Orientador: Edson Antunes / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-17T02:28:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Leiria_LuizOsorio_M.pdf: 1930744 bytes, checksum: 214d355861ca93277cceba03b993e869 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: As disfunções do baixo trato urinário estão entre as complicações mais comumente associadas ao diabetes mellitus, e incluem urgência miccional, alterações da freqüência e incontinência urinária, hiperatividade e hipertrofia da bexiga, tornando complexos os procedimentos diagnósticos e terapêuticos. O mediador primário para a contração do músculo liso detrusor é a acetilcolina (Ach), sendo suas ações mediadas, principalmente, pelos receptores muscarínicos do subtipo M3 e M2, principalmente o subtipo M3. O receptor P2X1, ativado pelo trifosfato de adenosina (ATP), também participa da contração do detrusor; porém, com menor importância. Ambos promovem a contração através da mobilização de Ca2+ citosólico, seja pela formação de inositol trifosfato (IP3), seja pelo influxo de Ca2+ extracelular via canais de Ca2+ tipo L. Além destes mecanismos, os receptores M3 podem desencadear resposta contrátil independente da concentração de Ca2+ citosólico, através da sensibilização ao mesmo, a qual ocorre, principalmente, pela ação da enzima Rho-kinase. A despeito de sua grande relevância na contração da bexiga, até o presente, poucos estudos abordaram as alterações na homeostase do Ca2+ celular resultantes do diabetes mellitus. Além disso, a contribuição da uretra para a cistopatia diabética ainda é pouco compreendida e estudada. O objetivo deste trabalho foi investigar as alterações funcionais, morfológicas e moleculares do baixo trato urinário em camundongos C57BL/6 com diabetes induzida por estreptozotocina, bem como compreender o papel da uretra na fisiopatologia desta desordem. Para tanto, realizamos os seguintes experimentos: 1) análise histomorfométrica da bexiga; 2) estudo cistométrico; 3) concentração-resposta ao agonista muscarínico carbacol (na ausência e na presença do Y27632 ou nifedipina), ao agonista purinérgico ?,?-metileno ATP, cloreto de potássio (KCl) e ao cloreto de cálcio (CaCl2), assim como curvas freqüência-resposta à estimulação elétrica (1-32 Hz, 80 V, 10 segundos) em detrusor isolado, e montado em banho para órgão preenchido com solução de Krebs Henseleit; 4) curvas concentração-resposta ao agonista ?1-adrenérgico fenilefrina, bem como de relaxamento ao nitroprussiato de sódio, tadalafil e Bay 41-2272, em anéis de músculo liso de uretra; 6) expressão de RNAm de receptores muscarínicos M2 e M3, purinérgicos P2X1 e canais de Ca2+ tipo L em detrusor. Os animais diabéticos apresentaram aumento do peso da bexiga, da espessura da parede e do volume da mesma em relação aos camundongos controle. A densidade de tecido neural também foi maior no grupo diabético, enquanto nenhuma alteração foi verificada em relação à densidade de músculo liso e de colágeno. O estudo cistométrico revelou aumento da capacidade e complacência da bexiga nos animais diabéticos, assim como maior amplitude das contrações de micção, aumento da freqüência de micção e de contrações involuntárias. Estes ainda exibiram aumento da pressão intravesical pós-miccional, evidenciando uma perda da eficiência da micção. A contratilidade do detrusor isolado de camundongos diabéticos se mostrou maior em resposta ao carbacol, ?,?-metileno ATP, KCl, CaCl2 e estímulo elétrico. Para avaliar o papel dos canais de Ca2+ tipo L e da rho-quinase no aumento da resposta contrátil ao carbacol, realizamos curvas ao carbacol na presença do bloqueador de canal de Ca2+ tipo L, nifedipina (3 nM) ou do inibidor da rho-quinase, Y27632 (1 µM). A pré-incubação com nifedipina preveniu o aumento da contração no grupo diabético, enquanto na presença do Y27632 não houve redução significativa das contrações em ambos os grupos. A expressão de RNAm de receptores M3 foi significativamente maior no grupo diabético em comparação com o grupo controle, enquanto não foram observadas alterações significativas na expressão de receptores M2 e P2X1. Os camundongos diabéticos exibiram aumento significativo da expressão de RNAm de canais de Ca2+ tipo L. As curvas concentração-resposta em músculo liso de uretra revelaram aumento da contração em resposta à fenilefrina e redução do relaxamento ao doador de óxido nítrico (NO), nitroprussiato de sódio (SNP), no grupo diabético. Em suma, nossos dados mostram que o aumento da contração do músculo detrusor em camundongos diabéticos é devido ao aumento do influxo de Ca2+ extracelular através dos canais de Ca2+ tipo L e ao aumento da expressão de receptores muscarínicos M3. Além disso, o aumento da resistência mecânica da uretra resultou em perda da eficiência do esvaziamento da bexiga associada à hiperatividade da mesma / Abstract: Bladder dysfunction is among the most common and incapacitating complications of diabetes mellitus. The diabetes related lower urinary tract symptoms (LUTS) include overactive bladder, incontinence, urgency, frequency increase and bladder hypertrophy. Acethylcholine (ACh) is the main neurotransmitter responsible for the detrusor smooth muscle contraction, acting mainly at the muscarinic M2 and M3 subtypes. P2X1, through ATP stimuli, also contribute to void contractions. Both M3 and P2X1 activation triggers citosolic Ca2+ mobilization by triphosphate inositol (IP3) formation or extracellular Ca2+ influx through L-type Ca2+ channels. Activation of M3 receptors can also elicit contractile response through Ca2+ concentration-independent pathways. Despite the great importance of Ca2+ handling/homeostases to receptor-mediated bladder contractions, its contribution to diabetic cistopathy has been little studied. In addition, the contribution of urethra in diabetic cistopathy remains poorly comprehended. The present study was designed to evaluate the functional, structural and molecular alterations of detrusor and urethral smooth muscles (DSM) in streptozotocin-induced diabetic mice. The following experiments were performed: 1) Hystomorfometric measurements; 2) Cystometric study; 3) Contractile responses to the muscarinic agonist carbachol (in the absence and in the presence of nifedipine or Y27632), purinergic agonist ?,?-methylene ATP, KCl, CaCl2 and electrical field stimulation (EFS, 1-32 Hz, 80 V, 10 sec) in detrusor strips mounted in organ baths containing Krebs-Henseleit solution; 4) Concentration-response curves to the ?1-adrenergic agonist phenylefrine were performed in isolated rings of urethral smooth muscle and relaxant curves to sodium nitroprusside (SNP), tadalafil and Bay 41-2272; 5) Expression of mRNA of muscarinic receptors M3 and M2, purinergic P2X1 receptors and L-type Ca2+ channels in detrusor by real-time RT-PCR. Histomorfometric analysis revealed increased bladder weight, volume and wall thickness. Neural tissue density was also higher in diabetic mice, whereas smooth muscle and collagen density were not modified in both groups. Cistometric study revealed increases in bladder capacity and compliance in diabetic group, as well as higher peak pressure, micturition frequency and frequency of non-void contractions. Diabetic mice exhibited enhanced post-void pressure, indicating a decrease in bladder emptying efficiency. Detrusor contractile responses to carbachol, ?,?-methylene ATP, KCl, CaCl2 and EFS were significantly higher in diabetic mice. In order to evaluate the role of L-type Ca2+ channels and rho-kinase in the detrusor hypercontractility, contraction curves to carbacol were performed in the presence of L-type Ca2+ channel blocker nifedipine (3 nM) or the rho-kinase inhibitor Y27632 (1 µM). Pre-incubation with nifedipine prevented the increased carbachol-induced detrusor contractions seen in the diabetic mice, while Y27632 did not significantly affect the detrusor contractions in both groups. Levels of mRNA of M3 receptor and L-type Ca2+ channels were significantly increased in diabetic animals, while M2 and P2X1 mRNA expression were not modified in both groups. Concentration-response curves in urethral smooth muscle revealed an increased contractile response to phenylefrine, and a reduction on the relaxant responses to nitric oxide donor, sodium nitroprusside (SNP), in diabetic group, indicating an enhanced urethral resistance by diabetes. In conclusion, our data shows that the overactive detrusor in diabetes is likely to be due an increase in extracellular Ca2+ influx through L-type Ca2+ channels and an enhanced M3 muscarinic expression. Moreover, the higher urethral mechanical resistance result in decrease of the bladder emptying efficiency in diabetic mice associated to detrusor overactivity / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Orientador: Carlos Arturo Levi D'Ancona / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-13T02:19:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 LavouraJunior_NivaldodaSilva_D.pdf: 951147 bytes, checksum: d3c8aa51fce06ad3e70f9b5dd82f9faf (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: Introdução: A videolaparoscopia, na Urologia, vem sendo empregada em cirurgias reconstrutivas complexas. Devido às vantagens, como menor intensidade de dor e menor tempo de recuperação pós-operatória. Objetivo: Comparar a ileocistoplastia assistida por videolaparoscopia com sua versão convencional, utilizando um modelo experimental de suínos; avaliar os aspectos intraoperatórios, aspectos funcionais do reservatório, recuperação pós-operatória do animal e incidência de aderência intraperitonial. Material e Métodos: Foram utilizados 30 porcos machos da raça Large-White, com peso variando entre 20 e 25 Kg. Separados em 4 grupos, sendo Grupo I: 10 animais submetidos a ileocistoplastia assistida por videolaparoscopia, Grupo II: 10 animais submetidos a ileocistoplastia aberta, Grupo III: 5 animais submetidos a simulação por videolaparoscopia e Grupo IV: 5 animais submetidos a simulação de cirurgia aberta. As variáveis analisadas foram: o tempo operatório total, tempo da anastomose vesicoileal, ganho de peso, capacidade e pressão vesicais, incidência, tipo, grau e o escore de aderência intraperitonial. O método estatístico utilizou análise descritiva através de medidas de posição e dispersão para variáveis contínuas e tabelas de frequências para variáveis categóricas. Para comparação de proporções foi utilizado o teste Exato de Fisher. Para comparação de medidas contínuas ou ordenáveis entre 2 grupos, foi utilizado o teste de Mann- Whitney e entre 3 ou mais grupos, o teste de Kruskal-Wallis. Para comparação do ganho de peso, ao longo do tempo e entre os grupos, foi utilizada a ANOVA para medidas repetidas. Devido ao tamanho dos grupos e à variabilidade, foi aplicada a transformação por postos na medida de ganho de peso. O nível de significância adotado para os testes estatísticos foi de 5%. Resultados: O tempo médio de cirurgia apresentou diferença significativa entre os Grupos I e II, sendo respectivamente de 179,4 minutos e de 69,6 minutos (p<0.05) e o tempo médio de anastomose enterovesical foi de 74,8 minutos para o Grupo I e 31,8 minutos para o Grupo II (p<0.05). A média de ganho de peso diário apresentou diferença significativa entre os Grupos I e II, durante as quatro semanas observadas, sendo as médias em cada semana para o Grupo I: 384,7 g; 437,2 g; 493,6 g e 546,2 g. Para o Grupo II, as médias semanais foram de 287,4 g; 353,9 g; 417 g e 485,1 g (p< 0.05 em todas as fases de observação). A capacidade vesical foi semelhante entre os Grupos, sendo as médias para os Grupos I, II, III e IV de 373,6 ml; 385,3 ml; 411 ml e 413 ml (p= 0,2470). As pressões vesicais apresentaram médias de 22,5 cmH20; 20,9 cmH20; 18,2 cmH20 e 21,2 cmH20 (p= 0.3987). Quanto à incidência de aderências intraperitoneal, não houve diferença significativa entre os Grupos I, II, III e IV (p= 0.1789). Entretanto, quanto ao tipo, grau da aderência e escore das aderências houve, diferenças significativas entre os grupos, sendo menores em todos os itens analisados nos grupos simulados (Grupo III e IV) e menores no Grupo I, quando comparado ao Grupo II (P< 0.05), sendo as médias do escore de aderência para os Grupos I, II, III e IV de 2,8; 4,2; 2 e 2. Conclusão: A ileocistoplastia assistida por videolaparoscopia, em modelo experimental de suínos, demanda tempo operatório superior ao convencional, porém, com vantagens significativas: recuperação pós-operatória mais rápida e incidência de aderências intraperitoniais menos complexas e com resultados funcionais do reservatório urinário semelhantes aos da cirurgia convencional / Abstract: Introduction: Based on the concept of less invasive surgical techniques, indications for video laparoscopy in Urology have grown and are well established either for ablative or reconstructive surgeries. The potential advantages of video laparoscopy are: less pain; shorter hospital stay; earlier recovery; biological advantages such as lower incidence of intraperitoneal adhesions, fewer stimuli to immunosuppression, smaller and more esthetic scars, less self-image aggression - especially in children. Laparoscopic reconstructive surgery takes longer than open surgery as it requires intracorporeal sutures. However, with the standardization of the operative technique and continuous training, it is possible to reduce duration, making it approximately the same as in an open surgery. Objective: Compare laparoscopic assisted ileocystoplasty with open ileocystoplasty in an experimental model in pigs, evaluating intraoperative aspects, postoperative recovery, development of peritoneal adhesions and functional results. Material and Methods: The study was conducted on 30 Large-white male pigs (20- 25Kg). The animals were divided into 4 groups. Group I (10 animals that underwent laparoscopic assisted ileocystoplasty), Group II ( 10 animals that underwent open surgery), Group III (5 animals underwent laparoscopy simulation) and Group IV (5 animals that underwent open surgery simulation). Studied variables were: total operative time, ileovesical anastomosis time, postoperative urodynamic results (bladder capacity and compliance), daily and weekly weight gain and intraperitonial adhesions (incidence and type, after animal sacrifice). Results: Mean operative time for groups I and II was 179.4 and 69.6 minutes respectively, and this difference was significant (p<0.05). Mean ileovesical anastomosis time had also significant difference (p<0.05) between groups I (74.8 min) and II (31.8 min). Significant differences were noted in mean weekly weight gain when comparing the first 4 weeks after surgery, Groups I (1st week: 384.7g ; 2nd week: 437.2g ; 3rd week: 493.6g and 4th week: 546.2g ) and II (1st week: 287.4g; 2nd week: 353.9g ; 3rd week: 417g and 4th week: 485.1g). Post operative bladder capacity and compliance differences among all groups were not significant (p>0.05). Overall incidence of intraperitoneal adhesions was not significant different in all groups (p>0.05). However, adhesions complexity and mean adherence "score" was higher in Group II (4.2 - open surgery) when compared to Groups I (2.8), III (2.0) and IV (2.0). This difference was significant (p<0.05). Conclusion: Laparoscopic assisted ileocystoplasty requires more surgical time than open surgery, but has significant advantages. Postoperative recovery is faster and intraperitoneal adhesions are less complex in laparoscopic assisted ileocystoplasty than conventional (open) surgery. Functional results are the same with open and laparoscopic assisted ileocystoplasty / Doutorado / Cirurgia / Doutor em Cirurgia

Orientador: Laura Sterian Ward / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-15T03:45:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Santos_LuisEduardoMurgeldeCastro_D.pdf: 684034 bytes, checksum: 23d763337837e7c15426a84955a7074e (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: Vários estudos já investigaram a associação do polimorfismo do códon 72 de P53 (P53 Arg72Pro) a um risco aumentado para desenvolver câncer de bexiga, com resultados controversos. Aproveitando a diversidade étnica da população brasileira, nós genotipamos 94 indivíduos com câncer de bexiga (76 homens e 18 mulheres; idade 21 - 96 anos; 67 ±13 anos; 79 fumantes e 15 não fumantes), que foram cuidadosamente pareados com 159 indivíduos controle (104 homens e 55 mulheres; idade 20 - 100 anos; 65 ±21 anos; 33 fumantes e 126 não fumantes). A avaliação levou em conta exposição ambiental, fatores alimentares, história ocupacional, tabagismo, condições gerais de saúde e doenças prévias. O genótipo Arg/Pro foi menos frequente na população de pacientes e conferiu um risco 44% menor de câncer de bexiga. A análise de regressão logística univariada também identificou sexo masculino (OR = 6,87, 95% CI = 3,78 - 12,5; P < 0,001), idade acima de 65 anos (OR = 4,44, 95% CI = 2,56 - 7,71; P < 0,001), e tabagismo (OR = 18,61, 95% CI = 9,62 - 36,03; P < 0,001) como importantes fatores de risco para câncer vesical. No entanto, o genótipo P53 Arg72Pro desapareceu como um fator de susceptibilidade numa análise de regressão multivariada e univariada ajustada para sexo, idade e tabagismo, sugerindo que estava conectada a um destes fatores na predisposição ao câncer de bexiga. Além disto, uma análise mais detalhada revelou que o alelo Pro foi menos frequente em pacientes com >=65 anos (23, 88%) do que nos com <65 anos (51,85%) (P = 0,009; P = 0,029). Todos os pacientes e controles apresentaram o tipo selvagem Pro no códon 47. Nós concluímos que P53 Arg72Pro pode não constituir fator independente, mas sim ligado à idade na susceptibilidade ao câncer vesical / Abstract: Several studies have investigated the association between P53 Arg72Pro and an increased risk of developing bladder tumors, with controversial results. Taking advantage of the high admixture rates in the Brazilian population, we genotyped 94 bladder cancer patients (76 males and 18 females; aged 21 - 96 years old; 67 ± 13 years old; 79 smokers and 15 nonsmokers) carefully paired with 159 controls (104 males and 55 females; aged 20 - 100 years old; 65 ± 21 years old; 33 smokers and 126 nonsmokers) with respect to environmental exposure, diet routine, lifetime occupational history, smoking history, general health conditions, and previous diseases. Arg/Pro genotype was under-represented in the patient population, and conferred a 44% lower risk of bladder cancer. Univariate logistic regression analysis also identified male sex (OR = 6,87, 95% CI = 3,78 -12,50; P < 0,001), age over 65 years (OR = 4,44, 95% CI = 2,56 - 7,71; P < 0,001), and smoking habits (OR = 18,61, 95% CI = 9,62 - 36,03; P < 0,001) as important risk factors for bladder cancer. However, the P53Arg72Pro genotype disappeared as a susceptibility factor both in the multivariate regression analysis and in an univariate regression analysis adjusted for gender, age, and smoking, suggesting that it was connected with one of these factors in the predisposition to bladder cancer. Indeed, a further analysis demonstrated that both alleles and genotype variants of P53Arg72Pro are less frequent in older patients (P = 0,029). All the patients and control presented the wild-type Pro genotype at codon 47. We concluded that the effect of P53Arg72Pro, described in some studies as an important risk factor, may not be an independent, but an age-related factor of susceptibility to bladder cancer / Doutorado / Clinica Medica / Doutor em Clínica Médica

Orientador: Viviane Herrmann Rodrigues / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-11T00:13:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Marques_AndreadeAndrade_D.pdf: 1123882 bytes, checksum: 0d246b4e1e0c7351ce6062d29d3ff7ca (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: Introdução: Bexiga Hiperativa é uma síndrome de alta prevalência, caracterizada por urgência miccional, com ou sem incontinência de urgência, geralmente acompanhada por freqüência e noctúria, em pacientes sem infecções ou outras patologias. O tratamento conservador tem sido recomendado como primeira linha para o tratamento da Bexiga Hiperativa. Entre os diferentes recursos fisioterapêuticos disponíveis, a eletroestimulação vem sendo utilizada há cerca de 30 anos com bons resultados, principalmente através de eletrodos intracavitários. Objetivo: avaliar os efeitos da eletroestimulação transcutânea no nervo tibial posterior para o tratamento da Bexiga Hiperativa. Metodologia: Foram selecionadas 43 pacientes e divididas em dois grupos: grupo I (estímulo) recebeu a eletroestimulação durante 30 minutos, duas vezes por semana, por quatro semanas, utilizando corrente transcutânea, bifásica (alternada) com largura de pulso de 200 microssegundos, a uma freqüência de estímulo de 10Hz, com variação de intensidade e freqüência (VIF) através de um canal e dois eletrodos. A intensidade foi mantida imediatamente abaixo do limiar motor. O grupo II (controle) foi submetido ao mesmo protocolo, porém sem passagem de corrente elétrica. Foram realizadas oito sessões. As medidas de avaliação incluíram exame urodinâmico e diário miccional, realizados antes e após o tratamento. Resultados: Houve diferença estatística entre o grupo estímulo e o grupo controle ao final do tratamento com relação à freqüência urinária (p=0,0001) e noctúria (p=0,0186). Com relação à urgência miccional, a diferença encontrada entre os grupos após o tratamento foi de p=0,05, apresentando melhora de 3,5 (DP +/- 3,9) para 1,5 (DP +/- 1,5) episódios ao dia. Houve melhora significativa nos episódios de Incontinência Urinária de Esforço (IUE) no grupo estímulo, quando comparadas ao grupo controle (p=0,0273). Não houve alteração significativa nos episódios de incontinência por urgência. A capacidade cistométrica máxima apresentou aumento significativo no grupo estímulo, variando em média de 322,9ml para 381,0ml (p=0,0328). Não foram observadas alterações significativas com relação ao primeiro desejo miccional. Em quatro casos do grupo estímulo e cinco casos do grupo controle houve desaparecimento das contrações não inibidas do detrusor. Nas pacientes em que as contrações não inibidas do detrusor se mantiveram (n=14), não foram observadas alterações significativas com relação à intensidade da contração ou volume infundido, quando comparados grupo controle e grupo estímulo. Conclusões: A eletroestimulação transcutânea do nervo tibial posterior demonstrou trazer benefícios às pacientes com Bexiga Hiperativa, trazendo melhora para alguns dos parâmetros objetivos e subjetivos da síndrome / Abstract: Introduction: Overactive Bladder (OAB) is a prevalent syndrome characterized by miccional urgency, with or without urge-incontinence, usually with frequency and noctúria, in patients without infection or other pathologies. Conservative management has been recomended as first-line treatment for OAB. Among the different physiotherapeutic resources available, electrical stimulation has been used for about 30 years with good results, mainly with intra-cavitary probes. Objective: to evaluate the effects of transcutaneous electrical nerve stimulation of the posterior tibial nerve in the treatment of the OAB. Methodology: A total of 43 women were selected and divided into two different groups: Group I (Stimulation) received electrical stimulation during 30 minutes, twice a week, during 4 weeks, using a TENS current, biphasic (alternating) with a pulse duration of 200 microseconds, stimulation frequency of 10Hz, with VIF (variation of intensity and frequency) through one channel and two electrodes. The intensity level was kept immediately under the motor threshold. Group II (Control) was submitted to the same protocol, but without electrical stimulation. Eight sections were done. Outcome measures included urodynamics exam and voiding diary before and after de treatment. Results: There was statistical difference between Control and Stimulation group at the end of the treatment regarding to daytime urinary frequency (p=0.0001), and noctúria (p=0.0186). Regarding to urgency symptom, the difference found between the groups before and after treatment was p=0.05, improving from 3.5 (SD +/- 3.9) to 1.5 (SD +/- 1.5) episodes per day. There was improvement of stress urinary incontinence episodes in the Stimulation Group when compared to Control Group (p=0.0273). We didn¿t find statistical difference of urgeincontinence symptoms between the groups, before and after the treatment. The maximal cystometric capacity increased statistically at Stimulation Group increasing from 322.9ml to 381.0ml in media (p=0.0328). We didn¿t find difference between Stimulation and Control Group regarding first desire to void. In 4 cases from Stimulation Group and 5 cases from the Control Group, involuntary detrusor contraction (IDC) disappeared. Patients who maintained IDC (n=14), we didn¿t find statistical difference regarding the intensity of the contraction or bladder volume at first contraction when compared Control and Stimulation Group. Conclusion: Transcutaneous posterior tibial nerve stimulation proved to be beneficial to patients with OAB, improving objective and subjective parameters / Doutorado / Ciencias Biomedicas / Doutor em Tocoginecologia

Introdução: Um dos principais obstáculos para compreensão dos eventos biológicos envolvidos no câncer é a falta de modelos adequados para o estudo in vitro em especial em relação ao câncer de próstata (CaP) e ao câncer de bexiga (CaB). Há um número limitado de linhagens celulares de CaP e de CaB sendo a maioria proveniente de tumores invasivos e metastáticos. Sabe-se ainda, que existem diferenças étnicas entre as populações quanto ao comportamento de neoplasias. Desta forma, a pesquisa baseada em linhagens de uma população homogênea seria fonte de resultados limitados, não contemplando a diversidade que sabidamente ocorre entre os diferentes grupos. Além desse aspecto, as linhagens celulares comerciais são na sua maioria adquiridas na Coleção Americana de Culturas de Tecido (ATCC, do inglês American Tissue Cell Culture) que apesar de serem bem padronizadas, requerem processos de importação com aumento do custo e demandas burocráticas que dificultam a pesquisa. Portanto, consideramos vital para a compreensão dos fenômenos relacionados à carcinogênese, assim como estudos de resistência a drogas, quimioprevenção e novas estratégias terapêuticas, o desenvolvimento de linhagens tumorais derivadas de tumores primários que acometem a nossa população, peculiarmente miscigenada. No presente trabalho, fragmentos de carcinoma urotelial da bexiga e de adenocarcinoma da próstata foram obtidos durante cirurgia para remoção de tumores primários de pacientes tratados e acompanhados na Divisão de Urologia da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo (FMUSP) e no Hospital Sírio Libanês. As linhagens estabelecidas a partir destes fragmentos foram caracterizadas através da análise da cinética de crescimento, análises imunocitoquímicas e anormalidades cromossômicas incluindo cariótipo e hibridização in situ por fluorescência (FISH). Além disso, as linhagens obtidas foram submetidas a estudos de quimiossensibilidade com o uso dos compostos curcumin e Prima-1. Avaliamos ainda, a tumorigenicidade de nossas linhagens em camundongos atímicos. Os resultados deste trabalho demonstram o desenvolvimento de três linhagens de CaB e três linhagens de CaP sendo as mesmas não tumorigênicas em camundongos atímicos. Além disso, demonstramos que o curcumin na concentração de 50 M induziu morte celular em todas as linhagens estudadas, sendo seu efeito mais evidente nas linhagens de CaP. Por fim, Prima-1 reduziu a viabilidade celular independente do status de p53 nas linhagens de CaB / Introduction: One of the main obstacles for understanding biological events involved in cancer is the lack of appropriated models for in vitro studies especially for prostate cancer (PC) and bladder cancer (BC). There are a limited number of PC and BC cell lines being the majority originated from metastatic and invasive tumors. Also it is well known that there are ethnic differences between populations concerning the behavior of tumors. In such a way, the research based on cell lines derived from a homogenous population should be source of limited results, not contemplating the diversity known to occur among different groups. In addition the commercial cell lines are generally acquired at American Tissue Cell Culture (ATCC) that although wellestablished requires importation processes with cost increase and bureaucratic demands that difficult the research. Therefore we consider vital to the comprehension of the carcinogenesis phenomena, as well as drug resistance studies, chemoprevention and new therapeutic strategies, the development of tumor lineages derived from primary tumors that assail our miscigenated population. At the present work, fragments of bladder urothelial carcinoma and prostate adenocarcinoma were obtained by surgical resection of primary tumors from patients treated and followed in the Division of Urology of the Clinical Hospital of the São Paulo University (FMUSP) and Syrian Lebanese Hospital. The cell lines established from these fragments were characterized through growth kinetic, immunocytochemistry and chromosome abnormalities including karyotyping and Fluorescence in situ hybridization (FISH). Moreover, the cell lines were submitted to chemosensitivity studies using curcumin and Prima-1 and analyzed regarding their tumorigenicity in athymic mice. The results of this work show the development of three BC and three PC cell lines that were not tumorigenic in athymic mice. Curcumin at 50 M concentration induced cell death in all studied lineages, being more effective in PC cell lines. Finally, PRIMA-1 reduced the cellular viability independent of the p53 status in BC cell lines

Introdução: O câncer de bexiga é a segunda neoplasia maligna mais frequente do trato urinário, com 386.000 casos estimados e 150.000 mortes para 2011 no mundo. Noventa e cinco por cento são carcinomas uroteliais (CUB) papilíferos não músculo-invasivos de baixo grau, que apresentam altas taxas de recidiva, mas raramente progridem. Tumores invasivos de alto grau representam 10-20% dos diagnósticos, são altamente agressivos levando à mortalidade elevada. O conhecimento das vias moleculares envolvidas na carcinogênese dessa neoplasia é importante para a identificação de novos marcadores para diagnóstico, acompanhamento, prognóstico e desenvolvimento de novas terapias alvo. Micro RNA (miRNA) são pequenas sequências não codificantes de RNA que regulam a expressão dos genes inibindo a tradução da proteína ou promovendo a degradação do RNA mensageiro, estando atualmente envolvidos em vários processos celulares fisiológicos e patológicos, incluindo o câncer. Objetivos: Caracterizar o perfil de expressão de miRNA no CUB, relacionando-o com os parâmetros prognósticos clássicos para a doença: grau histológico e estadiamento. Além disso, relacionar esse padrão de comportamento dos miRNA com a recidiva tumoral e sobrevida câncer-específica em pacientes tratados cirurgicamente para CUB. Material e Métodos: Catorze miRNA (miR-100, miR-10a, miR-21, miR-205, miR-let7c, miR- 125b, miR-143, miR-145, miR-221, miR-223, miR-15a, miR-16-1, miR-199a e miR- 452) foram isolados de espécimes cirúrgicos de 60 pacientes divididos em 2 grupos: 30 pacientes com CUB não invasivo (pTa) de baixo grau submetidos à RTU de bexiga, 30 com CUB invasivo (pT2-3) de alto grau submetidos à cistectomia radical. O grupo controle é representado por cinco pacientes portadores de bexiga normal sem CUB que realizaram tratamento cirúrgico aberto para tratamento da hiperplasia prostática benigna (HPB). O processamento dos miRNA envolveu três fases: (1) extração do miRNA com kit específico, (2) geração do DNA complementar e (3) amplificação do miRNA por PCR quantitativo em tempo real (qRT-PCR). A expressão de cada miRNA foi obtida através do cálculo 2- CT e os RNU-43 e RNU-48 foram utilizados como controles endógenos. Testes estatísticos foram aplicados para estudar as variáveis envolvidas e curvas de Kaplan-Meyer foram usadas para avaliar a sobrevida livre de recidiva (SLR) e sobrevida câncer-específica (SCE). Resultados: Dos 14 miRNA estudados a maioria apresentou subexpressão nos dois grupos de tumor analisados, com exceção do miR-10a para o grupo pTa de baixo grau e do miR-100, 21 e 205 para os tumores pT2/pT3 de alto grau, onde demonstraram-se superexpressos. Essas diferenças de expressão de miRNA entre os dois grupos foram estatisticamente. Quando estudamos a relação entre expressão de miRNA e a evolução dos pacientes através de curvas de sobrevida, observamos que maiores níveis de expressão do miR-21 relacionou-se com menor SLR para tumores pTa. Ainda, maiores concentrações de miR-10a e miR-145 se associaram com menor SLR e maiores níveis de miR-10a com menor SCE para tumores pT2-3. Conclusões: Demonstramos um predomínio de subexpressão de miRNA em xv carcinomas de bexiga. Os miR-100, miR-10a, miR-21 e miR-205 demonstraram diferenças no perfil de expressão para grau e estadiamento dentro dos dois grupos de tumor, sendo capazes de diferenciá-los. Maiores níveis de miR-21 se relacionaram com menor SLR para tumores pTa de baixo grau, enquanto maiores concentrações de miR-10a estiveram associadas com menor SLR e SCE para tumores pT2/pT3 de alto grau / Introduction: Bladder cancer (BC) is the second most common malignancy of the urinary tract, with 386,000 cases estimated and 150,000 deaths in 2011. Urothelial carcinomas (UC) represent 95% of BC cases, and knowledge of the molecular pathways associated with BC carcinogenesis is crucial to identify new diagnostic and prognostic biomarkers, and development of new target molecular therapies. MicroRNAs (miRNAs) are short non-coding RNA molecules that play important roles in the regulation of gene expression by acting directly on mRNAs, leading to either mRNA degradation or inhibition of translation, involved in many physiological and pathological processes, including cancer. Objectives: To characterize miRNAs expression profiles in UC, associating with classic prognostic factors: grade and stage. Moreover, correlate miRNA expression with tumor recurrence and survival. Material and Methods: Fourteen miRNAs (miR-100, miR-10a, miR-21, miR-205, miR-let7c, miR-125b, miR-143, miR-145, miR-221, miR-223, miR-15a, miR-16-1, miR- 199a e miR-452) were isolated from surgical specimens from 60 patients classified in two groups: 30 patients with low-grade non-invasive pTa UC that underwent TURB, 30 with high-grade invasive pT2/pT3 UC underwent radical cystectomy. The control group consists in five normal bladder tissue taken from patients that underwent retropubic prostatectomy to treat benign prostatic hyperplasia (BPH). miRNA processing involved three phases: (1) miRNA extraction by specific kits, (2) cDNA generation (3) miRNA amplification through qRT-PCR. Expression profiles were obtained by relative quantification determined by 2-ct method. Endogenous control were RNU-43 and RNU-48. Statistic tests were used to study the prognostic variables and Kaplan-Meyer curves were constructed to analyze disease-free (DFS) and disease-specific (DSS) survivals. Results: All miRNAs were underexpressed in both groups, except miR-10a in pTa and miR-100, 21 and 205 in pT2/pT3 tumors, that where over-expressed. miR-100, miR-21, miR-10a and miR-205 differentialy expressed in both groups and this differences were statistically significant. The Kaplan-Meyer survival curves showed that higher levels of miR-21 were related to shorter DFS for pTa group. Also, higher levels of miR-10a and miR-145 were associated with shorter DFS and higher levels of miR-10a were also related to shorter DSS in pT2/pT3 group. Conclusions: The majority of miRNA were shown to be underexpressed in bladder UC. miR-100, miR-10a, miR-21 and miR-205 were differentially expressed considering tumor grade and stage. The miRNA profile was able to distinguish pTa low grade and pT2-3 high grade tumors. Higher levels of miR- 21 were related to shorter DFS in pTa, while higher levels of miR-10a were associated with shorter DFS and DSS in pT2-3, high grade UC

Introdução: Ocupação foi identificada como o segundo fator de risco mais importante para o câncer de bexiga depois de fumar sendo responsável por até 20% de todos os cânceres de bexiga em países industrializados. Apesar dos esforços consideráveis para investigar ocupações em relação ao risco de câncer de bexiga, muitas não foram encontrados de forma consistente. Material e Métodos: Foram incluídos 200 pacientes com diagnóstico de câncer de bexiga entre os anos de 2009 e 2013. Foi aplicado um questionário para obter informações sobre a profissão, tempo de exposição e hábitos diários, sintomas, e também dados de doenças incluindo estágio, grau e número e tamanho de lesões. Os pacientes do Grupo 1 foram aqueles sem emprego previamente associados com o risco de câncer de bexiga. Grupo 2 representado pacientes em risco devido a profissões. Resultados: Os pacientes do Grupo 2 apresentaram uma proporção significativamente maior de pT2 CaB (P = 0,037), enquanto que os pacientes do grupo 1 apresentaram significativamente mais pTa (p = 0,002) da doença. Analisando preditores de pT2, a presença de ocupação aumento de alto risco por 2,80 vezes a chance de desenvolver uma doença invasiva. Ao analisar o grau do tumor descobriram que um tempo de exposição de 10 anos ou mais aumenta o risco de tumores de alto grau em 4,28 vezes (p = 0,001). Conclusão: Pacientes com história de exposição a agentes cancerígenos devido à sua atividade profissional podem estar em maior risco de desenvolvimento de tumores invasivos e aqueles que estão expostos a estes agentes para mais de 10 anos podem desenvolver doença de alto grau com mais freqüência. População em risco pode, portanto, beneficiar de rastreamento para o câncer de bexiga / Occupation was identified as the second most important risk factor for bladder cancer after smoking accounting for up to 20% of all bladder cancers in industrialized countries. Despite considerable efforts to investigate occupation against the risk of bladder cancer, many have not been found consistently. We included 200 patients diagnosed with bladder cancer between 2009 and 2013. A questionnaire was applied to obtain information about the profession, exposure time and daily habits, symptoms, and also diseases of data including stage, grade and number and lesion size. Patients in Group 1 were those without jobs previously associated with the risk of bladder cancer. Group 2 represented patients at risk because of professions. Group 2 patients had a significantly higher proportion of pT2 CaB (P = 0.037), whereas patients in group 1 had significantly more pTa (p = 0.002) of the disease. Analyzing predictors of pT2, the presence of high-risk occupation increases by 2.80 times the chance of developing invasive disease. In considering the degree of tumor found that a time of 10 or more years of exposure increases the risk of high-grade tumors in 4.28 times (p = 0.001). Patients with a history of exposure to carcinogens because of their duties may be at greater risk of developing invasive tumors and those who are exposed to these agents for more than 10 years can develop high-grade disease more often. Population at risk can therefore benefit from screening for bladder cancer

INTRODUÇÃO: A tuberculose urogenital é rara, tem diagnóstico tardio e é potencialmente destrutiva ao trato urogenital masculino. A bexiga contraída ocorre nas fases tardias de sua evolução e está associada à alta freqüência de exclusão renal unilateral, refluxo vésico-ureteral, estenose ureteral e insuficiência renal. A ampliação vesical é o tratamento padrão para estes casos. O presente trabalho avalia o seguimento tardio de 25 pacientes com bexiga contraída por tuberculose submetidos à ampliação vesical. CASUÍSTICA E MÉTODOS: Vinte homens e cinco mulheres, com idade mediana de 40 (12 a 60) anos foram estudados. Antes da ampliação, três pacientes estavam em insuficiência renal crônica em programação para transplante renal. Os demais pacientes possuíam exclusão renal funcional unilateral. Em oito casos, a ampliação foi feita com segmento ileocecal não destubulizado, em quatro com sigmóide não destubulizado e em 13 com sigmóide destubulizado. Os pacientes foram submetidos à avaliação clínica, radiológica e urodinâmica pós-operatória. Foi considerado bom resultado, após a ampliação, a presença de intervalo miccional diurno maior que duas horas e a satisfação do paciente avaliada pela pergunta sobre qualidade de vida do questionário \"ICSmaleSF\". RESULTADOS: O seguimento pós-operatório médio foi de 11,1 ± 9,1 (1 a 36) anos com 68% dos pacientes com seguimento maior que cinco anos e 52% maior que 10 anos. Um paciente morreu por um adenocarcinoma na bexiga ampliada após 25 anos de ampliação e seis anos de transplante renal. Após a ampliação, houve manutenção da mesma função renal em todos os pacientes, com exceção de dois casos de evolução para insuficiência renal crônica. Em sete (28%) casos, houve alto resíduo pós miccional com resolução após desobstrução cirúrgica em três casos e autocateterismo nos demais. Bom resultado foi encontrado em 80% dos pacientes operados. O mau resultado foi associado estatisticamente com a utilização do sigmóide não destubulizado (p <= 0,05) e tendeu a se associar com a presença de prostatite por tuberculose (p = 0,09). A comparação dos pacientes de mau com os de bom resultado mostrou que estes apresentaram, ao exame urodinâmico, bexiga ampliada com maior capacidade (p < 0,01), maior complacência (p < 0,01) e sensibilidade normal (p = 0,03). Entretanto, não houve diferença na presença de contrações involuntárias (p = 0,27) entre os dois grupos. Nos pacientes com bom resultado, as contrações iniciaram-se com maior volume de enchimento vesical (p = 0,02). CONCLUSÕES: No seguimento tardio da ampliação da bexiga contraída por tuberculose, 80% dos pacientes atingem intervalo miccional maior que duas horas e a ampliação vesical não contribui para a piora da função renal. O cólon sigmóide deve ser destubulizado, mas o segmento ileocecal pode ser utilizado na sua forma original sem destubulização para a ampliação vesical. O bom resultado com intervalo miccional maior que duas horas necessita de bexiga ampliada com capacidade maior que 250 ml, complacência maior que 20 ml/cm H2O e sensibilidade normal, sem influência da presença de contrações involuntárias. / INTRODUCTION: Urogenital tuberculosis is a rare disease with delayed diagnosis and is potentially destructive for the male urogenital tract. Chronic tuberculous cystitis is a late event in the tuberculosis evolution and is associated with high frequency of unilateral nonfunctioning kidney, ureteral reflux or stenosis and renal failure. Bladder augmentation is the standard treatment in these cases. The present study analyzes the late results of 25 patients with chronic tuberculous cystitis submitted to bladder augmentation. PATIENTS AND METHODS: Twenty men and five women, with median age of 40 (12 to 60) years were evaluated. Prior to augmentation, three patients had chronic renal failure and were in kidney transplantation program. The remaining patients had unilateral nonfunctioning kidney. In eight cases the augmentation was performed with tubularized ileocecal segment, in four with tubularized sigmoid and in 13 with detubularized sigmoid. All patients were submitted to postoperative clinical, radiological and urodynamic evaluation. It was considered a good result the miccional diurnal frequency of more than two hours and the patient?s satisfaction evaluated by the quality of life question from the ICSmaleSF questionnaire. RESULTS: The median follow-up time was 11,1 ± 9,1 (1 a 36) years. In 68% of the patients this time was higher than five years and in 52% higher than ten years. One patient died due to an adenocarcinoma in the augmented bladder 25 years after bladder augmentation and six years after kidney transplantation. After augmentation, all but two patients had the renal function preserved. In seven (28%) cases there was high post-void residue treated by surgery for bladder outlet obstruction in three cases and by intermittent self-catheterisation in the others. Good results were achieved in 80% of the patients. Bad results were statistically associated to augmentation performed with tubularized sigmoid (p <= 0,05) and in patients with prostatitis as a tendency (p = 0,09). The good result patients showed augmented bladder with higher capacity (p < 0,01), higher compliance (p < 0,01) and normal bladder sensation (p = 0,03) in comparison to the bad result patients. However, there was no difference in the frequency of involuntary contractions (p = 0,27) between these two groups. In good result patients the contractions started with higher bladder filling volume (p = 0,02). CONCLUSIONS: At late follow-up of bladder augmentation 80% of the patients with chronic tuberculous cystitis achieve miccional diurnal frequency of more than two hours and the augmented bladder does not contribute to the worsening of the renal function. The sigmoid has to be always detubularized but the ileocecal segment can be used in the tubularized form to augment the bladder. Augmented bladder with capacity of more than 250 ml, compliance of more than 20 ml/cm H2O and normal sensation is necessary to achieve miccional diurnal frequency of more than two hours and there is no interference of the presence of involuntary contractions.

Orientador: Paulo Cesar Rodrigues Palma, Viviane Herrmann / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-12T10:39:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bellette_PatriciaOdila_M.pdf: 1141308 bytes, checksum: 2b1b008fc3d9ef462a5114d38968193e (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar a eficácia da eletroestimulação do nervo tibial posterior em mulheres com hipótese diagnóstica de Bexiga Hiperativa e suas repercussões na qualidade de vida. Sujeitos e métodos: para este ensaio clínico prospectivo, controlado e randomizado foram convidadas a participar do estudo 37 mulheres consultadas no ambulatório de uro-ginecologia do Hospital das Clínicas (HC) da UNICAMP, que cumpriram os critérios de inclusão e exclusão. Foram aleatoriamente alocadas em dois grupos. Grupo tratamento: as mulheres foram tratadas com o uso da eletroestimulação transcutânea do nervo tibial posterior (n = 21) e Grupo placebo: as mulheres tiveram os eletrodos alocados, mas sem passagem de corrente elétrica (n = 16). No primeiro contato com a paciente foi feito o convite para participar do estudo e realizada uma avaliação fisioterapêutica, incluindo preenchimento do diário miccional de três dias e dos questionários de qualidade de vida (ICIQ, KHQ e OABq). Na aplicação da técnica utilizou-se oito sessões de eletroestimulação transcutânea do nervo tibial posterior. Resultados: A noctúria apresentou melhora significativa no grupo tratamento (p=0,003) e uma tendência de maior melhora no grupo tratado (p=0,054). A frequência urinária diminuiu significativamente no grupo tratamento (p=0,003) e a urgência miccional diminuiu também em ambos os grupos (placebo:p=0,025 e tratamento:p=0,002). Com relação aos questionários utilizados, apenas o OABq foi responsivo, tanto no escore total (p=0,037), quanto no escore severidade (p=0,018). Conclusão: A eletroestimulação transcutânea do nervo tibial posterior é uma ferramenta eficaz no tratamento fisioterapêutico da Bexiga Hiperativa. / Abstract: The aim of this study was to evaluate the effect of the electrical stimulation of the posterior tibial nerve on the quality of life in women with overactiv bladder syndrome. Subjects and methods: thirty seven women from to Urogynecology Division of the Hospital das Clínicas de Campinas (HC/UNICAMP) were invited to participate in a prospective randomized trial. After screening inclusion and exclusion criteria, they were randomly placed in one of two groups: Treatment group: the women were submitted to tibial posterior nerve electrical stimulation (n = 21) and Sham group: the women had electrodes placed on the tibial posterior nerve, without stimulation (n = 16). At first, the patients were invited to participate in the study and submitted to a physiotherapeutic evaluation, including fulfilling a three days diary, quality of life questionnaires (ICIQ, KHQ an OABq). The approach of the treatment was eigth sessions of electrical stimulation on the posterior tibial nerve. Results: noctury was significantly improved in the treatment group (p=0,003). The urinary frequency was significantly improved in treatment group (p=0,003) and the urgency decreased significantly in both groups (sham:p=0,025 and treatment p=0,002). Comparing the questionnaires applied only the OABq was responsive in both scores, total score (p=0,037) and severity score (p=0,018). Conclusion: The posterior tibial nerve electrical stimulation is an effective physiotherapeutic treatment in overactive bladder. / Mestrado / Mestre em Cirurgia

Orientador: Edson Antunes / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-25T08:00:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ramos-Filho_AntonioCelsoSaragossa_D.pdf: 3024613 bytes, checksum: a03a80c65d863acd441249f461461216 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: Os receptores TRPV4 e TRPM8 são expressos no urotélio e em fibras aferentes sensitivas da bexiga. Fisiologicamente, a ativação mecânica do receptor TRPV4 na parede da bexiga participa do controle miccional. Em doenças de origem inflamatória, esses receptores adquirem funcionalidade importante. As disfunções da bexiga no diabetes podem estar associadas a alterações ao nível de detrusor, inervação e urotélio. A disfunção urotelial parece ser a responsável por desencadear as alterações neurais e musculares da bexiga. Assim, o objetivo do presente estudo foi investigar os mecanismos fisiopatológicos da ativação dos receptores TRPV4 e TRPM8 no estado diabético em camundongos. Para tanto, dividimos o estudo em duas etapas, sendo que na primeira avaliamos a participação dos receptores TRPV4 e TRPM8 nos mecanismos contráteis e relaxantes do detrusor isolado de animais controles e knockout para esses canais. Em uma segunda etapa estudamos a ativação desses canais em camundongos diabéticos pela injeção intraperitoneal de estreptozotocina (180 mg/Kg) por 4 semanas. Em fragmentos do detrusor isolados de camundongos mostramos que o agonista do receptor TRPV4, GSK1016790A, causou resposta contrátil dependente da concentração. Por outro lado, quando os tecidos foram contraídos com solução despolarizante de KCl, o GSK1016790A causou relaxamento da preparação. No detrusor isolado de animais TRPV4-/- verificamos hipercontratilidade ao carbacol (agonista muscarínico) e à estimulação elétrica, assim como redução no relaxamento ao agonista ?-adrenérgico não-seletivo, isoprenalina. Estes efeitos não foram obtidos com os antagonistas dos receptores TRPV4, RN1734 e HC067047. A indução do diabetes causou nocicepção mecânica e aumento da proporção entre bexiga e peso corpóreo após 4 semanas da injeção. A avaliação miccional dos animais diabéticos mostrou aumento da capacidade, frequência urinária e das contrações involuntárias da bexiga. Observamos ainda hipercontratilidade do detrusor ao carbacol, à estimulação elétrica e ao KCl. A indução do diabetes em animais TRPV4-/- não modificou as disfunções "in vivo" e "in vitro" observadas nos animais wyld type diabéticos, mostrando que a ausência crônica dos receptores TRPV4 desencadeia alterações miccionais que são anteriores as causadas pelo diabetes. Também verificamos que os animais TRPM8-/- não apresentam alteração na resposta contrátil ao carbacol e à estimulação elétrica. Por outro lado, o mentol, mas não a icilina, reduziu significativamente as respostas contráteis nestes animais. O mentol inibiu o influxo de cálcio extracelular em cultura de células da musculatura lisa da bexiga por mecanismo inibitório direto nos canais Cav1.2. O tratamento agudo com mentol, intraperitoneal e intravesical, atenuou as disfunções miccionais observadas nos camundongos diabéticos. "In vitro" o pré-tratamento com mentol reduziu a hipercontratilidade ao carbacol no grupo diabético, sem alterar a resposta no grupo controle. Concluímos que o mentol impede a resposta contrátil da bexiga por mecanismo independente do receptor TRPM8 bloqueando o influxo de cálcio extracelular nos canais Cav1,2, podendo ser utilizado como tratamento na hiperatividade de bexiga de origem miogênica / Abstract: The TRPV4 and TRPM8 receptors are expressed in bladder urothelium and sensitive afferent fibers. Physiologically, the mechanical activation of TRPV4 receptor in the bladder wall is involved in micturition control. In inflammatory diseases, these receptors may have important roles. The bladder dysfunction in diabetes may be associated with changes at the level of detrusor, innervation and urothelium. The urothelial dysfunction triggers neural changes, modifying consequently the smooth muscle contractility. Thus, the goal of the present study was to investigate the pathophysiological mechanisms of TRPV4 and TRPM8 receptor activation in physiological and diabetic conditions in mice. For this purpose we divided the study in two phases, the first of which we evaluated the participation of TRPV4 and TRPM8 receptors in detrusor contractile and relaxing mechanisms in control and knockout animals for these channels. In the second phase we studied the activation of these channels in diabetic mice induced by intraperitoneal injection of streptozotocin (STZ; 180 mg / kg, 4 weeks). The TRPV4 agonist GSK1016790A produced concentration-dependent detrusor contractions. On the other hand, in detrusor pré-contracted with KCl (80 mM), GSK1016790A caused relaxation responses. In TRPV4-/- animals, we verified hypercontractility to carbachol (muscarinic agonist) and electrical-field stimulation, as well as a decreased relaxation to isoprenaline (non-selective ?-adrenergic agonist). These effects were not obtained with the TRPV4 antagonists, RN1734 and HC067047. Induction of diabetes with STZ caused hyperglycemia, mechanical nocicepton, and increased ratio between bladder and body weight after 4 weeks. The miccturition evaluationin diabetic animals showed increased capacity, urinary frequency, and non-voiding contractions. Hypercontractility to carbachol, electrical-field stimulation and KCl in isolated detrusor were lso observed. The induction of diabetes in TRPV4-/- animals did not change the urinary dysfunctions. Our data are consistent with the proposal that TRPV4 receptor has a physiological function in micturition control by decreasing muscarinic-induced contractions and increasing ?-adrenergic-mediated relaxations. Moreover, the bladder contractions to carbachol and EFS in TRPM8-/- did not significantly change compared to TRPM8+/+. However, menthol (300 ?M), but not icilin (1 ?M), significantly inhibited these contractile responses. The menthol (300 ?M) inhibited extracellular calcium influx in bladder smooth muscle cell culture by direct mechanism though Cav1.2 channels. In addition the acute treatment with menthol, intraperitoneal and intravesical, atenuated the micturition dysfunctions observed in diabetic mice. Also, detrusor preparations pre-treated with menthol decreased carbachol hypercontractility, without changing the responses in normoglycemic group. Menthol reduces bladder contractions by mechanisms independent of TRPM8 receptor activation, inhibiting extracellular calcium influx through Cav1.2 channel, thus been considered as treatment for bladder overactivity of myogenic origin / Doutorado / Farmacologia / Doutor em Farmacologia