Orientadores: Cesar Costapinto Santana, Marisa Masumi Beppu / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Quimica / Made available in DSpace on 2018-08-07T05:42:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Torres_MarcoAntonio_D.pdf: 1417582 bytes, checksum: 10045a785cc6ab8b5ff6c19e8efd00d0 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: Neste trabalho foram produzidas microesferas de quitosana com tamanho controlado e porosidade influenciada pela técnica de atomização e coagulação. As condições de produção foram definidas pelo planejamento de experimentos. As microesferas obtidas foram modificadas quimicamente com anidrido acético, epicloridrina e glutaraldeído com objetivos de melhorar suas características iniciais de resistência e estabilidade. As possibilidades de uso apresentadas por essas matrizes se devem ao reconhecimento observado entre adsorbato e adsorvente e à realização de modificações químicas e estruturais. Após essas modificações as microesferas obtidas foram analisadas quanto às suas propriedades estruturais, capacidade de adsorção e dessorção. As microesferas foram utilizadas em sistemas de adsorção em banho finito e coluna de leito fixo. Os adsorbatos utilizados foram as proteínas BSA, lisozima e um concentrado protéico (condição real) obtido do soro do leite. As proteínas BSA e lisozima apresentam pontos isoelétricos distintos de 4,8 e 11, respectivamente, permitindo assim avaliar o sistema adsorvente-adsorbato pelas isotermas de adsorção, cinética de equilíbrio, capacidade de dessorção e regeneração dos adsorventes, em condições distintas de pH. O modelo de Langmuir descreveu bem os valores de adsorção obtidos experimentalmente. As capacidades máximas de adsorção para as proteínas BSA e lisozima foram de 9,24 mg/g e 11,95 mg/g, respectivamente, utilizando as microesferas de quitosana reticuladas com glutaraldeído. Os maiores valores de adsorção foram encontrados próximos aos pontos isoelétricos, mostrando que as interações eletrostáticas, fundamentais para o processo em toda a faixa de pH estudada, não estão agindo isoladamente no sistema. Comparando-se os métodos de tanque agitado e coluna de leito fixo foi possível observar diminuição significativa na adsorção e dessorção da solução artificial de proteínas do primeiro para o segundo método. Esses resultados podem ser explicados por limitações no tamanho da coluna do leito, tempo de residência e conseqüentemente pela baixa transferência de massa. Com um extrato real ocorreu diminuição, mais significativa ainda, da capacidade de adsorção quando comparado com a solução artificial de proteínas. Estes resultados refletem a complexidade das interações e a existência de competição pelos sítios de adsorção da superfície interna e externa das microesferas de quitosana reticuladas com glutaraldeído. Essa competição ocorre possivelmente entre as proteínas do extrato e outros grupos moleculares / Abstract: This work is concerned with production of chitosan microspheres with sizes controlled and porosity influenced by spraying and coagulation process. The production conditions were defined through experimental planning. The microspheres were modified chemically with glutaraldehyde, epichlorohydrin and acetic anhydride in order to improve its initial characteristics of resistance and stability. The possibilities of use exhibited by these matrices are due to recognition adsorbate-adsorbent and the accomplishments these chemical and structural modifications. Soon after the gotten microspheres their structural, adsorption and dessorption properties were analyzed. The microspheres were used in adsorption system in two methods: stirred tank and fixed bed. The adsorbates used were the BSA and lysozyme proteins and a proteinic extract from milk serum. The BSA and lysozyme proteins have different isoeletric points, 4.8 and 11, respectively. This allowed study the adsorbent­absorbate system by adsorption isotherms, equilibrium kinetics, dessorption capability and regeneration of adsorbents, in different conditions of pH. The Langmuir described well the experimental values of capacity of adsorption. The maximum adsorption capacities were 9,24 mg/g and 11,95 mg/g for BSA and lysozyme proteins, respectively. The higher values of adsorption were found close to the isoelectric points, showing that the electrostatic interactions, important to the process during all pH range studied, it are not acting alone in the system. Comparing the methods of stirred tank with fixed bed happened significant reduction in the adsorption and dessorption from proteins artificial solution. These results may be explained by the limitations in the size of column, time of residence and consequently in the mass transfer. With a real extract occurred important reduction of the adsorption capacity when compared with synthetic proteins. These results show the complexity of the interactions and the competition between the extract proteins and others chemical groups by adsorption sites in the internal and external surface of chitosan microspheres crosslinked with glutaraldehyde / Doutorado / Desenvolvimento de Processos Biotecnologicos / Doutor em Engenharia Química

Submitted by Alisson Leda (alisson-brasil@outlook.com) on 2018-04-20T15:42:21Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao Maria Luiza.pdf: 1470014 bytes, checksum: 60527820b72a5cbc9b560498ac18d36b (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2018-04-20T15:48:15Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertacao Maria Luiza.pdf: 1470014 bytes, checksum: 60527820b72a5cbc9b560498ac18d36b (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2018-04-20T15:51:59Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertacao Maria Luiza.pdf: 1470014 bytes, checksum: 60527820b72a5cbc9b560498ac18d36b (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-20T15:51:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Maria Luiza.pdf: 1470014 bytes, checksum: 60527820b72a5cbc9b560498ac18d36b (MD5) Previous issue date: 2011-01-28 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The fish market is broad and diverse and the worry to consume healthier foods produced without intensive use of chemical additives has caused a sharp increase in the demand for white meat, the group that owns the fish, which both industrialized and fresh can meet the consumers’ nutritional, sensory, convenience and economical needs. This study aimed to produce built-cooked, ham- like meat from restructured aracu (Shizodum fasciatus Spix & Agassiz, 1829). The experiment included three treatments, 100% surimi, surimi 80- 20% / soy, 60-40% surimi / soybean, where each had three subtreatments, and in each subplot was added (1) corn starch ( 2) cassava starch, and (3) a mix of corn starch and albumin. The test for the concentration of albumin found 2.5% to be added in the formulations. The sensory analysis was carried out through the acceptability and attitude tests to determine the best formulation. It was determined the yield of surimi, composition on the raw material, surimi and final product, microbiological analysis (psychrophilic, Staphylococcus aureus, salmonella, yeasts and molds, coliforms 45 ° C) and chemical analysis at 0, 15, 30 , 45, 60 days of storage followed by statistical analysis. There was no significant difference between the products prepared, the formulation with 100% cassava starch and s urimi obtained greater acceptance in the flavor aspect. In a repeated treatment the 100% surimi and cassava starch was the most accepted in all organoleptic parameters getting 60% approval. The test of purchase intent made through an attitude scale of seve n points was analyzed and the products were not statistically different from each other although there was mild acceptance by consumers for the product 100% surimi and starch with a mean of 4.05±1.36%. The composition of surimi showed an average moisture content between 85.05±1.99% and 86.85±0.65%, and the product produced the ash was 4.63±0.05% by the addition of cryoprotectants, the total carbohydrate found reached an average of 4.78±1.19%, staying within the standard of the legislation. The calorific value had an average of 83.01±2.19 kcal, indicating a product low energy. The percentage of product yield of 98.75% was considered a promising and viable. There was absence of Salmonella (only determined at time zero), Staphylococcus coagulase positive, filamentous fungi and coliforms at 45 º C. To psichrophilic met value of 8.2x104 CFU/g. Percentage of 20.9±3.8 to 25.07±5.7 mg N- BVT/100g were obtained for the stored product, while the pH remained stable with a general average of 8.42±0.16 across period. For sensory evaluation in product stored at the end of the experiment was considered a slightly whitish color, the strong smell and the texture firm and consistent. / O mercado de consumo de pescado é amplo e diversificado e a preocupação por consumir alimentos mais saudáveis produzidos sem uso intensivo de aditivos químicos tem provocado um acentuado incremento à demanda das chamadas carnes brancas, grupo ao qual pertence o peixe, o qual tanto industrializado como in natura pode atender as necessidades do consumidor nos aspectos nutricionais, sensoriais, de conveniência e econômicos. Este trabalho teve por objetivo a produção de embutido cozido, tipo apresuntado a partir de carne reestruturada de aracu (Shizodum fasciatus Spix & Agassiz, 1829). O experimento contou com três tratamentos, 100% surimi, 80-20% surimi/soja, 60-40% surimi/soja, onde cada um contou com três subtratamentos utilizando amido de milho, fécula de mandioca, e amido de milho mais albumina. O teste para a concentração de albumina encontrou 2,5% para ser adicionada nas formulações. A análise sensorial realizou-se através do teste de aceitabilidade e teste de atitude para verificar a melhor formulação. Foi determinado o rendimento do surimi, composição centesimal na matéria prima, surimi e produto final, análise microbiológica (Psicrófilas, Stafilococcus aureus, salmonela, fungos filamentosos e leveduras, Coliformes 45°C), e análises químicas, nos tempos 0, 15, 30, 45, 60 dias de estocagem seguido de análise estatística. Não houve diferença significativa entre os produtos elaborados, tendo a formulação com 100% surimi e fécula de mandioca obtido maior aceitabilidade no aspecto sabor. Na repetição o tratamento com 100% surimi e fécula de mandioca obteve maior aceitação em todas as características organolépticas conseguindo 60% de aprovação. O teste de intenção de compra realizado através da escala de atitude de sete pontos foi analisado e os produtos não se diferenciaram estatisticamente entre si apesar de ocorrer ligeira aceitação por parte dos consumidores para o produto 100% surimi e fécula com média de 4,05±1,36%. A composição centesimal do surimi mostrou concentração de umidade com média entre 85,05±1,99% e 86,85±0,65%, e para o produto elaborado o resíduo mineral fixo foi de 4,63±0,05%, por adição de crioprotetores, o teor de carboidratos totais encontrado alcançou média de 4,78±1,19%, ficando dentro do padrão da legislação. O valor calórico obteve média de 83,01±2,19 Kcal, indicando ser um produto pouco ene rgético. O percentual do rendimento do produto de 98,75% mostrou-se promissor e viável. Verificou-se ausência da Salmonela (determinada apenas no tempo zero), Stafilococcus coagulase positivo, fungos filamentosos e de Coliformes a 45º C. Para Psicrofilas encontrou-se valor de 8,2 x 104 UFC/g. Percentuais de 20,9±3,8 a 25,07±5,7 mg N-BVT/100g foi obtido para o produto armazenado, enquanto o pH se manteve estável com média geral de 8,42±0,16% em todo período. Para analise sensorial no produto estocado ao fina l do experimento a cor foi considerada levemente esbranquiçada, o cheiro forte e a textura firme e consistente

Este trabalho tem como objetivo sintetizar e caracterizar um novo complexo mononuclear de rutênio (III) e enrofloxacina (enro, fármaco antibacteriano da família das fluoroquinolonas), [Ru(enro)3].nH2O. Foram testadas várias rotas sintéticas e apenas a partir de uma delas obteve-se o composto desejado. O produto foi caracterizado pelas técnicas espectroscópicas de absorção na região do UV-visível e do infra-vermelho. Através desta última técnica foi possível determinar o modo pelo qual a enrofloxacina se coordena ao íon rutênio: a coordenação ocorre de modo bidentado através do oxigênio da piridona e do oxigênio do grupamento carboxilato. Outro objetivo deste trabalho foi investigar a interação do complexo mononuclear de rutênio (III) e norfloxacina, [Ru(nor)3].nH2O, com a albumina de soro humano (HSA), através da técnica de luminescência. Mais especificamente pelo estudo da supressão da luminescência dos resíduos de triptofano, aplicando-se o modelo de tratamento da supressão bimolecular de Stern-Volmer. O estudo de supressão de fluorescência mostrou, por meio de espectros de emissão da HSA, que com o aumento da concentração do complexo [Ru(nor)3].nH2O na solução de HSA, ocorre uma redução gradual da luminescência da HSA, devido a alterações da conformação da proteína, que sugerem alteração do microambiente próximos aos resíduos de triptofano. A partir do tratamento dos dados pode-se determinar tanto K_sv quanto a constante cinética do processo de supressão, que mostraram uma dependência com a temperatura sugerindo como mecanismo predominante de supressão o mecanismo dinâmico. Porém essa conclusão foi revista a partir da determinação dos tempos de vida do estado excitado da HSA, e pode-se concluir que o mecanismo predominante à temperatura ambiente é o mecanismo estático, porém com o aumento da temperatura ocorre a predominância do mecanismo do tipo dinâmico. Através da determinação dos parâmetros termodinâmicos, concluiu-se que as interações entre a HSA e o complexo são espontâneas, e forças de van der Waals e ligações de hidrogênio estão envolvidas na ligação entre a HSA e o supressor. / This work aims to synthesize and characterize a new mononuclear ruthenium (III) complex and enrofloxacin (enro, antibacterial drug of the fluoroquinolone family), [Ru(enro)3].nH2O. Several synthetic routes were tested, but only from one of them it was obtained the desired compound. The product was characterized by spectroscopic techniques of absorption in UV-visible and infra-red regions. Through this last technique, it was possible to determine the coordination mode of enrofloxacin to the ruthenium ion: the coordination occurs in a bidentate way through the pyridone oxygen and the oxygen of the carboxylate group. Another aim of this study was to investigate the interaction of mononuclear ruthenium (III) complex and the norfloxacin, [Ru(nor)3].nH2O, with the human serum albumin (HSA), through the technique of luminescence. More specifically, by the study of the quenching of luminescence of tryptophan residues, by applying the Stern-Volmers model of treatment of bimolecular suppression. The fluorescence quenching study showed, through the emission spectra of HSA, that increasing the complex concentration in HSA solution, there is a gradual reduction of the luminescence of HSA, due to the conformational changes of the protein that suggests the change of microenvironment near tryptophan residues. From the data processing it is possible to determine both K_sv and the kinetic constant of the suppression process, which showed temperature dependence, suggesting as the predominant mechanism of quenching the dynamic mechanism. However, this conclusion has been revised from the determination of the lifetimes of the excited state of HSA, and it can be concluded that the predominant mechanism at room temperature is the static mechanism, but with the temperatures increase, it occurs the predominance of the dynamic type mechanism. By determining the thermodynamic parameters, it was concluded that the interactions between HSA and the complex are spontaneous, and Van der Waals forces and hydrogen bonds are involved in the binding between HSA and suppressor.

O ferro é essencial para a vida do ser humano, desempenhando um papel fundamental no metabolismo. Contudo, quando não armazenado em compartimentos biológicos adequados, o metal apresenta um potencial tóxico ao organismo, uma vez que contribui para a formação de espécies reativas de oxigênio. A sobrecarga de ferro é uma condição desfavorável para portadores de algumas disfunções genéticas, como a hemocromatose, ou de anemias crônicas que requeiram transfusões de sangue periódicas, como é o caso da talassemia. Os fármacos atuais que controlam a patologia, como a desferrioxamina (DFO), requerem infusão subcutânea lenta, causando desconforto em pacientes e podendo trazer um série de complicações, como insuficiência hepática e renal. A modificação dessas moléculas com biopolímeros é uma proposta para minimizar efeitos colaterais e aumentar a biodisponibilidade do fármaco no organismo. Dentre esses biopolímeros, destacam-se as albuminas proveniente do soro bovino (BSA) e do ovo (OVA), que têm baixa toxicidade, baixo custo e abundância de sítios reativos, que quando modificados, favorecem reação com a desferrioxamina. Como resultado, houve a reação dos biopolímeros com a desferrioxamina, com mudanças em suas estruturas secundárias e possível dimerização, resultando na formação de conjugados possuem afinidade com íon ferro e capacidade antioxidante semelhante ao fármaco original, características que tornam os compostos bons candidatos a uma alternativa à terapia de quelação. Os conjugados BSA-DFO e OVA-DFO podem reagir, além do ferro, com gadolínio, fazendo com o que os complexos tenham uma potencial aplicação como agentes de contraste em ressonância magnética de imagem (MRI). Neste trabalho, vimos que o complexo entre Gd(III) e BSA-DFO apresentou uma relaxatividade de 52,92 s-1 mM-1 para T2 e 45,37 s-1 mM-1 para T1 , um valor bem superior aos fármacos disponíveis no mercado, que apre-sentam relaxatividade entre 4 e 5 s-1 mM-1, o que foi explicado por sua elevada massa molecular, indicando que poderia ter bons efeitos na qualidade de MRI, com menores doses. / Iron is essential for human life, playing a fundamental role in metabolism. However, when not stored in appropriate biological compartments, the metal presents a toxic potential to the body, contributing to the formation of reactive oxygen species (ROS). Iron overload is an unfavorable condition for people with certain genetic disorders, such as hemochromatosis, or chronic anemias that require periodic blood transfusions, as thalassemia. Current drugs that control the pathology, as desferrioxamine, require slow subcutaneous infusion, causing discomfort in patients and may lead to a number of complications, such as hepatic and renal failures. As a result, the biopolymers were reacted with desferrioxamine, with changes in their secondary structures and possible dimerization, resulting in the formation of conjugates with iron ion affinity and antioxidant capacity similar to the original drug, characteristics that make the compounds good candidates for an alternative chelation therapy As a result, the reaction of the biopolymers with desferrioxamine caused a change in the secondary structure, with possible formation of dimers and showing different mobility when exposed to an electric potential difference. Not all polymer chains have reacted with DFO, however BSA-DFO complex has antioxidant capacity similar to the original drug. The BSA-DFO and OVA-DFO conjugates can react, in addition to iron, with gadolinium, making the complexes potential contrast agents for magnetic resonance imaging (MRI). In this work, the complex between Gd(III) and BSA-DFO presented a relaxativity of 52,92 s-1 mM-1 for T2 and 45,37 s-1 mM-1 for T1, values higher than the available drugs in the market (4 - 5 s-1 mM-1) which was explained by the high molecular weight, indicating a good effects on the quality of MRI, with lower doses.

Orientador: Anibal Eugenio Vercesi / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-19T05:29:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Figueira_TiagoRezende_D.pdf: 22742066 bytes, checksum: dd66394fba07238337b8c5a2eeb0c858 (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: A analbuminemia congênita é uma doença autossômica recessiva caracterizada por níveis traços de albumina plasmática (< 1 mg/mL) e sintomas clínicos leves. Entre as comorbidades apresentadas pelos indivíduos e ratos analbuminêmicos (ratos Nagase - NAR), os distúrbios no metabolismo/transporte de lipídeos plasmáticos são as mais marcantes. A dislipidemia associada à analbuminemia é caracterizada por níveis aumentados de colesterol e triglicérides, e déficit de ácidos graxos livres (FFA). Nesta tese, são apresentados três estudos independentes sobre a analbuminemia, os quais objetivaram investigar: 1) os mecanismos da hipertrigliceridemia e do déficit de FFA plasmático do NAR; 2) o metabolismo de carboidratos no NAR; 3) as funções mitocondriais no NAR. Também é apresentado um quarto estudo (aspectos metodológicos) sobre o uso do probe safranina para avaliar o potencial elétrico transmembrana mitocondrial. Os principais resultados destes estudos foram: Estudo um: as taxas de lipogênese (596 ± 40 vs. 929 ± 124 ?mol 3H2O/g/h) e de secreção de triglicérides para o plasma (4,25 ± 1,00 vs. 7,04 ± 1,68 mg/dL/min) foram mais lentas (P ? 0,05) no NAR do que no rato controle Sprague-Dawley (SDR). As injeções de heparina ou de albumina no NAR promoveram um aumento de FFA plasmático em função do tempo. Noventa minutos após a injeção de albumina, os níveis de FFA plasmáticos nos NAR se elevaram de 0,36 ± 0,05 para 1,34 ± 0,16 mEq/L (P ? 0,05), atingindo os níveis do SDR. Estes resultados indicam que a falta de albumina plasmática inibe a lipólise intravascular e causa o déficit de FFA plasmático na analbuminemia, e que a produção hepática de triglicérides não contribui para a hipertrigliceridemia no NAR. Estudo dois: a concentração de glicose plasmática foi similar entre os NAR e os SDR alimentados ou em jejum, porém a insulinemia no estado alimentado foi maior nos NAR do que nos SDR (P ? 0,05). O NAR apresentou maior tolerância à glicose quando comparado ao SDR (P ? 0,05). Esta maior tolerância a glicose está associada à maior resposta insulinêmica à administração de glicose. Não houve diferença entre os grupos para a sensibilidade periférica a insulina. Apesar do conteúdo similar de glicogênio hepático no estado alimentado, o NAR apresentou menor conteúdo de glicogênio (40% do SDR) após 6 h de jejum. A injeção de piruvato (substrato neoglicogênico) promoveu um aumento mais rápido na glicemia do NAR em comparação ao SDR. Deste modo, os resultados indicam que o NAR apresenta metabolismo de glicose acelerado. Estudo três: a capacidade de retenção de Ca2+ pelas mitocôndrias isoladas do fígado do NAR aos três meses de idade foi ~50% daquela do SDR. Esta variável não se diferiu entre os grupos quando avaliada aos 21 dias de vida dos ratos. Foi observada uma depleção de ~20% no conteúdo de nitrosotiol e um aumento de ~30% na expressão de ciclofilina D nas mitocôndrias de fígado do NAR. Nenhuma das variáveis relacionadas ao estado redox mitocondrial diferiu entre NAR e SDR, tais como: o conteúdo de tióis reduzidos, de glutationa total, a taxa de liberação de H2O2, e o estado reduzido de NAD(P)H. Com isso, conclui-se que a maior expressão de ciclofilina D, um componente importante no processo de transição de permeabilidade mitocondrial, e o menor conteúdo de nitrosotiol nas mitocôndrias dos NAR podem explicar a sua menor capacidade de retenção de Ca2+ / Abstract: Congenital analbuminemia is a rare autosomal recessive disorder characterized by a trace level of albumin in blood plasma and mild clinical symptoms. Analbuminemic patients and rats (Nagase analbuminemic rats - NAR) present associated abnormalities, among which the disturbances in plasma lipid metabolism and transport are hallmarks. The dyslipidemia associated with analbuminemia comprises a unique plasma lipid profile (i.e. high cholesterol and triglycerides, but a severe free-fatty acids deficiency). Three independent works on analbuminemia are presented in this PhD thesis, whose aims were: 1) to investigate the mechanisms of NAR hypertriglyceridemia and plasma free-fatty acids deficiency; 2) to study carbohydrate metabolism in NAR; 3) to evaluate mitochondrial (dys)function in NAR. Also, a methodological study about the use of the dye safranine as a fluorescent probe for the assessment of mitochondrial transmembrane electrical potential is presented in this thesis. The main results from these studies were: Study one: lipogenesis (596 ± 40 vs. 929 ± 124 ?mol 3H2O/g/h) and triglyceride secretion rates (4.25 ± 1.00 vs. 7.04 ± 1.68 mg/dL/min) were slower (P ? 0.05) in fasted NAR than in control Sprague-Dawley rats (SDR). The injection of either heparin or albumin elicited an increase in NAR plasma FFA levels over time. FFA levels reached control levels 90 min after the albumin administration into NAR, increasing from 0.36 ± 0.05 to 1.34 ± 0.16 mEq/L (P ? 0.05). These results indicate that the lack of plasma albumin inhibits intravascular lipolysis and causes the FFA deficit observed in NAR. Moreover, hepatic triglyceride output seems not to contribute to NAR hypertriglyceridemia. Study two: plasma glucose levels were similar between fed and fasted NAR and SDR, but fed insulinemia was higher in NAR than in SDR (P ? 0.05). NAR displayed increased glucose tolerance compared to SDR (P ? 0.05). This enhanced glucose tolerance was associated with higher insulinemia after the glucose load, and with similar insulin sensitivity between the groups. Despite similar liver glycogen content in fully fed condition, NAR had lower glycogen content (40% of control) after 6-h fasting. The injection of pyruvate (gluconeogenic substrate) elicited a faster rise in glycemia of NAR than in SDR. Therefore, NAR display enhanced glucose metabolism. Study three: the Ca2+ retention capacity of the liver mitochondria isolated from 3-month-old NAR was about 50% that of the control. Interestingly, the assessment of this variable in 21-day-old NAR and SDR indicated that the mitochondrial Ca2+ retention capacity was preserved at this age. A 20% decrease in mitochondrial nitrosothiol content and a 30% increase in cyclophilin D expression were observed in NAR liver mitochondria. None of the variables related to mitochondrial redox state differed between the controls and NAR, i.e., namely the contents of reduced mitochondrial membrane protein thiol groups and total glutathione, H2O2 release rate, and NAD(P)H reduced state. We conclude that the higher expression of cyclophilin D, a major component in the mitochondrial permeability transition process, and decreased nitrosothiol content in NAR mitochondria may underlie their lower Ca2+ retention capacity / Doutorado / Biologia Estrutural, Celular, Molecular e do Desenvolvimento / Doutor em Ciências

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2015-11-19T14:42:04Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1889555 bytes, checksum: a8fd7f1815d68da582c0b626c28d18a9 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-19T14:42:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1889555 bytes, checksum: a8fd7f1815d68da582c0b626c28d18a9 (MD5) Previous issue date: 2015-07-21 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A detecção da albumina do soro bovino (BSA) tem atraído interesse da comunidade científica em razão da sua aplicação em diversas áreas como alimentícia, farmacêutica e bioquímica. Diante disso, identificar e quantificar a BSA em diferentes matrizes torna-se muito importante. Neste contexto, o objetivo do presente trabalho foi desenvolver nanoblendas de polidiacetileno e copolímero tribloco (L64) para detecção de BSA, bem como avaliar a interação entre as nanoestruturas e a proteína. A fim de caracterizar a interação entre o nanossensor desenvolvido e a BSA, a influência de alguns fatores foi investigada tais como, a composição da nanoblenda (com e sem colesterol), o comprimento da cadeia do polidiacetileno utilizado na síntese (PCDA ou TCDA), a conformação da BSA (nativa e desnaturada) e a disponibilidade do domínio hidrofóbico (BSA livre e BSA ligada ao eugenol). O estudo termodinâmico de interação BSA-nanoblenda foi feito por meio de técnicas espectrofotométricas, calorimétricas, dispersão dinâmica de luz e medidas eletrocinéticas. Nanoblendas de polidiacetileno/L64 detectou BSA em pequenas quantidades apresentando resposta colorimétrica (RC) de 34%. A adição de colesterol na nanoestrutura tornou o sensor mais sensível, aumentando a RC para 65%. Os sensores desenvolvidos possibilitou a diferenciação visual entre a proteína nativa e desnaturada, por meio da transição azul-vermelho. A adição do complexo eugenol-BSA não causou mudança colorimétrica nas nanoblendas. A obtenção da energia livre padrão de Gibbs (-10,44 < ΔG° < -49,52 kJ mol-1), da estequiometria do complexo (1 < “n” <3) e constante de interação (6,7 x 102 <Ka <4,79 x 108 mol L-1) da formação do complexo BSA-nanoblenda, permitiu estabelecer uma relação direta entre a resposta do nanossensor e interação BSA-nanoblenda. A transição colorimétrica da nanoblenda de polidiacetileno/L64 foi induzida pelo aumento da entropia, enquanto a presença do colesterol tornou o processo entalpicamente dirigido devido, principalmente, à interação específica entre o colesterol e BSA (- 42,00 <Δap-intH <28,00 kJ mol-1). A substituição do PCDA por TCDA aumentou a sensibilidade do nanosensor devido à menor energia de barreira rotacional em razão do TCDA possuir dois átomos de carbono a menos em sua cauda hidrofóbica. Diante disso, o sensor sintetizado demonstrou ser eficaz para detecção de pequenas quantidades de BSA além de ser capaz de discriminar entre proteína nativa/desnaturada e livre/ligada. / The detection of bovine serum albumin (BSA) has attracted interest from the scientific community because of their application in areas such as food, pharmaceutical and biochemistry. Therefore, identify and quantify BSA in different matrices become very important. In this context, the aim of this study was to develop nanoblends of polidiacetileno and triblock copolymer (L64) to BSA detection and evaluate the interaction between nanostructures and protein. In order to characterize the interaction between nanossensor developed and BSA, the influence of some factors was investigated such as, the nanoblend composition (with and without cholesterol), the length of the chain polydiacetylene used in the synthesis (PCDA or TCDA), the BSA conformation (native and denatured) and the availability of the hydrophobic domain (free BSA and eugenol-bound BSA). The thermodynamic study BSA-nanoblend interaction was done using spectrophotometric techniques, calorimetric, light scattering and electrokinetic measurements. Polydiacetylene/L64 nanoblends detected small amounts of BSA showing colorimetric response (CR) of 34%. Cholesterol addition in the nanostructure became sensor more sensitive, increasing the RC to 65%. The developed sensors allowed the visual differentiation between the native and denatured protein, through the blue-red transition. The addition of eugenol-BSA complex did not cause nanoblend colorimetric change. Obtaining the standard Gibbs free energy (-10.44 <ΔG° <-49.52 kJ mol-1), the stoichiometry complex (1 <“n” <3), and interaction constant (6.7 x 102 <Ka <4.79 x 108 mol L-1) of BSA-nanoblend complex formation, allowed to establish a direct relation between nanosensor response and BSA-nanoblend interaction. The colorimetric transition of polydiacetylene/L64 nanoblend was induced by the increase of entropy, while the cholesterol presence made the enthalpically driven process, mainly due to the specific interaction between cholesterol and BSA (-42.00 <Δap-intH <28.00 kJ mol-1). The replacement of PCDA for TCDA increased the nanosensor sensitivity due to smaller rotational barrier energy because of TCDA having two less carbon atoms in its hydrophobic tail. Therefore, the synthesized sensor demonstrated to be effective for detecting small amounts of BSA addition to being able to discriminating between native/denatured and free/bound protein.

Os líquidos iônicos, por geralmente apresentar, em sua estrutura, uma cadeia alquílica apolar e uma parte polar, como o cátion imidazólio, podem ser considerados estruturas anfifílicas, e apresentam semelhanças com os tensoativos. Tais estruturas, devido a este caráter anfifílico, podem interagir com estruturas do tipo Lipossomas ou até mesmo com biomoléculas, como a BSA. Neste trabalho, foram sintetizados três líquidos iônicos inéditos, com rendimentos de 52 a 66%, acoplados a sistemas quirais derivados de aminoácidos naturais e de fácil obtenção, como a L-Cisteína, a L-Serina e a L-Treonina. Estes foram caracterizados tanto do ponto de vista estrutural, quanto por suas propriedades fotofísicas. Como procedimento metodológico utilizou-se de ciclocondensação de aminoácidos, esterificação de Steglich e alquilação para inserção de cadeia carbônica ao anel metil-imidazol. Para investigação e confirmação dessas estruturas utilizou-se de estudos de Ressonância Magnética de 1H e de 13C, Infravermelho, além das espectroscopias de absorção na região do UV-Vis e de emissão de fluorescência. Por fim, estes novos líquidos iônicos foram testados com lipossomas e BSA, cujos resultados mostraram boa interação com essas biomoléculas. / Ionic liquids can be considered as amphiphilic structures and have similarities with the surfactants, once they generally have an apolar alkyl chain and a polar moiety, such as the imidazolium cation. Such structures, due to this amphiphilic character, may interact with liposome structures or even with biomolecules, such as BSA. In this work, three new ionic liquids containing chiral systems derived from naturally occurring amino acids, such as L-Cysteine, L-Serine and L-Threonine were synthesized, with yields ranging from 52 to 66%. They were fully characterized both from the structural point of view, and by its photophysical properties. As methodological procedures, amino acid cyclocondensation, Steglich esterification and alkylation were used. In order to investigate and confirm these structures, magnetic resonance studies of 1H and 13C, infrared, as well as absorption spectroscopies in the UV-Vis region and fluorescence emission were used. At last, these new ionic liquids were tested with liposomes and BSA, and the results showed good interaction with these biomolecules.

Los acidos biliares son esteroides biosintetizados en el higado que actuan como tensoactivos, facilitando la digestion de los lipidos. Para ello, circulan y se reutilizan en un movimiento conocido como circulacion enterohepatica, un proceso muy complejo en el que no todas las etapas estan perfectamente entendidas. Con el proposito de estudiar algunos aspectos relacionados con la circulacion enterohepatica, en la presente Tesis Doctoral se planteo preparar derivados fotoactivos de acidos biliares para estudiar su comportamiento con modelos celulares para detectar efectos colestasicos de farmacos; y por otra parte, estudiar las interacciones con albumina serica humana, el transportador mayoritario de los acidos biliares en la ultima etapa de la circulacion enterohepatica. La sintesis de derivados fluorescentes de acidos biliares, principalmente acido colico, se baso en la condensacion del acido biliar mediante union covalente con diversos fluoroforos, en concreto aminofluoresceina, nitrobenzofurazano, dansilo, carprofeno, aminoftalimida y bimano. La aminofluoresceina se conjugo con el acido colico por el grupo carboxilico mientras que el resto de los fluoroforos mencionados se conjugaron por un grupo amino del acido colico, previamente obtenido de forma estereoselectiva a partir del correspondiente hidroxilo. Una vez preparados los analogos de los acidos biliares, se llevo a cabo su caracterizacion fotofisica. En concreto, los derivados de aminofluoresceina, nitrobenzofurazano y dansilo se han caracterizado completamente; asi se ha determinado sus espectros absorcion y emision, tiempos de vida y energias de singlete, asi como rendimientos cuanticos. Los estados excitados singlete mostraron ser sensibles al medio. Para el resto de los compuestos se han establecido sus propiedades fotofisicas mas importantes del estado singlete. A continuacion, los derivados de nitrobenzofurazano y dansilo se elegieron para examinar sus interacciones con albumina serica humana. / Rohacova ., J. (2010). Síntesis de Derivados Fotoactivos de Ácidos Biliares para Aplicaciones Biológicas [Tesis doctoral no publicada]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/8411 / Palancia

O cachorro-do-mato (Cerdocyon thous - Linnaeus, 1766) é um canídeo de médio porte com distribuição ampla na América do Sul e que ocorre em quase todo o Brasil. Dentre as principais ameaças à sua conservação estão os atropelamentos causados principalmente pela perda de habitat. A escassez de dados laboratoriais de cachorro-do-mato prejudica o atendimento médico veterinário dificultando a aplicação de terapias adequadas. Este trabalho teve como objetivo avaliar os níveis de Proteína C Reativa, Albumina, Pré-albumina, Ceruloplasmina, Haptoglobina e Alfa 1 Glicoproteína Ácida bem como o Indice Prognóstico Inflamatório Nutricional (IPIN) nesta espécie, obtendo portanto uma primeira descrição destes marcadores prognósticos. Foram coletados 1,5 ml de sangue por acesso jugular de oito exemplares de Cachorro-do-mato (Cerdocyon thous) provenientes do acervo do Laboratório de Ensino e Pesquisa em Animais Selvagens (LAPAS) da Faculdade de Medicina Veterinária da Universidade Federal de Uberlândia para exames de rotina. As amostras foram coletadas através da veia jugular após contenção física dos animais e tricotomia da região. Após análise estatística, os valores encontrados foram: albumina: entre 2,7 e 3,0 g/dl, alfa 1 glicoproteína ácida: entre 0,19 e 0,21 g/l, proteína C reativa: entre 1,7 e 2,2, pré-albumina: entre 30 e 35 mg/l e haptoglobina: entre 0,078 e 0,156 e IPIN ≤ 0,006 sendo considerado normal e valores ≥ 0,006 considerados altos. Esta prima descrição servirá como base para estudos utilizando animais com doenças específicas e, após as análises, comparadas com os valores encontrados neste trabalho verificando se o comportamento segue a semelhança de cães domésticos. / The dog-eating fox (Cerdocyon thous - Linnaeus, 1766) is a medium sized canid widely distributed in South America and occurs in almost all of Brazil. Among the main threats to their conservation are the roadkill mainly caused by habitat loss. The shortage of laboratory bush dogs data affect the veterinary medical care hindering the application of appropriate therapies. This study aimed to evaluate the levels of C-reactive protein, albumin, pre-albumin, ceruloplasmin, haptoglobin and Afla 1 acid glycoprotein and the Prognostic Index Inflammatory Nutritional (IPIN) in this species, thus obtaining a first description of these prognostic markers. They collected 1.5 ml of blood by jugular access 8 of Mato Dogs copies (thous thous) from the Laboratory of collection of Teaching and Research in Wildlife (limpets), Faculty of Veterinary Medicine, Federal University of Uberlândia for exams routine. The samples were collected via the jugular vein after physical restraint of animals and trichotomy of the region. After statistical analysis, the values were: albumin: between 2.7 and 3.0 g / dl, alpha 1-acid glycoprotein: between 0.19 and 0.21 g / l, C-reactive protein: between 1.7 and 2 2, prealbumin between 30 and 35 mg / l haptoglobin: between 0.078 and 0.156 and IPIN ≤ 0.006 being considered normal and values ≥ 0.006 considered high. This press description will serve as a basis for studies where animals may be used with specific diseases and, after analysis, compared with the values found in this study and verified the behavior follows the likeness of domestic dogs. / Tese (Doutorado)

Estudos anteriores mostram que o polímero Nafion® pode causar deslocamento do equilíbrio conformacional de proteínas em valores de pH que não o fisiológico. Nesse sentido, o Nafion® não só pode ser utilizado como uma sonda interessante para estudos estruturais de proteínas, mas, também, é importante entender seu papel na conformação da proteína. Portanto, a Albunina do Soro Bovino (BSA) foi escolhida como modelo para o estudo dos efeitos do Nafion® na conformação helicoidal de proteínas. A finalidade deste trabalho é entender as alterações na conformação e vizinhanças aromáticas da BSA, na faixa de pH de 2 a 12, na presença e ausência de Nafion®, que pode também revelar o papel do polímero na exposição dos aromáticos e nos processos de transferência de energia. As alterações da estrutura secundária foram medidas por Dicroísmo Circular e os espectros de fluorescência no estado estacionário foram usados para analisar as mudanças nas vizinhanças dos aromáticos. Os resultados mostraram a diminuição discreta do conteúdo helicoidal da conformação da BSA na região extremamente básica, pH 11 em relação à conformação em pH 7. Já na região ácida, pH 2, embora haja considerável diminuição do conteúdo helicoidal, a BSA ainda mantém quase 50% de sua conformação secundária regular. Em relação aos ambientes dos aromáticos triptofano e tirosina, a eficiência quântica da emissão de fluorescência diminui em regiões ácidas e básicas, indicando que, nessas estruturas, os aromáticos encontram-se em restrição conformacional em relação ao observado na proteína nativa. Estes resultados apontam para a mudanças na conformação da BSA em ambas as regiões: ácidas e básicas, incluindo mudanças das estruturas secundárias e nas vizinhanças dos aromáticos. A adição do Nafion®, por outro lado, acentua o deslocamento para o azul e diminuição da exposição dos aminoácidos, tanto em solução quanto em estado sólido. A estrutura secundária da proteína é completamente modificada pelo polímero na região ácida, e esta conformação é mantida nas regiões neutra e básica, sugerindo que o Nafion® não estabiliza estruturas helicoidais / Previous studies have shown that Nafion® can disturb the conformational equilibrium of some proteins when at pH other than physiological ones. In this sense, Nafion® can used to study protein conformation, but is also important to understand its interaction with the proteins. In this work, Bovine Serum Albimun (BSA) was chosen as a model to understand the modifications caused by Nafion® at helicoidal proteins conformation. More specifically, the aim encloses the understanding of changes in BSA secondary conformation and aromatic vicinities, at pH range from 2 to 12, in the Nafion®s presence and absence. Secondary changes were measured by Circular Dichroism and steady-state fluorescence was used to study the aromatic vicinities. Results have shown small differences at helix content in the extremely basic pH (pH 11) when compared to BSA conformation at pH 7 (native one). At pH 2, on the other hand, although a decreasing in helical content was observed, BSA was able to keep almost 50% of secondary regular conformation. Regarding the aromatic vicinities (tryptophans and tyrosines) the fluorescence emission quantum eficience decreased in both regions (acid and basic), suggesting that the aromatics in these conformations are found in a more restrict environment. Nafion®, when added, promoted a decreasing in aromatic exposition, both in solution and solid state, while the secondary structure is completelu modified by its presence in all pH range, suggesting that helical conformations are not stabilized by Nafion®