Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-01-26T13:56:45Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_AvaliacaoPotencialBiotecnologico.pdf: 1386641 bytes, checksum: 94f8b0196b1a33ca4a9d5eec8af30944 (MD5) / Approved for entry into archive by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2017-01-27T13:26:30Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_AvaliacaoPotencialBiotecnologico.pdf: 1386641 bytes, checksum: 94f8b0196b1a33ca4a9d5eec8af30944 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-27T13:26:30Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_AvaliacaoPotencialBiotecnologico.pdf: 1386641 bytes, checksum: 94f8b0196b1a33ca4a9d5eec8af30944 (MD5) Previous issue date: 2015-11-30 / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Swietenia macrophylla (mogno) é uma espécie de planta amplamente conhecida pelo seu potencial terapêutico. Os principais constituintes de extratos isolados de partes dessa planta são estruturas conhecidas como limonoides. Os limonoides também apresentam várias atividades biológicas, dentre elas, ação antitumoral. O objetivo desse trabalho foi avaliar o potencial antitumoral do extrato e de limonoide obtido de folhas de S. macrophylla em linhagens tumorais. A avaliação da citotoxicidade frente a 5 linhagens tumorais e uma normal, revelou que o extrato teve ação citotóxica em linhagens de câncer coloretal (HCT-116 e HT-29), já os limonoides foram citotóxicos para câncer colorretal (HCT-116) e melanoma (SKMEL-19). Diante desses resultados, foram selecionados o limonoide L3 e a linhagem HCT-116 para avaliação do mecanismo de ação, assim como a linhagem HT-29, que possui o gene TP53 mutado para comparação do possível mecanismo de ação do composto, haja vista que foi menos sensível a L3. Além disso, L3 se mostrou mais seletiva para células tumorais. Nenhum dos compostos causou hemólise em eritrócitos de camundongos. Para avaliação da ação antiproliferativa de L3, foi realizado o ensaio clonogênico, onde nas duas linhagens houve significativa redução de colônias, no entanto essa redução foi mais expressiva em HCT-116. O composto L3 também causou morte por apoptose de maneira dose-dependente nas linhagens, onde o número de células em processo de apoptose foi maior na HCT-116. Para avaliação de dano ao DNA, foi realizado o ensaio do cometa, o qual demonstrou que L3 causa dano no DNA das duas linhagens, com índice de dano maior na HCT-116. A avaliação da distribuição de células pelo ciclo celular após tratamento com L3 mostrou que houve bloqueio do ciclo na fase G2/M, principalmente na HCT-116 (45% das células). A partir desses dados, foi realizado um estudo de genes implicados nessa fase do ciclo, a partir da análise de suas expressões por PCR-RT. O gene ATM, o qual é ativado mediante a danos no DNA, ativa o CHK-2 que por sua vez fosforila p53. p53 pode ativar a transcrição de p21, o qual desencadeia parado ciclo celular, ou ativar vias de morte celular. Neste trabalho, foi verificado aumento da expressão dos genes ATM, CHK-2, TP53, ARF de maneira dose dependente nas duas linhagens, sendo essa expressão foi maior em células da linhagem HCT-116. A expressão de p21 foi aumentada em HCT-116, ao passo que em HT-29 diminuiu, isso se deve ao fato que HT-29 possuir o gene TP53 mutante, logo sua proteína não funciona corretamente. Quanto a via da apoptose, foi avaliado o gene da caspase-3 e o gene antiapoptótico BCL-2. Houve aumento na expressão de caspase-3, principalmente em HCT-116, e diminuição de BCL-2. Esses resultados sugerem que L3 possa estar causando danos ao DNA das células, desencadeando uma via de sinalização celular dependente de p53. Para avaliação da toxicidade do extrato de S. macrophylla, foi realizado o teste de toxicologia aguda em camundongos, onde o extrato não causou nenhuma alteração nos parâmetros fisiológicos dos animais. Assim como, o teste de claustogenicidade (micronúcleo) também mostrou que o extrato não é mutagênico em células da medula óssea de camundongos. / Swietenia macrophylla (mahogany) is a species of plant widely known for its therapeutic potential. The main constituents isolated extracts of this plant are structures known as limonoids. The limonoids also have several biological activities, among them, antitumor activity. The aim of this study was to evaluate the antitumor potential of the extract and limonoid obtained from leaves of S. macrophylla in cancer cell lines. Cytotoxicity to 5 cancer cell lines and normal revealed that the extract had cytotoxic effect in colorectal cancer cell lines (HCT-116 and HT-29), as the limonoids were cytotoxic for colorectal cancer (HCT-116) and melanoma (SKMEL-19). Given these results, we selected the limonoid L3 and HCT-116 cell line to evaluate the mechanism of action, as well as the HT-29 lineage, which has the TP53 gene mutated for comparison as possible of the compound mechanism of action, once it was less sensitive to L3. Moreover, L3 showed more selective for tumor cells. None of the compounds caused hemolysis of erythrocytes in mice. To evaluate the antiproliferative action of L3, the clonogenic assay was performed, where the two lines there was a significant reduction of colonies, however this reduction was more significant in HCT-116. The L3 compound also has caused death by apoptosis in a dose-dependent manner in the lines, where the number of cells in apoptosis was higher in HCT-116. To evaluate DNA damage, it was held the comet assay, which showed that L3 cause damage to the DNA of the two cancer cell lines, with greater damage index in HCT-116. The assessment of cell cycle distribution of cells after treatment with L3 showed that there was blocking the cycle at the G2 / M phase, mainly in HCT-116 (45% of the cells). From these data, it conducted a study of genes involved in this phase of the cycle, from analysis of their expression by RT-PCR. The ATM gene, which is activated by DNA damage activates the CHK-2 which in turn phosphorylates p53 protein. p53 protein can activate the transcription of p21 gene, which triggers cell cycle stopped, or activate cell death pathways. In this study, we found increased expression of genes ATM, CHK-2, TP53, ARF in a dose dependent in both cacer cell lines, and this expression was higher in HCT-116 cell line. The expression of p21 was increased in HCT-116, while in HT-29 decreased, this is due to the fact that HT-29 possess the mutant TP53 gene, then your protein does not work properly. As the path of apoptosis was evaluated caspase-3 gene and the anti-apoptotic gene BCL-2. There was increase in the expression of caspase-3 mainly in HCT-116 and decrease of BCL-2. These results suggest that L3 may be causing damage to the DNA of cells, triggering a cellular signaling pathway dependent on p53. To evaluate the toxicity of S. macrophylla extract, it was held the acute toxicology testing in mice, where the extract did not cause any changes in the physiological parameters of animals. As the claustogenicidade test (micronucleus) also showed that the extract is not mutagenic in the mouse bone marrow cells.

Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-06-06T15:09:18Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_EstudoPotenciaisMarcadores.pdf: 1422762 bytes, checksum: 1a0509ef0ea8dba76d7b8c811d02ce39 (MD5) / Approved for entry into archive by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2017-06-12T13:57:51Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_EstudoPotenciaisMarcadores.pdf: 1422762 bytes, checksum: 1a0509ef0ea8dba76d7b8c811d02ce39 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-12T13:57:51Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_EstudoPotenciaisMarcadores.pdf: 1422762 bytes, checksum: 1a0509ef0ea8dba76d7b8c811d02ce39 (MD5) Previous issue date: 2015-08-27 / O câncer de pulmão é um importante problema de saúde pública, ocupando atualmente a décima posição entre as principais causas de morte no mundo e a principal causa de morte dentre as neoplasias malignas. A predisposição individual ao desenvolvimento de câncer de pulmão pode estar associada a polimorfismos genéticos envolvidos na resposta inflamatória, em mecanismos de ativação ou na detoxificação de carcinógenos, assim como, em defeitos nos mecanismos de identificação e reparo de danos sofridos pelo DNA. O presente estudo teve como objetivo investigar a influência de 13 polimorfismos do tipo inserção/deleção em genes do metabolismo e biotransformação (CYP2E1, CYP19A1 e UGT1A1), genes de controle do sistema imunológico e resposta inflamatória (IL1A e IL4), genes que regulam a função de genes de controle do ciclo celular e do sistema imunológico (MDM2 e NFKB1), genes de reparação do DNA (TYMS e XRCC1), gene regulador da apoptose (CASP 8), gene regulador da hemostasia (PAR1) e gene de controle do ciclo celular (TP53,) quanto a suscetibilidade ao câncer de pulmão. Os polimorfismos foram genotipados por uma reação de PCR multiplex em pacientes com diagnóstico confirmado para câncer de pulmão e em indivíduos da mesma população, sem essa doença. A ancestralidade genética de todos os indivíduos foram estimadas por um painel de marcadores informativos de ancestralidade. Uma análise de regressão logística controlando pelas variáveis idade, gênero e tabagismo foi realizada para determinar a influência dos polimorfismos na susceptibilidade ao câncer. Não foram encontradas diferenças estatisticamente significativas entre os grupos com câncer e sem câncer. Os polimorfismos estudados não estão associados à suscetibilidade ao câncer de pulmão na população do Pará. / Lung cancer is a major public health problem, currently occupying the tenth position among the leading causes of death worldwide and the leading cause of death among cancer. The individual predisposition to developing lung cancer could be associated with genetic polymorphisms related to the inflammatory response, activation mechanisms and detoxification or carcinogens, as well as defects in the mechanisms of the DNA repair. This study aimed to investigate the influence of 13 polymorphisms of the type insertion / deletion in genes of the metabolism and biotransformation (CYP2E1, CYP19A1 and UGT1A1), control genes of the immune system and inflammatory response (IL1A and IL4), genes that regulate control of gene function of the cell cycle and immune system (MDM2 and NFKB1), DNA repair genes (TYMS and XRCC1), regulator of apoptosis gene (CASP 8), regulator of hemostasis gene (PAR1) and control gene cell cycle (TP53) as susceptibility to lung cancer. Polymorphisms were genotyped by a multiplex PCR reaction of patients with a confirmed diagnosis for lung cancer and individuals from the same population without the disease. The genetic ancestry of all individuals were estimated by a panel of ancestry informative markers. A logistic regression analysis controlling for age, gender and smoking was performed to determine the influence of polymorphisms in susceptibility to cancer. No statistically significant differences between the groups with cancer and without cancer were founded. Polymorphisms studied are not associated with susceptibility to lung cancer in the Pará population.

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:46:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 FernandoSS_DISSERT.pdf: 1401128 bytes, checksum: 9a2239f9c1eca61393a33efa394de31d (MD5) Previous issue date: 2011-12-19 / The therapeutic possibilities for chronic renal failure closely are related to the biological and social condition, and in this perspective the renal transplant is considered the best option, for providing quality of life better. This study it objectified to apprehend, by means of the rescue of the verbal history of life of the kidney transplant patients, the experiences lived since the diagnosis of the renal to the current with the current therapeutic modality. One is about a study of qualitative boarding, exploratory and descriptive, having the verbal history of life as a technique and method. The colony was formed with the ten first kidney transplant patients of the Rio Grande of the North, taken care of in the clinic of the Nephrology in the University Hospital Onofre Lopes-UFRN, located in the city of Christmas-RN. The net was composed for collaborators of both the sex, in the age band between 21 and 56 years of age, submitted it more than has one year to the renal transplant and that, in some cases, together of its familiar ones, they had voluntarily accepted to participate of the study. The first collaborator interviewed for this was excluded not to desire to participate the study more than. After approval for the Committee of Ethics in Search of the UFRN, we carry through the collection of data, by means of a halfstructuralized interview, recorded individually, in environment chosen for the collaborators. We carry through the transcription of the interviews and later we return to the interviewed ones so that the same ones made the conference, what it made possible in them to carry through the transcriation, after consecutive readings. We analyze the stories by means of the analysis of content of Bardin. Guiding the analysis of the stories of the collaborators, we find three axles thematic: Impact in the social relations, Impact in the social condition and Behavior front the illness and treatment. We conclude in this study that the loss of the renal function reed-echo drastically in the life of the collaborators, but that the acceptance of the pathological condition emerged, mainly for the support of the family and in the belief in God. The renal transplant was seen as the chance for a new life, however, so that they reach an improvement in the quality of life, other questions must be optimized, as the guarantee of constitutional laws, the rescue of the citizenship and offer of bigger support of the professionals of the health, family and society for the confrontation of the problems generated for the chronic renal illness and its treatments / As possibilidades terap?uticas para a Insufici?ncia Renal Cr?nica (IRC) est?o intimamente relacionadas ?s condi??es biol?gica e social, e nesta perspectiva o transplante renal ? considerado a melhor op??o, por proporcionar melhor qualidade de vida. Este estudo objetivou apreender, por meio do resgate da hist?ria oral de vida dos pacientes transplantados renais, as experi?ncias vivenciadas desde o diagn?stico da doen?a renal cr?nica ? conviv?ncia com a atual modalidade terap?utica. Trata-se de um estudo de abordagem qualitativa, explorat?rio-descritivo, tendo a hist?ria oral de vida como t?cnica e referencial metodol?gico. A col?nia foi formada pelos dez primeiros pacientes transplantados renais do Rio Grande do Norte, atendidos no ambulat?rio da Nefrologia no Hospital Universit?rio Onofre Lopes-UFRN, localizado na cidade de Natal-RN. A rede foi composta por colaboradores de ambos os sexos, na faixa et?ria entre 21 e 56 anos de idade, submetidos h? mais de um ano ao transplante renal e que, em alguns casos, juntamente de seus familiares, aceitaram, voluntariamente, participar do estudo. Foi exclu?do o primeiro colaborador entrevistado por este n?o desejar participar mais do estudo. Ap?s aprova??o pelo Comit? de ?tica em Pesquisa (CEP) da UFRN, sob o protocolo n. 413/2010, realizamos a coleta de dados, por meio de uma entrevista semi-estruturada, gravada individualmente, em ambiente escolhido pelos colaboradores. Realizamos a transcri??o das entrevistas e posteriormente retornamos aos entrevistados para a contra-prova, ou seja, para que os mesmos conferissem o que nos possibilitou realizar a transcria??o, ap?s leituras consecutivas. Analisamos os relatos por meio da an?lise de conte?do de Bardin. Norteando a an?lise dos relatos dos colaboradores, encontramos tr?s eixos tem?ticos: Impacto nas rela??es sociais, Impacto na condi??o social e Comportamento frente ? doen?a e tratamento. Conclu?mos, neste estudo, que a perda da fun??o renal repercutiu drasticamente na vida dos colaboradores, mas que a aceita??o da condi??o patol?gica emergiu, principalmente, pelo apoio da fam?lia e na cren?a em Deus. O transplante renal foi visto como a oportunidade para uma nova vida, por?m, para que alcancem uma melhoria na qualidade de vida, outras quest?es devem ser otimizadas, como a garantia de direitos constitucionais, o resgate da cidadania e a oferta de maior apoio dos profissionais da sa?de, fam?lia e sociedade para o enfrentamento dos problemas gerados pela doen?a renal cr?nica e seus tratamentos

Bancroftian lymphatic filariasis is a neglected parasitic illness, known popularly as elephantiasis, because it is one of its chronic clinical manifestations. It is an anthroponotic disease caused by a nematode helminth of the species Wuchereria bancrofti (Cobbold, 1877) (Spirurida: Onchocercidae). Bancroftian filariasis occurs in 83 countries localized in tropical and subtropical regions and is considered by the World Health Organization as the second leading cause, worldwide, of work disability. With the objective to ascertain the current distribution of lymphatic filariasis in Maceio, based upon previous studies, hemoscopic and entomological surveys were conducted in the city. The hemoscopic surveys were performed using a thick blood smear (TBS) in a random sample of 20,025 students of night schools, enrolled in the 143 public schools that cover the 50 districts of the city, a sample of 1418 employees of the same public night schools and of 546 soldiers of the Brazilian Army s 59th Motorized Infantry Battalion. Also evaluated by TBS was the family of the sole microfilaremic person found, composed of four individuals and 239 families of current and former neighbors of this patient, with a total of 943 individuals. The entomological survey, for which the methodology of xenomonitoring was adopted, was conducted in an area of the city where they found the microfilaremic person diagnosed during the study. For this, in the residences of microfilaraemic person and his neighbors, 478 engorged female mosquitos of the species Culex quinquefasciatus (Say, 1823) (Diptera: Culicidae) were caught and examined by PCR. No microfilaremia was diagnosed in the hemoscopic surveys conducted among the night school students and soldiers of the Army. Among the employees of the schools just an individual microfilaremic person was diagnosed living in the Benedito Bentes district, locality considered free of lymphatic filariasis, however he was a past resident of the Jacintinho district which is endemic for the disease. The sole microfilaremic found in the study had microfilaremia considered very low (4 mf/mL of blood). The hemoscopic survey conducted among the current neighbors (Benedito Bentes 336 individuals) and the previous neighbors in the endemic area (Jacintinho 607 individuals) did not detect microfilaremia. The entomologic survey revealed that there were no examples of mosquitos with W. bancrofti DNA in the home of the person or the surrounding region. It was demonstrated that the sole microfilaremic person, that lived in a non-endemic area for 10 years, could not be epidemiologically important as a source of infection (reservoir) possibly due to his low level of microfilaremia. These results, associated with recently released data that report a significant reduction of the disease in endemic areas of the city, suggests that there is no transmission of Bancroftian lymphatic filariasis in the city of Maceio. / A filariose linfática bancroftiana é uma doença parasitária, negligenciada, conhecida popularmente como elefantíase, devido a uma de suas manifestações clínicas crônicas. É uma enfermidade antroponótica, provocada por um helminto nematóide da espécie Wuchereria bancrofti (Cobbold, 1877) (Spirurida: Onchocercidae). A bancroftose ocorre em 83 países, localizados em regiões tropicais e subtropicais e é considerada pela Organização Mundial da Saúde como a segunda causa mundial de incapacidade para o trabalho. Com o objetivo de verificar a atual distribuição da filariose linfática em Maceió, tendo como base estudos anteriores, foram realizados na cidade inquéritos hemoscópicos e entomológico. Os Inquéritos hemoscópicos foram realizados utilizando a gota espessa de sangue (GE), em uma amostra aleatória de 20.025 escolares noturnos, matriculados em 143 escolas públicas que abrangem os 50 bairros da cidade; em uma amostra de 1.418 funcionários do período noturno das mesmas escolas públicas e 546 militares do 59º Batalhão de Infantaria Motorizada do Exército Brasileiro. Também foram avaliadas por GE, a família do único microfilarêmico encontrado, composta por quatro indivíduos e 239 famílias de atuais e antigos vizinhos deste paciente, com um total de 943 indivíduos. O inquérito entomológico, para o qual se adotou a metodologia de xenomonitoramento, foi realizado em uma área da cidade onde se detectou o único paciente microfilarêmico diagnosticado durante o estudo. Para isto, foram capturadas nas residências do microfilarêmico e de seus vizinhos, e examinadas pela PCR, 478 fêmeas ingurgitadas de mosquitos da espécie Culex quinquefasciatus (Say, 1823) (Diptera: Culicidae). Nos inquéritos hemoscópicos realizados entre os escolares noturnos e militares do Exército não foi diagnosticado nenhum microfilarêmico. Entre os funcionários das escolas foi diagnosticado apenas um indivíduo microfilarêmico residente no bairro Benedito Bentes, localidade considerada indene para filariose linfática na cidade, porém o parasitado era antigo residente do bairro Jacintinho, endêmico para a enfermidade. O único microfilarêmico detectado no estudo apresentou microfilaremia considerada muito baixa (4 mf/mL de sangue). O inquérito hemoscópico realizado entre os atuais vizinhos (Benedito Bentes 336 indivíduos) e os antigos vizinhos de área endêmica (Jacintinho 607 indivíduos) não detectou microfilarêmicos. O inquérito entomológico revelou que não havia exemplares de mosquitos com DNA de W. bancrofti na residência do microfilarêmico e na sua região circunvizinha. Verificou-se que o único microfilarêmico, que residia há 10 anos na área indene, não possuía importância epidemiológica como fonte de infecção (reservatório) possivelmente devido a sua baixa microfilaremia. Estes resultados, associados a dados recentemente divulgados, que relatam diminuição significativa da prevalência da enfermidade na área endêmica da cidade, sugere que não está havendo transmissão da filariose linfática bancroftiana na cidade de Maceió.

Made available in DSpace on 2016-12-23T13:55:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao de mestrado Ana Claudia Gouveia.pdf: 545544 bytes, checksum: ef710da8f0ab0b9735e6488225cd69ff (MD5) Previous issue date: 2006-09-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Use of the most rapid and reliable laboratory tests for Mycobacterium tuberculosis detection and identification is important for tuberculosis (TB) control. Diagnostic techniques based on molecular biology methods are able to dramatically reduce the time of detection as well as increase the sensitivity for detecting the bacilli. A polymerase chain reaction DNA amplification method for direct detection of Mycobacterium tuberculosis Complex (PCR IS6110) in BACTEC 12B broth cultures was evaluated. A total of 107 sputum samples were processed by standard methods, and then inoculated into Ogawa slants and BACTEC 12B vials. The PCR assay was used on BACTEC 12B broth cultures with a growth index (GI) of equal to or greater than 30. Molecular results were compared to those obtained by phenotypic identification methods. Of the 107 broth cultures evaluated, 90 were all culture and PCR positive for M. tuberculosis. Except for one, all cultures (n = 8) which grew mycobacteria other than M. tuberculosis were PCR negative. In two cultures which grew both mycobacteria and other organisms than acid-fast bacilli a phenotypic identification was not possible, and both of them were PCR negative. The remaining seven cultures that did not contain mycobacteria were PCR negative. Of particular interest were all 44 cultures positive from smear-negative sputum specimens and three contaminated BACTEC 12B broth cultures yielding mycobacterial growth which a M. tuberculosis Complex, which were successfully identified by PCR, resulting in a mean time to identify M. tuberculosis of 5,5 and 16 days before phenotypic identification, respectively. In light of an overall sensitivity and specificity of 100% and 87,5%, respectively, coupled with the ability to identify the bacilli days or weeks before other methods can be applied, we conclude that PCR might prove to be a rapid alternative for identification of M. tuberculosis Complex in culture, even in the context of paucibacillary patients. / A utilização de métodos laboratoriais rápidos para a detecção e identificação do Mycobacterium tuberculosis é crucial para a prevenção e o controle da tuberculose. Embora técnicas baseadas na amplificação de ácidos nucléicos apresentem alta sensibilidade e reduzam consideravelmente o tempo de identificação deste bacilo, há uma grande carência de estudos sobre a avaliação de primers específicos para detecção de M. tuberculosis em meios de culturas líquido (BACTEC 12B e ou MGIT) em condições de rotina diagnóstica. Diante deste fato, propusemo-nos a avaliar a reação em cadeia da polimerase utilizando um par de primers específico para a IS6110 (PCR IS6110), para detecção do Complexo Mycobacterium tuberculosis em culturas em meios BACTEC 12B. Um total de 107 amostras de escarro foi processado e inoculado em meio de Ogawa e BACTEC 12B. Uma alíquota dos cultivos em meio 12B que apresentaram índice de crescimento (IC) igual ou maior a 30 foi submetida à amplificação através da PCR IS6110. Os resultados do método molecular foram comparados à identificação obtida através de métodos fenotípicos. Das 107 culturas avaliadas, 90 foram identificadas através dos métodos fenotípico e molecular como M. tuberculosis, e todas as culturas (n = 8) com crescimento de outras micobactérias que não M. tuberculosis apresentaram resultado de PCR negativo, com exceção de uma amostra. A identificação fenotípica não foi possível em dois cultivos que apresentaram crescimento concomitante de micobactérias e microrganismos contaminantes, sendo que estas duas culturas apresentaram resultado negativo de PCR. Os resultados das demais sete culturas foram negativos por ambos os métodos. A identificação molecular do M. tuberculosis foi especialmente relevante em 44 culturas provenientes de escarros que apresentaram baciloscopia negativa e em três culturas de BACTEC 12B contaminadas, sendo que, em média, a identificação ocorreu 5,5 e 16 dias, respectivamente, mais rápido quando comparada à identificação fenotípica. Os resultados obtidos em nosso estudo demonstram a eficácia da PCR IS6110 na identificação rápida de M. tuberculosis em cultivos de meios 12B (100% de sensibilidade e 87,5% de especificidade), e evidenciam a relevância da técnica no diagnóstico precoce da tuberculose pulmonar, sobretudo em pacientes paucibacilíferos.

Made available in DSpace on 2016-12-23T13:55:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese Bete atual 3 maio 2006.pdf: 1008546 bytes, checksum: 47a15ef84c9d3ffd6d4e5ae6595331a5 (MD5) Previous issue date: 2006-05-26 / Embora os protocolos de prevenção da transmissão vertical do HIV-1 atualmente preconizados venham contribuindo para a redução da infecção na população pediátrica nos países desenvolvidos, um grande número de crianças continua sendo infectado pelo HIV em países em desenvolvimento. Dados sobre a infecção nesta população ainda são escassos. Neste trabalho, realizamos um levantamento do perfil genotípico do HIV em uma coorte de crianças infectadas pelo HIV-1 no Setor de Infectologia/AIDS Pediátrico do Centro de Referência do Hospital Infantil Nossa Senhora da Glória - Vitória / ES Os dados aqui apresentados demonstram que a prevalência e o nível de mutações de resistência às drogas foram mais evidentes no grupo de pacientes recebendo terapia com ARVs quando comparados ao grupo de pacientes virgem de tratamento, corroborando com o conceito de ação da pressão seletiva na emergência de cepas virais resistentes. Mutações de resistência primária aos ARVs não foram encontradas na grande maioria das crianças não tratadas (Grupo A), sustentando a hipótese que a transmissão vertical ocorreu a partir de mães que não tinham consciência do seu status sorológico e conseqüentemente não faziam uso de antiretrovirais. Neste grupo foi encontrado uma maior prevalência de mutações acessórias não conferindo resistência aos ARVs. A supressão máxima da replicação viral continua ser a principal meta a ser atingida pela terapia visando prevenir a emergência de cepas resistentes. Infelizmente, em 20-50% dos pacientes que iniciam HAART essa supressão viral sustentada não é atingida e podendo ser ainda maior em pacientes em esquemas de tratamentos seqüenciais. Embora, muitos fatores possam ser associados com falha virológica, incluindo baixa aderência, farmacocinética dos ARVs e regimes de tratamento sub-ótimos, a emergência de variantes virais resistentes aos ARVs tem sido a principal causa de falha de tratamento. O desenvolvimento de resistência aos ARVs tem um maior impacto no tratamento destas crianças por poder levar ao aparecimento de resistência cruzada, limitando opções futuras. A grande maioria das crianças no Grupo B já estavam em tratamento com ARVs há mais de 7 anos, sendo que alguns já haviam passado pela fase de monoterapia com AZT, depois terapia dupla e hoje se encontram no seu 2º, 3º e até mesmo 4º esquema de HAART. Estes fatos podem explicar a dificuldade de supressão da replicação viral e a conseqüente falha no tratamento encontrada nesta população. Os dados aqui apresentados enfatizam a importância de identificarmos o momento apropriado para o início da terapia com ARVs, bem como a escolha mais adequada da combinação de ARVs que leve à supressão da replicação viral de forma efetiva, sem deixarmos de considerar a importância da adesão ao esquema terapêutico por parte dos responsáveis legais por estas crianças. / Although existing protocols to prevent HIV-1 vertical transmission have contributed to reduce infection within the pediatric population in developed countries, a significant large number of children is still been infected vertically in undeveloped countries. Data regarding the latter population is still scarce. The HIV genotypic profile of a cohort of HIV-1 infected children attending to the Infectious Disease/Pediatric AIDS Ward of the Children s Hospital Nossa Senhora da Glória - Vitória / ES was evaluated in the present work. Our data demonstrated that both the prevalence and the level of genotypic resistance mutations were more evident among patients receiving HAART therapy (Group B) when compared to treatment naive patients (Group A), which supports the previous data showing the key role of antiretroviral (ARV) drugs selective pressure on the emergence of resistant virus isolates. Antiretroviral primary resistance mutations were not found in the great majority of treatment naive children, supporting the hypothesis that vertical transmission occurred from mother that didn t know their serological status and were not under treatment with ARV, the highest prevalence of viral polymorphism non-related to ARV resistance was found in this group. The main goal of ARV therapy is to achieve total suppression of viral replication, in order to prevent the emergence of ARV resistant strain. Unfortunately, in 20-50% of patients initiating HAART this total suppression is not achieved, this failure rate may be even higher among patients in sequential treatment regimens. Although several factors could be associated with treatment failure, such as non-compliance, ARV pharmacokinetics and inadequate treatment regimens, the emergence of ARV resistant viral mutants is still the main responsible for treatment failure. The development of ARV resistance has a greater impact among pediatric patients due to the fact that it may lead to cross-resistance, which may limit the use of other ARV later on. Most of the children in Group B were under treatment with ARV for more than 7 years, including some that received AZT monotherapy, than double therapy and today are in their 2nd, 3rd or even 4th HAART regimen. This fact may explain the difficulty in achieving total suppression of viral replication and consequently the high frequency of treatment failure found among patients in this group. Data presented here emphasize the importance of the correct timing for beginning ARV therapy, as well as the correct choice of ARV to achieve viral replication suppression efficiently, without forgetting the importance of patient compliance to the therapeutic regimen enforced by the legal guardians of these children.

Made available in DSpace on 2016-12-23T13:55:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Priscila Ventorim Lisboa Ferreira.pdf: 1031724 bytes, checksum: c897be36746643eea3eee9da896e7d40 (MD5) Previous issue date: 2013-08-14 / Introdução: Diversas alterações cutâneas têm sido descritas nos pacientes transplantados renais, sendo a maior parte delas relativas aos efeitos imunossupressores diretos ou aos efeitos colaterais das drogas e podem ser agrupadas em infecções virais, bacterianas e fúngicas, lesões pré-neoplásicas e neoplásicas e iatrogênicas. Objetivos: 1- Determinar os agentes etiológicos e formas clínicas das micoses observadas nos pacientes transplantados renais estudados. 2- Correlacionar a ocorrência de micose com esquema imunossupressor. 3- Avaliar a prevalência de micoses em relação às dermatoses bacterianas e virais. Materiais e métodos: Estudo descritivo tipo corte transversal, com amostragem por conveniência, que avaliou 82 pacientes transplantados renais em regime de medicações imunossupressoras, atendidos em um hospital da Grande Vitória (ES), nos anos de 2011 e 2012. Após exame dermatológico foram realizados exames micológicos através de microscopia e cultura, quando necessários. Resultados: A casuística consistiu, na maioria, de pacientes do sexo masculino, pardos e com média de idade de 49,2 anos. O esquema imunossupressor mais frequente foi a combinação de Prednisona + Tacrolimus + Micofenolato sódico (46,3%) e foi o mais relacionado às dermatomicoses. O percentual de dermatomicoses foi de 28%, sendo 19,5% de onicomicoses, 6,1% de pitiríase versicolor e 2,4% de tineas. Com relação às dermatoses infecciosas, 7,3% apresentaram verrugas vulgares, 2,4% herpes simples e o mesmo percentual de 1,22% para molusco contagioso, erisipela e furunculose. O grupo de pacientes com transplante tardio (entre 3 e 5 anos) foi o que apresentou maior frequência de dermatomicoses. Conclusões: Os aspectos clínicos das dermatomicoses foram semelhantes, porém mais freqüentes que aqueles observados na população em geral. O percentual de dermatoses infecciosas foi similar ao da população imunocompetente / Introduction: Several cutaneous changes have been reported in renal transplant recipients, most of them due to immunosuppressive effects or side effects of the drugs and can be grouped into viral, bacterial and fungal infections, pre-neoplastic and neoplastic, and iatrogenic. Objectives: 1 - Determine the etiologic agents and clinical forms of mycoses observed in renal transplant recipients studied. 2 - Correlate the occurrence of fungal infection with immunosuppressive regimen and time of transplantation. 3 - Evaluate the frequency of bacterial and viral skin diseases. Materials and Methods: Descriptive cross-sectional study with convenience sampling, which evaluated 82 renal transplant recipients under immunosuppressive medications, treated at a hospital in Vitória (ES) in the years 2011 and 2012. After dermatological examination, skin scrapings were performed by light microscopy and mycological culture. Results: The sample consisted mostly of males and a mean age of 49.2 years. The most frequent regimen was the combination of Prednisone + Tacrolimus + Mycophenolate sodium (46.3%) and it was the most related to dermatomycoses. The frequency of dermatomycoses was 28%, with 19.5% of onychomycosis, 6.1% of pitiryasis versicolor and 2.4% of Tineas. We also found 7.3% of common warts, 2.4% of herpes simplex and the same percentage of 1.22% for molluscum contagiosum, erysipelas and furunculosis. The group of patients with late transplant (between 3 and 5 years) showed the highest frequency of dermatomycoses. Conclusions: The clinical aspects of dermatomycoses was similar but it was more frequent than that observed in the general population. The percentage of cutaneous infections was similar to that of immunocompetent population

Made available in DSpace on 2016-12-23T13:55:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Joao Carlos Santos Hocayen.pdf: 1596592 bytes, checksum: 1c59eade564ebfd74618e55ade223a6a (MD5) Previous issue date: 2013-08-30 / Introduction. There are indications that an acute intoxication with ethanol has anti-inflammatory effects, reducing the exudation of neutrophils and increasing susceptibility to infections, especially with Streptococcus pneumoniae. However we do not know the time these inhibitory effects of cellular exudation and reduced microbicidal activity of leukocytes persist after one acute intoxication with ethanol. .Objective. To evaluate the time of duration of the inhibitory effects of exudation of neutrophils and reduction of microbicidal activity in a model of peritonitis induced by Staphylococcus aureus after an acute ethanol intoxication in mice. Methods. C57BL/6 mice received by gavage one dose of 7mg of ethane/g body weight. Control animals received the same volume of distillated water. One, 12, 24, 48 and 72 hours after ethanol intoxication all mice received intra-peritoneal injection of Staphylococcus aureus (0.5 ml containing 6 to 9x108 CFU/mL of ATCC 25923 strain). Six hours later the animals were euthanized, and the peritoneal cavity rinsed with PBS / EDTA 0.01 M; one aliquot was used CFU counts and the other for global and specific count of cells in the exudates, using a Neubauer chamber and a cytospin to obtain smears that were stained by fast staining method with Dipquick. CFU counts were made by the method of serial dilution. Results. All animals receiving ethanol showed signs of intoxication, which reached a state of profound lethargy and all animals were recovering 45 minutes later.The ethanol dose used induced thymic involution, evident 24 hours after alcohol ingestion, with recovery being evident after 120 hours. In animals that received ethanol a significant reduction in the number of cells in exudates was observed; this reduction was due to reduction of exudation of neutrophils up to 24 hours after ethanol intoxication. The number of mononuclear cells were similar in both groups. Microscopic analysis of the smears showed bacteria out of the cells, more frequently in the ethanol group and the number of CFU was lower in this group but the observed difference was not statistically significant. Conclusion. Results confirm the anti-inflammatory effects of an acute ethanol intoxication, with a significant reduction in exudates of neutrophils, but with no significant changes in exudates of mononuclear leukocytes. The microbicidal activity of peritoneal cavity against staphylococci was lower in the ethanol group although without statistical significance, possibly because the resident macrophages were less affected by the effects of ethanol / Introdução. Há demonstrações que uma intoxicação aguda pelo etanol tem efeitos antiinflamatórios, com redução da exsudação de neutrófilos e com aumento da susceptibilidade a bactérias, especialmente Streptococcus pneumoniae. No entanto não se conhece o tempo durante o qual persistem os efeitos inibidores da exsudação celular e da redução da atividade microbicida de leucócitos, após a intoxicação etílica aguda. Objetivos. Avaliar o tempo após uma intoxicação etílica aguda no qual persistem os efeitos inibidores da exsudação de neutrófilos e a redução da capacidade microbicida do exsudato inflamatório em um modelo de peritonite induzida por Staphylococcus aureus. Métodos. Camundongos C57BL/6 receberam, por gavagem, uma dose de 7mg de etanol/g peso corporal em solução a 40%. Uma, 12,24, 48 e 72 horas após, receberam uma inoculação intraperitoneal de Staphylococcus aureus (0,5 ml contendo 6 a 9x108 UFC/mL; cepa ATCC 25923). Seis horas depois, os animais eram eutanasiados e a cavidade peritoneal lavada com PBS/EDTA 0,01M; uma alíquota era utilizada para contagem do número de UFC e a outra para contagem global e específica das células do exsudato utilizando câmara de Neubauer e citocentrífuga para confecção de esfregaços, corados por corante hematológico rápido (Dipquick). A contagem de UFC foi feita pelo método de diluição seriada com semeadura em placas de ágar Müller-Hinton. Resultados. Todos os animais que receberam etanol apresentaram sinais de embriaguês, que chegou a um estado de letargia profunda do qual todos os animais se recuperavam em, no máximo, 45 minutos. A dose de etanol utilizada induziu involução do timo, evidente 24 horas após a alcoolização, mas com recuperação após 120 horas. Nos animais alcoolizados que receberam o inóculo do estafilococo houve redução significativa da exsudação celular, devido a redução da exsudação de neutrófilos, até 24 horas após a ingestão do etanol. A análise dos esfregaços mostrava maior quantidade de bactérias fora das células no grupo etanol e o número de UFC foi maior no período avaliado, mas a diferença não foi estatisticamente significativa. Conclusão. Confirma-se os efeitos antiinflamatórios da intoxicação etílica aguda, com redução significativa no exsudato de leucócitos, até 24 horas após a exposição ao etanol; essa redução decorre especialmente da redução da exsudação de neutrófilos, já que o número de mononucleares exsudados no período avaliado foi semelhante nos dois grupos experimentais. O poder microbicida da cavidade peritoneal frente aos estafilococos foi menor no grupo etanol embora sem significância estatística, possivelmente porque os macrófagos residentes foram menos afetados pelos efeitos do etanol

Made available in DSpace on 2016-12-23T13:56:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao de mestrado Tatiana Co.pdf: 1118842 bytes, checksum: f75eb8302dbe7252582bc592b702c3f7 (MD5) Previous issue date: 2006-09-28 / The cellular immune response probably plays a pivotal role in determining the clinical outcome after exposure to Mycobacterium tuberculosis (MTB). This immune response is mediated by Th1 cells, with production of IFN-g, the major cytokine in macrophage activation and mycobacteria eradication. Several factors can be related to tuberculosis resistance. We investigated the role of intestinal helminth infection on M. tuberculosis specific immune response during active tuberculosis in patients with concomitant tuberculosis and intestinal helminth infection at the time of diagnosis and during tuberculosis therapy. Forty patients with newly diagnosed tuberculosis were enrolled in this study. Twenty-seven percent of these patients were co-infected with at least one intestinal helminth (TB+Helminths patients). Concomitant intestinal helminth infection and tuberculosis had a negative impact on absolute numbers of total lymphocytes, B cells, T cells (CD4+ and CD8+), and NKT cells. These alterations were also accompanied by lower IFN-g and elevated and sustained IL-10 levels in whole blood cultures from TB+Helminths patients as compared to TB patients. In addition to a depressed anti-MTB immunity, TB+Helminths patients also presented more severe radiological pulmonary disease, with significant difference in the number of involved lung zones at the end of tuberculosis treatment. The data from this study indicated that intestinal helminth infection can disturb the protective immune response in patients with tuberculosis. / A resposta imune celular tem um papel fundamental na evolução clínica do hospedeiro após a exposição ao Mycobacterium tuberculosis (MTB). Essa resposta imune é mediada por uma resposta do tipo Th1, com a produção de IFN-g, principal citocina na ativação do macrófago e, conseqüentemente, na eliminação do bacilo. Vários fatores podem estar relacionados com a resistência a tuberculose. Neste trabalho, foi avaliado o papel da infecção helmíntica na resposta imune MTB-específica durante a tuberculose ativa em pacientes portadores de tuberculose, co-infectados por helmintos intestinais, no momento do diagnóstico e durante a terapia antituberculose. Para isso, foram arrolados 40 pacientes, com diagnóstico recente de tuberculose pulmonar. Desses pacientes, 27% eram portadores de pelo menos uma espécie de helminto intestinal (grupo TB+Helminto). A presença de helmintos intestinais nos pacientes portadores de tuberculose levou a um efeito negativo nos números absolutos de linfócitos totais, linfócitos B, linfócitos T (CD4+ and CD8+) e células NKT. Essas alterações nos números de células estavam acompanhadas de uma diminuição na produção de IFN-g e de elevados e prolongados níveis de IL-10 em sobrenadantes de cultura de sangue total no grupo TB+Helminto, quando comparado ao grupo nãoinfectado por helmintos intestinais. Adicionalmente à supressão da imunidade anti-MTB, os pacientes do grupo TB+Helminto apresentaram doença pulmonar mais grave (avaliada pelo exame radiográfico), com uma diferença significativa no número de zonas pulmonares envolvidas ao final do tratamento antituberculose. Os resultados desse trabalho sugerem que a infecção helmíntica intestinal pode prejudicar a resposta imune protetora nos pacientes portadores de tuberculose.

Made available in DSpace on 2016-12-23T13:56:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Saick Genotipos Rotavirus.pdf: 1758385 bytes, checksum: 51837cea2c3389401234f70c01e946ff (MD5) Previous issue date: 2007-09-17 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Os rotavirus do grupo A (RVA) são uma das principais causas de diarréia aguda em crianças até cinco anos tanto em países desenvolvidos como em desenvolvimento. O virion possui genoma constituído por 11 segmentos de RNAdf, contido por um triplo capsídeo concêntrico, cujo padrão de migração após eletroforese em gel de poliacrilamida (EGPA) permite a classificação em grupos (A-G) e em perfis longo, curto e super-curto. O capsídeo externo é formado pelas proteínas VP4 e VP7, cujos genes formam a base do sistema de classificação em genótipos P e G, respectivamente. O conhecimento dos genótipos de RVA em uma determinada área geográfica é essencial para o estabelecimento e o monitoramento de estratégias preventivas. Considerando a carência de estudo de genotipagem no Espírito Santo, esta pesquisa se propôs: i) determinar os genótipos de RVA obtidos de crianças com diarréia aguda, residentes na Região Metropolitana de Vitória - ES, provenientes do Pronto Socorro do Hospital Infantil Nossa Senhora da Glória (PS-HINSG) (80/253), entre fevereiro de 2003 e junho de 2004 e; ii) determinar a freqüência e os genótipos de RVA em crianças atendidas na emergência (n=5) ou hospitalizadas (n=63) na pediatria do Hospital CIAS-UNIMED, entre julho de 2004 e novembro de 2006. RNAdf viral foi extraído a partir de suspensão fecal, através do método de guanidina-sílica. EGPA foi realizado nas amostras do CIAS/UNIMED para detecção de RVs e determinação do perfil eletroforético. DNA complementar foi sintetizado por transcrição reversa utilizando o iniciador randômico pdN6 TM. PCR foi realizado utilizando um par de iniciadores consenso para VP4 (4con2/4con3) ou para VP7 (9con1/9con2) e os produtos foram utilizados na Multiplex semi-nested PCR com iniciadores específicos para G e P (G1-G5, G9, P[4], P[6], P[8], P[9]). Das cepas de RVA do PS-HINSG, observou-se os genótipos G1P[8] (83,6%), G9P[8] (7,5%), G1P[4] (2,5%), G1P[6] (1,3%), G4P[6] (1,3%) e G?P[8] (3,8%). Das amostras obtidas no CIAS/UNIMED, 20,6% (14/68) foram positivas para RVA, quatro e dez com perfis curto e longo, respectivamente. Destas cepas, foram observados os genótipos G9P[8] (50%), G2P[4] (28,7%), G2P[8], G1P[8] e G?P[8] (7,1%, cada). Nenhuma infecção mista foi observada em ambos hospitais. Estes dados revelam: i) G1P[8] e G9P[8], genótipos prevalentes no PS-HINSG e no CIAS/UNIMED, espectivamente; ii) G9P[8], detectado no final do período de coleta das amostras do PS-HINSG, sugere flutuação temporal na circulação; iii) G2P[4], encontrado somente em 2006 nas crianças hospitalizadas. Os resultados obtidos sugerem que a vacina Rotarix® utilizada no Brasil poderá ser eficiente em reduzir o número de casos e a gravidade da doença na região do estudo. Entretanto, destaca-se o surgimento do genótipo G2 para o qual a vacina apresenta menor proteção, reforçando a necessidade de vigilância contínua dos genótipos circulantes como monitoramento da eficácia da vacina. / Group A rotaviruses (RVA) are a major cause of acute diarrhea in children up to 5 years in both developing and developed countries. The virion consists of 11 double-stranded RNA (dsRNA) genome enclosed in a triple-shelled capsid, which migration pattern in polyacrilamide gel eletrophoresis (PAGE) permit the classification in groups (A-G) and in long, short and super-short profiles. The outer shell is composed by VP4 and VP7 proteins which genes form the basis of the classification system in P and G genotypes, respectively. The knowledge about RVA genotypes distribution is essential for the establishment and the monitoring of preventive strategies. Considering the lack of these studies in Espírito Santo State, this investigation proposed: i) to determine RVA genotypes obtained from children with acute diarrhea, resident in Metropolitan region of Vitória - ES, from the Emergency Room at Hospital Infantil Nossa Senhora da Glória (HINSG) (80/253), collected between February 2003 and June 2004 and; ii) to determine the frequency and RVA genotypes in children attended at Emergency (n=5) or hospitalized (n=63) from Pediatric Setor of CIAS/UNIMED hospital, between July 2004 and November 2006. dsRNA were extracted from fecal suspensions by guanidine-silica procedure. PAGE was performed in CIAS/UNIMED samples for rotaviruses detection and eletropherotype determination. Complementary DNA was obtained by reverse transcription with pdN6 TM random primer. PCR were done with a pair of consensus primers for VP4 (4con2/4con3) or VP7 (9con1/9con2) and the products were submitted to Multiplex semi-nested PCR with specific primers for the G and P types (G1-G5, G9, P[4], P[6], P[8], P[9]). RVA genotypes observed from HINSG were G1P[8] (83.6%), G9P[8] (7.5%), G1P[4] (2.5%), G1[6] (1.3%), G4P[6] (1.3%) and G?P[8] (3.8%). Among samples stools from CIAS/UNIMED, 20.6% (14/68) were RVA positive, four and ten with short and long eletropherotypes, respectively. The following genotypes were observed: G9P[8] (50%), G2P[4] (28.7%), G2P[8], G1P[8] and G?P[8] (7%, each). No mixed infection was observed in both hospitals. These data reveal: i) G1P[8] and G9P[8] were the most common genotypes from HISNG and CIAS/UNIMED, respectively; ii) G9P[8] was detected in the end of the samples obtainment, suggesting temporal fluctuation on genotype circulation; iii) G2P[4] was found only in 2006 from hospitalized children. The results suggest that RotarixTM vaccine used in Brazil may efficiently reduce the severity and the number of RVA cases in the region studied. However, it must be emphasize the emergence of G2 type for which the vaccine shows lower protection, reforcing the need of continuous surveillance of RVA genotypes as vaccine efficacy monitoring.