Resumo:Recentemente, foi relatado que na insuficiência renal crônica (IRC) canina ocorre estresse oxidativo e que a disfunção dos neutrófilos está associada ao aumento da apoptose. Dentre as muitas toxinas urêmicas que se concentram na IRC, há evidências em humanos de que as guanidinas inibem o metabolismo oxidativo dos neutrófilos, afetando a sua função bactericida. Uma revisão sistemática foi realizada sobre a relação entre os compostos guanidínicos e os neutrófilos em cães. Verificou-se que a literatura, sobre este tema, é escassa e contraditória, de modo que, foi investigado no presente estudo a relação entre a concentração de guanidina plasmática, a produção de superóxido e a apoptose de neutrófilos de cães com IRC. Aditivamente, foi investigado "in vitro" o efeito isolado do composto ácido guanidinoacético (AGA) sobre a produção de superóxido e a apoptose de neutrófilos de cães sadios. Foi possível comprovar que o grande aumento da guanidina plasmática observado em cães com IRC não está associado à alteração do metabolismo oxidativo e apoptose dos neutrófilos. O AGA inibiu o metabolismo oxidativo de neutrófilos de cães sadios sem afetar a viabilidade dessas células / Abstract:It has been recently reported that in canine chronic renal failure (CRF) there occurs oxidative stress, and that neutrophil dysfunction is associated with the increase of apoptosis. Among the many uremic toxins found in higher concentrations due to CRF, there is evidence - in humans - that guanidines inhibit the oxidative metabolism of neutrophils, affecting their bactericidal function. In this study, a systematic review of the relationship between guanidine compounds and neutrophils in dogs was undertaken. It was found that the literature on this subject is scarce and conflicting, which prompted this investigation of the relationship between the plasmatic concentration of guanidine, the production of superoxide, and the apoptosis of neutrophils in dogs with CRF. Morever, the effect of the isolated compound guanidine acetic acid (GAA) on the production of superoxide and on neutrophil apoptosis in healthy dogs was investigated in vitro. It was possible to verify that the large increase of plasmatic guanidine observed in dogs with CRF is not associated with the altered oxidative metabolism and the apoptosis of the neutrophils. The GAA inhibited the oxidative metabolism of the neutrophils in healthy dogs without affecting the viability of these cells / Orientador:Paulo Cesar Ciarlini / Banca:Fabiano Antonio Cadioli / Banca:Aureo Evangelista Santana / Mestre

Orientador: Paola Castro Moraes / Coorientador: Sérgio Britto Garcia / Coorientador: Andrigo Barboza De Nardi / Resumo: A síndrome do intestino curto (SIC) representa condição clínica grave na medicina, caracterizada pela deficiente absorção intestinal de nutrientes, causada pela perda extensa do intestino delgado, culminando em altas taxas de mortalidade tanto em pacientes humanos quanto veterinários. Os tratamentos disponíveis não possuem, até então, resultados satisfatórios para resolução desta importante afecção e consistem em terapias paliativas. Diversos estudos demostraram que o método de desnervação intestinal intrínseca, com utilização do Cloreto de Benzalcônio (CB), consiste em promissora esperança na busca de terapias menos invasivas e eficazes no tratamento da SIC, permitindo melhora nas condições pós-cirúrgicas e prognóstico dos pacientes, por aumentar a área absortiva do intestino. Objetivou-se, com esse trabalho, avaliar a capacidade do CB induzir desnervação química intrínseca, por meio de aplicações intramurais em íleo de ratos Wistar e aprofundar o conhecimento sobre a evolução da lesão neuronal causada neste processo. Foram utilizados 40 ratos, distribuídos em dois grupos (controle- GC e benzalcônio- GB) de 20 animais cada, subdivididos em quatro subgrupos de acordo com o tempo de avaliação pós-operatória de 24, 48 horas, 30 e 90 dias. Os animais foram submetidos à microinjeções intramurais de solução salina estéril 0,9% (GC) ou de cloreto de benzalcônio (GB) em porção ileal, e posterior análise histopatológica e imuno-histoquímica, para avaliação da lesão neuronal. Houve di... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Short bowel syndrome (SBS) represents a serious clinical condition in medicine, characterized by deficient intestinal absorption of nutrients, caused by extensive loss of the small intestine, culminating in high mortality rates in both human and veterinary patients. The available treatments do not have, until then, satisfactory results to solve this important affection and consist of palliative therapies. Several studies have shown that the intrinsic intestinal denervation method, using Benzalkonium Chloride (BC), is a promising hope in the search for less invasive and effective therapies in the treatment of SBS, allowing improvement in the post-surgical conditions and prognosis of the patients, by increasing the absorptive area of the intestine. The aim of this study was to evaluate the ability of BC to induce intrinsic chemical denervation through intramural applications in the ileum of Wistar rats and to deepen the knowledge about the mechanism of action of the neuronal injury caused in this process. A total of 40 rats were divided into two groups (GC-control and benzalkonium-GB) of 20 animals each, subdivided into four subgroups according to the postoperative evaluation time of 24, 48 hours, 30 and 90 days. The animals were submitted to intramural microinjections of sterile saline solution 0,9% (GC) or benzalkonium chloride (GB) in the ileal portion, and later histopathological and immunohistochemical analysis, to evaluate the neuronal lesion. There was a significant decrease (p <0.05) in the myenteric neuronal count in GB2, GB3 and GB4 groups. Positive specific immunoblotting for H2AX and Caspase-3 confirmed the results obtained in the histopathological evaluation, denoting the onset of irreversible cell damage, with DNA double strand break, at 24 and 48 hours, as assessed by the positivity of H2AX immunostaining, progr... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Odontologia, Florianópolis, 2009. / Made available in DSpace on 2012-10-24T13:57:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 267161.pdf: 2643687 bytes, checksum: cbc35430374d13d70bc30bf92fdd1b70 (MD5) / Esse estudo propôs investigar os aspectos relacionados à proliferação celular e ao mecanismo da apoptose no epitélio de revestimento de cistos radiculares (CRs) e dentígeros (CDs). Secções seriadas de 17 cistos radiculares e nove cistos dentígeros foram preparadas para detecção imunoistoquímica, pelo método estreptavidina-biotina-peroxidase (LSAB), dos antígenos Caspase-3 (pró-apoptótico), Bcl-2 (anti-apoptótico) e do marcador de proliferação celular Ki-67. A análise e quantificação das reações foram obtidas com auxílio do programa NIH ImageJ. O marcador Caspase-3 foi detectado principalmente nas camadas suprabasal e superficial de CRs e CDs, enquanto a expressão de Ki-67 foi predominante na camada basal dessas lesões. Ambos marcadores tiveram expressão mais significativa em epitélios hiperplásicos, relacionados a um intenso infiltrado inflamatório na cápsula conjuntiva. A expressão de Bcl-2 foi observada exclusivamente na camada basal do epitélio, com diminuição em áreas associadas a infiltrado inflamatório na cápsula. Nos CDs a expressão de Bcl-2 foi significantemente maior quando comparada aos CRs. Esses resultados sugerem que a atividade proliferativa dos cistos é balanceada pela apoptose, agindo como um mecanismo regulador na manutenção da espessura do revestimento epitelial. Demonstrou-se, ainda, que o processo inflamatório inibe a expressão de Bcl-2, sendo esse resultado mais evidente em CRs. Os cistos dentígero e radicular apresentam mecanismos distintos de formação, mas possuem comportamento biológico semelhante do revestimento epitelial diante da presença de intenso infiltrado inflamatório na cápsula de tecido conjuntivo fibroso. / This study proposed to investigate the aspects related to cell proliferation and the mechanism of apoptosis in epithelial linings of radicular cysts (RCs) and dentigerous cysts (DCs). Serial sections of 17 RCs and nine DCs were prepared for immunohistochemical detection, by the method streptavidin-biotin-peroxidase (LSAB), of antigens Caspase-3 (pro-apoptotic), Bcl-2 (anti-apoptotic) and of the cell proliferation marker Ki-67. The analysis and quantification of the reactions were obtained using the program NIH ImageJ. The marker Caspase-3 was detected mainly in the suprabasal and superficial layers of RCs and DCs, while the expression of Ki-67 was predominantly in the basal layer of these lesions. Both markers had higher expression in hyperplasic epithelium, related to an intense inflammatory infiltrate in conjunctive capsule. The expression of Bcl-2 was observed exclusively in the basal layer of the epithelium, with a reduction in areas associated with inflammatory infiltration in the capsule. The expression of Bcl-2 in DCs was significantly higher when compared to the RCs. These results suggest that the proliferative activity of the cysts is balanced by apoptosis, acting as a regulatory mechanism in maintaining the thickness of the lining epithelium. It was shown also that the inflammatory process inhibits the expression of Bcl-2, this result was more evident in RCs. The dentigerous and radicular cysts have different mechanisms of formation, but have similar biological behavior of the epithelial lining facing the presence of intense inflammatory infiltrate in the capsule of fibrous connective tissue.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2010 / Made available in DSpace on 2012-10-25T02:37:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 275262.pdf: 1618299 bytes, checksum: 7def48e5969e8c002b83f1e9c6db850a (MD5) / O câncer corresponde a um grupo de doenças que possuem em comum o descontrole na proliferação. Em alguns países o câncer já assumiu o papel de principal causa de morte. No Brasil, as leucemias estão entre as 10 principais causas de morte por câncer tanto em homens quanto em mulheres. A leucemia linfóide aguda é uma desordem maligna causada pela proliferação de progenitores linfóides B e T. As chalconas são compostos intermediários essenciais para a biossíntese de flavonóides em plantas. Esta classe de moléculas tem demonstrado uma grande variedade de efeitos farmacológicos entre eles antitumoral. O objetivo deste trabalho foi estudar a atividade antitumoral de chalconas derivadas quimicamente da 3,4-metilenodioxiacetofenona e da 2-naftilacetofenona, em células murinas de leucemia linfoblástica aguda (L1210). Para isto, foi analisada a viabilidade celular nas células tumorais bem como o mecanismo de morte envolvido. Observou-se que as chalconas denominadas R7, R13 e R15 induziram citotoxicidade dependente da concentração e do tempo, apresentando IC50 na faixa de micromolar. A fragmentação do DNA e a ativação da caspase-3 evidenciam que estas chalconas são capazes de promover morte celular por apoptose. Todas as chalconas induziram a geração de espécies reativas de oxigênio, a lipoperoxidação e um aumento na atividade das enzimas antioxidantes glutationa peroxidase, glutationa redutase e glutationa s-transferase. Todas as chalconas também induziram um aumento de glutationa total o qual corresponde principalmente a glutationa oxidada e a chalcona R15 induziu um aumento da glutationa na sua forma reduzida. Estes dados sugerem que todas as chalconas induziram um estresse oxidativo nas células sendo que as chalconas R7 e R15 apresentam um maior efeito pró-oxidante podendo ser esse o principal mecanismo de morte envolvido na citotoxicidade destas moléculas. Todas as chalconas testadas também induziram depleção de ATP nas células, no entanto a chalcona R13 causou uma maior depleção em um tempo menor de incubação. Portanto, o principal mecanismo de morte envolvido com a chalcona R13 pode estar relacionado a um dano mitocondrial e conseqüente depleção energética. Considerando a citotoxicidade das chalconas testadas, as mesmas são promissoras para a continuidade das investigações.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2010 / Made available in DSpace on 2012-10-25T08:35:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 280488.pdf: 1132214 bytes, checksum: 35224f58973c9b99525a5eeeb2f53138 (MD5) / A Daunorrubicina (DNR) é amplamente utilizada na fase de indução do tratamento da Leucemia Mielóide Aguda (LMA). No entanto, o fenômeno de resistência a múltiplos fármacos (MDR), pode comprometer sua eficiência terapêutica como agente antineoplásico. Considerando que fármacos doadores de Óxido Nítrico (NO) têm sido investigados por terem um papel importante na sensibilização de células neoplásicas aos agentes quimioterápicos, o objetivo desse trabalho foi investigar o envolvimento do NO nos mecanismos moleculares de resistência à DNR em células de LMA de origem humana K562. Nossos resultados mostram que a incubação das células K562, com concentrações crescentes de DNR e de SNAP, um doador de NO, não causou morte celular significativa quando utilizados de forma individualizada. No entanto, a adição simultânea desses compostos, causou citotoxicidade de maneira concentração dependente. Para estudar os mecanismos pelos quais esses compostos provocaram morte celular, foi realizada a avaliação do ciclo celular, da expressão das proteínas antiapoptóticas Bcl-2 e survivina, proapotótica Bax e da caspase-3. A DNR (100 µM) e o SNAP (1mM) respectivamente causam bloqueio nas fases S e G0/G1 do ciclo celular na célula K562. Contudo, quando adicionados simultaneamente, o SNAP não altera o bloqueio causado pela DNR na fase S. Além disso, as células K562 apresentam de maneira constitutiva a expressão das proteínas antiapoptóticas Bcl-2 e survivina, e o tratamento com DNR e SNAP, isoladamente, não alteraram de forma significativa a expressão dessas proteínas. No entanto, a adição simultânea desses compostos causou redução de 40% e 70% na expressão de Bcl-2 e na survivina, respectivamente. A DNR e o SNAP também não alteram a expressão da proteína proapoptótica Bax, porém a associação desses compostos causou um aumento de 30% na expressão dessa proteína. A análise da distribuição intracelular de DNR nas células K562, por imunofluorescência mostra que a DNR acumula-se em regiões pontuais do citoplasma. Entretanto, quando as células K562 são tratadas com a associação de DNR e SNAP, há um acúmulo maior de DNR na célula e sua localização ocorre preferencialmente na região nuclear. Os resultados, obtidos na avaliação do acúmulo e retenção de DNR por citometria de fluxo, corroboram com esses resultados. Na análise da expressão dos genes abcc1 e lrp por RT-PCR, foi observado que as células K562 apresentam expressão constitutiva de ambos os genes. Em relação ao gene lrp, observamos que a DNR e o SNAP associados ou não causaram uma significativa diminuição na sua expressão. No entanto, a expressão do gene abcc1 não foi alterada na presença de SNAP e o tratamento com DNR causou uma pequena redução na sua expressão, a qual foi intensificada com a associação DNR e SNAP. A compilação das evidências obtidas nesse estudo nos permite sugerir que o NO inibe a atividade da abcc1, o que leva a um aumento intracelular de DNR, o qual permite que o fármaco atinja seu alvo de ação citotóxica no núcleo. Assim, o dano ao DNA causado pela DNR ativa a apoptose via mitocondrial pelo aumento da expressão da Bax e inibição das proteínas Bcl-2 e survivina, culminando na ativação da caspase 3 e indução da apoptose nas células de leucemia mielóide aguda K562. / Daunorubicin (DNR) is widely used in the induction phase of the treatment for Acute Myeloid Leukemia (AML). However, multiple drug resistance (MDR) may compromise its therapeutic efficacy as an antineoplastic agent. Considering that Nitric Oxide (NO) donating drugs have been investigated for their important role in the sensitization of neoplastic cells to chemotherapy drugs, the goal of this work was to investigate the involvement of NO in the molecular mechanisms of resistance to DNR in human AML K562 cells. Our results have shown that the incubation of K562 cells, with increasing concentrations of DNR and SNAP (NO donors) did not cause significant cell death when used individually, but the simultaneous addition of these compounds produced cytotoxicity in a concentration-dependent manner. In order to study the mechanisms through which these compounds induce cell death, the cell cycle, the expression of anti-apoptotic proteins Bcl-2 and survivin, proapoptotic Bax, and caspase-3 were evaluated. DNR (100 ìM) and SNAP (1 mM) halt phases S and G0/G1 of the cell cycle in K562 cells, respectively. When added simultaneously, however, SNAP does not alter the block caused by DNR on phase S. Furthermore, K562 cells constitutively express anti-apoptotic proteins Bcl-2 and survivin, and treatment with DNR and SNAP separately does not significantly alter the expression of these proteins. Notwithstanding, the simultaneous addition of these compounds resulted in 40% and 70% reductions in the expression of Bcl-2 and survivin, respectively. DNR and SNAP also did not alter the expression of the proapoptotic protein Bax, but the association of both compounds resulted in a 30% increase in the expression of the same protein. The immunofluorescence analysis of the intracellular distribution of DNR in K562 cells shows that DNR accumulates in speckles in the cytoplasm. However, when K562 cells are treated with a mixture of DNR and SNAP, there is a greater accumulation of DNR in the cells, located primarily in the nuclear region. The results obtained in the evaluation of the accumulation and retention of DNR through flow cytometry support the previously mentioned findings. The RT-PCR analysis of the expression of abcc1and Irp genes showed that K562 cells constitutively express both genes. Regarding Irp, DNR and SNAP did not produce a significant decrease in its expression, either combined or separately. However, the expression of the abcc1 gene was not affected by the presence of SNAP but when treated with DNR its expression presented a small reduction, which was intensified by the association of DNR and SNAP. The compilation of evidence obtained in this study allows us to suggest that NO inhibits the activity of abcc1, leading to an intracellular increase in DNR, which allows this drug to reach its target of cytotoxic activity in the nucleus. Thus, the DNA damage caused by DNR triggers the mitochondrial apoptosis pathway with an increase in the expression of Bax and inhibition of Bcl-2 and survivin proteins, culminating in the activation of caspase-3 and the induction of apoptosis in acute myeloid leukemia K562 cells.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2011 / Made available in DSpace on 2012-10-25T17:13:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 293140.pdf: 2869221 bytes, checksum: afc89617168db8d6bb0fad6205bad8a8 (MD5) / Apesar do recente avanço e evolução no desenvolvimento de medicamentos cada vez mais específicos para o tratamento de neoplasias, continuam sendo observados e relatados efeitos inespecíficos destes agentes, que além de atuar nas células neoplásicas exercem efeitos em células normais. O Mesilato de Imatinibe (MI) foi racionalmente desenvolvido para inibir a atividade de proteínas e receptores do tipo tirosinoquinase, especialmente a proteína BCR-ABL anômala característica da leucemia mielóide crônica (LMC). As células-tronco mesenquimais (CTM) compõem o microambiente hematopoiético (MH), com função de suporte e regulação da hematopoese, sendo células precursoras de outras células que também constituem o MH, como os fibroblastos, adipócitos e osteoblastos. Estudos relataram efeitos citotóxicos de diferentes agentes quimioterápicos nas CTM, porém, os efeitos que o MI exerce nesta população de células ainda são desconhecidos. O objetivo do trabalho foi avaliar, in vitro, os efeitos do MI em CTM normais isoladas da placenta humana. Aplicamos um protocolo de cultivo celular de CTM, expondo as mesmas a diferentes concentrações do MI e avaliamos parâmetros como viabilidade celular, proliferação, morfologia, diferenciação e morte celular. Também foi avaliada a expressão de marcadores de células indiferenciadas (Oct-4 e Nanog) e da molécula de matriz extracelular fibronectina. Inicialmente, caracterizamos as células isoladas da placenta humana como CTM, de acordo com características morfológicas, fenotípicas e um painel de expressão imunofenotípica preconizados para este tipo celular. O MI exerceu efeito citotóxico nas CTM a partir da concentração de 1,0 µM, com valor de IC50 de 8,7 µM. A maioria das células expostas ao medicamento demonstrou morfologia alterada em comparação com as células normais e fibroblastóides do grupo controle. O MI reduziu a taxa de proliferação das CTM de modo concentração-dependente nos diferentes tempos de exposição testados. Nos ensaios de diferenciação celular, observamos que o medicamento estimulou a diferenciação das CTM para os fenótipos osteogênico e adipogênico. Com a análise da expressão de Nanog e Oct-4, observamos que, nas menores concentrações do MI (2,5 e 5,0 µM), as células indiferenciadas são mais resistentes aos efeitos do MI quando comparadas a células possivelmente já diferenciadas. A expressão imunocitoquímica de fibronectina também foi reduzida pelo MI. Na avaliação do processo de morte celular observado nos primeiros experimentos, indicamos que este mecanismo foi provavelmente por apoptose, devido à maior quantidade de núcleos picnóticos nas CTM expostas ao MI e também pela captação do corante brometo de etídio. É importante ressaltar que todos os efeitos observados, principalmente nos ensaios quantificados, foram classificados como concentração-dependente. Estes resultados confirmam o efeito do MI em CTM normais, o que pode representar danos até mesmo irreversíveis no MH de pacientes que utilizam o medicamento por período prolongado. Estes dados indicam a necessidade do desenvolvimento de medicamentos mais específicos para o tratamento das diferentes neoplasias que acometem a população.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2011 / Made available in DSpace on 2012-10-26T03:56:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 298139.pdf: 2310074 bytes, checksum: 6da2debdc48462608178c1de958dfa81 (MD5) / As terapias farmacológicas utilizadas nos casos avançados de melanoma metastático maligno parecem ser incapazes de curar ou melhorar a sobrevida dos pacientes, resultando numa das neoplasias mais refratárias ao tratamento. As respostas à quimioterapia são associadas a graus significativos de toxicidade e efeitos colaterais que podem resultar em interrupção do tratamento antes da possibilidade de erradicação do câncer. Este trabalho descreve a análise dos galatos de octila (G8) e de dodecila (G12) como agentes antitumorais para o tratamento do melanoma, com ênfase na elucidação do mecanismo de ação e na investigação da toxicidade in vitro e in vivo, assim como da atividade antimelanoma in vivo, utilizando a encapsulação dos galatos em nanopartículas lipídicas sólidas como estratégia para melhorar o potencial destes compostos como novos agentes antitumorais. A primeira parte deste estudo foi a investigação do mecanismo de citotoxicidade do G8 e do G12 sobre células de linhagem de melanoma murino B16F10 e de linhagens não tumorais renais. Para isso, vários métodos de avaliação da viabilidade celular foram usados visando determinar o alvo celular para a ação citotóxica dos mesmos. Os mecanismos relacionados à apoptose foram examinados por meio da avaliação da atividade da caspase-3, do estresse oxidativo, do potencial mitocondrial e da expressão de proteínas anti ou pró-apoptóticas. Ao comparar os diferentes métodos de avaliação da viabilidade celular, os galatos apresentaram uma maior citotoxicidade no ensaio indicativo da atividade lisossômica e da integridade da membrana plasmática em comparação com os relacionados às atividades mitocondrial e ribossômica. Promoveram, ainda, estresse oxidativo, despolarização da membrana mitocondrial, aumento na atividade de caspase-3 e aumento da expressão de proteínas pró-apoptóticas (Bax) e diminuição das anti-apoptóticas (Bcl-2). Entre as linhagens tumoral e não tumorais foi evidenciada maior citotoxicidade dos galatos para a primeira. A segunda parte do estudo foi a avaliação da toxicidade e atividade antimelanoma do G8 na forma livre ou encasulado em nanopartículas lipídicas sólidas, usando modelos in vivo do melanoma murino. As nanopartículas brancas (sem G8) ou contendo o G8 encapsulado foram produzidas e caracterizadas quanto às características físico-químicas. Nos modelos estudados, a encapsulação do G8 na nanopartícula lipídica não aumentou a sua atividade antimelanoma, entretanto, os efeitos colaterais foram amenizados. A encapsulação do G8 na nanopartícula resultou em uma diminuição da toxicidade geral, hepática e renal induzida pelo G8 na forma livre, porém, preservando sua eficácia em inibir o desenvolvimento de metástases pulmonares. Os estudos sobre o mecanismo de ação antimelanoma do G8 in vivo mostraram a indução de estresse oxidativo e a ativação de caspase-3 nos pulmões. Em adição, o composto diminuiu o conteúdo de melanina e aumentou a lipoperoxidação no tumor subcutâneo. Assim, os resultados in vitro indicam que a morte celular por apoptose induzida pelo G8 e G12 em células B16F10 apresenta maior seletividade para as células tumorais e envolve danos à membrana lipídica, além de disfunção mitocondrial e lisossomal, que foram acompanhadas por alterações na expressão e atividade de proteínas apoptóticas e parece ser desencadeada por estresse oxidativo celular. Os resultados in vivo revelam que a encapsulação na nanopartícula lipídica reduziu a toxicidade do G8, sem resultar, ao menos no modelo de metástase, em alteração na ação antitumoral do mesmo, a qual parece estar relacionada à indução de estresse oxidativo, ativação de caspase-3 pulmonar e inibição da concentração de melanina no tumor subcutâneo.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina. Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Neurociências. / Made available in DSpace on 2012-10-23T14:59:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 238067.pdf: 1031962 bytes, checksum: c221ab5663b373401930264fc5e8a508 (MD5) / O objetivo deste estudo foi avaliar o tipo de morte celular no hipocampo e córtex cerebral induzida pela administração de AQ em camundongos, bem como avaliar os efeitos do pré-condicionamento com NMDA sobre a expressão da caspase-3, fragmentação de DNA e sobre o sistema antioxidante da glutationa. Os camundongos foram tratados com NMDA (75mg/kg, 10ml/kg i.p) 24 h antes da infusão de AQ (4µl, 9.2mM i.c.v.). O AQ não promoveu fragmentação do DNA tanto no córtex cerebral como no hipocampo, sugerindo morte celular por necrose. O PC com NMDA não promoveu alteração na fragmentação do DNA, demonstrando que não possui efeito neurotóxico. O PC com NMDA e a infusão de AQ não promoveram alterações na expressão da pró-caspase-3 e da caspase-3. O PC com NMDA e a infusão de AQ não alteraram o conteúdo de glutationa total, e a atividade das enzimas glutationa redutase e da glicose 6-fosfato desidrogenase. Contudo, um aumento na atividade da glutationa S-transferase foi observado no córtex após o tratamento com NMDA e AQ. Além disso, o PC com NMDA preveniu a diminuição na atividade da glutationa peroxidase induzida pelo AQ no hipocampo, mas não teve efeito sobre a diminuição da atividade da GPx cortical.

Orientador: Fernanda da Cruz Landim / Coorientador: José Buratini Junior / Banca: Sony Dimas Bicudo / Banca: João Carlos Pinheiro Ferreira / Banca: José Antonio Visentini / Banca: Mario Binelli / Resumo: Objetivo deste experimento foi estudar os mecanismos envolvidos na sobrevivência à criopreservação de embriões Bos taurus indicus (Nelore) e Bos taurus taurus (Simental) produzidos in vitro (PIV) e in vivo (TE). Em um arranjo fatorial 2 x 2, duas subespécies (Bos taurus indicus vs Bos taurus taurus) e duas origens (PIV vs TE) foram utilizadas para testar a hipótese de que a capacidade de sobrevivência após a criopreservação é um evento multifatorial, e que a composição lipídica e o padrão de expressão gênica global afetam a criotolerância embrionária. Vacas Nelore (N=14) e Simental (N=14) foram submetidas a OPU e os oócitos recuperados (N=840 e 450, respectivamente) foram submetidos a MIV, FIV e CIV. Além disso, vacas Nelore (N=7) e Simental (N=8) foram submetidas a superestimulação ovariana, IATF e lavagem uterina. Os embriões PIV (N=349 e N=105) e TE (N=80 e N=74), respectivamente Nelore e Simental, foram submetidos as técnicas de vitrificação (N=70-94), coloração de Sudan Black (n=30), espectrometria de massas por ionização e dessorção a laser assistida por matriz (MALDI-MS; N=8 por grupo), microarray genômico (Nelore PIV N=4, Nelore TE N=4, Simental PIV N=3, Simental TE N=3) e validação no qPCR (N=8 por grupo). Modelos univariados (PROC LOGISTIC e PROC GLIMMIX- SAS 9.2) e multivariados (análise dos componentes principais-PCA- Piruete v.3.11 e MetaboAnalyst) foram utilizados na análise estatística. A análise do Microarray genômico procedeu-se no FlexArray 1.6.1.1. Genes com "fold change" de 1,5 e P≤0,05 foram considerados diferentemente expressos. Embriões Simental apresentaram maior sobrevivência após a vitrificação que os Nelore (34,6 vs 20,2%; P<0,05). Apesar disso, os embriões Simental apresentaram maior conteúdo lipídico do que os Nelore (3,4±0,3 vs 2,4±0,3 intensidade de cinza x 10-4 / μm3 ; P<0,05)... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The objective was to study mechanisms involved in the post-cryopreservation survival of Bos taurus indicus (Nellore) and Bos taurus taurus (Simmental) in vitro (IVP) and in vivo (ET) produced embryos. In a 2x2 factorial experimental design, two subspecies (Bos taurus indicus vs Bos taurus taurus) and two origins (PIV vs ET) were used to test the hypotheses that the postcryopreservation embryo survival capacity is a multifactorial event and that the lipid composition and the global gene expression pattern affect embryo cryotolerance. Nellore and Simmental cows (N=14) were submitted to OPU sessions and recovered oocytes (840 and 450, respectively) underwent IVM, IVF and IVC. Moreover, Nellore (N=7) and Simmental (N=8) cows were submitted to ovary superstimulation, FTAI, and uterine flushing. The IVP (N=349 and N=105) and ET (N=80 and N=74) embryos, Nellore and Simmental respectively, were used in the vitrification (N=70-94), Sudan Black B stain (N=30), matrix-assisted laser desorption ionization mass spectrometry (MALDIMS) (N=8 per group), genomic microarray (Nellore IVP N=4, Nellore ET N=4, Simmental IVP N=3, Simmental ET N=3) and qPCR (N=8 per group) techniques. Univariate (PROC LOGISTIC and PROC GLIMMIX, SAS 9.2) and multivariate (PCA - Piruete v.3.11 and MetaboAnalyst) models were used for the statistical analysis. Microarray data analysis was performed in FlexArray 1.6.1.1 software. Genes with a fold change of at least 1.5 and a probability of P<0.05 were considered differentially expressed. Simmental embryos had higher post-vitrification survival (34.6 vs 20.2%; P<0.05) compared with Nellore. Nevertheless, Simmental embryos had higher lipid content than Nellore (3.4±0.3 vs 2.4±0.3 gray intensity x 10-4 / μm3; P<0.05). When compared ET with PIV embryos, it was observed that the former had higher post-vitrification... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Paula Rahal / Coorientador: / Banca: / Resumo: O ZIKV é um vírus de RNA, não segmentado, de fita simples e sentido positivo membro da família Flaviviridae. O genoma viral possui uma arquitetura típica de flavivírus, com cerca de 11kb de comprimento, que codifica três proteínas estruturais (Capsídeo, precursor-Membrana, Envelope) e sete proteínas não-estruturais (NS1, NS2A, NS2B, NS3, NS4A, NS4B, NS5). Nas Américas, emergiu rapidamente após surto na ilha da Páscoa, Chile. No Brasil, o surto iniciou em 2015, aumentando consideravelmente casos de microcefalia em recém-nascidos. Aliada a esses casos, também foi observada a ocorrência de síndrome neurológica de Guillain-Barré. Essas associações transformaram o impacto da transmissão e infecções por ZIKV em uma preocupação de saúde pública global. O vírus é transmitido principalmente pelos mosquitos do gênero Aedes, que possuem ampla distribuição e apresentam grandes adaptações a ambientes urbanos. Além de transmissão vetorial, pode ser transmitido via sexual e materno-fetal. O objetivo deste trabalho foi comparar as infecções por uma cepa contemporânea de ZIKV com DENV2 em modelo de explantes de placenta humana a termo, bem como quantificar expressão de citocinas, interferons do tipo I, II e III e marcadores de apoptose induzida via infecção viral. Os resultados demonstram que os explantes da placenta a termo são permissivos e apoiam a infecção por ZIKV. A quantificação da carga viral entre infecções ZIKV e DENV2 foram similares. No entanto, DENV2 apresentou decréscimo na... / Abstract: ZIKV is a non-segmented, single-stranded, positive-sense RNA virus and a member of the Flaviviridae family. Its genome has a typical 11 kB-long flavivirus architecture that encodes three structural proteins (Capsid, PrecursorMembrane, Envelop) and seven non-structural proteins (NS1, NS2A, NS2B, NS3, NS4A, NS4B and NS5). In the Americas, the viruses emerged rapidly after outbreak on Pascoa Island, Chile. The outbreak reached Brazil in 2015, substantially increasing cases of microcephaly in newborns. In addition to microcephaly, cases associated with neurological diseases such as GuillainBarré syndrome have made ZIKV a global public health concern. The virus is mainly transmitted by mosquitoes of the genus Aedes, which are widely distributed and which have adapted well great to urban environments. In addition to vector transmission, ZIKV can be transmitted via sexual and maternal-fetal routes, the virus has been isolated is from sperm, amniotic fluid and central nervous systems of stillborn fetuses. The goal of this report was compare ZIKV-infected to DENV2 in full-term human placenta explant model. Quantify expression of cytokines, type I, II and III interferons and markers of induced-apoptosis by viral infection. The results demonstrated that full-term placenta explants are permissive and support ZIKV infection. Viral loads in ZIKV and DENV2 infections were similar. However, DENV2 presented a decrease in viral load release at 24 hours post infection (h.p.i). The kinetics of viral replication coincided with the expression of proinflammatory cytokines and the increase of apoptosis in the infected tissue. Apoptosis was partially dependent on TNF-α. Anti-TNF-α treatment significantly decreased the activated-caspase 3 mediated viral infection. Cumulatively, this model demonstrates that human placental tissues are targets of ZIKV-infection and that the infection is pathogenic to ... / Doutor