In the present thesis called "The modern analytical methods for detection of aminoacids asociated with malignant prostate tumours" sarcosine has been studied as a potential tumor marker which has significance for the diagnosis of aggressive forms of prostate cancer. The effect of addition of sarcosine prostate line PC3 has been also studied as well. Next studied area were the the interactions with amino acid sarcosine, sodium chloride, uric acid and uracil. We have primarily focused also on the development of methods for the detection of sarcosine in urine samples of patients with Cap and prostate cells.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Farmácia. / Made available in DSpace on 2012-10-21T01:07:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 189867.pdf: 467663 bytes, checksum: c88638f16a989b70e52ce3a6754550c6 (MD5) / O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito anti-hiperplásico prostático do extrato bruto hidroalcoólico, fração supercrítica e diclorometânica de Calendula officinalis e alguns fitosteróis. Foram utilizados: ratos machos de 40 dias (peso: 140 g, n= 6) foram castrados e submetidos a tratamento com testosterona (T 2,4 mg/kg rato) durante 7 dias para indução da hiperplasia prostática (HP). Posteriormente, foram submetidos a tratamento por 30 dias com fração supercrítica (SC 12 mg/kg), fração diclorometânica (DCM 1, 12, 80 mg/kg) e extrato bruto hidroalcoólico (EB 300 mg/kg) de C. officinalis e alguns fitosteróis como b-sitosterol (BS), estigmastadienona (EM), estigmasterol (EL), estigmastanol (ET). Após tratamento, os ratos foram sacrificados, sendo o sangue coletado para análise de fosfatase ácida (FA) e colesterol. A próstata e a vesícula seminal foram retiradas e pesadas para comparação com o grupo controle e medidas das concentrações de T e diidrotestosterona (DHT). O peso da próstata (PP) para extrato e frações apresentou redução estatisticamente significativa de 43% e 54% para DCM e SC respectivamente; FA apresentou redução de 37%, e 43% para SC e EB. A DHT apresentou redução de 59%, 43% e 39% para SC, DCM e EB respectivamente. Para o estudo dose-dependente com DCM o PP apresentou uma redução de 30% para 80 mg/kg; FA apresentou redução de 33% e 52% para 1 e 80 mg/kg. T apresentou um aumento de 89% e 164% para 1 e 80 mg/kg e DHT apresentou redução de 64%, 52% e 82% para 1, 12 e 80 mg/kg respectivamente. No tratamento com fitosteróis o PP apresentou redução de 49% para BS, 35% para EM, 26% e 25% para EL e ET. FA apresentou redução de 32%, 31% e 28% para BS, ET e EL respectivamente. DHT apresentou redução de 60% para BS, 43% e 40% para EL e ET e 33% para EM. A partir dos dados obtidos, conclui-se que as frações DCM e SC da C. offocinalis, ambas ricas em fitosteróis, apresentaram um potencial anti-hiperplásico prostático no modelo testado, sendo este efeito é dose-dependente para DCM. Todos os fitosteróis testados apresentaram efeito significativo sobre a HP, sendo que o BS foi o mais efetivo.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro Tecnológico. Programa de Pós-Graduação em Engenharia Elétrica. / Made available in DSpace on 2012-10-21T14:56:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 206416.pdf: 2864791 bytes, checksum: 921430ee9f17b71aeb173d23687ecefd (MD5) / O presente trabalho aborda o desenvolvimento e implementação de um sistema especialista on-line na área urológica para o auxílio ao diagnóstico de câncer de próstata (SEDACaP). O câncer de próstata é um dos mais comuns cânceres entre os homens e a segunda mais freqüente causa de morte por câncer em homens. Devido ao longo período para se descobrir a presença do câncer ainda em estágio precoce, fase que ainda há tratamento para a cura da doença, a prevenção através de diagnóstico precoce da doença na forma localizada é uma estratégia que pode salvar vidas. O SEDACaP é uma ferramenta computacional capaz de gerenciar todos os dados clínicos de pacientes, e através de processamento do sistema especialista, operando via Internet, auxiliar o médico na detecção da tendência da doença, principalmente em casos em que há suspeita de câncer de próstata. Foi realizado um amplo estudo sobre o câncer de próstata e outras doenças benignas da próstata. Foram analisados os procedimentos clínicos para o diagnóstico do câncer de próstata para que o sistema refletisse o mais próximo possível estes procedimentos. Por meio de uma minuciosa pesquisa, foi modelada a estrutura de banco de dados para o armazenamento e gerenciamento completo dos dados clínicos de pacientes. O sistema foi desenvolvido com arquitetura em camadas, e de forma modular. O sistema especialista é um módulo do sistema e utiliza os dados clínicos armazenados para o processamento. A máquina de inferência está incorporada ao módulo especialista e ela foi desenvolvida especialmente para este sistema, para que o seu processamento fosse otimizado, aumentando conseqüentemente a performance. O sistema foi testado com casos clínicos reais para a avaliação dos resultados do sistema especialista em comparação com o resultado da última biópsia desses pacientes. Foram utilizados os valores de corte de 50% e 75%. O valor de corte de 50% resultou na sensibilidade de 100%, especificidade de 25% e acurácia de 60%. O valor de corte de 75% resultou na sensibilidade de 85,7%, especificidade de 81,3% e acurácia de 83,3%. O sistema apresentou em testes práticos a capacidade de gerenciar, de forma confiável, as sessões de usuários utilizando paralelamente o sistema, inclusive para o processamento especialista. O sistema especialista apresentou bons resultados, mostrando um grande potencial de auxílio médico para o diagnóstico.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. / Made available in DSpace on 2012-10-18T09:02:30Z (GMT). No. of bitstreams: 0Bitstream added on 2014-09-25T21:35:07Z : No. of bitstreams: 1 176464.pdf: 9415880 bytes, checksum: 4b6fce9c282e2c488a90ee2d8f55d3d5 (MD5) / As evidências da participação do óxido nítrico (NO) na função prostática nos levaram a estudar o envolvimento deste na Hiperplasia Prostática Benigna (HPB). Na sintomatologia obstrutiva da HPB são identificados um componente mecânico, que consiste no crescimento do tecido glandular, e um dinâmico, relacionado ao aumento do tônus da musculatura lisa da próstata e uretra, estimulada pelos receptores a1-adrenérgicos e onde o NO pode exercer um papel regulatório. Atualmente a finasterida e o PermixonÒ são os medicamentos mais utilizados para o tratamento da HPB. Este trabalho buscou relacionar o envolvimento do NO na patogenia e nos efeitos dos tratamentos para a HPB, utilizando um modelo de hipertrofia prostática (HP) em ratos. Após 30 dias de tratamento, ocorreu uma redução nos níveis de NO nos animais com HP. O PermixonÒ aumentou o NO para níveis próximos aos dos animais normais, o que pode representar um mecanismo de ação na melhora dos sintomas. A finasterida não alterou os níveis de NO. A diminuição dos níveis de NO na próstata com HPB pode influenciar os sintomas obstrutivos resultantes de uma exacerbação dos efeitos a-adrenérgicos sobre a contração da musculatura lisa prostática. Algumas evidências indicam uma relação entre HPB e câncer prostático através de alterações nas defesas antioxidantes do tecido prostático que levariam às lesões no DNA. Assim, foi avaliado o estresse oxidativo nos ratos com HP. Ficou caracterizada uma condição de estresse oxidativo vinculada à HP, através dos níveis diminuídos de três enzimas antioxidantes e aumento do dano celular no fígado de ratos.

Resumo: O câncer de próstata é a neoplasia visceral maligna mais frequente no mundo. Suas taxas de incidência podem variar de acordo com a exposição da população estudada aos múltiplos fatores de risco associados a essa neoplasia. O objetivo desta tese é avaliar o efeito de diversos potenciais fatores de risco nas taxas de indicação de biópsias prostáticas e detecção de câncer de próstata em uma amostra da população de Curitiba (PR). Foram incluídos neste estudo 2.086 homens com idades entre 40 e 79 anos, participantes do Programa de Rastreamento de Câncer de Próstata do Instituto Curitiba de Saúde, entre 2006 e 2011. A análise estatística incluiu risco relativo (RR) com intervalo de confiança de 95% (IC 95%) e regressão logística múltipla. Os resultados foram considerados estatisticamente significantes para valor de p < 0,05 e IC 95% não incluindo a hipótese de nulidade (IC 95% ? 1,00). A taxa de indicação de biópsias prostáticas aumentou progressivamente com a faixa etária dos participantes, sendo de 4,7% entre 40-49 anos, 10,4% entre 50-59 anos, 29,4% entre 60-69 anos e 37,3% entre 70-79 anos; foi maior na presença de história familiar para câncer de próstata (19,5%) do que na sua ausência (12,3%); foi mais elevada nos portadores de hipertensão (17,6%) do que naqueles sem hipertensão (10,5%); e foi inferior em ex-fumantes (12,7%) do que em não fumantes (14,3%). Etnia (afrodescendentes ou não afrodescendentes) e escolaridade foram preditivos para a indicação de biópsias prostáticas quando avaliados isoladamente, mas não quando outros fatores de risco foram incluídos simultaneamente na análise. Raça (brancos, pardos ou pretos), histórico pessoal de vasectomia, diabetes mellitus, uretrites e tabagismo (fumantes ativos versus não fumantes) não foram associados à indicação de biópsias prostáticas. A taxa de detecção de câncer de próstata foi maior com o avançar da idade, com 0,8% entre 40-49 anos, 2,1% entre 50-59 anos, 8,1% entre 60-69 anos e 9,9% entre 70-79 anos; e foi superior em afrodescendentes (6,6%), em comparação a não afrodescendentes (3,1%). História familiar para câncer de próstata, escolaridade, histórico de vasectomia e hipertensão arterial foram preditivos para a detecção de câncer de próstata quando avaliados isoladamente, mas não quando outros fatores de risco foram incluídos na análise. Fatores que não demonstraram correlação com a detecção de câncer de próstata incluíram raça, histórico de diabetes, uretrites e tabagismo. Concluindo, os principais fatores preditivos para a indicação de biópsias prostáticas são faixa etária, histórico de câncer de próstata na família, histórico pessoal de hipertensão arterial e tabagismo (ex-fumantes versus não fumantes); enquanto os fatores de risco mais relevantes para a detecção de câncer de próstata são a faixa etária e a etnia do indivíduo.

Orientador: Laurecir Gomes / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-09T02:08:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_SilviaBorgesPimentelde_D.pdf: 1168180 bytes, checksum: da1367852d18352f97fbfe0c374bf4c0 (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: Interações entre o epitélio e o mesênquima/estroma são importantes em diversos estágios da morfogênese, na diferenciação celular e na função geral de diversas glândulas. Na próstata, a função secretora do epitélio nos animais adultos é regulada por andrógenos que tem participação direta na manutenção do estado ativo da glândula. Sabe-se que o endotélio é um dos primeiros elementos prostáticos a responder à eliminação do estímulo androgênico e a responder à sua reposição. Entretanto, a célula endotelial não apresenta receptor para andrógenos, o que leva a crer que a modulação do seu comportamento ocorra indiretamente pela ação de fatores locais produzidos por diferentes tipos celulares. Este trabalho teve como objetivo isolar, caracterizar e cultivar células endoteliais prostáticas, assim como avaliar a possível regulação do seu comportamento por células musculares lisas que correspondem ao principal tipo celular do estroma prostático. Culturas primárias de células endoteliais da próstata de ratos foram obtidas e caracterizadas a partir de sua morfologia e expressão do fator von Willebrand e dos receptores Flk-1 (VEGFR-1) e Flt-1 (VEGFR-2) marcadores específicos de células endoteliais, e de sua habilidade em formar estruturas parecidas com capilares quando cultivadas sobre Matrigel. Não foi observado efeito sobre a proliferação celular quando estas células foram cultivadas na presença de meio condicionado por células musculares lisas, sobre diferentes substratos (plástico, colágeno, matrigel). Entretanto, o meio condicionado pelas células musculares lisas reforçou o efeito de indução da diferenciação em estruturas similares a capilares. Foi também detectado que o meio condicionado inibe a secreção de angiopoietina-1 pelas células endoteliais quando cultivadas sobre colágeno e estimula a secreção de angiopoietina-2 quando as células foram cultivadas sobre Matrigel. Os dados obtidos demonstram que o protocolo utilizado resultou em uma população homogênea de células endoteliais prostáticas e que, as células musculares lisas, produzem fatores solúveis capazes de regular diferencialmente o comportamento das células endoteliais, de acordo com o substrato / Abstract: Interactions between the epithelium and mesenchyme/stroma are important in different stages of morphogenesis, differentiation and function of most glands. In the prostate, the secretory function of the epithelium in adult animals is regulated by androgens, which have direct roles in maintaining prostate activity. It is well known that the endothelium is the first prostatic compartment to respond to androgen deprivation and to its reposition after castration. However, the endothelial cell does not express the androgen receptor and this led us to believe that the altered behavior in response to androgen is modulated by soluble factors produced by other cell types that can sense androgen levels. The objective of this work was to isolated, characterize and culture prostatic endothelial cells, as well as to evaluate its possible regulation by smooth muscle cells, which are the predominant cell type in the prostate stroma. Primary cultures of rat ventral prostate endothelial cells were isolated, maintained in culture and characterized by their morphology, expression of von Willebrand factor, Flk-1 (VEGFR-1) and Flt-1 (VEGFR-2) receptors, and ability to form capillary-like structures on Matrigel. When these cells were cultured in the presence of smooth muscle cell conditioned medium, on different substrata (plastic, collagen, matrigel) there was no variation in cell proliferation. However, the smooth muscle cell conditioned medium reinforced the formation of capillary-like structures in Matrigel. It was also observed that the smooth muscle cell conditioned medium inhibited the secretion of angiopoietin-1 when the cells were cultured on collagen and stimulated the secretion of angiopoietin-2 when the cultured on Matrigel. Altogether, our data indicate that the protocol employed here resulted in a highly homogenous population of prostate-derived endothelial cells and that smooth muscle cells produce soluble factors capable of differentially regulating the behaviour of endothelial cell, as a function of the substratum / Doutorado / Biologia Celular / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Sebastiao Roberto Taboga / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-09T02:18:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Campos_SilvanaGiselePegorinde_D.pdf: 8120725 bytes, checksum: 6e1192220bc56007d359fcae3023e8d1 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: Há um grande interesse em melhor compreender a biologia da próstata devido à sua alta propensão em desenvolver lesões proliferativas, estando entre as mais comuns neoplasias que acometem o homem na atualidade. Entre os fatores de risco que contribuem para o aumento destas doenças destaca-se o envelhecimento, período em que ocorrem acentuados desequilíbrios hormonais. Vários grupos de pesquisa vêm tentando desenvolver, caracterizar e validar modelos roedores para análise do câncer de próstata sob diferentes aspectos e, modelos autóctones, têm desempenhado papel relevante nesse campo. Neste trabalho foi realizada a avaliação do comportamento biológico da próstata ventral do roedor gerbilo (Meriones unguiculatus) em fases distintas de seu desenvolvimento pós-natal. Em uma primeira etapa caracterizou-se através de análises morfológicas (estruturais e ultra-estruturais) e quantitativas os componentes celulares dos compartimentos epitelial e estromal, bem como o papel funcional de suas populações celulares na glândula. Para tanto foram utilizados gerbilos jovens, adultos e velhos. Considerando a próstata de animais jovens, constatou-se que nestes a glândula encontra-se estrutural e funcionalmente imatura. Já em animais adultos e velhos a atividade sintética está bem estabelecida e permanece estável nestas duas idades. Entretanto, a morfologia prostática em animais velhos apresentou-se diferenciada. Em uma mesma glândula puderam ser constatadas regiões funcionais com epitélio secretor semelhante aos adultos e, em outras, áreas completamente alteradas, dispondo de lesões histopatológicas. O comportamento prostático nas três fases do desenvolvimento analisadas foi diretamente influenciado pelos níveis de testosterona no soro, comprovando a importância desse andrógeno para homeostase e funcionalidade glandular. E, em animais velhos, o declínio de testosterona esteve associado a alterações proliferativas na glândula. Devido a essas constatações em uma segunda etapa, avaliou-se, exclusivamente, a próstata de animais velhos com o intuito de se caracterizar os principais tipos de lesões que podem acometê-la. As alterações mais freqüentes foram de origem epitelial, como as neoplasias intra-epiteliais (PIN), carcinomas microinvasivos e adenocarcinomas. O potencial invasivo das células anômalas pôde ser comprovado ultra-estruturalmente através da ruptura da membrana basal em alguns ácinos. No estroma, hiperplasia celular, quando constatada, esteve sempre associada a sítios de epitélio anômalo. Adicionalmente, uma maior deposição de fibrilas de colágeno (gerando fibrose estromal) foi encontrada em todos gerbilos velhos analisados. Parâmetros nucleares e nucleolares somente não foram efetivos para diagnosticar o potencial de severidade das alterações. Os índices de proliferação e morte celular, porém indicaram maior turnover celular à medida que alterações histopatológicas tornaram-se invasivas. A partir destes dados constatou-se que o gerbilo é um bom modelo para análise do comportamento prostático em diferentes fases do desenvolvimento pós-natal. Adicionalmente, o animal velho tem alta propensão em desenvolver alterações prostáticas espontâneas e estas podem auxiliar na melhor compreensão da evolução biológica do câncer prostático humano propriamente / Abstract: There is a great interest in understanding the prostate biology due to its high propensity in developing proliferative lesions. At the present time, this kind of illnes is one of the most common neoplasias which may damage men. Among the risk factors that contribute to the prostate cancer increase stands out aging, period when an accentuated hormonal unbalances happens. Several research groups are trying to develop, characterize and validate rodent models for analysis of the prostate cancer and, autochthonous models have been playing a relevant role in these aspects. In the present work, the biological behavior evaluation of the ventral prostate of gerbil rodent (Meriones unguiculatus) was accomplished in three different phases of postnatal development. Initially, the cellular components of epithelial and stromal compartments, as well as, the functional activity of those cellular populations in the gland were characterized through morphologic (structural and ultrastructural) and quantitative analyses. For this, young, adult and old gerbils were employed. Considering the prostate of young animals, it was verified that the prostate gland is structural and functionally immature. In adult and old animals the synthetic activity is well established and remained stable. However, in old animals, the prostatic morphology presented alterations. In a same gland it could be observed functional areas with a secretor epithelium similar to adults and regions completely modified, exhibiting histopathologic lesions. The prostatic behavior in the three phases of development was influenced directly by the serum testosterone levels, proving the importance of this androgen for glandular homeostasis and its functionality. In the old animals the testosterone decline was associated to the proliferative alterations presented in the gland. Because of these results, in a second stage of experiments, it was evaluated only the prostate of old animals with the purpose of characterizing the main types of lesions which may be develop in these gerbils. The most frequent changes noted were those originated in the epithelium, as the prostatic intraepithelial neoplasia (PIN), microinvasive carcinomas and adenocarcinomas. Ultrastructurally, the invasive potential of anomalous cells could be confirmed by the basement membrane disrupted noted in some acini. In the stroma, the cellular hiperplasia, when verified, it was always associated to the anomalous epithelium sites. Additionally, a larger deposition of collagen fibrils, which generates stromal fibrosis, it was found in all old gerbils analyzed. Nuclear and nucleolar parameters were not effective in diagnosing the severity potential of those alterations. The cellular proliferation and death indexes, however, indicated a larger cellular turnover according as the histhopatologic lesions become invasives. Concluding, these analyses allow confirming that the rodent gerbil is a good model for prostate behavior analysis in different phases of postnatal development. The old animal revealed a high propensity in developing spontaneous prostatic alterations and these changes may help to comprehend the natural course of the neoplasia's multistep and its biological behavior, contributing to a better understanding of the human prostate cancer / Doutorado / Biologia Celular / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Hernandes Faustino de Carvalho / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-15T10:03:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cardoso_AlexandreBruni_D.pdf: 5087353 bytes, checksum: c88d322680c216b0a0f0c99aef894042 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: Importante glândula acessória do trato reprodutor de mamíferos, a próstata é um órgão alvo de várias doenças benignas e malignas, que ocorrem principalmente com o envelhecimento. Tanto o desenvolvimento prostático pós-natal como a regressão da glândula após a ablação hormonal são caracterizados por intensa modificação no comportamento das células e remodelação da matriz extracelular (MEC). As metaloproteinases de matriz (MMP) constituem uma família de enzimas que degradam principalmente componentes de MEC. Portanto, pareceu-nos plausível que as MMPs tenham papel crucial na remodelação tecidual que ocorre em decorrência dos eventos morfogenéticos da próstata ventral (PV) e na progressiva regressão prostática pós-castração. Assim, o objetivo desse trabalho foi investigar o papel da MMP-2 no desenvolvimento prostático pós-natal em roedores e das MMP-2, -7 e - 9 na regressão da PV de ratos pós-castração. Para isso, foram empregadas técnicas moleculares, bioquímicas e análises morfológicas. A aplicação do siRNA específico para MMP-2 comprometeu o crescimento, a ramificação, a formação de lúmen e a proliferação de células epiteliais da PV de ratos in vitro, além de provocar um acúmulo de fibras colagênicas no compartimento estromal. A PV do camundongo MMP-2-/- adultos apresentou peso relativo reduzido e um menor volume epitelial, que resultaram de menor proliferação epitelial, menor ramificação ductal e maior estabilização da matriz colagênica durante a primeira semana de desenvolvimento pós-natal. Na regressão da próstata ventral de ratos após a castração encontraram-se múltiplas ondas de morte celular e uma relação direta entre a expressão e atividade das MMP-2, -7 e -9 e o pico de apoptose que ocorre 11 dias após a castração. Conclui-se através dos resultados apresentados neste trabalho, que tanto o desenvolvimento prostático pós-natal, como a regressão prostática pós-castração são dependentes da expressão e atividade das MMPs. / Abstract: The prostate is an important gland of the reproductive tract of mammals, which is a target of several benign and malign diseases affecting the elder. Both postnatal prostate development and prostate regression after androgenic ablation are characterized by intense modification in cell behavior and remodeling of extracellular matrix (ECM). MMPs constitute a family of endopeptidases which are able to cleave preferentially ECM components. Thus, it seems reasonable that these enzymes play a crucial role in tissue remodeling that happens during the ventral prostate (VP) morphogenesis and in the prostate regression after castration. In this study, we aimed to define the involvment of MMP-2 in the postnatal prostate development of rodent and the involvement of MMP-2, -7 and -9 rat ventral prostate regression after castration. For this aim, we have used molecular, biochemical and morphological approaches. siRNA specific for MMP-2 compromised the rat VP growth, branching, lumen formation and epithelial cell proliferation, besides leading an accumulation of collagen fibers in the stroma. MMP-2-/- VP showed a reduced relative weight and epithelial volume, besides displaying a decreased epithelial proliferation and branching and a stabilization of collagen matrix at the end of the first postnatal week. In the prostate regression after castration, we found multiple waves of cell death and a direct association between activity and expression of MMP-2, -7 and -9 and an apoptotic peak that occurs at the 11th Day after castration. In conclusion, the results presented here showed that both postnatal prostate development and prostate regression after castration are dependent on the expression and activity of MMPs. / Doutorado / Biologia Celular / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Orientadores: Anibal Eugenio Vercesi, Roger Frigerio Castilho / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-10T16:53:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_KiviaAparecidaPontesde_M.pdf: 1348299 bytes, checksum: 60cf5041b7c98ff265e1fd5399cfef64 (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: As estatinas são inibidores da 3-hidroxi-3-metilglutaril CoA (HMG-CoA) redutase usados no tratamento de hipercolesterolemia. Estudos in vitro e in vivo têm demonstrado que as estatinas podem ter efeitos anti-cancerígenos. No presente estudo analisamos os mecanismos de toxicidade de sinvastatina e de lovastatina nas linhagens de câncer de próstata LNCaP e PC-3. Curvas dose-resposta do efeito das estatinas (0,1-100 µM) sobre as células LNCaP e PC-3 mostraram efeitos similares e maior sensibilidade das células PC-3 do que das células LNCaP. Tratamentos de células PC-3 com sinvastatina 10 µM durante 48 h induziu morte principalmente por apoptose, a qual foi associada ao aumento de 3 vezes da [Ca2+]cit. Tanto a apoptose quanto o aumento da [Ca2+]cit foram prevenidos por mevalonato 100 µM presente no meio de cultura. Isso indica que a inibição da HMG-CoA redutase leva à apoptose mediada por Ca2+. Pifitrina-a, inibidor da proteína supressora tumoral p53, não preveniu apoptose em células PC-3 (p53 negativas) nem em células LNCaP (p53 positivas). Isso mostrou que a apoptose de células de câncer de próstata induzida por estatinas é independente de p53. Sinvastatina 60 µM induziu morte de células PC-3 principalmente por necrose, a qual foi associada ao aumento de 3 vezes da [Ca2+]cit e à diminuição da respiração e do potencial de membrana mitocondrial. Tanto a necrose quanto a disfunção mitocondrial foram parcialmente prevenidas pelos compostos ciclosporina A (inibidor da transição de permeabilidade mitocondrial [TPM] e da fosfatase calcineurina), FK506 (inibidor de calcineurina) e boncrecato (inibidor da TPM). O aumento da [Ca2+]cit não foi prevenido por ciclosporina A, FK506 ou boncrecato, porém a complexação de Ca2+ citossólico com BAPTA protegeu as células PC-3 da necrose, sugerindo que o aumento da [Ca2+]cit seja um dos primeiros passos no processo de necrose celular, seguido pela ativação da via de calcineurina. Conclui-se que a apoptose induzida por sinvastatina em células PC-3 seja dependente da via do mevalonato enquanto que a necrose seja dependente da via da calcineurina associada à disfunção mitocondrial / Abstract: Statins are 3-hydroxy-3-methylglutaryl CoA (HMG-CoA) reductase inhibitors used in the treatment of hypercholesterolemia. Both in vitro and in vivo studies have demonstrated that statins may have anti-cancer effects. In the present study we analyzed the mechanisms of simvastatin and lovastatina toxicity to the human prostate cancer cell lines LNCaP and PC-3. Dose-response curves of statins (0.1-100 µM) effects upon LNCaP and PC-3 cells showed similar effects and higher sensitivity of PC-3 than LNCaP cells. Treatments of PC-3 cells with 10 µM simvastatin during 48 h induced death mainly by apoptosis, which was associated with a 3-fold increase in [Ca2+]cyt. Both apoptosis and [Ca2+]cyt increase were prevented by 100 µM mevalonate present in the culture medium. This indicates that the inhibition of HMG-CoA reductase is followed by Ca2+ mediated apoptosis. Pifithrin-a, an inhibitor of tumor suppressor p53 protein, did not prevented apoptosis either in PC-3 (p53 negative) or LNCaP (p53 positive) cells. This showed that apoptosis of prostate cancer cells induced by statins is p53 independent. At 60 µM, simvastatin induced death in PC-3 cells mainly by necrosis, which was associated with a 3-fold increase in PC-3 [Ca2+]cyt, and decrease in both respiration and mitochondrial membrane potential. Both necrosis and mitochondrial dysfunction were partially prevented by the compounds cyclosporine A (mitochondrial permeability transition [MPT] and calcineurin inhibitor), FK506 (calcineurin inhibitor), and bongkrekic acid (MPT inhibitor). Increase in [Ca2+]cyt was not prevented by cyclosporine A, FK506 or bongkrekic acid, but chelation of [Ca2+]cyt with BAPTA protected PC-3 cells from necrosis, suggesting rise in [Ca2+]cyt is one of the first steps in the process of cell necrosis and is followed by activation of the calcineurin pathway. We may conclude that simvastatin-induced apoptosis in PC-3 cells is dependent on the mevalonate pathway whereas necrosis is dependent on the calcineurin pathway associated with mitochondrial dysfunction / Mestrado / Biologia Estrutural, Celular, Molecular e do Desenvolvimento / Mestre em Fisiopatologia Médica

Orientador: Valéria Helena Alves Cagnon Quitete / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-23T04:47:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Kido_LarissaAkemi_M.pdf: 14026607 bytes, checksum: 4b5dcdcd04b3cf312f7b62cb4cf2ac2b (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: A senescência está associada a mudanças significativas no ambiente hormonal, sendo fator causador de alterações morfofuncionais na próstata. Os diferentes processos biológicos que ocorrem na próstata são regulados por polipeptídeos, dentre esses os fatores de crescimento do endotélio vascular (VEGF) e Endostatina, relacionados à angiogênese. Além disso, inibidores da enzima 5_ redutase-II, como a finasterida, tem papel importante no combate às doenças prostáticas. Assim, os principais objetivos desse estudo foram avaliar os efeitos estruturais e moleculares das terapias antiangiogênicas e da finasterida sobre a próstata ventral de camundongos durante a senescência. Noventa camundongos machos FVB de 18 e 52 semanas de idade foram divididos nos seguintes grupos: Jovem (JV) e Senil (SEN), os quais receberam injeções de Solução Fisiológica 0,9% (5 mL/Kg/dia s.c.); Finasterida (FIN): injeções de Finasterida (20 mg/Kg, s.c.); SU5416 (SU): SU5416 (6 mg/Kg, i.p.); TNP-470 (TNP): injeções de TNP-470 (15 mg/Kg, s.c.), e SU5416 + TNP-470 (SU+TNP): os mesmos tratamentos dos grupos SU e TNP. Após 21 dias de tratamento, amostras do lobo ventral da próstata foram coletadas e submetidas às análises morfológicas, imunohistoquímicas e Western Blotting. Os resultados demonstraram alterações moleculares e estruturais no microambiente prostático durante a senescência, como atrofia presença de células inflamatórias, e lesões proliferativas, as quais foram interrompidas e ou bloqueadas através dos tratamentos com as drogas antiangiogênicas e pela finasterida. Os resultados moleculares revelaram no grupo senil a diminuição das reatividades para AR e Endostatina, e aumento para ER-_, ER-_ e VEGF, quando comparados aos camundongos jovens. Os camundongos dos grupos tratados com finasterida, SU5416 e SU5416+TNP-470, quando comparados aos do grupo senil, demonstraram de forma geral diminuição das reatividades de VEGF e ER-_ e aumento de ER-_. Já o tratamento com TNP-470 foi marcado principalmente pela redução da reatividade e dos níveis protéicos de AR e ER-_, quando comparado aos grupos jovem e senil. Desta maneira, conclui-se que a senescência favoreceu a ocorrência de alterações estruturais e/ ou funcionais que sugerem o aparecimento de lesões malignas, em virtude do desequilíbrio na sinalização entre epitélio e estroma. O tratamento com finasterida, SU5416 e SU5416+TNP- 470 mostraram-se mais ativos na regulação dos processos proliferativos através da via estrogênica / Abstract: Senescence is associated with significant changes in the hormonal environment and is a cause of morphological and functional changes in the prostate. The different biological processes that occur in the prostate are influenced by different factors such as vascular endothelial growth factor (VEGF) and Endostatin, related to angiogenesis. Also, 5_-reductase inhibitors, such as finasteride, play an important role in treatment of prostatic diseases. Thus, the aims of this study were to evaluate the structural and molecular effects of antiangiogenic therapies and finasteride on the ventral prostate of mice during senescence. Ninety 52 and 18 week old male FVB mice, were divided into groups: Young (YNG) and Senile (SEN) groups, which received 0.9% saline (5 mL/kg/day sc) injections; Finasteride (FIN) group: Finasteride (20 mg/kg, sc); SU5416 (SU) group: SU5416 (6 mg/kg, ip) injections; TNP-470 (TNP) group: TNP-470 (15 mg/kg, sc) injections and SU5416+TNP-470 (SU+TNP470) group: The same treatment as the SU and TNP-470 groups. After 21 days of treatment, samples of the ventral lobe of the prostate were collected and analyzed for morphological, immunohistochemical and Western Blotting analyses. The results demonstrated structural and molecular changes in the prostatic microenvironment during senescence, such as atrophy, inflammatory cells, and proliferative lesions, which were interrupted and/or blocked by treatment with antiangiogenic drugs and finasteride. The molecular results revealed decreased reactivity for AR and Endostatin, and an increase for ER-_, ER-_ and VEGF in the senile group, when compared to young mice. The mice in the groups treated with finasteride, SU5416 and SU5416 + TNP-470, when compared to the senile group, showed in general decreased VEGF and ER-_ reactivities and increased ER-_ reactivity. The treatment with TNP-470 however, was marked mainly by reduced AR and ER-_ reactivity and protein levels, when compared to young and senile groups. Thus, it can be concluded that senescence contributed to the occurrence of structural and/or molecular alterations that suggest the onset of malignant lesions, due to the imbalance in the signaling between the epithelium and stroma. Treatments with finasteride, SU5416 and SU5416+TNP-470, were active in the regulation of proliferative processes by means of the estrogen pathways / Mestrado / Anatomia / Mestra em Biologia Celular e Estrutural