Os hormônios tireoidianos (HTs) desempenham um papel importante em diversos processos, tais como o crescimento, desenvolvimento e metabolismo dos tecidos em geral. Embora estudos tenham demonstrado que os HTs agem diretamente nas células foliculares da tireoide reduzindo sua resposta ao TSH, pouco se sabe, a nível molecular, sobre essa e outras ações dos HTs na própria glândula tireoide. Nesse sentido, o objetivo do presente trabalho foi avaliar alterações no perfil de expressão gênica nas células foliculares tireoidianas (células PCCl3) em reposta ao tratamento com triiodotironina (T3). Após atingir confluência desejada, as células PCCl3 foram mantidas em meio depletado de HTs (grupo Hipo) por 24h. Após esse período, parte das células foi tratada com 10-7M de T3 (grupo T3) por 24 h. As células foram, então, lisadas para extração de RNA total para análise do transcriptoma, por RNAseq. Foi obtido como resultado, uma lista de genes diferencialmente expressos da qual foram selecionados cinco genes para validação in vitro (novo lote de células PCCl3 submetidas às mesmas condições descritas acima) e in vivo [ratos Wistar (250g), tratados por 4 semanas com T3 (1,5 μg/100g de peso corporeo; grupo hipertireoideo) ou PTU (10 μg/100g de peso corporeo; grupo hipotireoideo): o Slc16a1, que codifica o MCT8, responsável pelo transporte de T3 através da membrana, o Snrpd1, 9-March, Pfdn1 e Fam103a1, que codificam proteínas envolvidas no controle pós-transcricional e pós-traducional da expressão gênica. O tratamento com T3 estimulou a expressão dos genes Snrpd1, Pfdn1 e Fam103a1, enquanto reduziu a expressão de 9-March e Slc16a1. Juntos esses resultados demonstram a existência de um efeito autócrino exercido pelo T3 sobre o controle do seu próprio turnover proteico. / Thyroid hormones (HTs) play an important role in many processes, such as growth, development and metabolism of tissues in general. Although studies have shown that HTs act directly on follicular thyroid cells reducing their response to TSH, little is known, at the molecular level, about this and other actions of HTs in the thyroid gland itself. In this sense, the aim of the present study was to evaluate changes in the gene expression profile in the thyroid follicular cells (PCCl3 cells) in response to triiodothyronine (T3) treatment. After reaching 60% confluence, PCCl3 cells were maintained in HT depleted medium (Hypo group) for 24h. After this time, part of the cells was treated with 10-7M T3 (T3 group) for 24 h. Cells were then lysed for total RNA extraction for transcriptome analysis by RNAseq. As a result, a list of differentially expressed genes from which five genes for in vitro validation (PCCl3 cells under the same conditions described above) and in vivo [Wistar rats (250g), treated for 4 weeks with T3 (1.5 &um;g / 100 g body weight, hyperthyroid group) or PTU (10 &um;g / 100 g body weight; hypothyroid group): Slc16a1, which encodes MCT8, responsible for the transport of T3 through the membrane, Snrpd1, 9-March, Pfdn1 and Fam103a1, which encode proteins involved in post-transcriptional and post-translational control of gene expression. T3 treatment stimulated the expression of the Snrpd1, Pfdn1 and Fam103a1 genes, while reducing the expression of 9-March and Slc16a1. Together these results demonstrate the existence of an autocrine effect exerted by T3 on the control of its own protein turnover.

Στην παρούσα διατριβή, μελετήθηκε η επίδραση της ατορβαστατίνης στην εξέλιξη της οστεοπόρωσης. Ως πειραματικό μοντέλο επιλέχθηκε ο επίμυς, που, κατόπιν, απώλειας των οιστρογόνων λόγω ωοθηκεκτομής, αναπτύσσει οστεοπόρωση. Η επαγωγή της οστεοπόρωσης επιβεβαιώθηκε με πληθώρα μεθόδων. Αρχικά, (ημέρα 0) στο πειραματικό δείγμα (n=25) πραγματοποιήθηκαν μετρήσεις, στο αίμα, των βιοχημικών δεικτών του μεταβολισμού του οστού, (Αμινοτελικό πεπτίδιο του κολλαγόνου Τύπου Ι – NTx και οστεοκαλσίνη) με τη μέθοδο ELISA, μέτρηση της οστικής πυκνότητας με τη μέθοδο pQCT και αξιολόγηση της δομικής ακεραιότητας – ποιότητας του οστού με τη μέθοδο MDF. Ακολούθησε η αφαίρεση των ωοθηκών άμφω και, μετά από 60 ημέρες, επαναλήφθηκαν οι παραπάνω μετρήσεις. Όλες οι παραπάνω μέθοδοι, επιβεβαίωσαν την επαγωγή της οστεοπόρωσης μετά την ωοθηκεκτομή, και, άρα, την επιτυχία του πειραματικού μοντέλου. Αφού εξασφαλίσθηκε το οστεοπορωτικό μοντέλο, ο πειραματικός πληθυσμός χωρίστηκε τυχαία σε τρεις υπο-πληθυσμούς. Στον ένα υπο-πληθυσμό (n=10) χορηγήθηκε ατορβαστατίνη (4mg/kg/ημέρα), στον δεύτερο υπο-πληθυσμό (n=10) χορηγήθηκε αλενδρονάτη (4mg/kg/ημέρα), ενώ ο τρίτος υπο-πληθυσμός (n=5) χρησιμοποιήθηκε ως αρνητικός μάρτυρας και δεν έλαβε καμία θεραπεία (no-therapy control). Η χορήγηση των φαρμακευτικών αγωγών ήταν δια στόματος μέσω στοματογαστρικού καθετήρα και διήρκεσε από την ημέρα 60 έως την ημέρα 145. Μετά το πέρας χορήγησης των φαρμακευτικών αγωγών, επαναλήφθηκαν οι προαναφερθείσες μετρήσεις, τα πειραματόζωα θυσιάστηκαν και απομονώθηκαν οστά κνήμης για ιστολογική μελέτη, καθώς και μελέτη πρωτεϊνικών μορίων που εμπλέκονται στην κυτταρική βιολογία των κυττάρων του οστίτη ιστού. Συγκεκριμένα, η ιστολογική μελέτη συμπεριελάμβανε εκτίμηση των οστών με χρώση αιματοξυλίνης – ηωσίνης σε τομές παραφίνης, ιστομορφομετρία, ανοσοϊστοχημική χρώση των μορίων Bone Morphogenetic Protein-2 (BMP-2) και Fas (παράγοντας οστεοκλαστικής απόπτωσης) σε τομές σε πλαστικό, καθώς και ανοσοαποτύπωση κατά Western των αυτών πρωτεϊνών. Γενικά, όλες οι μέθοδοι που εφαρμόστηκαν, έδειξαν να ακολουθούν όλες τις μεταβολές στην δομική – ποιοτική κατάσταση των οστών, καθ’όλη την πειραματική πορεία. Ιδιάιτερη ευαισθησία στην ανίχνευση των μεταβολών αυτών, φάνηκε να παρουσιάζουν οι βιοχημικοί δείκτες του οστικού μεταβολισμού, αλλά και η νέα μέθοδος μέτρησης του Συντελεστή Εσωτερικής Απόσβεσης (MDF). Όσον αφορά στις φαρμακευτικές αγωγές, και η ατορβαστατίνη και η αλενδρονάτη παρουσίασαν θετική επίδραση στην εξέλιξη της οστεοπόρωσης, επιβραδύνοντάς την. Ειδικότερα, η ομάδα που έλαβε ατορβαστατίνη επέδειξε μια ισχυρότερη απόκριση στη χορήγηση της ουσίας, συγκριτικά με την ομάδα που έλαβε αλενδρονάτη. Προς την ίδια κατεύθυνση, φάνηκε να τείνουν και τα ευρήματα σχετικά με την έκφραση της BMP-2 και του Fas, αφού η ατορβαστατίνη ήταν η ουσία εκείνη που αύξησε την έκφραση και των δυο αυτών μορίων και, συνεπώς, την παραγωγή οστού από τους οστεοβλάστες και την απόπτωση των οστεοκλαστών. Στο σημείο αυτό θα ήταν σκόπιμο να σημειωθεί πως τα αποτελέσματα της μελέτης αυτής είναι ενδεικτικά και θα μπορούσαν να ισχυροποιηθούν με εφαρμογή των πειραματικών μεθόδων σε μεγαλύτερο πειραματικό δείγμα, μεγαλύτερη διάρκεια χορήγησης των φαρμάκων και δοκιμές διαφορετικών δόσεων αυτών. / The effects of the administration of atorvastatin on the development of ovariectomy-induced osteoporosis were evaluated in this study. The ovariectomized rat was employed as the experimental model. The development of osteoporosis, following ovariectomy was confirmed by a plethora of experimental methods and techniques. Initially (day 0), the experimental population (n=25) was submitted to blood measurements of the bone biochemical markers, NTx and osteocalcin (ELISA protocol), bone density measurements by pQCT and assessment of bone structural integrity with MDF methodology. MDF (Modal Damping Factor) is a new analytical and arithmetic method, based on the measurement of the dynamic characteristics of bone (quality factor and modal damping factor) by applying vibration excitation in the range of acoustic frequencies. Ovariectomy was performed to all test animals, and 60 days later, the same biochemical and radiological measurements were repeated. All the above methodologies confirmed the development of osteoporosis renderring, thus, the experimental animal model successful. Since osteoporosis had been confirmed, the experimental population was randomly divided (two cases to one control) into 3 sub-populations. The first sub-population (n=10) was administered atorvastatin (4mg/kg/day), the second sub-population (n=10) was administered alendronate (4mg/kg/day), whereas the third sub-population (n=5) was not administered any drug (no-therapy control). Drug administration was oral by gavage, from day 60 up to day 145. At the end of therapy, the test animals were again tested for levels of bone biochemical markers NTx and osteocalcin, and submitted to pQCT and MDF evaluation. They were, then, euthanized and tibiae were isolated for further histological studies. Specificly, histology studies included the evaluation of bone quality by eosin – hematoxylin staining of paraffin – embedded tibia sections, Histomorphometry, immunohistochemistry of methyl-methacrylate – embedded sections and Western Blotting for Bone Morphogenetic Protein-2 (BMP-2) and apoptotic factor Fas. In general, all methods applied followed the changes in bone integrity and quality, throughout the whole experimental course. Higher sensitivity in detecting these changes was exhibited by the bone biochemical markers and the new MDF method. With regard to the therapeutical agents administered, both atorvastatin and alendronate seemed to have a positive impact on the progression of osteoporosis, decelerating it. Especially, the atorvastatin – treated group presented a greated response to the administration of the drug, compared to the alendronate – treated one. The findings concerning the expression of BMP-2 and Fas, seemed to point to the same direction, since atorvastatin administration increased the levels of BMP-2 and Fas expression, increasing, thus, the bone production and osteoclast apoptosis, respectively. At this point, it would be wise to notice that our results are indicative, not conclusive and could be fortified by application of the methods used on a larger experimental sample size, longer administration of the drugs and tests of different drug dosages.

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:49:56Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-06-25. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:25:48Z : No. of bitstreams: 1 Publico-10869.pdf: 639507 bytes, checksum: 4b13227940debf1c6d9d1683aa25bd22 (MD5) / Objetivo: Observar o comportamento metabólico e os ajustes fisiológicos promovidos por um protocolo de atividades físicas em meio aquático com o uso de cargas complementares, variando entre 3-5% do peso corporal. Métodos: Para a realização do experimento, foram utilizados 30 ratos machos, adultos da linhagem Wistar. Os 30 animais empregados no estudo foram divididos aleatoriamente, em dois grupos sendo um o Grupo Treinado (GT) e outro o Grupo Controle (GC). Os animais (15) submetidos ao treinamento físico (GT) foram divididos em três subgrupos: GT1; GT2 e GT3, todos foram submetidos a cinco sessões semanais de natação com duração de 60 minutos, totalizando três, seis e doze semanas respectivamente de treinamento. Dosagens das concentrações de insulina, IGF, glicose e lactato em diferentes momentos e fases do protocolo, foram adotadas como ferramentas para a interpretação de possíveis adaptações. O tratamento estatístico empregado para a análise da glicose, insulina e IGF, foi ANOVA ONEWAY para dados não pareados. Para o lactato plasmático empregou-se ANOVA TWO-WAY empregando o pacote estatístico SAS para PC versão 6.08, (SAS Institute, Cary, NC). Resultados: não houve alterações significativas das concentrações plasmáticas analisadas. Conclusão: O presente estudo demonstrou que o modelo experimental empregado não induz ajustes fisiológicos ou tampouco adaptações hormonais quando estas são analisadas pelos métodos e pelas variáveis bioquímicas acima citadas. Contudo, novos estudos devem ser realizados com experimentos de longo prazo, associando técnicas e abordagens distintas. / Objective: Observe metabolic behavior and physiological adjustments promoted by a protocol of physical activities in aquatic way with the use of additional loads varying between 3 and 5% of body weight. Methods: Thirty adult male Wistar rats were randomly divided into two groups: the Trained Group (TG) and Control Group (CG). The 15 animals of the TG, which underwent physical training, were subdivided into three subgroups: GT1, GT2 and GT3. They underwent 5 weekly swimming sessions during 60 minutes, respectively totaling 3, 6 and 12 weeks of training. Insulin concentration doses, IGF, glucose and lactate at different periods and stages of protocol were used as tools to interpret possible adaptations. ANOVA ONE-WAY for unpaired data was the statistical method for glucose, insulin and IGF analysis. ANOVA TWO-WAY, statistic SAS for PC 6.08 (SAS Institute, Cary, NC) was used for plasmatic lactate. Results: No significant changes in plasmatic concentrations occurred. Conclusion: Current analysis showed that experimental model used does not induce physiological adjustments and hormone adaptations when these are analyzed by the above-mentioned methods and biochemical variables. Other researches should be undertaken involving long-term experiments coupling distinct techniques and approaches. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:05Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-06-29 / Introducao: A inflamacao tem sido relacionada a varias doencas neurodegenerativas e dados clinicos e experimentais sugerem uma funcao crucial nos processos inflamatorios no desenvolvimento da epilepsia, em particular, nos mecanismos geradores de crises (ictogenese) e na transformacao de uma rede neuronal normal a uma rede geradora de crises. A lovastatina, substancia usada na reducao da sintese do colesterol, tambem esta relacionada com a resposta inflamatoria, podendo modular a producao de citocinas e diminuir e o estresse oxidativo. Objetivos: O presente estudo teve como objetivo analisar a acao da lovastatina no desenvolvimento das diferentes fases do modelo de epilepsia, induzido por pilocarpina em ratos. Metodos: Ratos Wistar machos foram analisados nos 3 periodos do modelo da pilocarpina (350mg/kg) fases: aguda (24h), silenciosa (15 dias) e cronica (30 dias apos a 1.a crise espontanea) e para cada periodo do modelo usamos 4 grupos de animais: salina, lovastatina (Lova), pilocarpina (Pilo) e pilocarpina+lovastatina (Pilo+Lova). O tratamento com lovastatina (20 mg/kg) se iniciou 2 h apos o inicio do estado de mal epileptico e foi administrada por 15 dias, duas vezes ao dia nos animais do grupo silencioso e cronico. O cerebro foi processado para realizacao de PCR em tempo real e imuno-histoquimica de IL-1ƒÀ, IL-6, TNF-ƒ¿, IL-10, receptor B1 e B2 de cininas e quantificacao de aminoacidos no hipocampo. Alem disso, o tecido hipocampal foi processado para as tecnicas de Nissl e Neo-Timm modificado. Alem disso, foi medida a temperatura corporea na fase aguda, duracao do periodo silencioso e frequencia de crises na fase cronica. Resultados: O tratamento com a lovastatina no grupo Pilo+Lova mostrou diminuicao da expressao de RNAm e das proteinas IL-1ƒÀ e TNF-ƒ¿ nas 3 fases do modelo Notamos tambem reducao nos niveis do receptor B1 e B2 de cininas na fase aguda e de IL-6 nas fases aguda e silenciosa do modelo. Houve um aumento da expressão de IL-10 na fase crônica e não houve alteração nos níveis dos aminoácidos no hipocampo dos animais desse grupo, quando comparado ao grupo Pilo. Foi observada uma normalização da temperatura corpórea dos ratos submetidos ao SE e tratados com lovastatina. Não houve diferença significativa entre o grupo Pilo e Pilo+Lova na duração da fase silenciosa e na freqüência de crises. Foi observada uma preservação de neurônios em CA1 e também uma diminuição no brotamento de fibras musgosas no grupo Pilo+Lova, quando comparado ao grupo Pilo, na fase crônica do modelo. Conclusão: O presente estudo demonstrou que o tratamento com a lovastatina diminuiu diversos parâmetros importantes relacionados com o dano neuronal induzido pelo SE, no hipocampo de ratos nas diferentes fases do modelo experimental de epilepsia induzido pela pilocarpina. / Introduction: Inflammation has been associated with several neurodegenerative diseases and experimental and clinical data suggest a crucial role in inflammatory processes in the development of epilepsy, particularly in seizure-generating mechanisms (ictogenesis) and transformation of a normal neuronal network into a network generating seizures. Lovastatin, a drug used in the reduction of cholesterol synthesis, is also related to the inflammatory response and can modulate cytokine production reducing the oxidative stress. Objectives: This study aimed to analyze the action of lovastatin in different stages of development model of epilepsy induced by pilocarpine in rats. Methods: Male Wistar rats were analyzed in three periods of the pilocarpine-induced epilepsy (350mg/kg) into phases: acute (24h), silent (15 days) and chronic (30 days after the 1st spontaneous seizure) and for each period of this model we used 4 groups of animals: saline-treated, lovastatin (Lova), pilocarpine (Pilo) and pilocarpine + lovastatin (Pilo+ Lova). Treatment with lovastatin (20 mg / kg) begun 2 h after the onset of status epilepticus (SE) and was administered for 15 days, twice a day the animals in the silent and chronic phases. The brain was processed for performing real-time PCR and immunohistochemistry of IL-1ƒÀ, IL-6, TNF-ƒ¿, IL-10 and kinin B1 and B2 receptors and quantification of amino acids in the hippocampus. Besides, the hippocampal tissue was processed for Nissl techniques and Neo-Timm. In addition, body temperature was measured in the acute phase and the duration of the silent period and seizure frequency in chronic phase was analyzed. Results: Treatment with lovastatin in Pilo + Lova group showed decreased expression of mRNA and proteins IL-1ƒÀ and TNF-ƒ¿ in the three phases of this model, We also noted reduction of kinin B1 and B2 receptor in the acute and IL-6 into acute and silent periods. There was an increased expression of IL-10 in the chronic phase of this model. There was no change in amino acids levels in the hippocampus of rats from Pilo+Lova group when compared to Pilo group. We observed a normalization of body temperature of rats subjected to SE and treated with lovastatin. There was no significant difference between the group Pilo and Pilo + Lova on the duration of the silent phase and in seizure frequency. We observed a preservation of neurons in CA1 and also a reduction of mossy fiber sprouting in Pilo+ Lova group as compared to the Pilo group in the chronic phase of the model. Conclusion: This study demonstrated that treatment with lovastatin decreased number of important parameters related to the neuronal damage induced by SE in the hippocampus of rats at different stages of the experimental model of epilepsy induced by pilocarpine. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:46Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-04-29 / Introdução: Estudo previamente realizado em nosso laboratório demonstrou que a restrição alimentar intra-uterina (RAIU) provoca um retardo na termorregulação dos recém-nascidos. Em neonatos o tecido adiposo marrom (TAM) é essencial para a termogênese, principalmente devido à presença de proteínas desacopladoras (UCPs), cuja expressão pode ser modificada pela ação de hormônios como os hormônios da tireóide, a leptina e a insulina, que podem ser afetados pela restrição alimentar. A bomba de cálcio do retículo sarcoplasmático (SERCA1), presente no músculo e recentemente identificada no TAM, pode contribuir para a produção de calor. Objetivo: Avaliar a expressão das proteínas UCP1, UCP2, UCP3 e da SERCA1 no TAM e da UCP3 e da SERCA1 no músculo esquelético (ME) de animais submetidos a RAIU, bem como o perfil plasmático de insulina, leptina e hormônios tireoidianos destes filhotes. Métodos: Ratos fêmeas Wistar EPM-1 controle (C) receberam ração ad libitum durante todo o período gestacional e o grupo restrito (R) recebeu 50% desta quantidade. Quinze horas após o nascimento (pico de expressão das UCPs), os filhotes foram pesados e decapitados para coleta de sangue (pool) para a dosagem plasmática de insulina, leptina, T3 e T4 por ELISA. Foram coletados TAM e ME, para determinação da expressão das UCPs e da SERCA1 por imuno-histoquímica. Para análise dos resultados, utilizou-se o teste “t” de Student não pareado, com nível de significância de 5%. Resultados: Os animais R (n=16) apresentaram durante a gestação um ganho de peso corporal (g) significantemente inferior quando comparado ao C (n=16), (27,6 ± 3,8 e 109,0 ± 4,1). Os filhotes R (n=172) apresentaram redução significante do peso corporal (g) ao nascimento em relação aos filhotes C (n=169) (4,82 ± 0,05 e 5,83 ± 0,04); entretanto, não houve redução no número de filhotes por ninhada. A RAIU levou a um aumento significante na expressão (pixels) da UCP1 e da UCP2 no TAM da prole R em relação à prole C (em 42% e 53%, respectivamente). Não observamos diferença significante entre os grupos em relação à expressão da UCP3 e da SERCA1 no TAM e no ME. A concentração plasmática de insulina (ng/ml) foi significantemente maior nos filhotes R (n=8) em relação aos C (n=13) (3,34 ± 0,78 e 1,17 ± 0,18) e os níveis plasmáticos de T3 (ng/ml) foram significantemente menores nos filhotes R (n=10) quando comparados aos C (n=14) (0,82 ± 0,06 e 1,09 ± 0,08). Não houve diferenças significantes para as dosagens plasmáticas de leptina (pg/ml) (R (n=8) 987,79 ± 261,08 e C (n=11) 1255,54 ± 392,37) e T4 (ng/ml) (R (n=10) 20,99 ± 3,74 e C (n=12) 16,00 ± 1,68). Conclusão: O atraso no desenvolvimento da termorregulação previamente descritos nesses animais não parece resultar de redução na termogênese, mas de aumento na termólise, pois a RAIU provocou baixo peso dos filhotes ao nascimento, levando a uma maior relação superfície/ volume. A maior expressão da UCP1 e UCP2 no TAM observada nos filhotes restritos possivelmente ocorreu como um mecanismo compensatório para aumentar a termogênese, o que pode ter sido modulado por ação hormonal. / Background: Previous study from our laboratory has shown that intrauterine food restriction (IUFR) delayed thermoregulation of the newborns. In neonates brown adipose tissue (BAT) is essential for thermogenesis mainly due to the presence of uncoupling proteins (UCPs) and their expression can be modified by action of hormones such as thyroid hormone, leptin and insulin, which can be affected by food restriction. The sarcoplasmic reticulum Ca++ ATPase, (SERCA1) recently identified in BAT may contribute to heat production. Aim: The aim of this study was to evaluate the protein expression of UCP1, UCP2, UCP3 and SERCA1 in BAT and UCP3 and SERCA1 in skeletal muscle (SM) and the plasmatic concentration of insulin, leptin, T3 and T4 of newborn rats exposed to IUFR. Methods: Female Wistar EPM-1 control rats received chow ad libitum during pregnancy period (C) and food-restricted rats (R) received 50% of the amount ingested by C. Fifteen hours after birth, newborns were weighted and sacrificed by decapitation. Blood was collected for determination of insulin, leptin, T3 and T4 by ELISA. BAT and SM were used for determination of protein expression (UCPs and SERCA1) by immunohistochemistry. Unpaired Student’s t-test was used for statistical analysis of the results (p<0,05). Results: R animals (n=16) showed a significant lower weight gain (g) during pregnancy when compared to C (n=16) (27,6 ± 3,8 and 109,0 ± 4,1). R pups (n=172) showed a significant reduction in their body weight (g) at birth when compared to C (n=169) (4,82 ± 0,05 and 5,83 ± 0,04); however, there was no reduction in number of pups per litter. IUFR caused a significant increase in the expression (pixels) of UCP1 and UCP2 in BAT of the pups (42% and 53% respectively). UCP3 and SERCA1 expression in BAT and SM showed no significant differences between groups. Plasmatic insulin (ng/ml) was significantly higher in R pups (n=8) when compared to C (n=13) (3,34 ± 0,78 and 1,17 ± 0,18) and T3 levels (ng/ml) was significantly lower in R pups (n=10) when compared to C (n=14) (0,82 ± 0,06 and 1,09 ± 0,08). No differences between groups were found for leptin (pg/ml) (R (n=8) 987,79 ± 261,08 and C (n=11) 1255,54 ± 392,37) and T4 (ng/ml) levels (R (n=10) 20,99 ± 3,74 and C (n=12) 16,00 ± 1,68). Conclusion: The delay in development of thermoregulation previously described in these animals appears not to result from impairment in thermogenesis, but from an increase in heat loss, since IUFR caused low birth weight in pups, leading to greater surface/ volume ratio. The higher expression of UCP1 and UCP2 in BAT showed by R pups possibly occurred as a compensatory mechanism to increase thermogenesis, which may have been modulated by hormonal regulation. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Ilex paraguariensis A. St. Hil. é uma espécie nativa da América do Sul popularmente conhecida como mate ou erva-mate. Três principais classes de compostos bioativos estão presentes nas folhas: metilxantinas, polifenóis e saponinas, nas quais são atribuídas diversas atividades biológicas, incluindo efeitos no metabolismo lipídico. Do ponto de vista químico e biológico, essa espécie é bastante estudada. Em relação ao processo de obtenção, enriquecimento e purificação das frações do mate, porém, a pesquisa tecnológica revela-se restrita. Este trabalho teve como objetivo avaliar a atividade dos principais grupos de compostos do mate sobre o metabolismo de ratos Wistar submetidos à uma dieta hiperlipídica. A extração de polifenóis, metilxantinas e saponinas das folhas foi otimizado mediante um desenho experimental do tipo Box-Behnken, obtendo-se rendimentos máximos de 357, 41 e 15 mg/g de planta seca, respectivamente. Uma fração enriquecida em polifenóis e metilxantinas (MXPL) e outra enriquecida em saponinas (SFL) foram preparadas por fracionamento em fase sólida de resina polimérica, metanol e água em gradiente decrescente de polaridade. Os rendimentos para polifenóis, metilxantinas e saponinas foram 497, 88 e 245 mg/g de material seco, respectivamente. Vinte quatro ratos Wistar machos foram submetidos a uma dieta hiperlipídica e seis ratos submetidos à uma dieta padrão durante cinco semanas. Posteriormente, foram separados em dois grupos controles (dieta padrão e hiperlipídica), um grupo tratado com extrato de mate (YME), outro tratado com MXPL e outro tratado com SFL. Nenhum aumento significativo no peso corporal em ratos com dieta hiperlipídica foi observado, contudo, houve alterações evidentes em outros parâmetros relevantes relacionados ao metabolismo. Resultados referentes à redução de peso corporal, níveis plasmáticos de glicose e lipogênese se contrapõem a outros antes relatados na literatura, sugerindo uma relação com o modelo animal utilizado. Atividades observadas para o extrato e frações indicam claramente que essas podem ser diferentes e até opostas, levando acreditar que os principais compostos do mate possuam diferentes efeitos no metabolismo quando testados separadamente. / Ilex paraguariensis A. St. Hil. is a South American native species commonly known as mate or yerba mate and is widely used as stimulant tea-like beverages. Methylxanthines, polyphenols and saponins are the main compounds present in its leaves. To these, are attributed several biological activities, including effects in lipid metabolism. Although there are a range of studies of mate, in the point of view of technological processing and biological testing of enriched and purified fractions revealed to be restricted. In this sense, the aim of this study is to evaluate the activity of the main compounds found in mate on the lipid metabolism of male Wistar rats fed with a high-fat diet. For this propose, it was obtained and optimized an extract of mate leaves (YME) by a Box-Behnken design, obtaining maximum yields of 357, 41 and 15 mg/g dry material, respectively. Subsequently, the main compounds were separated by solid phase extraction and fractionation using a polymer resin, methanol and water, in decreasing gradient polarity, achieving an enriched fraction of polyphenol and methylxanthines (MXPL) and an enriched fraction of saponins (SFL). Yields for polyphenols, saponins and methylxanthines were 497, 88 and 245 mg/g of dry material, respectively. Twenty four male Wistar rats were submitted to a high-fat diet and six to a standard diet, during five weeks and separated in five groups (standard diet (control) (n = 6); high-fat diet (n = 6); YME-treated group (n = 6); MXPL-treated group (n = 6); SFL-treated group (n = 6). No significant increase in rats body weight fed with high-fat diet was observed. However, there were evident alterations in fat other relevant parameters related to metabolism. Dissimilar results regarding the reduction of body weight, plasma levels of glucose and lipogenesis, for instance, are opposed to other studies, previously reported in the literature, suggesting that the animal model might be determinant in the evaluation of these activities. Likewise, effects observed in the crude extract and enriched fractions clearly indicate that these may be different, even opposite, leading to believe that the main compounds of mate have different effects on metabolism when are tested separately.

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro / O propósito deste estudo foi analisar o comportamento do osso alveolar na remodelação óssea sob carga fisiológica e ortopédica após a disjunção rápida da sutura palatina mediana durante 14 dias, com e sem aplicação de laser de baixa potência e comparar imagens obtidas por técnica radiográfica convencional com microtomografias computadorizadas. O aparelho de laser utilizado foi de diodo de arsenieto de gálio-alumínio (AlGaAs) (830&#61544;m; 100mW, onda contínua, 126J/cm2, 29 segundos) aplicado à sutura palatina mediana de ratos Wistar, machos, de 6 semanas de vida. Foram utilizados 65 ratos divididos em um grupo controle (GC) contendo 5 ratos e dois experimentais I e II (GE I e GE II), com 30 ratos cada, ambos GE submetidos à disjunção imediata, sendo que o GE II foi irradiado imediatamente após a disjunção. Os GE I e II foram subdivididos em períodos de disjunção imediata, 6, 24, 48 horas, 7 e 14 dias. Dois amostras de cada período dos GC e GE foram radiografadas (convencional) e processadas para captura de imagens em scanner micro-CT (Scanco Medical, Zurik, Suíça), com 24KV de energia e 3,8&#956;m de resolução espacial e o restante foram processadas para serem analisadas histologicamente coradas com hematoxilina e eosina e tricrômico de Masson. Os resultados foram avaliados histológica e radiograficamente. O trabeculado ósseo recém-formado a partir dos bordos ósseos da sutura foi observado nos períodos de 2, 7 e 14 dias do GE II, 7 e 14 dias do GE I. O presente experimento demonstrou que a atividade osteoblástica aumenta a atividade da osteosíntese de modo mais expressivo após aplicação do laser de baixa potência, porem é necessários mais estudos em biologia molecular para desvendar os seus efeitos ao nível celular. As microtomografias computadorizadas mostraram maior riqueza de detalhes para analisar o rompimento da sutura palatina mediana e seu reparo com o depósito de tecido ósseo do que as radiografias convencionais. / The purpose of this study was to evaluate the behavior of the alveolar bone on bone remodeling under physiological load and on after rapid midpalatal suture expansion during a 14-day period, with and without low-level laser irradiation and to compare images obtained by conventional radiographic technique with microtomografias computed. The laser device was a gallium-aluminum-arsenide (GaAlAs) diode laser (830 &#61544;m; 100 mW, continuous wave, 126 J/cm2, 29 seconds) applied to the midpalatal suture of 6-week-old male Wistar rats. Sixty-five rats were assigned in a control group (CG) containing 5 rats and two experimental I and II (EG I and EG II), with 30 rats each, both EG submitted to expansion immediately, while the EG II was irradiated pos expansion immediately. The EG I and II were divided into periods of immediate midpalatal suture expansion, 6 hours, 1, 2, 7 and 14 days). . Two samples of each period of CG and EG were radiographed (conventional) and processed to capture images in micro-CT scanner (Scancem Medical, Zurik, Switzerland) with 24kV of energy and 3.8 mm in spatial resolution and the rest were processed for are analyzed histologically stained with hematoxylin and eosin and Masson's trichrome.The results were evaluated histologically and radiographically. Bone trabeculae recently formed from the bone borders of the suture were observed in the periods of 2, 7 and 14 days of EG II, and 7 and 14 days of EG I. The present experiment demonstrated that the osteoblastic activity increases the osteosynthesis activity in a more manner after low-level laser irradiation. However, more studies in the field of molecular biology are necessary to determine its effects at cellular level. The computed microtomographs provided a more detailed analysis of midpalatal suture opening and its repair by bone tissue deposition than conventional radiographs.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A obesidade e suas complicações metabólicas afetam o sistema endócrino e vários órgãos, tais como os testículos. Portanto, o objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos da ingestão de diferentes dietas hiperlipídicas (rica em ácidos graxos saturados e/ou poliinsaturados) na massa corporal, no metabolismo de carboidratos e na morfologia testicular em ratos aos sete meses de idade. 39 ratos machos Wistar (três meses de idade) foram divididos em 4 grupos: SC (standard chow; n = 9), HF-S (dieta hiperlipídica rica em ácidos graxos saturados; n = 10), HF-P (dieta hiperlipídica rica em ácidos graxos poliinsaturados; n = 10), HF-SP (dieta hiperlipídica rica em ácidos graxos saturados e poliinsaturados; n = 10). A massa corporal foi monitorada semanalmente, até o final do experimento. Ao sacrifício (sete meses de idade), amostras de sangue foram coletadas e os testículos foram dissecados, pesados e processados para análises histomorfométrica, imunohistoquímica e bioquímica. Os depósitos de gordura genital foram dissecados e pesados. Os dados foram analisados por ANOVA e pós-teste de Bonferroni, considerando p < 0,05. As dietas hiperlipídicas promoveram aumento na massa corporal dos animais quando comparado ao grupo SC (p < 0,0001). Corroborando com esse resultado, os depósitos de gordura genital dos grupos hiperlipídicos (HF-S, HF-P e HF-SP) apresentaram aumento de 67%, 91% e 90% (p = 0,0004) em relação ao grupo SC, respectivamente. Quanto aos parâmetros séricos, os animais dos grupos HF-S e HF-SP apresentaram hiperglicemia (p = 0,0060), hiperinsulinemia (p = 0,0030), hipercolesterolemia (p = 0,0021). Todos os grupos hiperlipídicos apresentaram hiperleptinemia (p = 0,0019). Os níveis de triglicerídeos e testosterona não diferiram entre os grupos. Em relação ao testículo, os grupos SC, HF-P e HF-SP apresentaram maior altura do epitélio seminífero quando comparado ao grupo HF-S (p = 0,0003). No que diz respeito ao diâmetro dos túbulos seminíferos, verificou-se uma diminuição no grupo HF-SP, em comparação ao grupo SC (p = 0,0010). A proliferação celular foi reduzida no grupo HF-S comparado ao grupo SC (p = 0,0450). Não foram observadas diferenças na massa testicular e na concentração de colágeno. Diante do exposto, a administração de dieta HF, independentemente da qualidade do lipídio, promoveu o sobrepeso em ratos adultos. No entanto, a dieta rica em ácidos graxos saturados (banha de porco) promoveu alterações no metabolismo dos carboidratos e na morfologia testicular, com redução no diâmetro dos túbulos seminíferos, na altura do epitélio seminífero e na proliferação das células da linhagem espermatogênica. Estas alterações estão possivelmente relacionadas à distúrbios na espermatogênese. / Obesity and its metabolic complications affects the endocrine system and multiple organs such as the testes. This study aimed to evaluate the effects of different high-fat diets (rich in saturated and / or polyunsaturated fatty acids) on body mass, carbohydrate metabolism and testicular morphology in rats at seven months old. 39 male Wistar rats (three months old) were divided into four groups: SC (standard chow, n = 9), HF-S (high fat diet rich in saturated fatty acids, n = 10), HF-P (high fat diet rich in polyunsaturated fatty acids, n = 10), HF-SP (high fat diet rich in saturated and polyunsaturated fatty acids, n = 10). Body mass was monitored weekly until the end of the experiment. At the sacrifice (seven months old), blood samples were collected and the testes were dissected, weighed and processed for histomorphometrical, immunohistochemical and biochemical analysis. Genital fat deposits were dissected and weighed. Data were analyzed by one-way ANOVA and Bonferroni post hoc test, considering p < 0.05. Different high-fat diets promoted an increased in body mass compared with the SC group (p < 0.0001). Accordingly, the genital fat deposits were higher in the high-fat groups (HF-S, HF-P, HF-SP) than in the SC group, showing an increase of 67%, 91% and 90%, respectively (p = 0.0004). Regarding serum parameters, the animals in the HF-S and HF-SP groups presented hyperglycemia (p = 0.0060), hyperinsulinemia (p = 0.0030), hypercholesterolemia (p = 0.0021). All of the hyperlipidemic groups showed hyperleptinemia (p = 0.0019). Serum triglyceride and serum testosterone levels did not differ among the groups. Concerning the testis, the SC, HF-P and HF-SP groups showed an increase on seminiferous epithelium height compared with the HF-S group (p = 0.0003). As the seminiferous tubule diameter, there was a decrease in the HF-SP group in comparison with the SC group (p = 0.0010). Cell proliferation was reduced in HF-S group compared with the SC group (p = 0.0450). Among the groups, no difference was observed in the testicular mass and in collagen level. In conclusion, the high fat diet administration, independent of the lipid quality, promotes overweight. Diet rich in saturated fatty acids (lard) alters the carbohydrate metabolism and the testicular morphology with reductions of seminiferous epithelium height, seminiferous tubule diameter and cell proliferation which could be related to a disturbance of spermatogenesis.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / This work investigated the effect of intermittent hypoxic training (IHT) sessions under bodyweight, food intake and biochemical parameters in Wistar rats fed normo fat (NF) and high fat (HF) diets. Forty rats were divided in two groups, which were fed a NF or a HF diet. Afterwards the rats were subdivided in four groups and submitted to intermittent hypoxia (IH) or normoxia (N) sessions for 30 days. Groups formed: NF/N, NF/IH, HF/N and HF/IH. The groups submitted to IHT followed this protocol: 15 minutes hypoxia, 10-15% inspired O2 and 5 minutes for reoxigenation). Sham group was exposed to the same conditions but with normal O2 concentrations (21%). Bodyweight and food intake were measured every two days. The rats were anesthetized on day 31 and the blood was sampled by cardiac punction for analyses. The biochemical parameters analyzed were: total cholesterol (TC), triglycerides (TG), high density cholesterol (HDL), glucose, lactate dehidrogenase (LDH), alanine aminotransferase (ALT), aspartate aminotransferase (AST), and muscle and hepatic glycogen. In regard to diets, the HF group promoted the biggest weight gain just in normoxia groups.The food intake decrease significantly in HF/IH subgroup compared to HF/N. Although the average of the corporal weight did not decrease significantly, the differences in percentages had shown a reduction in HF/IH subgroup. In the profile biochemist, the IHT only modified the LDH, increasing it in NF subgroup and the AST, diminishing it in HF subgroup. Our findings allow to suggest that the IHT can have a promising role in the prevention of the obesity and more studies are needed to evaluate its effect in the prevention/treatment of other diseases. / Este trabalho investigou o efeito de sessões de treinamento hipóxico intermitente (THI) sobre o peso corporal, consumo calórico e variáveis bioquímicas em ratos Wistar alimentados com dieta padrão (DP) ou dieta hipercalórica (DH). Quarenta ratos foram divididos em dois grupos e alimentados com DP ou DH. Na seqüência foram subdivididos em quatro grupos e submetidos às sessões de hipóxia intermitente (HI) ou normóxia (N) por 30 dias. Os grupos formados foram: DP/N, DP/HI, DH/N e DH/IH. Os grupos submetidos ao THI seguiram o seguinte protocolo: 15 minutos de hipóxia com a concentração de O2 inspirado variando entre 10 a 15% e 5 minutos para reoxigenação. Os grupos normóxia foram expostos às mesmas condições, porém com concentrações normais de O2 (21%). O peso corporal e o consumo de ração foram avaliados a cada dois dias. No dia 31, os animais foram anestesiados e o sangue foi coletado por punção cardíaca. As variáveis bioquímicas analisadas foram: colesterol total (CT), triglicerídeos (TG), lipoproteína de alta densidade (HDL), glicose, lactato desidrogenase (LDH), alanina aminotransferase (ALT), aspartato aminotransferase (AST), glicogênio muscular e hepático. Com relação às dietas, a DH promoveu maior ganho de peso somente nos grupos em normoxia. A ingesta calórica diminuiu significativamente no subgrupo DH/HI. Embora a média do peso corporal não tenha diminuído significativamente, as diferenças em percentagens mostraram uma redução no subgrupo DH/HI. No perfil bioquímico, o THI alterou somente a LDH, aumentando-a no subgrupo DP e a AST, diminuindo-a no subgrupo DH. Nossos achados permitem sugerir que o THI pode ter um papel promissor na prevenção da obesidade e mais estudos são necessários para avaliar seus efeitos na prevenção/tratamento de outras patologias.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:00Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-03-24Bitstream added on 2014-06-13T20:10:21Z : No. of bitstreams: 1 barbosa_ra_me_rcla.pdf: 1782892 bytes, checksum: c33b7a80d34353572789d680df7e20ec (MD5) / O diabetes tipo I, causado pela destruição das células beta do pâncreas, promove alterações metabólicas que podem ser acompanhadas de prejuízos em órgãos e tecidos específicos. O intestino delgado é um órgão que apresenta uma série de alterações, principalmente de caráter morfológico e funcional. A atividade física regular por sua vez, pode contribuir para o controle desta situação, sendo um fator importante, já que grande parte da população mundial sofre com esta doença. Este trabalho teve como objetivo analisar os aspectos morfológicos e histoquímicos do intestino delgado e a ultra-estrutura de células caliciformes de ratos diabéticos, a fim de se observar possíveis alterações causadas pela doença. Além disso, este trabalho buscou avaliar de que maneira o exercício físico pode interferir nestas modificações e contribuir para o controle do estado diabético. Neste estudo, ratos Wistar foram distribuídos em 4 grupos: controle sedentário (CS), controle treinado (CT), diabético sedentário (DS) e diabético treinado (DT). O diabetes foi induzido por aloxana monoidratada Sigma (35 mg/kg de peso corporal). Os grupos treinados realizaram um protocolo de exercícios físicos, que consistiu em natação com cargas acopladas ao corpo. Durante o período experimental, foram realizadas avaliações de peso corpóreo e ingestão hídrica e alimentar. Após o período experimental, o sangue dos animais foi coletado para análise de glicemia. Os intestinos delgados dos animais foram retirados, pesados e o comprimento foi medido. Amostras de duodeno, jejuno e íleo foram processadas e analisadas para a microscopia de luz e para a microscopia eletrônica de transmissão. O diabetes causou um aumento geral do intestino delgado, também devido à alteração de características histomorfométricas, tais como aumento de vilosidades e da espessura da camada mucosa... / Type I diabetes, caused by pancreatic beta cells destruction, promotes metabolic changes that may be accompanied by losses in specific organs and tissues. The small intestine is an organ that shows several changes, mainly of morphological and functional aspects. Regular physical activity can contribute to control this situation being an important factor, since most of the world population suffers from this disease. This study aimed to analyze the morphological and histochemical aspects of the small intestine and goblet cells ultrastructure in diabetic rats, in order to observe possible changes caused by the disease. In addition, this study aimed to evaluate how exercise can interfere on these changes and contribute to control the diabetic state. In this study, Wistar rats were divided into 4 groups: sedentary control (SC), trained control (TC), sedentary diabetic (SD) and trained diabetic (TD). Diabetes was induced by alloxan monohydrate Sigma (35 mg/kg body weight). Trained groups performed an exercise protocol, which consisted of swimming with loads attached to the body. During the experimental period, assessments were made on body weight, water and food intake. After the trial period, the animals' blood was collected for glucose analysis. The small intestines of the animals were removed, weighed and the length was measured. Samples of duodenum, jejunum and ileum were processed and analyzed for light microscopy and for transmission electron microscopy. Diabetes caused a general increase in the small intestine, also due to changes on histomorphometric features, such as increased villi and increased thickness of the mucosa. In addition, the disease promoted histochemical changes as demonstrated by reduced amounts of collagen fibers, reticular fibers and general proteins, and increased amounts of neutral polysaccharides and general nucleic acids. About goblet cells, diabetes increased... (Complete abstract click electronic access below)