Orientador: Mary Marcondes / Banca: Wagner Luís Ferreira / Banca: Raimundo Souza Lopes / Resumo: O objetivo do presente estudo foi determinar em uma população de 302 gatos provenientes de área endêmica para leishmaniose visceral, a prevalência da infecção por Leishmania spp. e a presença de coinfecção pelo Toxoplasma gondii, vírus da imunodeficiência felina (FIV) e vírus da leucemia felina (FeLV). Foram evidenciadas formas amastigotas de Leishmania spp. em 9,93% (30/302) dos animais. A prevalência da leishmaniose observada por meio dos métodos de ELISA-proteína A, ELISA-IgG ou exame parasitológico direto foi de 21,85% (66/302), sendo 13,64% (9/66) positivos no exame parasitológico direto e sororeagentes nas técnicas de ELISA indireto. Doze animais (70,59%) foram sororeagentes para o FIV e a Leishmania spp., enquanto 17 (25,76%) apresentaram anticorpos anti-Toxoplasma gondii e anti-Leishmania spp. e cinco (71,43%) apresentavam infecção pelos três agentes. Não foi observada coinfecção entre Leishmania spp. e o FeLV. Houve associação estatisticamente significante entre a coinfecção por Leishmania spp. e pelo vírus da imunodeficiência felina, bem como entre a presença de Leishmania spp., do vírus da imunodeficiência felina e do Toxoplasma gondii. A sensibilidade e a especificidade dos métodos de ELISA-proteína A, ELISA-IgG e reação de imunofluorescência indireta para o diagnóstico de leishmaniose felina foram de 56,6% e 89,47%, 55,55% e 90,96% e 54,55% e 96,80%, respectivamente. As concordâncias entre a RIFI e as técnicas de ELISA-proteína A e ELISA-IgG foram fracas. No entanto, houve boa concordância entre as duas últimas técnicas. O presente estudo verificou que gatos residentes em área endêmica para leishmaniose visceral são predispostos à coinfecção por Leishmania spp. e vírus da imunodeficiência felina, e que parte deles desenvolvem sintomas inespecíficos e devem ser investigados em um diagnóstico diferencial / Abstract:The aim of this study was to determine, in a population of 302 cats from an endemic area for visceral leishmaniasis, the prevalence of the infection by Leishmania spp. and the presence of co-infection by Toxoplasma gondii, feline immunodeficiency virus (FIV) and feline leukemia virus (FeLV). Amastigote forms of Leishmania spp were evidenced in 9.93% (30/302) of the animals. Prevalence of leishmaniasis by ELISA-prot A, ELISA-IgG or direct parasitological examination was 21.85% (66/302), being 13.64% (9/66) positive in both direct parasitological examination and ELISA. Twelve animals (70.59%) were seroreagent for FIV and Leishmania spp., while 17 (25.76%) showed antibodies against Toxoplasma gondii and Leishmania spp. and five (71.43%) showed antibodies against those three agents. Co-infection was not observed between Leishmania spp. and FeLV. There was statistically significant correlation between the co-infection by Leishmania spp. and by the immunodeficiency virus, as well as among the present of Leishmania spp, feline immunodeficiency virus and Toxoplasma gondii. The susceptibility and the specificities of (the methods) ELISA-prot A, ELISA-IgG and reaction of indirect immunofluorescence for the diagnosis of feline leishmaniasis were 56.6% and 89.47%, 55.55% and 90.96% and 54.55% and 96.80%, respectively. The agreements between RIFI and ELISA-prot A and ELISA-IgG techniques were weak. However, there was a good agreement between the last two techniques. This study verified that cats from endemic areas for visceral leishmaniasis are predisposed to co-infection by Leishmania spp. and feline immunodeficiency virus, and that part of them developed nonspecific symptoms and should be investigated in a differential diagnosis / Mestre

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-07-19T14:08:54Z No. of bitstreams: 1 Cecilia Maria de Souza Leao e Silva.pdf: 1235721 bytes, checksum: fa10ebf32171212966df2a23383f5075 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-19T14:08:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cecilia Maria de Souza Leao e Silva.pdf: 1235721 bytes, checksum: fa10ebf32171212966df2a23383f5075 (MD5) Previous issue date: 2014-02-21 / Glanders is a highly contagious disease caused by Burkholderia mallei solipeds, a Gram - negative bacterium, not motility and aerobic coccobacillus, primarily infecting horses, donkeys and mules, though humans are considered accidental hosts . The Burkholderia mallei is listed in the list of the World Organisation for Animal Health (OIE) as an important public health disease, and due to its high potential for infection is referred to as a bioterrorism agent. According to the OIE comprises the serological diagnosis, allergy testing and bacterial isolation, and complement fixation, the official test to be performed for trade of animals. This method of diagnosis is recommended in Brazil by Normative Instruction Nº 24 Ministry of Agriculture, Livestock and Food Supply by its high sensitivity and specificity. Serological qPCR showed 76 (16.7%) positivity and a sensitivity of 24.7% and a specificity of 89 % when compared to the gold standard western blotting used. The results show that the use of the qPCR may be used as a complementary technique to other methods for rapid and accurate identification of Burkholderia mallei. About statistical results showed that the ELISAi showed the highest sensitivity (35.5%) and specificity (97.6 %) when compared to western blotting. The results show the importance of preparation and use of antigens that are produced with local strains, resulting in higher sensitivity and specificity of the test. / O Mormo constitui-se em uma doença altamente contagiosa dos solípedes causada pela Burkholderia mallei, uma bactéria Gram-negativa, não móvel e cocobacilo aeróbio, infectando primariamente cavalos, burros e mulas, entretanto humanos são considerados hospedeiros acidentais. A Burkholderia mallei está relacionada na lista de doenças da Organização Mundial para a Saúde Animal (OIE) como doença de importância de saúde pública, e devido ao seu alto potencial de infecção é referenciada como agente de bioterrorismo. De acordo com a OIE o diagnóstico compreende o teste sorológico, alérgico e o isolamento bacteriano, sendo a fixação do complemento, o teste oficial a ser realizado para trânsito de animais. Este método de diagnóstico está preconizado no Brasil pela Instrução Normativa Nº 24 do Ministério da Agricultura Pecuária e Abastecimento por apresentar alta sensibilidade e especificidade. A qPCR sorológica apresentou 76 (16,7%) positividade e uma sensibilidade de 24,7% e especifidade de 89% quando comparado ao western blotting padrão ouro utilizado.. Os resultados mostram que a utilização da qPCR pode ser utilizada como técnica complementar de outras metodologias para identificação rápida e precisa da Burkholderia mallei. Em relação aos testes sorológicos, os resultados estatísticos mostraram que o ELISAi apresentou a maior sensibilidade (35,5%) e especificidade (97,6%) quando comparado ao western blotting. Os resultados mostram a necessidade da preparação e utilização de antígenos que sejam produzidos com cepas locais, determinando maior sensibilidade e especificidade ao teste.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-10-11T13:48:24Z No. of bitstreams: 1 Geraldo Vieira de Andrade Filho.pdf: 343219 bytes, checksum: 804718cf3c5fa3f4864f8630c7e71816 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-11T13:48:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Geraldo Vieira de Andrade Filho.pdf: 343219 bytes, checksum: 804718cf3c5fa3f4864f8630c7e71816 (MD5) Previous issue date: 2012-02-27 / Canine leptospirosis is considered a zoonosis of worldwide distribution and takes on considerable importance as an economic problem and public health, especially in developing countries. The objective was determine the frequency of aglutinins anti-Leptospira spp. and more prevalent serovars of dogs from Metropolitan Region of Recife and Fernando de Noronha island, Pernambuco, Brazil. Between 2008 to 2011 sera of 286 dogs were collected; 187 dogs were of five municipialities (Camaragibe, Jaboatão dos Guararapes, Olinda, Paulista and Recife) and 63 districts for Metropolitan Region of Recife, and 99 dogs from Fernando de Noronha island, both sexes and variable ages. Dogs from Metropolitan Region of Recife were Veterinary Clinical of “Centro de Vigilância Ambiental” (CVA Recife) (n=83), Veterinary Hospital of Department of Veterinary Medicine of “Universidade Federal Rural de Pernambuco – UFRPE (n=11), and Kennel of CVA Recife (n=18), and district of Dois Irmãos (n=75). Sera were examined by Microscopic Agglutination Test (MAT 100) with 25 serovars. Out of 187 sera of dogs examined from Metropolitan Region of Recife, 7 (3.7%) were seropositive to aglutinins anti-Leptospira spp. from Olinda (2/7,28.6%), and Recife (5/7, 71.4%). Most prevalent serovars were Icterohaemorrhagiae in 4/7, Copenhageni in 2/7, Castellonis in 1/7 and Pomona in 1/7. There was no statistically significant difference for the variables sex, age and race. In relation of sera of dogs from Fernando de Noronha Island, out of 99 dogs examined, 10 (10.1%) were seropositive and the most prevalent serovars were Copenhageni, Grippotyphosa and Autumnalis. This is the first serological survey of leptospirosis in dogs from Fernando de Noronha Island; the dogs of the areas examined were exposed to the Leptospira spp. in environments possibly contaminated by synantropic rodents; and the dogs can serve as sentinel animals for infection by Leptospira spp. to public health agencies. / A leptospirose canina é considerada uma zoonose distribuída mundialmente e assume considerável importância como problema econômico e de saúde pública, principalmente em países em desenvolvimento. Objetivou-se com o presente trabalho determinar a frequência de aglutininas anti-Leptospira spp. e os sorovares mais prevalentes em cães da Região Metropolitana do Recife e da Ilha de Fernando de Noronha, Pernambuco, Brasil. Durante os anos de 2008 a 2011 foram colhidos soros sanguíneos de 286 cães, sendo 187 cães de cinco municípios (Camaragibe, Jaboatão dos Guararapes, Olinda, Paulista e Recife) e de 63 bairros da Região Metropolitana do Recife e de 99 cães da Ilha de Fernando de Noronha, de ambos os sexos e idades variadas. Os cães da Região Metropolitana do Recife foram procedentes da Clínica Veterinária do Centro de Vigilância Ambiental (CVA) do Recife (n=83), do Hospital Veterinário do Departamento de Medicina Veterinária da Universidade Federal Rural de Pernambuco – UFRPE (n=11), do canil do CVA (n=18) e do bairro de Dois Irmãos (n=75). Os soros sanguíneos foram examinados pela Microtécnica de Soroaglutinação Microscópica (SAM 100) com 25 estirpes de leptospiras vivas. Dentre os 187 soros sanguíneos de cães examinados da Região Metropolitana do Recife, 7 (3,7%) foram sororeatores para aglutininas anti-Leptospira spp., dos quais dois cães foram de Olinda (28,6%) e cinco de Recife (71,4%). Os sorovares mais prevalentes foram Icterohaemorrhagiae (4/7), Copenhageni (2/7), Castellonis (1/7) e Pomona (1/7). Não houve diferença estatisticamente significante para as variáveis sexo, idade e raça. Com relação aos soros sanguíneos de cães da Ilha de Fernando de Noronha, dentre os 99 cães examinados, 10 (10,1%) foram sororeatores e os sorovares mais prevalentes foram Copenhageni, Grippotyphosa e Autumnalis. Este trabalho representou o primeiro inquérito sorológico de leptospirose em cães da ilha de Fernando de Noronha; os cães das áreas estudadas foram expostos à bactéria Leptospira spp. em ambientes contaminados possivelmente por roedores sinantrópicos; e os cães podem servir animais sentinelas para a infecção por Leptospira spp. aos órgãos de saúde pública.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-02-01T08:34:02Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Danielle de Freitas Mizoguti - 2013.pdf: 1318732 bytes, checksum: 8084d20c2bec9e4264a71581ca4d04b2 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-02-01T08:37:28Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Danielle de Freitas Mizoguti - 2013.pdf: 1318732 bytes, checksum: 8084d20c2bec9e4264a71581ca4d04b2 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-01T08:37:28Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Danielle de Freitas Mizoguti - 2013.pdf: 1318732 bytes, checksum: 8084d20c2bec9e4264a71581ca4d04b2 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2014-02-21 / Introduction: Leprosy Type 1 ( T1R) and type 2 reactions ( T2R) are considered the major complicators in the clinical management of leprosy patients. Leprosy reactions can occur before, during or after multidrug therapy (MDT). T1R is associated with exacerbated Th1 type cell mediated immunity (CMI) whereas T2R is associated with Th2 type immunity characterized by strong antibody production and in some cases transitory CMI to M. leprae antigens. Objective: Assess the serological reactivity to LID-1 fusion protein and to PGL-I M. leprae antigens among multibacillary (MB), paucibacillary (PB) leprosy patients that developed reaction at diagnosis or during MDT compared to reaction free MB and PB patients. Material and Methods: Paired serum samples from 73 leprosy patients were tested by ELISA to detect IgG antibodies to LID-1 and IgM responses to PGL-I. Leprosy patients included MB that developed T1R or T2R at diagnosis or during MDT and PB patients that developed T1R at diagnosis or during MDT compared to reaction free MB and PB patients. For T1R and T2R patients, samples collected during reactions and in the absence of reactions were tested and for reaction free patients samples collected at diagnosis and after MDT were tested. Results: The decline of anti LID-1 and anti PGL-I antibodies levels was significant among MB patients with T1R at diagnosis (p <0,05). Among MB patients with T2R at diagnosis and non reactional MB leprosy patients, the decline of antibodies was significant only to LID-1 (p <0,05). Higher levels of anti LID-1 antibodies were observed in MB patients who developed T2R at diagnosis compared with unreactional patients (p = 0.020) and patients who developed T1R at diagnosis (p = 0.008). Moreover, different antibody levels were seen in patients who developed T2R during MDT compared with unreactional MB patients after MDT (p = 0.020). Conclusions: Our data suggest that high anti LID-1 antibody levels may be associated with higher risk of T2R in MB patients. / Introdução: As reações hansênicas (tipo 1/RT1 e tipo 2/RT2) são as principais complicações no manejo clínico de pacientes com hanseníase e podem ocorrer antes, durante e após multidrogaterapia (MDT). A RT1 está associada a exacerbação da imunidade mediada por células (CMI) do tipo Th1 para antígenos do Mycobacterium leprae. Já a RT2 está associada com a resposta imunitária do tipo Th2, caracterizada por forte produção de anticorpos e em alguns casos ativação transitória da CMI. Objetivo: Avaliar a reatividade sorológica a proteína de fusão LID-1 e ao PGL-I do M. leprae em pacientes com hanseníase multibacilares (MB) e paucibacilares (PB) com reação hansênica e em pacientes MB e PB que não desenvolveram reação. Materiais e Métodos: Foram testadas amostras um total de 73 pacientes com hanseníase MB que desenvolveram RT1 ou RT2 ao diagnóstico ou durante MDT e em pacientes PB que desenvolveram RT1 ao diagnóstico ou durante MDT comparados com pacientes MB e PB que não desenvolveram reação hansênica ao diagnóstico nem durante MDT. A presença de IgG anti LID-1 e IgM anti PGL-I foi testada por ELISA. Resultados: O declínio dos níveis de anticorpos anti LID-1 e anti PGL-I foi significativo dentre os pacientes MB que estavam em RT1 ao diagnóstico (p< 0.05). Dentre os pacientes MB que estavam em RT2 ao diagnóstico e pacientes MB não reacionais, o declínio dos anticorpos foi significante apenas para LID-1 (p< 0.05). Níveis mais altos de anticorpos anti LID-1 foram observados nos pacientes MB que desenvolveram RT2 ao diagnóstico quando comparados com pacientes MB que desenvolveram RT1 ao diagnóstico (p=0.008) ou pacientes MB não reacionais (p=0.020). Pacientes MB que desenvolveram RT2 durante a MDT também apresentaram níveis mais altos de anticorpos anti LID-1 comparados com pacientes MB não reacionais após MDT (p=0.020). Conclusões: Nossos resultados sugerem que altos níveis de anticorpos anti LID-1 podem estar associados ao maior risco de desenvolvimento de RT2 em pacientes MB.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-10-05T14:30:57Z No. of bitstreams: 2 Dissertaçao - Adriano Badotti Grassi - 2007.pdf: 1439206 bytes, checksum: 031af098879a0122f9c34462d0323a5f (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-10-05T14:31:18Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertaçao - Adriano Badotti Grassi - 2007.pdf: 1439206 bytes, checksum: 031af098879a0122f9c34462d0323a5f (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-05T14:31:18Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertaçao - Adriano Badotti Grassi - 2007.pdf: 1439206 bytes, checksum: 031af098879a0122f9c34462d0323a5f (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2008-02-25 / Objectives: This study compared two leprosy rapid tests detecting (1) IgM against PGL-I (ML-Flow test, KIT, Amsterdam, Netherlands) or (2) IgM, IgG and IgA against PGL-I (ML-ICA, Yonsei University, South Korea). Methods: Whole blood and serum from untreated multibacillary (MB; n=50) and paucibacillary (PB; n=48) leprosy patients (Reference Center for Diagnosis and Treatment, Goiania, central Brazil), MB household contacts (HHC; n=35) and healthy endemic controls (EC; n=50) were tested. Leprosy patients were classified by dermato-neurological evaluation, bacillary index (BI) and histopathology. Median age was 29 years, 39.9% males. MB patients had BB-BL-LL leprosy (median BI=2.0), PB patients had TT-BT leprosy. Results: (1) Using sera, ML Flow positivity of MB patients was comparable to ML-ICA positivity. (2) For ML-Flow tests, the positivity was comparable with whole blood and serum. (3) Among PB leprosy ML- flow positiviy was comparable for whole blood and serum but it was higher than the ML-ICA seropositivity in whole blood and serum. (4) Among MB leprosy patients positivity of ML Flow test in serum and whole blood was comparable to the positivity of ML-ICA in serum. Conclusion: ML-Flow test is more field applicable than ML-ICA since high positivity was observed among MB patients using whole-bood. / Objetivos: Este estudo comparou dois testes rápidos para hanseníase que detectam (1) IgM anti-PGL-I (ML-Flow test, KIT, Amsterdam, Holoanda) ou (2) IgM, IgG e IgA anti-PGL-I (ML-ICA, Yonsei University, Coréia do Sul). Materiais e Métodos: Foram testados sangue-total e soro de pacientes com hanseníase multibacilar (MB; n=50) e paucibacilar (PB; n=48), virgens de tratamento (Centro de Referência em Diagnóstica e Terapêutica, Goiânia, GO), contactantes intradomiciliares de MB (CD; n=35) e indivíduos saudáveis de área endêmica (CS; n=50). Pacientes com hanseníase foram classificados segundo avaliação dermato-neurológica, índice baciloscópico (IB) e exame histopatológico. A mediana da idade foi de 29 anos, 39.9% do sexo masculino. Pacientes MB apresentavam as formas BB-BL-LL (mediana do IB=2.0), Pacientes PB apresentavam as formas TT-BT. Resultados: (1) Para o grupo MB não observamos diferença significante entre os resultados dos testes ML-Flow em amostras de sangue-total e soro e os resultados do ML-ICA em amostras de soro; (2) Em todos os grupos (MB, PB, CD e CS) que não observamos diferença estatisticamente significativa entres os resultados do ML-Flow em sangue-total ou soro; (3) Entre os pacientes PB o ML-Flow apresentou sensibilidade significativamente maior que o teste ML-ICA, em amostras de sangue-total e em soro; (4) O teste ML-ICA em soro discriminou melhor os pacientes MB e PB. Conclusão: O teste ML-Flow mostrou-se melhor para utilização em situações de campo que o ML-ICA, pois apresentou alta reatividade em sangue-total em pacientes MB.

Neospora caninum é um parasito intracelular obrigatório, formador de cistos, que acomete vários animais domésticos e silvestres, tendo maior importância nas espécies canina e bovina, nas quais causa problemas nervosos e reprodutivos. Os canídeos do gênero Canis são os únicos reconhecidos como hospedeiros definitivos do N. caninum até o momento, nos quais ocorre a fase sexuada de multiplicação, resultando na eliminação de oocistos pelas fezes. Toxoplasma gondii também é um coccídio responsável por uma das zoonoses de maior importância e ocorrência em todo o mundo. A fase assexuada de desenvolvimento do T. gondii ocorre nos mamíferos e aves (hospedeiros intermediários) com formação de cistos teciduais e a fase sexuada de desenvolvimento ocorre no intestino delgado dos hospedeiros definitivos, que são os membros da família Felidae. Este estudo teve por objetivo determinar a soroprevalência de anticorpos contra Neospora spp. e T. gondii em equídeos de diferentes regiões do Brasil e o isolamento e caracterização genética destes coccídios em amostras de tecidos de equídeos. A sorologia para T. gondii e Neospora spp. foi realizada em 453 amostras de soros por meio da Reação de Imunofluorescência Indireta com ponto de corte de 50 para Neospora spp e 64 para T. gondii. Deste total, oito (1,75%) amostras (sete de jumentos e um de cavalo) foram positivas para Neospora spp. e 129 (28,47%) amostras (82 jumentos, 32 cavalos e 15 mulas) para T. gondii. Para o isolamento do T. gondii foram realizados 29 bioensaios em camundongos, sendo 19 de animais soropositivos e 10 de pools de tecidos de cavalos soronegativos. Por meio dessa prova biológica, foi possível o isolamento em uma amostra de jumento (Equus asinus) de Mossoró, RN, ocorrendo a morte dos dois únicos camundongos infectados, no 16o e 17o dia pós-inoculação. A caracterização genotípica do isolado foi realizada pela PCR-RFLP utilizando 12 marcadores genotípicos. A genotipagem dessa amostra evidenciou o genótipo #60 TgCkBr220, já isolado em galinha do Arquipélago de Fernando de Noronha, PE, Brasil. O isolamento de Neospora spp em gerbilos não pode ser feito uma vez que não foi possível a obtenção de tecidos dos equídeos soropositivos. / Neospora caninum is an obligate intracellular parasite, forming cysts that affect many domestic and wild animals, having greater importance in canine and bovine species due neurological and reproductive problems. Canids of the genus Canis are recognized as the only definitive hosts of N. caninum until the moment in which sexual phase occurs multiplication, resulting in the elimination of oocysts in the feces. Toxoplasma gondii is also a coccidian parasite responsible for a zoonotic disease of great importance and occurrence around the world. The asexual developmental stage of T. gondii occurs in mammals and birds, the intermediate hosts, resulting in the formation of cysts and the sexual stage occurs in the small intestine of definitive hosts, which are the felids, occurring oocysts formation. This study aimed to determine the seroprevalence of antibodies against Neospora spp. and Toxoplasma gondii in equids from different regions of Brazil and the isolation and genetic characterization of these parasites from equids tissue. Serology for T. gondii and Neospora spp. was performed in 453 serum samples by Immunofluorescence Antibody Test (IFAT). Of this total, eight (1.75%) samples (seven of donkeys and one of horse) were positive to Neospora spp. antibodies and 129 (28.47%) samples (82 donkeys, 32 horses, 15 mules) were T. gondii seropositive. For the isolation of T. gondii, bioassay was performed in mice. A sample of one donkey (Equus asinus) from Mossoró, RN, was obtained with two of the 20 inoculated mouse infected. The mouse died at day 16th and 17th post inoculation. The genotypic characterization of the isolate was performed by PCR-RFLP using 12 genotypic markers. Genotyping showed the genotype #60 TgCkBr220, already described in chickens from Fernando de Noronha, PE, Brazil. Due the impossibility of acquisition of tissue from Neospora spp seropositive equids, isolation of this coccidian by gerbil bioassay was not possible to be done.

Com o objetivo de avaliar os equinos alojados no Jóquei Clube de São Paulo, Brasil, quanto a presença de anticorpos contra Theileria equi e Babesia caballi, foram testadas 180 amostras de soro sanguíneo por meio da técnica de C-ELISA (Competitive Enzyme-Linked Immunosorbent Assay), metodologia atualmente recomendada pela OIE (Organização Internacional de Epizootíases) por ter alta sensibilidade e especificidade. A frequência de animais com sorologia positiva para Theileria equi foi de 6,66% (12/180), para Babesia caballi foi de 22,3% (40/180) e para infecção concomitante foi de 6,66% (12/180). Os resultados sorológicos obtidos por este estudo revelam que 35,5% (64/180) dos animais possuem anticorpos contra a babesiose equina sendo que a maioria dos animais acometidos tem dois e três anos de idade e portanto estão há menos tempo no hipódromo. Fatores como a ausência de carrapatos vetores, o uso de terapias babesicidas repetidas e o longo tempo de permanência dos animais no Jóquei após o tratamento, favorecem a diminuição dos títulos de anticorpos sem que ocorra reinfecção. Esses fatores podem justificar o menor número de animais com sorologia positiva para a doença nos cavalos com idade acima de quatro anos. Considerando-se esses resultados sugere-se que os animais sejam avaliados sorologicamente ao ingressarem no Jóquei Clube de São Paulo para que o uso de medicamentos contra a doença seja feito de forma adequada e para que os sinais clínicos compatíveis com babesiose equina em animais sorologicamente negativos sejam melhor avaliados e considerados em diagnósticos diferenciais. / In order to evaluate the presence of antibodies against Theileria equi and Babesia caballi in horses kept at the Jockey Club in São Paulo city, Brazil, a total of 180 samples of blood serum was tested using the Competitive Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (C-ELISA test). This methodology has been recommended by the International Organization of Epizooties (IOE) due to its high sensitivity and specificity. The frequency of seropositive animals for Theileria equi, Babesia caballi and for both was 6.66% (12/180), 22.3% (40/180) and 6.66% (12/180), respectively. Serological results showed that 35.5% of the animals (64/180) had antibodies against equine piroplasmosis; they were from two to three years old and were at the Jockey Club for a shorter period of time. Factors such as absence of thick vectors, repeated therapy using babesicidal drugs and the long period of time that the animals stayed in the Jockey Club after treatment favoured the lowering of antibody titers with no reinfection. These factors might be responsible for the fewer number of animals with positive serology for the disease in horses over four years of age. Based on these findings, animals should be serologically evaluated at the time of entrance into the Jockey Club so that the use of drugs against the disease be performed properly and clinical signs suggestive of equine babesiosis in serologically negative animals be better evaluated and considered for differential diagnosis.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:31:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_jacqueline_radin.pdf: 589146 bytes, checksum: 57a338810c6c34920d4047b74e163eaf (MD5) Previous issue date: 2011-03-11 / The Toxoplasma gondii is a protozoan which causes opportunistic infections in individuals with a compromised immune system. There exist a lot of studies correlating toxoplasmosis with immunosuppressed patients, however, in neoplasia carriers, who may suffer a process of immunosuppression during the chemotherapy, few studies were conducted. The aim of the present study was to evaluate, through serological profile, the risk of acute infection (or reactivation) of T.gondii in cancer patients who had chemotherapy treatment in the School Hospital of Pelotas Federal University and in the Radiotherapy and Cancer Center of Pelotas Santa Casa de Misericórdia , as well as to correlate such cancer with toxoplasmosis, through clinical and epidemiological data. A longitudinal cohort prospective study was carried out with a total of 95 patients, who were followed during the antineoplastic treatment by approximately two cycles, from March to November of 2010. The serological search was performed through Indirect Immunofluorescence Techniques (IFI) and Enzyme Linked Immunosorbent Assays (ELISA), and positive results to antibodies IgM anti-T. gondii were confirmed through Electrochemiluminescence Immunoassay (ECLIA). The epidemiological data were obtained through a questionnaire and the clinical, from the analysis of previously authorized patient dossiers. It was verified that the seropositive rate for IgG anti-T.gondii antibodies was of 84.21% at the pre-treatment chemotherapy sample, and of 83.33% at the post-treatment sample through the IFI technique, observing the low titration of antibodies, while through ELISA, 100% of the samples in both analysis were reagents. Class M antibodies were detected in six of the patients (6.3%) through IFI or ELISA and confirmed by ECLIA in one of them. In the risk factor analysis, it was noted a significant association (p<0.05) among seropositive patients for IgM in relation to the variables death (OR= 4.78) and race (OR= 10.88), respectfully. The results obtained point towards the necessity to perform the monitoring toxoplasmosis in cancer patients who are undergoing chemotherapy treatment, in order to avoid grave or even fatal consequences. / Toxoplasma gondii é um protozoário oportunista causador de infecções em indivíduos com o sistema imunológico comprometido. Existem vários estudos correlacionando a toxoplasmose com pacientes imunocomprometidos, porém, em portadores de neoplasias, que podem vir a sofrer um processo de imunodepressão durante o tratamento quimioterápico, poucos estudos foram realizados. O objetivo deste trabalho foi avaliar, através do perfil sorológico, o risco de infecção aguda ou reativação de T. gondii em pacientes oncológicos, que realizaram tratamento quimioterápico no Hospital Escola da Universidade Federal de Pelotas e no Centro de Radioterapia e Oncologia da Santa Casa de Misericórdia de Pelotas, além de correlacionar o câncer com a toxoplasmose, através de dados clínicos e epidemiológicos. Foi realizado um estudo de coorte longitudinal prospectivo, com um total de 95 pacientes, os quais foram acompanhados por pelo menos duas sessões de quimioterapia, no período de março a novembro de 2010. A pesquisa sorológica foi realizada através das técnicas de Imunofluorescência Indireta (IFI) e ensaio imunoenzimático (ELISA), e os resultados positivos para IgM anti-T.gondii foram confirmados pela eletroquimioluminescência (ECLIA). Os dados epidemiológicos foram obtidos pela aplicação de um questionário e os clínicos através da análise dos prontuários dos pacientes, previamente autorizados. Constatou-se que a taxa de soropositivos para IgG anti-T.gondii foi de 84,21% na amostra pré-tratamento quimioterápico e 83,33% na amostra pós-tratamento pela técnica de IFI, observando-se baixas titulações de anticorpos, enquanto que por ELISA, 100% das amostras, nas duas análises, foram reagentes. Anticorpos da classe M foram detectados em seis pacientes (6,3%) através da técnica de IFI ou ELISA e confirmado por ECLIA em um dos pacientes. Na análise dos fatores de risco, foi verificada associação significativa entre os pacientes soropositivos para IgM em relação às variáveis óbito (OR=4,78) e raça (OR=10,88), respectivamente. Os resultados obtidos indicam a necessidade de se realizar o monitoramento da toxoplasmose em pacientes oncológicos, que estão realizando tratamento quimioterápico, para evitar consequências graves e até mesmo fatais.

Pythiosis is a granulomatous disease of humans and animals caused by an aquatic oomycete named Pythium insidiosum. In Brazil, equine species is the most affected and the highest occurrence of pythiosis is observed in Brazilian Pantanal. Nowadays, in Rio Grande do Sul (RS), in South of Brazil, there has seen an increase in the number of equine pythiosis. Nevertheless, there is no information about seroprevalence in Brazil. Early diagnosis is the key to success in controlling this infection. Currently, immunotherapy with proteic antigens has been studied as a promising alternative of treatment. The intradermal (ID) route to apply proteic antigen is an option to be evaluated, for both early diagnosis and pythiosis treatment, by using proteic antigens of P. insidioum. In this study it was investigated the seroprevalence of equine pythiosis in the RS State and also it was evaluated and compared the use of proteic antigens of P. insidiosum by the ID route in the diagnosis and control of pythiosis in an experimental model (Oryctolagus cuniculus). To determine the prevalence of equine pythiosis in RS it was used 1002 equine serum samples evaluated by indirect ELISA test. Of the total samples tested, 11.1% (111/1002) were seropositive for equine pythiosis. For the diagnosis it was applied 0.1mL (1.7mg) of proteic antigen by ID route in rabbits (O.cuniculus) (n = 15) divided into three groups: negative control (n = 5), with experimental pythiosis (n = 5) and animals previously immunized with the proteic antigen (n = 5). In order to verify and compare the use of proteic antigen of P. insidiosum by ID as an option of treatment it was used ten rabbits with pythiosis. Five rabbits with pythiosis were treated with 0.1mL proteic antigen applied through ID and other five rabbits by subcutaneous (SC) route with 2mL (34mg) (n = 5). The ID test was able to detect cutaneous reactions in 24h and 72h in all animals exposed to P. insidiosum, as well as it demonstrated sensitivity and specificity comparable with the pattern of diagnosis of pythiosis (indirect ELISA). The treatment proteic antigen of P. insidiosum, by ID and SC route, did not observed difference (P> 0.05) in the size of the lesions. However, the clinical cure affect as 40% of rabbits in both groups. Thus, protein antigen of P. insidiosum by ID may be used in therapeutic protocols of pythiosis in rabbits, also this route as a protocol of pythiosis has other advantages such as lower protein concentration and volume of antigen to control pythiosis. However, research is needed for evaluation of ID route for diagnosis and control of pythiosis in naturally affected species. / A pitiose é uma doença granulomatosa de humanos e animais, causada pelo oomiceto aquático Pythium insidiosum. A maior ocorrência da enfermidade no Brasil é na espécie equina, especialmente no Pantanal Mato-Grossense, porém no Rio Grande do Sul (RS) observa-se um aumento dos casos da doença. Todavia, não há dados de soroprevalência da pitiose no Brasil. O diagnóstico precoce da enfermidade é fundamental para sucesso no controle da pitiose. Atualmente, a imunoterapia com antígenos proteicos vem sendo estudada como uma alternativa promissora de tratamento. A via intradérmica (ID) é uma opção a ser avaliada tanto para um diagnóstico precoce quanto para o tratamento da pitiose empregando antígenos proteicos de P. insidiosum. Neste estudo investigou-se: a soroprevalência da pitiose equina no estado do RS, bem como avaliou-se e comparou-se o uso de antígenos proteicos de P. insidiosum pela via ID no diagnóstico e controle da pitiose em modelo experimental. Para determinar a soroprevalência da pitiose equina no RS foram utilizadas 1002 amostras de soro equino avaliadas pelo método de ELISA indireto. Do total das amostras testadas, 11,07% (111/1002) foram soropositivas para a pitiose equina. Para o diagnóstico aplicou-se 0,1 mL (1,7mg) de antígeno proteico pela via ID, em coelhos (Oryctolagus cuniculus) (n=15) separados em três grupos: controle negativo (n=5), com pitiose experimental (n=5) e animais previamente imunizados com antígeno proteico (n=5). A fim de verificar e comparar a aplicação do antígeno proteico pela via ID como opção de tratamento utilizaram-se dez coelhos com pitiose. Cinco animais foram tratados com 0,1mL de antígeno proteico aplicado via ID e outros cinco coelhos foram tratados pela via subcutânea (SC) com 2mL (34mg) do antígeno. O teste ID foi capaz de detectar reações cutâneas em 24h e 72h nos animais previamente expostos ao agente, demonstrando sensibilidade e especificidade comparáveis ao teste padrão de diagnóstico da pitiose (ELISA indireto). No tratamento com antígeno proteico pelas vias ID e SC, embora não tenha sido observada diferença (P>0,05) no tamanho das lesões, a cura clínica em 40% dos coelhos de ambos os grupos demonstrou que a via ID pode ser utilizada em protocolos terapêuticos da pitiose em modelo experimental, pois também apresenta outras vantagens como menor concentração e volume de antígeno proteico para o controle da pitiose. No entanto, são necessárias pesquisas para o emprego da via ID no diagnóstico e controle da pitiose nas espécies naturalmente acometidas.

Chlamydia trachomatis infections are associated with a spectrum of clinical diseases including urethritis, prostatitis and epididymitis among men and cervicitis and pelvic inflammatory disease (PID), with an increased risk of infertility and ectopic pregnancy (EP), among women. In the search for other pathogens causing urethritis, Mycoplasma genitalium was isolated from urethral specimens from two men with acute urethritis (1980). Mycoplasma bacteria are extremely difficult to isolate by culture, and clinical studies have been possible only after the advent of the first PCR-based detection method. M. genitalium has been found to be associated with lower genital tract infections in both men and women. Finding evidence for a connection between M. genitalium and upper genital tract infections in women is still of major importance. The aim in papers I and II was to develop a PCR method for genetic characterization of clinical C. trachomatis isolates by sequence analysis of the omp1 gene, and to study the distribution of genotypes within sexual networks and determine if genotyping would improve partner notification. The method was used to determine the genotypes of C. trachomatis in 237 positive urogenital and/or urine specimens from men and women attending the STDClinic in Örebro during one year. Sequence analysis of the omp1 gene revealed that the most prevalent genotypes corresponded to C. trachomatis serovar E (47%), followed by F (17%), and K (9%). There were 161 networks found and specimens were sequenced from at least two patients in 47 networks. In seven of these 47 networks there were discrepant genotypes. In the largest network comprising 26 individuals two different C. trachomatis genotypes were found, and one partner had urethritis due to a Mycoplasma genitalium infection but was C. trachomatis negative. The need for a new method for M. genitalium DNA detection was one reason for study III. An existing conventional PCR protocol for detection of M. genitalium DNA was further developed into a real-time PCR (RT-PCR) with hybridisation probes. In order to evaluate the RT-PCR assay with clinical material, specimens from 398 men and 301 women attending the STD Clinic in Örebro were analysed, using the RT-PCR assay, and also by the well established conventional PCR in Copenhagen. Using the conventional PCR method as “gold standard”, the sensitivity for the RT-PCR assay was 72.2% and 68.2% and the specificity was 99.7% and 98.6%, respectively, in urogenital specimens from men and women. The aim in paper IV was to adapt a Triton X-114 extracted Lipid-Associated Membrane Protein (LAMP) Enzyme Immuno Assays (EIA) method to detect antibodies against M. genitalium and to evaluate the association between M. genitalium and PID and EP, using sera sampled in Örebro during the 1980s, and also to compare the number of sera having M. genitalium antibodies against those having C. trachomatis antibodies, using a commercial anti- Chlamydia trachomatis EIA assay. No statistical significant association could be demonstrated between M. genitalium antibodies and PID or EP in our serum material. However, a slight trend toward association was found when focusing on younger individuals. Antibodies against C. trachomatis were found to be significantly associated with PID and EP.