Made available in DSpace on 2016-12-23T13:56:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao de Marcus Alexandre Vaillant Beltrame.pdf: 2601197 bytes, checksum: 99d4aecebe83edfdd851f8015a17ae7a (MD5) Previous issue date: 2010-05-24 / Introdução. A prevalência de infecção por Toxoplasma gondii em galinhas caipiras varia nas diferentes regiões e não se conhece a prevalência em galinhas caipiras no Estado do Espírito Santo. Objetivo. Estudar a prevalência da infecção por T. gondii em galinhas caipiras de municípios do E. Santo, tentar o isolamento do parasito nos tecidos de aves positivas e aplicar um questionário entre as pessoas que vivem nas propriedades nas quais as amostras foram tomadas, para verificar o conhecimento sobre o parasita e a doença que ele pode causar. Métodos. Pesquisa de anticorpos anti-T. gondii no soro de 510 galinhas de oito municípios do E. Santo, utilizando testes de hemaglutinação indireta (HAI) e aglutinação modificado (MAT). Em 64 aves soropositivas foi realizado o bioensaio em camundongos a partir de macerados do músculo da coxa, coração e encéfalo. Questionários foram aplicados para avaliar variáveis relacionadas a doença. Resultados. De 510 aves, foram soropositivas 40,4% (IC 95%: 36,1-44,7) no HAI e 38,8% (IC 95%: 34,6-43) no MAT. Das 64 galinhas submetidas ao bioensaio, isolou-se em 48 (75%; IC 95%: 85,6-64,4), com mortalidade ocorrendo entre 10 e 31dias após a infecção, e em duas houve soroconversão. Conclusões. (a) Detectou-se alta prevalência de anticorpos anti-T. gondii em galinhas caipiras no E. Santo, com grande freqüência de isolamento do protozoário; (b) A alta mortalidade dos camundongos utilizados no bioensaio pode estar relacionada com a virulência das cepas isoladas; (c) HAI teve concordância de 82% com o MAT, podendo ser indicado como teste de triagem para pesquisa de anticorpos anti-T. gondii em galinhas; (d) A presença de gatos soltos e em promiscuidade com as aves e demais espécies ocorreu em 73% das propriedades avaliadas; (e) O questionário aplicado revelou desconhecimento dos entrevistados sobre o protozoário, a doença que ele pode causar e seus meios de transmissão / Introduction. The prevalence of Toxoplasma gondii infection in free-range chickens varies in different regions and we do not know the prevalence of this infection in free-range chickens in the state of Espirito Santo. Objective. To study the prevalence of infection by T. gondii in free-range chickens from different municipalities of the E. Santo, to try the isolation of the parasite from tissues of positive chickens and to search the knowledge on the parasite and the disease it produces among people living in the rural properties from which the samples were collected. Methods. Detection of anti-T. gondii in the serum of 510 chickens from rural areas of eight municipalities of E. Santo, using indirect hemagglutination (IHA) and modified agglutination test (MAT). Bioassay was conducted in mice by intra-peritoneal injection of macerated of thigh muscle, brain and heart from 64 positive chickens. Questionnaires were used to assess environmental conditions related to the protozoan in each farm and the knowledge of people on the parasite. Results. Anti-T. gondii antibodies were detected in 40.4% (95% CI: 36.1 to 44.7) by IHA and 38.8% (95% CI: 34.6 to 43) by MAT. Among the 64 chickens submitted to bioassay, the parasite was isolated from 48 (75%, 95% CI: 85.6 to 64.4), with mortality occurring from 10 through 31days after infection, and in two chickens presented seroconversion. Conclusions. (a) A high prevalence of anti-T. gondii antibodies with high frequency of parasite isolation from positive chickens, was observed in free range chickens in E. Santo;(b) The high mortality observed in mice used in the bioassay may be in relationship with the virulence of isolated strains; (c) There was good concordance (82%) between IHA and MAT, therefore IHA may indicated as a screening test for anti-T. gondii antibodies in chickens; (d) presence of cats in promiscuity with birds and other species occurred in 73% of the properties and (e) The questionnaire revealed ignorance of the people living in the visited farms about the protozoan, the disease it produces and its transmission mechanisms

Made available in DSpace on 2016-12-08T16:24:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PGCA14MA154.pdf: 1313169 bytes, checksum: 4095d82961e0759ed84999755c5e444b (MD5) Previous issue date: 2014-11-07 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Ovine toxoplasmosis has important implications by causing reproductive disorders in this species and for being a zoonosis. This study aimed to determine the occurrence of antibodies against Toxoplasma gondii and to detect the agent in the dairy sheep flocks in western of state of Santa Catarina. From March to July 2013, 298 blood samples were collected from dairy sheep on two farms in Chapecó, SC. Samples were processed by IFI (≥1: 64). From the total, 37 (12.4%) were positive for T. gondii with titers of 1:64 (32) and 1: 256 (five). For the animals selection, which were studied looking for the presence of the agent in the milk, 128 blood samples from sheep in lactation period were collected, which were processed by IFI (≥1: 64) of which 42 (32.8%) were positive, with titers 1:64, (26) 1 256 (12), 1: 1024 (three) and 1: 4096 (one). For the detection of parasites in milk, techniques of mouse bioassay were employed (22 milk samples from eight sheep with antibody titers against T. gondii ≥256) and PCR, for the detection of T. gondii in the brains of mice inoculated bioassay and also directly from milk (108 samples from 42 seropositive sheep (≥64) in different lactation periods - 40, 90 and 120 days). SAG2R4 SAG2F4 primers were used. In 42 ewes in lactation period and seropositive for T. gondii it was possible to detect DNA of the parasite in the milk of 30.95% (13/42) of the animals. The isolation was impossible in bioassay, however the agent DNA was detected in mice brains inoculated with milk from eight sheep (a sample of the 45th day of lactation and seven in the collection of 90th day). The parasite DNA was detected directly from the milk in samples of the second collection (90 days of lactation) in five animals. Positive PCR samples were sequenced and the results confirmed ≥97% identity with the membrane antigen P22 gene of T. gondii. The results showed that the occurrence of antibodies against T. gondii in dairy sheep in western of state of Santa Catarina is lower when compared with that observed in steak sheep in the state and that the DNA of T. gondii is present in the milk of sheep, representing a possible source of infection to humans through the consumption of milk "in natura" and / or derivatives, besides the possibility of lactogenic transmission to lambs / A toxoplasmose ovina apresenta implicações sanitárias importantes por causar desordens reprodutivas nesta espécie e por ser uma zoonose. Os objetivos do presente trabalho foram determinar a ocorrência de anticorpos contra Toxoplasma gondii e detectar o agente no leite de rebanhos ovinos leiteiros na região Oeste de Santa Catarina. De março a julho de 2013, foram colhidas 298 amostras de sangue de ovinos leiteiros em duas propriedades em Chapecó, SC. As amostras foram processadas pela RIFI (≥1:64). Do total, 37 (12,4%) foram positivas para T. gondii com títulos de 1:64 (32) e 1:256 (cinco). Para a pesquisa da presença do agente no leite, foram coletadas 128 amostras de sangue das ovelhas em período de lactação, que foram processadas pela RIFI (≥1:64) das quais 42 (32,8%) foram positivas, com títulos 1:64 (26), 1:256 (12), 1:1024 (três) e 1:4096 (um). Para a pesquisa do parasito no leite foram empregadas as técnicas do bioensaio em camundongos (22 amostras de leite de oito ovelhas com títulos de anticorpos contra T. gondii ≥256) e da PCR, para a 12 13 pesquisa de T. gondii nos cérebros dos camundongos inoculados no bioensaio e também diretamente do leite (108 amostras obtidas de 42 ovelhas soropositivas (≥64) em diferentes períodos de lactação - 40, 90 e 120 dias). Foram utilizados os primers SAG2R4 e SAG2F4. Das 42 ovelhas lactantes e soropositivas para T. gondii foi possível detectar DNA do parasito no leite de 30,95% (13/42) dos animais. No bioensaio não foi possível o isolamento, entretanto DNA do agente foi detectado no cérebro dos camundongos inoculados com leite de oito ovelhas (uma amostra do 45º dia de lactação e sete na coleta do dia 90). Diretamente do leite, DNA do parasito foi detectado em amostras da segunda coleta (90 dias de lactação) em cinco animais. As amostras positivas na PCR foram sequenciadas e os resultados confirmaram identidade ≥97% com o antígeno de membrana gene P22 de T. gondii. Verificou-se que a ocorrência de anticorpos contra T. gondii em ovinos com aptidão leiteira, do Oeste de Santa Catarina é menor quando comparada com a observada em ovinos de corte no Estado e que o DNA de T. gondii está presente no leite de ovelhas, representando uma possível via de transmissão para o ser humano, por meio do consumo do leite in natura e/ou derivados, além da possibilidade da transmissão via lactogênica para cordeiros

CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / FAPEMIG - Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Muitos microorganismos desenvolveram a habilidade de adquirir ferro a partir do seu hospedeiro para seu próprio metabolismo. Toxoplasma gondii, um parasito intracelular obrigatório, produz proteinas de roptrias que são capazes de ligar ao transportador de ferro. Além disso, quelante de ferro foi capaz de controlar o parasitismo em células intestinais de rato. Logo, este trabalho teve como objetivo investigar a relação do efeito da adição ou privação de ferro na multiplicação de T. gondii e resultado da infecção quando o parasito é administrado por via oral e em cultura celular. Camundongos C57BL/6 foram infectados oralmente com T. gondii e tratados com um quelante de ferro, deferoxamina ou suplementados com ferro e o parasitismo, parâmetros imunológicos e histológicos foram analisados. Observou-se que a infecção aumentou a deposição de ferro no intestino delgado, pulmão e fígado e também sistematicamente. O tratamento com deferoxamina foi capaz de diminuir os níveis de ferro nas amostras de soro. O tratamento com deferoxamina diminuiu a carga parasitária no intestino delgado e alterações inflamatórias no órgão, preservando seu comprimento e também diminuiu o parasitismo pulmonar. Além disso, a suplementação com ferro aumentou a carga parasitária no intestino delgado, pulmão e fígado, associado com alterações inflamatórias nesses órgãos, bem como houve aumento da proliferação parasitária em cultivo celular com células Caco-2. A infecção oral modulou o perfil de expressão de marcadores de absorção de ferro, aumentando os níveis de IL-6 sistêmicos. Juntos, nossos resultados sugerem que a quelação de ferro comumente usada para tratar a sobrecarga de ferro pode ser um medicamento promissor para controlar a proliferação de T. gondii e consequentemente a inflamação causada por infecção e que o ferro é um nutriente essencial para o metabolismo de T. gondii. / Many microorganisms have developed the ability to acquire iron from their host to their own metabolism. Toxoplasma gondii, an obligate intracellular parasite, produces rhoptry proteins that are capable of binding to the iron transporter. In addition, iron chelator was able to control parasitism in rat intestinal cells. Therefore, the objective of this work was to investigate the relationship of the effect of iron addition or deprivation on the multiplication of T. gondii and the result of infection when the parasite is administered orally and in cell culture. C57BL/6 mice were orally infected with T. gondii and treated with an iron chelator, deferoxamine or iron supplemented and parasitism, immunological and histological parameters were analyzed. It was observed that the infection increased the deposition of iron in the small intestine, lung and liver and also systematically. Treatment with deferoxamine was able to decrease iron levels in the serum samples. Treatment with deferoxamine reduced parasite burden in the small intestine and inflammatory changes in the organ, preserving its length and also decreased pulmonary parasitism. In addition, iron supplementation increased parasite burden in the small intestine, lung and liver, associated with inflammatory changes in these organs, as well as increased parasite proliferation in cell culture with Caco-2 cells. Oral infection modulated the expression profile of iron absorption markers, increasing systemic IL-6 levels. Together, our results suggest that iron chelation commonly used to treat iron overload may be a promising drug to control T. gondii proliferation and consequently inflammation caused by infection and that iron is an essential nutrient for the metabolism of T. gondii. / Tese (Doutorado)

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2018-08-09T11:48:32Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Laura Vilela Souza - 2018.pdf: 1478023 bytes, checksum: 1f2124fc71f19fdff9f4fdd49de82f46 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2018-08-09T12:21:08Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Laura Vilela Souza - 2018.pdf: 1478023 bytes, checksum: 1f2124fc71f19fdff9f4fdd49de82f46 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-09T12:21:08Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Laura Vilela Souza - 2018.pdf: 1478023 bytes, checksum: 1f2124fc71f19fdff9f4fdd49de82f46 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2018-06-26 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG / Toxoplasmosis, a result of the obligate intracellular protozoan Toxoplasma gondii, is a cosmopolitan disease that affects the character of the world population. Typically T. gondii infection is asymptomatic in immunocompetent examples, however, several manifestations could be more severe, immunocompromised and infected congenitally, leading to fatal consequences, the major public health problem. The treatment of toxoplasmosis is the treatment of toxoplasmosis, the effects of toxoplasmosis, such as stuff based on the density lipids, making essential profile for security. This study evaluates in vitro the anti-toxoplasmic potential of the ethanolic extract, ethyl acetate and aquatic fractions, essential oil and bisabolol isolated from Siparuna guianensis. Cell viability tests using NIH/3T3 murine fibroblasts were performed by the MTT colorimetric method. Anti-toxoplasmatics were evaluated using the β-galactosidase assay in two experimental conditions using T. gondii strain RH-2F1. Samples were tested in different variables of 15 to 500 μg/mL, while the testosterone assayed in the test ranged from 15 to 500 μg/mL. It was verified that ethanolic extract and a fraction of euphyl acetate of cytometic activity against the fibroblasts in the highest concentrations analyzed (250 and 500 μg/mL) and the essential oil in the concentration of 500 μg/mL. For the other calories, some have a significant cytotoxic effect, suggesting that the plant is well tolerated by the body. In the intracellular proliferation of the parasite when the treatment was carried out after the cellular activation, the control of the progesterone control and the parasitism was observed, being that only a fraction of standard of acetate demonstrated capacity of relevant toxoplasmosis, presenting IC 50 value of 77,21 μg/ml. In contrast, the aqueous fraction and theessential effect, the thermal effect against the parasite, are not a therapeutic alternative. It was verified that the inhibitory effect of the parasitism was more significant in the pre-treatment of the parasites before the cellular infection, evidencing a direct effect on the parasite. According to protocol specifications, in order to allow the use of data, according to their implications, in vivo parasitic infection models and identification of the major plant components are required. / A toxoplasmose, causada pelo protozoário intracelular obrigatório Toxoplasma gondii, é uma doença cosmopolita que atinge um terço da população mundial. Tipicamente a infecção pelo T. gondii é assintomática em indivíduos imunocompetentes, no entanto, várias manifestações clínicas podem acometer, sobretudo indivíduos imunocomprometidos e infectados congenitamente, levando a consequências fatais, o que torna essa doença um importante problema de saúde pública. Embora existam medicamentos para o tratamento da toxoplasmose, estes apresentam eficácia limitada e graves efeitos colaterais, tornando essencial a busca de novas terapias, com melhor perfil de segurança. Neste contexto, o objetivo do estudo foi avaliar in vitro o potencial anti-toxoplásmico do extrato etanólico, frações acetato de etila e aquosa, óleo essencial e do α-bisabolol isolado de Siparuna guianensis. Foi realizado teste de viabilidade celular utilizando fibroblastos murinos NIH/3T3, pelo método colorimétrico de MTT. A atividade anti-toxoplásmica foi avaliada por meio do ensaio da β-galactosidase em duas condições experimentais diferentes, utilizando parasitos da cepa RH-2F1 de T. gondii. As amostras foram testadas em diferentes concentrações variando de 15 a 500 μg/mL, sendo utilizado como controle negativo meio RPMI e como controle positivo a enrofloxacina. Verificou-se que o extrato etanólico e a fração acetato de etila apresentaram atividade citotóxica frente aos fibroblastos nas maiores concentrações analisadas (250 e 500 μg/mL) e o óleo essencial na concentração de 500 μg/mL. Para as demais concentrações, nenhuma apresentou efeito citotóxico significativo, sugerindo que a planta seja bem tolerada pelo organismo. Na avaliação da proliferação intracelular do parasito quando o tratamento foi realizado após a infecção celular, observou-se que os compostos da S. guianensis controlaram parcialmente o parasitismo, sendo que apenas a fração acetato de etila demonstrou capacidade toxoplasmicida relevante, apresentando valor de IC 50 de 77,21 μg/mL. Em contraste, a fração aquosa e o óleo essencial, apresentaram nenhum efeito tóxico contra o parasito, indicando que estes não são uma boa alternativa terapêutica. Verificou-se que o efeito inibitório do parasitismo foi mais significativo no pré- tratamento dos parasitos antes da infecção celular, evidenciando um efeito direto sobre o parasito. Em conclusão, os resultados indicam utilização favorável da S. guianensis, especialmente da fração acetato de etila como terapia alternativa da toxoplasmose, devido a sua baixa citotoxidade, sua ação direta contra o parasito, além do seu efeito concentração-dependente, porém estudos futuros utilizando modelos de infecção parasitária in vivo e identificação dos princípios ativos da planta são necessários.

A toxoplasmose é uma zoonose de distribuição mundial, altamente prevalente na população humana e animal. A doença é geralmente benigna e autolimitada, mas pode ocasionar déficits visuais graves em cerca de 2 a 3% dos indivíduos acometidos, e ainda, assumir formas graves e letais em pacientes imunossuprimidos e em fetos de gestantes com infecção aguda. As principais formas de transmissão da doença são o consumo de água e alimentos crus contaminados com oocistos e a ingestão de carne crua ou mal cozida contendo cistos teciduais do Toxoplasma gondii. Na literatura há relatos de vários surtos epidêmicos de toxoplasmose humana, porém a análise descritiva destes surtos é pontual e restrita, com informações isoladas em relação período de incubação e gravidade dos sintomas que poderiam estar relacionados à forma infectante do agente. No presente trabalho analisamos a influência da forma infectante do T. gondii no quadro da doença aguda humana, através de revisão sistemática das principais bases de dados bibliográficos na área de Saúde Pública (Cochrane, Embase, Food Sciences & Tech Abstracts, Lilacs, PubMed, Scopus e Web of Science), além de publicações em boletins epidemiológicos (Boletim Epidemiológico Paulista, Boletim Eletrônico Epidemiológico SVS) e anais de congressos nacionais e internacionais de áreas correlatas. As pesquisas nas bases de dados bibliográficos foram realizadas utilizando idiomas em português e inglês para os termos: surtos de toxoplasmose humana (human toxoplasmosis outbreak). Os critérios de inclusão dos estudos levaram em consideração artigos e resumos que relatassem surtos epidêmicos de toxoplasmose humana com descrição da forma infectante do agente e quadro clínico da doença. Na busca eletrônica inicial, foram obtidos 431 artigos referentes a surtos mundiais e nacionais de toxoplasmose humana, provenientes de diferentes formas de transmissão da doença, porém foram elegíveis para o trabalho somente 33 artigos, incluindo um surto ocorrido recentemente na região de Araraquara, Estado de São Paulo, cuja investigação epidemiológica foi conduzida por nossa equipe. A análise da revisão sistemática sugere que o número de casos confirmados nos surtos é maior quando a transmissão ocorre por oocistos, sendo o solo e a água associados a esta forma de transmissão. Quanto aos achados clínicos, a infecção por cistos parece induzir um período de incubação menor do que o observado para oocistos. Não houve relação da forma infectante com o sexo predominante e faixa etária nas populações amostrais. Os surtos foram descritos mais frequentemente nas Américas que em outros continentes. Estes dados sugerem que a forma infectante do T.gondii interfere no quadro da toxoplasmose aguda. / Toxoplasmosis is a zoonosis of worldwide distribution, highly prevalent in the human and animal population. The disease is usually benign and self-limiting but can cause severe visual deficits in about 2 to 3% of affected individuals, and also take serious and lethal in immunosuppressed patients and in fetuses of pregnant women with acute infection. The most important modes of transmission are consumption of water and uncooked food contaminated with oocysts and the ingestion of raw or undercooked meat containing tissue cysts of Toxoplasma gondii. In literature there are reports of several human toxoplasmosis outbreaks, but the descriptive analysis of these outbreaks is punctual and restricted, with isolated information regarding the incubation period and severity of symptoms that could be related to the infective form of the agent. In this study we analyze the influence of infective form of T. gondii in the context of acute human disease, through a systematic review of the major bibliographic databases in the area of Public Health (Cochrane, Embase, Food Sciences & Tech Abstracts, Lilacs, PubMed, Scopus e Web of Science), as well as publications in epidemiological bulletins (Boletim Epidemiológico Paulista, Boletim Eletrônico Epidemiológico SVS) and annals of national and international conferences in related areas. This research on bibliographic databases was performed using English and Portuguese languages for the terms: human toxoplasmosis outbreak (surtos de toxoplasmose humana). The inclusion criteria of the studies took into consideration articles and abstracts that reported outbreaks of human toxoplasmosis with description of the infective form of the agent and the clinical disease. In the initial electronic search, 431 articles were obtained regarding global and national outbreaks of human toxoplasmosis from different main forms of disease transmission, but were eligible to work only 33 articles, including a recent outbreak in the region of Araraquara State of São Paulo, which epidemiological investigation was conducted by our team. The analysis of systematic review suggests that the number of confirmed cases in outbreaks is greater when the transmission occurs by oocysts, and the soil and water are associated with this form of transmission. Regarding clinical findings, cysts infection seems to induce an incubation period less than that observed for oocysts. No relationship between the infective form with the predominant sex and age group in the sample populations. Outbreaks were reported more frequently in the Americas than in other continents. These data suggest that the infective form of T. gondii interferes in the context of acute toxoplasmosis.

Toxoplasma gondii é um protozoário coccídio intracelular obrigatório conhecido por sua habilidade em parasitar uma ampla gama de espécies hospedeiras. A região apical do parasito é rica em organelas que, em função dos produtos liberados, estão envolvidas no processo de adesão e invasão da célula hospedeira. As proteínas liberadas por micronemas (MICs), solúveis e transmembrana, possuem domínios adesivos essenciais para a virulência do parasita. Algumas dessas proteínas são encontradas associadas entre si na superfície do taquizoíta, formando complexos como TgMIC1/MIC4/MIC6 e TgMIC3/MIC8. Em estudos anteriores demonstramos a que o subcomplexo TgMIC1/MIC4 (Fração LAC+) liga-se à lactose e estimula macrófagos a secretar IL-12. Verificamos, utilizando células HEK293 transfectadas, que um dos principais mecanismos responsáveis pela produção de IL-12 decorria do reconhecimento de N-glicanos do ectodomínio de TLR2 pelo domínio de reconhecimento de carboidrato de TgMIC1. O objetivo do presente estudo foi o de investigar a capacidade de TgMIC1 e TgMIC4 de ativar macrófagos murinos e qual o papel desempenhado por TLR2 e/ou TLR4 no desencadeamento dessa ativação. Mostramos que macrófagos derivados de medula óssea de camundongos C57Bl/6, estimulados com TgMIC1 e TgMIC4, utilizadas isoladamente ou em combinação, secretam altos níveis de citocinas pró-inflamatórias, como TNF-?, IL-6, IL-12 e IL-1?, produzem altos níveis de óxido nítrico, e têm aumentadas suas capacidades migratória e fagocítica. Os ensaios que utilizaram macrófagos de camundongos C57Bl/6 nocauteados revelaram que a ausência de expressão de TLR2 ou de TLR4 prejudicou os efeitos ativadores exercidos por TgMIC1 e TgMIC4. Macrófagos TLR2-/- tiveram as manifestações de ativação celular significantemente reduzidas em relação aos macrófagos selvagens. Por outro lado, esses efeitos foram mais afetados pela ausência de TLR4, uma vez que as respostas obtidas frente ao estímulo com TgMIC1 ou TgMIC4 eram similares às verificadas em células não estimuladas (controle negativo). Concluímos que TgMIC1 e TgMIC4 interagem com os receptores do tipo toll 2 e 4 expressos por macrófagos, levando à ativação celular manifesta por alta produção de citocinas e outros mediadores inflamatórios, e aumento das capacidades migratória e fagocítica. A interação com TLR4 é preponderante em relação à estabelecida com TLR2 no desencadeamento de ativação celular / Toxoplasma gondii is an obligate intracellular coccidian protozoan known for its ability to parasitize a wide range of host species. The parasite\'s apical region is rich in organelles that, because of the products it releases, are involved in the processes of adhesion and invasion of the host cell. The soluble and transmembrane proteins released by the micronemes (MICs), have adhesive domains that are essential for the parasite virulence. Some of these proteins can be found associated with each other on the taquizoite surface, as it is the case of TgMIC1/MIC4/MIC6 or TgMIC3/TgMIC8 complexes. Our group has demonstrated in previous studies that the TgMIC1/TgMIC4 subcomplex (LAC+ fraction) binds to lactose and stimulates macrophages to release IL-12. Using HEK293 transfected cells, we showed that one of the main mechanisms leading to IL-12 release by macrophages, was the recognition of N-glycans of the TLR2 ectodomain by the carbohydrate recognition domain of TgMIC1. Thus, the objective of this study was to address whether TgMIC1 and TgMIC4 activate murine macrophages and what is the role of TLR2 and TLR4 in macrophage activation. Our results show that the stimulation of C57BL/6 mice bone marrow derived macrophages with TgMIC1 and TgMIC4, alone or in combination, induce the release of high levels of proinflammatory cytokines such as TNF-?, IL-6, IL-12 and IL-1?, and also nitric oxide; and increases phagocytic activity and cell migration activity. The assays using knockout C57Bl/6 macrophages showed that the absence of TLR2 or TLR4 expression impaired the activating effects of TgMIC1 e TgMIC4. TLR2-/- macrophages presented significantly reduced cell activation manifestations compared to WT macrophages. On the other hand, these effects were more affected in the absence of TLR4, once the responses obtained with TgMIC1 or TgMIC4 stimulation were similar to those observed in non stimulated cells (negative control). We conclude that TgMIC1 and TgMIC4 interact with the receptors Toll like 2 and 4 expressed in macrophages, leading to cell activation, resulting in high cytokine and inflammatory mediators production, and increased migratory and phagocytic capacity. The interaction with TLR4 is predominant over that established with TLR2 in the triggering of cell activation

Mais de 2 bilhões de pessoas em todo o mundo encontram-se infectadas com Toxoplasma gondii. Na região endêmica de Erechim, RS, cerca de 90% da população é soropositiva e cerca de 18% destes indivíduos apresentam lesões oculares com manifestações clínicas. A estrutura genética das populações do T. gondii tem sido bastante investigada, a despeito da infecção ter se espalhado pelo mundo, do grande número de hospedeiros intermediários e da capacidade do parasita de se reproduzir sexualmente. Linhagens de T. gondii com atípica ou nova combinação de alelos têm sido isoladas de animais não domésticos ou em outros continentes, como América do Sul e África, e de pacientes com apresentações clínicas incomuns. Em modelos murinos, as linhagens com o genótipo tipo I são altamente virulentas, em contraste às cepas tipo II e tipo III que são menos virulentas. Este trabalho propõe a caracterização fenotípica da resposta imune do hospedeiro frente a infecção por diferentes cepas de T. gondii, bem como o isolamento e a caracterização genotípica das linhagens de T. gondii que infectam indivíduos de Erechim no Rio Grande do Sul. Para a caracterização fenotípica utilizamos duas cepas de T. gondii já bem estabelecidas, a cepa RH (tipo I) e a ME49 (tipo II), e uma cepa isolada a partir de gatos domésticos do Brasil, chamada TgCatBr71. Sendo assim, através da fenotipagem das células dendríticas de camundongos C57Bl/6 infectados com as cepas citadas, foi possível observar que essas cepas induzem expressão das moléculas de superfície CD40, CD80, CD86 e MHC classe II em DCs CD11c+, porém sem significativa diferença entre as cepas. Com relação as células CD4+ e células CD8+, observamos o aumento das células CD8+ no decorrer da infecção pelas cepas RH e ME49, indicando a importância deste tipo celular na resposta protetora contra T. gondii. Avaliamos também a produção de citocinas IL-12, IFN-g e IL-10 em células esplênicas de camundongos infectados pelas três cepas no decorrer da infecção e detectamos que camundongos infectados pela cepa tipo II (ME49) apresentam síntese maior dessas citocinas do que camundongos infectados pela cepa tipo I (RH) e pela cepa TgCatBr71. Assim, concluímos que esta cepa TgCatBr71 se assemelha bastante a cepa do tipo I (RH), tanto em relação a evolução da doença no camundongos como nos padrões da resposta imune do hospedeiro. E que apesar dessas duas cepas diferirem da cepa tipo II (ME49), resultando em graus diferentes de patologia em camundongos C57Bl/6, todas a três cepas parecem produzir semelhante resposta imune protetora do hospedeiro. / More than 2 billion people are infected with Toxoplasma gondii around the world. In the endemic region of Erechim, RS, Brazil, about 90% of the population is soropositive and about 18% of these individuals have ocular lesions with clinical manifestations. The genetic structure of strains of T. gondii has been investigated, despite the infection has spread throughout the world, the large number of intermediate hosts and the ability to reproduce sexually. Strains of T. gondii with atypical or new combination of alleles have been isolated from wild animals and other continents, such as South America and Africa, and also from patients with unusual clinical presentations. In murine models, the type I genetic lineage are highly virulent, in contrast to strains type II and type III.Our work proposes the phenotypic characterization of the host immune response against the infection by different strains of T. gondii, and the isolation and genetic strains characterization of T. gondii that infect individuals of Erechim in RS, Brazil. In the phenotypic characterization were used two strains of T. gondii already well established, the strain RH (type I) and ME49 (type II), and a strain isolated from domestic cats from Brazil, called TgCatBr71 (type BrI). Thus, by phenotyping dendritic cells of C57BL/ 6 mice infected with the strains mentioned, we observed that these strains upregulated the expression of surface molecules such as CD40, CD80, CD86 and MHC class II in DC CD11c+ although with no significant difference between the strains. With respect to the CD4+ and CD8+ cells, the observed increase in CD8+ T cells during the infection by strains RH and ME49, indicating the importance of this cell type in the protective response against T. gondii. We also evaluated the production of cytokines IL-12, IFN-g and IL-10 from spleen cells and found that mice infected by the strain type II (ME49) have increased synthesis of these cytokines than mice infected by the strain type I (RH) and the strain type BrI (TgCatBr71). Thus, we concluded that type BrI (TgCatBr71) strain is similar to type I (RH) strain, both for the evolution of the disease and also concerning the immunological parameters evaluated. Besides, despite these two strains differ from the strain type II (ME49), resulting in different degrees of pathology in mice C57BL / 6, all three strains seem to produce similar protective immune response of the host.

Dans le phylum des Apicomplexa le parasite Toxoplasma gondii est adapté à l'infection de tous les animaux à sang chaud y compris l'homme. L'infection se produit après la naissance par l'ingestion de kystes i) présents dans les muscles des animaux infectés, ou ii) des formes résistantes de l'environnement – les oocystes contaminants l'eau, les fruits et légumes, les coquillages. La maladie est généralement bénigne, mais l'infection peut avoir des conséquences graves pour le développement du fœtus dans le cas de l'infection maternelle pendant la grossesse et chez les individus immunodéprimés.Hormis les muscles et organes de moutons et de volaille, le parasite T. gondii est principalement isolé de la viande de porc. Dans les systèmes intensifs avec différents niveaux de confinement, l'intensité de l'infection par T. gondii est toujours considérablement plus basse que dans les élevages en plein air ou biologique pour toute l'Europe. L’absence de lutte contre les rongeurs et la présence de chats dans les exploitations intensives est les principales sources de l'infection par T. gondii chez le porc. Lorsque la paille est utilisée comme litière, elle peut contenir des oocystes ou carcasses de rongeurs, et si les silos ou les distributeurs d’alimentation sont ouverts, l'alimentation du porc peut être contaminée. Contrairement à l'agriculture intensive, dans les exploitations en plein air ou ayant le statut de « porc biologique » les animaux sont exposés à une contamination environnementale par T. gondii (pâture, nourriture et eau). Jusqu'à présent, la surveillance systématique des porcs vis à vis de l'infection par T. gondii n'a été établie dans aucun pays et il n’existe pas de contrôle à l'abattoir ou à la ferme (même si une visite sanitaire a été instaurée en 2015 en France). Aussi, les sources d'infection dans les élevages restent méconnues et le rôle de la viande de porc dans la contamination humaine est à définir.... / The parasite from the phylum Apicomplexa, Toxoplasma gondii is adapted for infection of all warm-blooded animals including humans. Postnatal infection occurs through ingestion of i) tissue cysts present in muscles of infected animals, or ii) environmentally resistant forms - oocysts via contaminated water, fruits and vegetables. Disease is generally benign, but infection may have serious consequences for the developing foetus in the case of maternal infection in pregnancy and in immunosuppressed individuals. Along with sheep and poultry, T. gondii parasites are mostly isolated from pig meat. In intensive systems with various levels of confinement, intensity of T. gondii infection is still considerably lower than in outdoor or organic farms throughout Europe. Poor rodent control and presence of cats on intensive farms are major sources of T. gondii infection for pig. When straw is used for bedding, it can contain oocysts or even rodent carcasses, and if the food silos or distributers are opened, pig nutrition can be contaminated. In contrast to intensive farming, in outdoor and organic farms, pigs are exposed to environmental T. gondii contamination through soil, food, and water sources. So far, routine surveillance of pigs for T. gondii infection has not been established anywhere in the World, neither in the slaughterhouse nor on the farm-levels. Thus the sources of pig infection on the farms are still unknown. Moreover, it is unknown how big the role of the meat from T. gondii infected pigs is in human nutrition...

Toxoplasma gondii, protozoaire ubiquitaire chez les mammifères et les oiseaux, est l’agent étiologique de la toxoplasmose, une maladie posant un réel problème de santé publique dans le monde avec environ 200 000 nouveaux cas de toxoplasmose congénitale chaque année. Il a été montré que la sévérité clinique de la toxoplasmose variait en fonction des régions géographiques, avec en particulier l’Amérique du Sud qui paie le plus lourd tribu de cette maladie. Malheureusement, les mécanismes de ces disparités géographiques sont encore peu compris et l’origine géographique ainsi que l'histoire évolutive du pathogène sont encore incertaines. Une collection mondiale de 168 isolats de T. gondii recueillis dans 13 populations de 5 continents a été séquencée pour cinq fragments de gènes (140 single nucleotide polymorphisms à partir de 3153 bp par isolat). La phylogénie basée sur les méthodes de Maximum de vraisemblance avec une estimation de l’âge du plus récent ancêtre commun (TMRCA) et des analyses géostatistiques ont été réalisées afin d’inférer l’origine hypothétique de T. gondii. Nous montrons que les souches actuelles de ce parasite ont vraisemblablement évolué à partir d’un ancêtre Sud-Américain il y a environ 1,5 million d’années et avons reconstruit la propagation mondiale du pathogène qui a suivi. Cette émergence est beaucoup plus récente que l’apparition de la forme ancestrale de T. gondii il y a environ 11 Ma et est postérieure à l’arrivée des félidés dans cette partie du monde. Nous proposons que la lignée ancestrale de T. gondii ait été introduite en Amérique du Sud avec les félidés et que l’évolution de l’infectivité orale des kystes tissulaires à travers le carnivorisme ainsi que la diversification des félidés dans cette région du monde a permis l'apparition d'une nouvelle souche ayant une capacité de transmission beaucoup plus efficace que la lignée ancestrale, ce qui lui a permis de la supplanter et d’avoir une distribution pandémique. / Toxoplasma gondii, a protozoan found ubiquitously in mammals and birds, is the etiologic agent of toxoplasmosis, a disease causing substantial Public Health burden worldwide, including about 200,000 new cases of congenital toxoplasmosis each year. Clinical severity has been shown to vary across geographical regions with South America exhibiting the highest burden. Unfortunately, the drivers of these heterogeneities are still poorly understood, and the geographical origin and historical spread of the pathogen worldwide are currently uncertain. A worldwide sample of 168 T. gondii isolates gathered in 13 populations was sequenced for five fragments of genes (140 single nucleotide polymorphisms from 3,153 bp per isolate). Phylogeny based on Maximum likelihood methods with estimation of the time to the most recent common ancestor (TMRCA) and geostatistical analyses were performed for inferring the putative origin of T. gondii. We show that extant strains of the pathogen likely evolved from a South American ancestor, around 1.5 million years ago, and reconstruct the subsequent spread of the pathogen worldwide. This emergence is much more recent than the appearance of ancestral T. gondii, believed to have taken place about 11 My ago, and follows the arrival of felids in this part of the world. We posit that an ancestral lineage of T. gondii likely arrived in South America with felids and that the evolution of oral infectivity through carnivorism and the radiation of felids in this region enabled a new strain to outcompete the ancestral lineage and undergo a pandemic radiation.

En France, quelques cas de toxoplasmose sévère ont été liés à la consommation de viande de cheval qui avait été importée du continent américain où les souches atypiques de Toxoplasma gondii sont plus fréquentes qu’en Europe. De nombreuses études de séroprévalence existent dans la littérature mais l’estimation du risque d’infection par T. gondii après consommation de viande de cheval est impossible à cause de l’absence de validation des tests sérologiques et la corrélation inconnue entre la détection des anticorps anti T. gondii et la présence de kystes dans les tissus. Nous avons utilisé la technique de capture magnétique-réaction de polymérisation en chaine (CM-PCR) pour détecter l’ADN de T. gondii dans 231 échantillons de viande de cheval achetés dans des supermarchés en France et évalué la performance et le niveau d’agrément du test d’agglutination modifié (MAT) et de la méthode immuno-enzymatique ELISA dans les jus de viande. Nous avons également utilisé 196 sérums de chevaux provenant de l'institut français du cheval et de l'équitation à Chamberet, en France, pour évaluer la précision des tests sérologiques ELISA, MAT et le test d’immunofluorescence (IFAT). Les tests sérologiques manquaient de sensibilité, de spécificité, d’agrément entre eux et il n’y avait pas de corrélation avec la présence d’ADN de T. gondii dans la viande de cheval, ce qui suscite des doutes sur la fiabilité des données de séroprévalence de T. gondii chez les chevaux dans la littérature. L’ADN de T. gondii a été détecté dans 43% des échantillons de viande de cheval mais l’absence d’isolement de souche chez la souris suggère une faible répartition des kystes dans les muscles squelettiques et un faible risque d’infection par T. gondii avec la consommation de viande de cheval. Cependant, pour éviter tout risque de toxoplasmose, il est recommandé de bien cuire la viande. / In France, some cases of severe toxoplasmosis have been linked to the consumption of horse meat that had been imported from the American continent where atypical strains of Toxoplasma gondii are more common than in Europe. Many seroprevalence studies exist in the literature but the risk assessment of T. gondii infection after horse meat consumption is impossible because of the absence of validation of serological tests and the unknown correlation between detection of antibodies against T. gondii and presence of tissue cysts. We performed magnetic capture-polymerase chain reaction (MC-PCR) to detect T. gondii DNA in 231 horse meat samples purchased in supermarkets in France and evaluated the performance and level of agreement of the modified agglutination test (MAT) and Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) in the meat juices. We also tested 196 horse sera from - institut français du cheval et de l'équitation, Chamberet, France - to assess the accuracy of ELISA, MAT and immunofluorescence antibody test (IFAT). The serological tests lacked sensitivity, specificity, agreement between them, and there was no correlation with the presence of T. gondii DNA in horse meat, raising concerns about the reliability of T. gondii seroprevalence data in horses from the literature. T. gondii DNA was detected in 43% of horse meat samples but the absence of strain isolation in mice from more than 100 horse meat samples suggest a low distribution of cysts in skeletal muscles and a low risk of T. gondii infection associated with horse meat consumption. However, to avoid any risk of toxoplasmosis, a thorough cooking of horse meat is recommended.