O exercício físico regular contribui para prevenção e redução da aterosclerose, em grande parte, por melhorar o perfil lipídico e o transporte reverso de colesterol (TRC). O TRC é um sistema antiaterogênico que promove a remoção do excesso de colesterol de macrófagos pelas apo A-I e HDL e seu transporte ao fígado, com eliminação de colesterol na bile e fezes. Em camundongos selvagens e transgênicos para proteína de transferência de colesterol esterificado (CETP-tg), o treinamento físico aumentou a transferência de colesterol radioativo de macrófagos para o plasma, fígado e fezes e o conteúdo dos receptores B-E e SR-BI no fígado. Em leucócitos, hepatócitos e enterócitos, o exercício físico aumentou a expressão do receptor de HDL, ABCA-1. Entretanto, não é claro se o exercício físico modula o fluxo de lípides em macrófagos, o que seria determinante para a primeira etapa do TRC. Assim sendo, avaliou-se, em camundongos selvagens e CETP-tg, o efeito do treinamento físico aeróbio sobre: 1) a expressão de genes envolvidos no fluxo de lípides, modulação da resposta inflamatória, vasodilatadora e antioxidante: Pparg (PPAR?), Nr1h3 (LXRalfa), Nr1h2 (LXRbeta), Abca1 (ABCA-1), Abcg1 (ABCG-1), Scarb1 (SR-BI), Cd36 (CD-36), Olr1 (LOX-1), Ccl2 (MCP-1), Tnf (TNFalfa), Il6 (IL-6), Il10 (IL10), Nos3 (eNOS) e Cat (Catalase) na parede arterial e em macrófagos peritoneais; 2) o efluxo de 14C-colesterol de macrófagos peritoneais para HDL2 e apo A-I e 3) a captação de 3H-colesteril oleoil éter-LDL (3H-COE-LDL) acetilada por macrófagos peritoneais. Camundongos machos com 12 semanas de idade, recebendo dieta padrão e água ad libitum, foram aleatoriamente divididos em grupo sedentário e treinado. O treinamento físico foi realizado em esteira, 15m/min, 30 min/dia, 5 vezes/semana, durante 6 semanas. Arco aórtico e macrófagos da cavidade peritoneal foram isolados dos animais sedentários e treinados, imediatamente (0 h) e após 48 h da última sessão de exercício. A expressão de genes foi avaliada por RT-PCR e o efluxo de colesterol, por meio da sobrecarga de macrófagos peritoneais com LDL acetilada e 14C-colesterol, seguindo-se incubação com apo A-I ou HDL2. A captação de LDL foi determinada pela incubação de macrófagos com 3H-COE-LDL acetilada. Não foram observadas alterações sistemáticas na expressão de genes envolvidos no fluxo de lípides em macrófagos e na aorta comparando-se animais sedentários e treinados, selvagens ou CETP-tg. De modo semelhante, não houve diferença no efluxo de colesterol celular e na captação de LDL. Em conclusão, não foram evidenciadas alterações em macrófagos peritoneais e na parede arterial frente ao treinamento físico aeróbio que possam contribuir para o TRC em modelo experimental de camundongos não dislipidêmicos, sem intervenção farmacológica ou alimentar. Sendo assim, o efeito do treinamento físico na melhora do transporte reverso de colesterol, observado em estudos anteriores, deve ser consequente à sua ação sistêmica sobre mediadores deste transporte e expressão de receptores no fígado e intestino / Regular physical exercise prevents and reduces atherosclerosis mainly by improving lipid profile and reverse cholesterol transport (RCT). RCT is an antiatherogenic system that promotes excess cholesterol removal from macrophages by apo A-I and HDL and its transport to the liver. Then, cholesterol can be secreted into bile and excreted in feces. In wild type and cholesteryl ester transfer protein transgenic (CETP-tg) mice exercise training increased the transfer of 14C-cholesterol from macrophages to plasma, liver and feces and elevated SR-BI and B-E receptor content in the liver. In leucocytes, hepatocytes and enterocytes, physical exercise increased mRNA of HDL receptor, ABCA-1. Nonetheless, it is not clear if exercise can modulate lipid flux in macrophages that can be important for the first phase of the RCT. It was analyzed in wild type and CETP-tg mice the effect of aerobic exercise training in: 1) the expression of genes involved in lipid flux, inflammation, oxidation and vasodilation: Pparg (PPAR?), Nr1h3 (LXRalfa), Nr1h2 (LXRbeta), Abca1 (ABCA-1), Abcg1 (ABCG-1), Scarb1 (SR-BI), Cd36 (CD-36), Olr1 (LOX-1), Ccl2 (MCP-1), Tnf (TNFalfa), Il6 (IL-6), Il10 (IL10), Nos3 (eNOS) and Cat (Catalase) in arterial wall and peritoneal macrophages; 2) the apo A-I and HDL2-mediated cholesterol efflux from macrophages and 3) the uptake of 3H-cholesteryl oleoyl ether- acetylated LDL (3H-COE-LDL) by macrophages. Twelve week old male mice fed a chow diet and water ad libitum were randomly assigned to sedentary and trained groups. Exercise training was performed in a treadmill (15m/min, 30 min/day, 5 times/week, during 6 weeks). Aortic arch and peritoneal macrophages were isolated from sedentary and trained animals immediately (time 0) and 48 h after the last exercise session. Gene expression was analyzed by RT-PCR and cholesterol efflux mediated by apo A-I or HDL2 after macrophage overloading with acetylated LDL and 14C-cholesterol. LDL uptake by macrophages was determined by incubation with 3H-COE-acetylated LDL. There were no systematic changes in the expression of macrophages and aortic genes comparing sedentary and trained wild type or CETP-tg mice. Similarly, there were no changes in cholesterol efflux and LDL uptake by macrophages. In conclusion, it was not found alteration in gene expression and cholesterol flux in macrophages and arterial wall that can contribute to the RCT in experimental model of non-dyslipidemic mice without pharmacological or dietary interventions. Therefore, the benefits of aerobic training in improving RCT, observed in previews studies, should be consequent to its systemic action on mediators of this transport and on the expression of hepatic and intestinal receptors

A paracoccidioidomicose (PCM) é uma micose sistêmica de natureza profunda e granulomatosa, que afeta preferencialmente o tecido pulmonar causada pelo Paracoccidioides brasiliensis, um fungo que exibe dimorfismo térmico. O P. brasiliensis interage com células apresentadoras de antígenos (APCs), alterando suas principais funções biológicas. Entre as APCs, os macrófagos são células que desempenham um papel importante na indução e regulação da resposta imune e/ou inflamatória. São células do sistema fagocítico mononuclear que podem discriminar entre o que é próprio do organismo e os patógenos, através da expressão de receptores de reconhecimento padrão (PRR) que reconhecem padrões moleculares associados à patógenos (PAMPs), sendo células importantes no processo de fagocitose controlando o crescimento destes patógenos. Recentemente tem sido demonstrada a importância dos receptores Notch na regulação da atividade de macrófagos e do sistema imune. Os ligantes de Notch estão envolvidos nas locais inflamatórios de infecção devido ao aumento da expressão dos mesmos na superfície de células envolvidas neste processo. Considerando que a sinalização Notch pode estar envolvida na modulação da função de macrófagos, nós avaliamos se P. brasiliensis tem a capacidade de modular a ativação desta via e interferir na produção de citocinas pró-inflamatórias. Para isso, macrófagos J774, pré-estimulados com LPS ou não, foram interagidos com leveduras do fungo, seguido por análise de PCR em tempo real e citometria de fluxo, dosagem de citocinas e índice de fagocitose. Nossos dados revelaram que na presença do fungo existe aumento dos níveis de transcrição do receptor Notch 1 e diminuição da transcrição do ligante Delta 4 em macrófagos pré-estimulados com LPS. Entretanto, verificamos que o fungo sozinho não é capaz de induzir a transcrição de NF-κB, nem na presença do LPS, mas quando os macrófagos são estimulados com LPS e sofrem inibição da via de Notch existe aumento dos níveis de transcritos após interação com o fungo, sugerindo que esse fator é ativado na ausência de Notch. Nesse contexto de inibição de Notch, evidenciamos que a fagocitose de leveduras do fungo por macrófagos tornou-se mais eficiente, visto que houve aumento do índice de fagocitose na ausência de Notch. Foi possível verificar que o fungo tem a capacidade de promover a produção de IL-6 via TLR-Notch, fazendo-nos supor que essa citocina seja importante para o estabelecimento da doença ao ser benéfica para o fungo e prejudicar o hospedeiro. E concomitantemente ao aumento de IL-6 existe diminuição da produção de TNF-α. Com base nesses resultados, podemos sugerir que o P. brasiliensis utiliza a via de sinalização Notch como um mecanismo de escape. A interação entre as leveduras do fungo e os macrófagos promove a ativação dessa via, através do receptor Notch 1, induzindo maior produção de IL-6, citocina importante para o crescimento do fungo no hospedeiro, conjuntamente com a diminuição de TNF-α prejudicando a atividade fungicida dos macrófagos. / Paracoccidioidomycosis (PCM) is a systemic mycosis and deep granulomatous in nature, which affects mainly the lung tissue caused by Paracoccidioides brasiliensis, a fungus that exhibits thermal dimorphism. The P. brasiliensis interacts with antigen presenting cells (APCs), changing its main biological functions. Among the APCs, macrophages are cells that play an important role in the induction and regulation of the immune response and/or inflammatory response. They are cells of the mononuclear phagocytic system that can discriminate between what is characteristic of the organisms and pathogens, by expression of pattern recognition receptors (PRR) that recognizes the pathogen-associated molecular pattern (PAMPs), and are considered cells important in phagocytosis for controlling the growth of these pathogens. It has been recently demonstrated the importance of the Notch receptor in regulating the activity of macrophages and of the immune system. The ligands of Notch are involved in inflammatory sites of infection because there are increased expression of these ligands on cell surface involved in this process. Whereas the Notch signaling may be involved in modulating macrophage function, we evaluated whether P. brasiliensis has the ability to modulate the activation of this pathway and interfere with the production of pro-inflammatory cytokines. For this, J774 macrophages, pre-stimulated with LPS or not, are interacted with yeast fungus, followed by Real Time PCR analysis and flow cytometry, cytokine and phagocytosis index. Our data showed that the presence of the fungus exists increased levels of transcription of the Notch 1 receptor, and a decrease in ligand Delta 4 transcription on macrophages pre-stimulated with LPS. However, we found that the fungus itself is not able to induce transcription NF-κB, even in the presence of LPS, but when macrophages are stimulated with LPS and suffer inhibition of the Notch signaling, exists increased levels of transcripts after interaction with the fungus, suggesting that this factor is activated in the absence of Notch. Within the context of inhibition of Notch, we found that phagocytosis of yeasts by macrophages become more efficient, since the increased rate of phagocytosis in the absence of Notch. It was verified that the fungus has the ability to promote the production of IL-6 via TLR-Notch, making us suppose that this cytokine is important for the establishment of the disease to be beneficial for the fungus and damage the host. And concurrently with increased IL-6 there is decreased production of TNF-α. Based on these results, we suggest that P. brasiliensis uses the Notch signaling pathway as an escape mechanism. The interaction between the yeasts with macrophages promotes the activation of this pathway, by means of a Notch 1 receptor, inducing increased production of IL-6 cytokine important for the growth of fungus on host, together with a reduction of TNF-α, contributing with a damaging fungicidal activity of macrophages.

As metaloproteinases são abundantes em venenos de serpentes. Estas enzimas são homólogas às de mamíferos, encontradas em níveis elevados em inflamações articulares. Neste estudo avaliou-se a capacidade da BaP1, induzir: i) a inflamação e incapacitação articulares e a participação do TNF-<font face=\"symbol\">a e PGE2 nesses efeitos e ii) a ativação de macrófagos em cultura e a natureza de sua interação com estas células. A BaP1 induziu aumento da permeabilidade vascular, liberação de TNF-<font face=\"symbol\">a, MMP-9 e PGE2 e acúmulo de leucócitos na cavidade articular e tecido sinovial. Ainda, induziu dor articular. O pré-tratamento dos animais com indometacina ou anti-TNF-<font face=\"symbol\">a reduziu a dor e o influxo leucocitário, induzidos pela BaP1. A BaP1 induziu a expressão de COX-2 e de TNF-<font face=\"symbol\">a e a liberação desta citocina, em macrófagos isolados. Nestas células detectou-se a internalização da BaP1. Em conclusão, a BaP1 induz inflamação e nocicepção articulares, dependentes de TNF-<font face=\"symbol\">a e PGE2. A COX-2 deve estar envolvida na liberação de PGE2 e os macrófagos são alvos importantes para as ações dessa metaloproteinase. / Metalloproteinases are major enzymes in snake venoms showing high grade of homology with mammal matrix metalloproteinases, present in high levels in inflamed joints. In this study we examined the ability of BaP1, to induce: i) inflammation and hypernociception in rat articular joints and participation of TNF-<font face=\"symbol\">a and PGE2 in these effects, and ii) activation of cultured macrophages. BaP1 increased vascular permeability, induced release of TNF-<font face=\"symbol\">a, PGE2 and pro-MMP-9 in joint cavities, and leucocyte influx into joint cavities and synovial tissues. Moreover, BaP1 induced articular hypernociception. Treatment of animals with indomethacin or antiserum anti-TNF-<font face=\"symbol\">a significantly reduced hypernociception and leukocyte influx induced by BaP1. Incubation of macrophages with BaP1 caused expression of TNF-<font face=\"symbol\">a and COX-2 as well as TNF-<font face=\"symbol\">a release. In conclusion, BaP1 induces inflammation and hypernociception in articular joints. These effects are dependent on PGE2 and TNF-<font face=\"symbol\">a. COX-2 may contribute for BaP1-induced PGE2 release and macrophages are key targets for BaP1 induced effects.

O gene Slc11a1 regula a resistência contra S. entérica, L. donovani e M. tuberculosis. Sublinhagens de camundongos AIRmax e AIRmin homozigotas para os alelos R e S do gene Slc11a1 (AIRmax,RR, AIRmaxSS, AIRminRR e AIRminSS) foram utilizadas para avaliar o efeito destes alelos na ativação de macrófagos peritoneais (M<font face=\"Symbol\">F), induzida pelo tioglicolato (TIO) ou infecção por M. bovis BCG.O TIO induz baixa ativação celular, a estimulação com LPS aumentou a ativação nos macrófagos dos animais AIRmaxRR e AIRmaxSS. Assim, na inflamação com TIO, a ativação do M<font face=\"Symbol\">F foi dependente do fundo genético selecionado nos animais AIRmax, independente do alelo do gene Slc11a1. Na infecção com BCG, a sublinhagem AIRmaxRR foi a única capaz de controlar a proliferação da bactéria, secretando altos níveis de IL-1<font face=\"Symbol\">b, IL-12, TNF<font face=\"Symbol\">a e IL-6 que ativam o macrófago. Por outro lado, os AIRminSS susceptíveis à infecção produziram maiores concentrações de NO, H2O2 e IL-10, mostrando o fundo genético para alta ou baixa resposta inflamatória, e os alelos do gene Slc11a1 interferem na resistência à infecção. / The Slc11a1 gene regulates resistance against S. enterica, L. donovani and M. tuberculosis. AIRmax and AIRmin mouse sublines, homozygous for Slc11a1 R and S alleles (AIRmaxRR, AIRmaxSS, AIRminRR and AIRminSS) were used in this work to evaluate the effect of this gene in peritoneal macrophage (M<font face=\"Symbol\">F) activation induced by thioglycollate (TIO) or M. bovis BCG infection. TIO induced weak cellular activation, LPS stimulation increased AIRmaxRR and AIRmaxSS macrophages activation. These results indicate that inflammation and M<font face=\"Symbol\">F activation induced by TIO were dependent on the genetic background for acute inflammatory response, while Slc11a1 alleles have little effect on this phenotype. In BCG infection only AIRmaxRR mice were capable of controlling bacterial proliferation, which was accompanied with high levels of IL-1<font face=\"Symbol\">b, IL-12, TNF and IL-6 produced by activated macrophages. On the other hand, susceptible AIRminSS mice produced higher amounts of NO, H2O2 and IL-10 suggesting that both inflammatory background and Slc11a1 alleles interfere on resistance to BCG infection.

We aimed to characterize well-know PIDs, novel genetic defects and immunopathological mechanisms in Brazilian patients with susceptibility to mycobacterial diseases. The patients developed different mycobacterial diseases and M. tuberculosis was the most frequent species. Molecular and genetic analysis revealed mutations in different genes: RAG1 (P1), CD40LG (P2, P3, P4), NEMO (P5), NCF1 (P6), TLR2 (P7) IL-12Rb2 (P8), IL-12Rb1 (P9), TLR10 (P10), DKC1(P11), SOCS-1(P12) and IRAK2 (P13). Finally, MDMs from patients phagocytose normally but were unable to appropriately control intracellular M. tuberculosis growth in comparison to MDMs from healthy subjects. We concluded that the Brazilian patients have heterogeneous mutations previously associated with susceptibility to mycobacterial diseases and novel genetic variations were identified suggesting novel PIDs. In addition, the inability of MDMs to control the intracellular growth of M. tuberculosis indicates this contributes to patients´ susceptibility to mycobacterial infections. / Objetivamos identificar novos defeitos genéticos e mecanismos imunopatológicos em pacientes brasileiros com suscetibilidade a infecções por micobactérias. Os pacientes foram investigados se portadores de imunodeficiencias previamente caracterizadas tais como SCID, deficiência de CD40L, MSMD, defeitos na sinalização via TLRs e CGD. A análise genética foi realizada por sequenciamento Sanger e \'\'whole exome sequencing\'\' para identificar possíveis novas imunodeficiências primárias. Além disso a função dos macrófagos dos pacientes foi avaliada. Infecções por diferentes espécies de micobactérias foram apresentadas pelos pacientes, sendo M. tuberculosis a espécie mais frequentemente identificada. Mutações em diferentes genes foram encontradas: RAG1 (P1), CD40LG (P2, P3, P4), NEMO (P5), NCF1 (P6), TLR2 (P7), IL-12Rb2 (P8), IL-12Rb1 (P9), IRAK2 (P10), SOCS-1 (P11) e TLR10 (P12). MDMs dos pacientes fagocitaram normalmente M. tuberculosis, porém reduzida capacidade em inibir o crescimento da M. tuberculosis foi observada. Concluímos que os pacientes estudados possuem defeitos moleculares heterogêneos e que os MDMs desses indivíduos apresentam falhas no controle do crescimento da M. tuberculosis. Nossos dados sugerem que esses são fatores subjacentes à susceptibilidade a infecções por micobactérias nesses indivíduos.

Submitted by Isaac Francisco de Souza Dias (isaac.souzadias@ufpe.br) on 2015-05-15T17:27:56Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO Samantha Cardoso de Andrade.pdf: 971765 bytes, checksum: 4662dfa9a04def6c5dac0c94620ea8f5 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-05-15T17:27:56Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO Samantha Cardoso de Andrade.pdf: 971765 bytes, checksum: 4662dfa9a04def6c5dac0c94620ea8f5 (MD5) Previous issue date: 2013-02-07 / CNPq / Durante os anos demonstrou-se que a terapia com o laser de baixa potência pode interferir na taxa de proliferação celular como no caso dos fibroblastos, mioblastos, células mesenquimais, osteoblastos e outros, além de exercer efeitos sobre o metabolismo celular. Desta forma, o presente estudo teve como objetivo avaliar a dose-resposta do laser de As-Ga-Al no comprimento de onda de 660nm sobre a viabilidade celular e a produção de espécies reativas do nitrogênio em macrófagos em cultura. Foi utilizada a linhagem RAW 264.7 em meio de cultura DMEM e o experimento foi dividido em quatro grupos, o primeiro grupo foi composto por apenas células e meio de cultura, o segundo grupo por células mais o meio e a irradiação com laser, o terceiro grupo pelas células estimuladas com lipopolissacarídeo (LPS) e o quarto grupo pelas células estimuladas com LPS e irradiadas com o laser. As células foram irradiadas nas potências de 10, 50 e 100mw, nos tempos de 10, 30 e 60s, dando um total de 9 densidades de energia. Este estudo indicou que a LBP aumentou significativamente (p<0,001) a produção de óxido nítrico (NO) pelos macrófagos do tipo RAW 264.7, quando comparado com células não irradiadas, tanto em células estimuladas pelo LPS quanto na produção basal de NO (sem estimulação por LPS). A densidade de energia de 32J/cm² foi a que apresentou um maior aumento na produção de NO (p<0,011) e analisando, apenas, o tempo de irradiação não houve diferença estatisticamente significativa (p>0,05 diferença) em diferentes potências. Baseado nos achados do presente estudo é possível concluir que a irradiação com 660nm aumentou a produção de NO por macrófagos em cultura, quando comparado com células não estimuladas, sem afetar a viabilidade celular.

Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2018-04-19T14:24:27Z No. of bitstreams: 4 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação Parcial (Cap. 1-4) - Luana C. Loureiro.pdf: 1354304 bytes, checksum: b111d7775e4cabbfa85f285cc283a8d3 (MD5) Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) Dissertação Parcial (Cap. 7) - Luana C. Loureiro.pdf: 419055 bytes, checksum: 69fb106adb296bf683acd63cc0d65b2c (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2018-04-19T14:24:48Z (GMT) No. of bitstreams: 4 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação Parcial (Cap. 1-4) - Luana C. Loureiro.pdf: 1354304 bytes, checksum: b111d7775e4cabbfa85f285cc283a8d3 (MD5) Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) Dissertação Parcial (Cap. 7) - Luana C. Loureiro.pdf: 419055 bytes, checksum: 69fb106adb296bf683acd63cc0d65b2c (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-19T14:24:48Z (GMT). No. of bitstreams: 4 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação Parcial (Cap. 1-4) - Luana C. Loureiro.pdf: 1354304 bytes, checksum: b111d7775e4cabbfa85f285cc283a8d3 (MD5) Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) Dissertação Parcial (Cap. 7) - Luana C. Loureiro.pdf: 419055 bytes, checksum: 69fb106adb296bf683acd63cc0d65b2c (MD5) Previous issue date: 2017-06-28 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O metabolismo de lipídios e suas funções biológicas, principalmente no processo de re-estruturação das membranas celulares e seus efeitos na imunologia celular é motivo de abordagem de estudo, conhecida como Terapia de Lipídios de Membrana (TLM). As proporções e composições de lipídios de membrana estão modificadas em pacientes com câncer, como também em outras patologias. O câncer de pulmão é a principal causa de morte por câncer entre homens e mulheres, e células do sistema imune como os macrófagos (MA) atuam como importantes mediadores da resposta tumoral. O fenótipo M1 é essencial na resposta imune contra tumores. Porém já se sabe que células tumorais podem modular o fenótipo de MA, favorecendo o perfil pró-tumoral (M2). No liquido surfactante (LS) pulmonar, podem ocorrer a formação de fosfolipídios oxidados gerados por ação do ozônio no processo respiratório, sendo importantes alvos de desenvolvimento da TLM. Desta forma, o objetivo desse estudo foi avaliar os efeitos da fosfatidilcolina oxidada em células tumorais pulmonar (LL/2) in vitro, e correlacionar a TLM utilizada com a modulação de MA associados ao câncer. Nossos resultados demonstraram que PaldoPC não foi citotóxico para células tumorais de LL/2, porém, apresentou efeito antiproliferativo nas culturas tumorais em longo período de tratamento. Também demonstramos que o tratamento com PaldoPC modulou a produção de NO, IL-6, TNF-α, IL-10, KC e MCP-1 em MA em co-cultura com LL/2, de modo dependente da polarização dos MA. Além disso, observamos o aumentou na produção de PGE2 nos diferentes perfis MA em associação com LL/2, e o tratamento com PaldoPC aumentou a produção de PGE2 nos M1 em co-cultura com LL/2. Assim, concluímos que a fosfatidilcolina oxidada do líquido surfactante PaldoPC possui potencial terapêutico no câncer (LL/2), com efeito direto sobre as células cancerosas, ou indireto na modulação de macrófagos. / O metabolismo de lipídios e suas funções biológicas, principalmente no processo de re-estruturação das membranas celulares e seus efeitos na imunologia celular é motivo de abordagem de estudo, conhecida como Terapia de Lipídios de Membrana (TLM). As proporções e composições de lipídios de membrana estão modificadas em pacientes com câncer, como também em outras patologias. O câncer de pulmão é a principal causa de morte por câncer entre homens e mulheres, e células do sistema imune como os macrófagos (MA) atuam como importantes mediadores da resposta tumoral. O fenótipo M1 é essencial na resposta imune contra tumores. Porém já se sabe que células tumorais podem modular o fenótipo de MA, favorecendo o perfil pró-tumoral (M2). No liquido surfactante (LS) pulmonar, podem ocorrer a formação de fosfolipídios oxidados gerados por ação do ozônio no processo respiratório, sendo importantes alvos de desenvolvimento da TLM. Desta forma, o objetivo desse estudo foi avaliar os efeitos da fosfatidilcolina oxidada em células tumorais pulmonar (LL/2) in vitro, e correlacionar a TLM utilizada com a modulação de MA associados ao câncer. Nossos resultados demonstraram que PaldoPC não foi citotóxico para células tumorais de LL/2, porém, apresentou efeito antiproliferativo nas culturas tumorais em longo período de tratamento. Também demonstramos que o tratamento com PaldoPC modulou a produção de NO, IL-6, TNF-α, IL-10, KC e MCP-1 em MA em co-cultura com LL/2, de modo dependente da polarização dos MA. Além disso, observamos o aumentou na produção de PGE2 nos diferentes perfis MA em associação com LL/2, e o tratamento com PaldoPC aumentou a produção de PGE2 nos M1 em co-cultura com LL/2. Assim, concluímos que a fosfatidilcolina oxidada do líquido surfactante PaldoPC possui potencial terapêutico no câncer (LL/2), com efeito direto sobre as células cancerosas, ou indireto na modulação de macrófagos.

Crotalfina (CRF) é um peptídeo produzido do veneno da serpente Crotalus durissus terrificus com efeito antinociceptivo tipo opióide detectado apenas na presença de inflamação. Estudos sobre mecanismos de analgesia relatam a ação de opióides em células imunes e macrófagos são apontados como alvos para os efeitos destes. Este estudo caracterizou a ação da CRF sobre funções de macrófagos e avaliou a importância de seus receptores opióides nestas ações. Os resultados indicam que CRF inibe fagocitose, liberação de H2O2 e produção de NO&bull; e TNF-a, modula IL-6 e estimula IL-1b por macrófagos residentes e inflamatórios. Ensaios de expressão e ativação mostram que macrófagos residentes expressam receptores opióides k seguido de m e d e macrófagos inflamatórios expressam receptores m seguido de k e d. A CRF interferiu, de maneira distinta, com a expressão destes receptores, dependendo do estado de ativação destas células. Antagonistas destes receptores bloquearam a ação da CRF, mostrando que este peptídeo possui ação imunomodulatória mediada por receptores opióides. / Crotalphine (CRF) is a peptide isolated from the venom of Crotalus durissus terrificus with type opioid antinociceptive effect only detected in the presence of inflammation. Studies on mechanisms of analgesia reported the action of opioids in immune cells and macrophages are considered as targets for these effects. This study characterized the action of CRF on functions of macrophages and assessed the importance of opioid receptors in these actions. The results indicate that CRF inhibits phagocytosis, release of H2O2 and production of NO&bull; and TNF-a, modulates IL-6 and stimulates IL-1b production by resident and inflammatory macrophages. Expression and activation assays show that resident macrophages express k receptors followed by m and d. Inflammatory macrophages express m receptors followed by k and d. CRF interfered differently with the expression of these receptors, depending on the activation state of these cells. Antagonists of these receptors blocked the action of CRF, showing that this peptide has immunomodulatory action mediated by opioid receptors.

Orientador: Mário José Abdalla Saad / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-19T22:12:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mittestainer_FrancineCappa_M.pdf: 2379142 bytes, checksum: cb6178fdb335fdabb4a29e4767a5c1b5 (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: A infusão da insulina durante a inflamação aguda melhora os resultados clínicos, mas o exato mecanismo desse efeito benéfico da insulina ainda não foi bem compreendido. Estudos recentes mostraram que a insulina tem um efeito antiinflamatório de modo que o hormônio também exibe um efeito inibidor sobre a mediação da transcrição de NF-kB em células mononucleares. Assim, o objetivo do presente estudo foi investigar os efeitos agudos da administração de insulina regular sobre a modulação de proteínas da via IKK/IkB/NF-kB e das proteínas chave da via de sinalização da insulina em tecido hepático, muscular e adiposo, a expressão de NF-kB nesses tecidos através de ELISA, o efeito do tratamento com insulina em macrófagos extraídos do peritônio de ratos e a influência dos inibidores da PI3K e MAPK na via inflamatória. Ademais, fizemos um ensaio da proteína fosfatase PP2A usando a imunoprecipitação com anticorpos anti-IKKbeta. Para o experimento, ratos machos adultos Wistar compuseram aleatoriamente 4 grupos diferentes. Três deles foram submetidos à infusão de insulina na veia porta e, então foram estimulados em 1, 3 e 5 minutos, enquanto o outro grupo (0) não foi estimulado com insulina. Em nossos resultados, observamos um aumento da fosforilação de IR, IRS1 e Akt induzida pela insulina nos três tecidos estudados. Em paralelo, houve uma redução na fosforilação de IKK e IkB após o estimulo da insulina. A ativação de NF-kB p65 no núcleo das células mostrou a redução na fosforilação do IKK e IkB no fígado, músculo e tecido adiposo. Na cultura de macrófagos tratada com insulina, após a adição dos inibidores específicos para PI3K e MAPK, observamos um aumento na fosforilação de IKK e IkB. Nossos resultados também mostraram que após estímulo da insulina houve um aumento na atividade da proteina fosfatase PP2A associada ao IKK nos três tecidos estudados. Desta forma, podemos sugerir que insulina pode induzir uma interação entre PP2A e IKK, o que resultará em mais desfosforilação de IKK e, assim, uma inibição da atividade da proteína quinase, revelando um potencial mecanismo de ação efeito anti-inflamatório da insulina / Abstract: Insulin infusion during acute inflammation improves clinical the outcomes but the exact mechanism of this beneficial effect is unclear. Recent studies have suggested that insulin has an anti-inflammatory effect in such a way that this hormone exhibits an inhibitory effect on the mediation of transcription of NF- kB in mononuclear cells. Thus, the aim of this study was to investigate the acute effects of regular insulin administration in modulation of IKK/IkB/NF-kB pathway and insulin signaling pathway (IR, IRS1 and Akt) and the DNA binding of NF-kB p65 in liver, muscle and adipose tissue of rats and also analyze the effect of treatment with insulin on macrophages of rats and the influence of PI3K and MAPK inhibitors on pathway. And finally, we analyze a phosphatase assay by using an immunoprecipitation with anti-IKKbeta antibody and PP2A phosphatase assay. For the experiment, male adult Wistar rats were divided in 4 groups. Three of them were submitted to insulin injection in the portal vein and were stimulated for 1, 3 and 5 minutes and the other group (0) was not stimulated (saline). In our results, we observed an increase in insulin-induced phosphorylation of IR, IRS1 and Akt during insulin injection in the three tissues studied. In parallel, there was a reduction in the phosphorylation of IKK and IkB after insulin stimulation. The DNA binding of NF-kB p65 in the cell nucleus showed a reduction of the IKK and IkB phosphorylation after insulin injection in liver, muscle and adipose tissue. In macrophages culture of treated with insulin and when added the specific inhibitor for PI3K and MAPK we observed an increased on phosphorylation of IKK and IkB. Our results also showed that after insulin stimulus there was an increase in PP2A phosphatase activity associated with IKK in the three tissues studied. Thus, we can suggest that insulin might induce an interaction between PP2A and IKK, which will result in more IKK dephosphorylation and thus an inhibition of this protein kinase activity, showed a possible anti-inflammatory effect of insulin / Mestrado / Mestre em Ciências

Sabe-se que a desnutrição modifica a resposta imune específica e inespecífica do organismo frente a agentes infecciosos comprometendo a produção e a função de células linfo-hemopoéticas, estando associada a modificações da resposta imune, resultando em maior suscetibilidade à infecções, porém os mecanismos exatos que comprometem o sistema imune em estados de desnutrição ainda estão para serem esclarecidos. A literatura relata que aproximadamente 60% das infecções que evoluem para sepse são adquiridas no ambiente hospitalar, envolvendo geralmente bactérias Gram negativas e incidindo especialmente em indivíduos com nutrição inadequada. Considerando tais aspectos e em função da complexidade da interação do estado nutricional e resposta do organismo frente a agentes patogênicos, envolvendo controles celulares e moleculares múltiplos ainda pouco conhecidos, propusemo-nos a estudar alguns aspectos da resposta inflamatória em desnutrição. Camundongos Swiss machos adultos, submetidos a desnutrição protéica-energética, após perda de aproximadamente 25% do peso corpóreo, foram inoculados com lipopolissacarideo de Escherichia coli: Hemograma, mielograma, esplenograma e dosagens sistêmicas de citocinas, foram realizadas. Células coletadas da cavidade peritonial de animais que não foram estimulados com LPS foram utilizadas para as determinações de citocinas e NO in vitro, bem como para quantificação dos receptores CD14 e TLR-4/MD-2 e do fator de transcrição NF&#954;B. Células da cavidade peritonial foram usadas, também, para realização dos testes de espraiamento, fagocitose e atividade cida com Candida albicans. Animais desnutridos apresentaram anemia, leucopenia; severa redução na celularidade da medula óssea, do baço e da cavidade peritonial. A capacidade de espraiamento, fagocitose, atividade cida e síntese de citocinas e NO foram significativamente menores nos animais dos grupo desnutrido. O número de receptores de CD14 e TLR-4/MD-2 e do fator de transrição NF&#954;B, também foram significativamente menores nos animais desnutridos. Estes achados sugerem que. animais desnutridos apresentam resposta deficiente frente ao LPS. A menor expressão de receptores CD14 e TLR-4/MD-2 pode ser responsável, em parte pela imunodepressão observada. Os dados nos levam a inferir que o estado nutricional interfere no estado de ativação de macrófagos e na capacidade de resposta dos animais. / Malnutrition modifies the specific and non-specific immune response of the organism to infectious agents, hampering the production and function of Iympho-hemopoietic cells leading to a higher susceptibility of the orgonism to infections. However, the exact mechanisms by which the immune system is undermined has not yet been fully elucidated. Approximately 60% of infections that evolve to bacteremia are nosocomial, and usually involve Gram negative bacteria in individuais that have inadequate nutrition. Taking this into consideration, and in view of the complexity of the interaction between nutritional state and the organism\' s response to infection, which involves poorly known multiple cellular and molecular controls, we proposed to study a few aspects of the inflammatory response in protein malnutrition. Male, outbred Swiss mice were sumbitted to protein malnutrition and after the loss of about 25% of total body weight they were inoculad whith lipopolissacharide of Escherichia coli: Hemogram, mielogram, splenogram and the determination of systemic production of cytokines were used to evaluate. Cells from the peritoneal cavity of animais who were not inoculated were collected for determination of cytokines and NO production in vitro and to evaluate the expression of NF&#954;B and CD14 and TLR-4/MD-2 receptors. Cells from the peritoneal cavity were used too for the spreading, phagocytosis and killing tests with Candida albicans. Malnourished animais presented anemia, leucopenia a severe reduction on bone marrow, spleen and peritoneal cavity cellularity. The spreading, phagocytosis, killing and the production of cytokines and NO was significantly lower in malnourished animais. The number of CD14 and TLR-4/MD-2 receptors and NF&#954;B was found to be significantly lower in malnourished animais. These findings suggest that malnourished mice present a deficient response to LPS. The smaller expression of CD14 and TLR-4/MD-2 receptors may be partly responsible for the immunodeficiency observed. These data lead us to infer that the nutritional state interferes in the activation of macrophages and in the immune response capacity.