Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Programa de Pós-graduação em Patologia Molecular, 2014. / Submitted by Ana Cristina Barbosa da Silva (annabds@hotmail.com) on 2014-10-10T16:54:01Z No. of bitstreams: 1 2014_LuizaChavesdeMirandaLeonhardt.pdf: 1508747 bytes, checksum: b7aafa88f3da9b4a46c3447800997019 (MD5) / Approved for entry into archive by Tania Milca Carvalho Malheiros(tania@bce.unb.br) on 2014-10-14T20:24:17Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_LuizaChavesdeMirandaLeonhardt.pdf: 1508747 bytes, checksum: b7aafa88f3da9b4a46c3447800997019 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-10-14T20:24:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_LuizaChavesdeMirandaLeonhardt.pdf: 1508747 bytes, checksum: b7aafa88f3da9b4a46c3447800997019 (MD5) / A cromoblastomicose (CBM) é uma micose subcutânea, crônica, de distribuição cosmopolita, causada por vários fungos demáceos, pigmentados e dimórficos, sendo o Fonsecaea pedrosoi um dos agentes etiológicos mais recorrente. Estudos a respeito da importância dos receptores do tipo Toll no processo da internalização e reconhecimento de F. pedrosoi ainda são escassos de modo que o presente trabalho analisou a participação de alguns receptores de reconhecimento padrão dos macrófagos infectados com diferentes formas do fungo. Nossos resultados demonstraram que os conídeos são capazes de proliferar no interior dos macrófagos previamente estimulados com agonistas de TLR4, TLR2/TLR6 e Dectina-1. Já as células muriformes, apresentaram um resultado diferente, onde macrófagos infectados com essa forma fúngica e previamente estimulados com zymosan e LPS, apresentaram ação fungicida. Outros componentes da parede do fungo, que poderiam interferir na ativação correta dos macrófagos são os lipídeos, porém lipídeos totais extraídos das células muriformes de F. pedrosoi não modularam a ativação dos macrófagos quanto à produção das citocinas MCP-1, IL-6, IL-12 e NO. A ativação adequada dos macrófagos, para que possa eliminar o fungo internalizado, depende da ativação conjunta de mais de um receptor, como quando estimulado com zymosan e LPS, bem como da adequada maturação do endossomo, considerando que o fungo consegue sobreviver em meio ácido. ______________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The chromoblastomycosis is a chronic subcutaneous mycosis of cosmopolitan distribution, caused by several pigmented (dematiaceous) and dimorphic fungi. Fonsecaea pedrosoi is one of the most recurrent etiological agents. Studies on the importance of pattern recognition receptors (PRR) in the process of internalization and recognition F. pedrosoi are poor, so the objective of this work was examined the participation of some macrophage PRR during infection with different forms of this fungus. Our results showed a higher proliferation index of conidia within macrophages when macrophage were previously stimulated with TLR4, TLR2 / TLR6 and Dectin-1 agonists. Macrophages previously stimulated with zymosan and LPS and infected with muriformes cells showed a fungicidal action. Other components of the fungal wall, which could interfere with proper activation of macrophages are lipids, but total lipids extracted from F. pedrosoi muriformes cells did not modulate macrophage activation inducing production of MCP-1, IL-6, IL-12 and NO. Macrophages properly activated can eliminate internalized fungus and this activity is associated with a receptors crosstalk, as when stimulated with zymosan and LPS.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2006. / Submitted by Thaíza da Silva Santos (thaiza28@hotmail.com) on 2009-10-24T13:16:24Z No. of bitstreams: 1 2006_Paulo Cesar Rodrigues Tabanez.pdf: 2997772 bytes, checksum: c45f51b562196594cb16abea9281c014 (MD5) / Approved for entry into archive by Tania Milca Carvalho Malheiros(tania@bce.unb.br) on 2009-10-27T13:18:02Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2006_Paulo Cesar Rodrigues Tabanez.pdf: 2997772 bytes, checksum: c45f51b562196594cb16abea9281c014 (MD5) / Made available in DSpace on 2009-10-27T13:18:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2006_Paulo Cesar Rodrigues Tabanez.pdf: 2997772 bytes, checksum: c45f51b562196594cb16abea9281c014 (MD5) Previous issue date: 2006-07-31 / A talidomida é uma droga imunomoduladora que tem sido utilizada experimentalmente em muitas condições clínicas, porém seu uso na malária ainda é insipiente. A malária é uma doença com alta morbi-mortalidade presente em todas as regiões tropicais do mundo. As manifestações severas da doença, possivelmente, estão ligadas à excessiva resposta imunitária, principalmente à produção de fator de necrose tumoral e radicais de oxigênio e nitrogênio. A talidomida diminui a produção de FNT por aumentar a degradação do seu ARNm e diminuir a ativação do NFκB. O presente trabalho avaliou a influência da talidomida sobre a evolução da malária e sobre as funções dos macrófagos em camundongos susceptíveis ou não à malária cerebral. Camundongos Balb/C e CBA foram infectados com 106 eritrócitos parasitados por Plasmodium berghei ANKA, tratados a partir do terceiro dia de infecção com 150 mg/Kg de talidomida diluída em solução a 0,8M de sacarose, por via oral, uma vez ao dia, em um volume de 100 μL. Outros dois grupos não foram infectados, mas foram tratados da mesma forma. No oitavo dia de infecção, o sangue foi obtido para a determinação do FNT e os macrófagos foram recuperados da cavidade abdominal para avaliação, in vitro, da capacidade fagocitária, produção de peróxido de hidrogênio, óxido nítrico e FNT. A capacidade fagocitária foi avaliada pelo teste de fagocitose, com ou sem opsoninas, em placa sendo determinado o índice fagocitário. A produção de peróxido de hidrogênio foi determinada pelo teste de oxidação do vermelho de fenol na presença de peroxidase. O óxido nítrico foi determinado pela reação de Griess. O FNT foi quantificado no soro e no sobrenadante das culturas dos macrófagos pelo teste imunoenzimático. A influência da talidomida, mas também da sacarose e da associação da talidomida com sacarose foi avaliada na evolução da malária por meio da curva de sobrevida, da parasitemia, anemia e peso dos camundongos Balb/C. Nos camundongos Balb/C, o tratamento com talidomida não modificou a sobrevida, diminuiu a perda de peso, retardou a elevação da parasitemia em nove dias, porém agravou a anemia a partir do vigésimo primeiro dia de infecção. O tratamento com solução a 0,8M de sacarose antecipou em um dia o início da morte e diminuiu em nove dias o tempo de vida, aumentou a perda de peso no início da infecção e posteriormente, a partir do décimo quarto dia, reduziu a perda de peso, agravou a parasitemia e a anemia. Porém, a associação da talidomida com a sacarose não modificou a curva de sobrevida e retardou a evolução da parasitemia a partir do vigésimo primeiro dia de infecção, por outro lado, agravou a evolução da anemia e aumentou a perda de peso a partir do vigésimo primeiro dia de infecção. Nos camundongos CBA, a associação da talidomida com sacarose não modificou a curva de sobrevida dos animais, a perda de peso, a parasitemia e a anemia. Em relação à função dos macrófagos, o tratamento dos camundongos Balb/C e CBA com talidomida diluída em solução 0,8M de sacarose não alterou a capacidade fagocitária e a produção de peróxido de hidrogênio, modulou negativamente a produção de óxido nítrico e diminuiu a produção de FNT tanto na cultura de macrófagos quanto no soro. Nossos dados sugerem que a talidomida, nos camundongos Balb/C, modulou a hiperativação do sistema imunitário de forma benéfica, uma vez que os aspectos gerais da evolução da malária não foram alterados, ao contrário, houve diminuição da perda de peso e retardo na evolução da parasitemia, porém, a administração isolada de sacarose deve ser avaliada pelos seus possíveis efeitos deletérios durante a infecção. Os dois modelos estudados não respondem da mesma forma à infecção provavelmente determinados por fatores genéticos. Sugerem, portanto, que a utilização da talidomida como terapia adjuvante aos anti-plasmodiais, antes das manifestações clínicas de gravidade, deve ser avaliada em seres humanos, exceto mulheres, com o objetivo de diminuir a grande morbidade e mortalidade da malária. ______________________________________________________________________ ABSTRACT / Thalidomide is an immunomodulatory drug that has been successfully evaluated in several clinical conditions, however it needs better evaluation in severe malaria. Malaria has high morbimortality in vast areas of the world. The excessive activation of the immune system, with increased production of tumor necrosis factor, oxygen and nitrogen reactive species, plays an important role in the pathogenesis of the disease. Thalidomide inhibits the production of TNF increasing the rate of mRNA degradation and depressing NFκB pathway. This work aimed to evaluate the influence of thalidomide on malaria outcome and on macrophage functions of susceptible (CBA) and not susceptible (Balb/C) mice to cerebral malaria. Balb/C and CBA mice were injected with 106 Plasmodium berghei ANKA infected-erythrocytes, and after three days mice were treated per os with 150 mg/Kg/day of thalidomide in 100 μL of 0,8M sucrose solution. The same treatment was administered to two other not infected groups. Another group was treated with only 0,8M sucrose solution. On the eightieth day after infection, blood was collected and macrophages were obtained from peritoneal cavity to assess, in vitro, immunological functions. Phagocytosis was evaluated by phagocytic index. Hydrogen peroxide was assessed by phenol red oxidation and nitric oxide production was assessed by Griess reaction. TNF production was evaluated in serum and supernatant of peritoneal macrophage cultures by immunoassay test. The influence of thalidomide on mortality, parasitemia, hematocrit and body weight was assessed in Balb/C and CBA-infected mice. Another Balb/c group treated with sucrose was added. Thalidomide did not influence the survival time, diminished body weight loss, delayed parasitemia in fortieth day, but worsened anemia twenty one days onward of infection in Balb/C mice compared to non-treated animals. The treatment with sucrose prompts one day the beginning of death and nine days the survival time. Firstly sucrose increased and after fortieth day of infection decreased body weight loss. It worsened parasitemia and anemia compared to that non-treated animals. However, association of thalidomide and sucrose did not alter survival time and body weight loss but increased parasitemia on fourth day onward of infection and worsened anemia after twenty one days of infection compared to that non-treated animals. The association of thalidomide and sucrose to treat CBA infected mice did not alter the survival time, body weight loss, parasitemia or anemia. The treatment with thalidomide of Balb/C and CBA infected mice did not influence the phagocytosis and hydrogen peroxide production, but it downregulated nitric oxide production, and decreased TNF production in serum (Balb/C) and supernatant of peritoneal macrophage cultures (Balb/C and CBA). Our findings suggest that thalidomide improved the outcome of disease, by decreasing body weight loss and delaying the parasitemia. Treatment with sucrose should be better evaluated because its possible deleterious effects. Our findings suggest that both experimental models show different immunopathological mechanisms, probably due to genetic factors. Moreover, thalidomide as adjuvant therapy in human malaria should be evaluated, except in women, to reduce morbidity and mortality of severe malaria.

A homeostase intracelular do colesterol é mantida, em células de mamíferos, por meio de uma série de mecanismos, porém pode haver uma ruptura deste balanço intracelular podendo levar ao desenvolvimento de doenças, como a lesão aterosclerótica que hoje em dia está acometendo grande parte da população mundial. A enzima HMG-CoA redutase, que possui cisteínas reativas em sua estrutura, pode ser alvo de estudos sobre o bloqueio do processo aterosclerótico, por meio de prostaglandinas da família das ciclopentenônicas (CP-PGs), particularmente a prostaglandina A2 (PGA2), que desviam completamente a síntese de novo de colesterol no sentido da síntese de fosfolípides em macrófagos/foam cells e outras preparações de macrófagos inflamatórios. Dessa forma o objetivo deste estudo foi investigar o efeito da PGA2 sobre a HMG-CoA redutase, em tipos celulares relacionados ao processo aterogênico, demonstrando seu mecanismo de ação por ligação covalente a cisteínas reativas desta enzima. Utilizaram-se macrófagos U937 que foram incubados ou não com LDL oxidada, tornando-se-os foam cells. As células foram tratadas com dose não tóxica (1 μM) de PGA2 ou com mistura controle por um período de 24 h. Outros grupos de macrófagos U937 e foam cells foram tratados com PGA2 biotinilada (com ou sem ditiotreitol, DTT 10 mM) na presença ou ausência de PGA2 (10 μM e 20 μM), por 2 h e 6 h. Foi feito também um estudo da atividade da HMG-CoA, através de kit específico e curvas de crescimentos celular em resposta PGA2. Nossos resultados mostraram aumento na imunodetecção de HMG-CoA redutase em macrófagos, quando tratados com LDL oxidada e tratados com PGA2 biotinilada por 2 h e 6 h, sendo que o tratamento com DTT produziu uma dramática redução na incorporação da mesma à enzima. A PGA2 foi capaz de reduzir a atividade da HMG-CoA em até 86,4% nas doses utilizadas. Macrófagos e foam cells tratados com PGA2 (1 μM) tiveram um aumento na proliferação celular quando comparados com aqueles que não receberam tratamento ou que foram tratadas com doses mais altas da PGA2. Nossos achados contribuem para esclarecer o mecanismo pelo qual ocorre a ação da PGA2 na reversão do processo aterosclerótico via inibição da enzima HMG-CoA redutase via ligação covalente nas cisteínas reativas desta enzima. / The intracellular cholesterol homeostasis is maintained in mammalian cells by a variety of mechanisms, although there may be intracellular breakdown of this balance that can lead to the development of diseases such as atherosclerotic lesions that are nowadays mostly affecting the population worldwide. The enzyme HMG-CoA reductase, which has critical reactive cysteines in its structure, may be target anti-atherosclerotic treatments , once cyclopentenonic prostaglandins (CP-PGs), particularly prostaglandin A2 (PGA2), which completely diverts de novo synthesis of cholesterol toward the direction of phospholipid synthesis in macrophages/foam cells in macrophage/foam cells and other inflammatory macrophage preparations. Thus the objective of this study was to investigate the effect of PGA2 on the HMG-CoA reductase in cell types related to the atherogenic process, demonstrating its mechanism of action by covalent binding to reactive cysteines of this enzyme. Macrophages U937 were used were incubated or not with LDL oxidized, making-up the foam cells. Cells were treated with non-toxic dose of PGA2 (1 μM) or with a mixture control for a period of 24 h. Other groups and U937 macrophage foam cells were treated with biotinylated PGA2 (with or without dithiothreitol, DTT, 10 mM) in the presence or absence of PGA2 (10 mM and 20 mM) for 2 h and 6 h. Was also made a study of the activity of HMG-CoA through kit specific and cell growth curves in response to PGA2. Our results showed the increase in immunodetection of HMG-CoA reductase into macrophages, when treated with LDL oxidized and treated with biotinylated PGA2 for 2 h and 6 h, and the DTT treatment produced a dramatic reduction the incorporation of the same enzyme. The PGA2 was able to reduce the activity of HMG-CoA to 86.4% at the doses used. Macrophages and foam cells treated with PGA2 (1 mM) had an increase in cell proliferation compared with those receiving no treatment or were treated with higher doses of PGA2. Our findings help to clarify the mechanism by which the action occurs in the PGA2 reversal of atherosclerosis by inhibiting the enzyme HMG-CoA reductase by way of covalent bond in the reactive cysteines of this enzyme.

Submitted by Luiza Maria Pereira de Oliveira (luiza.oliveira@ufpe.br) on 2015-05-15T16:25:27Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) TESE Igor Henrique Morais Silva.pdf: 1086010 bytes, checksum: c8c39ab5103fa1dbe17101da3ac13d38 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-05-15T16:25:27Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) TESE Igor Henrique Morais Silva.pdf: 1086010 bytes, checksum: c8c39ab5103fa1dbe17101da3ac13d38 (MD5) Previous issue date: 2014-08-15 / Objetivo: O objetivo deste trabalho foi avaliar a influência da laserterapia em diferentes parâmetros e comprimentos de onda, 660 e 808 nm, sobre a liberação de óxido nítrico (NO) e a viabilidade celular em células da linhagem RAW 264.7. Metodologia: A irradiação foi feita com o laser de As-Ga-Al, modo contínuo, comprimentos de onda 660 e 808 nm em diferentes densidades de energia (j/cm2) e potência (W/cm2). Para cada comprimento de onda foram utilizadas potências de 30, 50 e 100 mW com tempos de exposição de 10, 30 e 60 segundos. A liberação de NO foi mensurada utilizando-se a reação de Griess e a viabilidade celular foi avaliada pela redução mitocondrial do 3-[4,5-dimetiltiazol-2-il]-2,5-brometo de difenil tetrazólio (MTT) à formazan. Resultados: Laserterapia promoveu alterações na liberação de NO e MTT apenas com o laser de 660 nm (p<0,05) sendo o tempo de exposição e potência, respectivamente, mais influentes nos valores de cada um. Além disso, laserterapia promoveu aumento na liberação de NO (p=0,04) sem aleração no valor de MTT (p>0,05) quando se utilizou a densidade de energia 64 j/cm2. Conclusão: Variações no tempo de exposição e potência são, respectivamente, mais influentes na liberação de NO e viabilidade celular apenas utilizando o laser de 660nm, bem como laserterapia promove aumento na liberação de óxido nítrico utilizando 64 j/cm2 sem alteração da viabilidade celular no mesmo comprimento de onda quando variados os tempos de exposição e fixadas as potências.

Submitted by Gilvan Almeida (gilvan.almeida@icict.fiocruz.br) on 2017-02-21T18:04:00Z No. of bitstreams: 1 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) / Approved for entry into archive by Anderson Silva (avargas@icict.fiocruz.br) on 2017-03-16T19:17:27Z (GMT) No. of bitstreams: 2 livia_mariano_ioc_mest_2016.pdf: 3017677 bytes, checksum: e1138f1f4e5cbaa36865b559d960ffaa (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-16T19:17:27Z (GMT). No. of bitstreams: 2 livia_mariano_ioc_mest_2016.pdf: 3017677 bytes, checksum: e1138f1f4e5cbaa36865b559d960ffaa (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A silicose é uma doença inflamatória pulmonar, de caráter ocupacional, causada pela inalação de partículas de sílica, sendo caracterizada por marcada inflamação e fibrose, e para qual não há tratamento até o momento. A lidocaína é um anestésico local que possui atividade anti-inflamatória conforme já demonstrado em processos de natureza alérgica. Neste estudo buscamos avaliar o efeito do tratamento com lidocaína sobre a silicose experimental murina. Para tanto, camundongos Swiss-Webster foram instilados, por via intranasal, com partículas de sílica (0,5 \2013 10 \03BCm) e as análises realizadas em diferentes tempos após o desafio. A lidocaína foi administrada sob forma de aerossol, em doses diárias de 1 e 2%, por sete dias consecutivos, iniciando-se 6 horas (fase inicial) ou 21 dias (tardia) após a instilação de sílica. Verificamos que os camundongos silicóticos apresentaram comprometimento da função pulmonar (aumento de resistência das vias aéreas e elastância pulmonar) e hiper-reatividade frente à metacolina. Observamos uma correlação temporal com a ocorrência de alterações morfológicas como infiltrado inflamatório, com presença de células F4/80 positivas (macrófagos), produção de citocinas e quimiocinas (CXCL2/MIP-2, CXCL-1/KC, TNF-\03B1 e IFN-\03B3), progressiva fibrose e marcada formação de granulomas durante o curso da doença O tratamento com lidocaína, na fase inicial, foi capaz de inibir as alterações de função pulmonar, infiltrado de macrófagos, produção de citocinas e a resposta fibrótica, tanto em 7 como em 28 dias após instilação da sílica. De forma contrária, a administração da lidocaína na fase tardia (21 dias) falhou em causar alteração ou reversão dos parâmetros analisados. Adicionalmente, demonstramos que a lidocaína foi capaz de inibir a produção de TNF-\03B1 por macrófagos alveolares (linhagem AMJ2C11) estimulados com sílica in vitro. Ademais, utilizando macrófagos derivados de medula óssea, diferenciados in vitro para os fenótipos M1 (próinflamatório) e M2 (anti-inflamatório), verificamos que apenas o subtipo M1 mostrou-se sensível ao tratamento com lidocaína, conforme atestado pela redução dos níveis de citocinas liberadas (TNF-\03B1 e IL-1\03B2). Em conclusão, nossos resultados mostram que o tratamento com a lidocaína se mostrou eficiente em interferir somente com a fase de instalação da silicose, falhando quando administrada na condição do quadro fisiopatológico estabelecido. Isto pode ser atribuído, pelo menos em parte às propriedades anti-inflamatórias da lidocaína, conforme demonstrado pela inibição da atividade secretora de macrófagos possuidores de perfil próinflamatório (M1) / Silicosis is an occupational lung inflammatory disease caused by silica particle inhalation, being characterized a inflammation and fibrosis - there is no treatment available until now. Lidocaine is a local anesthetic showing anti-inflammatory activity already demonstrated in allergic processesess. In this study we investigated the effect of lidocaine treatment on a model of murine experimental silicosis. Swiss-Webster mice were instilled intranasally with silica particles (0.5 - 10 \03BCM) and the analyses were performed at different time points after challenge. Lidocaine was administered by aerosol 1 - 2% during seven consecutive days, starting 6 hours (initial phase) or 21 days (late phase) after silica instillation. We showed that silicotic mice exhibited decreased lung function (increased airways resistance and lung elastance) and hyper-reactivity after methacholine stimulation. A temporal correlation was noted concerning morphological alterations including inflammatory infiltrate F4/80 positive cells (macrophages), production of cytokines and chemokines (CXCL2/MIP-2, CXCL1/KC, TNF-\03B1 e IFN-\03B3) and a progressive fibrosis and granuloma formation during the course of the disease. Treatment with lidocaine, at the initial phase, inhibited lung function alterations, macrophage infiltration, cytokine production and fibrosis, both at 7 and 28 days after silica instillation In contrast, lidocaine administration at the late phase (21 days) failed to modify or reverse all the parameters analyzed. Additionally, we demonstrated that lidocaine inhibited TNF-\03B1 production by alveolar macrophages (AMJ2C11 lineage) stimulated with silica in vitro. Moreover, using bone-marrow derived macrophages differentiated in vitro to M1 phenotype (pro-inflammatory) and M2 phenotype (anti-inflammatory), we noted that only the M1 macrophages were sensitive to lidocaine as attested by reduced levels of cytokine release (TNF-\03B1 and IL-1\03B2). In conclusion, our results show that treatment with lidocaine was shown to be effective to interfere only with silicosis installation and failed when the physiopathology was already established. This could be attributed, at least partially, to the anti-inflammatory properties of lidocaine as shown by its ability to inhibit the secretory function of pro-inflammatory macrophages (M1)

A síntese de melatonina por fagócitos mononucleares do colostro humano é iniciada após a indução com a partícula zimosan, com ou sem opsonização por IgA. Esta produção é dependente da ativação da via NFKB, o que foi observado após o bloqueio farmacológico da via com PDTC ou ALLN levando a diminuição da concentração de melatonina nas culturas. A localização do NFKB varia temporalmente após o estímulo inicial e as subunidades do NFKB são diferentes no núcleo de células ativadas. A subunidade p50 está presente em todas as condições experimentais (controle, zimosan e zimosan opsonizado), mas as subunidades Rel A e c-Rel apenas nas células tratadas. A melatonina apresenta atividade sobre células imunocompetentes em diversos modelos experimentais, mas o modelo de fagocitose ainda não havia sido relatado na literatura. Observamos que a melatonina é capaz de potenciar a fagocitose de zimosan não opsonizado. A capacidade de síntese de melatonina apresentada por células imunocompetentes é um fenômeno conhecido e agora pudemos demonstrar que a via NFKB é responsável também pela síntese de melatonina em fagócitos mononucleares do colostro. Ao contrário do que ocorre na glândula pineal onde a ativação da via do NFKB bloqueia a síntese de melatonina, nos leucócitos, a ativação desta via se faz necessária para o inicio da síntese. Uma possível justificativa para esta diferença é a presença da subunidade c-Rel apenas nos fagócitos, permitindo supor que esta subunidade seja responsável pela síntese de melatonina nestas células. Hipoteticamente, a síntese de melatonina dependente da ativação de um fator envolvido com a resposta inflamatória, abre a perspectiva de que a melatonina estaria participando deste processo. O aumento na taxa de fagocitose induzida pela melatonina mostra uma participação importante dessa indolamina durante uma infecção, diminuindo o tempo em que um possível patógeno se encontraria no meio extracelular auxiliando na sua rápida eliminação. Os dados apresentados no presente trabalho demonstram que as células imunocompetentes não apenas produzem esta indolamina, como também se utilizam dela para modular processos nos quais estas células participam. / The melatonin synthesis by human mononuclear phagocytes starts after the induction by IgA opsonized or not zymosan. This production is dependent on the activation of NFKB pathway since the pharmacological block of the pathway by PDTC or ALLN reduces the melatonin concentration in culture supernatants. The NFKB localization temporally varies after initial stimulus and the presence of specific subunits in the cell nucleus is different in activated cells when compared with control cells. We observed the presence of p50 subunit in all experimental conditions (control, zymosan, opsonized zymosan), but the Rel A and c-Rel subunits were only detected in treated cells. Melatonin shows activity over immune cells in many experimental models, but the phagocytosis model was not yet reported in literature. We observed that melatonin (1 nM) is able to potentiate the non opsonized zymosan phagocytosis. The capacity to synthesize melatonin presented by immune cells is a well known phenomenon and now we demonstrate that the NFKB pathway is also responsible for the melatonin synthesis in colostral mononuclear phagocytes. The activation of NFKB pathway inhibits the melatonin synthesis in pineal gland but, in leukocytes, the activation of this pathway is necessary to achieved melatonin synthesis. A possible explanation for this difference is the presence of c-Rel in the phagocytes, which presents transactivation domains, allowing the supposition that this subunit is the responsible for melatonin synthesis in these cells. Since, melatonin synthesis is dependent on the activation of a factor involved with an inflammatory response, this study opens the perspective that the melatonin could participate as a modulator of this process. The phagocytosis induced by melatonin discloses a significant role of this indolamine during an infection, promoting the fast elimination of pathogen in the extracellular medium. The data shows that immune cells not only produces this indolamine, but also use the melatonin to modulate the immune responses.

Submitted by Heitor Rapela Medeiros (heitor.rapela@ufpe.br) on 2015-03-05T18:15:07Z No. of bitstreams: 2 Patricia Pereira.pdf: 1355446 bytes, checksum: 475882c4f94fd40562796afcb6a2861d (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-05T18:15:07Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Patricia Pereira.pdf: 1355446 bytes, checksum: 475882c4f94fd40562796afcb6a2861d (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2012-03-15 / A obesidade é considerada um baixo grau de inflamação crônica, que promove alterações em diversos sistemas, dentre os quais o sistema imune pode ser afetado. O treinamento físico é uma estratégia útil para evitar o excesso de peso e prejuízo à imunidade. Objetivo: Investigar as alterações imunológicas relacionadas com a obesidade e analisar a repercussão do treinamento físico moderado no sistema imune. Métodos: Foram utilizadas ratas Wistar fêmeas que após o 21º dia pós - natal foram divididas em dois grupos, segundo o regime dietético empregado: Grupo Controle (GC) (n=16) e Grupo Obeso (GO) (n=16). Aos 60 dias pós- natal, os grupos foram subdivididos em sedentários (S) e treinados (T), formando quatro grupos: Controle-Sedentário (CS), Controle-Treinado (CT), Obeso-Sedentário (OS) e Obeso -Treinado (OT). Avaliou-se peso, gordura visceral, índice de massa corporal e série branca do sangue, seguida de coleta e análise das células dos macrófagos alveolares. In vitro: Na cultura dos macrófagos foram avaliados taxa de fagocitose, índice de aderência, viabilidade celular e produção de óxido nítrico. Resultados: Aos 105 dias pós-natal, verificamos aumento no peso corporal, IMC e gordura visceral no OS. Quanto ao comprimento naso-anal, não houve diferença entre os grupos. No sangue, a série branca apresentou aumento nos linfócitos, neutrófilos e basófilos do OT. Eosinófilos não diferiram entre os grupos. Em macrófagos alveolares, a taxa de fagocitose foi maior para os animais treinados [CT (p= 0,000) e OT (p=0,002)]. A produção de óxido nítrico estimulado com lipopolissacarídeos aumentou em animais treinados [CT (p=0,014) e OT (p=0,000)]. O índice de aderência e a viabilidade celular não diferiram entre os grupos. Conclusão: A dieta hiperlipídica foi eficiente em aumentar a gordura visceral, além de repercutir na resposta imune. O treinamento físico reverteu o aumento da adiposidade e proteger o organismo das agressões promovidas pela obesidade.

Orientador: João Martins Pizauro / Coorientador: Samir Issa Samara / Coorientador: Marco Antonio de Andrade Belo / Banca: Eduardo Maffud Cilli / Banca: Monica Valdyrce dos Anjos Lopes Ferreira / Banca: Fabiana Garcia / Banca: Luiz Flávio José dos Santos / Resumo: A Aeromonas hydrophila é um patógeno oportunista com capacidade de infectar peixes, mamíferos e humanos. É cosmopolita e responsável por infecções hospitalares em humanos e causadora da aeromonose em peixes. O uso de antibióticos na água, como forma terapêutica na aquicultura, apesar de controlar a infecção, favorece o desenvolvimento de resistência microbiana através do efeito residual destes fármacos no peixe e consequentemente no consumidor final humano, tornando-se um agravo para a saúde pública. Pensando nisso, foi produzido uma imunoglobulina Y (IgY), extraída da gema do ovo de galinhas poedeiras, específica para as proteínas de membrana e citoplasmática de A. hydrophila. No início, a IgY foi validada quanto a capacidade de detectar o patógeno no tecido de tilápias-do-nilo (Oreochromis niloticus) infectadas com a bactéria homóloga. Após a validação da IgY anti- A. hydrophila, a mesma foi testada in vitro na imunoterapia, e seus efeitos na atividade fagolisossômica de macrófagos (MΦs) de tilápias-do-nilo, infectados com A. hydrophila viva opsonizada/ neutralizada ou não. Os resultados provaram a eficácia e a aplicação da IgY para o ensaio de imunofluorescência direta (IMF) e imuno-histoquímica (IHC) validando a IgY para o diagnóstico e estudo fisiopatológico da infeção por A. hydrophila em tilápias-do-nilo. Na imunoterapia in vitro a IgY anti-A. hydrophila teve efeito positivo no controle da infecção, postulando ainda, o uso dos MΦs da tilápia-do-nilo como um importante ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Aeromonas hydrophila is an opportunistic pathogen with the capacity to infect fish, mammals and humans. It is cosmopolitan and is responsible for hospital infections among humans and for aeromonosis in fish. Although using antibiotics in water for therapeutic purposes in fish-farming has the effect of controlling infection, it also favors development of microbial resistance through the residual effect of these drugs on fish and consequently on the final human consumers. Thus, their use has become a public health hazard. With the aim of investigating alternative ways of combating A. hydrophila, an immunoglobulin Y (IgY) extracted from the yolk of the eggs of laying hens that was specific for the proteins of the membrane and cytoplasm of A. hydrophila was produced. This IgY was firstly validated regarding its capacity to detect A. hydrophila in the tissues of Nile tilapias (Oreochromis niloticus) that were infected with the homologous bacterium. The anti-A. hydrophila IgY was then tested in vitro for immunotherapy to determine its effects on the phagolysosomal activity of macrophages (MΦs) in Nile tilapias that were infected with live A. hydrophila that was either opsonized/neutralized or not. The results demonstrated that application of IgY was effective. Direct immunofluorescence (IMF) tests and immunohistochemical (IHC) analysis validated IgY for diagnosing the presence of A. hydrophila and for conducting physiopathological studies on A. hydrophila in Nile tilapias. In in vi... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Rinaldo Poncio Mendes / Coorientador: Maria Sueli Parreira de Arruda / Banca: Daniela Vanessa Moris de Oliveira / Banca: Vânia Nieto Brito de Souza / Banca: Vanessa Soares Lara / Banca: Angela Satie Nishkako / Resumo: Diabetes mellitus (DM) é um importante fator de predisposição para o desenvolvimento de infecções, incluindo a candidíase. Embora a incidência e a gravidade das doenças infecciosas em pacientes diabéticos estejam com frequência relacionadas a disfunções da resposta imune, seus mecanismos ainda não foram bem esclarecidos. No presente estudo avaliou-se a influência da condição de hipoinsulinemia-hiperglicemia (HH) na evolução da candidíase experimental sistêmica. Parâmetros histológicos, microbiológicos e imunológicos envolvendo medula óssea, cérebro, baço e fígado, níveis plasmáticos de quimiocina e de citocinas, atividade macrofágica e distribuição de granulócitos e subpopulações de monócitos do sangue periférico foram avaliados. Para tanto, camundongos suiços, HH-induzidos ou não pela aloxana, foram inoculados com Candida albicans pela veia da cauda e avaliados 12, 24 e 96 horas e 7 dias após infecção. A presença de fungos foi avaliada em: sangue, medula óssea, rins, fígado, cérebro e baço. A atividade macrofágica foi estudada pela resposta de fagócitos peritoneais cultivados ou não com C. albicans mortas pelo calor, avaliando-se a produção de peróxido de hidrogénio e de óxido nítrico e os níveis de TNF-α, IL-6, IL-10, IFN-γ, IL-12p70 e CCL2 em sobrenadande de cultura. Os níveis plasmáticos destas citocinas também foram determinados. A distribuição de granulócitos e das subpopulações de monócitos circulantes foi determinada por citometria de fluxo. Os resultados mostraram aumento da mortalidade em camundongos HH; apesar da ausência de diferenças de resposta tecidual entre os grupos infectados; notamos diferenças importantes na carga fúngica presente nos diversos tecidos examinados (especificar). Estes animais também exibiam elevados níveis plasmáticos de IL-6 e TNF-α, e uma produção exacerbada de TNF-α pelos macrófagos. Após infecção ... / Abstract: Diabetis mellitus (DM) is an important predisposing factor for the development of infections, including candidiasis. Although the incidence and severity of infectious diseases in diabetic patients are related to dysfunction in the immune function, the mechanisms involved in the high susceptibility to this fungal infection are not clear. In the present study, we evaluated the influence of hypoinsulinemia-hyperglycemia (HH) on plasma levels of chemokine/cytokines, macrophage activity and distribution of peripheral blood granulocytes and monocytes subsets in a murine model of systemic candidiasis. C. albicans was intravenously inoculated in alloxan-induced HH mice, which were evaluated 12, 24 and 96 hours, and 7 days after infection. Colony-forming unit analysis and/or histopathological examination were performed on blood, bone-marrow, kidney, brain, liver and spleen. Peritoneal phagocytes were cultured with or without heat-killed C. albicans, and the production of hydrogen peroxide and nitric oxide were determined. The levels of TNF-α, IL-6, IL-10, IFN-γ, IL-12p70 and CCL2 were measured in the culture supernatants and also in the plasma of the mice. The distribution of peripheral blood granulocytes and monocytes subsets were performed by flow cytometry. Our findings showed an increased mortality in the infected HH mice, but they showed no significant differences in fungal recovery. Upon histopathological examination, no differences were observed between both infected groups, but strong discrepancies in fungal load were found among the tissues examined. High plasma levels of IL-6 and TNF-α as well as an excessive TNF-α-mediated macrophage response were also observed in the infected HH-induced mice. Soon after the fungal challenge, increased percentage of granulocytes and inflammatory monocytes was observed. C.albicans-infected HH mice presented a higher percentage of granulocytes than the non-HH ... / Doutor

A radiação ionizante tem sido empregada com sucesso na modificação das propriedades imunológicas das biomoléculas e tem se mostrado uma potente ferramenta para destoxicar venenos de serpentes sem afetar e, muitas vezes, melhorando suas propriedades imunogênicas. Resultados promissores foram obtidos com o tratamento, tanto de veneno total quanto de frações isoladas, com a radiação gama de 60Co. No presente trabalho, foram avaliados os efeitos da Bothropstoxina-1 (Bthx-1) e do veneno total de Bothrops jararacussu sobre o sistema imune de camundongos B10.PL e BALB/c, visando caracterizar a resposta imune contra proteínas irradiadas. Modificações estruturais foram observadas por meio de técnicas eletroforéticas - SDS-PAGE. Para os ensaios imunológicos, camundongos de diferentes linhagens foram imunizados com ambas as formas da Bthx-1 e os anticorpos circulantes foram isotipados e titulados pelo método de ELISA. Os resultados mostraram que tanto o veneno total como a toxina isolada, mesmo após o processo de irradiação, se mostraram imunogênicos e os anticorpos produzidos reconheciam as formas nativas. Para a caracterização antigênica a técnica de Western Blot permitiu demonstrar que a Bthx-1 irradiada induziu à produção de anticorpos responsivos para ambas as formas da toxina isolada e do veneno total. Os resultados do ensaio de citotoxicidade mostram que a viabilidade dos macrófagos ensaiados com a Bthx-1 ou com o veneno total irradiados foi maior quando comparada com os resultados obtidos para as formas nativas. Analisando-se o resultado do ensaio de LDH, observou-se que a Bthx-1 irradiada promoveu menor dano muscular que a toxina nativa. Conclui-se que a irradiação de proteínas promove modificações estruturais significativas, mantendo, contudo, suas propriedades imunológicas originais, representando uma potencial ferramenta na melhoria do processo de imunização. / Ionizing radiation has been successfully employed to modify the immunological properties of biomolecules and has been proven to be a powerful tool to attenuate snake venoms toxicity without affecting and even increasing their immunogenic properties. Very promising results were obtained when crude animal venoms, as well as isolated toxins, were treated with 60Co gamma rays, yielding toxoids with good immunogenicity, however, little is known about the modifications that irradiated molecules undergo and even less about the immunological response that such antigens elicit. At the present work, we have evaluated the effects on immune system of B10.PL and BALB/c mice of Bothrops jararacussu crude venom and isolated bothropstoxin-1 (Bthx-1), before and after gamma radiation exposition. According to our data, irradiation process promoted structural modifications on both isolated toxin and crude venom, characterized by higher molecular weight protein (aggregates and oligomers) formation. Irradiated samples were immunogenic and the antibodies elicited by them were able to recognize the native toxin in ELISA. These results indicate that irradiation of toxic proteins can promote significant modifications in their structures, but still retain many of the original antigenic and immunological properties. Also, our data indicate that the irradiated protein induced higher titers of IgG2b, suggesting that Th1 cells were predominantly involved. Results from Western blot assay showed that antibodies raised against irradiated bothropstoxin-1 recognize both native isolated toxin or crude venom. Citotoxicity assay showed that irradiated toxin and crude venom were less toxic than their native counterpart. Thus, the viability of the macrophages cultured in the presence of irradiated Bthx-1 or crude venom was higher if compared with their native forms. LDH Assay showed that irradiated Bthx-1 promotes less muscular damage than the native form. Our data confirm a potential use of ionizing radiation for immunization process improvement.