nÃo hà / Apesar de esforÃos contÃnuos que vem sendo aplicados na prevenÃÃo e no controle do cÃncer do colo do Ãtero nas Ãltimas dÃcadas, este permanece um importante desafio para a saÃde no nosso paÃs. Isto porque, requer aÃÃes de variados graus de complexidade e de recursos humanos de diversas Ãreas de conhecimento. A AtenÃÃo PrimÃria à SaÃde desempenha importante papel nas vÃrias dimensÃes do cuidado para o cÃncer do colo do Ãtero, pois possui um papel estratÃgico para desenvolver aÃÃes de planejamento, implementaÃÃo e acompanhamento relacionadas à prevenÃÃo, detecÃÃo, tratamento e reabilitaÃÃo das mulheres com cÃncer cervical. Esta pesquisa tem o objetivo principal de avaliar a qualidade da assistÃncia prestada Ãs mulheres para prevenÃÃo e controle do CÃncer de Colo do Ãtero na AtenÃÃo PrimÃria à SaÃde em Sobral-CE. Trata-se de um estudo do tipo avaliativo com abordagem quantiqualitativa sob o enfoque de Donabedian no qual foram avaliados estrutura, processo e resultados em 15 unidades bÃsicas de saÃde na sede do municÃpio. Participaram da pesquisa 15 gerentes (estrutura), 14 mÃdicos e 15 enfermeiras (processo) e 58 usuÃrias (resultado). Os dados quantitativos foram processados no programa Microsoft Office Excel 2007 e os qualitativos foram submetidos à anÃlise de conteÃdo do tipo anÃlise temÃtica proposta por Minayo. Esta pesquisa respeitou os princÃpios bioÃticos descritos na ResoluÃÃo n 466/12 do Conselho Nacional de SaÃde e foi aprovada pelo Comità de Ãtica em pesquisa sob protocolo de nÃmero 245.512. Na investigaÃÃo sobre a estrutura identificamos que a disponibilidade de recursos fÃsicos e materiais à adequado para a maioria das unidades, que a coleta do exame citopatolÃgico Ã, em sua maioria, realizado pelas enfermeiras e as consultas ginecolÃgicas realizadas tanto por mÃdicos quanto por enfermeiros. A anÃlise do processo revelou que as unidades nÃo dispÃem de mecanismos de registro para identificaÃÃo e busca ativa das mulheres com exame em atraso, a captaÃÃo destas à dependente da procura pelo serviÃo de saÃde, as condutas e encaminhamentos dependem diretamente da alteraÃÃo encontrada, existe uma boa interaÃÃo ente os nÃveis de atenÃÃo, porÃm com dÃficits na comunicaÃÃo, falta de momentos de capacitaÃÃo profissional em serviÃo, assim como, fatores facilitadores como o livre acesso e a oferta semanal com dias fixos e restritivos como acomodaÃÃo profissional, falta das mulheres ao exame e demora nos resultados. No terceiro e Ãltimo elemento, o resultado, encontramos como principal motivador para a procura pelo atendimento a necessidade de conhecimento sobre seu estado de saÃde atribuindo ao exame a importÃncia de prevenir doenÃas, referÃncias sobre a facilidade no agendamento e atendimento nas unidades e satisfaÃÃo das usuÃrias em relaÃÃo ao acesso, gratuidade, rapidez e qualidade do serviÃo oferecido. ConcluÃmos que, de forma geral, a estrutura identificada mostrou-se adequada para a maioria das unidades investigadas, o processo de trabalho dos profissionais diretamente envolvidos revelou-se frÃgil frente Ãs atividades desenvolvidas e o resultado expÃs a opiniÃo e a satisfaÃÃo das usuÃrias decorrentes das aÃÃes oferecidas. O contato com todos estes dados permitiu a avaliaÃÃo dos fatores envolvidos na prestaÃÃo do cuidado que poderÃo subsidiar a anÃlise e planejamento das aÃÃes voltadas para a saÃde da mulher e o amadurecimento dos serviÃos do SUS no nosso paÃs. / Despite ongoing efforts that are being applied in the prevention and control of cervical cancer over the past decades, it remains a major challenge for health in our country. This is because actions require varying degrees of complexity and human resources from different areas of knowledge. The primary health care plays an important role in the various dimensions of care for cancer of the cervix, it has a strategic role to develop actions in planning, implementation and related to the prevention, detection, treatment and rehabilitation of women with cervical cancer monitoring. This research has the main objective to assess the quality of care provided to women for prevention and control of Cervical Cancer in Primary Health Care in Sobral-CE. This is an assessment study with quantitative-qualitative approach from the standpoint of Donabedian that assessed the structure, process and outcomes in 15 basic health units in the town. 15 managers participated in the survey (structure), 14 doctors and 15 nurses (case) and 58 users (result). The quantitative data were processed in Microsoft Office Excel 2007 and underwent qualitative content analysis of the type proposed by Minayo thematic analysis. This study followed the bioethical principles outlined in Resolution No. 466/12 of the National Board of Health and was approved by the Research Ethics Committee under protocol number 245 512. Research into the structure identified that the availability of physical and material resources is suitable for most units, the collection of Pap smear testing is mostly performed by nurses and gynecological consultations by doctors and by nurses. The process analysis revealed that the units do not have mechanisms for identification and registration of active search of women with late examination, the capture of these is dependent on demand for health services, pipes and referrals depend directly on changes found, there is a good interaction entity levels of care, but with deficits in communication, lack of time for professional in-service training as well as facilitating factors such as free access and weekly offering with fixed and restrictive days as a professional accommodation, lack of women to take and delay in results. In the third and final element, the result, we found the main motivator for seeking care by the need for knowledge about their health status examination attributing to the importance of preventing disease, results for the ease in scheduling and attendance units and satisfaction of users regarding access, gratuity, speed and quality of service offered. We conclude that, in general, the identified structure was adequate for most units investigated, the process of working professionals directly involved proved fragile in the face of activities carried out and the result exposed the opinion and satisfaction of users resulting from shares offered. Contact with all these data allowed the evaluation of the factors involved in the provision of care that can support the analysis and planning of actions for women's health and the ripening of NHS services in our country.

A infecção por papilomavirus é a principal causa de desenvolvimento de neoplasias intraepiteliais cervicais (NIC) e câncer do colo do útero (CCU). Estudos epidemiológicos têm demonstrado que a persistência do genoma viral encontra-se associado a variantes moleculares específicas de papilomavirus humano (HPV) de alto risco. As moléculas HLA de classe II têm um importante papel na resposta imune. Associações entre HLA e CCU ou infecção por HPV tem sido demonstrado em diferentes populações. O nosso objetivo foi verificar se a variabilidade de HLA-DRB1 e DQB1 estavam associada ao CCU e NIC III em mulheres de Belém, uma população formada pelos 3 principais grupos étnicos humanos e uma área de alto risco para o CCU no Norte do Brasil. Foi investigada a existência de diferenças na distribuição de alelos HLA entre mulheres com CCU e NIC III portadoras de diferentes variantes de HPV-16 e mulheres citologicamente normais. Os genes HLA DQB1 e DRB1 foram tipados pelo método de PCR-SSO em 95 casos e 287 controles de mulheres com citologia normal atendidas em um centro de prevenção do colo do útero na mesma cidade. As variantes de HPV-16 foram tipadas por sequenciamento de um fragmento da região controladora do genoma viral (LCR). O polimorfismo na posição 350 do gene E6 foi tipado baseado em um protocolo de hibridização em pontos, para identificar a alteração na posição 350T→G. A magnitude das associações foi estimada por odds ratio (OR) e os respectivos intervalos de confiança (IC), ajustados para potenciais fatores de confusão. Uma associação positiva foi observada entre CCU e os haplótipos DRB1* 150 l-DQB1*0602, DRB1*04-DQB1*0301 e DRB1*1602-DQB1*0301. Ao contrário, DRB1*01-DQB1*0501 mostrou um efeito protetor. Os alelos DRB1*0804, DQB1*0402 apresentaram efeito protetor contra positividade por HPV. O alelo DQB1*0502 e o grupo DRB1*15 foram positivamente associados. Os nossos resultados mostram que as associações positivas de DRB1*1501 e DRB1*1602 podem ser atribuídas a variantes asiático-americanas quando comparado a variantes européias. O risco conferido a DRB1*1501 foi encontrado associado tanto a variantes E6350G quanto a variantes E6350T, entretanto, o maior efeito foi devido às variantes E6250T. A associação positiva de DRB1*1602 foi significativa somente no grupo de mulheres positivas para E6350G. Estes resultados estão de acordo com a composição étnica da população estudada bem como um maior potencial oncogênico de certas variantes. Nossos dados sugerem que a contribuição dos alelos HLA na susceptibilidade genética ao CCU difere de acordo com a distribuição das variantes de HPV em uma dada região geográfica ou grupo étnico. / Papillomavirus infection is the major cause for the development of cervical intraepithelial neoplasia (CIN) and invasive cervical cancer (ICC) in humano Epidemiological studies have demonstrated that persistence of the viral genome and development of cervical cancer are associated with specific molecular variants of high-risk human Papillomavirus (HPV). Human leukocyte antigen (HLA) molecules play a role in immune response and associations between HLA and IeC or HPV infections have been reported in several populations. We aimed to verify if HLA-DRB1 and DQB1 variability is related to ICC and CIN III in women from Belem, a population formed by the three main human ethnic groups and a high-risk area for this disease in Northem Brazil. We also investigated if there are differences in the HLA class II alleles distribution between women with ICC and CIN III that harbor different HPV-16 variants and women without cancer. HLA DRB1 and DQB1 were typed by PCR-SSO based methods in 95 ICC cases and 287 controls consisting of normal cytology from women attending cervical cancer screening programs in the same city. HPV-16 variants were typed by sequencing a PCR-amplified fragment of long control region (LCR) of the viral genome. The E6350 polymorphism was typed on the basis of a dot blot protocol targeting a specific nucleotide alteration in the position 350T→G of the E6 gene. The magnitude of associations was estimated by odds ratio (OR) and the respective 95% confidence interval (CI), adjusted for potential confounder factors. A positive association was found between ICC cases and DRB1*150 l-DQB1*0602, DRB1*04-DQB1*0301 and DRB1*1602-DQB1*0301 haplotypes. Conversely, DRB1*01-DQB1*05 showed a protective effect. DRB1*0804, DQB1*0402 showed negative association against HPV infection. DQB1*0502 and DRB1*15 were positively associated with HPV infection. Our study showed that positive association of DRB1*1501 and DRB1*1602 alleles may be attributed to AsianAmerican then European variants. Furthermore, the DRB1*1501 was found associated with both women carrying E6350G or E350T, however, a higher effect was observed for E6350T variants carriers. The positive association of DRB1*1602 was significant for women harboring E6350G then E6350T variants. These data are in agreement with ethnical component of the studied population as well as a higher oncogenic potential of certain HPV variants. Our results also suggest that the contribution of HLA class II alieles to the genetic susceptibility to ICC differs depending on the HPV-16 variants distribution in a given geographic and ethnic group.

Orientador: Aureo Tatsumi Yamada / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-08T07:35:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Lippe_ElianaMaraOliveira_M.pdf: 15998840 bytes, checksum: c90882b20fd79172ca6324e555698016 (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: o sucesso da implantação e do desenvolvimento embrionário no útero de humanos e roedores decorre de interações íntimas entre as células de origem materna e fetal, com a intermediação de citocinas e mediadores químicos em fino balanço estabelecendo um diálogo entre as diferentes populações celulares da interface materno-fetal. Este diálogo envolve do lado fetal as células trofoblásticas e do lado materno o estroma decidualizado, vasos sanguíneos e células leucocitárias do endométrio, numa complexa rede de sinalizações cujos mecanismos são apenas parcialmente conhecidos. Desequilíbrios neste balanço de sinalizações podem resultar na interrupção da gravidez sendo particularmente intrigante a participação das células natural killer uterinas (uNK) que constituem uma população linfocitária que estão presentes em grande quantidade no ambiente uterino exclusivamente durante a gestação. O presente trabalho teve como objetivo avaliar a expressão e participação das isoformas das enzimas óxido nítrico sintases (NOS) como potencial indutor do desequilíbrio da homeostasia do microambiente uterino na interface materno-fetal envolvendo a produção do óxido nítrico (NO). Foram utilizados camundongos no 8° e 10° dia de gestação (dg) normal e grupos de animais cujos embriões foram lesionados mecanicamente por intervenção cirúrgica ou inoculados com lipopolissacarídios (LPS). Amostras uterinas de sítios embrionários foram coletadas nos períodos de 1, 2 e 6 horas pós-lesão mecânica, ou, 6 horas após inoculação com LPS e processados de acordo com as técnicas rotineiras para embebição em parafina, assim como, processados para obtenção de homogeneizados teciduais da região mesometrial destes sítios embrionários. Cortes de parafina foram submetidos à reação citoquímica com a lectina Dolichos biflorus (DBA) e às reações imunocitoquímicas para as isoformas iNOS, eNOS e nNOS e, para IFNa. Foram realizadas SDS-PAGE dos homogeneizados teciduais e Western-blot com os anticorpos anti-iNOS, anti-eNOS e anti-nNOS. A região mesometrial dos sítios embrionários lesionados mecanicamente apresentou hiperemia após 1 hora de lesão que evoluiu para um quadro de hemorragia nos períodos posteriores. No grupo submetido ao tratamento com LPS foi observado um quadro de hiperemia no período de 6 horas. Pela citoquímica com a lectina DBA constataram-se alterações na morfologia das células uNK destes sítios, sendo notória a perda de reatividade no conteúdo dos grânulos lisosomo-secretores. As avaliações imunocitoquímica para iNOS indicaram que as células uNK, as células deciduais e as células trofoblásticas gigantes expressam iNOS constitutivamente na gestação normal, o mesmo ocorrendo com as isoformas eNOS e nNOS. Nos sítios de lesão embrionária, as células uNK apresentam acentuada redução na marcação pela imunocitoquímica para a iNOS e nNOS nos períodos de 1 e 2 horas, com recuperação parcial após 6 horas. Estas variações não foram constatadas em outras células da interface materno-fetal. A eNOS apresentou marcações constantes nas células uNK e nas células musculares lisas, sem variações nos grupos experimentais de lesão embrionária. Pelo Western-blot foi constatada uma redução signficativa para a iNOS e nNOS nos períodos de 1 e 2 horas pós-lesão mecânica. Estes resultados demonstraram que as células uNK respondem às alterações do ambiente uterino induzido pela lesão embrionária ou pelo LPS, com rápida mobilização das isoformas iNOS e nNOS possivelmente na produção do NO. O NO liberado por estas células pode ser a causa da alteração da permeabilidade ou lesão vascular da região mesometrial provocando a hiperemia e hemorragia. A mobilização da atividade da iNOS nas células uNK não parece ser dependente do IFN-a. e portanto não ocorre o envolvimento das células dendríticas nesta via de sinalização / Abstract: The successful embryo implantation and development in human and rodents uteri is dependent of intimate interaction between maternal and fetal cells, with intervening of fine balance of cytokines and chemical mediators on cross-talks between cells in the maternal-fetal interface. This dialogue involves the cells of decidualized stroma, blood vessels and leukocytes from endometrium of maternal side and the trophoblast cells from embryo in a complex signaling network which mechanism is only partially understood. Unbalance of these signals could outcome in miscarriage being intriguing the participation of uterine natural killer cells (uNK) that com pose lymphocyte population accumulate in the uterine environment specifically during pregnancy. The aim of this work was to evaluated the participation of nitric oxide synthase (NOS) enzymes isoforms which arise in nitric oxide (NO) production, as potential inducer of unbalance of homeostasis in the uterine environment. It was used normal pregnant mice on 8° and 10° gestational days and groups of animais which embryos were surgically lesioned or inoculated with lipopolyssacharide (LPS). Uterine samples were colleted after 1, 2 and 6 hs of embryo lesion or 6hs after LPS inoculation and processed for conventional paraffin embedding, as so as, for tissue homogenates of mesometrial region from this uterine sites. Paraffin sections were processed for Dolichos biflorus (DBA) lectin cytochemistry and immunocytochemistry for iNOS, eNOS, nNOS and IFN-a. SDS-PAGE and Western blot were performed with tissue homogenates using anti-iNOS, anti-eNOS and antinNOS. The mesometrial region of embryo lesioned uterine sites showed hyperemia after 1 hr lesion and increased to hemorrhage after that. In the LPS treated animais was seen hyperemia after 6hr. The DBA cytochemistry showed morphological changes in the uNK cells found in this embryo lesioned sites being noticeable the lost of reactivity in the secretory-Iysosome granules contents. The immunocytochemical for iNOS pointed out the uNK, decidual and trophoblast cells expressing iNOS constitutively in the normal pregnancy, as did the eNOS and nNOS. In the embryo damaged sites the uNK cells showed remarkable reduction in the iNOS and nNOS labeling after 1 and 2 hr with partial recuperation after 6 hr. These variations were not seen in other cells. The eNOS showed constant labelling on uNK cells and smooth muscle cells without changes in the experimental groups of embryo lesion or treated with LPS. By Western blot, it was noted significant lowering for iNOS and nNOS in the periods of 1and 2 hr after lesion. These results showed acute response of uNK cells against the changes of uterine environment induced by embryo lesion and LPS treatment, with fast mobilization of iNOS and nNOS isoforms possibly in the production of NO. The NO released from these cells could be the cause of changes on vascular permeability or even lesion of blood vessels localized in the mesometrial region wich results in hyperemia and hemorrhage. The iNOS activation of uNK cells does not seem dependent of IFN-a and therefore without commitmentof dendritic cells in this signaling pathway / Mestrado / Histologia / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Aureo Tatsumi Yamada / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-09T15:32:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Farias_AlineMacedo_M.pdf: 19526520 bytes, checksum: dc55dc97ad91bfacd185ea4b6bfb7e81 (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: o sucesso da implantação e desenvolvimento embrionário em animais de placentação do tipo hemocorial requer além da presençafísica do embrião/feto,uma dinâmica de alterações seqüenciais na interface materno-fetal do útero gestante. Tais alterações são mediadas e controladas pelas ações sincronizadas de uma série de fatores de efeito endócrino, parácrino e autócrino, com o comprometimento de diversas células presentes nesta interface. Dentre as peculiaridades do útero gestante, o recrutamento e o acúmulo de células uNK têm sido apontado como de fundamental importância na modulação da homeostase da interface materno-fetal para o desenvolvimento normal da gestação. Por outro lado, a complexidade das múltiplas interações célula-célula e citocinas-células que modulam a interação materno-fetal, dificulta a compreensão plena dos mecanismos envolvendo a participação das células uNK na imunomodulação do útero gestante. Portanto, procuram-se por procedimentos que permitam as análises do comportamento das células uNK em condiçõesexperimentais controladas,assim como, elucidar tanto as vias da ativação, quanto da inibição das atividades moduladorasdestas células na gestação. O presente trabalho teve como objetivo estabelecer um modelo experimental de cultivo de células uNK avaliando desde a viabilidade das células isoladas do útero de camundongos gestantes e, testando diversas condições para manipulação e manutenção in vitro destas células. Foram aprimorados os procedimentos de isolamento positivo e purificação das células uNK de camundongos pelo método da esfera magnética revestida com lectina DBA. Foram conduzidos testes quanto aos efeitos dos componentes da matriz extracelular -fibronectina, laminina e colágeno I na sobrevida destas células e, quanto aos efeitos isolados e combinados das interleucinas IL-2, IL-15 e GM-CSF e, das quimiocinas MIP-1j3e CXCL10. Para otimização dos procedimentos destes ensaios, foi desenvovido um protocolo de cultivo em micro-spots, visando manipular células em escala mínima (5x103 células) com reprodutibilidade e sensibilidade que permitisse a padronização dos ensaios in vitro. Dentre os componentes da matriz extracelular testados, a fibronectina proporcionou a manutenção de maior número de células viáveis pelo período de até sete dias de cultivo, enquanto a citocina IL-15 promoveu a diferenciação das células uNK notadamente pelo aumento de grânulos citoplasmáticos. A quimiocina MIP-1j3 induziu a migração de células in vitro, enquanto a CXCL10 teve um efeito inibidor desta ação do MIP-1j3. Por outro lado, as análises quantitativas mostraram que a combinação da CXCL10 e IL-15 manteve o maior número de células uNK aderidas ao substrato de fibronectina em períodos prolongados de cultura, alem de promover a diferenciação destas células. A integridade e viabilidade das células uNK pode ser comprovada pela amplificação de transcriptomas isoladas de 5x103 células através do RT-PCR. Porém, as reações imunocitoquímicas com anti-PCNA não demonstraram qualquer atividade proliferativa nas células uNK mantidas nestas condições de cultivo.Estes resultados demonstram a adequação deste protocolo de cultivo em microspot para diversos ensaios in vitro com as células uNK isoladas de camundongos mesmo em pequenas quantidades e, um protocolo inovador para estudos da fisiologia destas células em situações experimentais controladas / Abstract: The success of embryo implantation and development in the animais of hemochorial type placentation requires beside the presence of the embryo/fetus properly,a dynamic sequential changes at the maternal-fetal interface in the pregnant uterus. These changes are mediated and controlled by synchronized actions of many endocrine, paracrine and autocrine factors with commitment of several cells present at this interface. Among the peculiar features of normal pregnant uterus, the uNK cells recruitment and accumulation has been hallmarked as essential to modulate the maternal-fetal interface homeostasis. Otherwise, the complexity of multiple cell-cell and cytokine-cells interactions involved at the maternal-fetal interaction of pregnant uterus, make difficult the fully understanding of mechanisms related to the participation of uNK cells in the immunomodulation of pregnant uterus. Therefore, it is widely expected to establish and experimental procedures that benefit the analysis of uNK cells behavior under controlled condition and those allowing elucidation of both activation and inhibition of modulator activities of these cells. The present work aimed to establish an experimental model of uNK cells culture evaluating since the viability of isolated from pregnant mouse uterus and testing several conditions for in vitro manipulation and maintenance of these cells. There were improved the procedures of positive isolation and purification of mouse uNK cells by OSAlectin coated magnetic-beadmethod. Tests regarding the effects of extracellular matrix components - fibronectin, lamminin and collagen I on surviving of these cells and effects of interleukin IL-2, IL-15 and GM-CSF and, chemokines MIP-1[3and CXCL10 alone or in combination were perfomerd.To optimize the procedures of these in vitro assays, it was set up a protocol of micro-spot culture for manipulation of minimal scale (5.103cells) of cells with reproducibility and sensibility. Among the extracellular matrix components, the fibronectin promoted the maintenance of highest proportion of viable cells during seven days culture, while the cytokine IL15 induced the uNK cell differentiation noticeable by increasing of cytoplasmatic granules. The chemokine MIP-1[3induced the cell migration in vitro, while CXCL-10 inhibited the effect on MIP-1[3.On the other hand, the quantitative analysis showed the combination of CXCL-10 and IL-15 maintained the largest number of uNK cells for longest time adhered on fibronectin-coated cultures, as so as, the differentiation of these cells. However, the PCNA immunocytochemistry did not show any proliferation activity of uNK cells in culture. The integrity and viability of uNK cells in culture was confirmed by RT-PCR of transcriptomes obtained from 5.103 cells. These results confirm the adequacy of micro-spot culture as new insight using small number of uNK cells for in vitro assays and the establishment of required conditions to maintain these cells in primary culture to study their physiology under controlled experimental conditions / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Maria Helena Baena de Moraes Lopes, Luiz Carlos Zeferino / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-11T17:49:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Lopes_ErikaSimone_M.pdf: 700074 bytes, checksum: 3a0807c77000f2ca7cc189faee445613 (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: O presente estudo visou descrever o processo atual de produção, distribuição e uso do fixador nas Unidades Básicas Saúde (UBSs), de Campinas, SP, os recursos humanos e materiais disponíveis para a coleta de exame citopatológico, bem como a técnica de fixação utilizada e comparar a adequabilidade dos esfregaços citopatológicos coletados nas UBSs utilizando diferentes técnicas de fixação. Foi desenvolvido um estudo descritivo, comparativo e prospectivo. Foram incluídos 2.114 esfregaços citopatológicos coletados em 43 UBSs, nas quais foram observadas informações sobre condições do espaço físico, armazenamento do fixador, técnicas de fixação dos esfregaços citopatológicos utilizadas, os profissionais responsáveis pela coleta e o processo atual de produção, distribuição e uso do fixador nas UBSs. A distribuição do fixador para as UBS foi de acordo com três tipos de técnicas de fixação: gotas, spray e álcool. Em 93% das UBSs os fixadores são armazenados em armário, já em 60,5% os rótulos com a data de fabricação não estava presente. A técnica de fixação mais utilizada foi gotas (93%), e a agitação do frasco era realizada em 86% das UBSs. A incidência de luz sobre o fixador foi observada em 90,6% das UBS. As trocas dos fixadores ocorrem em 46,5% semanalmente e em 81,4 % observou-se que os frascos encontravam-se fechados nas UBSs. Os profissionais que realizam os exames são 86% auxiliares de enfermagem, 84% por médicos, e em 51% por enfermeiras. Sessenta e cinco por cento das UBS apresentaram ventilador na sala de coleta, e 97,6% a presença de janela, e destas 73,8% encontravam-se abertas durante o procedimento de coleta. As freqüências de resultados ¿satisfatórios, mas limitados por fixação¿ variam de 14,9 a 23,2%, sendo significativamente mais baixa quando se usa o fixador na apresentação em spray (p<0,0001). A freqüência de resultados ¿satisfatórios, mas limitados por ausência de células glandulares e metaplásicas¿ com os diferentes tipos de fixadores variou de 13,8 a 22,3%, com menores taxas quando se usa o spray (p=0,0001). Não houve diferença significativa em relação à freqüência de lesões de baixo e alto grau, comparando-se os diferentes tipos de fixação. Quando se fez a fixação com álcool a 95% observou-se freqüência mais elevada do diagnóstico ASC-US, (p= 0,0025). A produção do fixador celular preparado pelo Laboratório de Citopatologia do CAISM para ser utilizado nas UBSs e o ambiente físico observado está dentro das normas e dos padrões descritos na literatura. Já o uso do fixador precisa ser revisto, observando-se as trocas, data de validade, manutenção do frasco fechado e em local protegido do calor. Na maioria das UBSs visitadas os profissionais pela coleta são auxiliares de enfermagem ou médicos que utilizam a técnica de fixação em gotas. A técnica de fixação que apresentou melhor desempenho foi polietilenoglicol e álcool em apresentação spray. Esta poderá ser uma alternativa mais adequada para ser implantada na rotina de coleta do exame citopatológico. A técnica de fixação em álcool a 95% elevou a identificação de ASC-US, o que necessita de melhor avaliação e análise. Os esfregaços nos quais se utilizou a técnica de fixação polietilenoglicol e álcool 95% em spray e álcool a 95% apresentaram menor freqüência de resultados satisfatórios, mas limitados por ausência de células glandulares ou metaplásicas. Este achado também carece de melhor investigação. Palavras-chave: esfregaço vaginal, neoplasia do colo uterino, controle de qualidade, citologia, fixadores / Abstract: To describe the current process of production, distribution and use of the fixative in the Basic Health Units (BHU), from Campinas, SP, the human resources and available materials to the smear test collection as well as the used fixation techniques, and to compare the quality of the Pap smears collected in the BHU, by using the different fixation techniques. It was developed a descriptive, comparative and prospective study. The sample was of 2114 Pap smears in 43 BHU, in which were observed information about the physical space conditions, manner of storage of the fixative, fixation techniques of the used Pap smears, the professional responsible for the collect, and the current process of production, distribution and use of the fixative in the BHU. The distribution of the fixative to the BHU was divided into three groups, with three types of fixation: drops, spray and alcohol. The smears were analyzed in the Cytopathology Laboratory from CAISM in the State University in Campinas. In 93% of the BHU, the fixatives are stored in cabinets, and in 60,5% of the labels there was no fabrication date. The most used fixation technique was drops (93%) and the flask shake was performed in 86% of the BHU. The light incidence on the fixative was observed in 90,6%. The fixative change occurs in 46,5% weekly and in 81,4% it was observed that the flasks were found closed in the BHU. The exams are performed in the BHU by 86% nurse auxiliary, 84% by physicians, and in 51% by nurses. In physical environment, it was observed that 65% of the BHU had ventilators in the collect room, in 97,6% there were windows and from these, in 73,8%, the windows were opened during the collect procedure. The frequencies of results ¿satisfactory, but limited by fixation¿ vary between 14,9% to 23,2%, being significantly lower when the spray fixative is used (p<0,0001). The frequency of results ¿satisfactory, but limited by the absence of glandular and metaplasic cells¿, with different types of fixatives, varied from 13,8% to 22,3%, with lower taxes when the spray is used (p=0,0001). There was no significant difference in relation to the lesions of low and high grades, comparing the different fixation types. When alcohol in 95% fixation was done, it was observed a higher frequency of the ASCUS diagnosis (p=0,0025). The production of the cellular fixative is inside the patterns described in literature. The fixative use must be reviewed, observing the changes, validity date, maintenance of the flask (closed and in a heat-protected place). In most of the visited BHU, the professional responsible for the collect are nurse auxiliaries or physicians that use the drop fixation. The physical environment is according to the norms described in literature. The fixation technique that presented the best performance was spray. This can be a more adequate alternative to be implanted in the routine of the Pap smear collect. The alcohol in 95% fixation raised the ASC-US identification, which needs better evaluation and analysis. The Pap smears in which the fixation technique polyethylene glycol and alcohol 95% in spray and alcohol in 95% was used, presented lower frequency of satisfactory results, but limited by the absence of glandular and metaplasic cells. This findind also needs better investigation. Key words: Vaginal smears, Uterine Cervical Neoplasm, Quality control, Cytology, Fixatives / Mestrado / Enfermagem e Trabalho / Mestre em Enfermagem

Orientador: Aureo Tatsumi Yamada / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-11T19:21:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Degaki_KarinaYumi_M.pdf: 2877669 bytes, checksum: b1e725db393d6287fab125efb8b00e16 (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: As células natural killer uterinas (uNK) atuam na modulação da interface materno-fetal e homeostasia do útero gestante, sem desencadear a atividade citolítica típica de uma resposta imune inata. Contudo, ao provocar uma lesão cirúrgica no embrião (LCE) ocorrem alterações no comportamento das células uNK de camundongos e possível indução da atividade citolítica. O presente trabalho avaliou a expressão gênica de mediadores relacionados tanto com a ativação, quanto efetores da atividade citotóxica das células uNK no útero gestante de camundongos frente à anomalia provocada pela LCE. Foram avaliadas as expressões dos genes perforina, granzima-A, IFN-y, IL-15, IL-18, TNF-a, IL-6, IL-2, DAP-12, Fas, Fas-L através do RT-PCR (Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction) semi-quantitativo, a partir do RNAtotal obtido de homogenados teciduais da região mesometrial (RM) dos sítios uterinos de camundongos no 9º dia de gestação normal e grupos de animais submetidos à LCE nos períodos de 0,5, 1, 2, 6, 12 e 24 horas pós-LCM e, de RNA obtido de células uNK isoladas de animais gestantes normais. Foram investigadas também as diferenças nas expressões dos genes DAP12, IFN-??e TNF-a ?em RNA extraídos de células uNK imaturas e maduras microdissecadas de criocortes da RM pela microscopia de captura a laser (LCM) e avaliadas pelo qRT-PCR (quantitative Real Time-PCR). Os resultados do RT-PCR confirmam a expressão de todos os genes avaliados nos homogenados da RM e nas células uNK isoladas não foram detectadas apenas os genes da IL-15 e IL-2. Pela análise semi-quantitativa dos amplicons do RT-PCR os genes das proteínas citolíticas, granzima-A e perforina, juntamente com citocinas pró-inflamatórias IFN- y ?e TNF-a ?apresentaram aumentos significativas em 1h após a LCE e redução para níveis próximos do animal normal nos períodos após 6h da LCE. O aumento na expressão destes genes relacionado com a resposta imune inata das células NK, sugere uma rápida mudança do comportamento das células uNK em resposta à LCE, cujas ativações podem envolver a expressão do gene DAP12 que também mostra tendências de aumento nos mesmos períodos pós-LCE. Por outro lado, a expressão dos genes IL-15, IL-2, IL-18 e IL-6 relacionada com a migração, proliferação e diferenciação das células uNK não teve uma variação significativa entre as amostras de gestação normal e pós-LCE. Do sistema Fas/FasL, a redução significante do FasL resulta na regulação negativa da indução de morte celular por apoptose das células uNK, podendo prolongar a viabilidade destas células no ambiente uterino alterado pela LCE. Estes resultados comprovam que a LCE induz uma rápida regulação positiva da expressão dos genes relacionados com mecanismos de citotoxicidade da resposta imune inata das células uNK. Pelas análises dos genes DAP12, TNF-??e IFN-y ?através do qRT-PCR do RNA extraído de células uNK isoladas pela LCM identificaram-se diferenças nas expressões destes genes entre as células uNK imaturas e maduras classificadas atualmente por critérios morfológicos. As diferenças de expressões comprovam a ocorrência de subpopulações com heterogenidade funcional não atribuível apenas a subtipos de estágios de diferenciação celular e com possíveis domínios de distribuição específica no ambiente uterino / Abstract: The uterine natural killer cells (uNK) actively modulate the maternal-fetal interface and homeostasis of pregnant uterus, without triggering the typical cytolytic activity of innate immune response. However, experimentally induced embryo lesion in the pregnant mouse uterus, changes the uterine homeostasis with commitment of uNK cell and possible induction of its cytolytic activity. The present work evaluated the gene expression of mediators related either to the activation and effectors molecules of uNK cells cytotoxic activity. It was evaluated the genes of perforin, granzyme-A, IFN-y, IL-15, IL-18, TNF-a, IL-6, IL-2, DAP-12, Fas, Fas-L by RT-PCR (Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction), using RNA isolated from normal pregnant mice uterus on gestational day (gd) 9 and after 0.5, 1, 2, 6, 12 and 24h of abnormal pregnancy provoked by surgical lesion of the embryo (SLE) and also from RNA obtained from uNK cells isolated from normal pregnant mice. Differences in the DAP12, IFN-??and TNF-a ?genes expressions were also investigated with RNA isolated from immature and mature subtypes of uNK cells dissected from cryosections of mesometrial regions in the laser capture microscope (LCM) and evaluated by quantitative Real Time-PCR (qRT-PCR). The results of RT-PCR confirmed the expression of all genes evaluated in the uterine tissue homogenates and in the uNK cells were not detected the only expression of IL-15 and IL-2 genes. By semi-quantitative analysis of RT-PCR amplicons, the genes of cytolytic proteins, granzymes-A and perforin all together with pro-inflammatory cytokines IFN-y ?and TNF-a ?showed significant increasing at 1h after SLE and decreasing to the level near of normal pregnancy after 6h of SLE. The increasing expression of these genes related to innate immune response of NK cells suggest the quick changes of uNK cells behavior in response to the SLE, which activation could involve the expression of DAP12 gene that also showed increasing at the same period after SLE. On the other hand, the expression of IL-15, IL-2, IL-18 and IL-6 genes related to the migration, proliferation and differentiation of uNK cells did not showed significant differences among the SLE samples and normal pregnancy. The significant decreasing of FasL after SLE could down regulate the triggering of apoptotic cell death pathway in the uNK cells and therefore, increasing the viability of these cells in the uterine microenvironment affected by SLE. These results prove that SLE induces fast up-regulation genes expression related to the cytotoxic pathway of uNK cells innate immune response ability. Based on analysis of qRT-PCR of DAP12, TNF-a ?and IFN-y ?genes performed with RNA obtained from uNK cells dissected in the LCM, it was identified differences in the expression of these genes between now a days classified as immature and mature forms of uNK cells. These expressions differences attest the occurrence of functionally heterogeneous subpopulations of uNK cells not restricted to the differentiation stages and possible specific distribution domains in the uterine environment / Mestrado / Histologia / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Avaliar a associação entre as infecções genito-urinárias, o comprimento do colo uterino e a prematuridade é importante para determinar quais podem ser os fatores preditivos para o parto pré-termo. Foi realizado estudo tipo coorte de conveniência, prospectivo, avaliando 1370 gestantes na cidade de Ribeirão Preto, com idade gestacional entre 20 e 25 semanas. Aplicou-se questionário sócio demográfico com história reprodutiva para a identificação do histórico obstétrico, idade materna, paridade, tabagismo e antecedente de parto pré-termo. Foi realizada ultrassonografia endovaginal para a avaliação do comprimento do colo uterino segundo as diretrizes da Fetal Medicine Foundation (FMF). Foram coletadas amostras de urina e conteúdo vaginal para avaliar a presença de infecção urinária e vaginose bacteriana respectivamente. A associação entre infecções, comprimento do colo uterino e parto pré-termo (PPT) foi realizada mediante teste não paramétrico e o cálculo do Risco Relativo das diferentes variáveis, por meio do ajuste de modelos log-binomiais. Das 1370 mulheres grávidas avaliadas, 132(9,63%) cursaram com parto pré-termo (<37 semanas), sendo que 19 (14,4%) dos partos pré-termo ocorreram em mulheres com colo <= 2,5 cm. O estudo microbiológico determinou que no grupo das mulheres que cursaram com parto pré-termo, 15 apresentaram ITU, 19 apresentaram vaginose bacteriana (VB) e uma apresentou ITU e VB. Avaliando as 75 pacientes com PPT espontâneos, 10 apresentaram ITU e 14, VB. Após a análise destes dados, foi possível concluir que o colo uterino curto entre 20 e 25 semanas de gestação está associado ao PPT e que ITU e VB rastreadas nesta idade não se associaram ao encurtamento do colo nem ao PPT. No entanto a ITU, mesmo assintomática apresentou relação com o PPT espontâneo. / To evaluate the association between the genito-urinary infections, cervical length and preterm birth is important to determine which can be predictive factors for preterm birth. It was conducted cohort study of convenience, prospective, evaluating 1370 pregnant women in the city of Ribeirão Preto, with gestational age between 20 and 25 weeks. Applied socio-demographic questionnaire with reproductive history to identify the obstetric history, maternal age, parity, smoking and preterm birth (PTB) history. Transvaginal ultrasonography was performed for evaluation of cervical length in the guidelines of the Fetal Medicine Foundation (FMF). Urine and vaginal discharge samples were collected to evaluate the presence of urinary tract infection (UTI) and bacterial vaginosis (BV) respectively. The association between infections, cervical length and preterm delivery was performed using non-parametric test and calculate the relative risk of different variables, by adjusting log-binomial model. Of the 1370 evaluated pregnant women, 132 (9.63%) presenting with preterm delivery (<37 weeks), and 19 (14.4%) of preterm deliveries occurred in women with cervix <=2.5 cm. The microbiological study found that the group of women presenting with preterm birth(PTB), 15 had UTI, 19 had BV and one presented UTI and VB. Evaluating 75 patients with spontaneous PTB, 10 had UTI and 14, BV. After the analysis of these data, it was concluded that the short cervix between 20 and 25 weeks of gestation is associated with the PTB and UTI and VB screened at this age not associated to the shortening of the cervix or the PTB. However, the UTI even asymptomatic were related to the spontaneous PTB.

Orientadores: Luiz Carlos Zeferino, Joana Fróes Bragança Bastos / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-25T05:47:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Yoneda_JulianaYoko_M.pdf: 1509037 bytes, checksum: 64a492fd2dcabf75db665898f34f50aa (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: Objetivos: Avaliar fatores patológicos em mulheres submetidas à histerectomia radical e linfadenectomia pélvica bilateral para tratamento de câncer do colo do útero estádio IA1 com invasão angiolinfática e IA2, correlacionando achados na peça de conização e de histerectomia radical, para identificação de um grupo de pacientes candidatas a tratamento cirúrgico menos radical. Métodos: Avaliação de mulheres com câncer do colo do útero estádio IA1 com invasão angiolinfática e IA2, diagnosticadas por LEEP ou conização a frio, tratadas com histerectomia radical e linfadenectomia pélvica bilateral, no período de Janeiro de 1999 à Dezembro de 2011. Resultados: Foram avaliadas 50 pacientes, 40 estádio IA2 e 10 estádio IA1 com invasão angiolinfática. A média de idade foi de 43 anos (30-67). Todas as pacientes foram submetidas à conização prévia, sendo 45 LEEP (90%) e cinco cones a frio (10%). A análise de histologia revelou carcinoma epidermóide em 44 pacientes (88%), adenocarcinoma em quatro pacientes (8%) e carcinoma adenoescamoso em duas pacientes (4%). Invasão angiolinfática foi detectada em 15 pacientes (30 %), dez estádio IA1 e cinco estádio IA2. Margens estiveram comprometidas em 35 pacientes, e em quatro casos não foram avaliadas por artefato de fulguração. Linfonodos estiveram comprometidos em dois casos. Não foi identificado nenhum caso de comprometimento parametrial. Doença residual foi detectada em 22 pacientes (44%) e margens comprometidas no produto de conização foram preditoras de doença residual na peça cirúrgica de histerectomia radical (p=0,04). O tempo médio de seguimento foi de 51 meses, não sendo observado nenhum óbito relacionado à doença. Conclusões: Pacientes com margens comprometidas na peça de conização apresentam risco aumentado de doença residual na peça cirúrgica de histerectomia radical, necessitando de avaliação cautelosa previamente à cirurgia conservadora. Avaliação de linfonodos pélvicos é essencial devido ao risco de envolvimento mesmo em estádios iniciais. A ausência de comprometimento parametrial no presente estudo reforça que esse seleto grupo de pacientes com carcinomas microinvasores estádios IA1 com invasão angiolinfática e IA2 apresentam baixo risco de comprometimento parametrial, podendo ser considerada a realização de tratamento cirúrgico menos radical / Abstract: Aims: To evaluate pathological features in women treated with radical hysterectomy and pelvic lymphadenectomy for stages IA1 with lymph-vascular space invasion and IA2 cervical cancer by correlating findings on conization and hysterectomy specimens identifying a group of patients that could be candidate for less radical surgical treatment. Methods: Analysis of women with cervical cancer stages IA1 with lymph-vascular space invasion and IA2, diagnosed by LEEP or cold knife conization, treated with radical hysterectomy and pelvic lymphadenectomy, from January 1999 to December 2011. Results: Fifty patients were enrolled, 40 stage IA2 and 10 IA1 with lymph-vascular space invasion. Median age was 43 years (30-67). All patients underwent cervical conization, 45 LEEP (90%) and five cold knife (10%). Histology revealed squamous cell carcinoma in 44 patients (88%), adenocarcinoma in four patients (8%) and adenosquamous carcinoma in two patients (4%). Lymph-vascular space invasion was detected in 15 patients (30%), 10 stage IA1 and 5 stage IA2. Cone biopsy margins were positive in 35 patients and unavailable in 4 patients. There were two cases of positive pelvic nodes. No parametrial involvement was detected in the entire cohort. Residual disease was detected in 22 patients (44%). Positive margins predicted residual disease at radical hysterectomy (p= 0,04). Medium follow up time was 51 months and there were no disease- related deaths. Conclusions: Patients with positive margins at cone biopsy specimens have increased risk of residual disease at radical hysterectomy, and need careful evaluation prior to conservative surgery. Pelvic lymph-nodes evaluation is essential due to the risk of involvement even on early stages. The lack of parametrial involvement in the present study reinforce that this select group of patients with microinvasive cervical carcinoma stages IA1 LVSI, and IA2 have a very low risk of parametrial infiltration and less radical surgery could be considered / Mestrado / Oncologia Ginecológica e Mamária / Mestra em Ciências da Saúde

Abstract The invasion of a tumour through tissue limiting basement membranes is the critical step in malignant growth. Gelatinases (MMP-2 and MMP-9) are endopeptidases capable of degrading extracellular and pericellular matrix proteins such as collagen IV, the major component of basement membranes. An over-expression of these gelatinases is generally found in malignant tumours and is linked to impaired prognosis in many cancer types. Tissue inhibitors of metalloproteinases (TIMPs), endogenous regulators of the MMP activity, have recently been introduced as multifunctional proteins, which have paradoxical roles in tumour growth. Little data exists on the clinical significance of the gelatinases and TIMPs in gynaecological cancers. In this study the clinical significance of the gelatinases was studied in endometrial and uterine cervical cancers by using immunohistochemical staining with specific antibodies. In epithelial ovarian cancer (EOC) these enzymes and their TIMPs were studied in the preoperative serum samples using ELISA assay. Additionally, sequential serum measurements were performed during chemotherapy to evaluate them as treatment response indicators. In endometrial cancer, MMP-9 positivity correlated to a poor histological differentiation and an advanced clinical stage. High MMP-2 expression correlated to a poor differentiation, and unfavourable survival in stage I cancers, with mortality rates of 5% and 19% in patients with MMP-2 negative versus intensively MMP-2 positive tumours, respectively. In cervical cancers high MMP-2 expression correlated to an increased mortality risk. High MMP-9 expression was connected to a good differentiation of a tumour. In EOC, a high circulating TIMP-1 value correlated to all the examined aggressive features of EOC, including poor survival. The serum measurements of TIMP-1 were uninformative about response evaluation during chemotherapy but paradoxically, an increase in gelatinases and TIMP-2 seemed to reflect a good response to treatment. In conclusion, the data from this study show that high MMP-2 expression in tumour tissue could be prognostic in endometrial and cervical cancer, and preoperative circulating TIMP-1 could serve as an additional prognostic marker in EOC. Studies with larger patient cohorts would be necessary to further explore the value of these enzymes in clinical practice in gynaecological cancers.

Caesarean section is a common major surgical procedure and long-term complications have not been fully investigated. By longitudinal population based register studies, based on National health registers and medical data records, maternal complications after caesarean delivery at subsequent labour (N=7 683), among extremely preterm births (N=406), and at remote gynaecologic surgery (N=25 354) were explored. In Paper I, uterine closure was investigated in respect to uterine rupture in a subsequent delivery after caesarean section. Uterine rupture occurred in 1.3 % of women with a previous caesarean section. There was no increased risk of uterine rupture with single compared with double layers for closure of the uterus (adjusted Odds Ratio 1.17, 95 % CI 0.78-1.70). Modifiable risk factors of uterine rupture in a trial of labour after caesarean section included induction of labour and use of epidural analgesia. In Paper II, maternal outcomes and surgical aspects of caesarean section in the extremely preterm period were assessed. Maternal complications were more frequently reported in extremely preterm- compared with term caesarean delivery. No increase in short-term morbidity was observed at 22-24 compared with 25-27 gestational weeks, but uterine corporal incisions were performed more frequently (18.1 % vs. 9.6 %, p=0.02). Furthermore, risk factors for abdominal adhesions after caesarean section and organ injury in remote gynaecologic surgery were analysed (Paper III and IV). Numbers of prior caesarean sections were the most important factor for formation of adhesions. Advanced maternal age, obesity, infection and delivery year 1997-2013 were factors associated with adhesions in conjunction with caesarean section. Organ injury occurred in 2.2 % of women undergoing benign hysterectomy. A history of caesarean section increased the risk (adjusted Odds Ratio 1.74, 95 % CI 1.41-2.15), but was only partly explained by the presence of adhesions. The organ affected depended on medical history; prior caesarean predisposed for bladder injury, prior bowel/pelvic surgery for bowel injury and endometriosis was associated with ureter injury at time of hysterectomy. In conclusion; data from National health registers indicates that caesarean delivery is associated with long-term complications, although the absolute risk of severe complications for the woman is low.