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Análise de biomarcadores lipídicos em sedimentos de mangezais

Hansel, Fabricio Augusto January 2000 (has links)
Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Físicas e Matemáticas. Programa de Pós-Graduação em Química. / Made available in DSpace on 2012-10-18T01:28:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 185065.pdf: 2037148 bytes, checksum: 8f903e3ab75260efb375fc1b11ea38ce (MD5) / O trabalho teve por objetivos a análise dos lipídios totais e a otimização de um método de fracionamento desses compostos presentes na matéria orgânica oriunda de sedimentos de manguezais do Estado de Santa Catarina: dois na Ilha de Santa Catarina (Itacorubi e Rio Ratones), e outro na baía de Babitonga (Joinville). Nos sedimentos dos manguezais da Ilha de Santa Catarina efetuou-se a análise dos lipídios totais, enquanto que na amostra da baía de Babitonga (Lagoa do Saguaçu) aplicou-se o método de fracionamento. Com o uso de índices para biomarcadores orgânicos, como os Índices Preferenciais de Carbono (IPC) e a razão entre compostos de origem terrestre e aquática (RTA) procurou-se avaliar a origem da matéria orgânica encontrada nestes locais. Os valores de RTA para os ácidos mostraram a predominância da matéria orgânica de origem aquática em todos os locais estudados. Os IPC aplicados para os hidrocarbonetos variam entre 5,2 e 8,0 para os manguezais de Itacorubi e do Rio Ratones, indicando a presença de material de origem terrestre, enquanto que o valor do IPC para os hidrocarbonetos encontrados na Lagoa do Saguaçu foi de 2,8, devido à provável contaminação por combustível fóssil. Fato comprovado pela identificação dos biomarcadores dos tipos hopanóides e policíclicos aromáticos (amostra fracionada), na qual também a poluição fecal é sugerida pela identificação do coprostanol.
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Análises de biomarcadores bioquímicos e concentração de metais em mexilhões Perna perna (Linné, 1758) cultivados no litoral central de Santa Catarina

Sáenz Isla, Luis Alberto January 2000 (has links)
Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias. / Made available in DSpace on 2012-10-17T15:47:26Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Neste trabalho foi avaliada a atividade das enzimas colinesterase (ChE), glutationa S-transferase (GST), glutationa redutase (GR), glicose 6-fosfato desidrogenase (G6PDH) e catalase (CAT) nas brânquias e na glândula digestiva de P. perna mantidos por seis meses em zonas de cultivo e em uma região com suspeita de contaminação. Além disso, a concentração de metais traço foi avaliada tanto na água, como nos mexilhões destes locais. A atividade da ChE na glândula digestiva apresentou variação que foi relacionada com o comprimento total dos animais. Outras enzimas, como a GST, GR e G6PDH, apresentaram um perfil semelhante de variação das suas atividades, o que sugere a existência de um trabalho cooperativo entre estas enzimas. A análise de metais na água e nos mexilhões revelam níveis abaixo dos limites permitidos pelo CONAMA e estiveram dentro de uma faixa de concentração normal quando comparados com os animais de outras regiões contaminadas. Recomendamos o uso de biomarcadores bioquímicos em programas de monitoramento ambiental em P. perna, utilizando análise de parâmetros biológicos e químicos complementares para uma melhor interpretação dos resultados obtidos.
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Análise da expressão gênica diferencial em ostras-do-pacífico Crassostrea gigas expostas a esgoto doméstico in situ

Silva, Guilherme de Toledo e 24 October 2012 (has links)
Dissertação (mestrado) - Univesidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia, Florianópolis, 2009 / Made available in DSpace on 2012-10-24T20:51:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 270064.pdf: 1678063 bytes, checksum: de89498cbd9fdaf3dc0f4c547d9752f1 (MD5) / Nas últimas décadas, a contaminação dos ecossistemas marinhos tem aumentado como consequência da atividade humana, expondo os organismos a uma variedade de contaminantes oriundos da atividade industrial, agricultura e efluentes urbanos. O despejo de esgoto doméstico é a principal fonte de contaminação em ambientes costeiros e é considerado como uma das principais causas da diminuição da qualidade destes ecossistemas. Estudos que vêm sendo desenvolvidos no Laboratório de Biomarcadores de Contaminação Aquática e Imunoquímica visam a identificação e validação de novos biomarcadores de exposição ao esgoto doméstico em ostras para que possam ser futuramente utilizadas em programas de avaliação e biomonitoramento dos efeitos tóxicos causados por estes contaminantes. Este trabalho está dividido em dois capítulos. No primeiro capítulo são apresentados os resultados de experimentos realizados com ostras Crassostrea gigas expostas em um ambiente contaminado por esgoto doméstico. Foram analisadas a expressão de alguns genes previamente identificados em uma biblioteca subtrativa supressiva de cDNA em brânquias de C. gigas expostas a esgoto doméstico em condições de laboratório. A expressão do gene FABP apresentou uma indução significativa (28x) após 24 h de exposição, enquanto o gene GSTO obteve um aumento significativo na expressão após 1, 2 e 7 dias de exposição (8, 3.5 e 3.3x respectivamente). No segundo capítulo estão apresentados os resultados e uma discussão sobre os genes ativados e identificados em uma biblioteca subtrativa supressiva de cDNA em glândula digestiva de ostras C. gigas expostas por 24h no ambiente, sob condições de exposição real ao esgoto doméstico não tratado. Genes de diferentes categorias de função biológica foram encontrados após buscas no GenBank, incluindo alguns relacionados a resposta ao estresse, classe tipicamente utilizada em programas de biomonitoramento como biomarcadores moleculares de exposição. Também foram identificados genes relacionados com a o citoesqueleto, cadeia respiratória, desenvolvimento e diferenciação, divisão celular, metabolismo básico, maquinaria transcricional e traducional, transporte e armazenamento. Ambos trabalhos complementam os estudos em andamento no laboratório, ajudando na viabilização de metodologias práticas para o monitoramento de recursos marinhos utilizando organismos sentinela.
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Identificação e caracterização de marcadores moleculares para estudos ecotoxicológicos em moluscos bivalves e peixes

Zanette, Juliano January 2009 (has links)
Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia, Florianópolis, 2009 / Made available in DSpace on 2012-10-24T21:54:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 270587.pdf: 3722917 bytes, checksum: 5fca0f886701d91246cca285d114360f (MD5) / O recente avanço da biologia molecular tem ampliado o conhecimento relacionado a invertebrados marinhos e peixes, gerando inúmeras possibilidades de novas aplicações biotecnológicas. No presente estudo foram identificados e caracterizados novos genes em organismos modelo para estudos ecotóxicológicos. No capítulo I, foram estudados aspectos moleculares, bioquímicos e químicos, da ostra-do-mangue Crassostrea rhizophorae, uma espécie de importância econômica, ecológica e social que ocorre amplamente em estuários e manguezais na costa brasileira, áreas de risco constante de contaminação. Ostras expostas a efluentes contendo esgoto doméstico na Baía Norte da Grande Florianópolis mostraram aumento na atividade da enzima catalase, um biomarcador clássico de contaminação aquática. Bibliotecas subtrativas em ostra, comparando local contaminado e referência, possibilitaram a identificação de 36 novos genes de interesse para estudos ecotoxicológicos em C. rhizophorae, alguns deles codificam proteínas possívelmente envolvidas em biotransformação de xenobiótico, metabolismo de lipídeo, defesa imune, estresse oxidativo e ligante de metais. No capítulo II, bibliotecas públicas de sequências nucleotídicas expressas (ESTs) foram pesquisadas a fim de identificar novos genes de citocromo P450 (CYP) em moluscos bivalves dos gêneros Mytilus (mexilhões) e Crassostrea (ostras). Um total de 113 sequências CYP foram encontradas, a maioria em M. californianus (58). A caracterização preliminar do sistema complemento CYP em M. californianus, mostra que assim como é observado em deuterostômios, há uma expansão do Clan 2 neste organismo. Sequências similares as famílias CYP1, CYP3 e CYP26 de vertebrados foram clonadas em M. edulis, e a expressão órgão-específica e indução por contaminantes para estes genes foram avaliadas. Os genes CYP1-like, similares a CYP1A, que é proposto há décadas como biomarcador para agonistas do receptor AHR em vertebrados, não foi induzida por estas substâncias em M. edulis. Interessantemente, genes CYP3-like e CYP26-like foram induzidos por beta-naftoflavona, o que indica que diferentes mecanismos de ativação gênica, e provavelmente de biotransformação, ocorra nos CYPs em moluscos, quando comparados às famílias CYP similares de vertebrados. Este é o primeiro estudo a mostrar a diversidade do sistema complemento CYP (mesmo que de forma preliminar); clonar genes CYP1-like, CYP3-like e CYP26-like; e caracterizar a expressão destes genes em um molusco bivalve. No capitulo III foram identificados três novos genes CYP1 no peixe-modelo ambiental Fundulus heteroclitus. O set completo de genes CYP1 de peixe (CYP1A, CYP1B1, CYP1C1, CYP1C2 e CYP1D1), mostraram diferentes padrões de distribuição órgão-específica e indução por PCB 126, o que permitiu a escolha das combinações órgão/CYP1 mais apropriadas para detecção de contaminantes agonistas do receptor AHR. Estudos em uma população de F. heteroclitus proveniente de um local historicamente contaminado por PCB mostrou diferenças na expressão de alguns desses novos genes que podem estar relacionadas à adaptação para viver nestes locais. Os genes mais apropriados para detecção de contaminantes agonistas do AHR (CYP1A, CYP1B1 e CYP1C1) também foram clonados no peixe Poecilia vivipara, e poderão servir como biomarcadores de contaminação aquática nesta espécie amplamente distribuída em ambientes contaminados da costa Brasileira. Este trabalho apresenta um estudo sobre a aplicabilidade da técnica óptica shearografia para caracterizar a localização e profundidade de defeitos em materiais compósitos. Foi desenvolvido através de experimentos controlados tendo como base conjuntos de corpos de prova contendo falhas artificiais quadradas, propositalmente introduzidas entre as lâminas de um material compósito fabricado com resina epóxi e fibras de vidro unidirecionais e cruzadas. Defeitos de diferentes tamanhos foram dispostos em diferentes profundidades ao longo da espessura do material. O principal tipo de carregamento utilizado foi do tipo vibracional associado às técnicas de Média-Temporal, com iluminação contínua do laser para se obter a resposta da amplitude de modulação através de franjas de interferência e à técnica com iluminação Estroboscópica de forma a conseguir mapas das diferenças de fases referentes à superfície analisada. Foram produzidos conjuntos de corpos de prova com e sem falha de adesão artificialmente provocada. As respostas em freqüência foram relacionadas às profundidades das diferentes falhas. As relações freqüência x profundidade apresentaram bom comportamento, conforme descrevem as bibliografias consultadas. Também foram comparados os resultados obtidos através do modelamento matemático com os obtidos experimentalmente. Os resultados alcançados neste trabalho são encorajadores e abrem as portas para novos estudos com outros tipos de falhas e materiais compósitos.
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Avaliação nutricional e inflamatória em pacientes com afecções cirúrgicas

Nakazora, Lívia Mayumi 25 October 2012 (has links)
Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Nutrição, Florianópolis, 2010 / Made available in DSpace on 2012-10-25T00:14:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 285721.pdf: 788811 bytes, checksum: 9c8bd0945a6e24fe8035cb624c0c4bef (MD5) / Introdução e objetivo: Analisar a associação do ângulo de fase padronizado (AFP) com parâmetros nutricionais e inflamatório de pacientes com afecções cirúrgicas. Métodos: Estudo transversal, 121 pacientes (48,2 ± 14,3 anos), admitidos para realização de cirurgia gastrintestinal eletiva ou de hérnia. Todas as avaliações foram realizadas no período pré-operatório: Avaliação Subjetiva Global (ASG), albumina e transferrina séricas, linfócitos totais, Índice de Risco Nutricional (IRN) e a atividade inflamatória através da proteína C-reativa ultra-sensível (PCR-us). Estes parâmetros foram comparados com o AFP, obtido a partir da Análise por Impedância Bioelétrica (BIA). Resultados: Houve fraca concordância ( = 0,275) entre o AFP e a ASG. O AFP foi correlacionado com a transferrina (r = 0,288) e albumina (r = 0,372) séricas, com o IRN (r = 0,484) e com a PCR-us (r = -0,178). Os pacientes em risco nutricional, conforme o IRN ou desnutridos de acordo com a ASG, albumina e transferrina séricas, assim como àqueles com alterações nas concentrações de PCR-us, apresentaram valores de AFP significativamente menores do que os pacientes bem nutridos e sem inflamação. Conclusão: Não houve boa concordância entre o AFP e a ASG, no entanto, o AFP foi correlacionado com os demais parâmetros nutricionais, demonstrando detectar alterações do estado nutricional nesta população de pacientes. Unitermos: avaliação do estado nutricional, rastreamento nutricional, ângulo de fase, marcadores bioquímicos, inflamação, pacientes hospitalizados. / Background & Aims: To investigate the association between the standardized phase angle (SPA) and the inflammatory and nutritional parameters in patients with surgical disorders. Methods: Cross-sectional study, 121 adults# patients (48,2 ± 14,3 years), admitted for gastrointestinal surgery or hernia repair. The nutritional status was evaluated according to the Subjective Global Assessment (SGA), serum albumin and transferrin, total lymphocytes count (TLC) and the Nutritional Risk Index (NRI). The inflammatory activity was assessed by high sensitive C-Reactive Protein (hs-CRP). These parameters were compared with the SPA, obtained by Bioelectrical Impedance Analysis (BIA). Results: There was a weak agreement ( = 0,275) between the SPA and SGA. The SPA was correlated to serum transferrin (r = 0,288) and albumin (r = 0,372), to NRI (r = 0,484) and to hs-CRP (r = -0,178). Nutritional risk patients, detected by NRI, and malnourished patients diagnosed by SGA, serum albumin and transferrin, as well as those with inflammatory activity had a statistically significant lower median SPA as compared to those who were well-nourished and without inflammation. Conclusion: There was not good agreement between the SPA and SGA. Nevertheless, the SPA was correlated to the other methods investigated, indicating its ability on detecting alterations of nutritional status in this population of patients.
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Marcadores inflamatórios e de estresse oxidativo em crianças e adolescentes com fibrose cística

Bennemann, Gabriela Datsch 26 October 2012 (has links)
Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Nutrição, Florianópolis, 2011 / Made available in DSpace on 2012-10-26T00:49:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 290152.pdf: 2375402 bytes, checksum: bc18708386d28dd940f27eebcc494fe4 (MD5) / Introdução: Pacientes com Fibrose Cística (FC) são susceptíveis à inflamação e estresse oxidativo (EO), apresentando freqüente obstrução das vias aéreas e infecções bacterianas, com comprometimento das defesas antioxidantes e exacerbação da produção de espécies reativas de oxigênio. Objetivo: Avaliar biomarcadores inflamatórios e de estresse oxidativo, e associá-los com o estado clínico de crianças e adolescentes com FC. Método: Estudo clínico controlado em 55 portadores de FC (GFC), idade mediana de 5,62 anos (interquartil - IQR 2,25-7,83), e 14 indivíduos sem FC (grupo controle - GC), mediana de 3,83 anos (IQR 2,25-7,83) submetidos às análises sanguíneas dos marcadores glutationa reduzida (GSH), glutationa peroxidase (GPx), catalase (CAT), proteína carbonilada (PC), substâncias reagentes ao ácido tiobarbitúrico (TBARS), atividade da enzima mieloperoxidase (MPO), metabólitos do óxido nítrico (NOx), proteína C reativa (PCR), e bacteriologia para bactérias patogênicas associadas à FC. O estado nutricional (EN) foi avaliado por meio dos índices de peso, estatura e massa corpórea para idade (P/I, E/I e IMC/I) em escore-Z, massa magra em quilos e percentual de gordura corporal. Resultados: O estado nutricional prevalente foi eutrofia sem diferença entre os grupos, escores-Z médios: P/I = -0,21 ± 0,25 e de -0,34 ± 0,21, E/I = -0,69 ± 0,44 e -0,51 ± 0,23, e IMC/I = 0,78 0,34 e -0,28 0,20, respectivamente para GC e GFC. O Escore de Schwaschmann foi classificado como excelente, mediana igual a 90 % (IQR 85-100). A principal bactéria patogênica presente foi a S. aureus (34,54%), seguida pela P. aeruginosa (30,9%). No GFC em relação ao GC, observou-se níveis aumentados de TBARS (p=0,031), PC (p=0,031) e MPO (p=0,001), e níveis diminuídos da GSH (p=0,001). Em pacientes com cultura positiva para P. aeruginosa foram detectados maiores níveis de PC (p=0,002), NOx (p=0,023), e PCR (p=0,017). Conclusão: Considerando os aumentos referidos no TBARS, PC e MPO, e a diminuição nos níveis de GSH, é sugerido um quadro de estresse oxidativo (EO) sistêmico nos pacientes com FC, porém, aparentemente a presença de infecção não implicou, bem como os períodos de infecção bacteriana não foram determinantes no estabelecimento e/ou exacerbação do EO.
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Expressão do gene da enzima 5-aminolevulinato sintase (ALAS) na ostra Crassostrea gigas exposta ao esgoto doméstico

Rodrigues, Thiago Bruce January 2007 (has links)
Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina. Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia. / Made available in DSpace on 2012-10-23T12:08:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 241092.pdf: 1958015 bytes, checksum: b91f202b7b928f97c8d6dbdd6ae98013 (MD5) / Os organismos necessitam de tetrapirróis, primariamente na forma de grupo heme e/ou clorofila. O heme está presente como grupo prostético em um grande número de proteínas, entre elas a hemoglobina, mioglobina e citocromos, enquanto a clorofila é o principal pigmento utilizado nos processos fotossintéticos. A formação de tetrapirróis nos organismos tem início na síntese do ácido aminolevulínico (ALA). A enzima 5-aminolevulinato sintase (ALAS), EC 2.3.1.37, catalisa a condensação de succinil-CoA e glicina para a formação do ALA na mitocôndria. No presente trabalho, ostras Crassostrea gigas foram expostas à esgoto doméstico bruto diluído a 33% por 48 horas, sob condições controladas de laboratório. Após a exposição, a expressão o gene da ALAS foi analisada nas brânquias e na glândula digestiva, através de RT-PCR (Reverse Transcriptase- Polymerase Chain Reaction) semiquantitativo, utilizando-se iniciadores específicos. A exposição ao esgoto doméstico não promoveu um aumento significativo na expressão do gene ALAS na glândula digestiva. Por outro lado, as brânquias apresentaram um aumento significativo na expressão deste gene. Nossos resultados mostram um aumento de 68% na expressão do gene ALAS nas brânquias dos indivíduos do grupo tratado em relação ao grupo controle (não-tratado). Esses dados sugerem que o gene ALAS pode ser considerado como um potencial candidato a biomarcador molecular de exposição à esgoto doméstico na ostra C. gigas.
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Avaliação in situ da contaminação e dos efeitos de efluentes domésticos sobre biomarcadores bioquímicos em ostra do Pacífico Crassostrea gigas na Baía Norte da Ilha de Santa Catarina

Nunes, Fabrício Flores January 2008 (has links)
Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias. Programa de Pós-Graduação em Aquicultura / Made available in DSpace on 2012-10-24T02:20:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 261039.pdf: 534212 bytes, checksum: a1e0700b944d0b971f9d3a43e3dda147 (MD5)
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Marcadores bioquímicos de estresse

Mello, Denise Maria Sousa de January 2007 (has links)
Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Farmacologia / Made available in DSpace on 2013-07-16T03:19:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 243204.pdf: 1245828 bytes, checksum: 7eb84f3905b87184a33ebe99be5a77e6 (MD5) / Os hormônios relacionados ao estresse podem alterar funções metabólicas no tecido adiposo e no fígado. O eixo hipotálamo-pituitária-adrenal (HPA) é uma das vias endócrinas que promove lipólise aumentando os níveis de ácidos graxos livres (AGL) no sangue, além de indiretamente causar hiperglicemia. Assim, a lipólise e, consequentemente, os níveis de AGL e de glicose podem ser considerados marcadores confiáveis para a resposta individual a diferentes tipos de estresse. Por outro lado, a substância P (SP) está envolvida na patofisiologia de transtornos psiquiátricos graves e é considerado um neurotransmissor central do estresse. A SP está presente em inúmeras áreas cerebrais relacionadas ao estresse/ansiedade. No presente estudo, verificamos os níveis plasmáticos de AGL e glicose como marcadores metabólicos complementares do estresse/ansiedade em ratos machos adultos submetidos a diferentes estressores (imobilização, imobilização no frio, nado forçado, exposição ao labirinto em cruz elevado [LCE], e à administração intracerebroventricular de SP). A corticosterona sérica foi utilizada como marcador convencional de estresse. Nossos resultados mostraram elevados níveis de corticosterona, assim como de AGL e glicose (indicadores da mobilização de substratos energéticos induzidos pelo estresse), confirmando a situação aversiva induzida pela SP (parâmetros comportamentais acessados no LCE), e indicando a SP como um estressor químico , cujos efeitos envolvem receptores NK1 pois o antagonista destes receptores reverte ambos efeitos, bioquímicos e comportamentais. Além disso, nossos resultados mostraram um aumento diferencial nos níveis de corticosterona, AGL e glicose após cada estressor, sendo a duração deste efeito dependente do tipo de estressor. Nossos resultados também mostraram que a mobilização de reservas energéticas, inferida pelos níveis de AGL, é um marcador confiável para diferentes condições de estresse agudo, sendo em algumas situações mais sensível que a corticosterona. Ainda, a adrenalectomia não impediu mobilização de AGL, mostrando que este marcador parece depender predominantemente de uma ativação do SNS. Stress hormones can alter metabolic functions in white adipose tissue and liver. The hypothalamus-pituitary-adrenal (HPA) axis is the endocrine pathway that promotes lipolysis increasing free fatty acid levels (FFA) in blood, besides indirectly causing hyperglycemia. Thus, lipolysis and, consequently, free fatty acids and glucose levels, could be considered reliable markers to individual responses to different forms of stress. Substance P (SP) is involved in the pathophysiology of several psychiatric disorders and is considered a central neurotransmitter related to stress situation. SP is distributed in various brain regions considered to be involved in the control of emotional states such as stress/anxiety. In the present study we have verified the plasmatic levels of free fatty acids and glucose as metabolic markers of stress/anxiety conditions in adult male rats submitted to different stressors (restraint, cold restraint, forced swimming stress and exposure to plus-maze) and in the anxiogenic-like effects of SP, as evaluated on the elevated plus-maze (EPM). Serum corticosterone was used as the traditional stress marker, while the plasma FFA and glucose were used as alternative anxiety/stress markers. Our results show elevated levels of corticosterone, as well as of FFA and glucose (indicators of stress-induced mobilization of energy substrate), confirming the aversive situation induced by SP (behaviorally assessed in the EPM) and indicating SP as a chemical stressor which effects involve the NK1 receptors. Moreover, our findings show that plasma corticosterone levels increased significantly after each stressor as well as free fatty acids and glucose with a time-course that differs depending on the nature of stress. Our results also show that the mobilization of energy reserves, inferred by the free fatty acids levels, is a reliable marker for different acute stressful conditions, being in some conditions even more sensitive than corticosterone. Moreover, adrenalectomy did not avoid the FFA mobilization, showing that this stress marker seems to predominantly depend on a SNS activation.
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Purificação e caracterização da glutationa S-transferase (E.C.2.5.1.18) de brânquias de ostras Crassostrea rhizoporae (Guilding, 1828)

Trivella, Daniela Barretto Barbosa January 2006 (has links)
Dissertação (mestrado) - Univesidade Federal de Santa Catarina. Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia. / Made available in DSpace on 2012-10-22T08:08:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 226335.pdf: 502374 bytes, checksum: 32a6f66613c813a4d2eb00a1aa2abf71 (MD5) / A ostra Crassostrea rhizophorae vem sendo amplamente utilizada como um organismo sentinela em programas de biomonitoramento marinho. Biomarcadores de contaminação são ferramentas importantes para a avaliação dos efeitos provocados por contaminantes em organismos expostos. No entanto, são necessários estudos que visem uma melhor compreensão, caracterização e padronização do uso destas respostas bioquímico-moleculares para que as mesmas possam ser utilizadas em estudos Ecotoxicológicos. A família das GST é comumente utilizada como biomarcador de exposição a xenobióticos. Estas enzimas desempenham importante papel nos processos de detoxificação celular, catalisando algumas das principais reações de conjugação da Fase II de biotransformação. O objetivo do presente estudo foi purificar e caracterizar GSTs de brânquias de ostras do mangue C. rhizophorae. Extratos de brânquias foram submetidos à cromatografia de afinidade em coluna GSH-agarose. A atividade da GST das frações eluídas foi testada utilizando-se os substratos 1-cloro, 2,4-dinitrobenzeno (GST-CDNB) e ácido etacrínico (GST-ETA). As frações que apresentaram atividade foram analisadas através de eletroforese bidimensional e ensaios cinéticos utilizando os substratos CDNB e GSH. A atividade da GST no pico de eluição da coluna de afinidade foi 14,1 e 7,5 U/ mg de proteína para os substratos CDNB e ETA, respectivamente. A massa molecular aparente foi de 26,09 kDa, sendo que foram observados seis spots de pI diferentes (pI 7,6-5,4), sugerindo a presença de diferentes sub-unidades. Os valores de Km determinados foram Km CDNB = 1,37 mM e Km GSH = 0,77 mM. Os resultados obtidos foram similares aos observados previamente em estudos com GSTs de diferentes espécies de organismos aquáticos. A elevada atividade da GST-ETA sugere a presença de isoformas da classe Pi, e que esta é, possivelmente, a mais representativa isoforma de GST em brânquias de ostras C. rhizophorae. No entanto, estudos subseqüentes deverão ser realizados visando identificar outras isoformas de GST presentes nesta espécie. Mangrove oyster Crassostrea rhizophorae has been extensively used as a sentinel organism in marine monitoring programs. Biomarkers of contamination are important tools to understand the effects elicited by contaminants in exposed organisms. However, studies aiming the understanding, characterization and standardization of these biochemical-molecular responses in ecotoxicological studies are still required. The GST family is commonly used as biomarkers of exposure to xenobiotics. These enzymes play an important role in cell detoxification, catalyzing one of the major Phase II biotransformation reactions. The aim of this study was to purify and to characterize the GSTs from gills of C. rhizophorae. Gill extracts were submitted to affinity chromatography using GSH-agarose column. The GST activity was analyzed in the eluted fractions using 1-chlorine,2,4-dinitrobenzene (GST-CDNB) and ethachrinic acid (GST-ETA). The fractions containing the peaks of GST activity were submitted to 2D electrophoresis and kinetics analysis, using CDNB and GSH. The activity detected in the elution peaks was 14,1 and 7,5 U/ mg protein for CDNB and ETA, respectively. The apparent molecular mass was 26,09 kDa and six spots with pI values ranged from 7,6 to 5,4 were observed, suggesting the presence of different GST subunits. The Km values were Km CDNB = 1,37 mM and Km GSH = 0,77 mM. These findings are in agreement with those observed for GSTs in similar studies carried out in different species of aquatic organisms. The elevated GST-ETA suggests the presence of GST Pi class isoform and that is, possibly, the most abundant GST isoform in the gills of C. rhizohorae. Moreover, subsequent studies need to be carried out to identify other GST isoforms in this specie.

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