A dengue é uma doença infecciosa aguda causada pelo vírus DEN do gênero Flavivirus e é transmitida pela picada de um mosquito vetor, principalmente o Aedes aegypti. Existem quatro sorotipos do vírus da dengue (DEN-1, DEN-2, DEN-3 e DEN-4) e sua incidência tem aumentado dramaticamente nos últimos 50 anos, inclusive no Brasil. O objetivo deste trabalho é caracterizar subpopulações de linfócitos T, principalmente linfócitos T CD8+, provenientes de pacientes infectados quanto a sua capacidade proliferativa, seu estado de ativação e memória celular. Os pacientes foram recrutados no Hospital Ana Costa de Santos, SP, no ano de 2010, após assinarem o Termo de Consentimento Livre e Esclarecido. O diagnóstico de dengue foi realizado utilizando o teste rápido Dengue Duo e os parâmetros imunológicos foram analisados no citômetro de fluxo. Foi coletado sangue periférico para criopreservação de células mononucleares e separação de soro para detecção da carga viral. Pacientes com dengue apresentaram maior proliferação de linfócitos T CD8+ quando comparados com indivíduos saudáveis. Foi ainda observado que tal proliferação celular foi evidente nos dias cinco e seis de sintomas. Quando marcadores de ativação celular foram analisados por citometria de fluxo, observou-se um aumento de linfócitos T CD8+ expressando CD38 e HLA-DR nos pacientes, quando comparados com indivíduos saudáveis. Da mesma forma, a ativação celular também aumentou com o passar dos dias de sintomas com destaque para o quinto e sexto dia. Este aumento na ativação das células juntamente com os dias de sintomas, foi igualmente observado em várias subpopulações de células T de memória Além disso, foi observada uma correlação negativa entre o número absoluto de linfócitos T CD8+ e a carga viral. Juntos, os resultados desse estudo sugerem que a infecção por DEN leva a um aumento da ativação de células T CD8+ / Dengue is an acute disease caused by DEN, a Flavivirus transmitted by a mosquito vector, primarily Aedes aegypti. There are four serotypes of dengue viruses (DEN-1, DEN-2, DEN-3 and DEN-4) and their incidences have increased dramatically over the past 50 years, including in Brazil. The goal of this study is to characterize subpopulations of T lymphocytes, mainly CD8+ T cells, from infected patients. Status of cell activation, and memory cell profiles were assessed. Patients were recruited at Hospital Ana Costa, Santos-SP, Brazil, in 2010, after having signed an informed consent form. The serologic diagnosis of dengue was carryied out using a rapid test and immunological parameters were analyzed in flow cytometer. Peripheral blood was collected for cryopreservation of mononuclear cells and separation of serum for viral load testing. Dengue patients showed higher proliferation of CD8+ T cells compared to healthy subjects. Cell proliferation was more evident in the fifth and sixth days of symptoms. We observed increased frequency of CD8+ T cells expressing activation markers CD38 and HLA-DR in patients, when compared to healthy subjects. Similarly, T cell activation also increased along with the passing days of symptoms hitting on the fifth and the sixth days. Such augment in cellular activation along with the days of symptoms was equally observed in the several memory T cell compartments. Furthermore, we observed a negative correlation between the absolute number of CD8+ T lymphocytes and viral load. Together, the results of this study suggest that dengue virus infection leads to an increased activation of CD8+ T cells

As células T exercem papel crucial nas respostas imunes adaptativas e em doenças autoimunes, como a esclerose múltipla. O glutamato, neurotransmissor mais abundante no SNC, age por meio de duas famílias de receptores: metabotrópico e ionotrópico. As células T são alvo do glutamato durante a ativação e apresentação de antígenos, pois está presente nas sinapses imunológicas, porém, pouco se sabe a respeito de seu papel na função das células T. Nós estudamos o papel do NMDAR nas respostas mediadas por células T. In vitro, o uso do antagonista MK801 reduziu a linfoproliferação e a síntese de IFN-γ e IL-17A, bem com o NMDA reduziu a proliferação e produção de IFN-γ e IL-17A. In vivo, o MK801 reduziu a gravidade da EAE, resultado da menor infiltração de linfócitos Th1 e Th17 no SNC. Além disso, o MK801 reduziu a expressão de Rorc, Il17a, Stat4, Ccr4, Ccr6 e Ifna2 no SNC. Em suma, esses dados confirmam que o NMDAR exerce papel nas funções mediadas por células T, indicando que as células T são alvos do excesso do glutamato via NMDAR em doenças neuroinflamatórias. / T cells play a crucial role in adaptive immune responses and autoimmune diseases, such as multiple sclerosis. Glutamate is the most abundant neurotransmitter in the CNS, and it acts through two receptor families: metabotropic and ionotropic. T cells are target of glutamate during activation and antigen presentation, because glutamate is also present in the immunological synapses, however, little is known about its role on T cell functions. We investigated the role of NMDAR in immune-mediated T cell responses. In vitro, the use of the antagonist MK801 reduced T cell proliferation and cytokine production (IFN-γ e IL-17A), as well as NMDA reduced lymphocyte proliferation and IFN-γ e IL-17A production, in a dose dependent manner. In vivo, MK801 diminished severity of EAE, result of the minor Th1 and Th17 infiltration in the CNS. In addition, MK801 reduced Rorc, Il17a, Stat4, Ccr4, Ccr6 and Ifna2 expression in the CNS. In short, our data confirm that the NMDAR play a role in T cell-mediated functions, indicating that T cells are target of glutamate excess via NMDAR in neuroinflammatory diseases.

Camundongos selecionados para a alta (AIRmax) ou baixa (AIRmin) reatividade inflamatória aguda exibem diferenças no desenvolvimento de tumores de pele. O objetivo foi analisar a expressão gênica na medula e pele dos AIRmax e AIRmin submetidos a inflamação aguda e crônica. Os AIRmax, resistentes ao tumor de pele, apresentam intenso infiltrado celular e alta expressão de Il1b, Il6, Tnf e Ifng após estímulo agudo, sendo a resposta tardia nos AIRmin. Aos trinta dias, o infiltrado celular e a expressão dos genes Il1b, Il6, Tnf, Ifng e Casp8 é maior nos AIRmin. A expressão gênica global na medula dos AIRmax 24 h após o estímulo com Biogel, revelou genes diferencialmente expressos nos cromossomos 1, 3, 6 e 11, agrupados em categorias envolvidas na migração celular e reações inflamatórias. Após o estímulo crônico com TPA, foram encontrados genes de transdução de sinal ativados e de morfogênese de epitélio reprimidos nos AIRmax. Nos AIRmin, genes de transdução de sinal Rho-GTPase e angiogênese são ativados e de proliferação de linfócitos são reprimidos. / Mice selected for high (AIRmax) or low (AIRmin) acute inflammatory reactivity exhibit significant differences in the development of skin tumors. The objective was to analyze gene expression of bone marrow and skin of AIRmax and AIRmin subjected to acute and chronic inflammation. Resistant skin tumor AIRmax have an intense cellular infiltrate and high expression of II 1b, Il6, Tnf and Ifng after acute stimulation, while in AIRmin these responses take more time. After thirty days, the cellular infiltrate and the Il1b, Il6, Tnf, Ifng and Casp8 expressions are higher in AIRmin. The global gene expression in the AIRmax bone marrow 24 h after stimulation with Biogel, showed differentially expressed genes on chromosome 1, 3, 6 and 11, that were related to cell migration and inflammatory reactions. After TPA chronic stimulation, it was observed that genes involved in signal transduction are activated and others related to the epithelium morphogenesis are suppressed in the AIRmax. In the AIRmin, genes involved in Rho-GTPase signal transduction and angiogenesis are activated and others implicated in the proliferation of lymphocytes are repressed.

O desencadeamento da asma está sob influência do sistema imunológico onde a sensibilização ao antígeno, seu processamento e geração de anticorpos norteiam o desenvolvimento da resposta alérgica. Nesse contexto, as moléculas do complexo principal de histocompatibilidade e as moléculas co-estimuladoras da superfície de células apresentadoras de antígeno ocupam lugar de destaque. Estudos dos hormônios sexuais femininos (HSF) sobre a qualidade/ função das células dendríticas (DCs) no processo de sensibilização ainda não foram explorados. Neste estudo, analisamos, em modelo murino de asma, a participação dos HSF na maturação das DCs. Avaliamos a expressão de moléculas co-estimuladoras (CD40, CD80, CD86) em DCs (CD11c+) de camundongos fêmeas alérgicas, nas quais os ovários foram removidos 7 dias antes da sensibilização. Os dados obtidos indicaram que os HSF podem mediar a apresentação de antígeno ao modular a população de células dendríticas bem como suas moléculas co-estimuladoras, podendo interferir no desenvolvimento da resposta imune adquirida. / The trigger and the maintenance of asthma are influenced by immune system and its sensibilization. Antigen processing and antibody generation implicate on the allergic response development observed in asthmatic subjects. Results obtained in our laboratory showed that the female sex hormones oscillation during sexual cycle influences on the worsening of asthma. In this study, we analysed the participation of female sex hormones (FSH) on dendritic cells (DCs) maturation and consequently antigen presentation and lymphocyte activation during pulmonary inflammation. Furthmore, we studied immunorregulatory aspects and co-stimulatory molecules expression in allergic mice DCs (DC11c+), in wich ovaries were removed 7 days before allergen sensitization. The results obtained indicate that the FSH can modulate the antigen presentation by reducing DCs expression of costimulatory molecules. Altogether, our data contributes to a better understanding of the mechanisms envolving the regulation of immune response through interaction with FSH.

A identificação e caracterização das células reguladoras (Treg) trouxeram uma nova perspectiva para a indução da tolerância imunológica nos transplantes e um aumento na sobrevida dos enxertos. Uma vez que as células-tronco mesenquimais derivadas de tecido adiposo (ADSC) possuem a capacidade de suprimir uma resposta imune, nos questionamos se as ADSC poderiam melhorar a sobrevida de um enxerto em camundongos C57BL/6, associada à indução de Treg. Nossos resultados mostram que o tratamento com as ADSC aumentou a média de sobrevida do enxerto, com uma melhora na morfologia do tecido transplantado, um aumento na população de linfócitos Treg e na expressão de IFN-g e IL-10, alem de uma inibição da expressão de IL-17 e na proliferação de células T CD4+. Nossos achados sugerem que as ADSC suprimem a resposta imune ao enxerto por meio da indução de Treg, a qual inibe a participação das células Th17, com uma melhora no enxerto. Estes dados ajudam a desenvolver novos aspectos na estratégia terapêutica e possivelmente o uso futuro dessas células na prática clínica. / The identification and characterization de regulatory T cells that can control immune responsiveness to alloantigens opened up opportunities for new therapies in transplantation. After exposure to alloantigens in vivo, antigen-specific immunoregulatory activity is enriched in a population of CD4+ T cells that express high levels of CD25 and Foxp3. Adipose tissue contains one type of mesenchymal stem cells (ADSC) with capacity of suppressing immune response. In this work we propose the correlation of the ADSC cells in ameliorating skin graft survival, and if is associated with Foxp3 expression. Graft survival was enhanced in animals that received ASCs from the donor. Interesting, in the animals treated with ASCs from CBA presented a higher expression of Foxp3+ cells in the lymph-nodes. In treated mice Foxp3 expression was increased and IL-17 were increased in allogeneic group, suggesting a potent inflammatory response inside the graft. So far, these data suggest the ADSCs increase TReg population cells, inhibit IL-17 expression and prolonging skin graft survival.

Introdução: Dentre as doenças cardiovasculares, as doenças isquêmicas do coração (DIC) são a principal causa de morte e incapacidade em todo o mundo. A aterosclerose é a principal causa das DIC, e a inflamação do tecido adiposo epicárdico (TAE) parece estar associada à doença arterial coronariana (DAC). A inflamação no TAE periplaca próxima à placa de ateroma, pode ter um papel ativo na inflamação, contribuindo para a patogênese da aterosclerose. Entretanto, não há evidências conclusivas se esta inflamação está presente apenas no TAE próximo à placa de ateroma ou se é um processo que envolve todo o TAE. Além disso, a associação entre a inflamação do TAE e placas instáveis, assim como o papel dos linfócitos B no processo inflamatório, ainda não foram investigados em estudos de autópsia. Objetivo: Investigar a associação entre inflamação no TAE perivascular e DAC num estudo clinicopatológico. Métodos: Trata-se de um estudo transversal, com material de autópsia coletado no Serviço de Verificação de Óbitos da Capital da Universidade de São Paulo (SVOC-USP), após a aceitação do familiar através do termo de consentimento livre e esclarecido. A entrevista clínica semiestruturada foi feita com o familiar. Artérias coronárias foram dissecadas junto com o TAE e fixadas em formol a 4%. Fragmentos das artérias coronárias (tronco esquerdo, descendente anterior, circunflexa e direita) foram amostrados no local de maior obstrução ou com sinal de lesões instáveis, além de um fragmento distal sem aterosclerose significativa. O tecido adiposo epicárdico perivascular adjacente periplaca (TAPp), distal à placa (TAPaa), subcutâneo (TAS) e perirrenal (TAPr) foram amostrados. As lesões ateroscleróticas foram classificadas de acordo com a estabilidade da placa para estabelecer a divisão dos grupos, e a porcentagem de obstrução arterial foi mensurada por métodos morfométricos. A quantificação de células inflamatórias nos tecidos adiposos foi feita através da digitalização de lâminas coradas através de imunoistoquímica: CD68 (macrófagos), CD3 (linfócitos T) e CD20 (linfócitos B). O número de células inflamatórias foi comparado entre os dois grupos em todos os fragmentos, utilizando modelos lineares generalizados ajustados para fatores de confusão. Resultados: Foram incluídos 82 indivíduos (162 fragmentos de artérias coronárias com placas estáveis e 84 fragmentos com placas instáveis). Houve um aumento do número de macrófagos (?: 0,008; IC95% 0,002; 0,014; p=0,007) e linfócitos B (beta: 0,009; IC95% 0,002; 0,015; p=0,01) com o aumento da porcentagem de obstrução arterial. Observamos também maior número de linfócitos B na presença de placas instáveis (beta: 0,554; IC95%0,194; 0,914; p=0,002). Estas associações foram restritas à placa aterosclerótica, quando comparado com TAPaa. Houve aumento do número de macrófagos (beta: 5,717; IC95% 1,802; 9,632; p=0,004) e linfócitos T (beta: 0,991; IC95% 0,030; 1,951; p=0,04) com o aumento da obstrução arterial nas artérias coronárias no TAPp, em relação ao TAS. O número de macrófagos também aumentou no TAPp em relação ao TAPr (beta: 5,523; IC95% 0,910; 10,136; p=0,01) com o aumento da porcentagem de obstrução arterial, e na presença de placas instáveis (beta: 12,781; IC95%4,363; 21,200; p=0,002). Conclusão: Macrófagos e linfócitos B no TAPp foram associados à DAC, e esta inflamação foi restrita ao TAPp em relação a todos os tecidos adiposos controles. Desta forma, a inflamação no TAPp parece estar associada à maior porcentagem de obstrução e instabilidade da placa de aterosclerose / Introduction: Among the cardiovascular diseases, ischaemic heart disease (IHD) is the main cause of mortality and morbidity worldwide. Atherosclerosis is the main cause of IHD, and inflammation in the epicardial adipose tissue (EAT) seems to be associated with coronary artery disease (CAD). Inflammation in the EAT proximal to the atherosclerotic plaque could have an active role in the inflammation that contributes to atherosclerosis pathophysiology. However, controversy remains whether this inflammation is only adjacent to the atherosclerotic plaque or whether it is present in the whole EAT. Moreover, the association between inflammation in EAT and unstable plaques, as well as the role of B-lymphocytes in the inflammatory process, have not been investigated yet. Aim: To investigate the association between inflammation in perivascular epicardial adipose tissue (PAT) and CAD in a clinicopathological study. Methods: This cross sectional study used autopsy material collected at the Sao Paulo Autopsy Service (SPAS) from University of Sao Paulo, after informed consent term sign by the next-of-kin (NOK). A semi-structured clinical interview was applied to the NOK. Coronary arteries were dissected with PAT and fixed in 4% buffered formalin. Coronary artery fragments (left trunk, anterior descending, circumflex, and right coronary) were sampled at the region with the greatest obstruction or unstable plaque, and also at a distal region without atherosclerosis. PAT adjacent to the atherosclerotic plaque (PATp), distal to the plaque (PATd), subcutaneous adipose tissue (SAT), and perirenal adipose tissue (PrAT) were sampled. Atherosclerotic plaque fragments were classified regarding plaque stability, and percentage of arterial obstruction measured by morphometric methods. The number of inflammatory cells in adipose tissues was counted in slides stained using immunohistochemistry: CD68 (macrophages), CD3 (T-lymphocytes), CD20 (B-lymphocytes). The number of inflammatory cells in all fragments was compared using generalized linear models adjusted for confounders. Results: 82 participants were included (162 fragments of coronary arteries with stable plaques and 84 fragments with unstable plaques). The number of macrophages (beta: 0.008; IC95% 0.002; 0,014; p=0.007) and B-lymphocytes (beta: 0.009; IC95% 0.002; 0.015; p=0.01) increased with the percentage of arterial obstruction. We observed a large number of B-lymphocytes in the presence of unstable plaques (beta: 0.554; IC95% 0.194; 0.914; p=0.002). These associations were restricted to PATp, when compared to PATd. The number of macrophages (beta: 5.717; IC95% 1.802; 9.632; p=0.004) and T-lymphocytes were greater in the PATp than in the SAT (beta: 0.991; IC95% 0.030; 1.951; p=0.04). The number of macrophages was also greater in the TAPp compared to PrAT with the increase of the percentage of arterial obstruction (beta: 5.523; IC95% 0.910; 10.136; p=0.01), and in presence of unstable plaques (beta: 12.781; IC95% 4.363; 21.200; p=0.002). Conclusion: Macrophages, and B-lymphocytes were associated with CAD, and this association was restricted to PATp when compared to all other adipose tissues. Therefore, inflammation in PATp seems to be associated with greater arterial obstruction and atherosclerotic plaque instability

A imunodeficiência comum variável (ICV) é uma imunodeficiência primária de origem heterogênea, definida como uma diminuição de pelo menos dois isótipos de imunoglobulinas, a falta de resposta anticórpica a imunizações e a exclusão de outras causas primárias de hipogamaglobulinemia. A ausência de níveis adequados de anticorpos em pacientes com ICV resulta em infecções bacterianas recorrentes, mais freqüentes no trato respiratório e digestivo, que podem levar a seqüelas sinusais e pulmonares. Nos últimos 6 anos iniciou-se a descoberta de genes relacionados à causa de doenças com o fenótipo de ICV, como os genes de TACI, BAFF-R, CD19 e ICOS. Dentre as alterações imunológicas, podemos também relatar deficiência de células B de memória (CD19+IgM-IgD-CD27+), levando a distúrbio de comutação isotípica e redução da secreção de imunoglobulinas. Atualmente tal característica vem sendo utilizada para classificar a ICV. No decorrer do presente trabalho pudemos observar que pacientes com ICV apresentam alterações na expressão de CD27 não somente em células B, mas também em células T, além de resposta linfoproliferativa ao estímulo de PHA reduzida. O CD27 consiste em uma molécula da família TNF presente constitutivamente em células T e após ativação em células B. Sua atuação na resposta imune está relacionada com a proliferação e co-ativação de células T específicas que atuam na interação T-B, na resposta de células B dependente de T. Dessa forma deficiências na via de CD27 podem resultar em defeitos nos mecanismos de comutação isotípica e de diferenciação de células B do centro germinativo, assim como de células de memória. Essas características podem ser observadas em modelos murinos de deficiências de CD27/CD70. Nossos achados permitem que uma nova janela se abra para o estudo da ICV. A avaliação dos distúrbios associados a defeitos de sinalização de CD27/CD70 em humanos pode se tornar uma nova ferramenta para a compreensão de uma deficiência tão pouco esclarecida. Tal enfoque pode eventualmente contribuir para o desenvolvimento de novos tratamentos, atuando diretamente na molécula em questão. Além disso, sugerimos também a utilização da fenotipagem das moléculas CD27 em linfócitos B e T, além da IgM e IgD de membrana para a caracterização da ICV, mais a análise da molécula CD154 para exclusão de outras imunodeficiências / Common variable immunodeficiency (CVID) is a primary immunodeficiency disorder of heterogeneous origin, defined by a decrease of at least two immunoglobulin isotypes, lack of antibody response to immunization and the exclusion of other causes of primary hypogammaglobulinemia. The absence of adequate levels of antibodies in patients with CVID results in recurrent bacterial infections, most frequently in the respiratory and digestive tract, which can lead to sinusal and lung sequels. Over the past six years the discovery of genes related to the phenotype of CVID began, such as the genes of TACI, BAFF-R, CD19 and ICOS. Among the immunological changes, there is impairment of memory B cells (CD19+/IgM-IgD-CD27+), leading to disturbance of isotypic switching and reduced secretion of immunogobulins. Currently this feature has been used to classify CVID. During the present study we observed that patients with CVID present changes in the expression of CD27 not only in B cells, but also in T cells, and reduced lymphoproliferative response to PHA. CD27 molecule is a member of the TNF family present constitutively in T cells, and after activation in B cells. Its importance in the immune response is related to the proliferation and co-activation of specific T cells that act in T-B interaction, in the T cell dependent B cells response. Thus disturbances in the CD27 pathway can result in defects in isotypic switch and differentiation of germinal center B cells, as well as memory cells. These characteristics can be observed in murine models of CD27/CD70 deficiency. Our findings allow a new approach for the study of CVID. The evaluation of defects in CD27/CD70 signaling in humans might become a new tool for understanding an incompletely understood disease. Such an approach may contribute to the development of new treatments, acting directly on the molecule in question. In addition, we also suggest the use of phenotyping of CD27 molecules on B and T lymphocytes, in addition to membrane IgM and IgD to characterize CVID, associated to the analysis of the molecule CD154 to exclude other immunodeficiencies

Este trabalho objetivou avaliar os efeitos imunomoduladores das células-tronco imaturas da polpa dentária (CTIPD) sobre a diferenciação, maturação das células dendríticas derivadas de monócitos (mo-DC), sua capacidade para ativar linfócitos T (Lin T), bem como verificar fatores solúveis liberados nos cocultivos celulares. As analises foram feitas por citometria de fluxo. Foi observado que mo-DC tiveram a diminuição de moléculas relacionadas à diferenciação para mo-DC e o aumento de moléculas relacionados ao estado precursor, o que parece ter refletido na maturação para mDC, verificado pela diminuição das moléculas de maturação. As mo-DC tiverem sua função em induzir a proliferação de Lin T reduzida, além, de favorecer o aumento da proporção de Lin T CD4+FoxP3+IL-10+ e Lin T CD4+FoxP3+IFN-<font face=\"Symbol\">g+. A mensuração dos fatores solúveis dos cocultivos mostrou que houve aumento de fatores anti-inflamatórios e redução de fatores pró-inflamatórios. Futura investigações podem suportar o uso das CTIPD em uma abordagem imunomoduladora utilizando DC em aplicações clínicas. / This study aimed to evaluate the immunomodulatory effects of immature stem cells from dental pulp on differentiation, maturation of monocyte-derived dendritic cells (mo-DC), their ability to activate T cells, as well as identify soluble factors released in cellular cocultures. The analyzes were performed by flow cytometry. It was observed a decrease of molecules related to mo-DC differentiation and an increase of molecules related to precursor state, which seems to have reflected to mDC maturation verified by reduction of maturation molecules. The mo-DC have their role in inducing T cells proliferation reduced, in addition, favored increase CD4+FoxP3+IL-10+ and CD4+FoxP3+IFN-<font face=\"Symbol\">g+ T cells population proportion. The measurement of soluble factors from coculture showed an increase of anti-inflammatory factors and a reduction of pro-inflammatory factors. Future research may support the use immature stem cells from dental pulp in an immunomodulatory approach using DC in clinical applications.

Para investigar o papel dos linfócitos T no modelo de Paracoccidioidomicose pulmonar, depletamos in vivo os linfócitos TCD4+ e TCD8+ de camundongos resistentes (A/J) e susceptíveis (B10.A) infectados intratraquealmerite com um milhão de leveduras de isolado virulento do Paracoccidioides brasiliensis. Quando comparados ao grupo não depletado de linfócitos TCD4+, após 4 semanas de infecção, camundongos A/J apresentaram aumento da disseminação de leveduras ao fígado; na 8&#170; semana, contudo, houve redução na carga fúngica pulmonar destes animais. Ao contrário, a depleção de células TCD4+ não alterou a gravidade da doença de animais B10.A em ambos os períodos de infecção. O tratamento com o AcM anti-CD4, em ambos os tempos de infecção, diminuiu as reações de HTT dos animais A/J, mas não alterou a anergia cutânea dos camundongos B10.A. Em adição, ambas as linhagens depletadas tiveram a produção específica de anticorpos diminuída na 4&#170; e 8&#170; semanas. Quanto às citocinas pulmonares, após 4 semanas de infecção, os animais A/J depletados apresentaram redução nos níveis de IL-12 pulmonar e na 8&#170; semana da infecção, esta linhagem apresentou redução nos níveis de IL-10, IL-4, IL-5,IL-2 e GM-CSF pulmonar, e os animais B10.A mostraram aumento nos níveis de IL-12. Por outro lado, verificamos que ambas as linhagens depletadas com o AcM anti-CD8, apresentaram aumento da gravidade da doença após a semanas de infecção, pois camundongos A/J tratados apresentaram aumento da carga fúngica pulmonar, e animais B10.A apresentaram aumento do crescimento fúngico no pulmão e fígado. Animais B10.A depletados de células TCD8+ apresentaram ainda um incremento nas suas reações de HTT específicas. Esses dados sugerem que na linhagem susceptível há a presença de duas subpopulações celulares de TCD8+, uma subpopulação protetora que controla o crescimento fúngico e outra inibidora de reações de HTT. A depleção dos linfócitos TCD8+ não levou a grandes alterações na produção de anticorpos específicos em ambas as linhagens; no entanto, levou a alterações significativas nos níveis das citocinas pulmonares; os animais A/J apresentaram aumento de IL-4, IL-12, IL-3 e GM-CSF, e diminuição de IL-2. Por outro lado, os animais B10.A apresentaram aumento nos níveis de IL-10, IL-12, IL-3 e IFN-&#947;. Estes resultados demonstraram que nos animais B10.A as células TCD4+ têm pouca ou nenhuma participação no controle da infecção. No entanto, nos animais A/J há duas subpopulações, uma protetora (4&#170; semana) e outra exacerbadora (8&#170; semana) dependendo do estágio da doença. Contudo, em ambas as linhagens a subpopulação TCD8+ apresentou-se importante no controle da doença. Além disso, na PCM experimental, tanto as respostas de HTT como a produção de anticorpos específicos, são mecanismos que dependem de células TCD4+ e na linhagem B10.A há uma subpopulação TCD8+ que regula negativamente as reações de HTT. / To investigate the role of T lymphocytes in the pulmonary model of Paracoccidioidomycosis (PCM), resistant and susceptible mice were in vivo depleted of T CD4+ and T CD8+ cells by intraperitoneal injection of specific monoclonal (mAb) antibodies and infected intratracheally with one million yeast cells of a virulent isolate of Paracoccidioides brasiliensis. When compared with the non-depleted group, at week 4 after infection A/J mice presented increased dissemination of yeasts to liver; however, at week 8 A/J-depleted mice showed decreased fungal loads in the lungs. In contrast, depletion of TCD4+ cells of B10.A mice did not alter the severity of disease at any periods of infection assayed. Treatment with anti-CD4 mAb diminished the delayed-type hypersensitivity reactions (DTH) of resistant mice but the cutaneous anergy of B10.A mice was not modified. In addition, CD4-depleted A/Sn and B10.A mice presented decreased titers of P.brasiliensis specific antibodies at both the 4th and 8th week postinfection. Regarding pulmonary cytokines, at week 4 of infection A/J-depleted mice presented diminished levels of IL-12 but at week 8 IL-10, IL-4, IL-S, IL-2 and GM-CSF appeared in lower levels. Only IL-12 was detected in lower levels in the lungs of B10.A-depleted mice at week 8 after infection. Depletion of CD8+ cells led to a more severe disease in both mouse strains. A/J-treated mice presented increased fungal burdens in the lungs whereas in the B10.A strain increased number of yeast cells was detected in the lungs and liver. Importantly, neutralization of CD8+ cells reverted the DTH anergy of susceptible mice. These data suggest the existence of two T CD8+ subpopulations in B10.A mice, a protective that controls fungal growth and another one that suppresses DTH reactions. The production of P.brasiliensis specific antibodies by resistant and susceptible mice depleted of CD8+ T cells was similar to that of mice given control antibody. Neutralization of CD8+ cells, however, induced significant alterations in the concentrations of pulmonary cytokines. In A/J-treated mice, higher levels of IL-4, IL-12, IL-3 and GM-CSF were concomitant with reduced amounts of IL-2. B10.A mice depleted of CD8+ cells presented higher levels of pulmonary IL-10, IL-12, IL-3 and IFN-&#947; than their controls. As a whole, our results demonstrate that CD4+ T cells have no influence on the control of disease severity of B10.A mice. Depending on the period of the infection, A/J mice develop two subpopulations of CD4+ T cells: one protective subset which appeared early in the infection, followed by a subpopulation that lead to disease exacerbation. Moreover, in both mouse strains CD8+ T cells are protective and able to control fungal growth. It was also verified that DTH reactions and antibody production in murine PCM are CD4+ T cells mediated. Finally, only in B10.A mice a regulatory CD8+ T cell subpopulation was characterized by its ability to suppress DTH reactions

Introdução: Os linfócitos T regulatórios CD4+CD25+Foxp3+ (Tregs) desempenham um papel fundamental na manutenção da tolerância aos antígenos próprios e no controle da magnitude da resposta imunológica. Alterações quantitativas ou funcionais foram descritas em diversos distúbios auto-imunes. O pênfigo foliáceo endêmico (PFE) é uma doença bolhosa cutânea de natureza auto-imune, que compartilha características clínicas e imunopatológicas com o pênfigo foliáceo clássico, mas apresenta achados epidemiológicos próprios. Auto-anticorpos circulantes e teciduais da classe IgG dirigidos contra caderinas desmossômicas (desmogleína 1), levam à perda de adesão entre os queratinócitos. Objetivo: O objetivo deste estudo foi avaliar se a perda de tolerância é associada com alterações quantitativas nos linfócitos Tregs CD4+CD25+Foxp3+ na pele de pacientes com PFE. Métodos: Amostras de pele de 22 pacientes e 10 controles saudáveis foram submetidos à análise imunoistoquímica com anti-CD4, anti-CD25 e anti-Foxp3. Fotomicrografias foram obtidas de campos consecutivos ao longo de toda epiderme e derme. A seguir, foi realizada quantificação dos linfócitos Foxp3+, CD4+, CD25+, CD4+Foxp3+ e CD25+Foxp3+ em cada compartimento, considerando-se a respectiva área de cada campo (m2). Valores significantemente estatísticos foram considerados como p<0,05. Resultados: Encontramos um infiltrado epidérmico aumentado de linfócitos imunomarcados CD25+(p=0,003), Foxp3+(p=0,04) e CD25+Foxp3+ (p=0,007), em comparação com os controles. O infiltrado dérmico exibiu uma maior expressão de linfócitos CD4+ (p<0,001) e CD25+ (p=0,008) em amostras de pele de pacientes com PFE, quando comparados aos controles. Conclusões: Nossos achados sugerem que a quebra de tolerância imunológica periférica nos pacientes com PFE não se correlaciona com uma diminuição dos linfócitos T reg CD4+CD25+Foxp3+ na pele afetada. Entretanto, uma maior expressão de linfócitos CD25+Foxp3+ no infiltrado epidérmico poderia representar outra população de linfócitos com atividade regulatória, a ser definida. / Background: CD4+CD25+Foxp3+ regulatory T cells (Tregs) play a crucial role in the maintenance of self tolerance and control of the magnitude of the immune response. Their quantitative or functional impairment has been reported in several autoimmune disorders. Endemic pemphigus foliaceus (EPF) is an autoimmune organ-specific blistering skin disorder that shares many clinical and immunopathological features with classic pemphigus foliaceus, but with unique epidemiological features. Circulating and tissue-bound IgG auto-antibodies react against desmosomal cadherins (desmoglein 1), causing loss of adhesion between keratinocytes. Aims: The purpose of this study was to evaluate whether the loss of tolerance is associated with impairment of CD4+CD25+Foxp3+ Tregs in the skin of EPF patients. Methods: Skin samples from 22 patients and 10 controls were submitted to immunohistochemistry with anti-CD4, CD25 and Foxp3. Photomicrographs were obtained from consecutive fields along epidermis and dermis; quantification of Foxp3+, CD4+, CD25+, CD4+Foxp3+ and CD25+Foxp3+ cells were performed in each compartment, taking into account the respective field area (m2). Significance was set at p<0.05. Results: We found an enhanced epidermal infiltrate of CD25+(p=0.003), Foxp3+(p=0.04) and CD25+Foxp3+(p=0.007) immunostained T cells in EPF patients, when compared to controls. Dermal infiltrate exhibited a higher expression of CD4+ (p<0.001) and CD25 p=0.008) T cells in EPF skin samples than in controls. Conclusions: Our findings suggest that the break of peripheral immunologic tolerance in EPF patients did not correlate with an impairment of CD4+CD25+Foxp3+ Treg cells present in the affected skin. However, higher expression of CD25+Foxp3+ cells in the epidermal infiltrate could be a counterpart of a diverse population of T cells, previously described as exerting a regulatory activity, yet to be defined