Submitted by Gizele Lima (gizele.lima@inpa.gov.br) on 2017-04-05T20:42:27Z No. of bitstreams: 2 Tese doutorado Letícia Cegatti Bridi.pdf: 1541965 bytes, checksum: 4cfd95df1d435b1e09c0bf0fb68a8061 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-05T20:42:27Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese doutorado Letícia Cegatti Bridi.pdf: 1541965 bytes, checksum: 4cfd95df1d435b1e09c0bf0fb68a8061 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2016-08-23 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas - FAPEAM / Malaria in Brazil occurs especially in the Amazon (99% of cases), where environmental conditions are favorable for the proliferation of the etiologic and their mosquito vectors agents, whose main transmitter is the Anopheles darlingi. Environmental factors and human activities are some of the main aspects that contribute to the adaptive and evolutionary process that anopheles, which can be reflected in chromosomal rearrangements. We carried out the physical chromosome mapping by fluorescence in situ hybridization (FISH) of inume response genes in the genome of A. darlingi, GNBP (Gran-negative binding protein), Toll-interacting protein (Toll), defensin, Chymotrypsin-like serine protease (AdChyL), 28S ribosomal protein S7- mitochondrial precursor (RpS7), gambicin anti-microbial peptide (gambicin) and also the gene sensory response: OBP (odorant binding protein) to assist in more precise assembly of its structural genomics. These genes have been mapped in single chromosomal regions, with the exception of RpS7, which mapped in more than one location. Other genes have been mapped in inversion regions: GNBP (inversion 2 Rd); AdChyL in the region 38D (inversion 3Lb) and RpS7 in 22C region (inversion 2Lb). The OBP gene mapped the X chromosome from five locations individuals, where only A. darlingi of São Gabriel da Cachoeira/AM (SGC/AM) OBP gene marked the region 3A compared to four locations Coari/AM, Manaus/AM, Barra do Bugres/MT and Macapá/AP, where the probe mapped the region 4A. Two new investments were described for A. darlingi and one on chromosome X (Xb) in the population of SGC/AM and another in the arm 2L (2LC), population Bugres/MT. Geographical distances and ecoregions (geographical barriers) are environmental factors that can favor the appearance of the two new inversions described in this work. In the phylogenetic analysis of GNBP genes Toll, defensin, RpS7 and gambicin, we obtained three clades for GNBP and most of the analyzed sequence was homologous to the subfamily B, including GNBP Anopheles gambiae (87%), suggesting that GNBP A . darlingi belongs to the subfamily B. Phylogenetic trees for RpS7 genes, gambicin, defensin and Toll showed a high degree of conservation between these genes in A. gambiae and Anopheles arabiensis. Immune response genes of A. darlingi and Anopheles albimanus are phylogenetically close but not always a reliable support. This may suggest some level of evolutionary conservation of the genes of the immune response of both species. The genes mapped in situ were considered cytogenetic useful markers for chromosomal variability studies and developments in A. darlingi as they are conserved genes, and assist in the improvement of sequence analyzes not finalized the assembly and annotation of the genome of A. darlingi. / A malária no Brasil ocorre especialmente na Amazônia (99% dos casos), onde as condições ambientais são favoráveis para a proliferação dos agentes etiológicos e de seus mosquitos vetores, cujo principal transmissor é o Anopheles darlingi. Fatores ambientais e atividades antrópicas são alguns dos principais aspectos que contribuem para o processo adaptativo e evolutivo desse anofelino, o que pode ser refletido em rearranjos cromossômicos. Neste trabalho, realizamos o mapeamento físico cromossômico por hibridização in situ fluorescente (FISH) dos genes de resposta inume do genoma de A. darlingi, GNBP (Gran-negative binding protein), Toll-interacting protein (Toll), defensina, Chymotrypsin-like serine protease (AdChyL), 28S ribosomal protein S7- mitochondrial precursor (RpS7), gambicin anti-microbial peptide (gambicina) e ainda, o gene de resposta sensorial: OBP (odorant binding protein), para auxiliar na montagem mais precisa do seu genoma estrutural. Esses genes foram mapeados em regiões cromossômicas únicas, com exceção do RpS7 que mapeou em mais de um local. Outros genes foram mapeados em regiões de inversão: GNBP (inversão 2Rd); AdChyL, na região 38D (inversão 3Lb) e RpS7, na região 22C (inversão 2Lb). O gene OBP mapeou o cromossomo X de indivíduos de cinco localidades, onde apenas A. darlingi de São Gabriel da Cachoeira/AM (SGC/AM) o gene OBP marcou na região 3A em comparação com as quatro localidades Coari/AM, Manaus/AM, Barra do Bugres/MT e Macapá/AP, onde a sonda mapeou a região 4A. Duas novas inversões foram descritas, para A. darlingi sendo uma no cromossomo X (Xb) na população de SGC/AM e outra no braço 2L (2Lc), população de Barra do Bugres/MT. Distâncias geográficas e ecoregiões (barreiras geográficas) são fatores ambientais que podem favorecer o aparecimento das duas novas inversões descritas nesse trabalho. Na análise filogenética dos genes GNBP, Toll, defensina, RpS7 e gambicina, obtivemos três clados para GNBP e a maioria das sequências analisadas foi homóloga com a da subfamília B, incluindo GNBP de Anopheles gambiae (87%), sugerindo, que GNBP de A. darlingi pertence à subfamília B. As árvores filogenéticas para os genes RpS7, gambicina, defensina e Toll mostraram um alto grau de conservação entre esses genes em A. gambiae e Anopheles arabiensis. Os genes de resposta imune de A. darlingi e Anopheles albimanus são filogeneticamente próximos, mas nem sempre com um suporte confiável. Isso pode sugerir algum nível de conservação evolutiva entre os genes de resposta imune de ambas as espécies. Os genes mapeados in situ foram considerados marcadores citogenéticos úteis aos estudos de variabilidade cromossômica e evolução em A. darlingi já que são genes conservados, além de auxiliar no aprimoramento das análises de sequências não finalizadas na montagem e anotação do genoma de A. darlingi.

Submitted by Gizele Lima (gizele.lima@inpa.gov.br) on 2017-05-23T14:08:20Z No. of bitstreams: 2 Bruna Wolfarth-Couto TESE_2015 FINAL IMPRIMIR.pdf: 10092268 bytes, checksum: 5b52c71522091ce96736ecde1da80908 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-23T14:08:20Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Bruna Wolfarth-Couto TESE_2015 FINAL IMPRIMIR.pdf: 10092268 bytes, checksum: 5b52c71522091ce96736ecde1da80908 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2015-10-09 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas - FAPEAM / In order to verify the reliability of the data set offered by SIVEP-Malaria and examine the relationship of precipitation and river water level in response to malaria cases, this study proposed: to evaluate the autochthonous events of Malaria of the Amazonas State from 2003 to 2014; to apply alternatives to reduce errors in the data; to analyze trends of seasonal standards of malaria with respect to local hydrological variability; and to identify the temporal behavior of malaria cases in relation to precipitation and river water level. Methods applied for the data analysis were divided in three processes: 1 - Data Cleaning to identify absent data, data interval and data consistency; 2- Filtering for malaria cases data and fluviometric data; and 3- Analysis of coherence and phase of wavelets to identify dominant modes of variability between variables. Results were divided in three chapters and demonstrated that: 1- the data set of SIVEP-Malaria show some limitations to fill the forms of notification in the spreadsheets of the Amazonas State, but this is an important and effective system to plan actions of control; 2- with respect to seasonal standards of malaria and hydrological variability, it is indicated seasonal trends of malaria from the wave shifting of high levels of the rivers. Peaks of malaria cases occurred between 1 and 4 months after the river high levels and have different characteristics according to the basin region analyzed; 3- the correlation of precipitation anomaly and river water level with malaria cases indicated that these variables oscillate mainly at the annual variability scale, however, other oscillations can be identified. Precipitation and river water level showed lags in relation to malaria cases, varying approximately 45 days before and after rain peaks and from 1 to 3 months after the peak of river water level. The understanding of the relationship of precipitation and river water level can clarify the impact of climatic and hydrological variables on the malaria cases. Plans of actions that consider the current environmental and climatic conditions for each location joined to the understanding of the lags between hydrological regimes and precipitation are fundamental keys to the monitoring and controlling of the malaria disease. / Com a finalidade de verificar a confiança dos dados disponibilizados pelo SIVEP-Malária e examinar a relação das variáveis de precipitação e nível d'água na resposta dos casos de malária, a proposta deste trabalho foi avaliar os casos autóctones do Estado do Amazonas para o período de 2003 a 2014, aplicar alternativas para reduzir margens de erros nos dados, analisar as tendências dos padrões sazonais da malária com relação à variabilidade hidrológica local e identificar o comportamento temporal da relação dos casos de malária com as variáveis de precipitação e nível d'água. Os métodos aplicados nas análise foram compreendidos em 3 processos: 1 - Tratamento tipo Data Cleaning para identificação de dados ausentes, intervalo e consistência dos mesmo; 2- Filtragem dos dados de casos de malária e dados fluviométricos e 3- Análise de Coerência e Fase de Ondeletas para a identificação dos modos dominantes de variabilidade entre as variáveis. Os resultados, divididos em 3 capítulos distintos, demonstraram que: 1- O Banco de dados do SIVEP-Malária apresenta algumas limitações no preenchimento das fichas de notificação das planilhas do Estado do Amazonas, porém é um sistema importante e eficaz para o planejamento das ações de controle; 2- Com relação aos padrões sazonais da malária e da variabilidade hidrológica, foram indicadas tendências de modulação da sazonalidade da malária a partir do deslocamento da onda de cheia dos rios. Os picos de casos de malária foram exibidos entre 1 a 4 meses após as cheias dos rios e possuem características distintas de acordo com a porção da bacia analisada; 3- O cruzamento das séries de anomalia de precipitação e nível d'água com os casos de malária indicaram que as variáveis oscilam principalmente na escala de variabilidade anual, no entanto outras oscilações puderam ser identificadas. A precipitação e o nível d'água apresentaram defasagens em relação aos casos de malária, variando aproximadamente 45 dias antes ou depois dos picos de chuva e em média de 1 a 3 meses após o pico de nível d'água. O entendimento da relação das variáveis de precipitação e nível d'água dos rios esclarecem o vínculo das variáveis climáticas e hidrológicas sobre as respostas que elas provocam sobre a malária. Planos de ações que contemplem a realidade ambiental e climática de cada localidade somado às condições de defasagens dos regimes hidrológicos e pluviométricos são elementos fundamentais para o monitoramento e auxílio no controle da doença.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-graduação em Medicina Tropical, 2015. / Submitted by Patrícia Nunes da Silva (patricia@bce.unb.br) on 2015-11-17T19:48:43Z No. of bitstreams: 1 2015_ HenryMaiaPeixoto_Parcial.pdf: 3442470 bytes, checksum: b84b03e2ddc7d08569743a7d466360fa (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2015-11-19T11:18:55Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_ HenryMaiaPeixoto_Parcial.pdf: 3442470 bytes, checksum: b84b03e2ddc7d08569743a7d466360fa (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-19T11:18:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_ HenryMaiaPeixoto_Parcial.pdf: 3442470 bytes, checksum: b84b03e2ddc7d08569743a7d466360fa (MD5) / Introdução: A deficiência da enzima G6PD (dG6PD) é causada por mutações no gene G6PD, ligado ao cromossomo X, que exerce um importante papel na proteção da hemácia contra agentes oxidantes, podendo acometer ambos os sexos. As manifestações clinicamente relevantes, no entanto, como a anemia hemolítica aguda, ocorrem, predominantemente, em homens. A primaquina, uma 8-aminoquinolina utilizada no tratamento radical da malária vivax, representa o principal fator desencadeador de complicações associadas à dG6PD em áreas endêmicas de malária. Nesse sentido, a utilização de um teste para detecção da dG6PD antes da indicação da primaquina poderá prover uma maior segurança aos portadores da deficiência. Objetivo: Avaliar a eficiência da introdução de teste diagnóstico rápido (TR) para detectar a dG6PD em indivíduos do sexo masculino com malária vivax na Amazônia Brasileira. Método: Foi realizada uma análise econômica na perspectiva do Sistema Único de Saúde (SUS). O estudo foi subdividido em análise de custos, análise de custo-efetividade e análise de impacto orçamentário. Foram estimados custos diretos da dG6PD para os anos 2009, 2010 e 2011 na Amazônia Brasileira, considerando os custos com o diagnóstico do P. vivax, com o seu tratamento e com as hospitalizações associadas ao uso da primaquina. A análise de custo efetividade, desenvolvida para o ano de 2013, considerou os desfechos: caso diagnosticado adequadamente, hospitalização evitada e cura da malária vivax. Foram comparadas, por meio de árvores de decisão, a rotina preconizada no Brasil que não inclui o diagnóstico da dG6PD (estratégia Rotina) e duas estratégias diagnósticas com TR para dG6PD em indivíduos do sexo masculino infectados com P. vivax antes da indicação da primaquina. A primeira estratégia considerou o uso combinado do TR BinaxNOW® G6PD (BX-G6PD) nos municípios com mais de 100 mil habitantes e a rotina para os demais municípios. A segunda estratégia considerou o uso do TR CareStartTM G6PD (CS-G6PD) em 100% dos municípios. A análise de impacto orçamentário, desenvolvida para os anos de 2013, 2014 e 2015, comparou a rotina adotada no Brasil com a estratégia baseada no uso do CS-G6PD, considerando uma expectativa de difusão na Amazônia Brasileira de 30% no primeiro ano, de 70% no segundo ano e de 100% no terceiro ano. Resultados: As estimativas de custos da dG6PD no âmbito da malária vivax indicam um custo médio correspondente a R$ 10.066.338,31, variando de acordo com a análise de sensibilidade entre R$7.981.552,46 e R$ 12.048.660,00. Na análise de custo-efetividade para o desfecho caso diagnosticado adequadamente, ao comparar as estratégias baseadas em TR com a Rotina, a estratégia com CS-G6PD foi a mais custo efetiva e a estratégia com o BX-G6PD foi dominada de forma estendida; considerando o desfecho hospitalização evitada, a estratégia que usou o CS-G6PD dominou as demais. Para o desfecho cura da malária vivax, embora a Rotina tenha sido a mais custo-efetiva, a estratégia CS-G6PD apresentou um menor custo, além de não apresentar uma diferença importante quanto à efetividade. Na análise de impacto orçamentário, quando comparados os cenários constituídos pela Rotina e o CS-G6PD, o impacto orçamentário incremental foi negativo nos três anos avaliados. Conclusão: A pesquisa estima que a estratégia baseada CS-G6PD é a estratégia mais custo-efetiva para diagnosticar a dG6PD e evitar a hospitalização, além de apresentar impactos orçamentários incrementais que indicam um melhor uso dos recursos públicos. / Introduction: The Deficiency of the enzyme G6PD (G6PDd) is caused by mutations in the gene G6PD, which plays an important role in protecting the red blood cell against oxidizing agents; it is linked to the chromosome X, and it may affect both sexes. The clinically relevant manifestations, such as acute haemolytic anaemia, mainly occur in men, however. The 8-aminoquinoline primaquine, which is the medication used in the radical treatment of malaria caused by Plasmodium vivax, represents the main factor that triggers complications associated with G6PDd in malaria endemic areas. In this sense, the usage of a test for the detection of the G6PDd before the indication of primaquine will be able to provide increased security to the carriers of G6PDd. Objective: To evaluate the efficiency of the introduction of rapid diagnostic testing (RDT) to detect the G6PDd in male individuals with vivax malaria in the Brazilian Amazon. Method: An economic analysis was performed in the perspective of the Brazilian Public Health System (SistemaÚnico de Saúde - SUS). The study was subdivided into cost analysis, cost-effectiveness analysis and budget impact analysis. Direct costs from the G6PDd for the years 2009, 2010 and 2011 in the Brazilian Amazon were estimated considering the cost of the diagnosis of P. vivax, with its treatment and with hospitalizations associated with the use of primaquine. The analysis of cost-effectiveness, developed for the year 2013, considered the outcomes: properly diagnosed cases, avoided hospitalizations and cure of vivax malaria. By means of decision trees, the routine recommended in Brazil, which does not include the diagnosis of the G6PDd (Routine strategy), and two diagnostic strategies with RDT for the G6PDd in male individuals infected with P vivax before the indication of primaquine were compared. The first strategy considered the combined use of the RDT BinaxNOW® G6PD (BX-G6PD) in municipalities with more than 100,000 inhabitants and the routine to the other municipalities. The second strategy considered the use of the RDT CareStartTM G6PD (CS-G6PD) in 100% of the municipalities. The analysis of budget impact, developed for the years 2013, 2014 and 2015, compared the routine adopted in Brazil with the strategy based on the use of the CS-G6PD considering an expectation of diffusion in the Brazilian Amazon of 30% in the first year, of 70% in the second year and of 100% in the third year. Results: The cost estimations of the G6PDd in the framework of vivax malaria indicate an average cost equivalent to R$ 10,066,338.31, varying according to the analysis of sensitivity between R$ 7,981,552.46 and R$ 12,048,660.00. In the analysis of cost-effectiveness for the outcome properly diagnosed cases, when comparing the strategies based on RDT with the Routine, the strategy with CS-G6PD was the most cost-effective and the strategy with the BX-G6PD was dominated in extended form; considering the outcome avoided hospitalizations, the strategy that used the CS-G6PD dominated the others. For the outcome cure of vivax malaria, though the Routine was the most cost-effective, the CS-G6PD strategy presented a lower cost, besides not presenting an important difference regarding the effectiveness. In the analysis of budget impact, when compared to the scenarios constituted by the Routine and the CS-G6PD, the incremental budgeting impact was negative in the three years evaluated. Conclusion: The study estimates that the CS-G6PD based strategy is the most cost-effective one for diagnosing the G6PDd and avoiding hospitalization, besides presenting incremental budgeting impacts that indicate a better use of public resources.

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:47Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-09-30 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / A região C-terminal da proteína 1 de superfície de merozoítas de Plasmodium (MSP119) vem sendo estudada como um dos principais alvos para desenvolvimento de uma vacina contra malária. Estudos têm demonstrado a imunogenicidade desta região em vacinações experimentais utilizando proteínas recombinantes na presença de adjuvantes fortes. No presente estudo, consideramos a possibilidade da utilização de proteínas recombinantes baseadas na sequência da MSP119 para imunização de camundongos por uma via de mucosa. Também geramos novas proteínas recombinantes de fusão da MSP119 com a flagelina (proteína do flagelo de Salmonella enterica Typhimurium), com o intuito de aumentar a imunogenicidade deste antígeno. Avaliamos inicialmente a capacidade de atuação das moléculas toxina colérica (CT), toxina termo-lábil de E. coli (LT) e do oligodeoxinucleotídeo CpG ODN 1826 como adjuvantes em imunizações de camundongos pela via de mucosa intranasal, utilizando como antígenos as proteínas recombinantes baseadas na MSP119 de P. vivax His6PvMSP119 ou His6PvMSP119-PADRE (contendo o epítopo “helper” universal PADRE). Quando administradas na presença dos adjuvantes CT ou LT, ambas foram altamente imunogênicas pela via intranasal, induzindo altos títulos de anticorpos, maiores do que quando utilizamos o CpG ODN 1826 como adjuvante. A adição do CpG ODN 1826 em imunizações na presença de CT foi capaz de aumentar a resposta específica de IgG2c. Nossos resultados demonstraram que CT e LT são adjuvantes potentes de mucosa em imunizações com antígenos recombinantes de malária, e que o CpG ODN 1826 pode ser utilizado como ferramenta de modulação da resposta imune nestas imunizações. Subsequentemente, expressamos em bactérias E. coli uma proteína recombinante contendo a sequência da PvMSP119-PADRE fusionada à flagelina FliC de S. enterica Typhimurium (His6FliC-PvMSP119-PADRE). Demonstramos que essa proteína de fusão retém as propriedades antigênicas da PvMSP119 e a capacidade da flagelina de ativar o receptor TLR5 da imunidade inata. A imunização de camundongos utilizando somente esta proteína recombinante de fusão induziu altos títulos de anticorpos, além de células específicas produtoras de IFN-g medidas no baço dos animais imunes. A adição de CpG ODN 1826 nas imunizações foi capaz de imunomodular a resposta de anticorpos, aumentando os títulos de IgG2c. Além disso, os soros dos camundongos imunizados foram capazes de reconhecer os parasitas por imunofluorescência indireta (IFA). Estes resultados demonstraram uma nova classe de antígenos candidatos à vacina contra malária, com atividade adjuvante intrínseca e capaz de estimular respostas imunológicas humoral e celular específicas, quando administrada sozinha ou na presença de outros adjuvantes. Por fim, expressamos em bactérias E. coli uma proteína recombinante contendo a sequência da MSP119 de P. falciparum (PfMSP119) fusionada à flagelina FliC de S. enterica Typhimurium (His6FliC-PfMSP119). Demonstramos que esta proteína de fusão retém a capacidade da flagelina de ativar o receptor TLR5 da imunidade inata. A imunização de camundongos com somente esta proteína recombinante de fusão induziu altos títulos de anticorpos, além de células produtoras de IFN-g específicas contra a PfMSP119. A adição de adjuvantes como CpG ODN 1826 ou Quil-A (saponina de Quillaja saponaria) nas imunizações com a proteína recombinante de fusão foi capaz de imunomodular a resposta de anticorpos, aumentando os títulos de IgG2c, bem como de potencializar a resposta celular medida pela produção de IFN-g contra a PfMSP119. Os soros de coelhos imunizados com a His6FliC-PfMSP119 sem a adição de nenhum adjuvante apresentaram altos títulos de anticorpos específicos contra a PfMSP119, que foram capazes de inibir o crescimento do parasita in vitro. Esses resultados sugerem a estratégia de fusão de antígenos de plasmódios como uma alternativa viável de desenvolvimento de uma vacina barata e eficaz contra a malária. / The C-terminal region of Plasmodium merozoite surface protein 1 (MSP119) is being studied as one of the main targets for the development of a vaccine against malaria. Several studies have shown high imunogenicity of this region in experimental immunizations when injected in the presence of strong adjuvant formulations. In the present study we evaluate the possibility of using recombinant proteins based on the sequence of MSP119 to immunize mice by a mucosal route. Also, we generate new recombinant proteins consisting in the genetic fusion of the MSP119 to the flagellin FliC (flagellar protein of Salmonella enterica Typhimurium), to increase the immunogenicity of the antigen. Initially, we evaluated the capacity of the molecules cholera toxin (CT), heat-labile E. coli enterotixin (LT) or CpG ODN 1826, to act as adjuvants in mucosal intranasal immunization of mice with the recombinant proteins His6PvMSP119 or His6PvMSP119-PADRE (containing the universal T helper epitope PADRE). When administered in the presence of CT or LT, both recombinant proteins were highly immunogenic by the intranasal route. CpG ODN 1826 was less efficient as adjuvant by this route. The addition of CpG ODN 1826 in CT adjuvanted immunizations increased the specific IgG2c titers. These results showed that CT and LT are potent mucosal adjuvants in immunizations with recombinant malaria antigens and that CpG ODN 1826 can, in this case, be used as a tool to modulate the pattern of the immune response. Subsequently, we expressed a recombinant protein consisting of the sequence of PvMSP119-PADRE genetically fused to FliC (His6FliC-PvMSP119- PADRE). We showed that this fusion protein preserved the antigenic properties of PvMSP119 and the ability of flagellin to activate TLR5. The immunization of mice using this recombinant fusion protein induced high titers of specific antibodies and the presence of antigen-specific IFN-g producing cells in the spleen. The addition of CpG ODN 1826 in the vaccine formulations modulated the immune response by augmenting the specific titers of IgG2c. In addition, sera from immunized mice recognized the parasite in indirect immunofluorescence assay (IFA). Our results provided a new class of malaria vaccine formulation with intrinsic adjuvant property capable of stimulating specific humoral and cellular immune responses when administered alone or in the presence of other adjuvants. Finally, we expressed a recombinant protein containing the sequence of Plamodium falciparum MSP119 (PfMSP119) fused to FliC (His6FliC-PfMSP119). This fusion protein retained the capacity of flagellin to activate TLR5. Immunization of mice with the His6FliC-PfMSP119 alone induced high titers of specific antibodies and IFN-g producing cells. The addition of adjuvants such as CpG ODN 1826 or Quil-A (saponin of Quillaja saponaria) increased the levels of IgG2c and the cellular immune response, measured by the IFN-g secretion by immune spleen cells in culture. In addition, sera from immunized rabbits recognized the parasites in IFA and inhibited parasite growth in vitro. These results provide evidences that the fusion of malaria antigens to flagellin is an inexpensive and viable alternative for the development of a malaria vaccine. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2016-03-28T12:42:11Z (GMT). No. of bitstreams: 2 janaiara_cunha_ioc_mest_2014.pdf: 5340118 bytes, checksum: d30f5606e8d7731758e5708a036d73ec (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2016-01-13 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Os primatas neotropicais dos gêneros Saimiri e Aotus são modelos recomendados pela OMS para estudos experimentais da malária humana, pois são susceptíveis à infecção por plasmódios humanos e reproduzem de forma relativamente confiável a patologia e a imunidade observadas em humanos. Eles apresentam, entretanto, uma importante limitação: a necessidade de se esplenectomizar o animal para que as parasitemias sejam elevadas e consistentes. O objetivo desse estudo foi avaliar a influência da administração de lipossomo-clodronato (LC), utilizado para depletar monócitos/macrófagos em vários modelos experimentais, na infecção por Plasmodium falciparum em Saimiri sciureus. Realizou-se um experimento in vitro utilizando cultivo de esplenócitos de Saimiri, incubados em presença ou não de LC, quantificando-se a depleção de macrófagos por citometria de fluxo. Primeiro experimento: foram utilizados seis animais não esplenectomizados divididos em dois grupos que receberam 1mL PBS ou de LC (5mg/mL) a partir do dia 0 de infecção com inóculo contendo 106 hemácias parasitadas com P. falciparum (cepa FUP). Segundo experimento: foram utilizados 14 animais não esplenectomizados divididos em seis grupos - três grupos não infectados, com dois animais cada, que receberam 1mL PBS, ou 0,5mL ou 1mL de LC e três grupos infectados no dia 0 que receberam as mesmas administrações; sendo que o grupo que recebeu PBS tinha dois animais e os grupos que receberam LC tinham três animais cada. Em ambos os experimentos as administrações foram por via intravenosa duas vezes por semana a partir de dia 0. Após eutanásia, foram realizados exames histopatológicos e ensaio de expressão de citocinas em células esplênicas No ensaio in vitro o LC induziu uma citotoxicidade dose-dependente de monócitos/macrófagos. No primeiro experimento o grupo tratado com LC apresentou aumento na parasitemia alcançando valores superiores a 20% no d11 e requerendo tratamento. O grupo tratado com PBS apresentou parasitemia de 0,029% a 8,15% e foi capaz de controlar espontaneamente a infecção no d18. No segundo experimento os animais infectados que receberam 0,5mL LC apresentaram parasitemias mais elevadas (pico entre 16,1% e 26,7% entre d10 e d14) do que os outros grupos (grupo PBS - picos entre 6,3% e 17,7% entre d12 e d13, e grupo 1mL LC \2013 pico entre 4,8% e 8,8% entre d11 e d15). Em todos os animais infectados, a temperatura foi relacionada com a presença de parasitemia e a hemoglobina e o hematócrito diminuíram alcançando valores mínimos quando parasitos já não são mais detectáveis na circulação. Os animais toleraram clinicamente a administração de LC, mas apresentaram sinais histopatológicos de toxicidade hepática. Em conclusão, o LC é capaz de promover parasitemias mais altas em infecções de P. falciparum em primatas S. sciureus. A infecção esteve associada a evidências de depleção parcial de macrófagos como diferenças no tamanho dos baços e menor presença de ferro nos baços e fígados dos animais que receberam LC. Ensaios ainda precisam ser realizados para se estabelecer volumes mínimos funcionais e superar o problema da aparente toxicidade hepática / The WHO recommends the Neotropical primates of the genus Saimiri and Aotus as models for experimental studies of human malaria. The se monkeys are susceptible to infection by human P lasmodi a and reproduce relatively reliably the pathology and immunity observed in man . However, the model has a s limitation the need of splenectomy for the obtention of high and consistent parasitemias . The aim was to evaluate the influence of administration of clo dronate - liposome (CL), used to deplete monocytes/macrophages in several experimental models, in Plasmodium falciparum infected Saimir i sciureus . We conducted an experiment using in vitro culture of spleen cells from Saimiri incubated in the presence or abs ence of C L and quantifying the depletion of macrophages by flow cytometry. Other experiment s were: Exp. 1 : six non splenectomized animals were divided into two groups receiv ing 1 mL of PBS or 1 mL of C L (5mg/mL) from the d ay 0 of infection with 10 6 P. falc iparum (FUP strain) parasitized erythrocytes . Exp. 2 : 14 non - splenectomized animals were divided in six groups - three non - infected groups , with two animals each, receiv ing 1mL PBS, 0.5 mL or 1 mL CL ; and three infected groups receiving the same injections . The group that received PBS had two animals each; and the groups that received CL had three animals each . In both experiments the injections were intravenous, two times a week from d0. After euthanasia, histopathological examination and testing of cytoki ne expression in splenic cells were performed. In vitro assay : the CL induced a dose - dependent monocyte / macrophage cytotoxicity. In Exp 1, the CL treated group showed an increase in parasitemia reaching values higher than 20% at d11 and requir ed treatm ent. T he group treated with PBS showed parasitemia from 0.029 % to 8.15% and was able to spontaneously control the infection by d18. In Exp 2, the infected animals receiv ing 0.5 ml CL showed higher parasitaemia (peak s between 16.1% and 26.7% between d10 and d14) than the other groups (PBS group - peaks between 6.3% and 17 7% between d12 and d13, and 1mL CL group - peak between 4.8% and 8.8% between d11 and d15). In all infected animals, the temperature was related to the presence of parasitaemia and hemoglob in and hematocrit decreased , reaching minimum values during or after clearance of the parasite. The animals tolerated clinically the CL administration but showed histopahological signs of liver toxicity. Animals receiving CL showed less iron in the spl ee n , suggesting a decreased erythrophagocitosis . In conclusion, the CL is capable of promoting higher parasitemia in P. falciparum infect ed S. sciureus primates. The infection was associated with evidence s of partial depletion of macrophages , such as differe nces in the spleen size s and decreased presence of iron in the spleens and livers of animals receiv ing CL. However , more tests still need to be conducted to define the lower volum es of LC that are still functional , to overcome the problem of the apparent l iver toxicity.

Made available in DSpace on 2018-08-01T21:35:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_11601_Ata Defesa Filomena Alencar.pdf: 367178 bytes, checksum: 98d9dbf57524895e8047d690e2c631b2 (MD5) Previous issue date: 2017-12-11 / O comportamento da malária residual na região extra-amazônica difere daquele da região Amazônica, não apenas pelo reduzido número de casos registrados, mas também pela dispersão dos casos em área geográfica dentro do bioma de Mata Atlântica. Compreender o papel do portador assintomático de DNA de Plasmodium na cadeia de transmissão nessas áreas é importante para o aperfeiçoamento das políticas de eliminação e controle da endemia. Duas coortes foram conduzidas na região montanhosa do Espírito Santo. Uma para avaliar a persistência de positividade de DNA de Plasmodium em indivíduos detectados em estudo anterior e outra para calcular a incidência de DNA de Plasmodium entre moradores na vizinhança de um caso detectado. Na primeira, dos 48 portadores detectados num estudo realizado entre 2001 e 2004, 37 foram localizados e reavaliados entre 2010 e 2011, em três coletas com intervalo de três meses entre elas. Apenas dois moradores tiveram resultados de PCR positivos, revelando Plasmodium malariae como no primeiro inquérito. Na segunda coorte, após a notificação do primeiro caso de malária em 2010, os habitantes vivendo em um raio de 2 km em torno de sua casa, convidados a participar de um estudo de acompanhamento, responderam um questionário e forneceram amostras de sangue para PCR e gotas espessas e esfregaços, inicialmente e a cada visita de seguimento, em intervalos de três meses, durante 21 meses. Noventa e duas pessoas foram incluídas para acompanhamento. Na primeira coleta, todos eles eram assintomáticos. Um indivíduo foi positivo para Plasmodium vivax, um para Plasmodium malariae e um para P. vivax e P. malariae, correspondendo a uma prevalência de 3,3% (2,2% para cada espécie). Durante o seguimento, foram registrados quatro novos casos positivos na PCR (dois para cada espécie), correspondendo a uma incidência de 2,5 infecções/100 pessoas-ano ou 1,25 infecções/100 pessoas-ano para cada espécie. A análise com um modelo matemático de transmissão, utilizando uma baixa frequência de portadores humanos e a densidade vetorial na região, calculada com base em estudos anteriores na mesma localidade, cujos resultados foram submetidos a uma regressão linear, sugere que a cadeia de transmissão provavelmente não se baseia unicamente em portadores humanos, independentemente de serem sintomáticos ou não. Os achados da primeira coorte sugerem que moradores não tratados desta região extra-Amazônica inicialmente positivos para DNA de Plasmodium podem tornar-se negativos sem desenvolver sintomas aparentes da doença. Embora a possibilidade de reinfecção não possa ser descartada, a positividade para P. malariae em dois indivíduos, na primeira e na segunda pesquisas, pode ser compatível com estado de portador desta espécie em longo prazo. Sendo a maioria dos casos sintomáticos de malária na área decorrente de infecção por P. vivax, o impacto epidemiológico desse carreamento de P.malariae seria limitado. A baixa incidência de casos e a baixa frequência de portadores de malária assintomáticos tornam improvável que a cadeia de transmissão na região seja baseada unicamente em hospedeiros humanos, pois os casos são isolados uns dos outros por centenas de quilômetros e frequentemente por longos períodos de tempo, reforçando a hipótese de transmissão zoonótica.

Introdução: A malária autóctone no Estado de São Paulo (ESP) caracteriza-se por surtos esporádicos na região oeste e transmissão persistente na região leste onde ocorrem casos oligossintomáticos com baixa parasitemia pelo Plasmodium vivax. Objetivos: Analisar a completitude das fichas de notificação de malária autóctone; estimar a tendência da incidência de casos autóctones no ESP de 1980 a 2007; analisar o comportamento clínico e epidemiológico dos casos em duas regiões de autoctonia neste período. Métodos: Foi realizado um estudo descritivo com 19 variáveis das fichas de notificação de malária do ESP, analisadas em duas regiões e em dois períodos (1980-1993 e 1994-2007). Fontes de dados: SUCEN/SES/SP, SINAN/CVE/SES/SP e DATASUS. Resultados: A completitude foi superior a 85% em 11 variáveis. A tendência da incidência de malária autóctone no ESP foi decrescente. Foram notificados 821 casos de autoctonia, 91,6% na região leste, predominando P. vivax. A infecção assintomática teve maior porcentagem no segundo período (p<0,001). Discussão: A completitude das informações foi satisfatória. As diferenças clínicas encontradas merecem atenção da vigilância epidemiológica que deve lidar com o desafio da infecção assintomática por Plasmodium. / Introduction: Autochthonous malaria in São Paulo State is characterized by sporadic outbreaks in the west region and by persistent transmission with oligoassymptomatic cases in the east region, with low parasitemia by Plasmodium vivax. Objectives: To assess the completeness of autochthonous malaria reporting forms; to estimate autochthonous malaria incidence trends in São Paulo State from 1980 to 2007; to analyze the clinical and epidemiological patterns in two distinct regions of autochthony in this period. Methods: This was a descriptive study that analysed 19 report form variables, comparing the east and the west in two periods (1980-1993 and 1994-2007). Sources of secondary data: SUCEN/SES/SP, SINAN/CVE/SES/SP e DATASUS. Results: The completeness was over 85% on 11 variables. The autochthonous malaria incidence trend was decreasing. There were 821 cases of autochthony, 91.6% occurred in the east, predominantly caused by P. vivax. The asymptomatic infection had higher percentage in the second period (p <0.001). Discussion: The completeness of the information was satisfactory. The clinical differences observed deserve attention from surveillance that must deal with the challenge of asymptomatic infection by Plasmodium.

A malária é a doença parasitaria que mais mata no mundo. Metade da população mundial está sob risco de contrair a doença, que mata mais de 1 milhão de pessoas por ano, principalmente crianças com menos de 5 anos de idade. A periodicidade das febres é o sintoma característico da doença. A febre é resultado da lise dos eritrócitos mediada pela saída do parasita, para infectar novas células. Esse evento é sincronizado, com os parasitas rompendo as células ao mesmo tempo. Para que isso aconteça, os eventos celulares que são necessários para a maturação do parasita dentro do eritrócito tem que ser finamente regulada. O hormônio circadiano melatonina é o sinal que sincroniza o ciclo intraeritrocítico do Plasmodium. Neste trabalho, reportamos que a sincronia observada na maioria das espécies do parasita pode ser usada por ele como meio de evadir o sistema imune do hospedeiro e assegurar a continuidade da infecção. Quando dessincronizamos o desenvolvimento do parasita P. chabaudi utilizando luzindol, um antagonista da melatonina, foi observado que o uso de uma dose sub-otima do antimalárico cloroquina aumenta a sobrevida de camundongos infectados. Reportamos também que P. berghei, parasita de roedor que possui uma infecção não sincronizada, não percebe o hormônio. Diferentemente do que é observado com espécies que possuem sincronia, a melatonina falhou em induzir aumento de cálcio intracelular ou sincronizar o ciclo de vida do parasita in vitro. No trabalho também é relatado a construção de vetores para nocauteamento de genes em Plasmodium, afim de se conhecer a função das genes alvo por análise de fenótipo. / Malaria is the most killing parasitic disease in the world. Half of the world population is at risk of contracting the disease, which kills over 1 million people, being children under 5 the most affected. The fever periodicity is the characteristic symptom of the disease. The fever is a result of the burst of the erythrocyte when the parasite leaves the host cell to infect other ones. This event is highly synchronous, with the parasites going out of the cells at the same time. For this to happen, the cellular events that are necessary for parasite growth have to be very well regulated. The circadian hormone melatonin is the signal that synchronizes the intraerythrocytic cycle of Plasmodium. In this work, we report that this synchrony, observed in the majority of the parasites species, could be used as a way to evade the immune system, assuring the continuity of the infection. When we disrupt this synchrony with luzindole, a melatonin antagonist, we observe that a suboptimal dose of the antimalarial chloroquine increases the survival of the infected mice. We also report that P. berghei, rodent parasite that possess and unsynchronized infection, cant perceive the hormone. Unlike what is observed in species that have a synchronous infection, melatonin fail to induce intracellular calcium increase or promote cell cycle synchronization in vitro. Here we also report the construction of knockout vector for Plasmodium, to be used to investigate the functions of the target genes by phenotype analysis.

A identificação de focos de transmissão pode ser de grande utilidade no controle da malária. Por esse motivo, hospitais em regiões endêmicas buscam saber os locais que foram visitados anteriormente por pacientes. No entanto, tais informações, obtidas através de questionários fornecidos aos pacientes, são geralmente vagas e muitas vezes imprecisas. Isto torna o processo manual, lento e de pouca valia em estudos epidemiológicos de larga escala. Baseando-se no fato de que uma parcela significativa da população possui celulares com GPS, o objetivo deste projeto é melhorar a acurácia, organização e dinâmica do processo de coleta de dados de geolocalização de pacientes infectados. Um sistema (https://sipos.fcf.usp.br) foi desenvolvido para que pacientes que chegam aos hospitais possam, sob consentimento voluntário, fornecer os dados de GPS dos seus celulares. Os dados dos usuários, que são tratados de forma anônima, são automaticamente processados e armazenados de forma segura. Através do sistema SiPoS Explorer, epidemiologistas e especialistas em saúde pública podem explorar e analisar os dados de geolocalização, permitindo, desta forma, que regiões vulneráveis sejam priorizadas durante campanhas de controle. / The identification of regions with high rates of infection can be of great use in the control of malaria. For this reason, hospitals in endemic regions seek to know the places previously visited by patients. However, such information, obtained through questionnaires provided to patients, is usually vague, inaccurate and not integrated into databases. This makes the process manual, slow and of little value in large-scale epidemiological studies. Based on the fact that a significant portion of the population has smartphones equipped with GPS, this project aims to improve the accuracy and organization of the process of collecting geolocation data from infected patients. The Sickness Positioning System (https://sipos.fcf.usp.br) was developed so that patients who arrive at hospitals can, with voluntary consent, provide the GPS data collected by their smartphones. User data, which is handled anonymously, is automatically processed and securely stored. Through the SiPoS Explorer system (https://sipos.fcf.usp.br/explorer), epidemiologists and public health experts can explore and analyze geolocation data, thereby allowing vulnerable regions to be prioritized during control campaigns.

Submitted by Marcos Anselmo (marcos.anselmo@unipampa.edu.br) on 2016-04-04T14:38:17Z No. of bitstreams: 1 Alessandra Melise Golke.pdf: 1584787 bytes, checksum: c4cea85302181139401e8596c156ca0a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-04T14:38:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Alessandra Melise Golke.pdf: 1584787 bytes, checksum: c4cea85302181139401e8596c156ca0a (MD5) Previous issue date: 2015-07-27 / A malária é causada por protozoários do gênero Plasmodium, sendo que o P. falciparum é responsável pela maioria das mortes. O quadro clínico dessa parasitose inclui febre, calafrios, cefaleia, vômito, diarreia, anemia, coma e morte. O mais antigo antimalárico é a quinina, um alcaloide obtido a partir da casca da árvore de espécies de Cinchona. Devido a sua toxicidade e ao surgimento de novos fármacos, seu uso foi limitado, porém voltou a ter maior importância em virtude da resistência do plasmódio a outros medicamentos. Uma alternativa para minimizar a toxicidade é o desenvolvimento de uma forma farmacêutica capaz de tornar esse fármaco menos tóxico, como os sistemas nanoencapsulados. O presente trabalho teve como objetivo verificar parâmetros hematológicos, bioquímicos e de estresse oxidativo em ratos Wistar tratados com nanocápsulas contendo quinina. Os animais foram divididos em quatro grupos, os quais receberam os seguintes tratamentos: controle (solução salina - NaCl 0,9%); quinina livre (75mg/Kg/dia); nanocápsulas brancas; nanocápsulas contendo quinina (75mg/Kg/dia). As formulações foram administradas três vezes ao dia por via intraperitoneal durante sete dias consecutivos. No oitavo dia os ratos foram eutanasiados e o sangue venoso foi coletado para análises posteriores. O tratamento com nanocápsulas contendo quinina foi capaz de manter os níveis hematológicos dentro dos limites normais. Os marcadores das funções cardíaca, hepática e renal apresentaram níveis sanguíneos significativamente diminuídos no grupo tratado com nanocápsulas contendo quinina em relação ao grupo tratado com quinina livre. As enzimas antioxidantes catalase, superóxido dismutase e glutationa peroxidase apresentaram uma atividade significativamente mais elevada no grupo tratado com nanocápsulas contendo quinina comparado ao grupo quinina livre, assim como o nível de glutationa reduzida. A quinina foi capaz de induzir dano lipídico, proteico e genético, e sua nanoencapsulação atenuou o dano. Assim, estes resultados demonstraram que a nanoencapsulação pode ser eficaz na redução dos efeitos adversos causados pela quinina, tornando este medicamento mais seguro para o tratamento da malária. / Malaria is caused by protozoa of the genus Plasmodium, which P. falciparum is responsible for the most deaths. The clinical picture this parasitosis include fever, chills, headache, vomit, diarrhea, anaemia, coma and death. The oldest antimalarial is quinine, an alkaloid obtained bark species Cinchona. Due to their toxicity and the appearance of new drugs, its use was limited, but again had greater importance because to Plasmodium resistance to other drugs. An alternative to minimize toxicity is the development of a pharmaceutical form capable of less toxic drug, as nanoencapsulated systems. This present work had objective to verify hematological, biochemical and oxidative stress parameters in rats Wistar treated with nanocapsules containing quinine. The animals were divided into four groups which received the following treatments: control (solution saline - 0.9% NaCl); free quinine (75mg/kg/day); blank nanocapsules; quinine-loaded nanocapsules (75 mg/kg/day). The formulations were administered three times a day intraperitoneally during seven consecutive days. On the eighth day the rats were euthanized and venous blood was collected for followed analysis. Treatment with quinine-loaded nanocapsules was able to maintain the blood levels with normal limits. The markers of cardiac, hepatic and renal function showed blood levels significantly decreased in the group treated with quinine-loaded nanocapsules compared to the group treated with free quinine. The antioxidant enzymes catalase, superoxide dismutase and glutathione peroxidase were significantly higher activity in the group treated with quinine-loaded nanocapsules compared to free quinine group, as well as the level of reduced glutathione. Quinine was able to induce lipid, protein and genetic damage, and its nanoencapsulation attenuate the damage. Then, these results demonstrate that nanoencapsulation can be effective in reducing the adverse effects caused by quinine, making this a safer medicament for treatment malaria.