Devido ao seu rápido crescimento, o feto é particularmente vulnerável a insultos e modificações no milieu hormonal. Este fato sugere que situações adversas experimentadas pela mãe grávida podem alterar o desenvolvimento e a saúde criança. Em vista das dificuldades metodológicas de se investigar o impacto do estresse pré-natal sobre o desenvolvimento e sobre o comportamento de crianças, muita da informação que se tem sobre este assunto advém de estudos conduzidos em animais de laboratório. Este foi o objeto desta tese, guardando-se sempre os devidos cuidados com as extrapolações. Mais especificamente, avaliamos os efeitos de um estresse pré-natal aplicado no terço final de gestação sobre o comportamento, sobre a atividade de neutrófilos sanguíneos e macrófagos peritoneais, sobre os níveis de corticosterona e testosterona séricos e sobre a neuroquímica de uma prole de camundongos Swiss, machos e fêmeas avaliados aos 30 dias de vida. Investigamos, também, os efeitos da naloxona (antagonista opioidérgico) e da metirapona (inibidor da síntese de corticosterona), aplicadas antes do estresse materno, sobre os parâmetros descritos acima. Os resultados obtidos mostraram que: 1) o estresse pré-natal aumentou a locomoção total dos machos avaliados em campo aberto; a naloxona aplicada antes do estresse preveniu este efeito; 2) o estresse pré-natal e a injeção de metirapona aumentaram os níveis de ansiedade da prole de machos e fêmeas; a aplicação de metirapona antes do estresse preveniu o aumento da ansiedade nas proles dos dois sexos; 3) a naloxona, seja sozinha ou associada ao estresse materno, diminuiu o burst oxidativo dos neutrófilos sanguíneos na prole de machos e fêmeas; a injeção somente de naloxona aumentou a capacidade de fagocitose destas células na prole de fêmeas. 4) o estresse pré-natal diminuiu a capacidade de fagocitose dos macrófagos peritoneais da prole de machos; o tratamento com naloxona antes do estresse preveniu este efeito; 5) o estresse pré-natal diminuiu o burst oxidativo e a fagocitose dos macrófagos peritoneais da prole das fêmeas; a injeção de naloxona antes do estresse gestacional evitou o aparecimento destas alterações; 6) o estresse pré-natal diminuiu os níveis séricos de corticosterona na prole de macho; a naloxona sozinha ou associada ao estresse e a metirapona sozinha aumentaram os níveis deste hormônio; 7) Na prole de fêmeas, o estresse pré-natal aumentou os níveis séricos de corticosterona; o tratamento com metirapona antes da exposição das fêmeas grávidas ao estresse preveniu esse efeito; 8) o estresse pré-natal aumentou o turnover de Nor nos machos e nas fêmeas; 9) o tratamento com naloxona aumentou o turnover de DA na prole de machos; 10) o tratamento com metirapona aumentou o turnover de DA na prole de machos e fêmeas. 11) o estresse pré-natal e os tratamentos com naloxona ou metirapona apresentaram efeitos diferentes em machos e de fêmeas. Em seu conjunto, os presentes resultados mostraram que o estresse pré-natal tem profundos efeitos sobre o desenvolvimento dos animais, podendo as alterações por ele induzidas perdurar até a idade adulta dos animais. Os resultados mostraram, também, que os efeitos do estresse pré-natal podem ser prevenidos quer pelo bloqueio do sistema opióide quer da liberação de corticosterona durante a administração do estímulo aversivo. Sugerimos que as alterações comportamentais e de imunidade inata encontradas neste trabalho estejam ligadas tanto às modificações induzidas pelo estresse no funcionamento do eixo HPA como ao aumento da atividade catecolaminérgica da prole tratada. Estes resultados foram discutidos à luz das interações entre os sistemas nervoso central e imune. / Due to its rapid growth, the fetus is particularly vulnerable to insults and the attendant changes in its hormonal milieu. This led to the suggestion that adverse life situations experienced by the pregnant mother can induce alterations in the fetal environment and result in deleterious effects on the rate of development and health of the child. In view of the considerable methodological difficulties in assessing the impact of the stress on human mothers, and evaluating its effects on the development and behavior of their children, much of our information about sequelae from gestational stress has been derived from studies in experimental animals. That was the objective of this study, taking into account the required grounds for reasonable comparisons. We particularly aimed the effects of prenatal stress applied from gestational day (GD) 15 to GD19 on behavior, immunological parameters, levels of corticosterone and testosterone and brain neurochemistry of male and female Swiss mice offspring, on post natal day 30. We also study the effects of naloxone (opioid antagonist) and of metyrapone (corticosterone synthesis inhibitor), both applied before prenatal stress, on parameters described above. The results of this work showed that: 1) prenatal stress increased total locomotion in males evaluated in an open field and naloxone treatment before stress prevented this effect; 2) prenatal stress and metyrapone injection increased anxiety levels of male and female offspring. Metyrapone injection before prenatal stress prevented this effect; 3) naloxone, alone or associated to prenatal stress, decreased oxidative burst of blood neutrophils in male and female pups. On the other hand, in female offspring naloxone alone increased blood neutrophil phagocytosis; 4) prenatal stress decreased phagocytosis of peritoneal macrophage and naloxone before stress prevented this effect; 5) prenatal stress decreased oxidative burst and phagocytosis of peritoneal macrophage in female pups and naloxone treatment before stress prevented this effect; 6) prenatal stress decreased corticosterone serum levels in male offspring and naloxone treatment, alone or associated to stress increased it. 7) In female pups, prenatal stress increased corticosterone serum levels and metyrapone before stress prevented this alteration; 8) gestational stress increased Nor turnover in male and female offspring; 9) naloxone increased DA turnover only in male offspring; 10) metyrapone treatment increased DA turnover in male and female offspring; 11) prenatal stress, naloxone or metyrapone treatment had different effects on male and female offspring. Altogether, these findings show that prenatal stress has relevant effects on animal development; these effects last until adulthood. The results also show that many of prenatal stress effects can be prevented by naloxone or metyrapone, and suggests that the opioid system and corticosterone are important for behavioral and immune modifications linked to prenatal stress. We postulate in this study that the changes observed might be driven by the alteration in the offspring HPA axis and cathecolaminergic activity. These results were discussed in the light of an interaction between the central nervous system and the immune system.

A paracoccidioidomicose (PCM) é uma infecção causada pelos fungos do gênero Paracoccidioides. A forma crônica é a mais comum e acomete principalmente os pulmões, mas pode se disseminar para outros órgãos produzindo lesões secundárias. Constitui-se uma doença de saúde pública com alto impacto econômico por comprometer a saúde dos trabalhadores durante sua fase produtiva, podendo chegar ao ponto de causar a sua morte. Essa doença é marcada por uma forte predileção pelo gênero masculino e essa diferença ocorre em virtude do 17β-estradiol exercer um efeito inibidor na transformação da forma de micélio em levedura. Os objetivos deste estudo foram avaliar a existência de receptores de estrógeno alfa (ER1) e receptores de progesterona (PR) em lesões orais da PCM crônica e procurar correlacionar com a quantidade de fungos e com o CD163 em homens e mulheres. Foram utilizados 32 fragmentos de biopsias da mucosa bucal de pacientes diagnosticados com a PCM, obtidos do Laboratório de Anatomopatologia da Unifal-MG e que foram submetidos à análise imuno-histoquímica pelos marcadores ER1, PR, Anti-Pb e CD163. Os resultados obtidos foram tabulados e realizou-se a análise estatística com os testes não paramétricos do coeficiente de correlação de Spearman e o Teste de Mann-Whitney, com um nível de significância de 5%. O ER1 foi expresso apenas em mulheres e, quando foi correlacionado com a quantidade de fungos, apresentou uma correlação positiva significativa (r= 0,6844, p= 0,0034). O PR foi expresso em ambos os gêneros, porém não apresentou correlação com a quantidade de fungo (p= 0,8343). A quantidade de fungos e a expressão do CD163 entre os gêneros não se mostraram significativas (respectivamente, p= 0,8802 e p= 0,9699). Os resultados indicaram que o ER1 pode ser mais expresso em mulheres e que a expressão deste hormônio está correlacionada positivamente com a quantidade de fungos. O PR foi expresso em ambos os gêneros e não mostrou nenhuma correlação com o ER1 e a quantidade de fungos. O CD163 não apresentou correlação com nenhum dos imunomarcadores. / Paracoccidioidomycosis (PCM) is an infection caused by fungi of the genus Paracoccidioides. The chronic form is the most common and affects mainly the lungs, but can spread to other organs producing secondary lesions. It constitutes a public health disease with high economic impact by compromising the health of workers during their most productive lifespan, and may even lead to their death. PCM is marked by a strong predilection for males and this difference occurs as a result of the 17 β-estradiol inhibitory effect on mycelium turns into the pathogenic form of the yeast. The objectives of the present study were to evaluate the immunostaining of estrogen receptors alpha (ER1) and progesterone receptor (PR) in oral lesions of chronic PCM and correlate with the amount of fungi and CD163 expression in men and women. Third-two fragments of oral mucous membrane biopsy of patients diagnosed with PCM were included in the study. The specimens were obtained from the Laboratory of Oral Pathology of Unifal-MG and were subjected to immunohistochemical analysis by markers ER1, PR, Pb and CD163. The results were tabulated and the statistical analysis was performed using the nonparametric tests Spearman correlation coefficient and the Mann-Whitney Test, with a significance level of 5%. The ER1 was found only in women. A significant positive correlation was observed between estrogen and amount of fungi (r = 0.6844, p = 0.0034). Regarding PR was expressed in both genders, but showed no correlation with the amount the fungi (p = 0.8343). Moreover, there was no difference between genders considering oral fungal cell number and CD163 immunostaining (p = 0.8802 and p = 0.9699, respectively). The results indicated that the ER1 may be more expressed in women and that the expression of this hormone is positively correlated with the amount of fungi. The PR was expressed in both genders and showed no correlation with the ER1 and the amount of fungi. The CD163 showed no correlation with any of the immunomarkers. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

Protozoários do gênero Acanthamoeba estão presentes nos mais variados ambientes, sendo esta a ameba mais isolada entre as amebas de vida livre (AVL). Acanthamoeba spp. pode causar encefalomielite e outras doenças graves em animais e seres humanos. Os fatores que contribuem para infecções por Acanthamoeba incluem biologia parasitária, diversidade genética, propagação no meio ambiente e suscetibilidade do hospedeiro. Acanthamoeba pode hospedar diversos microrganismos como: algas, bactérias, fungos, protozoários e vírus. Os estudos sobre as interações entre Acanthamoeba e microrganismos tem aumentado nos últimos anos, principalmente para entender como certas bactérias resistem à fagocitose de seus hospedeiros. Existem poucos estudos sobre adesão e a interação in vitro de Acanthamoeba com macrófagos, que são a primeira linha de defesa em doenças infecciosas. Neste trabalho foi proposto o isolamento de AVL do gênero Acanthamoeba de amostras clínicas de cães. Os resultados deste trabalho foram: 14 isolados de Acanthamoeba confirmados pela PCR, sendo o alvo o gene do 18S rDNA, de mucosa nasal e lesões cutâneas de 96 amostras coletadas de 48 cães. Destes, 13 isolados de Acanthamoeba foram sequenciados, o genótipo foi determinado e o potencial de patogenicidade em células VERO de 8 isolados foi avaliado. Os isolados eram pertencentes aos genótipos T3 (3 amostras), T4 (5 amostras), T5 (4 amostras) e T16 (1 amostra). Os 14 isolados de Acanthamoeba continham pelo menos uma espécie bacteriana internalizada e um isolado continha todas as espécies de endossimbiontes pesquisados. Observou-se que 79% dos isolados de Acanthamoeba hospedavam Legionella pneumophila, 50% Mycobacterium, 79% Pseudomonas e 57% Enterobacteriaceae. Os isolados de Acanthamoeba foram co-cultivados com macrófagos e observou-se à aderência em apenas 1h de contato, confirmando que Acanthamoeba é contato dependente. Este estudo descreveu os primeiros isolados de Acanthamoeba de amostras clínicas provenientes de cães. Também foi o primeiro relato da presença de endossimbiontes neste tipo de isolado realizado na América Latina. Neste estudo foi isolado pela primeira vez o genótipo T16 de amostra clínica. A importância deste estudo está no fato de verificar a presença de Acanthamoeba potencialmente patogênica em amostras clínicas de animais e pesquisar bactérias patogênicas internalizadas nestas amebas. Podendo estes microrganismos estar envolvidos em doenças infecciosas e futuras complicações como doenças graves em mamíferos. / Protozoa of the genus Acanthamoeba are present in diverse environments and are the most common free-living amoeba (FLA). Acanthamoeba spp. cause encephalitis and can cause severe illness in animals and humans. The factors that contribute to infections include Acanthamoeba parasite biology, genetic diversity, spreading in the environment and host susceptibility. Acanthamoeba may host various microorganisms such as algae, bacteria, fungi, protozoa and viruses. Studies regarding the interactions between Acanthamoeba and microorganisms have increased in recent years, mainly to understand how certain bacteria resist phagocytosis by their hosts. There are few studies on adherence and in vitro interaction of Acanthamoeba with macrophages, which are the first line of defense in infectious diseases. In this study, we proposed the isolation of the FLA Acanthamoeba from clinical samples from dogs. We found 14 Acanthamoeba isolates confirmed by PCR and by the 18S gene target rDNA in nasal mucosa and skin lesions out of 96 samples collected from 48 dogs. From this 14 isolates, 13 Acanthamoeba isolates were sequenced and the genotype was determined. Regarding the potential for pathogenicity in VERO cells, 8 isolates was assessed. The isolates belonged to genotype 3 (3 samples), T4 (5 samples), T5 (4 samples) and T16 (1 sample). The 14 isolates of Acanthamoeba contained at least one bacterial species internalized and one isolate contained all endosymbionts species studied. It was observed that 79% of isolates of Acanthamoeba carryng Legionella pneumophila, Mycobacterium 50%, 79% Pseudomonas and 57% Enterobacteriaceae. Acanthamoeba isolates were co-cultured with murine macrophages and adherence was observed in 1h of contact, confirming that Acanthamoeba interact with defense cells in a contact-dependent manner. This study describes the first clinical isolates of Acanthamoeba samples from dogs. It was also the first report of the presence of this type of endosymbionts isolated held in Latin America. As far as we know, this is the first study to isolate a T16 genotype amoeba from clinical sample. The importance of this study lies on the fact verify the presence of potentially pathogenic Acanthamoeba in samples from animals and search pathogenic bacteria internalized by these amoebae. These microorganisms may be involved in infectious diseases in mammals.

Devido ao seu rápido crescimento, o feto é particularmente vulnerável a insultos e modificações no milieu hormonal. Este fato sugere que situações adversas experimentadas pela mãe grávida podem alterar o desenvolvimento e a saúde criança. Em vista das dificuldades metodológicas de se investigar o impacto do estresse pré-natal sobre o desenvolvimento e sobre o comportamento de crianças, muita da informação que se tem sobre este assunto advém de estudos conduzidos em animais de laboratório. Este foi o objeto desta tese, guardando-se sempre os devidos cuidados com as extrapolações. Mais especificamente, avaliamos os efeitos de um estresse pré-natal aplicado no terço final de gestação sobre o comportamento, sobre a atividade de neutrófilos sanguíneos e macrófagos peritoneais, sobre os níveis de corticosterona e testosterona séricos e sobre a neuroquímica de uma prole de camundongos Swiss, machos e fêmeas avaliados aos 30 dias de vida. Investigamos, também, os efeitos da naloxona (antagonista opioidérgico) e da metirapona (inibidor da síntese de corticosterona), aplicadas antes do estresse materno, sobre os parâmetros descritos acima. Os resultados obtidos mostraram que: 1) o estresse pré-natal aumentou a locomoção total dos machos avaliados em campo aberto; a naloxona aplicada antes do estresse preveniu este efeito; 2) o estresse pré-natal e a injeção de metirapona aumentaram os níveis de ansiedade da prole de machos e fêmeas; a aplicação de metirapona antes do estresse preveniu o aumento da ansiedade nas proles dos dois sexos; 3) a naloxona, seja sozinha ou associada ao estresse materno, diminuiu o burst oxidativo dos neutrófilos sanguíneos na prole de machos e fêmeas; a injeção somente de naloxona aumentou a capacidade de fagocitose destas células na prole de fêmeas. 4) o estresse pré-natal diminuiu a capacidade de fagocitose dos macrófagos peritoneais da prole de machos; o tratamento com naloxona antes do estresse preveniu este efeito; 5) o estresse pré-natal diminuiu o burst oxidativo e a fagocitose dos macrófagos peritoneais da prole das fêmeas; a injeção de naloxona antes do estresse gestacional evitou o aparecimento destas alterações; 6) o estresse pré-natal diminuiu os níveis séricos de corticosterona na prole de macho; a naloxona sozinha ou associada ao estresse e a metirapona sozinha aumentaram os níveis deste hormônio; 7) Na prole de fêmeas, o estresse pré-natal aumentou os níveis séricos de corticosterona; o tratamento com metirapona antes da exposição das fêmeas grávidas ao estresse preveniu esse efeito; 8) o estresse pré-natal aumentou o turnover de Nor nos machos e nas fêmeas; 9) o tratamento com naloxona aumentou o turnover de DA na prole de machos; 10) o tratamento com metirapona aumentou o turnover de DA na prole de machos e fêmeas. 11) o estresse pré-natal e os tratamentos com naloxona ou metirapona apresentaram efeitos diferentes em machos e de fêmeas. Em seu conjunto, os presentes resultados mostraram que o estresse pré-natal tem profundos efeitos sobre o desenvolvimento dos animais, podendo as alterações por ele induzidas perdurar até a idade adulta dos animais. Os resultados mostraram, também, que os efeitos do estresse pré-natal podem ser prevenidos quer pelo bloqueio do sistema opióide quer da liberação de corticosterona durante a administração do estímulo aversivo. Sugerimos que as alterações comportamentais e de imunidade inata encontradas neste trabalho estejam ligadas tanto às modificações induzidas pelo estresse no funcionamento do eixo HPA como ao aumento da atividade catecolaminérgica da prole tratada. Estes resultados foram discutidos à luz das interações entre os sistemas nervoso central e imune. / Due to its rapid growth, the fetus is particularly vulnerable to insults and the attendant changes in its hormonal milieu. This led to the suggestion that adverse life situations experienced by the pregnant mother can induce alterations in the fetal environment and result in deleterious effects on the rate of development and health of the child. In view of the considerable methodological difficulties in assessing the impact of the stress on human mothers, and evaluating its effects on the development and behavior of their children, much of our information about sequelae from gestational stress has been derived from studies in experimental animals. That was the objective of this study, taking into account the required grounds for reasonable comparisons. We particularly aimed the effects of prenatal stress applied from gestational day (GD) 15 to GD19 on behavior, immunological parameters, levels of corticosterone and testosterone and brain neurochemistry of male and female Swiss mice offspring, on post natal day 30. We also study the effects of naloxone (opioid antagonist) and of metyrapone (corticosterone synthesis inhibitor), both applied before prenatal stress, on parameters described above. The results of this work showed that: 1) prenatal stress increased total locomotion in males evaluated in an open field and naloxone treatment before stress prevented this effect; 2) prenatal stress and metyrapone injection increased anxiety levels of male and female offspring. Metyrapone injection before prenatal stress prevented this effect; 3) naloxone, alone or associated to prenatal stress, decreased oxidative burst of blood neutrophils in male and female pups. On the other hand, in female offspring naloxone alone increased blood neutrophil phagocytosis; 4) prenatal stress decreased phagocytosis of peritoneal macrophage and naloxone before stress prevented this effect; 5) prenatal stress decreased oxidative burst and phagocytosis of peritoneal macrophage in female pups and naloxone treatment before stress prevented this effect; 6) prenatal stress decreased corticosterone serum levels in male offspring and naloxone treatment, alone or associated to stress increased it. 7) In female pups, prenatal stress increased corticosterone serum levels and metyrapone before stress prevented this alteration; 8) gestational stress increased Nor turnover in male and female offspring; 9) naloxone increased DA turnover only in male offspring; 10) metyrapone treatment increased DA turnover in male and female offspring; 11) prenatal stress, naloxone or metyrapone treatment had different effects on male and female offspring. Altogether, these findings show that prenatal stress has relevant effects on animal development; these effects last until adulthood. The results also show that many of prenatal stress effects can be prevented by naloxone or metyrapone, and suggests that the opioid system and corticosterone are important for behavioral and immune modifications linked to prenatal stress. We postulate in this study that the changes observed might be driven by the alteration in the offspring HPA axis and cathecolaminergic activity. These results were discussed in the light of an interaction between the central nervous system and the immune system.

Padrões moleculares associados à patógenos (PAMPs) e citocinas pró-inflamatórias ativam o Eixo Imune-Pineal promovendo uma alternância temporária da síntese de melatonina da glândula pineal para células imuno-competentes. Esta regulação é mediada pela ativação do fator de transcrição factor nuclear kappa B (NF-&kappa;B), que de acordo com contexto fisiológico controla a transcrição do gene que codifica a enzima-chave na síntese de melatonina (arilalquilamina-N-acetiltransferase, AA-NAT), e altera a função da melatonina de cronobiótica a reguladora de respostas inflamatórias. Nosso objetivo foi investigar se a poluição do ar, um importante fator inflamatório ambiental é capaz de acionar o Eixo Imune-Pineal. Investigamos o efeito de partículas concentradas finas (<2,5 &mu;m) na síntese de melatonina noturna em ratos, e o efeito de partículas isoladas derivadas diesel (DEP) na síntese de melatonina por células RAW 264.7 e macrófagos pulmonares. A exposição ao PM aumentou a translocação nuclear de NF-&kappa;B e reduziu a expressão pineal de AA-NAT e a concentração de melatonina plasma. Em contraste, a DEP leva a uma translocação transitória de NF-&kappa;B em macrófagos resultando na expressão de AA-NAT e a síntese da melatonina. Nós confirmamos que a ativação de elementos kappa B no gene Aa-nat foi responsável por sua transcrição. Em conclusão, a poluição do ar, o que pode ser considerado um agente de sinalização de perigo, ativa o eixo imune-pineal, reduzindo a síntese da melatonina pineal noturno, e ativando a produção de melatonina por macrófagos. / Pathogen-associated molecular patterns (PAMPs) and pró-inflammatory cytokines activate the Immune-Pineal Axis promoting a temporary shift of melatonin synthesis from the pineal gland to immune-competent cells .This shift is mediated by the activation of the transcription factor nuclear factor kappa B (NF-&kappa;B ), which according to the cell milieu inhibits or induces the transcription of the gene that codifies the key enzyme in melatonin synthesis (arylalkylamine-N-acetyltransferase, AA-NAT), and alters melatonin function from chronobiotic to a regulator of inflammatory responses Our aim is to investigate whether air pollution, an important environmental danger-associated molecular pattern, triggers the immune-pineal axis. We investigated the effect of urban fine concentrated particulate matter (PM2.5, <2.5 mm) on the nocturnal melatonin synthesis in rats, and the effect of isolated derived diesel particles (DEP) on melatonin synthesis by RAW 264.7 cells, a model for studying macrophages. PM exposition increased nuclear translocation of NF-&kappa;B and reduced the pineal expression of AA-NAT and plasma melatonin concentration. In contrast, DEP leads to a transient translocation of NF-&kappa;B in RAW 274.6 cells resulting in the expression of AA-NAT and the synthesis of melatonin. We confirmed that the activation of &kappa;B elements in Aa-nat gene was responsible for its transcription. In conclusion, air pollution, which can be considered a danger-signalizing agent, activates the immune-pineal axis, reducing nocturnal pineal melatonin synthesis, and activating the production of melatonin by macrophages.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:31Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-01-20Bitstream added on 2014-06-13T18:40:48Z : No. of bitstreams: 1 goncalves_a_dr_jabo.pdf: 482879 bytes, checksum: 0e902aebca008cecff34c13a46883198 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / Este trabalho avaliou o efeito de dietas contendo probiótico e espirulina sobre a formação de macrófagos, variáveis hematológicas e bioquímicas em tambaqui Colossoma macropomum jovens mantidos em duas densidades de estocagem. Previamente foi conduzido por três meses com três dietas alimentares - grupo controle, probiótico e espirulina; utilizando três caixas de água com capacidade de 500 L em sistema aberto de produção com renovação de água e filtragem biológica. Posteriormente, o experimento teve a duração de 12 dias, utilizando 36 caixas plásticas com capacidade de 50 L, com aeração e renovação de água constantes. O delineamento experimental foi inteiramente casualizado em um esquema fatorial 3 x 2 x 2 (dietas x densidade de estocagem x lamínulas), totalizando em 12 tratamentos, onde cada tratamento apresentava um grupo com peixes implantados lamínulas (I) e outro grupo com peixes sem implantes de lamínulas (S), apresentando três repetições cada, sendo: T1 – ração controle com densidade 5 kg/m3 com (I) e (S); T2 – 1g probiótico/kg ração com densidade 5 kg/m3 com (I) e (S); T3 – 5g espirulina/kg ração com densidade 5 kg/m3 com (I) e (S); T4 – ração controle com densidade 20 kg/m3 com (I) e (S); T5 – 1g probiótico/kg ração com densidade 20 kg/m3 com (I) e (S); T6 – 5g espirulina/kg ração com densidade 20 kg/m3 com (I) e (S). Foram coletados dois indivíduos por tratamento, nos intervalos de 0, 3, 7, 10 e 12 dias experimentais para avaliação das variáveis hematológicas, bioquímicas e contagem dos núcleos das células gigantes. Os resultados mostraram que a suplementação da dieta de tambaqui com probiótico ou espirulina não causaram alterações nos valores hematológicos, bioquímicos e na formação de célula gigante. Contudo, ocorreu maior... / The aim of this experiment was to evaluate the effect of diets contend probiotic and spirulina on small glass blades implanted, hematological and biochemistry parameters of tambaqui, Colossoma macropomum, juveniles, submitted the two different stockage density. The pay-experimental period was lead by three months with three alimentary diets – control group I, group contend probiotic in diet and group contend spirulina in diet; three boxes were used in a 500 L water capacity, in open system of production with water renewal and biological filtering. After, the experiment had the duration of twelve days; thirty six plastic boxes were used in a 50 L, with aeration and constant water renewal. The experimental design was a factorial design - 3 x 2 x 2 (diets x stockage density x small glass blades), totalizing in twelve treatments, presented a group with small glass blades implanted fish (I) and another group with fish without implantations of small glass blades (S), with three repetitions each, being: T1 - ration has controlled in density 5 kg/m3 with (I) and (S); T2 - ration contend 1g probiotic/kg in density 5 kg/m3 with (I) and (S); T3 - ration contend 5g spirulina/kg in density 5 kg/m3 with (I) and (S); T4 - ration has controlled in density 20 kg/m3 with (I) and (S); T5 - ration contend 1g probiotic/kg in density 20 kg/m3 with (I) and (S); T6 – ration contend 5g spirulina/kg in density 20 kg/m3 with (I) and (S). Were collected two fish for treatment, in the intervals of 0, 3, 7, 10 and 12 experimental days for evaluation of the hematological and biochemistry parameters, and counting of giant cells nucleus. The results had shown that the diet supplemented of with probiotic and spirulina had not caused alterations in the hematological and biochemistry parameters and in the formation of giant cell o tambaqui. However... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Luciane Dias de Oliveira / Co-orientadora : Mariella Vieira Pereira Leão / Banca: Ana Paula Candido Santos / Banca: Michelle Cardoso de Sousa / Banca: Graziella Nuernberg Back Brito / Banca: Estela Kaminagakura Tango / Resumo: Muitos produtos probióticos são compostos pela associação de lactobacilos no intuito de potencializar seu efeito benéfico. Assim, o objetivo deste estudo foi avaliar a imunomodulação e atividade anti-Candida causada por diferentes combinações de suspensões probióticas em macrófagos e em Galleria mellonella. Lactobacillus rhamnosus (LR), L. acidophilus (LA), e L. paracasei (LP) foram suspendidos para obtenção das suspensões LR, LA, LP, LR+LA, LR+LP, LA+LP e LR+LA+LP. Foram utilizadas suspensões de Candida albicans (CA) ATCC 18804, C. krusei (CK) ATCC 6258 e C. glabrata (CG) ATCC 9030. Macrófagos de camundongo (RAW 264.7) foram ativados por cada suspensão de lactobacilos e desafiados por cada uma das cepas fúngicas. Foram investigadas taxa de fagocitose, produção de citocinas e óxido nítrico e a viabilidade celular. A melhor suspensão probiótica para cada cepa fúngica seria usada nos testes in vivo, com G. mellonella, no entanto, devido à baixa virulência das espécies não-albicans, os testes in vivo prosseguiram com CA e LR. Duas cepas clínicas de CA foram acrescentadas: 21 e 60. Suspensões de LR foram injetadas na hemolinfa das larvas 24 h antes do desafio com as cepas fúngicas. Foram determinadas curva de sobrevivência, contagem de UFC/mL das cepas de C. albicans e de hemócitos. Os resultados foram analisados estatisticamente de acordo com a distribuição normal (ANOVA e Tukey ou Kruskal-Wallis e Dunn) e a curva de sobrevivência pelo teste de Log-rank (Mantel-Cox), p<0,05. As ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Many probiotic products are composed by association of lactobacilli in order to potentiate their beneficial effect. Therefore, the objective of this study was evaluating the immunomodulation and anti-Candida activity caused by different combinations of probiotic suspensions in macrophages and in Galleria mellonella. Lactobacillus rhamnosus (LR), L. acidophilus (LA) and L. paracasei (LP) were suspended to obtain the suspensions LR, LA, LP, LR + LA, LR + LP, LA + LP and LR + LA + LP. Suspensions of Candida albicans (CA) ATCC 18804, C. krusei (CK) ATCC 6258 and C. glabrata (CG) ATCC 9030 were used. Mouse macrophages (RAW 264.7) were activated by each suspension of lactobacilli and then challenged by each fungal strain. Phagocytosis, cytokine and nitric oxide production and cell viability were investigated. The best lacobacilli suspension for each fungal strain would be used in the in vivo assays with G. mellonella, however, because of low virulence of the non-albicans species, in vivo tests were performed with CA and LR. Two clinical strains of CA were added: 21 and 60. LR suspensions were injected into the haemolymph of the larvae 24 h before challenging with fungal strains. Survival curve, CA strains CFU/mL counting and hemocytes were determined. The results were statistically analyzed according to their normal distribution (ANOVA and Tukey or Kruskal-Wallis and Dunn) and the survival curve by Log-rank test (MantelCox), p <0.05. The best suspensions for CA, CK and CG were LR (which obtained the best results in the cytokine profile), LP and LA (which obtained the best results on phagocytosis), respectively. In G. mellonella, LR suspension increased percentage survival and hemocyte counting and decreased CFU/mL counting in all groups, with statistically significant differences in the results. Thus, it can be concluded that the suspensions of lactobacilli have ...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Doutor

Orientador: Iracilda Zeppone Carlos / Banca: Antonio Eduardo Mauro / Banca: Denise Fecchio / Resumo: O câncer, manifestação originada pelo crescimento descontrolado de células, afeta milhões de indivíduos. Os macrófagos são as primeiras células a serem ativadas para participar de uma resposta imunológica propriamente dita, são células capazes de secretar mais de cem produtos biologicamente ativos, entre esses, espécies reativas de nitrogênio e citocinas que atuam no contexto da resposta imunológica e/ou inflamatória. Sabendo que compostos de paládio (II) podem apresentar potenciais atividades anti - tumorais, neste trabalho foram testado os compostos de fórmula geral [Pd(dmba)(Cl)tu] e [Pd(dmba)(N3)tu], nos quais dmba = N,N-dimetilbenzilamina e tu = tiouréia quanto a atividade antiinflamatória, antitumoral e mutagênica dos mesmos.Como droga padrão das reações realizadas foi utilizada a cis-platina. Foi determinada a ação destes compostos frente ao sistema imunológico através, de ensaios de determinação de citotoxicidade mediano (IC50) pela técnica de MTT, óxido nítrico (NO), peróxido de hidrogênio (H2O2), determinação das citocinas IL-1, IL-6, IL-12, TNF-α e IL-10. Além disso, foi determinado a atividade antitumoral dos compostos frente à célula tumoral de Ehrlich, assim como a atividade mutagênica pelo teste de Ames e Ensaio com plasmídio pUC 9.1. Os resultados mostraram produção de NO e das citocinas IL-1, IL-6, IL-12 e TNF-α; moderada produção de H2O2 pelos macrófagos peritoneais de animais normais e animais portadores do tumor de Ehrlich na sua forma sólida, estimulados com os compostos e seus ligantes, assim como a cis-platina. Por outro lado, de maneira contrária às outras citocinas testadas, não houve a produção de IL-10. No que se refere à atividade antitumoral dos compostos testados, estes mostraram efeito citotóxico sobre a linhagen tumoral testada. Com relação à atividade mutagênica, os compostos... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The cancer, manifestation originated by the growth not controlled of cells, affects million of individuals. Macrophages are the first cells to be activated to participate in an immune response itself, are cells to able to secreting more than one hundred biologically active products, among these, reactive nitrogen species and cytokines that act in the context of the immune response and / or inflammatory. Knowing that compounds of palladium (II) can be potential activities anti - tumor in this study was tested compounds of general formula [Pd (Pd) (Cl) tu] and [Pd (Pd) (N3) tu], where Pd = N, N-dimetilbenzilamina and tu = thiourea as the anti-inflammatory, antitumor and mutagenic of the same. As standard was used the cis-platinum. We determining the action of these compounds against the immune system, for tests to determine the median cytotoxicity (IC50) by the MTT technique, nitric oxide (NO), hydrogen peroxide (H2O2), determination of IL-1, IL-6 , IL-12, TNF-α and IL-10. Moreover, it was determined the antitumor activity of compounds against the Ehrlich tumor cell, as well as mutagenic by the Ames test and test with plasmid pUC 9.1. The results showed NO production and the IL-1, IL-6, IL-12 and TNF-α, by peritoneal macrophages from normal animals and animals with Ehrlich tumor in solid form was stimulated by the compounds and their ligands as well as cis-platinum. Moreover, in contrary manner to other cytokines tested, there wasn't production of IL-10, and H2O2. With regard to the antitumor activity of the compounds tested, these showed cytotoxic effect on tumor lineage tested. With respect to mutagenic activity, compounds and ligands weren't mutagenic in vitro, unlike cis-platinum was shown to be mutagenic, causing mutations in the DNA of Salmonella typhimurium by the Ames test. The compounds and ligants were not also to induce DNA breaks in the plasmid... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandar@gmail.com) on 2013-08-13T18:18:32Z No. of bitstreams: 1 Tese_ICS_Angela Giudice Diniz.pdf: 1118441 bytes, checksum: a3651deda168fee418b2f5acb8f9b6a9 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-08-13T18:18:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_ICS_Angela Giudice Diniz.pdf: 1118441 bytes, checksum: a3651deda168fee418b2f5acb8f9b6a9 (MD5) / NIH Grant AI30639;Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq);Universal 472198/2009-2. / Introdução: Na leishmaniose cutânea (LC) e mucosa (LM) causadas por Leishmania braziliensis, a patologia está associada com a produção exacerbada de citocinas pró-inflamatórias. Cerca de 10% dos indivíduos residentes em Corte de Pedra- BA, uma área de transmissão de L. Braziliensis apresentam reação de hipersensibilidade tardia ao antígeno de Leishmania, não apresentam evidências de doença clínica e são considerados como tendo uma forma subclínica (SC) da doença. linfócitos desses indivíduos não produzem ou apresentam uma produção menor de IFN- e TNF- quando comparados a pacientes com LC. Até o momento não está claro porque esses indivíduos têm a capacidade de controlar a doença. Como a erradicação do parasito ou a ocorrência de formas assintomáticas da infecção não podem ser explicadas pela ação efetiva da resposta imune adaptativa, é necessário um maior aprofundamento do conhecimento do papel da resposta imune inata no controle da infecção. Os macrófagos são as principais células que abrigam a Leishmania e consequentemente a sobrevivência ou morte desse parasito depende da ativação dessas células, da produção de oxidantes e de moléculas inflamatórias. Todavia na LC e na LM os parasitos não são totalmente destruídos e uma constante ativação macrofágica pode vir a contribuir para a reação inflamatória e patogênese da doença. Objetivo: Avaliar o papel dos monócitos /macrófagos na imunopatogênese da leishmaniose tegumentar. Metodologia: Macrófagos de pacientes com LC, LM e indivíduos SC foram infectados in vitro com L. braziliensis e avaliados quanto à suscetibilidade a infecção por Leishmania e a capacidade de matar o parasito. No sobrenadante dos macrófagos infectados foram avaliadas as produções de óxido nítrico (NO), superóxido (O2-) pelo reagente de Griess, quimiocinas e TNF-α por teste imunoenzimático. Foram também avaliadas a frequência de monócitos inflamatórios (CD14+CD16+), assim como a caracterização fenotípica dessas células por citometria de fluxo nos diferentes grupos estudados. Resultados: Após a exposição a L. braziliensis, macrófagos de indivíduos SC apresentaram uma diminuição significante na percentagem de células infectadas e no número de amastigotas por 100 macrófagos em comparação com as células de pacientes com LC e LM. A produção de NO e O2- foi detectada, mas não houve variação significante entre os diferentes grupos. A produção de quimiocinas e de TNF-α foi maior em pacientes com LC e LM quando comparado com a do grupo SC. A frequência de monócitos CD14+CD16+ foi maior em doentes com LC em comparação com indivíduos SC. Conclusão: Nossos dados sugerem que monócitos/macrófagos desempenham um papel importante no controle da infecção por L. braziliensis e na patologia da leishmaniose tegumentar. / Salvador

PINTO, A. C. M. D. Efeito anti-inflamatório e imunomodulador de componentes de ascaris suum em artrite experimental, 2017.118 f.Tese (Doutorado em Ciências Médicas) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2017 / Submitted by Ivone Sousa (ppgcm.ufc@gmail.com) on 2017-07-21T13:27:56Z No. of bitstreams: 1 2017_tese_acmdpinto.pdf: 10927136 bytes, checksum: 4648aa6dab4dc5fb388eac8229d92bb9 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-07-21T15:51:59Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_tese_acmdpinto.pdf: 10927136 bytes, checksum: 4648aa6dab4dc5fb388eac8229d92bb9 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-21T15:51:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_tese_acmdpinto.pdf: 10927136 bytes, checksum: 4648aa6dab4dc5fb388eac8229d92bb9 (MD5) Previous issue date: 2017-07-10 / Rheumatoid arthritis (RA) is a chronic autoimmune inflammatory disease with multifactorial etiopathogenesis, involving genetic, immunological and environmental mechanisms, whose diagnosis and delayed treatment have a negative influence on the prevalence and severity of the disease. Therefore, patients residing in low-income countries should show increased morbidity and / or mortality from these diseases. Interestingly, the evolution seems to be similar, if not less severe, to that found in populations with better socioeconomic indexes. The hygienic hypothesis suggests an inverse relationship between the global distribution of autoimmune diseases and parasitic infections, where helminths tend to stimulate the development of Th2 responses and suppress Th-1 and Th-17 responses. The aim of this study was to isolate components in Ascaris suum extract and characterize its anti-inflammatory mechanism in experimental arthritis models. Ascaris suum crude extract was separated into fractions > 30 and <30 kDa. Four smaller fractions (1-4) were obtained, in the fraction <30 kDa, by native electrophoresis. In fraction 1, the ABA-1 protein was identified by mass spectrometry and after protein digestion with trypsin, seven peptides were isolated (Aba-AG). The genomic sequence of the Aba-B and Aba-F peptides was inserted into a commercial plasmid (VR2 -001-TOPO ™). Plasmids were cloned and expanded in E. coli and extraction of plasmid DNA was performed by commercial kit (Qiagen ™). Male Swiss mice received crude extract of A. suum (1mg), > 30kDa, <30kDa (50ng) or fractions 1, 2, 3 and 4 (1μL), diluted in sterile saline (200 μL), p.o., 30min before of the injection of Zy (0.1mg) i.a. Hypernociception was evaluated by the electronic von Frey and the cellular influx was evaluated in the joint fluid 6h or seven days after zymosan i.a. Swiss and Balb/c male mice, submitted to ZyA and AIA, respectively, received recombinant plasmids of Aba-B or Aba-F (50μg/30μL) at the back of each hind leg. The cell influx was evaluated 6h or seven days (ZyA) and 7h or 14 days (AIA) after the i.a stimulus. Cytokines were evaluated in the synovial fluid. Synovitis and joint damage were evaluated by H&E and safranin O, respectively, and mast cell by toluidine blue. Levels of cytokines (CXCL-1, IL-1β, IFN-γ, IL- 5, IL-6 and IL-10) were assessed by ELISA and the expression of iNOS, CD11b, F4/80 and CD206 by immunohistochemistry. The administration of fractions <30 kDa, 1 and 4 reduced hypernociception and acute and chronic cellular influx in the ZyA model. Transfection with both plasmids, Aba-B or F, significantly reduced the influx of cells in both the zymosan and acute and chronic mBSA arthritis models. Reduction of synovitis, mast cell numbers, joint damage and iNOS expression were observed. Levels of CXCL1, IFN-γ, IL-1β and IL-6 were reduced. However, IL-10 levels did not increase. Surprisingly, IL-5 levels were significantly reduced after plasmid injection. Plasmids increased the expression of M2 macrophages in the synovium. A qPCR analysis showed the expression of peptides in the thigh muscles of mice that received the plasmids. This is the first demonstration that peptide sequences derived from A. suum promote anti-inflammatory activity in arthritis models, and that it is associated with reduced release of inflammatory cytokines. Peptides promoted a change in the differentiation of macrophages in the synovial membrane at the same time, decreasing the release of IL-5. Despite the complex modulating mechanisms of helminths of inflammation, the data still support a protective effect of helminth products in chronic arthritis. / A artrite reumatoide (AR) é uma doença inflamatória autoimune crônica com etiopatogenia multifatorial, envolvendo mecanismos genéticos, imunológicos e ambientais, cujo diagnóstico e tratamento tardio influenciam negativamente na prevalência e gravidade da doença. Portanto, pacientes que residem em países com baixa renda deveriam apresentar um aumento da morbidade e / ou mortalidade por essas doenças. Curiosamente, a evolução parece ser semelhante, se não menos grave, à encontrada em populações com melhores índices socioeconômicos. A hipótese higiênica sugere relação inversa entre a distribuição global de doenças autoimunes e infecções parasitárias, onde helmintos tendem a estimular o desenvolvimento de respostas Th2, além de suprimir respostas Th-1 e Th-17. O objetivo deste estudo foi isolar componentes no extrato de Ascaris suum e caracterizar seu mecanismo antiinflamatório em modelos de artrite experimental. O extrato bruto de Ascaris suum foi separado em frações > 30 e <30 kDa. Foram obtidas quatro frações menores (1-4), na fração <30 kDa, por eletroforese nativa. Na fração 1, foi identificada a proteína ABA-1, por espectrometria de massa, e após digestão proteica com tripsina, sete peptídeos foram isolados (Aba-A – G). A sequência genômica dos peptídeos de Aba-B e Aba-F foi inserida em um plasmídeo comercial (VR2-001-TOPO ™). Os plasmídeos foram clonados e expandidos em E. coli e a extração do DNA plasmidial foi realizada por kit comercial (Qiagen™). Camundongos Swiss machos receberam extrato bruto de A. suum (1mg), >30 kDa , <30kDa (50ng) ou frações 1, 2, 3 e 4 (1μL), diluídos em salina estéril (200 μL), v.o., 30 min antes da injeção de Zy (0,1mg) i.a. Hipernocicepção foi avaliada pelo von Frey eletrônico e o influxo celular foi avaliado no fluido articular 6h ou sete dias após zymosan i.a. Camundongos Swiss e Balb/c machos, submetidos a artrite induzida por zymosan AZy e induzida por antígeno (AIA), respectivamente, receberam plasmídeos recombinantes de Aba-B ou Aba-F (50μg/30μL) na parte posterior de cada coxa traseira. O influxo celular foi avaliado 6h ou sete dias (AZy) e 7h ou 14 dias (AIA) após o estímulo i.a. Citocinas foram avaliadas no líquido sinovial. Sinovite e dano articular foram avaliados por H&E e safranina O, respectivamente, e número de mastócitos por azul de toluidina. Níveis de citocinas (CXCL-1, IL-1β, IFN-γ, IL-5, IL-6 e IL-10) foram avaliadaos por ELISA e a expressão de iNOS, CD11b, F4/80 e CD206 por imunohistoquímica. A administração das frações <30 kDa, 1 e 4 reduziu a hipernocicepção e influxo celular agudo e crônico no modelo de AZy. A transfecção com ambos os plasmídeos, Aba-B ou F, reduziu significativamente o influxo de células em ambos os modelos de artrite por zymosan e mBSA agudo e crônico. Foram observados a redução da sinovite, número de mastócitos, do dano articular e expressão de iNOS. Níveis de CXCL1, IFN-γ, IL-1β e IL-6 foram reduzidos. No entanto, os níveis de IL-10 não aumentaram. Surpreendentemente, os níveis de IL-5 foram significativamente reduzidos após a injeção de plasmídeos. Plasmídeos aumentaram a expressão de macrófagos M2 na sinóvia. Uma análise quantitativa por PCR mostrou a expressão de peptídeos Aba-B e Aba-F nos músculos da coxa de camundongos que receberam os plasmídeos. Esta é a primeira demonstração de que sequências peptídicas derivadas de A. suum promovem a atividade anti-inflamatória em modelos de artrite, e que está associada à redução da liberação de citocinas inflamatórias. Esses peptídeos promoveram mudança na diferenciação de macrófagos na membrana sinovial ao mesmo tempo, diminuindo a liberação de IL-5. Apesar dos complexos mecanismos de modulação de helmintos de inflamação, os dados suportam ainda um efeito protetor dos produtos de helmintos em modelos de artrite crônica.