Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:09Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-07-29 / Os produtos de reações e os mecanismos envolvidos na radiólise de macromoléculas de relevância fisiológica têm sido objetos de diversos estudos. Estes fatores são conhecidos por atuarem em diversos tipos de patologias no organismo humano. Como uma das fontes de geração de radicais livres em solução pode ser obtida pela ação da radiação ionizante, decidiu-se nesta tese, avaliar-se o efeito da irradiação de alguns peptídeos de importância fisiológica. A parte preponderante deste trabalho envolveu o estudo dos peptídeos vasoativos angiotensina II (DRVYIHPF, AngII) e bradicinina (RPPGFSPFR, BK). Foram realizadas irradiações com doses variando entre 1 e 15 kGy, nas quais foram observadas uma progressiva degradação de suas estruturas em função da dose de radiação. Notou-se neste processo, a formação de subprodutos que foram purificados e caracterizados por diferentes procedimentos experimentais dentre os quais: HPLC, análise de aminoácidos e espectrometria de massa, e sequenciamento de aminoácidos. Além destes, foram também realizados ensaios de dicroísmo circular (CD) e atividade biológica (contrações musculares). No estudo da AngII, foram isolados três análogos: Tyr 8 -AngII, m-Tyr 8 -AngII, e Lys 6 -AngII. Quanto ao estudo da BK, notou-se novamente a transformação do resíduo de Phe em Tyr e m-Tyr, mas apenas ocorrendo com o resíduo de Phe 8 e não Phe 5 da estrutura da BK. Este dado, de grande relevância, indica que o efeito da radição é sequência dependente. Vale a pena ressaltar que não se observou alterações simultâneas tanto na AngII quanto na BK. Os produtos isolados sempre contiveram apenas uma destas alterações mencionadas. Além destes peptídeos, foram estudados em caráter preliminar, a angiotensina I (DRVYIHPFHL, AngII, o hormônio liberador de melanócito (acetil-SYSMEHFRWGKV- amida, α-MSH), e dois análogos marcados com o spin label TOAC (ácido 2,2,6,6- tetrametilpiperidina-1-oxil-4-amino-4-carboxílico) na posição 1 (AngII) e na posição 3 (BK). Em comum, todos os peptítdeos mostraram uma degradação não linear e em função da dose de radiação. Observou-se também um acréscimo de massa de 16 Da em relação ao peptídeo nativo nos subprodutos encontrados nos peptídeos que apresetaram a formação de subprodutos. Foi também realizado um estudo com soluções equimolares de L-aminoácidos livres no qual foi observado apenas um decréscimo dose-dependente dos aminoácidos Cys e Met, nas condições estudadas. Em conclusão, este tipo de projeto de pesquisa parece ser promissor no sentido de poder-se continuar com os estudos já iniciados e que poderão levar a um esclarecimento mais aprofundado do efeito da irradiação e, por conseguinte, do mecanismo de ação dos radicais livres gerados em solução. Estes achados poderão ser, portanto, relevantes para estudos de diferentes tipos de processos fisiológicos que ocorrem no organismo animal. Além do mais, esta estratégia experimental desenvolvida no presente estudo, pode ser de grande relevância para a produção de novas drogas terapêuticas, pois como foi observado, podem se gerar derivados peptídicos não usuais e, portanto de difícil obtenção pelos métodos convencionais envolvendo a síntese de peptídeos (e por extensão, de proteínas) / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Farmacologia. / Made available in DSpace on 2012-10-21T19:13:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 200056.pdf: 544186 bytes, checksum: 6fc391d939fb6809e2af14ef73beeb98 (MD5) / As [cininas] são peptídios biologicamente ativos envolvidos em vários processos fisiopatológicos. O objetivo da presente tese foi analisar a participação dos receptores B1 e B2 para as cininas em modelos experimentais de [dor] [crônica]. A [deleção gênica] do [receptor B1] para as cininas, mas não do [receptor B2], reduziu amplamente a [hiperalgesia] térmica e a [alodínia] mecânica crônica produzida pelo adjuvante completo de Freund (CFA) ou pela lesão parcial do nervo ciático em [camundongos]. Este estudo também demonstrou que a administração sistêmica e intratecal de [antagonistas] seletivos dos receptores B1, e em menor extensão de receptores B2, também foi capaz de reduzir a [nocicepção] causada pelo CFA e pela lesão nervosa em animais selvagens. A deleção gênica do receptor B1 não afetou, contudo, o edema de pata, a infiltração de neutrófilos, a elevação da temperatura local, ou ainda, o aumento na produção de interleucina-1b e de prostaglandina E2 induzidos pelo CFA pata dos animais. Conclui-se, portanto, que os receptores B1 parecem exercer um importante papel para o desenvolvimento da [dor inflamatória] e [dor neuropática] crônica.

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:49:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-12-31 / No presente trabalho foram avaliados os efeitos cardiovasculares de quatro peptídeos potenciadores de bradicinina (BPPs) em ratos espontaneamente hipertensos (SHR). Os peptídeos foram selecionados de uma família de 19 oligopeptídeos encontrados no veneno e no precursor do peptídeo natriurético do tipo C do cérebro da serpente Bothrops jararaca. Estes peptídeos foram escolhidos por suas características distintas; relativos a inibição in vitro da enzima conversora de angiotensina I (ECA) e a potenciação ex vivo da bradicinina (BK). Os experimentos foram realizados em ratos hipertensos (SHR) e normotensos (WT) acordados, com implantação de cateteres de polietileno em artéria femoral para medida da pressão arterial média (PAM) e da freqüência cardíaca (FC) e veia femoral para administração da droga. A PAM e a FC foram monitorados durante 6 horas após a injeção intravenosa dos BPPs. Os quatro BPPs mostraram efeitos cardiovasculares potentes entre as doses de 0,47 nmol/Kg e 710 nmol/Kg. O efeito anti-hipertensivo dos BPPs foi bifásico, apresentando uma redução inicial da PAM nos primeiros 20 minutos após a injeção do peptídeo (período agudo), seguida por outra queda que iniciou em 60- 80 minutos após o BPP e se manteve por até de 6 horas. A alteração da PAM máxima foi observada com o BPP-10c na dose de 71 nmol/Kg (-53 ± 6 mmHg). O BPP-7a é um fraco inibidor in vitro da ECA somática [Ki(app) ≅ 50 μM] e mostrou-se incapaz de potenciar a BK, até mesmo, em concentrações 100 vezes maior que concentrações usadas para os outros peptídeos. Contudo, o BPP-7a na dose de 14,2 nmol/Kg provocou queda máxima da PAM de -45 ± 6 mmHg em SHR. Em contraste, foi mostrado que durante a ação antihipertensiva dos quatro BPPs em SHR não houve alteração das respostas hipotensora da BK e pressora da Ang I, tanto durante o período agudo como durante o período tardio. Esses resultados indicam a participação de mecanismos ainda não esclarecidos nos efeitos cardiovasculares desses peptídeos, não podendo ser descartada a ação mediada por receptor órfão. Essas características abrem novas perspectivas para utilização dos BPPs como anti-hipertensivos. / In the present study, were evaluated the cardiovascular effects of four Bradykinin Potentiating Peptides (BPPs) in spontaneously hypertensive rats (SHR). The peptides were selected from a family of 19 proline-rich oligopeptides found either in the venom of Bothrops jararaca or derived from the C-type natriuretic peptide precursor of the B. jararaca brain. These peptides were chosen for their distinct features concerning the in vitro and in vivo inhibition of the somatic angiotensin converting enzyme (ACE), and the ex-vivo and in vivo potentiation of bradykinin (BK). The experiments were performed in conscious adult male hypertensive rats (SHR) and normotensive rats (WT), with polyethylene catheters implanted into the femoral artery for the mean arterial pressure (MAP) and heart rate (HR) measurements, and into the femoral vein for drug administration. The MAP and HR were monitored for 6 hours after the intravenous injection of BPPs. All four BPPs showed potent cardiovascular effects in the range between 0.47 nmol/Kg and 710 nmol/Kg. The anti-hypertensive effect of BPPs was biphasic, presenting an initial reduction of MAP in the first 20 minutes after the peptide injection (acute period), folowing by other fall in 60-80 minutes after BPP and maintained for even of 6 hours (late period). The maximal change on MAP was observed using the BPP-10c at a dose of 71 nmol/Kg (-53 ± 6 mmHg). Differently from the other three BPPs, the BPP-7a presented a weak in vitro inhibition of the somatic ACE [Ki(app) ≅ 50 μM], and was unable to potentiate the BK, even at concentrations 100-fold higher than the concentrations used for the other peptides. However, the BPP-7a at a dose of 14.2 nmol/Kg caused the maximum MAP fall of the -45 ± 6 mmHg in SHR. In contrast, was showed that during the BPP antihypertensive effect in SHR there were not alteration of the BK hypotensive and the Ang I pressure responses, during both acute and late periods. These results indicate the participation non elucidated of mechanisms in the cardiovascular effects caused by these peptides. The action mediated by an orphan receptor has not been discarded. These characteristics open new perspectives for the use of BPPs as anti-hypertensive drugs. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Submitted by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2018-05-21T19:24:15Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_Renata_Zanella.pdf: 575197 bytes, checksum: 59c20b438c7e122081f43156f1b94bf3 (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2018-05-21T20:15:45Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_Renata_Zanella.pdf: 575197 bytes, checksum: 59c20b438c7e122081f43156f1b94bf3 (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2018-05-21T20:15:53Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_Renata_Zanella.pdf: 575197 bytes, checksum: 59c20b438c7e122081f43156f1b94bf3 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-05-21T20:15:53Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_Renata_Zanella.pdf: 575197 bytes, checksum: 59c20b438c7e122081f43156f1b94bf3 (MD5) Previous issue date: 2016-08-26 / Sem bolsa / O sistema calicreínas-cininas (SCC) está envolvido em diversos processos biológicos como modulação de dor, vasodilatação, permeabilidade vascular, edema e inflamação, tendo seus efeitos mediados por dois receptores específicos acoplados a proteína G, o receptor B1 e B2 de cininas. O SCC tem sido recentemente relacionado com a homeostase da glicose e resistência à insulina. O objetivo do presente estudo foi investigar a participação do receptor B1 (B1R) de cininas nos processos metabólicos relacionados à obesidade e ao diabetes mellitus tipo 2 em camundongos obesos. Para isso foram utilizados camundongos deficientes para a leptina e nocautes para o B1R de cininas (obB1). Quando comparados, os animais obB1 mostraram uma redução na ingestão alimentar em todo período avaliado (4° a 26° semana de vida); menor ganho de peso, tanto aos 3 meses (obWT, 63,79 ± 1,59; obB1, 51,22 ± 1,09 g, p < 0,001) quanto aos 6 meses de idade (obWT, 74,61 ± 1,04; obB1, 57,98 ± 1,58 g, p < 0,001); e menor depósito de gordura. No teste de tolerância a glicose, animais obB1 apresentaram maior captação de glicose do que seus controles quando jovens (obWT, 46045 ± 3492; obB1, 30875 ± 2311 (mg/dL).min, p< 0,01). Adicionalmente, foi observado aumento do peso do fígado nestes animais, quando mais velhos (obWT, 3,29 ± 0,24; obB1 4,09 ± 0,06 g, p<0,001). Em conclusão, o silenciamento do gene do B1R oferece uma proteção contra a obesidade com um significativo impacto na homeostase da glicose. Estes resultados sugerem que o SCC pode ser um novo alvo para desenvolvimento de novas estratégias farmacológicas para o tratamento de doenças metabólicas como obesidade e diabetes mellitus tipo 2. / The kallikrein-kinin system (KKS) is involved in many biological processes such as modulating pain, vasodilation, vascular permeability, edema and inflammation, with effects mediated by two specific receptors coupled to G protein, B1 and B2 kinin receptor. The KKS has recently been associated with glucose homeostasis and insulin resistance. The aim of this study was to investigate the participation of B1 receptor (B1R) of kinins in the metabolic processes related to obesity and type 2 diabetes in obese mice. For this we used mice deficient for leptin and knockouts for B1R kinin (obB1). When compared, the animals obB1 showed a reduction in food intake in the whole study period (4 to 26 ° week of life); less weight gain, both at 3 months (obWT, 63.79 ± 1.59; obB1, 51.22 ± 1.09 g, p <0.001) and at 6 months of age (obWT, 74.61 ± 1, 04; obB1, 57.98 ± 1.58 g, p <0.001); and less fat deposit. In the glucose tolerance test, obB1 animals had higher glucose uptake than their controls when young (obWT, 46045 ± 3492; obB1, 30875 ± 2311 (mg / dL) .min, p <0.01). Additionally, there was an increase in liver weight in these animals, while older (obWT, 3.29 ± 0.24, 4.09 ± 0.06 g obB1, p <0.001). In conclusion, the B1R gene silencing offers a protection against obesity have a significant impact on the glucose homeostasis. These results suggest that the KKS may be a new target for the development of new pharmacologic strategies for treating metabolic diseases such as obesity and type 2 diabetes mellitus.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Farmacologia / Made available in DSpace on 2013-07-16T02:47:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 213750.pdf: 1651506 bytes, checksum: 51f72f26f26443575eadcdbf94c02d1f (MD5) / Coletivamente, os resultados do presente estudo fornecem uma visão compreensiva a respeito dos possíveis mecanismos através dos quais a BK induz contração ou relaxamento na TC, com ênfase no papel do epitélio e dos prostanóides presentes no mesmo. A sinalização intracelular envolvida nas respostas contracturantes e relaxantes para a BK foram também objeto de investigação no presente estudo, e os resultados obtidos demonstram a participação de um complexo mecanismo de sinalização intracelular, inclui entre outros, a participação da COX-2 presente constitutivamente, tanto no efeito contrátil como no relaxante, com liberação de elevados níveis de PGE2 que, por sua vez, ativaria receptores EP3. Acopladas às ações da BK na TC, estariam também as enzimas eNOS e nNOS responsáveis pela liberação de NO, tanto do epitélio, como dos terminais nervosos e/ou músculo liso, onde exercem um importante efeito relaxante sobre este tecido. Do ponto de vista das vias intracelulares, os resultados do presente estudo indicam que vias de sinalização importantes e comumente associadas com as ações da BK. Um resultado importante, foi a observação de que a ativação da tirosina quinase ligada ao fator de crescimento epidermal (EGFR-Trk) poderia estar presente na via de sinalização do relaxamento da BK na TC. Soma-se a isso o possível envolvimento da bomba Na+-K+-ATPase com a própria EGFR-Trk. Finalmente, na ativação dos receptores B2 é comum a dessensibilização e os resultados do presente estudo mostram que na TC, apenas a resposta contrátil à BK é dessensibilizante, um efeito que pode ser completamente prevenido por inibidores da COX-2. Assim, com base nos presentes resultados, pode-se afirmar que a BK, em conjunto com os prostanóides e o NO exerce um papel modulador contrátil e relaxante importante nas vias aéreas de cobaias.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Farmacologia. / Made available in DSpace on 2012-10-21T14:20:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 207434.pdf: 549000 bytes, checksum: 1b8bfb8bb1089351f2e5ac7abd155919 (MD5) / Este trabalho demonstrou que a contração induzida pela BK na íris isolada de porco é mediada pelos receptores B2, com liberação neuronal de ACh, noradrenalina, neuropeptídeos e derivados do ácido araquidônico, através das vias das COX-1, COX-2, LOX e TXA2. Além disso, demonstrou o envolvimento do influxo de cálcio do meio extracelular, através dos canais de cálcio do tipo L, N e P, bem como a possível participação das PKA e PKC mediando as ações da BK na íris. Os estudos também mostram que os receptores B1 não são constitutivos nessa preparação, no entanto, após 4 h de incubação com LPS, ocorre a ativação dos receptores B1, por meio de mecanismos dependentes da síntese protéica e de fatores de transcrição, como o NF-kB. A via das MAPKs, especialmente MEK-1, p38-MAPK e fosfatidilinositol 3-quinase, além de estarem envolvidas na indução dos receptores B1, também participam dos mecanismos que regulam as ações do receptor B1 após a indução com LPS. Além disso, confirma-se a participação das MEK-1 e p38-MAPK por meio dos estudos de biologia molecular. Por outro lado, demonstra-se que os neuropeptídeos como o NK1, NK2, NK3 e CGRP não participam das respostas contráteis induzidas pela des-Arg9-BK nessa preparação. Todavia, apresentam dependência significativa do cálcio extracelular, através dos canais de cálcio do tipo L e não do tipo N. Os resultados contribuem para melhor compreensão de alguns dos mecanismos envolvidos na regulação dos receptores de cininas B1 e B2 na íris isolada de porco. Além disso, geram subsídios para o melhor entendimento dos processos inflamatórios e dolorosos, como também para o desenvolvimento futuro de terapias antiinflamatórias e analgésicas.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pos-Graduação em Farmacologia. / Made available in DSpace on 2012-10-21T17:28:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 205415.pdf: 1195552 bytes, checksum: d24b6d58aede3df233b74b912908f2a4 (MD5) / O receptor B1 para as cininas está normalmente ausente durante condições fisiológicas, sendo rapidamente expresso durante processos inflamatórios, infecciosos ou após lesão tecidual. O objetivo do presente trabalho foi determinar alguns mecanismos intracelulares envolvidos no controle da expressão do receptor B1 após trauma na veia porta de rato. Através da incubação in vitro da veia porta de rato após a lesão tecidual se observa um aumento dependente do tempo na resposta contrátil induzida pelo agonista do receptor B1, a des-Arg9-bradicinina (des-Arg9-BK), e na expressão do RNAm para o receptor B1. Além disso, com a incubação in vitro da veia porta de rato se verifica a ativação de membros da família das proteínas quinases ativadas por mitógeno (MAPK), incluindo a proteína quinase regulada por sinal extracelular (ERK), a proteína quinase c-Jun NH2-terminal (JNK) e a proteína quinase p38 MAPK. Concomitante a esse fenômeno ocorre a degradação da proteína inibitória do fator nuclear-kB (IkBa) com conseqüente migração do fator de transcrição nuclear-kB (NF-kB) do citoplasma para o núcleo celular. O bloqueio das vias de sinalização da p38 MAPK, da JNK ou do NF-kB, mas não da ERK com inibidores seletivos resulta em redução significativa do aumento da resposta contrátil induzida pela des-Arg9-BK, além de prevenir a expressão do RNAm para o receptor B1 das cininas na veia porta de rato. Analisados em conjunto, esses dados demonstram que a lesão e incubação in vitro da veia porta de rato induz a ativação de diferentes vias de sinalização intracelular com importante papel regulador sobre a expressão do receptor B1 para as cininas.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Neurociências / Made available in DSpace on 2012-10-20T03:20:39Z (GMT). No. of bitstreams: 0Bitstream added on 2014-09-26T02:34:17Z : No. of bitstreams: 1 182962.pdf: 1617046 bytes, checksum: fb76be08451b69a6987bcb63771db9d1 (MD5) / Neste estudo procurou-se avaliar o efeito da quercetina sobre o extravasamento plasmático induzido pela substância P (SP) e bradicinina (BK) em diversos tecidos de ratos: rim, duodeno, coração, pâncreas, traquéia e bexiga. A avaliação do extravasamento plasmático (EP) mediado pela SP e pela BK foi feita pela técnica do corante azul de Evans, determinado por espectrofotometria (620nm) e expresso em mg de azul de Evans/g de tecido seco. A SP aumentou o EP de modo dose-relacionado no coração, pâncreas, traquéia e bexiga; a BK aumentou o EP de modo dose-relacionado no duodeno, pâncreas, traquéia e bexiga. A quercetina na dose de 7mg/kg, v.o. não alterou o EP em nenhum dos tecidos selecionados; entretanto, a quercetina na dose de 20mg/kg, v.o. provocou um aumento significante do EP no duodeno. A quercetina potencializou o aumento do EP induzido pela SP no duodeno, coração, pâncreas e bexiga, e também potencializou o aumento do EP induzido pela BK no duodeno, coração e traquéia. A inibição farmacológica seletiva da EPN com fosforamidon potencializou o aumento do EP induzido pela SP na traquéia e na bexiga; a inibição da ECA com captopril potencializou o EP induzido pela BK no duodeno e pâncreas. O pré-tratamento com antagonistas de receptores NK-1 e B2 mostrou que os mediadores envolvidos no aumento do EP provocado pela quercetina são a SP e a BK. No rim, o EP não foi modificado por nenhum dos tratamentos utilizados. Portanto, conclui-se que a quercetina tem ação potencializadora do EP induzido tanto pela SP como pela BK, e que este efeito é resultado da inibição das enzimas degradadoras destes mediadores inflamatórios, EPN e ECA, respectivamente. A inibição ECA pela quercetina foi comprovada quando se comparou a atividade da ECA plasmática de animais controle com a de animais tratados com quercetina.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Farmacologia / Made available in DSpace on 2012-10-26T09:19:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 300327.pdf: 5507539 bytes, checksum: 5b97d410164cee38d371b2f8c82e82f7 (MD5) / A Esclerose Múltipla (EM) é uma doença inflamatória crônica e progressiva, a qual desencadeia desmielinização no sistema nervoso central (SNC). Apesar dos grandes avanços observados nas últimas décadas quanto aos mecanismos envolvidos no desenvolvimento e controle da EM, nenhum tratamento completamente seguro e eficaz surgiu até o presente momento. Estudos prévios demonstraram que os níveis de cininas, assim como a expressão dos seus respectivos receptores B1 e B2 encontram-se aumentados em pacientes com EM. No entanto, os mecanismos pelos quais os receptores de cininas regulam o desenvolvimento da EM não foram totalmente elucidados. Neste sentido, o presente estudo tem como objetivo investigar o papel desempenhado pelos receptores de cininas na modulação da encefalomielite autoimune experimental (EAE), o modelo clássico de EM. A EAE foi induzida em camundongos C57BL/6 fêmeas com inoculação de glicoproteína de mielina do oligodendrócitos (MOG35-55), associado com adjuvante incompleto de Freund (CFA), suplementado com Mycobacterium tuberculosis (Mt) H37Ra. Além disso, cada animal recebeu toxina pertussis por via intraperitoneal no dia 0 e dia 2. Neste modelo experimental, até o sétimo dia após a imunização, os linfócitos T reativos à MOG acumulam-se nos linfonodos inguinais. Entre os dias 10-12 surgem os primeiros sinais clínicos relacionados à doença, os quais atingem escore máximo entre os dias 15-18 após a imunização. Por esta razão durante o desenvolvimento deste trabalho definimos os dias 0-7 como a fase de indução da EAE, os dias 7-15 como fase aguda e por fim os dias 15-25 como a fase crônica da doença. O presente estudo demonstrou que o bloqueio dos receptores B1, tanto pelo tratamento farmacológico com o antagonista seletivo para o B1R - des-arg9-[leu8]-bradicinina (DALBK, 50 nmol/kg, i.p.) como em animais nocautes (B1R-/-), na fase de indução da EAE inibiu o desenvolvimento da doença por interferir com o surgimento da resposta imunológica periférica. De maneira significativa, o bloqueio do B1R inibiu a hiperalgesia mecânica induzida pela EAE durante os 14 dias após a imunização. Além disso, a administração do antagonista seletivo para o receptor B1 (DALBK) durante a fase de indução inibiu a produção e a expressão de citocinas e de fatores de transcrição relacionados com os linfócitos Th1 e Th17, tanto em órgãos periféricos como no SNC. Durante a fase crônica da EAE, o tratamento com o antagonista seletivo para o B1R (DALBK, 50 nmol/kg, i.p.) foi capaz de reduzir significantemente a progressão da doença. O tratamento com o antagonista seletivo para o B1R (DALBK), assim como o antagonista seletivo para o B2R (HOE-140) inibiu de maneira significativa a produção e a expressão de mediadores pró-inflamatórios em cultura primária de astrócitos estimulados com IFN-?. De maneira interessante, a administração do agonista seletivo para o receptor B1 (des-arg9- bradicinina, DABK, 300 nmol/kg, i.p.), durante a fase aguda da EAE bloqueou a instalação da doença e inibiu o aumento da permeabilidade da barreira hemato-encefálica (BHE) e conseqüentemente a neuroinflamação. Já o bloqueio do receptor B2 (antagonista HOE-140, 150 nmol/kg, i.p. e animal nocaute B2R-/-) durante todos os períodos de análises causou inibição parcial no desenvolvimento da EAE. Em resumo, nossos resultados sugerem que os receptores de cininas, principalmente o subtipo B1R apresenta um papel dual na progressão da EAE, dependendo da fase de tratamento, através da inibição dos linfócitos T auto-reativos e das células gliais.

A Síndrome de Marfan (SMF) é uma doença de caráter autossômico dominante que acomete o tecido conjuntivo. As principais manifestações clínicas afetam o sistema cardiovascular, ótico e ósseo. A SMF é causada por mutações no gene FBN1, que codifica a proteína extracelular fibrilina-1, componente principal das microfibrilas, que formam as fibras elásticas. Estudos mostraram que mutações no gene da fibrilina-1 levam a um aumento indiscriminado do TGF-&Beta; ativo na matriz, que resulta nos principais fenótipos da doença. O Sistema Renina Angiotensina (RAS) tem como produto principal a Angiotensina II (Ang-II), envolvida na regulação da massa óssea e da atividade do TGF-&Beta;. Estratégias terapêuticas para a SMF utilizando fármacos que agem no RAS têm sido alvos de estudos em modelos animais. Em camundongos, Ramipril, inibidor da ACE (Angiotensin-converting enzyme inhibitor, ACEi), aumenta a transcrição do gene Fbn1 em 35% e melhora a cifose, característica do fenótipo ósseo no modelo animal mg&Delta;loxPneo. O mecanismo de ação do Ramipril no sistema ósseo ainda não está totalmente elucidado, sendo que pode agir por diminuição na produção de Ang-II e consequente diminuição nos níveis de TGF-&Beta;, ou pela inibição de degradação da bradicinina (BK) pela Ang-II. A bradicinina ativa diretamente seu receptor B2R, que induz ações fisiológicas opostas às da Ang-II. O objetivo deste trabalho foi avaliar e compreender os mecanismos gerais da patogênese óssea do modelo murino mg&Delta;loxPneo para a SMF. Para tanto, foi analisado o fenótipo ósseo dos animais mg&Delta;loxPneo e selvagens controle e tratados com Ramipril. Foi verificado que, além da cifose, os animais mutantes apresentaram pior estrutura óssea. O tratamento melhorou a cifose, porém não alterou a qualidade óssea dos animais mutantes. Portanto, o efeito benéfico do Ramipril na cifose dos animais mg&Delta;loxPneo não se deve a uma melhora da estrutura óssea, e pode estar relacionado à integridade do ligamento que sustenta a coluna vertebral. Com o intuito de testar a hipótese de que a sinalização pelo receptor B2R da BK possa estar envolvida no desenvolvimento do fenótipo ósseo dos animais mg&Delta;loxPneo, foram gerados animais mg&Delta;loxPneo e knockout para o receptor B2R. Os resultados mostram que o receptor B2R não interfere no desenvolvimento da cifose, sendo apenas o genótipo para Fbn1 o fator determinante para a manifestação desse fenótipo. Foi realizada a análise de RNA-seq para verificar genes e vias diferencialmente expressas que possam explicar o mecanismo de desenvolvimento do fenótipo ósseo dos animais mg&Delta;loxPneo. Foram encontradas vias como da adesão focal, interação receptor-meio extracelular (MEC), junção ocludente, reparação por excisão de nucleotídeo e de reparação missmatch, que podem explicar alterações no metabolismo de células ósseas. Além disso, foram encontradas diferenças de expressão de genes relacionados ao metabolismo muscular esquelético, o que está de acordo com a hipótese de regulação parácrina entre o tecido muscular e ósseo, levando a uma pior estrutura óssea / Marfan syndrome (MFS) is an autosomal dominant disease that affects the connective tissue. The main clinical manifestations affect the cardiovascular, optical and bone systems. MFS is caused by mutations in the FBN1 gene, that encodes the extracellular protein fibrillin-1, a major component of microfibrils, which form elastic fibers. Studies have shown that mutations in the fibrillin-1 gene lead to an indiscriminate increase in active TGF-&Beta; in the matrix, which results in the major phenotypes of the disease. The Renin Angiotensin System (RAS) has as its main product Angiotensin II (Ang-II), involved in bone mass regulation and TGF-&Beta; activity. Therapeutic strategies using drugs targeting the RAS have been studied in animal models. Ramipril, an ACE inhibitor (Angiotensin-converting enzyme inhibitor, ACEi), increase Fbn1 gene expression in 35% and improve kyphosis index in the mg&Delta;loxPneo mouse model for SMF. Its mechanism of action in bone tissue is not completely elucidated, and it may act by decreasing Ang-II production and consequent reduction in TGF-&Beta; levels, or by inhibiting degradation of bradykinin (BK) by Ang II. BK directly activates its B2R receptor, which induces opposite physiological actions to Ang-II. This study aims to evaluate and understand the general mechanisms of bone pathogenesis in the mg&Delta;loxPneo mouse model. We analyzed the bone phenotype of mg&Delta;loxPneo and wildtype animals treated, or not, with Ramipril by measuring the kyphosis index (KI), micro computed tomography (&mu;CT) and Real-time PCR (RT-PCR). We found that mutant animals showed a greater degree of kyphosis and an altered bone structure. Ramipril improved kyphosis but did not alter bone quality of mutant animals, while in wild type animals Ramipril decreased bone structure without altering KI. Therefore, the beneficial effect of Ramipril on mg&Delta;loxPneo animals\' kyphosis is not due to an improvement in bone structure. In order to test the hypothesis where signaling through BK B2R receptor may be involved in the development of bone phenotype of mg&Delta;loxPneo animals, a mouse model with the mg&Delta;loxPneo mutation and knockout for B2R receptor was generated. The analysis of these animals show that the B2R receptor does not interfere with the development of kyphosis, with Fbn1 genotype as sole determinant for this phenotype manifestation. RNA-seq analysis was performed to verify differential expression of genes and altered cellular pathways, which could reveal mechanisms of bone phenotype development in mg&Delta;loxPneo animals. Altered pathways found included focal adhesion, receptor- extracellular matrix (ECM) interaction, tight junction, nucleotide excision repair and missmatch repair, which may explain changes in bone cells metabolism. In addition, there were differences in gene expression related to skeletal muscle metabolism, which is in agreement with the paracrine regulation of bone and muscle tissue, leading to worst bone structure