente os fungos Colletotrichum sp. (quimiotipos I e II) e Scopulariopsis fusca foram capazes de produzir COVs consideravelmente; sendo que os compostos &#61538;&#61485;linalol e &#61538;&#61485;cariofileno, produzidos por S. fusca tambÃm foram detectados na constituiÃÃo quÃmica das folhas de L. alba quimiotipo I, de onde o fungo foi isolado. O estudo dos COVs produzidos por fungos tambÃm apontou um potencial biocatalÃtico para os endÃfitos de L. alba. Este potencial foi investigado utilizando-se (R)-carvona e (R)-limoneno como substratos. VariÃveis como meio de cultivo e tempo foram investigadas em ambos experimentos, sendo que a biotransformaÃÃo da (R)-carvona por cepas de endÃfitos isolados de L. alba resultou na produÃÃo de trÃs derivados, dentre os quais um deles ainda nÃo foi citado na literatura como produto de biotransformaÃÃo da carvona. Jà a biotransformaÃÃo do (R)-limoneno levou à produÃÃo de 9 derivados, dentre os quais, 4 ainda nÃo foram relatados na literatura, como produtos de biotransformaÃÃo do limoneno.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Lippia alba (Mill.) N.E. Brown (VERBENACEAE), popularly know as Erva Cidreira Brasileira, has been one of the most commonly herbs used in the Brazilian folk medicine to blood pressure control. This study aimed to investigate the cardiovascular effects of the essential oil of Lippia alba (EOLA) in rats. For the hemodynamic measurement, normotensive male Wistar rats had their abdominal aorta and lower vena cava cannulated. Initially, five chemotypes (geranial, limonene, linalool, mircene, and carvone) were tested in normotensive conscious rats. They were intravenously and in bolus administrated at the doses of 5, 10, 20, 40 and 60 mg/kg. The EOLAG showed the best results on blood pressure, being chosen for the following experiments. The administration of EOLAG (5, 10, 20, and 40 mg/kg, i.v.) induced transient hypotension and bradycardia. These responses were attenuated by atropine (2 mg/kg, i.v.), hexamethonium (20 mg/kg, i.v.) and NG-nitro-Larginine methyl ester hydrochloride (L-NAME - 20 mg/kg, i.v.), but not by indomethacin (5 mg/kg, i.v.). For in vitro approach, the rats were euthanized and the superior mesenteric artery was removed and cut in rings (1-2 mm), which were placed in organ baths containing Tyrode`s solution at 37o C and gassed with carbogen. In intact rings of rat mesenteric artery pre-contracted with phenilephrine (1 μM), EOLAG (1 - 1000 mg/mL) induced relaxation (pD2 = 1.89 ± 0.21; Emax = 110.8 ± 10.8 %) which was not modified after the removal of the endothelium (pD2 = 2.37 ± 0.16; Emax = 134.8 ± 16.5 %), after incubation with TEA (pD2 = 2.23 ± 0.04; Emax = 117.2 ± 4.96 %) or KCl (80 mM) (pD2 = 1.96 ± 0.06; Emax = 112.6 ± 6.70 %). In addition, the EOLAG was able to inhibit the contraction caused by CaCl2 and produced additional effect (34.82 %; n = 5) on maximal relaxation of nifedipine (10 μM). In conclusions, the results demonstrate that the EOLAG induces hypotensive effect, that seems to be caused by muscarinic activation and NO release, and bradycardia, that seems to be due to an activation of ganglion nicotinic and cardiac muscarinic receptors. Furthermore, EOLAG produces vasorelaxation primarily caused by blocking Ca2+ influx through voltage-operated Ca2+ channels. / A Lippia alba (Mill.) N.E. Brown (VERBENACEAE), conhecida popularmente como Erva Cidreira Brasileira, é uma das plantas mais utilizadas na medicina popular brasileira, inclusive para o tratamento da hipertensão arterial. Este estudo buscou investigar os efeitos cardiovasculares do óleo essencial de Lippia alba (OELA) em ratos. Para registro dos parâmetros hemodinâmicos, ratos machos Wistar saudáveis foram canulados na aorta abdominal e na veia cava inferior. Inicialmente foram testados 5 quimiotipos deste óleo (geranial, limoneno, linalol, mirceno e carvona), administrados por via intravenosa e in bolus, nas doses de 5, 10, 20, 40 e 60 mg/kg. Após análise destes resultados, observou-se que o quimiotipo geranial (OELAG) foi o que apresentou o melhor efeito sobre a pressão arterial, tornando-se o quimiotipo de escolha. Em animais saudáveis e não-anestesiados, o OELAG (5, 10, 20 e 40 mg/kg, i.v.) induziu hipotensão e bradicardia transientes. Estes efeitos foram atenuados em animais pré-tratados com atropina (2 mg/kg, i.v.), hexametônio (20 mg/kg, i.v.) ou LNAME (20 mg/kg, i.v.), mas não com indometacina (5 mg/kg, i.v.). Para os experimentos in vitro, os ratos foram eutanasiados e a artéria mesentérica superior foi removida e seccionada em anéis (1-2 mm), os quais foram montados em cubas para órgão isolado contendo solução de Tyrode a 37o C e gaseificada com carbogênio. Em anéis intactos de artéria mesentérica superior de ratos, pré-contraídos com fenilefrina (10 μM), o OELAG (1 - 1000 mg/mL) induziu relaxamento (pD2 = 1,89 ± 0,21; Emax = 110,8 ± 10,8 %) cujo efeito não foi alterado após remoção do endotélio (pD2 = 2,37 ± 0,16; Emax = 134,8 ± 16,5 %), após a incubação com tetraetilamônio (TEA) (pD2 = 2,23 ± 0,04; Emax = 117,2 ± 4,96 %) ou KCl (80 mM) (pD2 = 1,96 ± 0,06; Emax = 112,6 ± 6,70 %). Além disso, o OELAG foi capaz de inibir as contrações induzidas por CaCl2 e produzir um efeito adicional (34,82 %; n = 5) sobre o relaxamento máximo causado pela nifedipina (10 μM) em anéis sem endotélio. Diante destes resultados, pode-se concluir que o OELAG produz efeito hipotensor, que parece ser causado por ativação de receptores muscarínicos e liberação de NO, e bradicardia, que parece ser causado pela ativação de receptores muscarínicos cardíacos e Efeitos cardiovasculares do óleo essencial de Lippia alba em ratos MAYNARD, L.G (2011) 9 nicotínicos ganglionares. Além disso, o OELAG induz vasorelaxamento que parece ser causado inicialmente por um bloqueio do influxo de Ca2+ através dos canais de Ca2+ operados por voltagem.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Lippia alba (Mill.) N. E. Br. is a medicinal plant widely distributed and used in Brazil, because of its sedative activity of the essential oil. This study aimed to characterize and evaluate the behavior of accessions of Lippia alba (Mill.) N. E. Br., collected in several states of Brazil, and maintained in the Active Germplasm Bank of the Federal University of Sergipe (UFS), São Cristóvão county. The first chapter presented a general introduction of the work, the theoretical study about the relationship between genetic resources, seasonality and sustainability in Agroecosystems, origin, botanical aspects and use of L. alba, the essential oil and morphological, agronomic and chemical characterization of germplasm. The second chapter consisted of morphological and agronomic characterization of L. alba germplasm grown in field, using a randomized block design with two replications. The evaluated variables were: length of branch, crown diameter, growth habit, length, width and length/width ratio of leaf, color of stems, veins, leaves, sepals and petals, dry weight of leaves, essential oil content and yield. The results showed morphological differences among accessions for the following variables: length of branch, crown diameter, color of stems, leaves and petals, growth habit, length, width and length/width ratio of leaves. Differences were observed for essential oil content and yield, and the accession LA-60 presented best results for essential oil yield. In the third chapter the chemical composition of the L. alba accessions of the Active Germplasm Bank of the UFS. The chemical composition of essential oils distinguished the accessions into six groups and we observed that Group 3 is formed only by the accession LA-13, which presented predominantly limonene and carvone. In the fourth chapter, the seasonal variation in L. alba genotypes were studied, harvesting in four different seasons. The best results were obtained in the first harvest, which was realized at the end of the rainy season (September/2008). The plants showed higher chemical constituents content at the third harvest (March/2009). / A erva-cidreira-brasileira [Lippia alba (Mill.) N. E. Br.], é uma espécie medicinal amplamente distribuída e utilizada no Brasil, em função da atividade sedativa de seu óleo essencial. Este trabalho visou caracterizar e avaliar o comportamento de acessos de erva-cidreira-brasileira [Lippia alba (Mill.) N. E. Br.], de vários Estados do Brasil, mantidos em Banco Ativo de Germoplasma em São Cristóvão. No primeiro capítulo, apresentou-se a introdução geral do trabalho, o referencial teórico sobre recursos genéticos e sazonalidade na sustentabilidade em Agroecossistemas, a origem, os aspectos botânicos e de uso erva-cidreira-brasileira, o óleo essencial e a caracterização de germoplasma (caracterização morfológica, agronômica e química). O segundo capítulo consistiu da caracterização morfológica e agronômica de acessos de ervacidreira-brasileira cultivados em campo, utilizando-se delineamento experimental em blocos ao acaso com duas repetições. Foram avaliadas as variáveis: comprimento de ramo, diâmetro de copa, hábito de crescimento, largura, comprimento e relação comprimento/largura de folha, cor de caule, nervura, folha, sépala e pétala, massa seca de folha, teor e rendimento de óleo essencial. Os resultados mostraram diferenças morfológicas nos acessos para as variáveis: comprimento de ramo, diâmetro de copa, cor de caule, folhas, pétalas, hábito de crescimento, comprimento e largura de folha e relação comprimento/largura de folha. Para as características agronômicas, foram evidenciadas diferenças para teor e rendimento óleo essencial, sendo o acesso LA-60 o que se destacou para a variável rendimento de óleo. No terceiro capítulo estudou-se a composição química dos acessos pertencentes ao Banco Ativo de Germoplasma da UFS. A composição química dos óleos essenciais distinguiu os acessos em seis grupos e observou-se que Grupo 3 é formado apenas pelo acesso LA-13, onde predominam os compostos limoneno e carvona. No quarto capítulo, estudou-se a sazonalidade em genótipos de Lippia alba (Mill.) N. E. Br., em quatro épocas diferentes. Para as características agronômicas avaliadas, os melhores resultados foram obtidos no primeiro corte, que foi realizado na época do final das chuvas nesta região (setembro/2008). Com relação aos teores dos constituintes químicos, as plantas apresentaram melhores resultados para o terceiro corte (março/2009).

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2016-09-15T12:46:42Z No. of bitstreams: 1 fernandaalvesdefreitasguedes.pdf: 2011976 bytes, checksum: 6684b1525d9f87a2f6e72eadaa42fc34 (MD5) / Approved for entry into archive by Diamantino Mayra (mayra.diamantino@ufjf.edu.br) on 2016-09-26T20:18:53Z (GMT) No. of bitstreams: 1 fernandaalvesdefreitasguedes.pdf: 2011976 bytes, checksum: 6684b1525d9f87a2f6e72eadaa42fc34 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-26T20:18:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 fernandaalvesdefreitasguedes.pdf: 2011976 bytes, checksum: 6684b1525d9f87a2f6e72eadaa42fc34 (MD5) Previous issue date: 2011-02-28 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Lippia alba, também conhecida popularmente como erva cidreira, é uma espécie amplamente distribuída pelas Américas podendo ser encontrada por praticamente todo o Brasil. Muito usada pela medicina popular para o tratamento de problemas gastrointestinais e respiratórios, a folha desta espécie produz um óleo essencial rico em terpenos, principalmente mono e sesquiterpenos. Estes compostos não são apenas de interesse farmacológico, como também industrial. A composição deste óleo pode variar em função de fatores abióticos e também de variações genotípicas. Diante da complexidade da síntese destes compostos a proposta deste trabalho foi uma ampla caracterização do transcriptoma de folha de Lippia alba, além da identificação de prováveis enzimas envolvidas na síntese de terpenos. Para isso, foi feito um sequenciamento deste transcriptoma usando a plataforma 454 (Roche) seguido de uma montagem de novo. Esta plataforma tem sido cada vez mais utilizada para o sequenciamento de transcriptomas numa abordagem conhecida como RNA-Seq. O sequenciamento de biblioteca preparada a partir de RNA total em 1/8 de placa gerou 104.631 leituras com comprimento médio de 184,48bp num total de 19.302.161 bases. Foram feitas montagens das leituras usando 2 diferentes assemblers a fim de compará-las. Com o Newbler 2.5 foi possível montar 2.686 contigs com comprimento médio de 349bp, enquanto o SeqMan2.2 gerou 13.448 contigs com média de 284bp. Em seguida, foi feita a anotação funcional com o Blast2GO para os contigs obtidos nas duas montagens, tendo sido anotados 51,49% e 30,88%, respectivamente, dos contigs do Newbler e do SeqMan. Por fim, a análise das sequências anotadas revelou algumas enzimas potencialmente envolvidas com a síntese de terpenos. Os resultados obtidos neste estudo pioneiro sobre a espécie comprovam que as tecnologias NGS podem ser uma ferramenta bastante eficiente para o sequenciamento de transcriptomas e servirão como referência para o preparo mais específico de novas bibliotecas. Futuros sequenciamentos devem contribuir para uma melhor cobertura do transcriptoma permitindo a descoberta inclusive de transcritos raros. / Lippia alba, popularly known as erva cidreira, is widely distributed throughout the Americas and can be found through almost whole Brazil. This species is largely used in folk medicine to treat gastrointestinal and respiratory problems, especially leaves, which produce an essential oil rich in terpenes, mainly mono-and sesquiterpenes. These compounds are not only of pharmacological interest, as well as industrial. Composition of essencial oil can vary depending on the developmental stage, the plant part and other abiotic factors. However, genotypic variations also contribute to oil composition variation. Given the complexity of terpenes synthesis, including diversity of enzymes involved in these metabolic pathways, the purpose of this work was a L. alba leaf transcriptome characterization, in addition to identifying some enzymes probably involved in terpene synthesis. For that, it was made a transcriptome sequencing using 454 platform (Roche) followed by a de novo assembly. This platform, along with other NGS technologies, has been increasingly used for transcriptome sequencing in an approach known as RNA-Seq. Sequencing of a library prepared from total RNA in 1/8 plate generated 104,631 reads with average length of 184.48 bp and a total of 19,302,161 bases. Read assemblies were made using two different assemblers in order to compare them. While Newbler 2.5, proprietary software platform, assembled 2686 contigs with average length of 349bp, SeqMan2.2 generated 13,448 contigs with an average of 284bp. Then, functional annotation was performed with Blast2GO for all contigs from both assemblies; 51.49% and 30.88% of contigs, respectively, from Newbler and SeqMan were annotated. Finally, analysis of annotated sequences revealed some enzymes potentially involved in terpene synthesis. Results obtained from this pioneering study on the species show that NGS technology can be a very efficient tool for transcriptome sequencing and they will serve as reference for preparation of other more specific libraries. New sequencings should contribute to a better coverage of this transcriptome, allowing discovery of even rare transcripts.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2017-04-04T13:14:56Z No. of bitstreams: 1 diegopandelojose.pdf: 913814 bytes, checksum: 7e149c7c8e0bee3253c4894426a6892c (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2017-04-04T15:36:35Z (GMT) No. of bitstreams: 1 diegopandelojose.pdf: 913814 bytes, checksum: 7e149c7c8e0bee3253c4894426a6892c (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-04T15:36:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 diegopandelojose.pdf: 913814 bytes, checksum: 7e149c7c8e0bee3253c4894426a6892c (MD5) Previous issue date: 2009-03-03 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / FAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / O gênero Lippia pertence à família Verbenaceae, inclusa no clado Asteridaee, ordem Lamiales, compreendendo aproximadamente 175 gêneros e 2800 espécies, onde muitos gêneros apresentam plantas com propriedades medicinais e ornamentais. A espécie Lippia alba, originária da América do Sul, também ocorre no Brasil e é uma das mais estudadas do gênero Lippia. Ela floresce durante o ano todo e recebe grande destaque no gênero, devido às suas inúmeras propriedades medicinais. O óleo essencial de Lippia alba é composto basicamente por sesqui e monoterpenos, que são as substâncias responsáveis por suas propriedades medicinais. O objetivo central do presente trabalho foi clonar e analisar a expressão de dois potenciais genes codificadores de terpeno sintases em Lippia alba. Através do alinhamento de genes codificadores de monoterpeno sintases caracterizadas, primers degenerados foram desenhados dentro de regiões conservadas e utilizados para se obter a clonagem de genes codificadores de terpeno sintases em Lippia alba. Dois potenciais genes codificadores de terpeno sintases foram clonados, LaTPS12 e LaTPS23. Após a clonagem, técnicas de RT-PCR semiquantitativo foram empregadas para análises de expressão desses dois genes em diferentes estágios foliares e em três diferentes quimiotipos de Lippia alba. Os resultados mostraram que em folhas situadas no quarto segmento nodal o gene LaTPS12 apresenta maior nível de expressão. A diferença na expressão do gene LaTPS23 foi menos acentuada nos três quimiotipos analisados em relação ao gene LaTPS12, que apresentou uma expressão diferencial. Análises filogenéticas foram realizadas comparando-se as seqüências desses dois genes com outros genes codificadores de terpeno sintases já caracterizadas de diferentes espécies de plantas. De acordo com essas análises, LaTPS12 e LaTPS23 pertencem à classe TPS-b, que é composta principalmente por monoterpeno sintases de angiospermas. / The genus Lippia belongs to Verbenaceae family, Asteridaee, order Lamiales. This family comprises about 175 genus and 2800 species, and many of them have medicals and ornamentals proprierties. Lippia alba is native from South America, and is also found in Brazil and is the most studied species of the genus Lippia. This plant blooms throughout the year and has great importance due to its medicinal properties. The Lippia alba essential oils are composed by sesquiterpenes and monoterpenes conferring its medicinal properties. The aim of this work was to clone and to analize gene expression of putative terpene synthases genes (TPS) in Lippia alba. Alignment of TPS genes was used to design degenerate primers into conserved domains for cloning of these genes in Lippia alba. We have cloned two putative TPS genes, LaTPS12 and LaTPS23. After cloning, semiquantitative RT-PCR was employed to expression analysis of these two genes in different leaf stages and among three different chemotypes of Lippia alba. The result of expression level showed that LaTPS12 occurred at higher level in leaves located in fourth nodal segment and showed a marked differential expression among the chemotypes. The difference of expression of the LaTPS23 was less prominent comparing the three studied chemotypes. We performed a phylogenetic analysis in order to compare the LaTPS12 and LaTPS23 to others TPS genes in different plant species. The results showed that these LaTPS12 and LaTPS23 belong to the class TPS-b, which comprises mainly angiosperms monoterpene synthases genes.

Submitted by isabela.moljf@hotmail.com (isabela.moljf@hotmail.com) on 2017-04-27T13:44:40Z No. of bitstreams: 1 julianamainentileallopes.pdf: 2178130 bytes, checksum: ac4968430d3e36932e81380861925cd4 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2017-05-12T15:49:17Z (GMT) No. of bitstreams: 1 julianamainentileallopes.pdf: 2178130 bytes, checksum: ac4968430d3e36932e81380861925cd4 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-12T15:49:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 julianamainentileallopes.pdf: 2178130 bytes, checksum: ac4968430d3e36932e81380861925cd4 (MD5) Previous issue date: 2015-03-03 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / FAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Estudos recentes sugerem que a duplicação completa dos genomas é muito mais comum do que sua estabilidade, ocorrendo em todas as angiospermas. Nesse contexto, Lippia alba (Mill.) N.E.Br. (Verbenaceae) constitui um modelo interessante de estudo, pois além de ser a espécie mais estudada dentro do gênero Lippia, é amplamente utilizada na medicina popular apresentando importância econômica, sobretudo em função da riqueza de seus óleos essenciais. Estudos recentes demonstraram a existência de pelo menos cinco diferentes níveis de ploidia em Lippia alba, revelando grande plasticidade do genoma. A fim de contribuir para entender a variação genética e o processo de poliploidização em Lippia alba, o presente trabalho objetivou identificar novos marcadores genéticos do tipo microssatélite e estimar a diversidade genética em 100 acessos de Lippia alba. Foram avaliados nove loci já descritos e 16 novos marcadores. O tamanho dos fragmentos foi detectado por eletroforese capilar usando o sequenciador MegaBACE1000 (GE Healthcare, Buckinghamshire, UK). A identificação dos alelos foi inferida utilizando o software Fragment Profile (GE Healthcare, Buckinghamshire, UK). Os dados finais foram exportados para uma planilha do Excel® e foram transformados nos arquivos de entrada específicos para cada programa computacional. Os valores de PIC (polymorphism information content) e heterozigosidade foram calculados por meio do programa Cervus v3.0.7. Os coeficientes de similaridades de Jaccard e Dice foram calculados para construir um dendrograma de acordo com o algoritmo UPGMA (Unweighted Pair Group Method with Arithmetic Mean) por meio dos softwares NTSYS e PAST. Para a análise por inferência Bayesiana, foi utilizado o programa STRUCTURE v 2.3.4. Foi possível observar a formação de grupos de acordo com o nível de ploidia e inferir a possível origem de alguns citótipos baseada na similaridade genética entre os acessos. Os resultados contribuem para fortalecer a hipótese de que os acessos tenham surgido por autopoliploidia. / Recent studies suggest that complete genome duplication is much more common than its stability, occurring in almost all angiosperms. Lippia alba (Mill.) N.E.Br. (Verbenaceae), is the most studied species within the genus Lippia, and it is widely used in folk medicine presenting economic importance mainly due to the richness of their essential oils. Recent studies have demonstrated the existence of at least five different ploidy levels in Lippia alba revealing a large genome plasticity making the species an interesting model of study. To better understand the genetic variation and the polyploidization process in Lippia alba, this study aimed to identify new genetic microsatellite markers and estimate the genetic diversity for 100 Lippia alba accessions. We assessed 9 loci already described and 16 new markers. The size of the fragments was detected by capillary electrophoresis using MegaBACE1000 sequencer (GE Healthcare, Buckinghamshire, UK). The identification of alleles was inferred using the Fragment Profile software (GE Healthcare, Buckinghamshire, UK). Final data were exported to an Excel spreadsheet according to the input files of each software used. PIC values (polymorphism information content) and heterozygosity were calculated using Cervus v3.0.7 software. Jaccard and Dice similarity coefficient were calculated to construct a dendrogram according to UPGMA algorithm (Unweighted Pair Group Method with Arithmetic Mean) using NTSYS and PAST softwares. Bayesian inference analysis was performed using STRUCTURE v 2.3.4 program. It was possible to observe the formation of groups according to the ploidy level and infer the possible origin of some cytotypes based on genetic similarity among accessions. Results contribute to support the hypothesis that the cytotypes have emerged by autopolyploidy.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-08-17T11:45:44Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1385032 bytes, checksum: a7a47673fd25727005d3257d331d834e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-17T11:45:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1385032 bytes, checksum: a7a47673fd25727005d3257d331d834e (MD5) Previous issue date: 2016-02-17 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Com o objetivo de avaliar o efeito da qualidade de luz na morfogênese e produção de óleos essenciais e do incremento de CO 2 na morfogênese, anatomia, perfil qualitativo de produção de óleos essenciais e expressão de genes relacionados à rota de síntese em três quimiotipos de Lippia alba (BGEN-01, BGEN-02 e BGEN-42), três experimentos foram conduzidos in vitro. No primeiro experimento, as plantas foram cultivadas em meio MS sem reguladores em três diferentes condições lumínicas: lâmpadas fluorescentes, LEDs brancas e LEDs azul/vermelho, após 40 dias a análise qualitativa de perfil de óleos essenciais e a análise quantitativa dos parâmetros morfogênicos: altura de planta, massa fresca e seca, clorofilas totais e carotenoides totais foram realizadas. No segundo experimento, o efeito das trocas gasosas no perfil de óleos essenciais foi avaliado comparando plantas crescidas in vitro 45 dias sob três diferentes taxas de troca de CO 2 : 14, 21 e 25 μL L -1 s -1 de CO 2 . No terceiro experimento, além dos tratamentos de 14 e 25 μL L -1 s -1 de CO 2 , as plantas foram colocadas em caixas com ventilação forçada, perfazendo concentrações internas de 360 e 1000 μL L -1 de CO 2 , além disso um controle adicional com frascos vedados foi colocado nas caixas, totalizando cinco tratamentos. Após 45 dias, análises de perfil de óleos essenciais, histoquímica, de densidade estomática, morfogênicas e reação da polimerase em cadeia em tempo real (RT-qPCR) foram realizadas. A qualidade de luz influenciou significativamente o crescimento in vitro em L. alba. LEDs azul/vermelho induziram maiores massa fresca e massa seca nos quimiotipos BGEN-01 e BGEN-02 e menores em BGEN-42. Os teores de pigmentos fotossintéticos também foram maiores em plantas cultivadas em LEDs azul/vermelho em todos os quimiotipos. A análise multivariada permitiu identificar diferentes padrões de produção de óleos essenciais entre os tratamentos. A composição dos compostos voláteis variou entre as diferentes qualidades de luz e quimiotipos, essa variabilidade se deu principalmente devido às diferenças nas quantidades de eucaliptol e linalol. O enriquecimento com CO 2 aumentou os pesos fresco e seco, clorofilas totais e carotenoides em BGEN-01 e BGEN-02, e também aumentou a densidade estomática e os teores de lignina em todos os quimiotipos. A análise multivariada dos óleos viessenciais mostrou que estes variaram não só entre os diferentes quimiotipos, mas também dentro de BGEN-01 e BGEN-02 a produção qualitativa foi diferenciada nos tratamentos com renovação forçada de ar e enriquecimento com CO 2 . A sintase do farnesil pirofosfato (FPPS) e a sintase do geranil pirofosfato (GPPS) não variaram seus níveis de expressão, exceto nos tratamentos com renovação forçada de ar (360 e 1000 μL L -1 ) no BGEN-01, nos quais houve uma supra-regulação de FPPS. A sintase do geraniol (GS) foi supra-regulada em todas as condições de CO 2 para BGEN-02 e em 360 e 1000 μL L -1 de CO 2 para BGEN-01. A sintase do nerolidol (NS) foi supra- regulada somente em BGEN-01 sob as condições de 360 e 1000 μL L -1 de CO 2 . Esses resultados fornecem um melhor entendimento da relação entre a qualidade de luz e o perfil de óleos essenciais e também de como o CO 2 regula a produção de metabólitos secundários, fornecendo subsídios para futuros estudos que permitirão uma produção direcionada de óleos essenciais com maiores interesses industrial e econômico. / Aiming to evaluate the effect of light quality in morphogenesis and essential oil production and CO 2 elevation on morphogenesis, anatomy, essential oils qualitative production and expression of genes related to the synthesis pathway in three chemotypes of Lippia alba (BGEN-01, BGEN-02 and BGEN-42), three experiments were conducted in vitro. In the first experiment, plants were grown in hormone-free MS medium at three lights conditions: fluorescent lamps, White LED bulbs and blue/red LEDs, after 40 days qualitative analysis of essential oils profile and quantitative analysis of the morphogenic parameters: plant length, fresh and dry weight, total chlorophyll and total carotenoids were performed. In the second experiment, the effects of gas exchange in essential oil profile were evaluated by comparing plants 45-days grown under three CO 2 exchange rates: 14, 21 and 25 μL L -1 s -1 CO 2 . In the third experiment, in addition to the previous 14 and 25 μL L -1 s -1 CO 2 treatments, plants were put into a chamber with continuous forced air ventilation, leading to inner of 360 and 1000 μL L −1 of CO 2 , an additional control without allowing gas exchange was added inside the chambers, totaling five treatments. After 45 days of growth, analyses of essential oils profile, histochemical, stomatal density, morphogenic evaluation and real- time reverse transcription polymerase chain reaction (RT-qPCR) were performed. The light quality significantly influenced the in vitro growth of L. alba. Blue/red LEDs induced higher fresh and dry weigh in BGEN-01 and BGEN-02 chemotypes and the lower to BGEN-42. Photosynthetic pigments were also higher in plants grown under blue/red LEDs for all chemotypes. The multivariate analysis allowed to identify different patterns of essential oil production among the treatments. The composition of the volatile compounds ranged with the light quality and chemotypes, this variability is due mainly to differences in amounts of eucalyptol and linalool. The enrichment with CO 2 enhanced plant dry and fresh weight, total chlorophylls and carotenoids in BGEN- 01 and BGEN-02, and also increased stomatal density and lignin content for all chemotypes. The multivariate analysis showed that essential oil profile varied not only among the different chemotypes, but also within BGEN-01 and BGEN-02 the viiiqualitative production were different in the treatments with forced air renovation and CO 2 enrichment. Farnesyl pyrophosphate synthase (FPPS) and geranyl pyrophosphate synthase (GPPS) did not vary, except for the treatments with forced air ventilation (360 and 1000 μL L -1 ) in the BGEN-01, which had FPPS upregulated. Geraniol synthase (GS) was upregulated in all BGEN-02 treatments and to the BGEN-01 treatments with 360 and 1000 μL L -1 CO 2 . Nerolidol synthase (NS) was upregulated only in the BGEN- 01, at the treatments with 360 and 1000 μL L -1 CO 2 . These findings provide a better understanding of the relation between light quality and essential oil profile and also of how CO 2 regulates secondary metabolites production, giving basis for further studies that can allow an oriented production of essential oils with greater economic and industrial interest.

Orientadores: Fernando Antonio Cabral, Losiane Cristina Paviani / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-23T09:13:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Diniz_TabataTayaraGarmus_M.pdf: 2219524 bytes, checksum: d534ef54252dcca6946c4b832f819e43 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: Esse trabalho objetivou, através da combinação de processos de extração, a obtenção de extratos naturais a partir de folhas de pitanga (Eugenia uniflora L.) e de folhas de alecrim-pimenta (Lippia sidoides Cham.). Os extratos foram obtidos por extração sequencial em leito fixo a 60 ºC e 400 bar, primeiro por extração com dióxido de carbono supercrítico (scCO2), seguido por extração com etanol em uma segunda etapa e por último, extração com água (terceira etapa). Curvas de extração (rendimento de extrato em função da massa de solvente) foram obtidas no intuito de se avaliar o desempenho da extração quanto ao rendimento em função do tipo de solvente. Todos os extratos foram avaliados quanto ao teor de fenóis e flavonoides totais e a fração volátil obtida na primeira etapa com scCO2 foi avaliada quanto ao seu perfil químico por cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massas (GC-EM). Para efeito de comparação, mais dois tipos de extratos etanólicos e aquosos foram obtidos: 1) Extratos em etapa única a partir das folhas, com etanol e com água em leito fixo a 60 °C e 400 bar sem prévia extração com scCO2 e 2) Extratos convencionais utilizando um sistema a baixa pressão e 60 ºC. A análise dos resultados mostrou que o caráter do solvente empregado influenciou significativamente no processo de obtenção dos extratos, pois o rendimento apresentou tendência de aumento com o aumento da polaridade do solvente, sendo os extratos aquosos os de maior rendimento, seguidos dos etanólicos e por último os supercríticos. O estudo apontou o processo de extração sequencial (em três etapas) como o mais eficaz em termos de rendimento global de extração e de fenóis e flavonoides totais para Eugenia uniflora. O extrato obtido com etanol (60 ºC e 400 bar) após extração supercrítica e o extrato obtido com scCO2 apresentaram as maiores concentrações de fenóis e flavonoides totais, respectivamente, dentre todos os extratos obtidos das folhas de E. uniflora L. Na matriz Lippia sidoides Cham., o processo de extração etanólica a 60 ºC e 400 bar em etapa única permitiu obter extratos mais concentrados em fenóis e flavonóis e o melhor rendimento de flavonoides totais. Os resultados para o rendimento de compostos fenólicos do alecrim-pimenta aponta a extração sequencial como a mais eficiente. A influência da extração supercrítica prévia foi diferente dependendo da matriz vegetal estudada. O scCO2 como primeiro solvente de extração permitiu obter extratos etanólicos e aquosos mais concentrados em compostos fenólicos para pitanga / Abstract: The objective of this study was to obtain natural extracts from leaves of pitanga (Eugenia uniflora L.) and pepper-rosmarin (Lippia sidoides Cham.) with the combination of different sequential extraction techniques. The extracts were obtained by sequential extraction in fixed bed (60 °C and 400 bar), first by extraction with supercritical carbon dioxide (scCO2), followed by extraction with ethanol in a second step and finally extracted with water in a third step. Extraction curves (yield of extracts by the mass of solvent) were obtained in order to evaluate the performance of the extraction yield due to the type of solvent. All extracts were evaluated for their content of total phenols and flavonoids and the more volatile fraction obtained in the first step with scCO2 was evaluated for its chemical profile by gas chromatography coupled to mass spectrometry (GC-MS). For comparison, two types of ethanol and aqueous extracts were obtained: 1) single-step extracts from the leaves with ethanol and water in the fixed bed at 60 °C and 400 bar without prior extraction with scCO2 and 2) extracts using a conventional low pressure system and 60 °C. The results showed that the nature of the solvent employed strongly influenced the process of obtaining extracts, as the yield showed a tendency to increase with increasing polarity of the solvent. The aqueous extracts showed the highest yield, followed by ethanol and finally the supercritical The study pointed out the process of sequential extraction (three-step) as the most effective in terms of global extraction yield and total phenols and flavonoids for Eugenia uniflora. The extract obtained with ethanol (60 °C and 400 bar) after supercritical extraction and the extract obtained with scCO2 were those with the highest concentrations of total phenols and flavonoids, respectively, among all the extracts obtained from the leaves of E. uniflora L. At Lippia sidoides Cham. matrix, the process of single-step ethanolic extraction at 60 °C and 400 bar obtained more concentrated yields in phenols and flavonols and the best yield of total flavonoids. The results for the yield of phenolic compounds from pepper-rosmarin indicate the sequential extraction as the most efficient process. The influence of prior supercritical extraction was different according to plant matrix studied. The scCO2 as the first extraction step yielded ethanolic and aqueous extracts more concentrated in phenolic compounds for E. uniflora / Mestrado / Engenharia de Alimentos / Mestra em Engenharia de Alimentos