La creciente demanda de metodologías analíticas simples, selectivas y de bajo coste para el análisis cuantitativo o semicuantitativo de analitos de variada naturaleza en muestras complejas ha favorecido el desarrollo de alternativas analíticas a los métodos clásicos de análisis. En este contexto, en la presente tesis se ha planteado como objetivo la construcción de biosensores robustos y económicos y cuya utilización no requiera supervisión profesional, para la detección descentralizada y fiable de compuestos de interés en la seguridad alimentaria y en el control medioambiental. Debido a la experiencia de nuestro grupo de trabajo y a las demostradas ventajas del material grafito-epoxi (GEC) como transductor electroquímico, se dirigieron los esfuerzos hacia la construcción de nuevos transductores basados en compósitos rígidos grafito-epoxi. Así, se abordaron dos líneas distintas de investigación: la primera, dirigida hacia la construcción de transductores biocompósitos grafito-epoxi (GEB) modificados en volumen con biomoléculas de afinidad universal, para la inmovilización de enzimas, anticuerpos, u oligonucleótidos y, la segunda, en el desarrollo de nuevos protocolos para la detección electroquímica de biomoléculas inmovilizadas en partículas magnéticas, mediante el diseño de un sensor con propiedades magnéticas, m-GEC. Abordando el primer eje de esta tesis, se estudiaron diferentes moléculas de afinidad universal para la preparación de biocompósitos, tales como la proteína A y la proteína G (para la inmovilización de anticuerpos de diferentes especificidades a través del Fc) y la estrept(avidina), para la inmovilización de prácticamente cualquier analito biotinilado, sea este enzimas, oligonucleótidos o anticuerpos. Así, se construyeron exitosamente biocompósitos de avidina (Av-GEB) capaces de inmovilizar con una excelente orientación, oligonucleótidos, enzimas y anticuerpos. Del mismo modo se diseñaron y construyeron plataformas universales para la inmovilización de anticuerpos basados en biocompósitos grafito-epoxi de proteína A (ProtA-GEB). Usando esta plataforma se consiguieron inmovilizar anticuerpos de las más variada naturaleza a través de su fracción constante para la detección de diferentes analitos como, por ejemplo, atrazina en zumo de naranja o en aguas embotelladas, alcanzando límites de detección por debajo del límite de 0.1 ?g L-1 fijado por la legislación europea. Además de estas plataformas electroquímicas de afinidad universal, se construyeron con éxito inmunocompósitos grafito-epoxi de afinidad específica (Ab-GEB), en concreto inmunocompósitos anti-atrazina para la determinación de este analito en muestras reales con una alta sensibilidad. Resultados muy prometedores se han obtenido también con el segundo eje de la presente tesis, mediante ensayos llevados a cabo con un nuevo sensor magnético basado en compósito grafito-epoxi (m-GEC) y esferas magnéticas modificadas con bioespecies. Las partículas magnéticas representan una nueva estrategia para bioanálisis que aportan numerosas ventajas adicionales. Después de un estudio exhaustivo de la inmovilización de biomoléculas sobre diferentes tipologías de esferas magnéticas funcionalizadas por diferentes grupos químicos (tosil y carboxilo) o moléculas biológicas (proteína A), se consiguió inmovilizar con éxito anticuerpos para la determinación de una familla de antibióticos (sulfonamidas) en muestras alimentarias y de anticuerpos para la determinación de atrazina en muestras alimentarias y medioambientales. Con esta estrategia se consiguió detectar atrazina en muestras tales como agua de consumo y zumo de naranja, y sulfonamidas en leche fresca o UHT entera, desnatada y semidesnatada. En este último caso, se ha conseguido rebajar en un factor de 100 los límites de detección fijados por la legislación europea. Por último, y para concluir, con el objetivo final de desarrollar en un futuro un sistema de detección de DNA de E. coli patógenas basado m-GEC y detección electroquímica, para la aplicación en seguridad alimentaria en cuanto a bacterias patógenas, se ha desarrollado un sistema de primers específicos basados en experimentos de RT-PCR. / The increasing interest in simple, selective and cost-effective analytical methodologies for quantitative analysis in different complex samples is related with the development of analytical alternatives beside instrumental methods of analysis. This thesis is focused on the development of robust, low-cost, user-friendly biosensors, for the accurate detection of compound related with food safety and environmental monitoring. One of the main expertise area in our group is the construction of conducting and rigid graphite-epoxy composites. Due to our experience as well as the improved properties of this transducer material, the research was focused on the construction of novel transducers based on rigid graphite-epoxy composite (GEC). On one hand, this thesis was focused on the construction of graphite-epoxy biocomposite (GEB) transducer bulk-modified with universal affinity biomolecules for the improved immobilization of enzymes, antibodies and oligonucleotides. On the other hand, the development of novel strategies for the electrochemical detection of biomolecules previously immobilized on magnetic beads was also performed, by the construction of a novel magneto sensor based on graphite-epoxy composite (m-GEC). In order to design graphite-epoxy biocomposite based-transducers, different universal affinity molecules such as protein A and G -for the immobilization of antibodies through the Fc region-, and strept(avidin) -for the immobilization of almost any biotinylated biomolecules such as enzymes, DNA or antibodies- were studied. Avidin graphite-epoxy biocomposite transducers -Av-GEB- with improved immobilizing properties for biotinylated DNA, antibodies and enzymes were constructed and electrochemically evaluated. In a similar way, protein A graphite-epoxy biocomposite (ProtA-GEB) transducers for the improved immobilization of antibodies with different specificities were also constructed. Atrazine in bottled water samples as well as orange juices were determined by immunosensing with this strategy, reaching the maximum residues limits established by the European Commission (0.1 ?g L-1). Beside these universal affinity platforms, graphite-epoxy immunocomposite transducers (Ab-GEB) with specific affinity were constructed for the specific detection of atrazine in real samples with high sensitivity. On the other hand, very promising results were also achieved with a novel magneto sensor based on graphite-epoxy composite (m-GEC) and magnetic beads modified with biomolecules. Magnetic beads provide further improvement to a bioassay, such as better and easier separation of the biomolecule from the complex sample. After a carefully study of the different modified magnetic beads (such as tosyl, carboxilate and Protein A modified magnetic beads), a class specific antibodies for the determination of sulfonamides as well as the specific anti-atrazine antibody were immobilized on tosyl modified magnetic beads. The detection of atrazine in water samples and orange juices, as well as sulfonamides in skimmed, semi-skimmed and full cream UHT and raw full cream milk samples was achieved following this strategy with remarkable sensitivity and reaching by far the maximum residues limits established by the European Commission. Finally, the design of a set of specific primers for the detection of pathogenic E. Coli by RT-PCR has been described. This system will be used in the electrochemical genosensing based on m-GEC of pathogenic bacteria in a near future.

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El selenio es un nutriente esencial para los seres vivos. Recientemente se ha demostrado que la selenometilselenocisteína, forma orgánica de selenio, presenta efectos quimiopreventivos en cáncer de colon, pulmón, próstata y mama. Dado esto, se hace necesaria la identificación de biomarcadores capaces de indicar el estado funcional de selenio. Mediante el uso de una aproximación proteómica en un modelo animal, se han determinado dos posibles bioindicadores. Ellos son las proteínas Transtiretina (TTR) y Apolipoproteína E (ApoE). Ambos presentaron un aumento en su expresión proporcional a la ingesta de selenometilselenocisteína. El presente trabajo de título pretende determinar las propiedades fisicoquímicas, peso molecular (PM), punto isoeléctrico (pI) e hidrofobicidad superficial promedio (HSP) de estos bioindicadores y estudiar un método de purificación preeliminar para la Transtiretina. Para la determinación del PM y pI, se desarrollaron técnicas de SDS-PAGE e IEF en el equipo PhastSystem, escogido por su elevada sensibilidad de detección. Dado que esto fue infructuoso, se obtuvieron las propiedades desde geles bidimensionales realizados por la Profesora Andrea Mahn. Así, se estimó que el PM para TTR es de 13 KDa y el de ApoE 20 KDa, mientras que el pI de TTR se encuentra entre 5,6 a 6,0 y el pI de ApoE entre 5,0 y 5,6. Para estimar la hidrofobicidad superficial promedio, obtenida como la contribución de todos los aminoácidos expuestos en la superficie de la proteína, se utilizaron las estructuras disponibles en bases de datos para TTR y se construyeron modelos para ApoE. Como resultado del modelamiento por homología utilizando el programa MODELLER se obtuvieron dos modelos ligeramente diferentes para la estructura tridimensional de ApoE. Ambos presentan más del 90% de los aminoácidos en las zonas permitidas del gráfico de Ramachandran, además otros parámetros evaluados también resultaron ser positivos. Así, se concluye que los modelos presentan buenas probabilidades de asemejarse a la estructura real de la proteína. Finalmente, se obtuvo que la hidrofobicidad superficial promedio para TTR es de 0,24 ± 0,01 y de 0,33 ± 0,02. Como proceso de purificación de TTR, se postularon dos etapas. La primera corresponde a un sistema de dos fases acuosas (ATPS) formados por PEG-1000 y Fosfato, cuyo largo de línea de equilibrio fuera de 45, y la segunda etapa corresponde a la aplicación de una muestra tomada de la fase inferior del ATPS a una resina de afinidad usando como ligado tiroxina. Como resultado, se obtuvo un ATPS capaz de remover proteínas de elevado peso molecular y parcialmente albúmina (migran preferentemente hacia la fase superior) desde muestras de suero de rata, de manera reproducible. Se postula que TTR migra preferentemente hacia la fase inferior, sin embargo sería necesario realizar a futuro ensayos Western Blot o espectrometría de masa para comprobarlo. Con respecto a la cromatografía de afinidad realizada, tampoco es posible asegurar concluyentemente que TTR queda adsorbida o no en la matriz, sin embargo los resultados presentan algunos indicios positivos, cuyo análisis en profundidad permitiría determinar si los resultados obtenidos fueron positivos o no.

La disponibilitat de metalls per part dels organismes no depèn únicament de la concentració total sinó també de l'especiació d'aquestes subtancias. En general, la disponibilitat de les espècies metàl•liques en medis naturals per a organismes està determinada per un conjunt d'esdeveniments encadenats on el equilibri representa només un cas particular de la situació dinàmica general. Espècies poc definides químicament, com ara àcids húmics i fúlvics, actuen com a lligands de metalls i juguen un paper clau en la circulació i la determinació de les propietats ecotoxicològiques de les espècies metàl•liques en medis naturals. La polifuncionalitat dels àcids húmics i fúlvics és descrita en aquest estudi utilitzant mètodes termodinàmics i mecano-estadístics. La tècnica Diffusive Gradients in Thin films (DGT) s'ha utilitzat per mesurar el flux disponible de metall en un sistema sintètic que conté complexos metàl•lics. La principal conclusió d'aquest estudi és que el disc de resina quelant dels sensors juga un paper clau en la determinació del grau de labilitat d'un complex mesurat amb aquesta tècnica. D'altra banda, a un pH baix, o concentració alta de lligand, es pot aconseguir l'equilibri entre la resina del sensor i el metall en el si de la dissolució, pertorbant l'acumulació lineal a temps de contacte relativament curts. Es presenta una anàlisi d'aquests fenòmens, així com la seva justificació mitjançant models teòrics. / La disponibilidad de metales por parte de los organismos no depende únicamente de la concentración total sino también de la especiación de estas subtancias. En general, la disponibilidad de las especies metálicas en medios naturales hacia organismos está determinada por un conjunto de eventos encadenados cuyo equilibrio representa sólo un caso particular de la situación dinámica general. Especies poco definidas químicamente, tales como ácidos húmicos y fúlvicos, actúan como ligandos de metales y juegan un papel clave en la circulación y la determinación de las propiedades ecotoxicológicas de las especies metálicas en los medios naturales. La polifuncionalidad de los ácidos húmicos y fúlvicos es descrita en este estudio usando métodos termodinámicos y mecano-estadísticos. La técnica Diffusive Gradients in Thin films (DGT) se ha utilizado para medir el flujo disponible de metal en un sistema sintético que contiene complejos metálicos. La principal conclusión de este estudio es que el disco de resina quelatante de los sensores juega un papel clave en la determinación del grado de labilidad de un complejo medido esta técnica. Por otra parte, a un pH bajo, o a concentración alta de ligando, puede ser alcanzado el equilibrio entre la resina del sensor y el metal en el seno de la disolución, perturbando la acumulación lineal a tiempos de contacto relativamente cortos. Se presenta un análisis de estos fenómenos, así como su justificación mediante modelos teóricos. / Availability of metals for organisms does not depend only on the total metal concentration but also on speciation of these species. In general, the availability towards organisms is determined by a set of chained events whose equilibrium approach only represents a simplified limiting case of the general dynamic situation. Poorly defined species such as humic and fulvic acids, act as metal ligands and play a key role in the circulation and determination of the ecotoxicological properties of metal species in the natural media. Thermodynamic and statistical mechanics methods are here applied to describe the polyfunctionality of humic and fulvic acids. The Diffusive Gradients in Thin Films (DGT) has been used to measure the available metal flux in a synthetic system that contains metal complexes. A main conclusion of this study is that the chelating resin disc of the sensor plays a key role in determining the lability degree of a complex measured with DGT. Moreover, at relatively low pH, or in presence of high affinity ligands, the equilibrium with the bulk metal concentration can be approached in the sensor, disturbing linear accumulations at relatively short deployment times. Analysis of these phenomena and theoretical explanations are reported.

Introducción: en la presente revisión conoceremos los detalles de esta nueva prueba de laboratorio, utilizada para cuantificar los anticuerpos neutralizantes contra el SARS-CoV-2. Esta prueba diagnóstica comienza a tener un mayor protagonismo, a razón del proceso de infección y vacunación en el mundo, para comprender los misterios del correlato de protección inmunológica. Contenido: los anticuerpos neutralizantes tienen la capacidad de bloquear la capacidad del virus, para unirse al receptor ACE2 en las células humanas y estos anticuerpos permiten eliminar el efecto de microorganismos invasores. Su actividad se genera por las proteínas situadas en la superficie de los virus, a las que se unen para «bloquear» la infección. Los anticuerpos neutralizantes se definen in vitro por su capacidad para bloquear la entrada, fusión o salida del coronavirus, es decir son anticuerpos funcionales. Resumen: en la actualidad existen diferentes pruebas de laboratorio (pruebas de inmunoensayo de alto rendimiento), que tienen la capacidad de detectar anticuerpos inmunoglobulinas G anti proteína S del SARS-CoV-2 y que se correlacionan con las pruebas de laboratorio gold standard para la determinación de estos anticuerpos. Es crucial que estas pruebas de inmunoensayo de alto rendimiento, sean validadas en su fabricación contra métodos gold standard para determinar la presencia de anticuerpos neutralizantes. Perspectiva: esta revisión pretende ampliar el conocimiento de esta nueva prueba, que en un futuro permitirán definir los valores de correlato inmunológico generados por las vacunas o por una infección previa.

Made available in DSpace on 2016-01-26T12:51:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 anaiaraferreira_tese.pdf: 5113092 bytes, checksum: 6a3bf6f59ab187f632c5ffc52b74de32 (MD5) Previous issue date: 2011-09-16 / Toxoplasma gondii (T. gondii) infects humans among other ways, from the gastrointestinal tract, site of expression of ABO antigens through epistatic interactions between ABO, Secretor and Lewis genes. The toxoplasmic retinochoroiditis (TR) disease resulting from this infection is considered the main cause of posterior uveitis. Objective: To evaluate the risk factors that contribute to infection with T. gondii and development of TR. Materials and Methods: After obtaining informed consent (case 050/2009), peripheral blood and serum samples from 357 patients were analyzed. Patients were divided in two groups according to presence (n=82) or absence (n=275) of clinical diagnosis of TR. ABO and Lewis phenotyping were performed using the methods of hemagglutination in tubes and gel columns, respectively. Indirect immunofluorescence (IFI), ELISA and avidity test were used to define titration and avidity of the anti-T. gondii antibodies. The genotypes FUT2 and FUT3 were identified by PCR-RFLP and the parasite DNA by conventional PCR. Results: From the overall 357 analyzed samples, 74.8% were ELISA reagents and 25.2% were non reagent for IgG anti-T. gondii. IgM antibodies were not found and any samples. High titer (&#8805; 4000) were observed in 8.1% of the patients with TR and 1% of those with other ocular diseases (ODO) (p=0.03), whereas the values of high avidity (&#8805; 60%) were similar between the groups (p=0.44). The PCR results were positive in 21/62 (33.9%) with TR and 1/101 xviii (0.9%) among those with ODO and reagents for IgG anti-T. gondii (p<0.0001). Direct contact with cat and / or dog (p=0.009) and ingestion of raw or undercooked meat (p=0.03) were associated with infection by T. gondii but not the TR. The Le(a-b+) phenotype (p=0.03) showed a lower risk for infection, while the Le(a+b-) phenotype (p=0.08) seems to favor the development of TR. Conclusions: The results demonstrate high frequency of presumable TR among patients with ocular diseases. Besides reveal that majority of patients with TR present low titers of IgG anti-T. gondii, with high avidity and that T. gondii can be find in the peripheral blood of approximately one third of patients independent of ocular lesions resulting from toxoplasmosis. The presence of dogs and cats as well as ingestion of raw or undercooked meat increases the risk of infection by T. gondii, but does not influence the development of TR. The high Leb antigen expression reflects protective effect against infection with T. gondii, as well as the antigen Lea seems to favor the development of TR. / Toxoplasma gondii (T. gondii) infecta os seres humanos dentre outras vias, pelo trato gastrintestinal, local de expressão dos antígenos ABO por meio de interações epistáticas entre os genes ABO, Secretor e Lewis. A retinocoroidite toxoplásmica (RT), doença resultante desta infecção, é considerada a principal causa de uveíte posterior. Objetivo: Avaliar os fatores de risco que contribuem para infecção por T. gondii e desenvolvimento da RT. Materiais e Métodos: Após obtenção do termo de consentimento livre e esclarecido (parecer 050/2009), amostras de sangue periférico e soro de 357 pacientes foram analisadas. Os pacientes foram divididos em dois grupos de acordo com a presença (n=82) ou ausência (n=275) de diagnóstico clínico da RT. As fenotipagens ABO e Lewis foram realizadas por meio dos métodos de hemaglutinação em tubos e colunas de gel, respectivamente. Imunofluorescência indireta (IFI), ELISA e teste de avidez foram utilizados para definir as classes (IgM e IgG), o título e a avidez dos anticorpos IgG anti-T. gondii. Os genótipos FUT2 e FUT3 foram identificados por PCR-RFLP e o DNA do parasito por PCR convencional. Resultados: Das 357 amostras analisadas, 74,8% foram reagentes no ELISA e 25,2% não reagentes. Não foram encontradas amostras reagentes para IgM. Títulos elevados (&#8805; 4.000) foram observados em 8,1% dos pacientes com RT e em 1% daqueles com outras doenças oculares (ODO) (p=0,03), enquanto que os índices de avidez elevados xvi (&#8805; 60%) foram semelhantes em ambos os grupos (p=0,44). O PCR mostrou-se positivo em 21/62 (33,9%) com RT e em 1/101 (0,9%) daqueles com ODO, reagentes para IgG anti-T. gondii (p<0,0001). Contato direto com gato e/ou cão (p=0.009) e ingestão de carne crua ou mal cozida (p=0.03) associaram-se à infecção por T. gondii, mas não a RT. O fenótipo Le(a-b+) (p=0.03) apresentou menor risco para infecção, enquanto que o fenótipo Le(a+b-) (p=0.08) parece favorecer o desenvolvimento da RT. Conclusões: Os resultados demonstram elevada frequência de RT presumível em pacientes com doenças oculares. Além disso, revelam que a maioria dos pacientes com RT apresentam baixos títulos de anticorpos IgG anti-T. gondii, com alta avidez e que o T. gondii encontra-se no sangue circulante de aproximadamente um terço dos pacientes independente da presença de lesões oculares resultantes da toxoplasmose. A presença de cães e/ou gatos bem como ingestão de carne crua ou mal cozida eleva os riscos de infecção por T. gondii, mas não influenciam no desenvolvimento da RT. A elevada expressão do antígeno Leb reflete efeito protetor contra a infecção pelo T. gondii, assim como o antígeno Lea parece favorecer o desenvolvimento da RT.

Con el aumento en el uso de las TIC para el aprendizaje en distintos campos, resalta el crecimiento de las comunidades en línea, sobre todo de aquellas enfocadas al aprendizaje de lenguas, que plantean nuevos intereses de investigación en relación con el aprendizaje informal. Existen, pues, distintas investigaciones en el campo que han logrado estudiar aquellas comunidades online que se centran en el aprendizaje informal colaborativo de idiomas con el objetivo de aportar en el área de educación abriendo discusiones acerca de la creación de nuevos métodos de enseñanza y aprendizaje. Es por ello que la presente investigación busca analizar el aprendizaje informal en función de las interacciones entre los usuarios de la comunidad Aprende Coreano Amino la cual se caracteriza por ser una comunidad de aprendizaje de coreano en la que los participantes aportan y consumen contenido con el fin de aprender la lengua coreana mediante sus interacciones dentro de la plataforma. Con tal fin, se indagará sobre la motivación de los miembros para participar en la comunidad, y sobre sus prácticas y espacios de afinidad que se desarrollan dentro de la misma. Para lograrlo, se empleará el método netnográfico. Asimismo, se contactará a un grupo de participantes de la misma comunidad y se obtendrá el consentimiento para realizar entrevistas y observar su actividad en la plataforma durante un período determinado de tiempo. Por último, los datos recogidos por estas técnicas se analizarán mediante el análisis de contenido. / Along with the growing use of ICT on learning, the growth of online communities stands out, especially those focused on learning foreign languages. This has raised interest in doing research on informal learning. There are various studies that have focused on those online communities around collaborative informal language learning, aiming to improve theory on education studies by starting discussions on the creation of new studying and learning methods. This study also aims to analyze informal learning through the interactions of the users of the community Aprende Coreano Amino. This community is one of Korean language learning and members are supposed to build knowledge through their interactions. To reach our goals, the motivations of the members will be studied, as well as their practices and the affinity spaces within the platform. In order to do so, the netnographic approach will be used. In addition, a group of users will be contacted and asked for their consent to be interviewed and observed on the platform for a period of time. Finally, the collected data will be analyzed through the content analysis. / Trabajo de investigación

[ES] Este trabajo de investigación trata sobre las interferencias fonéticas-fonológicas presentes en relatos de vida de inmigrantes portugueses en Venezuela. La utilidad de este estudio radica en el hecho de que el fenómeno migratorio es universal, en el que dos culturas se encuentran, influyéndose mutuamente, por lo que la comprensión del principal vehículo integrador como lo es la lengua debe ser objeto de estudio minucioso. Nuestro objetivo de investigación es explicar las interferencias lingüísticas en el discurso oral de los inmigrantes portugueses que llegaron a Venezuela en el periodo 1950 a 1980, conforme a la clasificación de las interferencias fonéticas- fonológicas de Porto (2009), Niño (2007) y Obediente (2007). Utilizamos un cuestionario y la técnica de la entrevista. La muestra estuvo constituida por 26 sujetos elegidos al azar. Utilizamos el Software Atlas ti versión 8.0 para identificar la frecuencia de las interferencias fonéticas - fonológicas en los relatos de vida. En conclusión, se observa un estancamiento en la evolución de la interlengua, es decir se evidencia una fosilización de L2. La edad al emigrar aparece como un factor determinante en la adquisición de la L2, a la hora de adquirir una integración sociolingüística identitaria. Este factor se muestra como elemento predictivo de una mejor integración y de una menor frecuencia de interferencias fonéticas. / [CA] Aquest treball de recerca tracta sobre les interferències fonètiques-fonològiques presents en relats de vida d'immigrants portuguesos a Veneçuela. La utilitat d'aquest estudi radica en el fet que el fenomen migratori és universal, en el qual dues cultures es troben, influint-se mútuament, per la qual cosa la comprensió del principal vehicle integrador com ho és la llengua ha de ser objecte d'estudi minuciós. El nostre objectiu d'investigació és explicar les interferències lingüístiques en el discurs oral dels immigrants portuguesos que van arribar a Veneçuela en el període 1950 a 1980, conforme a la classificació de les interferències fonètiques-fonològiques de Porto (2009), Niño (2007) i Obediente (2007). Utilitzem un qüestionari i la tècnica de l'entrevista. La mostra va estar constituïda per 26 subjectes triats a l'atzar. Utilitzem el Programari Atlas ti versió 8.0 per a identificar la freqüència de les interferències fonètiques -fonològiques en els relats de vida. En conclusió, s'observa un estancament en l'evolució de la interllengua, és a dir s'evidencia una fossilització de L2. L'edat en emigrar apareix com un factor determinant en l'adquisició de la L2, a l'hora d'adquirir una integració sociolingüística identitària. Aquest factor es mostra com a element predictiu d'una millor integració i d'una menor freqüència d'interferències fonètiques. / [EN] This research work deals with the phonetic-phonological interferences present in the life stories of Portuguese immigrants in Venezuela. The usefulness of this study lies in the fact that the migratory phenomenon, in which two cultures meet and influence one another, is universal, so the understanding of the main integrative vehicle as the language must be carefully studied. Our research objective is to classify linguistic interference in the oral discourse of Portuguese immigrants who arrived in Venezuela in the period 1950 to 1980, according to the classification of phonetic-phonological interferences of Porto (2009), Niño (2007) and Obediente (2007). We use a questionnaire and interview techniques. The sample consisted of 26 randomly chosen subjects. We use the Atlas Ti software version 8.0 to identify the frequency of phonetic - phonological interferences in life stories. In conclusion, there is a stagnation in the evolution of the interlanguage, that is, a fossilization of L2 is evident. Age when emigrating appears as a determining factor in the acquisition of L2, when acquiring an identity sociolinguistic integration. This factor is shown as a predictive element of better integration and a lower frequency of phonetic interferences. / Prato Duarte, VC. (2021). Estudio sociolingüístico de las interferencias fonéticas-fonológicas de inmigrantes portugueses en Venezuela según relatos de vida: una orientación intercultural [Tesis doctoral]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/161314 / TESIS

Classically it was assumed that the compounds with therapeutic effect exert their action interacting with a single receptor. Nowadays it is widely recognized that the pharmacological effect of most drugs is more complex and involves a set of receptors, some associated to their positive effects and some others to the side effects and toxicity. Antipsychotic drugs are an example of effective compounds characterized by a complex pharmacological profile binding to several receptors (mainly G protein-coupled-receptors, GPCR). In this work we will present a detailed study of known antipsychotic drugs and the receptors potentially involved in their binding profile, in order to understand the molecular mechanisms of the antipsychotic pharmacologic effects.The study started with obtaining homology models for all the receptors putatively involved in the antipsychotic drugs receptorome, suitable for building consistent drug-receptor complexes. These complexes were structurally analyzed and compared using multivariate statistical methods, which in turn allowed the identification of the relationship between the pharmacological properties of the antipsychotic drugs and the structural differences in the receptor targets. The results can be exploited for the design of safer and more effective antipsychotic drugs with an optimum binding profile. / Tradicionalmente se asumía que los fármacos terapéuticamente efectivos actuaban interaccionando con un único receptor. Actualmente está ampliamente reconocido que el efecto farmacológico de la mayoría de los fármacos es más complejo y abarca a un conjunto de receptores, algunos asociados a los efectos terapéuticos y otros a los secundarios y toxicidad. Los fármacos antipsicóticos son un ejemplo de compuestos eficaces que se caracterizan por unirse a varios receptores simultáneamente (principalmente a receptores unidos a proteína G, GPCR). El trabajo de la presente tesis se ha centrado en el estudio de los mecanismos moleculares que determinan el perfil de afinidad de unión por múltiples receptores de los fármacos antipsicóticos.En primer lugar se construyeron modelos de homología para todos los receptores potencialmente implicados en la actividad farmacológica de dichos fármacos, usando una metodología adecuada para construir complejos fármaco-receptor consistentes. La estructura de estos complejos fue analizada y se llevó a cabo una comparación mediante métodos estadísticos multivariantes, que permitió la identificación de asociaciones entre la actividad farmacológica de los fármacos antipsicóticos y diferencias estructurales de los receptores diana. Los resultados obtenidos tienen interés para ser explotados en el diseño de fármacos antipsicóticos con un perfil farmacológico óptimo, más seguros y eficaces.