Orientador: Sergio Tadeu Martins Marba / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-07T04:18:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 SantosJunior_ErivaldoRibeiro_M.pdf: 1077371 bytes, checksum: 322fb695844c73dce88d947928230871 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito do Diabetes mellitus induzido na fase pré-gestacional e gestacional em ratas Wistar e seus conceptos. Foi realizado um estudo de diabetes experimental utilizando 16 ratas da linhagem Wistar, sendo seis induzidos na fase pré-gestacional, seis durante a gestação e 4 como controle. Os dados foram coletados no laboratório de cirurgia do trauma da Faculdade de Ciências Médicas da UNICAMP. Foram avaliadas as variáveis, glicemia, tempo de acasalamento, peso materno, número de filhotes, peso corporal e cardíaco dos filhotes. Para análise estatística foi realizada análise descritiva, a evolutiva através da ANOVA e teste de tukey e para comparar as variáveis numéricas foi utilizado a coeficiência de correlação de Pearson sendo o nível de significância adotado de p<0. 05. Foi observado que em todas as ratas induzidas foi possível reproduzir a doença. Quanto ao tempo de acasalamento o grupo que mais ocorreu dificuldades foi o pré-gestacional com 20 dias para que a fêmea aceitasse a cópula. O ganho de peso gestacional foi estatisticamente menor quando comparado com o grupo controle e um menor número de filhotes encontrado foi no grupo pré-gestacional. Nos neonatos do grupo gestacional encontramos maior peso corporal e menor peso corporal no pré-gestacional. Os neonatos do grupo gestacional apresentaram aumento médio do coração quando comparados ao controle. Foi possível estabelecer o Diabetes em todas as ratas induzidas e se utilizar esse modelo para investigar e prevenir possíveis anormalidades causadas pela Diabete gestacional nos recém-nascidos através da intervenção e profilaxia de malformações nos conceptos de mães diabéticas / Abstract: The objetive of study has establish effects of diabetes induced by streptozotocin in Wistar rats ( phase advance pregnancy and pregnancy) and your newborns. Had been used 16 rats of lineage wistar, six rats per group (6 rats induced during pregnancy, 6 rats induced before pregnancy and 4 rats as control. The data had been collected in the laboratory of surgical inquiry of College of Medicine of the UNICAMP, during the period of October of 2004 at June of 2005.They had been measured: the glucose, time of copulation, the weight maternal, size of offspring, weight of offspring and weight cardiac of offspring. For analyze statics adopted ANOVA, test of tukey and correlacion of Pearson, the level of significant adopted was of p<0.05. They was perceibed which in all rats induced was possible reproduce the patology . While the mate, the group which more had hardness is the before pregnancy which 20 days for female let male. The gain of wight pregnancy was less which the expectation in group before pregnancy which mean of 195±38g and as less number of offspring find in group before pregnancy which mean of 3.5. In offspring finds larger weight in group pregnancy which mean of 6.01g and less weight in group before pregnancy which mean of 2.23g compared control which is of 3.96g. While the heart hipertrofy finds in group pregnancy which mean of 0.055g compared group control of 0.037g. Conclusions : An established time the gestational model diabetes in rats is possible now to use of this method to leave investigative space in neonatology e to future prevent the appearance of discomforts and anomaly in mother e in the children / Mestrado / Saude da Criança e do Adolescente / Mestre em Saude da Criança e do Adolescente

Orientador: Antonio Wilson Sallum / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-08T09:57:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bezerra_BeatrizdeBrito_M.pdf: 4030297 bytes, checksum: ff82a7914f5c90084725c76037c4f132 (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: O objetivo do presente estudo foi avaliar histometricamente a influência de uma dieta hiperlipídica sobre a evolução da doença periodontal experimental em ratos. Trinta e dois ratos machos adultos, da linhagem Wistar, fizeram parte do estudo e os mesmos foram aleatoriamente divididos em dois grupos: C (ração para animais de laboratório) e H (ração hiperlipídica). Uma ligadura de fio de algodão foi colocada ao redor do primeiro molar inferior esquerdo e o dente contra-lateral serviu como controle. Os animais foram sacrificados nos intervalos de 7, 14, 21 e 28 dias após a colocação da ligadura com o objetivo de avaliarmos a progressão da doença periodontal. As mandíbulas foram removidas para obtenção dos cortes histológicos dos primeiros molares. Análise histométrica foi realizada, com o auxílio do programa de avaliação de imagens ImagePro®, para quantificar a perda óssea na região da bifurcação através da contagem de pontos. No momento do sacrifício observamos um maior acúmulo de restos alimentares nos dentes com ligadura, independente da dieta, e também um maior acúmulo de tecido adiposo na região abdominal dos animais do grupo H, devido ao tipo de dieta ingerida por estes animais, que continha maior concentração de lipídeos. Os dados foram analisados com os testes ANOVA e de Tukey ao nível de significância de 5%. A análise intergrupos não revelou diferença estatisticamente significante na quantidade de perda óssea entre os diferentes intervalos de tempo (p>0,05) tanto nos dentes com ligadura quanto nos sem ligadura. A análise intragrupo, no entanto, mostrou maior perda óssea nos dentes que receberam a ligadura, comparados aos dentes sem ligadura (p<0,0001). Desta maneira podemos concluir que o consumo de uma dieta hiperlipídica não tem influência sobre a perda óssea resultante da periodontite induzida em ratos / Abstract: The aim of this study was to evaluate, histometrically, the influence of a hyperlipidic diet on the evolution of experimental periodontal disease. Thirty-two male Wistar rats were randomly assigned to two groups: C (commercial chow diet) and H (hyperlipidic diet). Cotton ligatures were placed around the left first mandibular molar and the contralateral tooth was used as a control. The animals were sacrificed on days 7, 14, 21 and 28 days after ligature placement for evaluation of periodontal disease progression. The specimens were routinely processed for serial decalcified sections and histometric analysis was performed to evaluate bone loss in the furcation area with the help of an image analysis software, ImagePro®. In the moment of the sacrifice it was noticed a greater accumulation food debris on the teeth with ligature of both groups, it was also noticed a greater accumulation of adipose tissue in group H, due to the kind of diet that the animals were fed, which has an elevated concentration of lipids. The data was analyzed using the ANOVA and Tukey¿s test at a significance level of 5%. Intergroup analysis did not show significant differences in relation to loss of bone volume for both the ligated and unligated teeth between time intervals (p>0.05). Intragroup analysis, however, showed a greater amount of bone volume loss in the ligated teeth than in the unligated ones (p<0.0001). I could be concluded that the consumption of a hyperlipidic diet does not influence bone loss in ligature-induced periodontal disease in rats / Mestrado / Periodontia / Mestre em Clínica Odontológica

Made available in DSpace on 2014-06-12T23:02:15Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4126_1.pdf: 2136103 bytes, checksum: 238ff37ea93450492b30a983b8b6b412 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2011 / Embora as mulheres que amamentam geralmente evitem o uso de drogas o padrão de consumo parece não ser alterado, devido à crença, em várias populações, de que o álcool é galactogênico. Este estudo objetivou avaliar as repercussões da ingestão materna de uma solução de aguardente de cana-de-açúcar durante a lactação, associada a uma dieta experimental, sobre os parâmetros nutricionais, metabólicos e imunológicos de seus descendentes. Ratas Wistar (N=12) e seus filhotes (N=72) foram randomizados em quatro grupos de 18 animais (9 machos + 9 fêmeas), de acordo com a dieta oferecida e/ou a exposição a uma solução de aguardente (15% v/v): GDE (grupo dieta experimental controle); GDEA (grupo dieta experimental álcool); GC (grupo dieta caseína); GCA (grupo dieta caseína álcool). Foram avaliados o peso das mães e filhotes, a ingestão hídrica materna, a produção de leite e o desenvolvimento dos lactentes. Ao final do experimento (21 dias de lactação), os animais foram sacrificados e coletados: sangue, para os parâmetros bioquímicos e imunológicos dos filhotes (proteína total, albumina, globulina, apartato amino transferase (AST), alanina aminotransferase (ALT), Imunoglobulina A (IgA) e leucograma), timo e baço, para análise histomorfométrica. No 1º artigo, Immune response in newborn rats exposed to sugarcane alcohol associated to an experimental diet , foi avaliada a toxicidade da ingestão da solução de aguardente, associada à dieta experimental, sobre os parâmetros imunológicos. As ninhadas do GCA apresentaram uma média de peso superior aos demais. Quanto à contagem das células imunes, houve diferença entre os grupos. Os lactentes do GC apresentaram uma média superior, em todos os parâmetros, houve diferença entre os animais do GC e GCA. O baço foi o único órgão que demonstrou interação significativa entre os grupos e gêneros e esta diferença ocorreu no peso relativo do mesmo entre as fêmeas do GDEA e GC. As médias das áreas foliculares do baço foram mais elevadas no GDE do que no GDEA e se comprovou diferença entre esses grupos. No 2º artigo, Efeitos nutricionais e metabólicos em lactentes expostos a ingestão materna de aguardente associada a uma dieta experimental: estudo em ratos , foram analisados os efeitos da ingestão da solução de aguardente, associada à dieta experimental, sobre os parâmetros nutricionias e metabólicos. A dieta caseína (GC e GCA) promoveu maior peso entre as lactantes, apresentando diferença em relação aos demais grupos, aos 21 dias de lactação. O GCA apresentou aumento na produção de leite no 4º dia de lactação, em relação aos demais. Aos 21 dias, foi detectada diferença nos pesos das ninhadas, segundo o grupo, o GCA apresentou peso superior aos demais. AST e ALT foram mais elevadas nos animais expostos ao álcool. Houve redução das globulinas nos animais do GCA. Os achados permitem concluir que, tanto a dieta como a bebida alcoólica oferecida às lactantes neste estudo, modularam a resposta imune e o estado nutricional das mesmas e de seus descendentes de forma diferenciada, de acordo com o gênero

Orientador: Raquel Fantin Domeniconi / Banca: Wellerson Rodrigo Scarano / Banca: Sebastião Toboga / Banca: Luis Antônio Justilin Jr. / Resumo: Os ftalatos são ésteres utilizados na fabricação de plásticos transparentes empregados na indústria e são amplamente encontrados como substâncias contaminantes no meio ambiente, sendo o tipo mais encontrado, o Di-n-Butil-Ftalato (DBP). Diversos estudos têm mostrado efeitos antiandrogênicos do DBP em ratos expostos durante a vida fetal, refletindo em alterações morfofuncionais sobre órgãos reprodutivos. A morfogênese da próstata é um processo dependente de andrógeno resultante das interações entre mesênquima e epitélio, modulada por fatores de crescimento e algumas moléculas de sinalização. Dentre elas, estão as BMPs que controlam o desenvolvimento de vários tecidos e sofrem influência hormonal. O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos da exposição gestacional e lactacional ao DBP em duas doses (100 e 500mg/kg), sobre a morfogênese inicial e intermediária da próstata de ratos. Assim, fêmeas prenhes da linhagem Wistar foram divididas em 3 grupos experimentais (n=10): CN (controle negativo); DBP100 (DBP; 100 mg/kg) e DBP500 (DBP; 500 mg/kg). Os animais tratados foram expostos ao DBP do 15º dia de gestação (DG15) até o 21º dia pósnatal (DPN21) por gavagem, enquanto os animais CN receberam óleo de milho (veículo). Os animais da geração F1 foram eutanasiados por decapitação nos DPN1 e DPN21, e procedeuse a coleta do sangue para a análise sérica de testosterona. A parte pélvica da uretra (DPN1) e a próstata ventral (DPN21) foram submetidas às análises histológica e imuno-histoquímica para a detecção de AR (receptor de andrógeno), antígeno P63 e α-actina; enquanto que os níveis das proteínas: AR, BMP-4 e PCNA foram avaliados por Western Blot. No DPN1, houve redução na distância anogenital e nos níveis de testosterona nos animais tratados com DPB, e a reconstrução 3D mostrou redução nos números e comprimentos dos brotos no grupo DBP500. A imunomarcação para AR e α-actina foi... / Abstract: Phthalate esters such as Di-n-butyl phthalate (DBP) are used in the manufacture of transparent plastics and they are widely found as contaminants in the environment. Previous studies have shown anti-androgens effects of DBP in rats exposed during fetal life, which presented morphological changes on the reproductive organs. Morphogenesis of the prostate is an androgen-dependent process that depends on interactions between mesenchymal and epithelial cells and it is modulated by growth factors and signaling molecules. Among these molecules, BMPs are important morphogenetic proteins, which are influenced by hormonal levels. These proteins have been implicated in the regulation of prostatic branching morphogenesis. The aim of this study was to evaluate the effects of gestational and lactational exposure to DBP in two doses (100 and 500 mg/kg b.w.) on the initial and intermediate morphogenesis in prostate of rats. Thus, pregnant female rats were divided into 3 groups (n = 10): CN (negative control); DBP100 (BPD; 100 mg/kg) and DBP500 (BPD; 500 mg/kg). Treated animals were exposed from 15th gestation day (GD15) to 21st postnatal day (PND21) by gavage, while the CN animals received corn oil (vehicle). F1 male rats were sacrificed by decapitation in PND1 and PND21 to proceed the blood collect to analysis the testosterone serum levels. The prostatic urethra (DPN1) and the ventral prostate (DPN21) were subjected to histological and immunohistochemical detection for AR (androgen receptor), p63 antigen and α-actin; whereas protein levels: AR, BMP-4 and PCNA were assessed by Western Blot assay. In DPN1, anogenital distance and testosterone levels decreased in animals treated with DBP, and on three-dimensional reconstruction of the prostate, the number of prostatic buds was lower in DBP500 than CN. Immunostaining for AR and α-actin were reduced in the mesenchyme in differentiation, and protein expression of AR and BMP-4 were lower, especially in... / Mestre

Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-03-27T14:02:09Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_AnaliseImunologicaGenotoxica.pdf: 1336666 bytes, checksum: 4e5571e62941a2f1f595da14f8696549 (MD5) / Approved for entry into archive by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2017-04-06T12:47:08Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_AnaliseImunologicaGenotoxica.pdf: 1336666 bytes, checksum: 4e5571e62941a2f1f595da14f8696549 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-06T12:47:08Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_AnaliseImunologicaGenotoxica.pdf: 1336666 bytes, checksum: 4e5571e62941a2f1f595da14f8696549 (MD5) Previous issue date: 2016-08-11 / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O desenvolvimento deste trabalho, deu-se devido a necessidade de se compreender melhor o sistema imune, levando-se em consideração a diversidade dos modelos experimentais de imunossupressão, bem como a variedade de respostas imunológicas e genotóxicas, diferenças estas, relacionadas às espécies, ao medicamento e doses utilizadas. Desta maneira, objetivo do presente estudo foi analisar os efeitos no sistema imunológico e os efeitos genotóxicos em Rattus norvegicus da linhagem Wistar, após a inoculação do agente alquilante Ciclofosfamida (CY). A administração de 50 mg/kg de CY nos roedores, possibilitou observar uma significativa diminuição dos parâmetros de celularidade e peso relativo dos órgãos linfóides. A imunidade humoral dos roedores sofreu supressão, visto que foi realizada a análise da titulação de anticorpos, o ensaio sobre as células formadoras de placa e o teste de hemólise. Foram realizadas quatro inoculações desse imunossupressor e a periodicidade entre as inoculações foi determinada pela recuperação dos níveis de normalidade dos parâmetros supracitados. Nas duas vezes que foi administrada a droga, houve redução no número de linfócitos e posteriormente diminuição de neutrófilos, porém somente no segundo contato com a CY foi observada a imunossupressão. A análise da genotoxicidade da ciclofosfamida (CY) foi analisada através do ensaio cometa e foi de suma importância, pois dectamos danos genômicos ocorridos no DNA , expostos às diferentes doses da ciclofosfamida (CY), que foram de 50 mg/kg nas duas primeiras fases e de 25 mg/kg nas duas últimas fases do experimento. Além disso, foi verificado que os efeitos genotóxicos são cumulativos a cada dose de CY aplicada, pois mesmo sendo administrado na terceira fase, a metade da concentração (25 mg/kg) das duas inoculações inicias CY, o índice de danos não correspondeu a metade dos índices de danos da primeira e da segunda administração. Entretanto, ao analisarmos imunologicamente e genotoxicamente os roedores, nosso trabalho possibilitará testar novos esquemas terapêuticos de imunossupressão. / The development of this work has given up due to the need to better understand the immune system, taking into account the diversity of experimental immunosuppression models as well as the variety of immunological responses and genotoxic differences these, related species, the drug and doses used. Thus, aim of this study was to analyze the effects on the immune system and genotoxic effects in Rattus norvegicus Wistar, after inoculation of the alkylating agent cyclophosphamide (CY). The administration of 50 mg / kg in rodents CY, possible to observe a significant decrease in the parameters of cellularity and relative weight of lymphoid organs. The humoral immunity of rodents has undergone deletion, since the analysis of the antibody titration was performed on the test plate forming cells and hemolysis testing. four inoculations that immunosuppressant and the intervals between the inoculations was determined by recovery of normal levels of the above parameters were performed. Both times the drug was administered, there was a reduction in the number of lymphocytes and neutrophils subsequently decreased, but only the second contact CY was observed immunosuppression. The analysis of the genotoxicity of cyclophosphamide (CY) was analyzed using the comet assay and was of paramount importance because dectamos genomic damage occurring in DNA exposed to different doses of cyclophosphamide (CY), which were 50 mg / kg in the first two phases and 25 mg / kg during the last two phases of the experiment. Furthermore, it was found that the genotoxic effects are cumulative with each CY dose applied, because even being administered in the third phase, the middle concentration (25 mg / kg) of the two inoculations initial CY the damage index does not correspond to half damage indices of the first and second vaccination. However, the analysis and immunologically genotoxicamente rodents, our work will enable testing new therapeutic immunosuppression regimens.

A Organização Mundial da Saúde revela que mais de 20 milhões de crianças nascem com baixo peso ao nascimento em todo o mundo, sendo a má nutrição o principal fator desencadeante. Estudos realizados nas duas últimas décadas mostram que o status nutricional materno pode ser crítico no desenvolvimento de teratogenicidade; porém não há trabalhos que comprovem a associação entre restrição alimentar materna e a ocorrência de malformações. No entanto, o conceito de teratogênese não se restringe apenas às malformações estruturais logo após o nascimento, também são consideradas alterações funcionais, como aquelas comportamentais ou no sistema imune, entre outras, que podem se manifestar somente na maturação pós-natal. Assim, o presente trabalho visou verificar os efeitos da restrição alimentar materna durante a gestação, avaliando-a por meio tanto do protocolo clássico de teratogenicidade, como através de protocolos de imunoteratologia, analisando-se neste caso, as possíveis alterações no sistema imune da prole após o desmame e também na idade adulta. Foram empregadas ratas Wistar prenhes, divididas em cinco grupos iguais, um controle (CO) no qual os animais receberam ração ad libitum, e nos demais grupos, as fêmeas foram submetidas à restrição alimentar, do 6º ao 17º dia de gestação, diminuindo-se em 15 (E15), 40 (E40), 55 (E55) e 70% (E70) da quantidade de ração consumida pelos animais do grupo CO. Por meio do protocolo clássico de teratogenicidade, verificaram-se as possíveis alterações ósseas e viscerais sobre a prole. Empregou-se ainda o protocolo de imunoteratologia, no qual foram realizados testes nas proles tanto ao desmame como na idade adulta, e aferiu-se os seguintes parâmetros: hemograma, peso relativo do timo e do baço, celularidade do baço e da medula óssea; a imunidade inata: atividade de macrófagos peritoneais por meio da fagocitose, produção de peróxido de hidrogênio e óxido nítrico; a imunidade humoral: produção de anticorpos pelo ensaio do plaque forming cell e a titulação de anticorpos anti-eritrócitos de carneiro; e a imunidade celular: avaliação da hipersensibilidade tardia. Em relação às avaliações teratogênicas clássicas, estas mostraram haver, naqueles filhotes provenientes das ratas submetidas às restrições alimentares (E40, E55 e E70), diminuição no peso ao nascimento, aumento da proporção de fetos mortos até uma hora após o nascimento e aumento do número de fetos com ureter sinuoso; no entanto, não foi constatada a ocorrência de malformações graves, que pudessem colocar em risco a vida do concepto. Já as avaliações pós-natais revelaram diminuição no ganho de peso, do nascimento até a idade adulta, das proles provenientes das ratas do grupo E70. Em relação às alterações imunoteratogênicas, houve aumento no peso relativo do timo e da resposta imune celular nas proles destas mães submetidas à maior restrição alimentar, quando estes animais foram avaliados aos 21 dias de idade. Quando realizou-se este estudo nas proles com 70 dias (idade adulta), os filhotes provenientes de mães das diferentes restrições alimentares apresentaram aumento da resposta imune humoral; além disto aqueles filhotes de mães E70, mostraram aumento da resposta imune celular. Os dados apresentados na presente pesquisa permitem sugerir que a restrição alimentar em ratas Wistar durante a organogênese fetal, embora não promova malformações estruturais, produz prole de menor peso ao nascimento e é capaz de gerar alterações significantes no sistema imune dos filhotes. / The World Health Organization has reported that more than 20 million children worldwide are born with low birth weight, with malnutrition the main triggering factor. Studies in the past two decades have shown that maternal nutritional status may be critical in the development of teratogenicity, but there are no studies that directly relate maternal feed restriction and malformation. However, teratogenecity is not restricted only to structural abnormalities at birth, but may also include functional changes, such as behavioral or immune system alterations, among others, which may manifest themselves only in the postnatal period of maturation. Thus, this work aimed to assess the effects of maternal food restriction in pregnant rats using classical and immunoteratogenic protocols to evaluate the offspring. Thus, possible immune system changes were evaluated in the offspring after weaning and after maturation. Pregnant females were divided into five groups, a control group (CO) in which the animals received feed ad libitum, and four other groups, in which females were fed a restricted amount based on the total ingested by controls: 15% (E15), 40% (E40), 55% (E55) and 70% (E70) during days 6 to 17 of gestation. Rats were humanely euthanized and teratogenicity was evaluated using skeletal and visceral measurements. Immunoteratogenic effects were determined in weaned and mature offspring (10 weeks) using blood, thymus and spleen relative weights and spleen and bone marrow cellularity. In addition, innate immunity was determined using activity of peritoneal macrophages through phagocytosis, and production of hydrogen peroxide and nitric oxide. Humoral immunity was determined using production of antibodies by the plaque-forming cell assay and titers of anti-sheep red blood cells. Cellular immunity was determined by evaluating delayed type hypersensitivity. Traditional teratogenic indices showed that pups from females subjected to feed restriction (E40, E55 and E70) had a decrease in birth weight, an increased proportion of dead fetuses up to one hour after birth, and an increase in the number of fetuses with kinked ureter. No major malformations serious enough to threaten the life of the conceptus were observed. There was a postnatal decrease in weight gain in offspring from mothers of group E70 from birth to adulthood. There was also immune system changes, with an increase in the thymus relative weight (E40, E55, E70) and cellular immune response in offspring (21 days of age). When offspring were evaluated after maturation, those pups from mothers with feed restriction had increased humoral immune responses; in addition offspring from the E70 group showed an increase in cellular immune response. The data presented in this study suggest that feed restriction in Wistar rats during organogenesis does not promote structural malformations, but instead results in offspring with lower birth weights, and also promoted significant changes in the immune system of rat pups.

O diabetes mellitus (DM) é caracterizado por hiperglicemia associada à falta ou à ineficiência da insulina. DM também é marcado por alterações em diversos processos celulares que precisam ser mais bem entendidos. Estudou-se a via da autofagia em diferentes macrófagos, verificando se o tratamento com insulina é capaz de modular esse processo. Foram estudados macrófagos derivados da medula óssea (BMM), do lavado broncoalveolar (LBA) e do tecido esplênico de ratos Wistar, machos, diabéticos (aloxana, 42 mg/kg, i.v., 10 dias), ratos diabéticos tratados (insulina 4UI, s.c.) e respectivos controles. Para caracterização do modelo e avaliação do efeito da insulina sobre o processo autofágico, as seguintes análises foram realizadas: (a) glicemia, número de leucócitos no sangue periférico, número de células do LBA; (b) concentrações de citocinas: interleucina (IL)-1beta, fator de necrose tumoral (TNF)-alfa, IL-6, IL-4, IL-10, cytokine-induced neutrophil chemoattractant (CINC)-1 e CINC-2 no sobrenadante do LBA pela técnica de ELISA; (c) caracterização de macrófago alveolar (MA) do LBA quanto a antígenos de superfície (MHCII, pan-macrophage KiM2R, CD11b) e marcadores autofágicos (proteína de cadeia leve associada a microtúbulo (LC)3 , gene/proteína relacionado à autofagia (ATG) pela técnica de citometria de fluxo e microscopia confocal ; (d) estudo dos macrófagos diferenciados, a partir da medula óssea, por citometria de fluxo e microscopia confocal; (e) estudo da arquitetura do baço pela técnica de imuno-histoquímica associada à microscopia confocal. Avaliando os resultados em conjunto, a via autofágica parece ser de extrema importância e de capacidade inovadora para alvo terapêutico. Observou-se que a insulina exerceu efeitos antagônicos sobre os macrófagos de tecidos diferentes: aumentou a expressão LC3 nos macrófagos recuperados por LBA e não conseguiu alterar a atividade autofágica em macrófagos da polpa vermelha do baço em ratos diabéticos. Os BMM originários de ratos diabéticos comportaram-se de maneira contrária aos do animal controle: os BMM tipo M1 tiveram o conteúdo de LC3 diminuído, enquanto os M2 tiveram o conteúdo autofágico aumentado. O tratamento com insulina nos ratos diabéticos não alterou o nível do conteúdo LC3 dos BMM, mesmo após uma semana de cultura in vitro. Concluímos, assim, que o tratamento com dose única de insulina foi capaz de induzir a autofagia em macrófagos alveolares, mas insuficiente para resgatar os níveis basais da autofagia em macrófagos da medula óssea e da polpa vermelha do baço / Diabetes mellitus (DM) is characterized by hyperglycemia associated to a lack or ineffectiveness of insulin. DM is marked by changes in several cellular processes that need to be better understood. Autophagy pathway in macrophages from different tissues was studied with the purpose to verify whether treatment with insulin is capable of modulating this process. Bone marrow derived macrophages (BMM), bronchoalveolar lavage (BAL), and splenic tissue macrophages from Wistar rats, diabetic (alloxan, 42 mg/kg, iv, 10 days) and diabetic rats treated with insulin were studied. To characterize the model and evaluate the effect of insulin upon the autophagic process, the following analyzes were performed: (a) glucose levels, number of leukocytes in peripheral blood, BAL cell number; (b) concentrations of cytokines (interleukin (IL)-1beta, tumor necrosis factor (TNF)-alfa, IL-6, IL-4, IL-10, cytokineinduced neutrophil chemoattractant (CINC)-1 and CINC-2 in the supernatant of BAL fluid by ELISA; (c) characterization of BAL alveolar macrophage (AM) surface antigens (MHCII, pan macrophage marker KiM2R, CD11b) and autophagic markers (microtubule-associated protein light chain (LC)3, gene/protein associated to autophagy (ATG) by flow cytometry and confocal microscopy (d) study of macrophages diferenciated from bone marrow by flow cytometry and confocal microscopy; (e) the architecture of spleen and macrophages from red pulp by immunohistochemical techniques associated to confocal microscopy. Evaluating these results together, the autophagic pathway appears to be innovative for therapeutic target. In this study, it was observed that insulin exerted diverse effects on macrophages from different tissues: increased expression of LC3 in AM recovered from BAL and was unable to change the autophagic activity of macrophages from the red pulp of the spleen in diabetic rats. BMM from diabetic rats behaved in an antagonistic way compared to control animals: BMM M1 type decreased their autophagy content while M2 macrophages increased autophagic levels and insulin treatment did not alter the level of LC3 expression. In conclusion, treatment with a single dose of insulin was able to induce autophagy in alveolar macrophages, but insufficient for recovering baseline levels of autophagy in bone marrow derived macrophages and macrophages from the red pulp of the spleen

INTRODUÇÃO: Embora a população diabética seja extremamente significativa e crescente nos últimos anos, os estudos envolvendo regeneração nervosa e diabetes mellitus (DM) não são muitos e, frequentemente, mostram resultados conflitantes e pouco conclusivos. O objetivo deste trabalho foi estudar a regeneração nervosa em ratos diabéticos. MÉTODOS: O trabalho foi realizado no Laboratório de Microcirurgia Experimental (LIM 4) do HC-FMUSP. Utilizaram-se 40 ratos machos, que foram separados em 2 grupos principais, cada um com 20 animais: grupo controle e grupo diabetes. Cada grupo foi subdividido em 2 subgrupos de 10 animais: controle com neurorrafia término-terminal (CN), controle com enxerto de nervo (CE), diabético com neurorrafia términoterminal (DN) e diabético com enxerto de nervo (DE). A indução do DM foi feita pela inoculação de estreptozotocina na dose de 60mg/Kg, por via intraperitoneal e após 8 semanas os animais foram submetidos à cirurgia. Diversas avaliações foram feitas: massa corporal, glicemias, testes da marcha e eletrofisiológico, índice de peso do músculo tríceps sural (pata operada/não operada) e análises histomorfométricas. RESULTADOS: Ocorreram 3 óbitos, 1 no CN, 1 no DN e 1 no DE. Nas avaliações pósoperatórias o peso dos animais do grupo controle foi maior que o do grupo diabetes (p<0,05). Todos os ratos do grupo diabetes mostraram níveis glicêmicos bem superiores aos do grupo controle (p<0,05), mantendo-se sempre maiores que 200mg/dL. No 20o PO o teste da marcha foi mais próximo do normal nos animais do grupo controle do que no grupo diabetes (p<0,05), sendo melhor nos subgrupos com neurorrafia do que com enxerto de nervo (p<0,05). No 40o PO o panorama se manteve, exceto pela comparação do DN com o DE (p>0,05). Já no 60o PO o teste foi semelhante entre os animais do grupo controle (CN e CE) e o DN (p>0,05), se mostrando pior no DE (p<0,05). No teste eletrofisiológico com 60 dias de evolução, as amplitudes do potencial evocado foram semelhantes entre os subgrupos controles e diabéticos (p>0,05). O índice de peso do músculo tríceps sural foi maior no CN em comparação com os outros 3 subgrupos (p<0,05), não se verificando o mesmo nas demais comparações (p>0,05). No 60o PO não se encontraram diferenças estatisticamente significativas na comparação dos subgrupos controles e diabéticos em relação à densidade axonal, medidas das áreas das secções transversas das fibras nervosas, dos axônios e das células de Schwann. CONCLUSÕES: O teste da marcha mostrou que a recuperação funcional foi mais rápida nos animais do grupo controle, porém, com 60 dias, o DN apresentava uma recuperação semelhante aos animais controles, ao passo que o DE ainda não. A resposta da musculatura tríceps sural ao estímulo do nervo ciático com 60 dias de evolução, verificada no teste eletrofisiológico, se mostrou parecida nos animais controles e diabéticos, não havendo diferença estatística. A atrofia muscular, vista pelo índice de peso do músculo tríceps sural, foi menor em CN, porém sem diferença estatística entre CE, DN e DE. A densidade de axônios, assim como os calibres das fibras nervosas e dos axônios não foram estatisticamente diferentes nos animais diabéticos no 60o PO / INTRODUCTION: Although the diabetic population is highly significant and has been growing during the past few years, studies involving nerve regeneration and diabetes mellitus (DM) are rather uncommon, frequently demonstrating divergent results and few conclusions. The objective of this study is to evaluate nerve regeneration in diabetic rats. METHODS: The study was accomplished in the Experimental Microsurgery Laboratory (LIM 4) of the HC-FMUSP. The study included 40 male rats, separated into two main groups: 20 controls and 20 diabetic animals. Each group was then further subdivided into two subgroups with 10 animals in each: control with end-toend neurorrhaphy (CN); control with nerve graft (CE); diabetic with end-toend neurorrhaphy (DN); and diabetic with nerve graft (DE). DM was accomplished by intraperitoneal innoculation of 60mg/Kg of streptozocin and the animals underwent surgery eight weeks later. Various evaluations were performed: body mass, glycemias, walking and electrophysiology tests, triceps surae muscle weight index (operated/non-operated paw) and histomorphometric analysis. RESULTS: Three deaths occurred; one in CN, one in DN, and one in DE. In the postoperative evaluations the weight of the control animals was greater than that of the diabetic group (p<0.05). All the rats in the diabetic group demonstrated glycemic levels very superior to those of the control group (p<0.05), always remaining over 200mg/dL. On the 20th PO day, the walking test was closer to normal in the control group than in the diabetic one (p<0.05), better in the neurorrhaphy subgroups than in the nerve graft ones (p<0.05). On the 40th PO day the range was maintained, except for comparison of DN with DE (p>0.05). Already on the 60th PO day, the test was similar among the animals of control group (CN and CE) and DN (p>0.05), seeming worse on DE (p<0.05). At 60 days the potential amplitudes of the electrophysiological test were similar among the control and diabetic subgroups (p>0.05). Triceps surae muscle weight index was greater in the CN compared with the other three subgroups (p<0.05), which was not seen in the other comparisons (p>0.05). On the 60th PO day no statistically significant differences were observed when comparing the control and the diabetic subgroups regarding the axonal density, measurent of the areas of the transverse sections of the nerve fibers, axons and Schwann cells. CONCLUSIONS: The walking test showed that the functional recovery was swifter in the control group animals. At 60 days, however, DN presented a recovery similar to that of the control animals, whereas DE still did not. Triceps surae muscle response upon stimulation of the sciatic nerve at 60 days, verified by the electrophysiological test, showed it to be similar in the control and diabetic animals, without a statistical difference. The muscular atrophy observed by the triceps surae muscle weight index was less in CN, however, without a statistical difference among CE, DN and DE. The axon densities as well as the calibers of the nerve fibers and axons were not statistically different in the diabetic animals at 60 days PO

As pesquisas em lesão medular tiveram um avanço significativo nas últimas duas décadas. Várias substâncias têm sido testadas, dentre elas, os fatores neurotróficos que são proteínas que auxiliam na maturação e desenvolvimento do sistema nervoso. O objetivo deste estudo foi conduzir testes que propiciem a análise dos efeitos da recuperação funcional locomotora e regeneração axonal em ratos submetidos a testes experimentais com a utilização da substância neurotropina-4. O estudo consistiu de 30 ratos adultos jovens, da raça Wistar, que foram submetidos à lesão medular ao nível de TX, provocado por um aparelho denominado NYU impactor. Os ratos foram divididos em dois grupos de 15 ratos cada, denominados de grupo controle e grupo tratamento, que receberam aplicação de água destilada e 1g de neurotropina-4, respectivamente. Estes foram avaliados funcionalmente pela escala BBB e submetidos à análise histológica. Concluiu-se que a neurotropina-4 promove a recuperação locomotora funcional e diminui os efeitos secundários da lesão medular, comparativamente ao grupo controle / Research into spinal cord injury has advanced significantly over the past two decades. Many substances have been tested, including the neurotrophics factors, which are proteins that aid in the maturation and development of the nervous system. The objective of this study was to conduct tests that provide the analysis of the effects of the locomotor functional recovery and axonal regeneration in rats subjected to experimental tests with the use of the substance neurotrophin-4. The study consisted of thirty young adult rats, Wistar race, which received TX level of spinal cord injury through a device called NYU impactor. The rats were divided into two groups of fifteen rats each, called the control group and treatment group, which received application of distilled water and 1 g Neurotrophin-4, respectively. They were evaluated functionally by the BBB scale and submitted to the histological analysis. It was concluded that the Nt-4 promotes the recuperation of the locomotor function and reduces the side effects of spinal cord injury, compared to the control group

Dentre as diversas possibilidades de reconstrução de tecidos ósseos atróficos, a regeneração óssea guiada é uma das mais promissoras. Neste contexto, muitas membranas reabsorvíveis tem sido desenvolvidas e precisam ser testadas como parte de sua caracterização. O objetivo do presente estudo foi avaliar radiográfica e histologicamente em um estudo in vivo, se uma nova membrana polimérica eletrofiada de PCL/poli(rotaxona) demonstra comportamento semelhante a uma membrana de colágeno, comercialmente consagrada, quanto à promoção de regeneração óssea guiada. Foi realizado defeito crítico de 8mm de diâmetro na calvária de 60 ratos Wistar machos. Em dois grupos iguais (n=20) os defeitos foram recobertos aleatoriamente por uma membrana de colágeno suíno ou por uma membrana polimérica mista de policaprolactona (PCL) e poli(rotaxona). Em um terceiro grupo (n=20) os defeitos não foram recobertos e permaneceram apenas com o coágulo. Os animais sofreram eutanásia em 7, 14, 21 e 42 dias pós operatórios. Espécimes da região foram radiografadas e preparadas para análise histológica. Radiograficamente, os defeitos recobertos pela membrana de colágeno suíno apresentaram diminuição mais significativa da área radiográfica dos defeitos de acordo com a progressão dos períodos pós-operatórios do que nos outros grupos. A histomorfologia do reparo mostrou agrupamentos mais expressivos de células gigantes no grupo PCL/poli(rotaxona) sugerindo resposta à corpo estranho. Na histomorfometria, a neoformação óssea foi significativamente mais intensa e com osso neoformado mais maduro no grupo Colágeno. Concluímos que para um modelo de regeneração óssea guiada, a membrana de PCL/poli(rotaxona) não superou a membrana de colágeno. / The need to rebuild lost bone tissue, shows up as one of the great challenges of modern dentistry. Among several possibilities, guided bone regeneration is one of the most established techniques. In this context, many resorbable membranes have been developed and need to be tested as part of their characterization. The aim of this study was to evaluate by an in vivo model, if a new electrospinning PCL/polyrotaxane polymer membrane promotes similar guided bone regeneration when compared to a collagen membrane. An 8mm diameter critical defect was made in 60 male Wistar rats calvaria. In two equal groups (n = 20) the defects were randomly covered with a porcine collagen or a PCL/polyrotaxane membranes. In a third group (n = 20) the defects remained uncovered and just the blood clot occupied the defect. The animals were euthanized at 7, 14, 21 and 42 days post-operative. Specimens were x-rayed and prepared for histological analysis. Radiographically, the defects covered by porcine collagen membrane, showed more significant reduction in defect area, according to postoperative period evolution. Histomorphology showed intense giant cells presence in the PCL/polyrotaxane group, suggesting a foreign body response. The histomorphometric analysis showed new and mature bone formation more intense in collagen group. Under the limits of this study, the collagen membrane performance in guided tissue regeneration was far superior to the PCL/polyrotaxane membrane.