A Salmonella sp é um importante agente zoonótico no mundo todo e diversas são as técnicas desenvolvidas para a sua identificação, com o isolamento microbiológico ainda sendo a técnica de escolha. Além de sua importância em microbiologia de alimentos e em criações comerciais de aves, ultimamente vem se destacando a sua presença na microbiota de animais silvestres. No presente estudo, foram colhidos \"swabs\" cloacais de 200 aves e 200 répteis, com o intuito de se observar a freqüência de isolamento do agente, caracterizar os isolados através da determinação dos perfis bioquímico e de resistência a antimicrobianos além da sorotipagem. Buscamos também comparar diferentes técnicas de isolamento com diversos meios de cultura e determinar qual a mais eficiente. Desse modo, os \"swabs\" coletados foram submetidos ao plaqueamento em ágar Mac Conkey, suspensão paralela em caldo Rappaport e Tetrationato com posterior plaqueamento em ágar XLT4. Das 200 aves amostradas nenhuma apresentou resultado positivo para o isolamento de Salmonella sp, ao passo que dos 200 répteis, 71 apresentaram-se positivos para o agente, totalizando uma proporção de 35,5%. Dentre os répteis as serpentes foram as que apresentaram maior proporção de animais positivos com 83,9% em contraste às tartarugas que formaram a ordem com menor isolamento (7,1%). Diversos sorotipos foram isolados, muitos não sendo freqüentemente relacionados a animais silvestres com vários apresentando algum grau de resistência aos antimicrobianos testados. A técnica de isolamento que possibilitou a maior recuperação do microorganismo foi a suspensão em caldo Rappaport seguida do plaqueamento em ágar XLT4. Concluímos que os répteis podem ser considerados importantes reservatórios para a Salmonella sp, ao passo que as aves não merecem destaque nesse quesito, embora seu potencial disseminador não deva ser desprezado. / Salmonella sp is an important zoonotic agent in the whole world and many are the techniques developed for its identification, although the microbiological isolation is still the preferred one. Salmonela\'s importance in food microbiology and poultry are unquestionable, but in the late years there is a growing concern about the presence of this bacteria in many species of wild animals. In the present study we collected cloacal swabs from 200 wild birds and 200 reptiles with the following goals: Determination of the isolation frequency, characterization of the isolates through biochemical and antimicrobial susceptibility profiles and serotyping. We also target a comparison between different isolation techniques and culture media to determine wich one is the most effective. In this way, the collected swabs were submitted to direct plating in Mac Conkey agar and parallel suspension in Rappaport and Tetrationate broths with posterior streaking in XLT4 agar. None of the 200 tested birds were positive for Salmonella sp, while 71 from the 200 reptiles were positives for the agent, in a 35,5% proportion. Among the reptiles, the snakes presented the higher prevalence, with 83,9% of the animals being positives, in contrast to turtles, the Order with less isolation, totalizing only 7,1%. A lot of different serotipes were isolated, many of them infrequently related with wild animals and showing at least some degree of antimicrobial resistance. The use of Rappaport broth followed by the XLT4 agar showed the best recovering rates of Salmonella sp from the cloacal swabs. We conclude that reptiles may act as important reservoirs for this pathogen. Wild birds doesn\'t seems to play the same role, but theirs spreading potencial must not be underestimated.

O Brasil tem uma grande produção leiteira, e, embora seu comércio seja ilegal, o leite cru é consumido por uma parcela da população, principalmente na zona rural. Visando avaliar o risco associado ao consumo de leite cru, esse trabalho estudou a ocorrência de Listeria monocytogenes e Salmonella spp. em leite cru produzido em quatro importantes regiões produtoras de leite do Brasil, fazendo uma correlação com os níveis de contaminação com outros microrganismos indicadores de qualidade do produto (bactérias aeróbias mesófilas totais, coliformes totais e Escherichia coli), bem como investigou a presença de substancias químicas empregadas no manejo do gado bovino (sanitizantes, antibióticos e defensivos agrícolas). Foi também avaliada a interferência de alguns fatores na detecção desses dois patógenos em leite cru, incluindo sensibilidade da metodologia analítica, possível ação inibitória dos resíduos químicos e o possível antagonismo microbiano da microbiota autóctone do leite sobre L. monocytogenes ou Salmonella spp. O estudo foi conduzido com amostras de leite cru obtidas em 210 fazendas leiteiras localizadas nos Estados do Paraná, São Paulo, Rio Grande do Sul e Minas Gerais, selecionadas de acordo com as diferentes práticas de ordenha e de equipamentos disponíveis. Os resultados indicaram ausência dos dois patógenos em todas as amostras estudadas, embora grande parte (48,6%) apresentasse contaminação microbiológica acima do especificado pela Instrução Normativa 51, do Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento, a vigorar a partir de julho de 2005. A presença de cloro não foi detectada em nenhuma das amostras, mas 11,4% foram positivas para antibióticos. A grande maioria das amostras (93,8%) foi positiva para organofosforados e/ou carbamatos. Quanto à sensibilidade das metodologias analíticas, verificou-se que sua capacidade de detectar os patógenos era dependente da contaminação microbiana presente. Os pesticidas não tiveram nenhuma ação inibitória sobre L. monocytogenes ou Salmonella spp. Das 360 colônias de bactérias isoladas das amostras de leite cru, 25,3% e 9,2% apresentaram antagonismo em relação à L .monocytogenes e Salmonella spp., respectivamente. A maioria dessas bactérias foi identificada como Lactococcus lactis subsp. lactis e Enterococcus faecium. Concluiu-se que L. monocytogenes e Salmonella spp. não devem ser considerados perigos de significância em leite cru produzido nas quatro regiões estudadas, mas resultados negativos devem ser interpretados com cuidado, pois há fatores que podem interferir no isolamento desses patógenos, especialmente em relação à L. monocytogenes, sendo a atividade antimicrobiana na microbiota autóctone o mais importante. / Brazil is a great milk-producing country, and despite illegal its commercialization, raw milk is consumed by certain groups of people, especially in rural areas. Aiming to evaluate the risk associated to consumption of raw milk, this study evaluated the occurrence of Listeria monocytogenes and Salmonella spp. in raw milk produced in four important milk producing regions in Brazil, correlating this result with the levels of hygiene indicator microorganisms (total aerobic counts, fecal coliforms and Escherichia coli) and the presence of chemical substances used in animal rearing (sanitizers, antibiotics and pesticides). The study also evaluated some factors that may interfere in the detection of both pathogens in raw milk, mainly sensitivity of the analytical method, potential inhibitory activity of chemical residues and antagonism of the autoctonous microbiota. The study was conducted with raw milk samples collected in milk farms located in four Brazilian States: Paraná, São Paulo, Rio Grande do Sul and Minas Gerais, selected according to milking procedures and machinery availability. Results indicated that both pathogens were absent in the samples, despite 48.6% of the samples were not in accordance to the standards of the Brazilian Ministry of Agriculture (Instrução Normativa 51), that will be in place next July 2005. Chlorine was not detected, but 11.4% of the samples were positive for antibiotics. The great majority (93.8%) was positive for organophosphorous and/or carbamate pesticides. Results conformed that the sensitivity of the analytical method is dependent on the level of microbial contamination of the samples. The pesticides presented no action over the tested pathogens. Among 360 bacterial colonies isolated from the milk samples, 25.3% and 9.2% were active against L. monocytogenes e Salmonella spp., respectively. Most of them were identified as Lactococcus lactis subsp. lactis and Enterococcus faecium. It was concluded that L. monocytogenes and Salmonella spp. should not be considered relevant pathogens in raw milk produced in the four tested regions in Brazil, but the negative results should be interpreted with care because there are factors that may interfere in the isolation of the pathogens, mainly L. monocytogenes, being the antagonism of components of the autoctonous microbiota the most important.

O consumo mundial de produtos frescos tem aumentado nos últimos anos, devido a preocupação da população com a saúde. Entretanto, a busca por uma alimentação mais saudável vem aumentando o risco de surtos de doenças veiculadas por frutas e hortaliças, tendo em vista, que estes alimentos são geralmente consumidos in natura. Embora qualquer patógeno possa ser um problema potencial nesses produtos, Salmonella spp. tem grande relevância em saúde pública. A contaminação potencial por esse patógeno em frutas, é possível devido a contaminação cruzada e falta de boas práticas agrícolas durante o cultivo, colheita, manuseio e distribuição. Nas frutas de baixa acidez, dentre as quais está o caqui, Salmonella spp pode ainda ter condições para sobreviver e se multiplicar. O caqui é uma fruta de relevante importância sócio-econômica, com crescente demanda para exportação, no entanto, o mercado importador está cada vez mais exigente em relação a segurança alimentar. No Brasil, não existem informações sobre a ocorrência de Salmonella spp em caqui, bem como, a respeito do comportamento desse patógeno na polpa e na casca dessa fruta. Desse modo, os objetivos do presente estudo foram: (1) verificar a incidência de Salmonella spp na superfície do caqui, (2) estudar a sobrevivência e multiplicação de S. Enteritidis na polpa e na casca dessa fruta armazenada a diferentes temperaturas de incubação. Para tanto, em 2005 foram coletadas 77 amostras de caqui Fuyu e 80 amostras de caqui Rama Forte no varejo na cidade de Campinas-SP e a mesma proporção no ano de 2006. Adicionalmente em 2006 também foram coletadas 134 amostras de caqui Rama Forte e 134 amostras de caqui Fuyu no CEAGESP, na cidade de São Paulo. A pesquisa para Salmonella spp foi realizada pelo sistema BAX®, que se baseia na reação da polimerase em cadeia (PCR). Os parâmetros de crescimento de S. Enteritidis (duração da fase lag, taxa de crescimento exponencial e tempo de geração) foram obtidos dos dados experimentais. Os resultados mostraram que das 582 amostras analisadas 5 (0,9%) foram positivas para Salmonella spp, indicando que condições sanitárias durante o crescimento no campo (água de irrigação, adubo, etc.), colheita, condições de transporte e armazenamento, assim como a manipulação das frutas podem levar a contaminação. Os dados de crescimento obtidos para Salmonella mostram que este patógeno pode sobreviver e se multiplicar tanto na polpa quanto na casca do caqui, nas duas variedades estudadas e mesmo a baixas temperaturas. / The worldwide consumption of fresh produce has increased in the last years, due to an increased concern among the population about health. However, the search for more healthful eating habits has also increasing the risk of acquiring a foodborne disease, as these products generally are consumed raw. Although any pathogen can be a potential problem in these produces, Salmonella spp. is of great relevance in public health. The potential contamination for this pathogen in fruits, is possible due to cross contamination and poor agricultural practices during harvest, handling and distribution. In low acid fruits, amongst which is persimmon, Salmonella spp can still have conditions to survive and to multiply. The persimmon is a fruit of great economic importance, with increasing demand for exportation, however, the import market has an increase demand for food safety. There are not in Brazil, information about the occurrence of Salmonella spp in persimmon, as well as, information regarding the behavior of this pathogen in the pulp and the rind of this fruit. Thus, the objectives of the present study had been: (1) to verify the incidence of Salmonella spp on the surface of persimmon, (2) to study the survival and multiplication of S. Enteritidis on the peel and in the pulp of this fruit stored at different temperatures of incubation. For this survey in 2005 and 2006 harvests, 77 samples and 80 samples of \'Fuyu\' and \'Rama Forte\' persimmon respectively collected in the retail in Campinas city - SP. Additionally in 2006, 134 samples of each \'Rama Forte\' and \'Fuyu\' persimmon were also collected in the CEAGESP, in São Paulo city. The analyses had been carried using the BAX® system (Dupont/Qualicon), that is based on the Polymerase Chain Reaction (PCR). The parameters of growth during the evaluation of the ability of growth of S. Enteritidis (lag phase duration, exponential growth rate and generation time) were obtained from experimental data. Salmonella spp were detected in five samples (0,9%) of those analysed. The growth data obtained for Salmonella indicated that this pathogen can survive and multiply on the peel as well as in the pulp in the two studied varieties and even at low temperatures.

Resumo: O objetivo do presente trabalho consistiu na avaliação de parâmetros de qualidade da água residuária proveniente de abatedouro de aves, visando analisar a possibilidade de reutilizá-la na irrigação de culturas agrícolas, após sua caracterização. As águas residuárias do abatedouro de aves, localizado na cidade de Pereiras - SP, foram coletadas em diferentes dias e épocas do ano e analisadas quanto aos seguintes parâmetros: pH, temperatura, condutividade elétrica, fósforo total, nitrato, nitrito, sólidos sedimentáveis, ferro, alumínio, turbidez, Salmonellas sp, macro e micronutrientes. As temperaturas do ar e da água foram medidas no momento da coleta.A discussão dos resultados obtidos esteve de acordo com a Resolução do Conselho Nacional do Meio Ambiente (CONAMA) nº 357, de 17 de março de 2005, que estabelece os padrões para classificação dos corpos de água. A condutividade elétrica foi avaliada segundo padrões propostos pela Companhia de Tecnologia de Saneamento Básico (CETESB, 2005) e o alumínio, segundo valor estabelecido pelo Ministério da Saúde - Portaria nº 1 469. Os resultados obtidos permitem concluir que a água residuária analisada, não deve ser descartada diretamente em corpos hídricos naturais, porém, pode ser utilizada na irrigação de culturas agrícolas, após simples desinfecção. / Abstract: The aim of this search consisted in comparing the quality of wastewater from a poultry slaughterhouse, trying to analyze the possibility of using it in the irrigation of agricultural growing, after its make-up. Samples were colleted from wastewater from a poultry slaughterhouse in Pereiras - SP, in different days or time of the year, analyzing the following: pH, temperature, electrical conductivity, total phosphorus, nitrate, nitrite, sedimentary solids, iron, aluminium, muddy, salmonella, macro and micro nutrients. The temperature of the air and of the water were measured at collection time.The results were evaluated according to the Resolution of the Environment National Council (CONAMA) nº 357, on March 17th- 2005, which establish the patterns to classify the water contents. The electrical conductivity was evaluated according to the amount suggested by CETESB/2005 and the aluminium according to the established amount by Health Ministry - Regulation nº 1.469. The obtained results allow to conclude that the analyzed wastewater, must not be rejected in natural water contents, however, it can be used in the irrigation of agricultural growing, after simple disinfection. / Orientador: Raimundo Leite Cruz / Coorientador: Germano Francisco Biondi / Banca: Antônio de Padua Sousa / Banca: Andréa Bogatti Guimarâes Tomazela / Mestre

Orientador: Ângelo Berchieri Junior / Banca: Manoel Victor Franco Lemos / Banca: Gerson Nakazato / Resumo: Salmonella enterica sorotipo Typhimurium sintetiza cobalamina (Vitamina B12) apenas sobre condições anaeróbicas. Dois porcento do genoma da S. Typhimurium é dedicado a reações dependentes de vitamina B12 como cofator, sua síntese e absorção. Neste estudo nós preparamos mutantes de Salmonella sorotipos Enteritidis, Gallinarum e Pullorum duplo defectivos na biossintese de cobalamina, cepas ΔcobSΔcbiA. A virulência destes mutantes foi comparada com as respectivas cepas selvagens e, nenhuma deficiência na capacidade de causar doença foi observada para as cepas de S. Enteritidis ΔcobSΔcbiA e S. Pullorum ΔcobSΔcbiA. S. Gallinarum ΔcobSΔcbiA por sua vez, mostrou atenuação total. Posteriormente nós testamos a produção de B12 pelas cepas mutantes e selvagens já descritas, e incluímos neste estudo a cepa de S. Typhimurium ΔcobSΔcbiA, e sua respectiva cepa selvagem. Todas as cepas mutantes não tiveram produção de B12 detectada. As cepas selvagens mostraram produção de vitamina B12 em ambos os ensaios utilizados, com exceção da S. Gallinarum que não apresentou produção de cobalamina in vitro. Como conclusão, a produção de vitamina B12 in vitro diferiu entre os sorotipos de Salmonella testados, a deleção dos genes cbiA e cobS produziu alteração na relação parasita hospedeiro em diferentes níveis entre os sorotipos de Salmonella estudados, sendo que esta foi muito maior entre o sorotipo Gallinarum e as aves. / Abstract: Salmonella enterica serovar Typhimurium only synthesizes cobalamin (Vitamin B12) during anaerobiosis. Two-percent of the S. Typhimurium genome is devoted to the synthesis and uptake of Vitamin B12 and to B12-dependent reactions. In order to understand the requirement from cobalamin synthesis better, we constructed Salmonella serovar Gallinarum, Salmonella serovar Enteritidis and Salmonella serovar Pullorum mutants that are double-defective in cobalamin biosynthesis (ΔcobSΔcbiA). We compared the virulence of these mutants to that of their respective wild type strains and found no impairment in S. Enteritidis ΔcobSΔcbiA and S. Pullorum ΔcobSΔcbiA ability to cause disease in chickens. S. Gallinarum ΔcobSΔcbiA mutant showed attenuated for chickens. We then assessed B12 production by these mutants and their respective wild type strains, as well as S. Typhimurium ΔcobSΔcbiA, and their respective wild type strain. All mutants were unable to produce detectable B12. B12 was detectable in wild type strains, but, S. Gallinarum demonstrated no in vitro cobalamin production. In conclusion, the production of vitamin B12 in vitro differed across the Salmonella serotypes that were tested. Furthermore, the deletion of the cbiA and cobS genes resulted in an alteration in the relationship between the serotype Gallinarum and the birds more stronger than did to the others serotypes. / Mestre

Orientador: Angelo Berchieri Junior / Coorientador: Hélio José Montassier / Banca: Rosângela Zacarias Machado / Banca: Luiz Felipe Caron / Banca: Raphael Lucio Andreatti Filho / Banca: Marcelo Brocchi / Resumo: Salmonella Enteritidis (SE) causa doença transmitida por alimentos (DTA) em humanos. Carne de frango e ovos frequentemente estão associados a esses casos. O controle da infecção em aves, baseia-se em medidas de biossegurança, incluindo-se a vacinação. Tem sido comum a utilização de vacinas vivas (VV) e inativadas (Bacterinas - BA), porém pouco se sabe sobre os mecanismos imunes desencadeados pelas vacinas contra SE. Neste estudo, utilizaram-se quatroprogramas vacinais (VV; VV+VV; BA; VV+BA) em galinhas leves de variedade branca para postura de ovos de mesa, vacinadas com 5 e/ou 25 dias de vida, e desafiadas aos 45 dias de vida com SE. No dia anterior à infecção (1 DAI) e 1, 6 e 9 dias pós-infecção (DPI), cinco aves/grupo foram sacrificadas para amostragem. A população de linfócitos CD4+ e CD8+ foi avaliada por imuno-histoquímica em tonsilas cecais e fígado; citocinas foram quantificadas por RT-qPCR em tempo real em tonsilas cecais e baço; níveis de IgG e IgM foram mensurados por ELISA no soro e IgA em lavado intestinal. Os níveis de imunoglobulina (IgG, IgM e IgA) estavam significativamente mais altos em aves vacinadas com BA, do 1 DAI ao 9 DPI, em comparação aos grupos vacinados somente com VV. Os níveis de IFN-γ, na tonsila cecal, eram similares em todos os grupos após o desafio. Antes do desafio (1 DAI), IL-10 foi altamente expressa em baço de aves que receberam somente BA (25 dias de vida), sugerindo o desenvolvimento de resposta por linfócitos T CD4+ auxiliar 2 (Ta2), reforçado pelos altos níveis de IgG encontrados neste grupo (p<0.05). Os níveis de TGF-β4 e das citocinas pró-inflamatórias IL-6 e TNFSF15 eram bastante elevados no grupo que recebeu VV+VV. A vacinação por via oral com VV aumentou significativamente o fluxo de linfócitos T CD8+ para as tonsilas cecais após o desafio. Isso poderia... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Salmonella Enteritidis (SE) causes foodborne infection in humans. Poultry meat and eggs are frequently associated with these cases. The control of this bacterium is based on sanitary measures and mainly, vaccination of chicken flocks. Vaccine programs are used worldwide to control SE in poultry flocks. Live (LV) and killed vaccines (KV) are often combined, although few studies regarding immune mechanisms developed by SE vaccines are available. In this work, four vaccine programs were studied (LV; LV+LV; KV; LV+KV) in white layer-hens vaccinated at 5 and/or 25 days-old and challenged at 45 days-old with SE. At 1 day before (dbi) and 1, 6 and 9 days post-infection (DPI), five birds/group were sacrificed for sampling. The population of CD4+ and CD8+ T cells was evaluated by immunohistochemistry in caecal tonsils and liver, cytokines were quantified by real time RT-qPCR in caecal tonsils and spleen; IgG, IgM and IgA levels were measured by ELISA in serum and the latter in intestinal washes. The immunoglobulin levels (IgG, IgM and IgA) were significantly higher in birds vaccinated with KV, from 1 dbi to 9 DPI, than in groups that received only LV. In caecal tonsils, IFN-γ levels were similar in all groups after challenge. Before challenge (1 dbi), IL-10 was highly expressed in spleen of birds that received only KV (25 days-old), suggesting the development of the T CD4+ helper 2 (Th2) type of immune response, reinforced by high IgG levels against SE seen in this group (p<0.05). TGF-β4 and the proinflammatory cytokines IL-6 and TNFSF15 were higher in caecal tonsils in the group that received LV+LV. Vaccination by oral route with LV clearly increased the influx of CD8+ T cells in caecal tonsils after challenge. This could be correlated with the better control of SE noticed in groups that received at least one dose of LV, including... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

A principal fonte de escoamento da piscicultura no Brasil, são os pesqueiros comerciais (\"pesque-pagues\"), que recebem cerca de 90% da produção. A tilápia é um dos peixes mais utilizados nestas criações dado a sua rusticidade, fácil manejo, alto rendimento e grande aceitação. É inegável a contribuição que os pesqueiros trazem para a atividade, pois propiciam, além do lazer, uma divulgação do produto, aumento do consumo e até mudanças nos hábitos alimentares. Porém, com a internacionalização dos hábitos alimentares, pratos com peixes crus, típicos da culinária japonesa, tem sido servidos ao consumo nos pesqueiros sem qualquer controle sanitário ou inspeção veterinária. Estes peixes podem contrair uma variada gama de microrganismos em águas poluídas por contaminação fecal tornando o pescado um importante veiculador de agentes patogênicos responsáveis por diversas doenças no homem. O crescimento desordenado deste segmento, oferece portanto, produtos de qualidade duvidosa colocando em risco a saúde do consumidor, sendo indispensável desenvolver o setor buscando a qualidade e segurança do pescado produzido. O presente trabalho pesquisou coliformes totais, fecais e Salmonella spp em tilápias (Oreochromis spp) em 30 pesqueiros da região metropolitana de São Paulo. Foram analisados 180 peixes na época seca e fria, entre os meses de setembro e outubro de 2001; e 180 peixes na época chuvosa e quente, entre fevereiro e março de 2002. Os resultados revelaram que 70% dos pesqueiros estudados apresentaram coliformes fecais e/ou Salmonella spp em desacordo com a legislação, sendo que 63,3% dos pesqueiros apresentaram coliformes fecais, em níveis acima do permitido pela legislação e 20% a presença de Salmonella spp, independentemente do período do ano estudado. Conclui-se portanto que nos pesqueiros estudados foram encontrados peixes contaminados por coliformes fecais e Salmonella spp, com valores em desacordo com a legislação, estando impróprios para o consumo humano direto. / The main source of drainage of the fish farming in Brazil, are the \"pesqueiros comerciais\" (fish and pay), they receive about 90% of the production. The tilapia is one of the fish more used in these fish farming for their rusticity, easy handling, high income and great acceptance. It is undeniable the contribution that the \"pesqueiros\" bring for the activity, because they propitiate, besides the leisure, a popularization of the product, increase of the consumption and changes in the alimentary habits. However, with the internationalization of the alimentary habits, plates with raw fish, typical of the Japanese cookery, has been served to the consumption in the \"pesqueiros\" without any sanitary control or veterinary inspection. These fish can contract a varied range of microorganisms in waters polluted by fecal contamination turning the fish an important pathogenic agent disseminator responsible for several diseases in the man. The disordered growth of this segment, offers products of doubtful quality putting in risk the consumer\'s health, being indispensable to develop the section looking for the quality and safety of the produced fish. The present work researched total, fecal coliforms and Salmonella spp in tilapias (Oreochromis spp) in 30 \"pesqueiros\" of the metropolitan area of São Paulo. They were analyzed 180 fish at dries and cold time, between the months of September and October of 2001; and 180 fish at rainy and hot time, between February and March of 2002. The results revealed that 70% of the \"pesqueiros\" studied presented fecal coliforms and/or Salmonella spp in disagreement with the legislation, and 63,3% of the \"pesqueiros\" presented fecal coliforms, in levels above allowed by the legislation and 20% the presence of Salmonella spp, independently of the period of the studied year. It was concluded that in the \"pesqueiros\" studied fish were found contaminated by fecal coliforms and Salmonella spp, with values in disagreement with the legislation, being inappropriate for the direct human consumption.

Introdução A presença de Salmonella spp.,que é um patógeno de importância clínica, tem sido detectada em lodos de esgoto gerados ao redor do mundo. O objetivo desse estudo foi o de estimar o risco anual de infecção relacionado à ingestão de alface, tomate e cenoura cultivados em solos acondicionados com o lodos de esgoto provenientes de cinco Estações de Tratamento de Esgoto (ETEs) da Região Metropolitana de São Paulo bem como o risco de infecção anual que trabalhadores agrícolas, através da ingestão involuntária de partículas de solo, são submetidos. Como no Brasil ainda não há o estabelecimento de valor de risco tolerável, o valor usado pela USEPA, de 1/10.000 (10-4), foi utilizado para que a comparação com os resultados obtidos fosse realizada. Métodos Foram coletadas 54 amostras de lodos de esgotos de cinco ETEs num período de 12 meses (janeiro a dezembro de 2011). A concentração de Salmonella spp nessas amostras foi obtida utilizando o método USEPA 1682/2006. Foram selecionadas 40 cepas isoladas e identificadas como Salmonella spp. para sorotipificação em laboratório de referência. Essas cepas foram submetidas à detecção dos genes de virulência invA, ssel e spvC, presença de plasmídeo por técnicas moleculares e ainda à resistência a antimicrobianos. Para a estimativa dos riscos anuais de infecção por Salmonella foram desenhados nove cenários diferentes considerando como fatores principais a presença ou ausência da variação da concentração de Salmonella spp. nos solos tratados com lodos de esgoto, a presença ou a ausência de crescimento desta bactéria nas hortaliças, a inibição do crescimento de Salmonella spp. nas cenouras e a ingestão involuntária de partículas de solo pelos trabalhadores agrícolas. Resultados Cepas de Salmonella spp. estavam presentes em 38,9 por cento (21/54) das amostras de lodos de esgoto analisadas. As maiores concentrações foram encontradas na ETE 2, sendo a maior delas de 12,19 NMP/g ST. Das 40 cepas selecionadas para sorotipificação 35 foram confirmadas como sorotipos de Salmonella comumente envolvidos em surtos alimentares e em casos clínicos como S. Typhimurium, S. Agona e S. Infantis. Destas, todas apresentaram o gene sseL e duas cepas de S. Typhimurium portavam os três genes de virulência pesquisados. Das 35 cepas 14 (40 por cento ) apresentaram plasmídeos e 14,2 por cento (3/35) foram sensíveis a pelo menos dois antimicrobianos, 5,7 por cento (3/35) foram identificadas como multi-droga resistentes (MDR). O maior risco anual de infecção foi obtido no cenário 9 para trabalhadores que aplicam lodos de esgoto nos solos (9,4x10-2) seguidos, em ordem decrescente, dos riscos de infecção para a ingestão de tomates e alfaces nos cenários 1 e 3 que consideravam o crescimento de Salmonella spp. nas hortaliças. Os menores riscos foram obtidos nos cenários 5 e 6 que envolviam o consumo de cenouras. Conclusões: Os riscos foram considerados elevados tendo em vista o valor utilizado como referência. O fator que mais impactou nos riscos obtidos foi o crescimento de Salmonella spp. nas hortaliças (alface e tomate). A variação da concentração de Salmonella spp. no solo teve pouco impacto nos riscos obtidos. / Introduction - The presence of Salmonella spp., an important pathogen, has been reported in sewage sludge worldwide. The aim of this study was to estimate the annual risk of infection related to ingestion of lettuce, tomatoes and carrots grown in soil conditioned with sewage sludge from five Wastewater Treatment Plant (WWTP) in the Metropolitan Region of São Paulo. Also the annual risk of infection of farm workers through involuntary ingestion of soil particles were estimated. As in Brazil there is no establishment of the value of tolerable risk, the value used by the USEPA, 1/10,000 (10-4), was adopted in order to proceed the comparison with the results obtained. Methods - 54 samples of sewage sludge from the five WWTPs were collected over a period of 12 months (January to December, 2011). The concentration of Salmonella spp. in these samples was obtained using the method 1682/2006 USEPA. 40 strains identified as Salmonella spp were selected for serotyping in a reference laboratory. These strains were subjected by molecular techniques to detection of virulence genes invA, sseL and spvC, presence of plasmid and even resistance to antimicrobials. To estimate the annual risk of infection by Salmonella spp. nine different scenarios were designed considering the presence or absence of varying concentrations of Salmonella spp. in soils treated with sewage sludge, the presence or absence of growth of the bacteria in vegetables, the growth inhibition of Salmonella spp. in carrots as well as the involuntary ingestion of soil particles by agricultural workers. Results -Salmonella spp. strains were present in 38.9 per cent (21/54) of samples of the sewage sludge analyzed. The highest concentrations were found in WWTP 2, being the highest 12.19 MPN/g TS. From the 40 previously selected strains, 35 strains were confirmed as commonly involved in food borne outbreaks and clinical cases as such S. Typhimurium, S. Agona and S. Infantis. All the 35 strains harbored the sseL gene and two strains of S. Typhimurium carried the three virulence genes surveyed. A total of 14 from the 35 strains (40 per cent ) had plasmids and 14.2 per cent (3/35) were sensitive to at least two antimicrobials and 5.7 per cent (3/35) were identified as multi-drug resistance (MDR). The highest annual risk of infection was obtained in scenario 9 for workers applying sewage sludge in soils (9,4x10-2) followed, in descending order of risk of infection, to the intake of tomatoes and lettuces in scenarios 1 and 3 which considered the growth of Salmonella spp. in the vegetables. The lowest risks were obtained in scenarios 5 involving the consumption of carrots. Conclusions: The risks were considered high given the value used as a reference. The factor that most impacted the annual risk of infection obtained was the growth of Salmonella spp. in vegetables (lettuce and tomato). The variation of the concentration of Salmonella spp. in soil had little effect on the risks obtained.

Infecções pulmonares de potros jovens por Rhodococcus equi resultam em grave pneumonia levando à morte um grande número de animais todos os anos. Até o momento não há nenhuma vacina aceita globalmente para a prevenção da rodococose equina. O único tratamento preconizado é baseado em antibioticoterapia, porém os protocolos clínicos são longos, de alto custo, com efeitos colaterais e tem favorecido a seleção de cepas resistentes aos antibióticos. Diversas estratégias no desenvolvimento de uma vacina segura e eficiente contra a rodococose foram propostas, porém, não induziram um efeito protetor considerável. O principal fator de virulência do R. equi descrito e amplamente estudado é a proteína vapA, no entanto, outras proteínas localizadas na ilha de patogenicidade estão presentes em amostras de R. equi virulento extraídos de animais infectados. Trabalhos recentes têm demonstrado a presença do gene vapG em todas as cepas virulentas e este gene é altamente expresso quando a bactéria reside no interior de macrófagos, tornando-o um possível alvo vacinal. Nosso grupo já possui experiência prévia no uso de linhagem de Salmonella enterica Typhimurium atenuada carreando a proteína vapA. Baseado nos resultados positivos obtidos, foi construída uma linhagem atenuada de S. enterica Typhimurium 3987 expressando a proteína vapG. A administração desta linhagem em camundongos foi capaz de induzir proteção contra R. equi virulento. Os resultados observados foram a colonização e persistência da Salmonella nos órgãos alvo, a redução da carga bacteriana de R. equi, e a indução de um perfil imune protetor semelhante ao observado em animais adultos resistentes. Observou-se o aumento da produção de IL-12p70 e IFN-, alem da presença de níveis aumentados de IL-4 e a redução dos níveis de TNF-. Observou-se também o aumento na subpopulação de células T auxiliares (CD4+) com perfil de memória, além de aumento na população de linfócitos B totais quando comparado aos grupos controles. Este conjunto de resultados indica que a imunização com Salmonella enterica Typhimurium expressando a proteína vapG gera uma resposta imune celular eficiente tornando esta linhagem uma possível candidata a vetor vacinal. Alem disso, sugere que outros antígenos do R. equi podem ser / Pulmonary infections in young foals by Rhodococcus equi result in severe pneumonia, leading to death a large number of animals every year. There is no globally accepted vaccine for the prevention of equine rhodococosis so far. To date, the only acceptable treatment is based on antibiotics, but the clinical protocols are long lasting, expensive, having side effects and favoring the emergence of drug resistant strains. Several strategies for developing a safe and effective vaccine against rhodococosis have been proposed, however, none has induced a significant protective effect. The main virulence factor of R. equi described and extensively studied is the protein vapA, although other proteins encoded by genes in pathogenicity islands are detected in samples of virulent R. equi, isolated from infected animals. Recent works have demonstrated that the vapG gene is present in all virulent strains, and that this gene is highly expressed when bacteria reside within macrophages, making it a potential vaccine target. Our group has already been working with an attenuated Salmonella enterica Typhimurium strain expressing the VapA protein. Even though our results were very promising, we decided to construct a second vaccine strain expressing the VapG protein. Based on the positive results, it was constructed an attenuated strain of S. enterica Typhimurium 3987 expressing the vapG protein. Interestingly, the VapG-expressing strain induced protection against virulent R. equi in mouse model of infection. We could observe colonization and persistence of Salmonella vaccine cells in target organs, with reduction of bacterial loads of R. equi and induction of a protective immune profile similar to that seen in resistant adult animals. We could also observe increased production of IL-12p70 and IFN- in addition to the presence of increased levels of IL-4 and reduced levels of TNF-. Moreover, we detected an increase in the subpopulation of T helper cells (CD4), with a profile of memory, as well as in the population of B lymphocytes, when compared to control groups. This set of results shows that immunization with Salmonella enterica Typhimurium expressing the VapG protein raises an efficient cellular immune response, making this strain a potential candidate for vaccine vector. Furthermore, this work suggests that other R. equi antigens may be taken into account for vaccine construction, besides the VapA protein utilized in the majority of studies.

Orientador: Ângelo Berchieri Júnior / Banca: Antonio Carlos Alessi / Banca: Simone Alves Mendes Ribeiro / Resumo: A presente pesquisa avaliou o nível de contaminação por Salmonella spp. em dois abatedouros avícolas com sistema de inspeção diferenciados - SIF (serviço de inspeção federal) e SISP (serviço de inspeção do estado de São Paulo). O estudo foi realizado em abatedouros localizados no estado de São Paulo, no período de janeiro a fevereiro de 2009. Foram colhidas 292 amostras, oriundas de locais considerados críticos do abatedouro, como gaiolas de transporte, água do tanque de escalda, depenadeiras, área de evisceração, água dos tanques de pré- resfriamento e resfriamento e setor de embalagem (carcaça e partes prontas para comercialização). No abatedouro A, 30 amostras foram positivas (18,7%), sendo as depenadeiras o local onde mais isolou-se Salmonella spp. e no abatedouro B, 74 amostras positivas (56,1%), sendo as gaiolas e a área de evisceração e depenadeiras os locais mais contaminados. Os sorovares mais detectados foram S. Albany, S. Infantis e S. Schwarzengrund, S. Kentucky / Abstract: The following research evaluated the level of contamination by Salmonella spp. In two poultry slaughterhouses with different inspection systems - SIF (service of federal inspection) and SISP (service of inspection of state Sao Paulo). The study was carried out in slaughterhouses located in the state of Sao Paulo, in the period of January to February of 2009. It was gathered a total of 292 samples, from the critical points of the slaughterhouses: transport cages, water from the scalding tank, plucking machines, evisceration, water from tanks of pre-cooling and cooling and packaging sector with samples of final products. The slaughterhouse A 30 samples were positive (18,7%), being the most contaminated the plucking machine and on slaughterhouse B 74 samples were positive (56,1%), being the cages, evisceration and the plucking machines the most contaminated. The serotypes most detected were S. Albany, S. Infantis e S. Schwarzengrund, S. Kentucky / Mestre