Submitted by Maike Costa (maiksebas@gmail.com) on 2017-01-31T12:37:20Z No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 2719783 bytes, checksum: 00456e5b8ca69f853baec641a28cd6f2 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-31T12:37:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 2719783 bytes, checksum: 00456e5b8ca69f853baec641a28cd6f2 (MD5) Previous issue date: 2016-04-01 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / The β-D-glucans are polysaccharides constituting the cell wall of yeasts such as Saccharomyces cerevisiae. Evidence shows polymers have several beneficial effects, mainly related to immunomodulation. However, their action on platelet and endothelial function is understudied. This study aimed to evaluate the effect of (1-3) (1-6) β-D-glucan extracted from S. cerevisiae and derivative carboxymethylated (CM-G) on vascular and platelet function in rats. The animals were treated orally with CM-G and BG-Sc at a dose of 20 mg/kg daily for eight days and the controls received saline as placebo. At end, were collected blood and thoracic aortic artery to study platelet activation and aggregation by light transmission, flow cytometry, vascular reactivity and cytokine assay. In vitro studies of platelet activation and aggregation induced by adenosine diphosphate (ADP) and collagen were conducted with CM-G at different concentrations (100 and 300 μg/mL). Significant reduction in IL-8 levels (4,18 ± 0,72 pg/mL) in the group treated with CM-G was also found when compared to control (22,7 ± 6,9 pg/mL) and the BG-Sc group (16,4 ± 2,4 pg/mL). The reactivity studies shows BG-Sc and CM-G had no influence on vascular response to phenylephrine (PHE) compared to the control. In the group treated with BG-SC, the response to vasorelaxantes agents such as acetylcholine (ACH; Emax = 90,2 ± 14,1%; pD2 = 6,36 ± 0,30 M) and sodium nitroprusside (SNP; Emax = 92,3 ± 2,4%; pD2 = 10,21 ± 0,10M) were impaired compared to controls (ACH: Emax = 100 ± 7,5%; pD2 = 8,17 ± 0,25 M; SNP: Emax = 100 ± 9,5%; pD2 = 11,18 ± 0,27 M). However, treatment with CM-G (max = 93,1 ± 2,7%; pD2 = 11,71 ± 0,07 M) increased the potency of NPS when compared with the control (Emax = 100 ± 9.5%; pD2 = 11.18 ± 0.27). In vitro studies of platelet aggregation by light transmission reveals CM-G inhibited the aggregation stimulated by ADP in doses of 100 and 300 mg/ml, reaching 25,7 ± 2,7% and 14,8 ± 3,2% of aggregation, respectively. When aggregation was induced by collagen, only the dose 300 mg/ml had inhibitory activity (33 ± 6,2%). The antiplatelet effect was similar to acetylsalicylic acid when the aggregation was generate by ADP. Aggregation inhibition was also demonstrated by flow cytometry, however was observed that CM-G had no effect on platelet activation. In treated animals, there was inhibition of platelet aggregation induced by ADP (45% ± 3,9 and 45 ± 6%, respectively). However, when induced by collagen, antiplatelet effect was observed only in animals receiving the BG-Sc (22,6 ± 7,7%). The treatment and in vitro aggregation assays suggest that CM-G appears to be more selective for ADP. The findings indicate the CM-G and BG-Sc feature antiplatelet effect and modulating vascular function. Thus, the use of these polysaccharides may be a possible tool for the prevention of cardiovascular diseases / As β-D-glucanas são polissacarídeos constituintes da parede celular de leveduras, como a Saccharomyces Cerevisae. Evidências mostram que esses polímeros possuem diversos efeitos benéficos, principalmente relacionados a imunomodulação. Entretanto, a sua ação sobre a função plaquetária e endotelial é pouco estudada. Assim, este estudo teve como objetivo avaliar o efeito da (1-3) (1-6) β-d-glucana extraída de S. cerevisae e do seu derivado carboximetilado (CM-G) sobre a função vascular e plaquetária em ratos. Os animais foram tratados por via oral com CM-G e BG-Sc na dose de 20 mg/Kg, diariamente, durante oito dias, e os controles receberam solução salina como placebo. Ao final, foram coletados o sangue e a artéria aorta torácica para estudos de agregação e ativação plaquetária por transmissão luminosa, citometria de fluxo, reatividade vascular e dosagem de citocinas. Foram realizados estudos in vitro de agregação e ativação plaquetária induzida por adenosina difosfato (ADP) e colágeno com a CM-G em diferentes concentrações (100 e 300 μg/mL). Constatou-se redução significativa dos níveis de IL-8 (4,18±0,72 pg/mL) no grupo tratado com CM-G ao se comparar com o grupo controle (22,7±6,9 pg/mL) e com o grupo BG-Sc (16,4±2,4 pg/mL). Os estudos de reatividade mostraram que a BG-Sc e a CM-G não exerceram influência sobre a resposta vascular da fenilefrina (PHE) em relação ao controle. No grupo tratado com BG-SC, a resposta aos agentes vasorelaxantes acetilcolina (ACH; Emax = 90,2 ± 14,1%; pD2 = 6,36 ± 0,30 M) e nitroprussiato de sódio (NPS; Emax = 92,3± 2,4%; pD2 = 10,21 ± 0,10M) foram prejudicadas em relação aos controles (ACH: Emax = 100 ± 7,5%; pD2 = 8,17 ± 0,25 M; NPS: Emax = 100 ± 9,5%; pD2 = 11,18 ± 0,27 M). Porém, o tratamento com a CM-G (Emax = 93,1 ± 2,7 %; pD2 = 11,71 ± 0,07 M) aumentou a potência do NPS quando comparado com o controle (Emax = 100 ± 9,5%; pD2 = 11,18 ± 0,27 M). Os estudos de agregação plaquetária in vitro por transmissão luminosa revelam que a CM-G inibiu a agregação estimulada por ADP nas doses de 100 e 300 μg/mL, atingindo 25.7±2.7% e 14.8±3.2% de agregação, respectivamente. Quando a agregação foi induzida pelo colágeno, apenas a dose 300 μg/mL teve ação inibitória (33 ± 6,2%). O efeito antiagregante foi similar ao ácido acetilsalicílico quando a agregação foi induzida por ADP. Inibição da agregação também foi demonstrada na técnica de citometria de fluxo, porém observou-se que a CM-G não afetou a ativação plaquetária. Nos animais tratados, verificou-se inibição da agregação plaquetária induzida por ADP (45 ± 3.9% e 45 ± 6 %, respectivamente). Entretanto, quando induzido por colágeno, o efeito antiagregante foi visto apenas nos animais que receberam BG-Sc (22.6 ± 7.7%). O tratamento e os ensaios de agregação in vitro sugerem que a CM-G parece ser mais seletiva para o ADP. Os achados indicam que a CM-G e a BG-Sc apresentam efeito antiagregante e moduladora da função vascular. Assim, o uso desses polissacarídeos pode ser uma possível ferramenta para a prevenção de doenças cardiovasculares.

Submitted by Cristhiane Guerra (cristhiane.guerra@gmail.com) on 2017-02-01T16:10:08Z No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 2145717 bytes, checksum: d5fdbc85b572e5bc3fbbb89985a24ef3 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-01T16:10:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 2145717 bytes, checksum: d5fdbc85b572e5bc3fbbb89985a24ef3 (MD5) Previous issue date: 2015-02-27 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / The pulmonary hypertension (PH) is caracterized for the increase chronic pulmonary arterial pressure, vascular remodeling and ventricle right hypertrophy. The oxidative stress is a common disorders in the PH. Cissampelos sympodialis Eichl. is frequently used in the popular medicine for the treatement of deseases of the tract respiratory, rheumatism and arthritis. Furthermore many of these activites it has been proved scientifically making this plant an promising target. In this context this study had with aim to evaluate the acute effect of aqueous fraction of Cissampelos sympodialis Eichl (FAFCS) in pulmonary artery of normotensives rats and to avaluate the FAFCS potential in to prevent and/or to improve the pulmonary vascular dysfunction induced for the monocrotaline PH (MCT). In pulmonary artery rings precontracted with phenilefrine (PHE) (1uM) isolated of normotensive rats, FAFCS (10-3000ug/mL) induzed vasorelaxation, concentration dependent, with (MR=98±2%; EC50=599μg/mL) or without of endothelium (MR=102±2%; EC50 =700μg/mL), demostrate that FAFCS produces vasorelaxation independent of the endothelial factors. The PH was induced for the subcutaneous injection of MCT (60mg/kg, single dose). The animals receive FAFCS oral via (50 ou 100mg/kg/day), sildenafil or saline during 28 days. The MCT group presented increase of PAP (63±5 mmHg) and HVD (0,52±0,03g) in comparing to the control group (PAP=29±2mmHg; HVD=0,28±0,02g). The treatment with FAFCS 50mg/kg (PAP=46±3mmHg; HVD=0,36±0,04g) and 100mg/kg (30±5mmHg; HVD=0,37±0,05g) or sildenafil 50mg/kg (32±2mmHg; HVD=0,35±0,03g) showed a significant reduction in pressure and right ventricular hypertrophy compared to the MCT group. In the tests of vascular reactivity the MCT animals showed reduction of the response to PHE (Δ contraction=0,37±0,04g) and decrease of the reponse vasorelaxation to ACh and NPS (MR=45±6%) in relation to the control group (PHE, Δ contraction=0,86±0,09 g; NPS, MR=96±6%). The treatment with FAFCS or sildenafil not reversed to endothelial dysfunction caused for the exposition to MCT. However the effect to PHE and the NPS were restored with FAFCS 50mg/kg (PHE, Δcontraction =0,63±0,04g; MR=79±3%), FAFCS 100mg/kg (PHE, Δcontraction=0,77±0,06g; NPS, MR= 85±5 %) e sildenafil (PHE, Δcontraction = 0,8±0,08g; NPS, MR=72±2%). Furthermore FAFCS reduced significantly the levels of reactive oxygen species in the DHE staining in pulmonary artery. In conclusion these results suggests that FAFCS promotes relaxant effect endothelium independent in pulmonary artery of normotensive rats. In PH monocrotaline-induced the treatment with FAFCS reduced the oxidative stress and restore the damage on smooth muscle in pulmonary artery of rat and hypertrophy right ventricle induced by monocrotaline. / A hipertensão pulmonar (HP) é caracterizada pelo aumento crônico da pressão arterial pulmonar, remodelamento vascular e hipertrofia do ventrículo direito. O estresse oxidativo é uma das desordens comum na HP. Cissampelos sympodialis Eichl. é frequentemente utilizada na medicina popular para o tratamento de doenças do aparelho respiratório, reumatismos e artrites. Além disso, muitas dessas atividades têm sido cientificamente comprovadas tornando essa planta um alvo de pesquisa bastante promissor. Nesse contexto, o trabalho teve como objetivo avaliar o efeito agudo de fração aquosa de Cissampelos sympodialis Eichl. (FAFCS) em artéria pulmonar de rato saudável, bem como avaliar o potencial da FAFCS em prevenir e/ou melhorar disfunção vascular pulmonar promovida pelo modelo de HP induzido pela monocrotalina (MCT). Em anéis de artéria pulmonar isolada de rato normotenso, pré-contraídos com fenilefrina (FEN) (1μM), FAFCS (10-3000μg/mL) induziu vasorrelaxamento, dependente de concentração, na presença (Emáx=98±2%; CE50=599μg/mL) e ausência (Emáx=102±2%; CE50 =700μg/mL) do endotélio, demonstrando que FAFCS produz efeito vasorrelaxante independente dos fatores endoteliais. A HP foi induzida pela injeção subcutânea de MCT (60mg/kg, dose única). Os animais receberam FAFCS via oral (50 ou 100mg/kg/dia), sildenafil ou salina durante 28 dias. O grupo MCT apresentou aumento na PAP (63±5 mmHg) e HVD (0,52±0,03g) em comparação ao grupo controle (PAP=29±2mmHg; HVD=0,28±0,02g). O tratamento com FAFCS 50mg/kg (PAP=46±3mmHg; HVD=0,36±0,04g) e 100mg/kg (30±5mmHg; HVD=0,37±0,05g) ou sildenafil 50mg/kg (32±2mmHg; HVD=0,35±0,03g) apresentaram redução significativa da pressão e hipertrofia ventricular direita em comparação ao grupo MCT. Nos ensaios de reatividade vascular, os animais MCT apresentaram redução da resposta à FEN (Δcontração=0,37±0,04g) e diminuição das respostas vasorrelaxantes à ACh e NPS (Emáx=45±6%) em relação ao grupo controle (FEN, Δcontração=0,86±0,09 g; NPS, Emáx=96±6%). O tratamento com FAFCS ou sildenafil não reverteu à disfunção endotelial causada pela exposição a MCT. Entretanto, a resposta à FEN e ao NPS foram restauradas com o tratamento com FAFCS 50mg/kg (FEN, Δcontração =0,63±0,04g; Emáx=79±3%), FAFCS 100mg/kg (FEN, Δcontração=0,77±0,06g; NPS, Emáx= 85±5 %) e sildenafil (FEN, Δcontração = 0,8±0,08g; NPS, Emáx=72±2%). Além disso, o tratamento com FAFCS reduziu significativamente os níveis de espécies reativas de oxigênio em cortes de artéria pulmonar, detectado pela fluorescência emitida pela oxidação do DHE por ânions O2●-. Em conclusão, estes resultados sugerem que FAFCS promove efeito relaxante independente de endotélio em artéria pulmonar de rato normal. No modelo de HP adotado, o tratamento com FAFCS reduz o estresse oxidativo e restaura a resposta muscular lisa em artéria pulmonar de rato, prevenindo a HP e hipertrofia ventricular direita.

Neste estudo, foram realizados três experimentos distintos (1) analisando os efeitos da administração de material particulado em camundongos BALB/c com inflamação pulmonar alérgica crônica induzida por ovalbumina; (2) comparando camundongos AIRmax e AIRmin com inflamação pulmonar alérgica crônica induzida por ovalbumina; (3) comparando camundongos AIRmax e AIRmin que receberam material particulado (resíduo da queima de óleo diesel - ROFA) por via intranasal. Para a indução da inflamação pulmonar alérgica crônica, os camundongos foram sensibilizados com ovalbumina (OVA) através de duas injeções intraperitoneais de alérgeno com o adjuvante hidróxido de alumínio (dias 0 e 14) e quatro inalações de OVA 1% (dias 22, 24, 26 e 28). Os animais que foram expostos ao material particulado, receberam ROFA (60 ?g) nos dias 0, 2, 4 e 6 no experimento do efeito do material particulado ou nos dias dos desafios com OVA no experimento do efeito da administração de material particulado em animais com inflamação pulmonar induzida pela OVA. Os grupos controle foram tratados com solução salina 0,9 % seguindo o mesmo protocolo. Quarenta e oito horas após o último desafio, a responsividade pulmonar foi medida por broncoprovocação àr metacolina através da pletismografia de corpo inteiro, após a qual os animais foram sacrificados e tiveram os pulmões removidos para analise histológica. O estudo realizado com animais BALB/c para análise dos efeitos do material particulado sobre a resposta inflamatória induzida pela ovalbumina mostrou um aumento de responsividade nos animais inflamados e co-expostos ao material particulado, sem efeito sobre a inflamação ou remodelamento epitelial induzidos pela OVA. A exposição ao material particulado por si só levou a uma diminuição da área ocupada por células ciliadas e a um aumento da responsividade pulmonar. O experimento realizado com camundongos das linhagens AIRmax e AIRmin para estudar eventuais diferenças entre a resposta destas linhagens à inflamação pulmonar crônica induzida pela OVA mostrou uma maior susceptibilidade dos animais AIRmin, com maior infiltrado eosinofílico nas vias aéreas e responsividade pulmonar. Por outro lado, o estudo realizado para verificar a ação do material particulado nas linhagens AIRmax e AIRmin mostrou um intenso remodelamento epitelial, com infiltrado macrofágico ao redor das vias aéreas de ambas as linhagens, porém os animais AIRmin apresentaram maior responsividade pulmonar que os AIRmax quando expostos ao material particulado. Assim pudemos concluir que (1) a exposição ao material particulado na presença de inflamação pulmonar alérgica crônica amplifica o remodelamento epitelial e a responsividade pulmonar; o background genético influencia (2) a inflamação eosinofílica e a responsividade pulmonar induzidas pela inflamação alérgica crônica bem como (3) a responsividade pulmonar induzida pela exposição ao material particulado. / In this study, three distinct experiments were performed (1) examining the effects of administration of particulate matter in BALB/c mice with chronic allergic pulmonary inflammation induced by ovalbumin; (2) comparing AIRmax and AIRmin mice with chronic allergic pulmonary inflammation induced by ovalbumin; (3) comparing AIRmax and AIRmin mice receiving particulate matter (residue from the burning of diesel oil - ROFA) intranasally. For the induction of chronic allergic pulmonary inflammation, the mice were sensitized to ovalbumin (OVA) through two intraperitoneal injections of allergen with adjuvant aluminum hydroxide (days 0 and 14) and four inhalations of OVA 1% (days 22, 24, 26 and 28). The animals that were exposed to particulate matter received ROFA (60 ?g) on days 0, 2, 4 and 6 in the study of the effect of the particulate matter or after the challenges with OVA in experiment of the effect of administration of particulate matter in animals with pulmonary inflammation induced by OVA. The control groups were treated with saline 0.9% following the same protocol. Forty eight hours after the last challenge, pulmonary responsiveness was measured through broncoprovocation to methacholine by whole body plethysmography, after which the animals were sacrificed and the lungs were removed for histologic analysis. The study conducted on animals BALB/c for analysis of the effects of particulate matter on the inflammatory response induced by ovalbumin showed an increase of responsiveness in animals with allergic inflammation and exposed to the particulate matter, without effects on inflammation or epithelial remodeling induced by OVA. Exposure to particulate matter led to a reduction in the area occupied by ciliated cells and increased lung responsiveness. The experiment in AIRmax AIRmin mice to study possible differences in the response of these strains to chronic lung inflammation induced by OVA showed greater susceptibility of AIRmin, with more eosinophilic infiltration in airway and greater lung responsiveness. The study to check the action of particulate matter in the lines AIRmax and AIRmin showed an intense epithelial remodeling, with macrophagic infiltrate around the airways of both strains. However, AIRmin mice had higher pulmonary responsiveness than AIRmax when exposed to particulate matter. We conclude that (1) exposure to particulate matter in the presence of chronic allergic pulmonary inflammation amplifies the epithelial remodeling and pulmonary responsiveness; the genetic background influences (2) the pulmonary responsiveness and eosinophilic inflammation induced by chronic allergic inflammation and (3) the pulmonary responsiveness induced by exposure to particulate matter.

No presente trabalho, uma série de calcogenotriazóis (3a-o,5a-f) foi sintetizada empregando reações de cicloadição entre azidas e alquinos catalisadas por cobre (CAACu), com duas diferentes metodologias: uma aplicada aos selenetos e outra aos teluretos triazólicos. Os selenetos acetilênicos (1a,b) foram submetidos ao sistema catalítico Cu(OAc)2/ascorbato de sódio, enquanto os teluretos (4a,b) sumetidos à CuI e PMDTA. Foi possível obter 14 diferentes selenotriazóis (3a-o) e 6 telurotriazóis (5a-f). Em seguida, os produtos obtidos através da cicloadição foram empregados como eletrófilos em reações de acoplamento cruzado tipo Negishi com nucleófilos de organozinco. Assim, o emprego de catalisador de níquel associado à fosfinas como ligantes permitiu a síntese de diversos compostos triazólicos (6a-k) partindo dos calcogenetos triazólicos (3k, 3l, 3o, 5a). Os resultados obtidos com a metodologia desenvolvida demonstraram a eficiência da catálise de níquel em reações de acoplamento tipo Negishi além da aplicabilidade dos produtos originados das reações de cicloadição catalisada por cobre. / In this work it was synthesized a range of different 4- organochalcogenoyl-triazoles (3a-o, 5a-f) employing the Copper Catalyzed Azide-Alkyne Cycloadittion (CAACu) 1,3-dipolar in two distinct methodologies: one of them applied to the selenium compounds and the other one to the tellurium triazoles. To the acetylenic selenides (1a,b) was employed the catalytic system composing of Cu(OAc)2 and sodium ascorbate, while with the telurides (4a,b), CuI and PMDTA was used. Practicing these methodologies it was possible to obtain 14 differents selenium-triazoles (3a-o) and 6 tellurotrizoles (5a-f). In the next step of the work, the products previously obtained through the CAACu were employed as the eletrophile partner in Negishi-type cross coupling reactions, with organozinc nucleophiles. Thereby, the use of nickel catalyst and fosfines ligands allowed some triazolic compounds (6a-k) synthesis starting from 1,2,3-triazole chalcogenides (3k, 3l, 3o, 5a). The results described here showed the nickel catalysis efficiency in Negishi-type cross-coupling reaction. Furthermore, it is remarkable the applicability of the products obtained from the CAACu.

Nesse trabalho, foi analisada a redução de arrasto, a partir da utilização de duas bancadas experimentais, onde uma delas está situada no laboratório de Mecânica dos Fluidos (EPUSP) e a outra, no laboratório de Fisiologia Vascular (ICB-USP). A redução de arrasto foi investigada a partir do uso dos seguintes polímeros: poliacrilamida 1822S e 1340S, polietileno glicol (PEG4000) e óxido de polietileno (Polyox WSR-301). O comportamento reológico das soluções poliméricas do PEG4000 e das poliacrilamidas foi adquirido experimentalmente, enquanto do Polyox WSR-301 foi obtido da literatura. Esses polímeros foram utilizados na bancada experimental da EPUSP, simulador hidrodinâmico, mas somente o PEG4000 foi utilizado na bancada experimental do ICBI em leitos arteriais caudais de ratos normotensos (Wistar) e espontaneamente hipertensos (SHR). No simulador hidrodinâmico, foi estudada a redução de arrasto em escoamentos pulsáteis laminares e turbulentos, cuja faixa de Reynolds varia entre 2300 a 13700, com concentrações poliméricas que variaram entre 5 e 100 ppm, porém para o PEG4000 essa concentração atingiu valor de 5000 ppm. Em leitos arteriais caudais de ratos, a redução de arrasto foi analisada para escoamento laminar, cuja faixa de Reynolds varia entre 100 e 700, com concentração polimérica de 5000 ppm. Além disso, a redução de arrasto foi estudada na presença e ausência das células endoteliais. Simulações computacionais utilizando o método dos volumes finitos (Fluent) foram realizadas a partir dos dados obtidos da bancada experimental do ICB-I, para avaliar a distribuição da tensão de cisalhamento sobre a parede do vaso na presença e ausência das células endoteliais e do PEG4000, considerando a parede da artéria rígida. A partir dos dados obtidos da análise da viscosidade, ficou constatado que o PEG4000 com concentração de 5000 ppm e as poliacrilamidas 1822S e 1340S com concentrações de 5 e 10 ppm apresentaram comportamento de fluido Newtoniano. Para as poliacrilamidas, concentrações poliméricas acima de 10 ppm apresentaram comportamento de fluido não-Newtoniano. De acordo com a literatura, o Polyox WSR-301 apresentou comportamento de fluido Newtoniano para todas as concentrações poliméricas utilizadas nesse trabalho. O PEG4000 não apresentou o fenômeno da redução de arrasto em nenhuma concentração polimérica analisada, quando aplicado na bancada experimental da EPUSP. As poliacrilamidas e o Polyox WSR-301 apresentaram reduções de arrasto que foram dependentes do número de Reynolds e da concentração utilizada, muito embora o Polyox WSR-301 tenha se mostrado mais eficiente em promover esse fenômeno. Nos leitos arteriais caudais, o PEG4000 apresentou redução de arrasto para a concentração de 5000 ppm, que foi acentuada pela presença das células endoteliais. Os valores da tensão de cisalhamento foram maiores para o animal SHR quando comparados com o animal Wistar. Além disso, no animal Wistar, o endotélio controlou o aumento dessa tensão via produção de substâncias vasodilatadoras, mas apresentou disfunção no animal SHR. A partir dos resultados apresentados acima, podese concluir que o Polyox WSR-301 é mais eficiente para promover a redução de arrasto em tubos rígidos. Por outro lado, muito embora o PEG4000 não tenha apresentado efeito na bancada experimental da EPUSP, esse se mostrou um bom redutor de arrasto em leitos arteriais caudais, tendo sua ação intensificada pela presença das células endoteliais. / In this work, the drag reduction was analyzed in two benches located at Laboratory of Fluid Mechanics at Polytechnic School (EPUSP) and at Laboratory of Vascular Physiology at Institute of Biomedical Science (ICB-USP). The drag reduction was investigated for the following polymers: polyacrilamide 1822S and 1340S, polyethylene glycol (PEG4000) and polyethylene oxide (Polyox WSR-301). The rheological behavior of polymeric solutions of polyacrilamide and PEG4000 was acquired experimentally; while it was obtained from the literature for Polyox WSR-301. All of these polymers were used in the hydrodynamic simulator, but only PEG4000 was employed in the tails arterial bed from normotensive (Wistar) and spontaneously hypertensive rats (SHR) at ICB-1. In the hydrodynamic simulator, the drag reduction was analyzed in laminar and turbulent pulsatile flow, in the range varying between 2300 and 13700, with polymeric concentrations between 5 and 100 ppm, but for PEG4000, concentration has reached 5000 ppm. On the other hand, in the tail arterial beds, the drag reduction was analyzed for laminar flow, in the range between 100 and 700, with polymeric concentration of 5000 ppm. In addition, it was studied in the presence and absence of endothelial cells. Computational simulation using the finite volume method (Fluent) was performed using data obtained from ICB-1 in order to analyze the wall shear stress distribution along of wall vessel both in the presence and absence of endothelial cells and PEG4000, considering the rigid walls. Polyacrilamide 1822S and 1340S as well as PEG4000 showed behavior of Newtonian fluid in the following concentrations: 5 and 10 ppm and 5000 ppm, respectively. On the other hand, for polyacrilamides, concentrations higher than 10 ppm showed behaviour of non- Newtonian fluids. According to the literature, the Polyox WSR-301 behaved as a Newtonian fluid in all concentrations used in this work. At EPUSP\'s bench, while PEG4000 did not show drag reduction for any polymeric concentration analyzed, this phenomenon could be seen for polyacrilamides and Polyox WSR-301, being dependent on Reynolds number as well as polymeric concentration. More important, Polyox WSR- 301 showed to be the most efficient drag reducer of them. Interestingly, in the assays employing the tail arterial beds, PEG4000 showed drag reduction in the concentration of 5000 ppm and it was increased by the presence of the endothelial cells. Thus, Polyox WSR-301 seems to be more efficient to promote drag reduction in the rigid tubes. On the other hand, while PEG4000 did not show drag reduction at EPUSP\'s bench, it was a good drag reducer in the tail arterial beds, being intensified by the action of endothelial cells.

A ouabaína (OUA) promoveu hipertensão arterial (HA) após 5, 10 e 20 semanas de tratamento e modificou a função vascular de artérias mesentéricas de resistência (AMR). O tratamento por 5 semanas com OUA aumentou o óxido nítrico (NO) e a expressão protéica da isoforma neuronal de óxido nítrico (nNOS), ao passo que diminuiu os prostanóides vasoconstritores. Além disso, reduziu a expressão protéica da Cu-Zn superóxido dismutase (SOD) e aumentou a atividade funcional da Na+K+-ATPase. Já o tratamento por 10 semanas com OUA aumentou NO e prostanóides vasodilatadores, enquanto diminuiu a expressão protéica da nNOS e da COX-2. O tratamento por 20 semanas reduziu o NO e a expressão protéica da nNOS. Porém, aumentou o ânion superóxido, o tromboxano A2 e a expressão protéica de ambas: a SOD e a COX-2. Em conclusão, o tratamento com OUA promoveu HA e alterações funcionais em AMR, sendo estas dependentes do tempo analisado, pois no tratamento durante 5 e 10 semanas estas alterações não contribuem para a manutenção da HA, enquanto que o tratamento durante 20 semanas contribui. / Ouabain treatment (OUA) developed hypertension after 5, 10 and 20 weeks and modified the vascular function in mesenteric resistance arteries (MRA). 5-weeks treatment with OUA increased nitric oxide (NO) and neuronal isoform of nitric oxide (nNOS) protein expression. On the other side, this treatment reduced vasoconstrictors prostanoids. Besides decreased Cu-Zn superoxide dismutase (SOD) protein expression and increased functional activity of Na+K+-ATPase. 10-weeks treatment enhance NO and vasodilators prostanoids but reduced both nNOS and COX-2 protein expression. 20-weeks treatment reduced NO and nNOS protein expression. Nevertheless increased anion superoxide, tromboxan A2 and both SOD and COX-2 protein expression. In conclusion, OUA treatment induced HA and functional alterations in MRA that are time-dependents, because in 5 and 10 weeks of treatment these alterations are not likely to maintenance of HA, but the changes observed in the treatment during 20 weeks contributes.

Parasitas da família trypanosomatidae como dos generos Crithidia, Blastocrithidia, Leptomonas, Hepertomonas e Rhynchoidomona infectam insetos e Phytomonas parasitam plantas. O T. cruzi e L. (L.) chagasi, agentes etiológicos respectivamente da doença de Chagas e da leishmaniose visceral (LV) também fazem parte desta família. Pela similaridade entre estes parasitos alguns estudos tem utilizado os tripanosomatídeos não patogênicos como fonte alternativa de antígenos para o imunodiagnóstico da doença de Chagas e da leishmaniose. Com o objetivo de identificar moléculas em tripanosomatídeos não patogênicos que reagem com anticorpos anti T. cruzi e anti- Leishmania sp, foram utilizados dois preparados antigênicos: a fração excretada-secretada (ES) e o extrato total obtido por digestão química (ET) de L. seymouri, C. deanei, C. fasciculata e C. luciliae, sempre comparados com o T. cruzi e a L. (L.) chagasi. A reatividade diferencial entre anticorpos anti T. cruzi e anti L. (L.) chagasi levou à escolha da L. seymouri, único parasito no qual a fração ES mostrou significativas diferenças de reatividade, a C. deanei apresentou dados semelhantes. Anticorpos presentes em casos de LV reagem, por ELISA, tanto com ES como com ET de L. seymouri, no entanto casos de leishmaniose tegumentar e a maioria dos chagásicos não apresentaram reação com a fração ES deste parasito, apesar de reagirem com o antígeno ET. O ELISA mostrou que os anticorpos anti L. (L.) chagasi reagem mais com proteínas contidas no ES e menos com carboidrato, ao contrário a baixa reatividade dos anticorpos anti T. cruzi para o ES são preferencialmente contra carboidratos. Quando as frações de ES e ET foram analisados por Immunobloting o anti- L. (L.) chagasi não reagiu com nenhuma banda por esta metodologia, ao contrário anticorpos anti- T. cruzi apresentaram intensa reação com bandas na região de 29-36kDa do ET de L. seymouri, que foram identificadas como sendo moléculas de proteínas e de carboidratos (66-97kDa) para o ES. A utilização de soros policlonais monoespecíficos mostra que ES e ET possuem epítopos compartilhados e a quantificação deste compartilhando foi calculado utilizando anticorpos monoespecíficos eluídos de ES ou ET. Estes resultados mostraram que a identificação de moléculas reativas de L. seymouri por anticorpos presentes em chagásicos e leishmanióticos sp depende da metodologia empregada versus preparado antigênico. A superioridade das moléculas contidas no parasito de L. seymouri foi adicionalmente evidenciada quando 25,5% das amostras de soros de VL que apresentavam baixa reatividade para o ET de L. chagasi, Abs 492nm menores que 0.99 e média e SD de 0,56 ? 0,18 apresentavam alta reatividade para o ET de L. seymouri (p<0,01) com média e SD de 1,51 ? 0,35. Estes dados nos indicam que uma caracterização mais profunda das moléculas presentes na L. seymouri é de vital importância se for empregada no imunodiagnóstico das doenças de Chagas e leishmaniose. / Parasites of Trypanosomatidae family as Crithidia, Blastocrithidia, Leptomonas, Hepertomonas and Rhynchoidomonas infect insects and Phytomonas parasitize plants. T. cruzi and L. (L.) chagasi the etiological agents of Chagas disease and Leishmaniasis (VL) respectively, belong to this family. The similarity between these parasites led few studies to use non-pathogenic trypanosomatids as an alternative source of antigens for Chagas\' disease and leishmaniasis immunodiagnosis. With the aim of identifying molecules in nonpathogenic trypanosomatids that react with anti T. cruzi and anti-Leishmania antibodies, two antigenic preparations were employed: the excreted-secreted molecules (ES) and total extract obtained by chemical digestion (ET) of L. seymouri, C. deanei, C. fasciculata and C. luciliae, and compared with T. cruzi and a L. (L.) chagasi. ES fraction of L. seymouri was the unique that showed differences in reactivity when tested with anti T. cruzi and anti L. (L.) chagasi antibodies, evaluation with C. deanei showed similar data. ELISA performed with L. seymouri ES and ET antigens reacted with all VL cases, however tegumentar leishmaniasis and Chagas disease cases showed no reaction with the ES fraction, although they react with ET antigen. The ELISA revealed that anti L. (L.) chagasi antibodies react with proteins contained in ES and less with carbohydrate, unlike the low reactivity of anti T. cruzi with ES were mainly against carbohydrates. When ES and ET were analyzed by immunoblotting the anti L. (L.) chagasi antibodies did not react with any bands, unlike antibodies to T. cruzi showed intense reaction with 29-36kDa protein bands of L. seymouri ET and carbohydrate bands ES (66-97kDa). The use of monospecific polyclonal sera showed that ES and ET share epitopes and these data was calculated using monospecific antibodies eluted from ES or ET antigens. These results show that the identification of L. seymouri molecules reactive by chagasic and leishmaniotic sp cases depends on the methodology employed versus antigenic preparation. The superiority of L. seymouri reactivity was further evidenced when 25.5% of VL sera that showed low reactivity to L. chagasi ET (Abs 492nm < 0.99 and smaller than average and SD of 0.56 +/- 0.18) showed high reactivity to ET L. seymouri (p <0.01) with mean and SD of 1.51 +/- 0.35. These data indicate that a more thorough characterization of molecules present in L. seymouri is of vital importance if used in Chagas disease and leishmaniasis immunodiagnosis.

The direct relationship between resistance exercise and vascular health is certain, but the complex set of metabolic and hemodynamic pathways and the effects of this type of exercise on cardiovascular tissues are still controversial. Although consensus that nitric oxide (NO) contributes to the control of blood flow during resistance exercise, are not yet fully understood the events signaling in the vasculature that mediate the release of this vasoactive agent. In this sense, the objective of the present study was to evaluate the acute effects of different intensities of resistance exercise on vascular adjustments in the superior mesenteric artery of healthy rats. The thesis comprises two chapters, consisting of two original articles. The first article, "Resistance exercise enhances insulin mesenteric artery acutely-induced relaxation in healthy rats", which assessed the acute effects of an exercise session held on vascular actions of insulin in rat mesenteric artery. In this first study, it was observed that a resistance exercise session increased the vasorelaxation via PI3K/eNOS. Such increase is due in part to an increased production of NO, associated with an increase in the participation of channels for K+ and Na+/K+-ATPase. The second article, "Endothelium adjustments to acute resistance exercise are intensity-dependent in healthy animals", demonstrated that a session of vigorous exercise moderately weathered and/or improves endothelium-dependent relaxation induced by insulin due to an increase in the levels of phosphorylation of eNOSser1177 and, consequently, increased endothelial production of NO healthy animals. From these findings it is possible to suggest that resistance exercise promotes vascular adjustments that work in favor of better control of vascular tone. In addition, the magnitude of these beneficial vascular adjustments is strongly related to increased resistance exercise intensity from the intensity of 50% of 1 RM. / A relação direta entre o exercício resistido e a saúde vascular é certa, mas o complexo conjunto de vias metabólicas, hemodinâmicas e os efeitos desta modalidade de exercício físico sobre os tecidos cardiovasculares ainda é bastante controverso. Embora seja consenso na literatura que o óxido nítrico (NO) contribui para o controle do fluxo sanguíneo durante o exercício resistido, ainda não estão completamente compreendidos os eventos de sinalização na vasculatura que medeiam à liberação deste agente vasoativo. Neste sentido, o objetivo do presente estudo foi avaliar os efeitos agudos de diferentes intensidades de exercício resistido sobre os ajustes vasculares em artéria mesentérica superior de ratos saudáveis. A tese é composta por dois capítulos, constituídos de dois artigos originais. O primeiro artigo, Resistance exercise acutely enhances mesenteric artery insulin-induced relaxation in healthy rats , no qual avaliou os efeitos agudos de uma sessão de exercício resistido sobre as ações vasculares da insulina em artéria mesentérica de ratos. Neste primeiro estudo foi demonstrado que uma sessão de exercício resistido aumentou o vasorelaxamento via PI3K/eNOS. Este aumento, se deve em parte a uma maior produção de NO, associado a um aumento da participação dos canais para K+ e da Na+/K+-ATPase. O segundo artigo, Endothelium adjustments to acute resistance exercise are intensity-dependent in healthy animals demonstrou que uma sessão de exercício resistido moderado e/ou vigoroso melhora o relaxamento dependente do endotélio induzido por insulina devido a um aumento nos níveis de fosforilação da eNOS ser1177 e, consequente, incremento da produção endotelial de NO em animais saudáveis. A partir destes achados é possível sugerir que o exercício resistido é capaz de promover ajustes vasculares importantes que atuam diretamente no favorecimento do melhor controle do tônus vascular. Além disso, a magnitude destes benéficos ajustes vasculares estão fortemente relacionados ao aumento da intensidade do exercício resistido a partir da intensidade de 50% de 1 RM.

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2016-05-20T12:56:17Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Tese_Ayyaz-Mahmood.pdf: 9023674 bytes, checksum: beecc131e286e19ce6d03dec91f319d8 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-20T12:56:17Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Tese_Ayyaz-Mahmood.pdf: 9023674 bytes, checksum: beecc131e286e19ce6d03dec91f319d8 (MD5) Previous issue date: 2015-11-27 / Realizamos estudos do mecanismo, da seletividade e regiosseletividade da metilação de nitronatos [R1R2CNO2]− com CH3I, em que R1 = R2 = H (1), R1 = CH3 e R2 = H (2), R1 = R2 = CH3 (3); e R1 + R2 = c-(CH2)2 (4), usando método quântico ab initio MP2/CBS método e as teorias ADO e RRKM e simulações numéricas. As estruturas de todos os pontos estacionário no perfil da reação, incluindo os estados de transição, foram obtidas com sucesso e forneceram as energias de ativação (Δ‡) e de reacção (Δr) para todos os caminhos reacionais. Estas reações iniciam com a formação de complexo de reagente do tipo íon-molécula (RC@C ou RC@O) que se converte no respectivo complexo de produto (PC@C e PC@O), através do estado de transição (TS@C e TS@O) correspondente. As constantes de velocidade para a conversão do RC ao PC foram calculadas com a teoria RRKM. Ao contrário da proposta da literatura para o mecanismo de reação, a C-metilação é a via termodinâmica e cinética preferencial, com as seguintes seletividades: PC@C:PC@O = 89:11 (1), 97:03 (2-E), 97:03 (2-Z), 100:0 (3) e 100:0 (4). Isto é corroborado pela concordância qualitativa e quantitativa entre a ordem da reatividade calculada e experimental: 4 >> 3 > 2 > 1. A regiosseletividade para a C-alquilação é explicada pela maior exotermicidade desse canal de reação em comparação com a O-alquilação. O aumento da reatividade com o aumento do impedimento estérico ao redor do carbono central é explicado pelas diferenças de carácter sp3 deste átomo e pela diminuição da frequência vibracional associada à piramidalização ao redor deste átomo de carbono. Uma avaliação de funcionais híbridos- e duplo-híbrido DFT e do método MP2 para estas reações foi realizada a fim de verificar a confiabilidade e precisão destes métodos e sua utilização em modelagens similares. Os métodos mais precisos e robustos, que apresentam menor demanda computacional, foram M06- 2X and MP2 com as funções de base aug-cc-pVTZ-PP. A fim de revelar os efeitos solvente e do agente alquilante, a metilação do nitronato [MeCHNO2]− (2) com Me3O+ (oxônio) foi estudada em fase gás e em solução com o método B2PLYP/6-311+G(d,p). Os resultados mostraram regiosseletividade para a O-metilação em fase gás e principalmente em solução (diclorometano), o que concorda com os dados experimentais. Além disso, eles mostram que a regiosseletividade é fortemente dependente do agente alquilante (MeI vs. Me3O+). Este mesmo método foi utilizado para as reações [XC6H4CHNO2]− + MeCl (X = H, p-MeO, p-NO2) em fase gás e em solução (DMF). Os resultados em solução mostram uma pequena seletividade favorável à O-metilação, contudo, considerando que o agente metilante usado experimentalmente era o metil-p-bromobenzenossulfonato (MeOBS), o qual é muito mais reativo que o MeCl, é esperado que a utilização do MeOBS nas modelagens moleculares deva aumentar esta regiosseletividade para a O-metilação. / We performed a mechanistic, selectivity and regioselectivity study of methylation of nitronates [R1R2CNO2]− by CH3I in the gas-phase, where R1 = R2 = H (1), R1 = CH3 and R2 = H (2), R1 = R2 = CH3 (3); and R1 + R2 = c-(CH2)2 (4), using ab initio MP2/CBS method, ADO and RRKM theories and kinetics simulations. The structures of all stationary points, including transition states, were successfully obtained to provide energies of activation (Δ‡) and of reaction (Δr) for all reaction pathways. These reactions proceed with the formation of ion-neutral reactant complex (RC@C or RC@O) that is converted into the respective product complex (PC@C and PC@O) through the corresponding transition state (TS@C and TS@O). The rate constants for the conversion of RCs into PCs were calculated with the RRKM theory. Contrary to a previous proposal for the reaction mechanism, the C-methylation is the thermodynamics and kinetics preferred pathway with the following PC@C:PC@O selectivites 89:11 (1), 97:03 (2-E), 97:03 (2- Z), 100:0 (3), and 100:0 (4). This is corroborated by the agreement between the calculated and experimental reactivity trend 4 >> 3 > 2 > 1. The regioselectivity towards the C-alkylation is explained by the much larger exothermicity of this reaction channel compared to the Oalkylation. The increase of reactivity upon the increase of crowdedness of the central carbon atom is explained by differences of sp3 character at this atom and the decrease of the vibrational frequency associated with pyramidalization around this carbon atom. An assessment of hybrid- DFT functionals and MP2 method for these reactions was performed in order to ascertain the reliability of these methods for similar molecular modeling. The most accurate and robust methods, with the least computational demand, were M06-2X and MP2 with aug-cc-pVTZ-PP basis sets. In order to reveal the solvent and alkylating agent effects, the methylation reaction [MeCHNO2]− (2) + Me3O+ (oxonium) was studied in the gas-phase and in solution with B2PLYP/6-311+G(d,p) calculations. The results show regioselectivity towards O-methylation in the gas-phase and more significantly in solution (dichloromethane), which is in agreement with the experimental observation. In addition, it shows that the regioselectivity is highly dependent upon the reactivity of the alkylating agent (MeI vs. Me3O+). This same method was employed for the [XC6H4CHNO2]− + MeCl (X = H, p-MeO, p-NO2) reactions in the gas-phase and in solution (DMF). The results in solution show a slight regioselectivity towards O-methylation; however, considering that the methylating reagent used in the experiments was methyl pbromobenzenesulfonate (MeOBS), which is much more reactive than MeCl, it should thus be expected an increase of the calculated selectivity.

The aim of our study was to evaluate the effects of a resistance exercise session on the vascular action of insulin in superior mesenteric artery of rats. Wistar rats (250-300g) were divided into 3 groups: control (CT, n = 20), electrically stimulated (ES, n = 5) and resistance exercise (RE, n = 20). The exercise was conducted in the apparatus of the squat, where the animals were subjected to 15 sets of 10 repetitions with 3 minutes rest between sets. The intensity was set at 70% of maximum load established by repetition maximum test performed 48h before the exercise session. The animals were kept suspended in EE squat machine and received the same intensity of electrical stimuli applied to the exercised animals. Immediately after the single resistance exercise session, the animals were anesthetized and killed by exsanguination, the superior mesenteric artery was removed and sectioned into rings (1-2 mm) which were mounted on tanks for isolated organ. The endothelium-dependent relaxation was obtained from concentration-response curves for insulin on rings precontracted with phenylephrine. After that, concentration response curves were obtained for groups CT response and ER, in the absence and/or presence of the following inhibitors: L-NAME (NOS inhibitor), TEA (inhibitor nonselective channel for K+), LY294002 (PI3K inhibitor), BQ123 ( ETA receptor antagonist), and Ouabain (inhibitor of Na+/K+-ATPase), concentration-response curves to KCl in the absence and/or presence of ouabain. According to the data obtained, we found that there was no significant difference in the relaxation induced by insulin between groups EE and CT, however, the animals in the ER showed a significant increase in relaxation when compared to CT group (p<0.001). After use of L-NAME reducing the relaxation was observed in both groups (p<0.001). When evaluating the involvement of K + channels, using TEA, relaxation was inhibited only in the RE group (p <0.001). In the presence of L-NAME+TEA relaxation in the CT group was reduced and there was a group ER contraction (p<0.001). The presence of these rings LY294002 interestingly responded in similar ways in the presence of L-NAME+TEA, promoting and inhibiting the group CT contraction curve ER group (p<0.001). The BQ123 were able to amplify the relaxation in both groups (p<0.001). Using both inhibitors (LY294002+BQ123) was observed an inhibition of contractile and relaxing effects in both groups (p<0.001). To assess the functional activity of the Na+/K+-ATPase curves were made for insulin and KCl in the absence and presence of ouabain. It was observed that ouabain was a decrease of insulin-induced relaxation only in the ER (p<0.001) and reduced the relaxation promoted by KCl in both groups, this reduction being higher in the ER (p<0.001). These data demonstrate that a single session of resistance exercise promotes adjustments in insulin-induced relaxation, which is mediated by NO, the channels for K+ and the activity of Na+/K+-ATPase. In addition, there was an effect mediated by ET-1 (via ETA receptors), necessary for the control of vascular tone. / O objetivo do nosso estudo foi avaliar o efeito agudo de uma sessão de exercício resistido na ação vascular da insulina em artéria mesentérica superior de ratos. Ratos Wistar (250-300g) foram divididos em 3 grupos: controle (CT, n = 20), eletroestimulado (EE, n = 5) e exercício resistido (ER, n = 20). O exercício foi realizado no aparelho de agachamento, onde os animais foram submetidos a 15 séries de 10 repetições, com 3 minutos de intervalo entre as séries. A intensidade foi fixada em 70% da carga máxima estabelecida pelo teste de repetição máxima, realizado 48 h antes da sessão de exercício. Os animais EE foram mantidos suspensos no aparelho de agachamento e receberam a mesma intensidade de estímulo elétrico aplicadas aos animais exercitados. Imediatamente após a única sessão de exercício resistido, os animais foram anestesiados e mortos por dessangramento, a artéria mesentérica superior foi removida e seccionada em anéis (1-2 mm), os quais foram montados em cubas para órgão isolado. O relaxamento dependente de endotélio foi obtido a de curvas concentração-resposta para a insulina, em anéis pré-contraídos com fenilefrina. Após isto, foram obtidas curvas concentração-respostas para os grupos CT e ER, na ausência e/ou na presença dos seguintes inibidores: L-NAME (inibidor da NOS); TEA (inibidor não seletivo dos canais para K+), LY294002 (inibidor da PI3K); BQ123 (antagonista do receptor ETA); e Ouabaína (inibidor da Na+/K+-ATPase); curvas concentração-resposta para KCl na ausência e/ou presença de ouabaína. De acordo com os dados obtidos, constatamos que não houve diferença significativa no relaxamento induzido por insulina entre os grupos CT e EE, entretanto, os animais do grupo ER apresentaram um aumento significativo do relaxamento quando comparado ao grupo CT (p<0,001). Após a utilização do L-NAME, foi observada redução do relaxamento em ambos os grupos (p<0,001). Quando avaliamos a participação dos canais para K+, utilizando TEA foi observado inibição do relaxamento apenas no ER (p<0,001). Na presença de L-NAME+TEA o relaxamento no grupo CT foi reduzido e no grupo ER houve uma contração (p<0,001). A presença do LY294002 interessantemente estes anéis responderam de formas similares quando na presença de L-NAME+TEA, promovendo uma inibição no grupo CT e uma contração da curva no grupo ER (p<0,001). O BQ123 foi capaz de amplificar o relaxamento em ambos os grupos (p<0,001). Utilizando ambos os inibidores (LY294002+BQ123) foi observada uma inibição tanto dos efeitos contráteis quanto dos efeitos relaxantes em ambos os grupos (p<0,001). Para avaliar a atividade funcional da Na+/K+-ATPase foram feitas curvas para insulina e KCl na ausência e na presença de ouabaína. Foi observado que a ouabaína promoveu uma redução do relaxamento induzido pela insulina apenas no grupo ER (p<0,001) e reduziu o relaxamento promovidos pelo KCl em ambos os grupos, sendo esta redução maior no grupo ER (p<0,001). Estes dados demonstram que uma sessão de exercício resistido promove ajustes no relaxamento induzido por insulina, que é mediado pelo NO, pelos canais para K+ e pela atividade da Na+/K+-ATPase. Além disso, houve um efeito mediado pela ET-1 (via receptores ETA), necessária para o controle do tônus vascular, durante o exercício.