INTRODUÇÃO: Nos pacientes com câncer de próstata considerados de baixo risco, a braquiterapia de baixa taxa de dose (BBTD) utilizando sementes de 125I é uma excelente opção, com seguimento após o tratamento, devendo ser feito por meio de medidas seriadas de PSA. A avaliação de falha bioquímica após radioterapia, definida por elevação do PSA, tem sido feita pelo critério da ASTRO (American Society for Therapeutic Radiology and Oncology) e, mais recentemente, pelo critério do consenso de Phoenix. OBJETIVOS: Avaliar a sobrevida livre de falha bioquímica (SLFB) de pacientes submetidos à BBTD pelos critérios ASTRO e Phoenix e as relações entre eles com as falhas clínicas. Correlacionar essas sobrevidas com idade, grau histológico de Gleason, estadiamento clínico, PSA inicial, porcentagem de fragmentos positivos na biópsia, invasão perineural, volume prostático na ultra-sonografia diagnóstica, hormonioterapia neoadjuvante, bounce e D90 (dose recebida por 90% do volume de próstata). MÉTODO: Estudo retrospectivo de 329 pacientes tratados, entre julho de 1998 e dezembro de 2002, no serviço de Radioterapia do Hospital Sírio-Libanês, São Paulo. Foram excluídos 18 pacientes que tinham recebido braquiterapia associada à RT externa, 18 pacientes classificados como de alto risco, 61 casos com menos de dois anos de seguimento mínimo e 12, com dados incompletos nos prontuários. Portanto, 220 pacientes formaram a base desta análise. RESULTADOS: Cento e vinte e um (55%) pacientes foram classificados como de baixo risco e 99 (45%) de risco intermediário. O seguimento mediano foi de 53,5 meses (24 a 116); 74 pacientes (33,6%) fizeram algum tipo de bloqueio hormonal por um tempo mediano de 90 dias e 66 pacientes (30%) apresentaram bounce. O tempo médio para o aparecimento do bounce foi de 15 meses, com um nadir médio de 0,30ng/mL. A SLFB em cinco anos pelo critério ASTRO foi de 83% e de 88,3% pelo Phoenix (p < 0,05). Para os pacientes de risco baixo e intermediário, respectivamente, 86,7% e 78,4% pela definição ASTRO (p = 0,069) e 88,5% e 77,9% de acordo com Phoenix (p = 0,016). Na análise multivariada, PSA inicial < 10 ng/mL e porcentagem de fragmentos positivos < 50% foram fatores prognósticos favoráveis em relação à falha (p < 0,05) pelo critério ASTRO. De acordo com o critério Phoenix, PSA inicial < 10 ng/mL, grau histológico de Gleason < 7, porcentagem de fragmentos positivos < 50% e grupo de baixo risco foram os fatores independentes favoráveis, preditivos de falha bioquímica (p < 0,05). CONCLUSÕES: Os dados de sobrevida livre de falha bioquímica em cinco anos para pacientes de risco baixo e intermediário desta análise foram comparáveis aos da literatura. Nesta análise, não houve diferença entre as definições ASTRO e Phoenix de falha. PSA, escore de Gleason, porcentagem de fragmentos positivos na biópsia e grupo de risco foram os fatores prognósticos independentes para falha bioquímica. / INTRODUCTION: Patients with low-risk prostate adenocarcinoma may be very well treated by low dose-rate brachytherapy (LDR) using 125I seeds. Follow-up with periodical serum prostate specific antigen (PSA) dosages is used to determine the effectiveness of treatment. Biochemical relapse may be defined either by the American Society for Therapeutic Radiology and Oncology (ASTRO) definition, or, more recently, by the Phoenix Consensus criteria. PURPOSE: To evaluate and compare biochemical failure-free survival (BFFS) of patients treated with LDR brachytherapy using ASTRO and Phoenix criteria. Also, to correlate BFFS with age, Gleason score, clinical stage, initial PSA, percentage of positive prostate biopsies, perineural invasion, prostate volume at diagnostic ultrasound, neoadjuvant hormone therapy, bounce, and D90 (dose received by 90% of the prostate). METHODS: A cohort of 329 patients who received LDR brachytherapy for prostate cancer, between 1998 and 2002 at Hospital Sírio-Libanês, São Paulo, was retrospectively studied. Eighteen patients who received external beam irradiation were excluded, together with another 18 high-risk patients, 61 with less than 2 years minimal followup, and 12 with incomplete record data. So, 220 patients were the basis of this study. RESULTS: One hundred and twenty one (55%) were low-risk patients and 99 (45%) were intermediate-risk. Median follow-up was 53.5 months (24-116); 74 (33.6%) patients received neoadjuvant hormone therapy during a median period of 90 days, and 66 (30%) presented bounce. Mean time till bounce was 15 months, with mean nadir of 0,30ng/mL. The 5-year BFFS was 83% using ASTRO criteria, and 88.3% using Phoenix (p > 0,05). Low and intermediate-risk patients presented, respectively, 86.7% and 78.4% 5-year BFFS using ASTRO definition (p = 0,069), and 88.5% and 77.9%, considering Phoenix criteria (p = 0,016). In multivariate analysis, initial PSA < 10 ng/mL, and percentage of positive prostate biopsies < 50% were favorable prognostic factors, regarding biochemical relapse using ASTRO criteria (p < 0,05), while initial PSA < 10 ng/mL, Gleason score < 7, percentage of positive prostate biopsies < 50%, and low-risk group were detected as independent favorable prognostic factors using Phoenix definition (p < 0,05). CONCLUSIONS: The 5-year estimates of BFFS using both criteria, for low and intermediate-risk patients, were similar to previous published data, with no significant difference between them. Initial PSA, Gleason score, percentage of positive prostate biopsies, and risk group were independent prognostic factors for biochemical relapse.

Introdução: O câncer de próstata (CaP) é o tumor sólido mais diagnosticado no homem atualmente, e a sexta ocorrência mais frequente de casos novos de neoplasia maligna no mundo, sendo a segunda causa de óbito por câncer. O câncer de bexiga (CaB) é a segunda neoplasia maligna mais comum e a segunda em causa de óbito entre os tumores genito-urinários. Mundialmente o CaB é responsável por aproximadamente 386.000 novos casos e 150.000 óbitos por ano. O conhecimento das alterações em processos celulares envolvidos na sua carcinogênese nos permite melhor compreensão da patogênese dessas neoplasias, subsidiando, assim, mais efetivamente, o planejamento de estratégias de prevenção, diagnóstico e tratamento. Micro RNA (miRNA) são pequenas sequências não codificantes de RNA que possuem grande papel no controle da expressão dos genes, inibindo a tradução da proteína ou promovendo a degradação do RNA mensageiro (RNAm). Os miRNA estão envolvidos em vários processos celulares fisiológicos e patológicos, incluindo o câncer, onde podem atuar como oncogenes (oncomiR) ou como supressores de tumor (tsmiR). Previamente demonstramos que níveis elevados de miR-100 estão relacionados a recidiva bioquímica pós-prostatectomia radical enquanto no carcinoma urotelial de bexiga de baixo grau ocorre subexpressão desse miRNA. Objetivo: O estudo pretende analisar o papel do miR-100 na regulação de seus supostos genes alvo SMARCA5, THAP2, BAZ2A, mTOR e FGFR3 em linhagens de CaB e CaP e sua relação com a proliferação, apoptose e ploidia de DNA Material e Métodos: As linhagens de CaB (RT4 e T24) e CaP (DU145 e PC3) foram transfectadas com pré-miR-100, antimiR-100 e seus respectivos controles negativos utilizando lipossomas. Após a transfecção o nível de expressão de RNAm e proteína dos genes alvos foi analisado pelas técnicas da cadeia da polimerase quantitativa em tempo real (qRT-PCR) e western blotting respectivamente. A proliferação celular, apoptose e instabilidade cromossômica foram analisadas por citometria de fluxo. Resultados: A transfecção de pré-miR 100, reduziu de modo significativo a expressão de RNAm dos genes mTOR(p=0,006), SMARCA5 (p=0,007) e BAZ2A (p=0,03) na linhagem RT4, mTOR (p=0,02) e SMARCA5 (p=0,01) na linhagem T24, mTOR (p=0,025), THAP2 (p=0,04), SMARCA5 (p=0,001) e BAZ2A (p=0,005) na linhagem DU145 e mTOR (p=0,01) na linhagem PC3. Quanto a expressão proteica houve diminuição global da expressão de todas as proteínas varável de 22,5% a 69% nas quatro linhagens estudadas. Na linhagem T24 miR-100 promoveu um aumento na proliferação e o antimiR-100 induziu a apoptose demonstrando o papel oncogênico desse miR no câncer de bexiga de alto grau. Na linhagem PC3, do mesmo modo, a exposição ao antimiR-100 promoveu um aumento de células em apoptose. Conclusões: Demonstramos que miR-100 controla a expressão gênica e proteica de seus genes alvos nas linhagens de CaP e CaB. Os genes mTOR e FGFR3 são proto-oncogenes envolvidos com o desenvolvimento e progressão de neoplasias, enquanto os genes BAZ2A, SMARCA5 e THAP2 estão relacionados a regulação da transcrição, estabilidade genômica e indução da apoptose. Desse modo podemos admitir que miR-100 tem um papel contraditório no câncer, podendo se comportar como um oncomiR ou como um tsmiR, o que o classificaria como um miRNA \"contexto dependente\". Demonstramos porém que miR-100 tem um papel oncogênico na linhagem T24 de carcinoma urotelial de alto grau de bexiga promovendo um aumento na proliferação e inibição da apoptose. Na linhagem PC3 também o papel oncogênico de miR-100 pode estar relacionado a inibição da apoptose. Dada a variação de ação dos miRNA nos diversos tecidos e estágios tumorais, a determinação do seu papel nos diversos tumores é fundamental pois existe a possibilidade de utiliza-los como marcadores diagnóstico, prognóstico e como alvos para terapias moleculares / Introduction: Prostate cancer (PC) is the most commonly diagnosed solid tumor in men today, and the sixth most frequent occurrence of new cases of malignancy in the world, being the second cause of death by cancer in men. Bladder cancer (BC) is the second most common malignancy and the second cause of death among genitourinary tumors. Globally BC is responsible for approximately 386.000 new cases and 150.000 deaths per year. The knowledge of cellular processes involved in carcinogenesis allows us to better understand the etiology and pathogenesis of these neoplasms, supporting thus more effectively, planning strategies for prevention and treatment. Micro RNAs (miRNA) are small non-coding RNA sequences that have a large role in the control of gene expression by inhibiting protein translation or promoting the degradation of messenger RNA (RNAm). The miRNA are currently involved in various physiological and pathological cellular processes, including cancer where they can act as oncogenes (oncomiR) or tumor suppressors (tsmiR). Previously we demonstrated that high levels of miR-100 are associated with biochemical recurrence after radical prostatectomy while in low-grade bladder urothelial carcinoma it is persistently underexpressed. Objective: The study aims to examine the role of miR-100 in the regulation of its supposed target genes SMARCA5, THAP2, BAZ2A, mTOR and FGFR3 in BC and PC cell lines and its relationship with proliferation, apoptosis and chromosomal instability. Material and Methods: The BC (RT4 and T24) and PC cell lines (DU145 and PC3) were transfected with pre-miR-100, antimiR-100 and their respective controls using liposomes. After transfection RNAm and protein levels of its supposed target genes were analyzed by quantitative real time polymerase chain reaction (qRT-PCR) and western blotting. Cell proliferation, apoptosis and DNA ploidy were analyzed by flow cytometry. Results: After transfection of pre-miR 100, there was a significant reduction in the RNAm expression of mTOR (p=0.006), SMARCA5 (p=0.007) and BAZ2A (p=0.03) in RT4, mTOR (p=0.02) and SMARCA5 (p=0.01) in T24, mTOR (p=0.025), THAP2 (p=0.04), SMARCA5 (p=0.001) and BAZ2A (p=0.005) in DU145 and mTOR (p=0.01) in PC3. There was a reduction in the expression of all proteins, variable from 22.5% to 69% in all cell lines. In T24 miR-100 promoted an increase in cell proliferation and antimiR-100 promoted apoptosis characterizing miR-100 as an oncomiR in this cell line representative of a right grade urothelial carcinoma. Also in PC3 antimiR-100 promoted an increase in apoptosis. Conclusions: We have shown that miR-100 controls the expression of gene and protein of its supposed target genes in PC and BC cell lines. mTOR and FGFR3 are proto-oncogenes related to the tumor development and progression, while BAZ2A, SMARCA5 and THAP2 are related to the DNA transcription regulation, chromossomic stability and apoptosis induction. We can conclude that miR-100 has a contradictory role in cancer, behaving as an oncomir or tsmiR depending the type and stage of a specific neoplasia, classifying it as a \"context depending\" miRNA. In T24 cell line however miR-100 acts as an oncomiR increasing cell proliferation and inhibiting apoptosis. In PC3 cell line miR-100 also acts as an oncomiR inhibiting apoptosis. Due to the variation of roles of miRNAs in different tissues and stage of tumors, the characterization of their role in neoplasm is very important because of the possibility to use them as diagnostic or prognostic markers, even as targets for the development of new drugs

As técnicas de radioterapia vem sendo constantemente modificadas com a implementação de novas tecnologias visando aumentar a eficiência e diminuir a toxicidade dos tratamentos com radiação ionizante. Esse trabalho visa comparar as técnicas de radioterapia de intensidade modulada (IMRT) e a radioterapia em arco modulada volumetricamente (VMAT) em termos dosimétricos para o alvo e órgãos em risco além de avaliar a diferença do tempo de tratamento utilizando cada técnica. Para assegurar que os planejamentos seguiriam um padrão aceitável para ambas as técnicas, realizou-se primeiramente os planejamentos sugeridos pelo TG 119 da Associação Americana de Física Médica e compatibilidade dos resultados obtidos comparados com os dados da literatura. Tal comparação permitiu prosseguir para uma próxima etapa que consistiu da utilização de imagens de pacientes reais que foram submetidos a tratamentos de próstata e cabeça e pescoço, para a realização dos planejamentos utilizando as técnicas de IMRT e VMAT. A qualidade dosimétrica dos planejamentos utilizando ambas as técnicas foi avaliada em termos de conformidade e homogeneidade da dose no alvo e para os casos de pacientes com câncer de próstata, foram investigados os limites de dose em reto, bexiga e cabeça de fêmur, sendo avaliada a associação entre o volume de intersecção de reto e bexiga com o alvo. Para os   casos de pacientes com câncer de cabeça e pescoço, em termos dos limites de dose em medula, tronco cerebral e parótidas. Os planejamentos nos quais fez se uso da técnica de VMAT apresentaram valores semelhantes aos dos planos de IMRT. A análise dos tempos de tratamento para cada técnica avaliada mostrou que a VMAT reduz significativamente o tempo, até 67% para os casos de pacientes com câncer de próstata e até 36% para os casos de pacientes com câncer de cabeça e pescoço / The goal of this study was to compare the dosimetric aspects of volumetric-modulated arc therapy (VMAT) with those of intensity-modulated radiotherapy (IMRT) and to evaluate the delivery time and monitor unit differences between the two techniques, for applications in prostate and head and neck cancer treatment. First of all, to assure an acceptable pattern of treatment planning using both techniques, the TG119 of American Association of Medical Physics instructions were followed and the results of plans were compared to TG119 published data. The next step consisted of using real patients\' images, whose underwent prostate radiotherapy or head and neck radiotherapy, to planning IMRT and VMAT. The dosimetric quality of plans using both techniques was evaluated in terms of target dose conformity and target dose homogeneity The dose constraints for rectum, bladder and femoral head were analyzed and the association between the rectum intersection volume and bladder intersection volume to the target volume were evaluated for the prostate cases. The dose constraints for spinal cord, brainstem and parotids were investigated for the head and neck cases. Best or similar values were obtained for the VMAT plans in relation to IMRT plans. The analysis of treatment time indicated a significant reduction using VMAT, until 67% to the prostate cases and 36% to the head and neck cases

Submitted by Fabíola Silva (fabiola.silva@famerp.br) on 2018-01-04T16:27:03Z No. of bitstreams: 1 rildocesarnczorny_dissert.pdf: 922116 bytes, checksum: 21576df5fc3874640ad5d3bc25ba686f (MD5) / Made available in DSpace on 2018-01-04T16:27:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 rildocesarnczorny_dissert.pdf: 922116 bytes, checksum: 21576df5fc3874640ad5d3bc25ba686f (MD5) Previous issue date: 2017-03-24 / Objectives: To describe the profile of the male patient in a Primary Family Health Unit and identify risk factors for prostate cancer. Method: This is a descriptive, cross-sectional study, of quantitative approach developed in a Primary Family Health Unit integrated into the networkservice of the Unified Health System. The study sample comprised 150 male users who have been attended this unit for consultation and / or nursing reception in the month of November / 2015. Results: The majority of patients evaluated were between 61 and 80 years old (48 ¬- 32.00%); they were considered whites (91 - 60.67%), with a fundamental level of education (75 - 50.00%), with Monthly income of 2 to 3 minimum wages (55 - 36.67%). The majority of the patients were classified as sedentary (114 - 76.00%), ingesting alcohol (84 - 56.00%) up to twice a week (53 - 63.10%) and not smoking and Or use of inhaled drugs (113 - 75.33%). The majority of patients reported eating red (133-88.67%), milk (96-64.00%), fat (76-50.67%), fruits (115-76.67%), vegetables - 82.00%) and legumes (129 - 86.00%) five or more times per week, 23.33% had a history of prostate cancer (father or brother). The data indicated that the patients presented chronic diseases (82 - 54.67%), the main one being Systemic Hypertension (35 - 42.68%), followed by diabetes and Systemic Hypertension (20 - 34.39%), Diabetes (14 - 14.63%), and others (15-18.29%). Specific prostate antigen was the most frequent (84 - 56.00%) followed by rectal (48 - 32.00%), ultrasound (16 - 10.67%) and biopsy (12 - 8.00 %). Conclusions: Need for new strategies to sensitize younger men to seek care in the pursuit of disease prevention and health promotion. The main factors for prostate cancer reported by participants were age, schooling, sedentary lifestyle, use of alcoholic beverage, red meat intake, milk and milk products, fat and overweight. The present study suggests that the male population needs to be assisted according to the guidelines of the National Policy for Integral Attention to Human Health, and there may be a protocol of care with actions necessary for the knowledge of the situation and the impact on the morbidity and mortality profile aimed at This clientele. / Objetivos: Describir perfil del usuario hombre atendido en una Unidad de Salud de la Familia e identificar los factores de riesgo para el cáncer de próstata. Método: Se trata de una estudio transversal, enfoque descriptivo, cuantitativo desarrollado en una Unidad Básica de Salud de la Familia integrada al Sistema de Salud Servicio de red La muestra del estudio consistió en 150 hombres usuarios que se sirve esta unidad de consulta y recepción o de enfermería en noviembre / 2015. Resultados: La mayoría de los pacientes han de ser de entre 61-80 años (48 ¬ 32,00%) se consideran blancos (91 a la 60.67%), con educación primaria (75 a 50,00%) con uningreso mensual de 2 a 3 salarios mínimos (de 55 a 36,67%). La mayoría de los pacientes fueron clasificados como sedentarios (114 a 76.00%), ingiere alcohol (de 84 a 56.00%) hasta dos veces por semana (de 53 a 63.10%) y no tiene el hábito de fumar y o uso de drogas inhalables (113 a 75,33%). La mayoría de los pacientes informaron de comer carne roja (de 133 a 88.67%), leche (96 a 64.00%), grasas (76 a 50.67%), frutas (de 115 a 76,67%), verduras (123 - 82.00%) y legumbres (129 a 86.00%) cinco o más veces a la semana, 23.33% tenían antecedentes de cáncer de próstata (padre o hermano). Los datos indicaron que los pacientes con enfermedades crónicas (82-54,67%) Hipertensión siendo la principal (35 a 42,68%), seguido de la diabetes y la hipertensión (20 a 34,39%); diabetes (de 14 a 14,63%) y otra de (15 - 18,29%). La finalización del antígeno específico de la próstata se presentó la frecuencia más alta (84 a 56,00%), seguido de rectal (48 a 32,00%), ultrasonidos (16 a 10.67%) y biopsia (de 12 a 8,00 %). Conclusiones: La necesidad de nuevas estrategias para sensibilizar a los hombres más jóvenes a buscar el servicio en la búsque da de la prevención de enfermedades y promoción de la salud. Los principales factores para el cáncer de próstata reportados por los participantes fueron la edad, la educación, la inactividad física, el consumo de alcohol, el consumo de carne roja, productos lácteos, lasgrasas y el sobrepeso. Este estudio sugiere que la población masculina necesita ser asistida de acuerdo con las directrices de la Política Nacional de Atención Integral a la Salud del Hombre, y puede haber un protocolo de atención a las acciones necesarias para la comprensión de la situación y el impacto en la morbilidad y la mortalidad perfil frente esta clientela. / Objetivos: Descrever o perfil do usuário homem atendido em uma Unidade Básica de Saúde da Família e identificar os fatores de risco para o câncer de próstata. Método: Trata-se de um estudo descritivo, transversal, de abordagem quantitativa desenvolvido em uma Unidade Básica de Saúde da Família integrada ao serviço de rede do Sistema Único de Saúde. A amostra do estudo foi composta por 150 usuários do sexo masculino que foram atendidos nesta unidade para consulta e ou acolhimento de enfermagem no mês de novembro / 2015. Resultados: A maioria dos pacientes avaliados tem idade ente 61 a 80 anos (48 - 32,00%), consideram-se brancos (91 – 60,67%), com escolaridade de nível fundamental (75 – 50,00%), com renda mensal de 2 a 3 salários mínimos (55 – 36,67%). A maior parte dos pacientes foi classificada como sedentária (114 – 76,00%), ingere bebida alcoólica (84 – 56,00%) até duas vezes na semana (53 – 63,10%) e não apresenta o hábito de fumar e ou uso de drogas inaláveis (113 – 75,33%). A maioria dos pacientes relatou ingerir carne vermelha (133 – 88,67%), leite (96 – 64,00%), gordura (76 – 50,67%), frutas (115 – 76,67%), vegetais (123 – 82,00%) e leguminosas (129 – 86,00%) cinco ou mais vezes por semana, 23,33% apresentavam história de câncer de próstata (pai ou irmão). Os dados indicaram que os pacientes apresentam doenças crônicas (82 – 54,67%) sendo a Hipertensão Arterial Sistêmica a principal delas (35 – 42,68%), seguida de diabetes e Hipertensão Arterial Sistêmica (20 – 34,39%), diabetes (14 - 14,63%), e outras (15 - 18,29%). A realização do Antígeno Prostático Especifico foi o que apresentou maior frequência (84 – 56,00%) seguido do toque retal (48 – 32,00%), ultrassom (16 – 10,67%) e biópsia (12 – 8,00%). Conclusões: Necessidade de novas estratégias para sensibilizar os homens mais jovens a procurarem o serviço na busca de prevenção de doenças e promoção da saúde. Os principais fatores para o câncer de próstata relatados pelos participantes foram idade, escolaridade, sedentarismo, uso de bebida alcoólica, ingestão de carnes vermelha, leite e derivados, gorduras e sobrepeso. O presente estudo sugere que a população masculina precisa ser assistida de acordo com as orientações da Política Nacional de Atenção Integral à Saúde do Homem, podendo haver um protocolo de cuidado com ações necessárias para o conhecimento da situação e do impacto no perfil de morbimortalidade voltado para essa clientela.

Introdução: O câncer de próstata (CaP) é o tumor mais comum do homem nos países ocidentais e a segunda causa de óbito por câncer em homens nos EUA, Europa e Brasil. O câncer localizado tem sobrevida câncer especifica elevada quando tratado adequadamente, porém a doença metastática ainda apresenta tratamentos pouco eficientes com sobrevida global de 28%. Os microRNAs (miRNAs) são um grupo de moléculas pequenas de RNA que contém entre 19 a 25 nucleotídeos não codificantes de proteína, com ação fundamental na regulação da expressão gênica. Eles estão envolvidos em processos essenciais nas células normais e neoplásicas como ciclo celular, proliferação, apoptose, metabolismo energético, invasão e metastatização. Objetivos: Realizar estudos in vitro e in vivo usando miRNA em um modelo de câncer de próstata metastático inédito no nosso meio com intuito de analisar o seu potencial como agente terapêutico dessa neoplasia. Métodos: Nos estudos in vitro, três linhagens celulares foram utilizadas (PC3, DU145 e LNCaP). Essas linhagens foram transfectadas com os miRNAs 100, 145 e 373 e seus respectivos antiMiRs utilizando-se lipofectamina. Analisamos a expressão dos genes alvo mTOR, SMARCA5, KRAS, CMYC, MMP9, CD44 por PCR quantitativo em tempo real (qRT-PCR). Foram realizados também estudos de apoptose, ciclo celular e ploidia utilizando o citômetro de fluxo. Alterações no potencial de invasão foram avaliadas pela técnica do matrigel. O modelo in vivo pré-clínico foi desenvolvido pela injeção intra-cardíaca da linhagem PC-3M-Luc-C6 em camundongos NUDE com 9 semanas. O crescimento tumoral foi avaliado com o sistema de bioluminescência in vivo. Após o pleno estabelecimento das metástases no dia 21, os animais foram tratados com três injeções na veia da cauda contendo o miRNA conjugado com o atelocolágeno. Os animais foram sacrificados e no dia 48 para análise dos tecidos. Resultados: miR-100 aumenta a apoptose na LNCaP, e reduz a apoptose na DU145. Na linhagem DU145 o miR 100 inibiu a proliferação. Na análise da expressão gênica o miR-100 inibe SMARCA5 na DU145 e PC3 e mTOR na LNCaP, o anti-miR 100 estimula mTOR e SMARCA5 na LNCaP. O miR-145 promoveu aumento da apoptose em 24% na DU145. Na linhagem PC3 o miR-145 age inibindo a proliferação, com uma diferença absoluta de 18% em relação ao seu controle. O miR-145 inibe KRAS e CMYC nas três linhagens e o anti-miR-145 estimula CMYC na DU145 e RAS nas três linhagens O miR-373 reduziu a apoptose em 29% na DU145 e diminui a proliferação com uma diferença absoluta de 13% em relação ao controle. O miR- 373 estimula a MMP9 na DU145 e na LNCaP e inibe o CD44 na PC3. O antimiR- 373 inibe MMP9 na DU145 e LNCaP. Nos estudos in vivo de CaP metastático o miR-100 apresenta tendência a redução no crescimento tumoral (p=0,23) e o miR-145 reduz o crescimento de forma significativa no dia 34 (p=0,02). Após esses dias o tumor volta a crescer de forma agressiva. Os animais tratados com anti-miR-373 não apresentaram alterações em relação aos controles. Conclusões: O miR-100 é um miRNA contexto dependente, com papel supressor tumoral em linhagens de tumor de próstata agressivo e o miR- 373 age in vitro como oncomiR. O miR-145 age como supressor tumoral in vitro e em modelo animal de CaP metastático apresentando resposta terapêutica consistente, podendo ser utilizado no arsenal terapêutico contra essa neoplasia. Estudos futuros devem avaliar o uso dos miRNAs isoladamente ou de forma adjuvante no tratamento do CaP metastático / Introduction: Prostate cancer (PCa) is the most common neoplasia of man in Western countries and the second cause of death by cancer in men in the US, Europe and Brazil. The localized cancer has high cancer-specific survival when treated properly, however metastatic disease still presents low effective treatments with 28% of global survival. microRNAs (miRNAs) are a group of small RNA molecules containing from 19 to 25 nucleotides of noncoding protein with fundamental action in the regulation of gene expression. They are involved in key processes in normal and neoplastic cells as cell cycle, proliferation, apoptosis, energy metabolism, invasion and metastasis. Objectives: To carry out studies in vitro and in vivo using miRNA in a novel model of metastatic prostate cancer in our country in order to evaluate its potential as a therapeutic agent of this neoplasia. Methods: In the in vitro studies, three cell lines were used (PC3, DU145 and LNCaP). These cell lines were transfected with miRNAs 100, 145 and 373 and their antiMiRs using lipofectamine. We analyzed the gene expression of mTOR, SMARCA5, KRAS, CMYC, MMP9, CD44 by real-time polymerase chain reaction (qRT-PCR). We also performed studies of apoptosis, cell cycle and ploidy using flow cytometer. Changes in the invasion potential were evaluated by the technique of matrigel. The pre-clinical model in vivo was developed by intracardiac injection of PC-3MLuc-C6 cell line in NUDE mice with 9 weeks. Tumor growth was evaluated with an in vivo image system (IVIS). After the full establishment of metastases on day 21, the animals were treated with three injections into the tail vein containing the miRNA plus atelocollagen. The animals were sacrificed on day 48 for tissues analysis. Results: MiR-100 increases apoptosis in LNCaP and reduces apoptosis in DU145. The anti-miR-100 increased apoptosis in 14% in PC3. In cell line DU145, miR-100 inhibited proliferation. In the analysis of gene expression, the miR-100 inhibits SMARCA5 in DU145 and PC3 and mTOR in LNCaP, anti-miR-100 stimulates mTOR and SMARCA5 in LNCaP. The miR-145 promoted an increased in apoptosis by 24% in DU145. In PC3 cell line miR-145 acts by inhibiting the proliferation, with an absolute difference of 18% compared to control. MiR-145 inhibits KRAS and CMYC in the three cell lines and anti-miR-145 stimulates CMYC in DU145 and KRAS in the three cell lines. The miR-373 reduced apoptosis by 29% in DU145 and reduces proliferation with an absolute difference of 13% relative to control. MiR-373 stimulates MMP9 in DU145 and LNCaP cells and inhibits CD44 in PC3. The anti -miR-373 inhibits MMP9 in DU145 and LNCaP. In the in vivo studies of metastatic PCa, miR-100 shows a tendency to decrease tumor growth (p=0.23) and miR-145 reduces tumor growth on day 34 (p=0.02). After those days, the tumor grows back aggressively. Animals treated with anti-miR-373 showed no changes relative to controls. Conclusion: The miR-100 is a context-dependent miRNA, with tumor suppressor role in aggressive tumor cell lines. The miR-373 acts in vitro as oncomiR and miR-145 acts as a tumor suppressor in vitro and in an animal model with consistent therapeutic response and can be used in the therapeutic arsenal against this neoplasia. Future studies should evaluate the use of miRNAs alone or adjuvant in the treatment of metastatic prostate cancer

Introdução: O Câncer de próstata metastático (mCaP) é uma doença incurável com progressão para o mCaP resistente à castração (mCPRC) após terapia de deprivação androgênica. Os microRNAs (miR) -23b e -27b tem ação antioncogênica e são suprimidos neste contexto. O gene da ciclina G1 (CCNG1) codifica uma quinase dependente de ciclina com potencial de inibição do crescimento e é um dos alvos dos miR-23b/-27b. Objetivos: Estimular os miR-23b/-27b isoladamente e em conjunto para avaliar e comparar o crescimento tumoral e a expressão do gene alvo CCNG1 em relação ao grupo controle em xenenxertos de PC-3M-luc-C6 em camundongos atímicos castrados. Métodos: Xenoenxertos subcutâneos da linhagem celular PC-3M-luc-C6 foram implantados em camundongos machos BALB/c nude. Os animais foram castrados 10 dias após o implante e utilizamos injeções intratumorais para induzir o aumento da expressão dos miR-23b/-27b separadamente e em conjunto através de Pre-miR® específicos. Realizamos avaliações semanais da bioluminescência (BLI) para avaliar o crescimento tumoral após a castração. Utilizamos a reação em cadeia de polimerase reversa em tempo real (qRT-PCR) para analisar a expressão da CCNG1 e os animais foram sacrificados 21 dias após a castração. Dividimos um total de 21 xenoenxertos nos seguintes grupos de tratamento: 4 no grupo controle, 5 no grupo Pró miR-23b, 6 no grupo Pró miR-27 e 6 no grupo Pró miR-23b associado ao Pró miR-27b. Resultados: Confirmamos o sucesso da transfecção dos miRs por qRT-PCR, e apresentamos o achado de superexpressão relativa da CCNG1 em relação ao grupo controle em: 9% (p=0,76), 46% (p=0,05) e 203% (p=0,01) nos grupos Pró miR-23b, Pró miR-27b e Pró miR-23b associado ao Pró miR-27b respectivamente. Comparamos o crescimento proporcional de cada tumor através da BLI, por meio da leitura no momento da castração ao final do experimento. Obtivemos um crescimento de 13,5; 8,69; 5,96 e 9,98 vezes nos grupos: controle, Pró miR-23b, Pró miR-27b e Pró miR-23b associado ao Pró miR-27b respectivamente. Conclusão: Demonstramos um modelo in vivo de CPRC que apresentou supreexpressão da CCNG1 após o tratamento intratumoral que aumentou a expressão dos miRs -23b e -27b. Este conjunto de miRs tem ação antioncogênica descrita no contexto do mCPRC e a sua estimulação neste contexto aumentou a expressão da CCNG1. Nosso estudo sugere que a CCNG1 deve apresentar uma ação pró-apoptótica quando superexpresso pelos miRs-23b/-27 no CPRC / Introduction: Metastatic prostate cancer (mPCa) is an incurable disease that invariably progresses to castration-resistant mPCa (mCRPC) after androgen deprivation therapy. The microRNAs miR-23b/-27b have been reported as tumor suppressors and are underexpressed in this context. The cyclin G1 gene (CCNG1) encodes a cyclin-dependent kinase with potential growth inhibitory activity that is a potential target of miR-23b/-27b. Objectives: We aim to explore a bioluminescent xenograft model of CRPC in castrated mice the effect positive modulation of the miR-23b/-27b on CCNG1 expression and mCRPC growth. Material and Methods: We injected subcutaneous xenografts of PC-3M-luc-C6 PCa cell line in BALB/c nude male mice. We neutered the animals after 10 days and used intratumoral injections up-regulating miR-23b/-27b separately and simultaneously through specific Pre-miRTM. We used weekly bioluminescence imaging (BLI) to assess tumor growth after castration and real-time polymerase chain reaction (qRT-PCR) to analyze the expression of CCNG1. We sacrificed the animals 21 days after castration. We randomized 21 xenografts in experimental groups as follows: n=4 in the negative control group; n=5 in Pro miR-23b group; n=6 in Pro miR-27b group and an n=6 tumors in the Pro miR-23b plus Pro miR-27b. Results: We confirmed successful transfection of both miRNAs with overexpression of CCNG1 of 9% (p=0.76), 46% (p=0.05) and 203% (p=0.01) in the Pro miR-23b, Pro miR-27b and Pro miR-23b plus -27b groups respectively. We compared the fold-change in BLI growth by the end of experiment finding an increase of 13.5-fold, 8.69-fold, 5.96-fold and 9.98-fold in groups Pro miR-negative control, Pro miR-23b, Pro miR-27b and Pro miR-23b plus Pro miR-27b groups respectively. Conclusions: We showed an in vivo model with overexpression of CCNG1 upon artificial upregulation of miR-23b and -27b in CRPC. This cluster of antineoplastic miRNA increased the expression of this cyclin, often described as oncogenic. Our study suggests that CCNG1 has a pro-apoptotic role when up-regulated by miR-23b/-27b in CPRC

Objetivo: Retrovirus Endógeno Humano (HERV) compreende ao redor de 8% do genoma humano. Apesar do fato de que em sua maioria são genes não-funcionais devido a processos de mutação ou perda de material genético no processo de retrotransposição, existem evidências do aumento da expressão de HERVs em tecido de câncer de próstata. Nós estudamos e comparamos a imunogenicidade de peptídeos da família HERV em 2 coortes de pacientes com câncer de próstata. Posteriormente examinamos o estado de ativação e senescência linfocitária nestas coortes. Desenho Experimental: Células Mononucleares de Sangue Periférico (CMSP) de 65 pacientes com câncer localizado da próstata em situação de hormônio-sensibilidade e de 24 pacientes com câncer de próstata metastático e em situação de resistência à castração, comparados a um grupo controle de 12 indivíduos normais foram avaliados em relação ao seu estado de resposta imune pela técnica de ELISPOT contra um conjunto de peptídeos derivados dos exons gag e env do gene da família HERV-K HML-2. Como parte de nosso estudo, foi realizado de forma preliminar uma análise genômica in silico de 500 pacientes com câncer de próstata sequenciados e disponíveis para análise pública do banco de dados TCGA, com o objetivo de reforçar o racional de nossa interrogação científica. Além disso , como estudo de correlação, fizemos uma análise por citometria de fluxo da ativação celular de linfócitos T de nossas coortes para determinarmos a imunofenotipagem e ontogenia linfocitária em nossos indivíduos investigados, no momento de nossa pesquisa de sua resposta imune. Resultados: Nossa análise da resposta imune contra peptídeos de HERV-K HML-2 por ELISPOT-Interferon Gama não mostrou nenhum resultado significativo. Nenhum paciente apresentou dados significativos de resposta de acordo com nossos critérios, apesar de nossos dados preliminares de expressão gênica terem mostrado expressão gênica em torno de 17% em pacientes com doença localizada. Nossos dados de ativação linfocitária mostraram maior ativação e senescência nos pacientes com doença disseminada e resistente à castração. Conclusões: Este parece ser o primeiro estudo a interrogar a presença de resposta celular imune contra peptídeos de HERV-K em pacientes com câncer de próstata. Nosso achados não mostraram resposta imune relevante em doença localizada ou disseminada e em diferentes estados de ativação linfocitária ou status de integridade hormonal. Apesar destes resultados, pesquisa posterior poderia utilizar diferente metodologia, como por exemplo a utilização de citometria de fluxo bem como a busca de diferentes citoquinas envolvidas, tais como as relacionadas a resposta Th2, ao invés de Th1 / Purpose: Human Endogenous Retrovirus (HERV) comprises 8% of human genome. Despite the fact that most of it is non-functional due to mutations or loss of genetic material in the process of retrotransposition, there are some evidence of increased expression of HERV in prostate cancer tissue. We studied the cellular immunogenicity of peptides from HERV-K family in 2 cohorts of prostate cancer patients. Experimental Design: PBMCs from 65 patients with hormone-intact localized prostate cancer and 24 patients with castrate-metastatic disease, matched with 12 normal controls were evaluated for cellular immune response by ELLISPOT against a pool of gag and env peptides from HERV-K family of HML-2 type. As an independent supportive study we did in silico genomic analysis of 500 prostate cancer patients from TCGA database to give another evidence of the prevalence of HERV-K gene expression in prostate cancer genome, reinforcing the rational of our questions. Results: Our analysis of cellular immune response against HERV-K HML-2 peptides by Interferon-gama ELISPOT did not show any meaningful results. No patient showed any minimal criteria of response, despite the fact that in our preliminary genomic analysis we obtained HERV expression in about 17% of a cohort of 500 patients with localized prostate cancer. In regards to the flow cytometry data of the lymphocytes we showed stronger activation and senescence status in the cohort of patients with castration sensitive and resistant disseminated disease, compared to the localized disease cohort. Conclusions: To the authors\'s knowledge this is the first study to look for cellular immune response against peptides derived from coding HERV-K transcripts in prostate cancer patients. Our findings did not show relevant immune response in neither localized nor metastatic castrate prostate cancer patients. Despite those results, further research could continue using different methodology, like flow cytometry as well as looking for different cytokines involved, such as those related to a Th2 response, instead of Th1

As técnicas de radioterapia vem sendo constantemente modificadas com a implementação de novas tecnologias visando aumentar a eficiência e diminuir a toxicidade dos tratamentos com radiação ionizante. Esse trabalho visa comparar as técnicas de radioterapia de intensidade modulada (IMRT) e a radioterapia em arco modulada volumetricamente (VMAT) em termos dosimétricos para o alvo e órgãos em risco além de avaliar a diferença do tempo de tratamento utilizando cada técnica. Para assegurar que os planejamentos seguiriam um padrão aceitável para ambas as técnicas, realizou-se primeiramente os planejamentos sugeridos pelo TG 119 da Associação Americana de Física Médica e compatibilidade dos resultados obtidos comparados com os dados da literatura. Tal comparação permitiu prosseguir para uma próxima etapa que consistiu da utilização de imagens de pacientes reais que foram submetidos a tratamentos de próstata e cabeça e pescoço, para a realização dos planejamentos utilizando as técnicas de IMRT e VMAT. A qualidade dosimétrica dos planejamentos utilizando ambas as técnicas foi avaliada em termos de conformidade e homogeneidade da dose no alvo e para os casos de pacientes com câncer de próstata, foram investigados os limites de dose em reto, bexiga e cabeça de fêmur, sendo avaliada a associação entre o volume de intersecção de reto e bexiga com o alvo. Para os   casos de pacientes com câncer de cabeça e pescoço, em termos dos limites de dose em medula, tronco cerebral e parótidas. Os planejamentos nos quais fez se uso da técnica de VMAT apresentaram valores semelhantes aos dos planos de IMRT. A análise dos tempos de tratamento para cada técnica avaliada mostrou que a VMAT reduz significativamente o tempo, até 67% para os casos de pacientes com câncer de próstata e até 36% para os casos de pacientes com câncer de cabeça e pescoço / The goal of this study was to compare the dosimetric aspects of volumetric-modulated arc therapy (VMAT) with those of intensity-modulated radiotherapy (IMRT) and to evaluate the delivery time and monitor unit differences between the two techniques, for applications in prostate and head and neck cancer treatment. First of all, to assure an acceptable pattern of treatment planning using both techniques, the TG119 of American Association of Medical Physics instructions were followed and the results of plans were compared to TG119 published data. The next step consisted of using real patients\' images, whose underwent prostate radiotherapy or head and neck radiotherapy, to planning IMRT and VMAT. The dosimetric quality of plans using both techniques was evaluated in terms of target dose conformity and target dose homogeneity The dose constraints for rectum, bladder and femoral head were analyzed and the association between the rectum intersection volume and bladder intersection volume to the target volume were evaluated for the prostate cases. The dose constraints for spinal cord, brainstem and parotids were investigated for the head and neck cases. Best or similar values were obtained for the VMAT plans in relation to IMRT plans. The analysis of treatment time indicated a significant reduction using VMAT, until 67% to the prostate cases and 36% to the head and neck cases

Introdução: O câncer de próstata (CaP) é o tumor sólido mais diagnosticado no homem atualmente, e a sexta ocorrência mais frequente de casos novos de neoplasia maligna no mundo, sendo a segunda causa de óbito por câncer. O câncer de bexiga (CaB) é a segunda neoplasia maligna mais comum e a segunda em causa de óbito entre os tumores genito-urinários. Mundialmente o CaB é responsável por aproximadamente 386.000 novos casos e 150.000 óbitos por ano. O conhecimento das alterações em processos celulares envolvidos na sua carcinogênese nos permite melhor compreensão da patogênese dessas neoplasias, subsidiando, assim, mais efetivamente, o planejamento de estratégias de prevenção, diagnóstico e tratamento. Micro RNA (miRNA) são pequenas sequências não codificantes de RNA que possuem grande papel no controle da expressão dos genes, inibindo a tradução da proteína ou promovendo a degradação do RNA mensageiro (RNAm). Os miRNA estão envolvidos em vários processos celulares fisiológicos e patológicos, incluindo o câncer, onde podem atuar como oncogenes (oncomiR) ou como supressores de tumor (tsmiR). Previamente demonstramos que níveis elevados de miR-100 estão relacionados a recidiva bioquímica pós-prostatectomia radical enquanto no carcinoma urotelial de bexiga de baixo grau ocorre subexpressão desse miRNA. Objetivo: O estudo pretende analisar o papel do miR-100 na regulação de seus supostos genes alvo SMARCA5, THAP2, BAZ2A, mTOR e FGFR3 em linhagens de CaB e CaP e sua relação com a proliferação, apoptose e ploidia de DNA Material e Métodos: As linhagens de CaB (RT4 e T24) e CaP (DU145 e PC3) foram transfectadas com pré-miR-100, antimiR-100 e seus respectivos controles negativos utilizando lipossomas. Após a transfecção o nível de expressão de RNAm e proteína dos genes alvos foi analisado pelas técnicas da cadeia da polimerase quantitativa em tempo real (qRT-PCR) e western blotting respectivamente. A proliferação celular, apoptose e instabilidade cromossômica foram analisadas por citometria de fluxo. Resultados: A transfecção de pré-miR 100, reduziu de modo significativo a expressão de RNAm dos genes mTOR(p=0,006), SMARCA5 (p=0,007) e BAZ2A (p=0,03) na linhagem RT4, mTOR (p=0,02) e SMARCA5 (p=0,01) na linhagem T24, mTOR (p=0,025), THAP2 (p=0,04), SMARCA5 (p=0,001) e BAZ2A (p=0,005) na linhagem DU145 e mTOR (p=0,01) na linhagem PC3. Quanto a expressão proteica houve diminuição global da expressão de todas as proteínas varável de 22,5% a 69% nas quatro linhagens estudadas. Na linhagem T24 miR-100 promoveu um aumento na proliferação e o antimiR-100 induziu a apoptose demonstrando o papel oncogênico desse miR no câncer de bexiga de alto grau. Na linhagem PC3, do mesmo modo, a exposição ao antimiR-100 promoveu um aumento de células em apoptose. Conclusões: Demonstramos que miR-100 controla a expressão gênica e proteica de seus genes alvos nas linhagens de CaP e CaB. Os genes mTOR e FGFR3 são proto-oncogenes envolvidos com o desenvolvimento e progressão de neoplasias, enquanto os genes BAZ2A, SMARCA5 e THAP2 estão relacionados a regulação da transcrição, estabilidade genômica e indução da apoptose. Desse modo podemos admitir que miR-100 tem um papel contraditório no câncer, podendo se comportar como um oncomiR ou como um tsmiR, o que o classificaria como um miRNA \"contexto dependente\". Demonstramos porém que miR-100 tem um papel oncogênico na linhagem T24 de carcinoma urotelial de alto grau de bexiga promovendo um aumento na proliferação e inibição da apoptose. Na linhagem PC3 também o papel oncogênico de miR-100 pode estar relacionado a inibição da apoptose. Dada a variação de ação dos miRNA nos diversos tecidos e estágios tumorais, a determinação do seu papel nos diversos tumores é fundamental pois existe a possibilidade de utiliza-los como marcadores diagnóstico, prognóstico e como alvos para terapias moleculares / Introduction: Prostate cancer (PC) is the most commonly diagnosed solid tumor in men today, and the sixth most frequent occurrence of new cases of malignancy in the world, being the second cause of death by cancer in men. Bladder cancer (BC) is the second most common malignancy and the second cause of death among genitourinary tumors. Globally BC is responsible for approximately 386.000 new cases and 150.000 deaths per year. The knowledge of cellular processes involved in carcinogenesis allows us to better understand the etiology and pathogenesis of these neoplasms, supporting thus more effectively, planning strategies for prevention and treatment. Micro RNAs (miRNA) are small non-coding RNA sequences that have a large role in the control of gene expression by inhibiting protein translation or promoting the degradation of messenger RNA (RNAm). The miRNA are currently involved in various physiological and pathological cellular processes, including cancer where they can act as oncogenes (oncomiR) or tumor suppressors (tsmiR). Previously we demonstrated that high levels of miR-100 are associated with biochemical recurrence after radical prostatectomy while in low-grade bladder urothelial carcinoma it is persistently underexpressed. Objective: The study aims to examine the role of miR-100 in the regulation of its supposed target genes SMARCA5, THAP2, BAZ2A, mTOR and FGFR3 in BC and PC cell lines and its relationship with proliferation, apoptosis and chromosomal instability. Material and Methods: The BC (RT4 and T24) and PC cell lines (DU145 and PC3) were transfected with pre-miR-100, antimiR-100 and their respective controls using liposomes. After transfection RNAm and protein levels of its supposed target genes were analyzed by quantitative real time polymerase chain reaction (qRT-PCR) and western blotting. Cell proliferation, apoptosis and DNA ploidy were analyzed by flow cytometry. Results: After transfection of pre-miR 100, there was a significant reduction in the RNAm expression of mTOR (p=0.006), SMARCA5 (p=0.007) and BAZ2A (p=0.03) in RT4, mTOR (p=0.02) and SMARCA5 (p=0.01) in T24, mTOR (p=0.025), THAP2 (p=0.04), SMARCA5 (p=0.001) and BAZ2A (p=0.005) in DU145 and mTOR (p=0.01) in PC3. There was a reduction in the expression of all proteins, variable from 22.5% to 69% in all cell lines. In T24 miR-100 promoted an increase in cell proliferation and antimiR-100 promoted apoptosis characterizing miR-100 as an oncomiR in this cell line representative of a right grade urothelial carcinoma. Also in PC3 antimiR-100 promoted an increase in apoptosis. Conclusions: We have shown that miR-100 controls the expression of gene and protein of its supposed target genes in PC and BC cell lines. mTOR and FGFR3 are proto-oncogenes related to the tumor development and progression, while BAZ2A, SMARCA5 and THAP2 are related to the DNA transcription regulation, chromossomic stability and apoptosis induction. We can conclude that miR-100 has a contradictory role in cancer, behaving as an oncomir or tsmiR depending the type and stage of a specific neoplasia, classifying it as a \"context depending\" miRNA. In T24 cell line however miR-100 acts as an oncomiR increasing cell proliferation and inhibiting apoptosis. In PC3 cell line miR-100 also acts as an oncomiR inhibiting apoptosis. Due to the variation of roles of miRNAs in different tissues and stage of tumors, the characterization of their role in neoplasm is very important because of the possibility to use them as diagnostic or prognostic markers, even as targets for the development of new drugs

Introdução: O câncer de próstata (CaP) é o tumor mais comum do homem nos países ocidentais e a segunda causa de óbito por câncer em homens nos EUA, Europa e Brasil. O câncer localizado tem sobrevida câncer especifica elevada quando tratado adequadamente, porém a doença metastática ainda apresenta tratamentos pouco eficientes com sobrevida global de 28%. Os microRNAs (miRNAs) são um grupo de moléculas pequenas de RNA que contém entre 19 a 25 nucleotídeos não codificantes de proteína, com ação fundamental na regulação da expressão gênica. Eles estão envolvidos em processos essenciais nas células normais e neoplásicas como ciclo celular, proliferação, apoptose, metabolismo energético, invasão e metastatização. Objetivos: Realizar estudos in vitro e in vivo usando miRNA em um modelo de câncer de próstata metastático inédito no nosso meio com intuito de analisar o seu potencial como agente terapêutico dessa neoplasia. Métodos: Nos estudos in vitro, três linhagens celulares foram utilizadas (PC3, DU145 e LNCaP). Essas linhagens foram transfectadas com os miRNAs 100, 145 e 373 e seus respectivos antiMiRs utilizando-se lipofectamina. Analisamos a expressão dos genes alvo mTOR, SMARCA5, KRAS, CMYC, MMP9, CD44 por PCR quantitativo em tempo real (qRT-PCR). Foram realizados também estudos de apoptose, ciclo celular e ploidia utilizando o citômetro de fluxo. Alterações no potencial de invasão foram avaliadas pela técnica do matrigel. O modelo in vivo pré-clínico foi desenvolvido pela injeção intra-cardíaca da linhagem PC-3M-Luc-C6 em camundongos NUDE com 9 semanas. O crescimento tumoral foi avaliado com o sistema de bioluminescência in vivo. Após o pleno estabelecimento das metástases no dia 21, os animais foram tratados com três injeções na veia da cauda contendo o miRNA conjugado com o atelocolágeno. Os animais foram sacrificados e no dia 48 para análise dos tecidos. Resultados: miR-100 aumenta a apoptose na LNCaP, e reduz a apoptose na DU145. Na linhagem DU145 o miR 100 inibiu a proliferação. Na análise da expressão gênica o miR-100 inibe SMARCA5 na DU145 e PC3 e mTOR na LNCaP, o anti-miR 100 estimula mTOR e SMARCA5 na LNCaP. O miR-145 promoveu aumento da apoptose em 24% na DU145. Na linhagem PC3 o miR-145 age inibindo a proliferação, com uma diferença absoluta de 18% em relação ao seu controle. O miR-145 inibe KRAS e CMYC nas três linhagens e o anti-miR-145 estimula CMYC na DU145 e RAS nas três linhagens O miR-373 reduziu a apoptose em 29% na DU145 e diminui a proliferação com uma diferença absoluta de 13% em relação ao controle. O miR- 373 estimula a MMP9 na DU145 e na LNCaP e inibe o CD44 na PC3. O antimiR- 373 inibe MMP9 na DU145 e LNCaP. Nos estudos in vivo de CaP metastático o miR-100 apresenta tendência a redução no crescimento tumoral (p=0,23) e o miR-145 reduz o crescimento de forma significativa no dia 34 (p=0,02). Após esses dias o tumor volta a crescer de forma agressiva. Os animais tratados com anti-miR-373 não apresentaram alterações em relação aos controles. Conclusões: O miR-100 é um miRNA contexto dependente, com papel supressor tumoral em linhagens de tumor de próstata agressivo e o miR- 373 age in vitro como oncomiR. O miR-145 age como supressor tumoral in vitro e em modelo animal de CaP metastático apresentando resposta terapêutica consistente, podendo ser utilizado no arsenal terapêutico contra essa neoplasia. Estudos futuros devem avaliar o uso dos miRNAs isoladamente ou de forma adjuvante no tratamento do CaP metastático / Introduction: Prostate cancer (PCa) is the most common neoplasia of man in Western countries and the second cause of death by cancer in men in the US, Europe and Brazil. The localized cancer has high cancer-specific survival when treated properly, however metastatic disease still presents low effective treatments with 28% of global survival. microRNAs (miRNAs) are a group of small RNA molecules containing from 19 to 25 nucleotides of noncoding protein with fundamental action in the regulation of gene expression. They are involved in key processes in normal and neoplastic cells as cell cycle, proliferation, apoptosis, energy metabolism, invasion and metastasis. Objectives: To carry out studies in vitro and in vivo using miRNA in a novel model of metastatic prostate cancer in our country in order to evaluate its potential as a therapeutic agent of this neoplasia. Methods: In the in vitro studies, three cell lines were used (PC3, DU145 and LNCaP). These cell lines were transfected with miRNAs 100, 145 and 373 and their antiMiRs using lipofectamine. We analyzed the gene expression of mTOR, SMARCA5, KRAS, CMYC, MMP9, CD44 by real-time polymerase chain reaction (qRT-PCR). We also performed studies of apoptosis, cell cycle and ploidy using flow cytometer. Changes in the invasion potential were evaluated by the technique of matrigel. The pre-clinical model in vivo was developed by intracardiac injection of PC-3MLuc-C6 cell line in NUDE mice with 9 weeks. Tumor growth was evaluated with an in vivo image system (IVIS). After the full establishment of metastases on day 21, the animals were treated with three injections into the tail vein containing the miRNA plus atelocollagen. The animals were sacrificed on day 48 for tissues analysis. Results: MiR-100 increases apoptosis in LNCaP and reduces apoptosis in DU145. The anti-miR-100 increased apoptosis in 14% in PC3. In cell line DU145, miR-100 inhibited proliferation. In the analysis of gene expression, the miR-100 inhibits SMARCA5 in DU145 and PC3 and mTOR in LNCaP, anti-miR-100 stimulates mTOR and SMARCA5 in LNCaP. The miR-145 promoted an increased in apoptosis by 24% in DU145. In PC3 cell line miR-145 acts by inhibiting the proliferation, with an absolute difference of 18% compared to control. MiR-145 inhibits KRAS and CMYC in the three cell lines and anti-miR-145 stimulates CMYC in DU145 and KRAS in the three cell lines. The miR-373 reduced apoptosis by 29% in DU145 and reduces proliferation with an absolute difference of 13% relative to control. MiR-373 stimulates MMP9 in DU145 and LNCaP cells and inhibits CD44 in PC3. The anti -miR-373 inhibits MMP9 in DU145 and LNCaP. In the in vivo studies of metastatic PCa, miR-100 shows a tendency to decrease tumor growth (p=0.23) and miR-145 reduces tumor growth on day 34 (p=0.02). After those days, the tumor grows back aggressively. Animals treated with anti-miR-373 showed no changes relative to controls. Conclusion: The miR-100 is a context-dependent miRNA, with tumor suppressor role in aggressive tumor cell lines. The miR-373 acts in vitro as oncomiR and miR-145 acts as a tumor suppressor in vitro and in an animal model with consistent therapeutic response and can be used in the therapeutic arsenal against this neoplasia. Future studies should evaluate the use of miRNAs alone or adjuvant in the treatment of metastatic prostate cancer