Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-01-16T13:07:10Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Amanda Juliana Soaris de Souza - 2016.pdf: 2234438 bytes, checksum: 7ea39739a499e174ae4502af4bafbfaa (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-01-16T13:10:24Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Amanda Juliana Soaris de Souza - 2016.pdf: 2234438 bytes, checksum: 7ea39739a499e174ae4502af4bafbfaa (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-16T13:10:24Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Amanda Juliana Soaris de Souza - 2016.pdf: 2234438 bytes, checksum: 7ea39739a499e174ae4502af4bafbfaa (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2016-12-12 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Abstract: Toxoplasma gondii is a pathogenic agente capable o causing both local and systemic disease in immunocompetent and immunocompromised individuals. It can be agressive inducing lesions in the central nervous system, viscera, eye globe and/or lymohatic ganglia. Neurocysticercosis is the most severe form of cysticercosis. It is the one of the main helminthiasis of the central nervous system leasing to varied symptoms. During toxoplasmosis infection the inflammatory response is typically pro-inflammatory. When there is co-infection between these two agents, this typical pro-inflammatory response may lead to the death of the parasites resulting in the release of antigens. Therefore an experimental model using T. gondii cysts and T. crassiceps antigens was developed. The aim of this study was to evaluate the influence of T. crassiceps cysticerci antigens in the modulation of the inflammatory response of the experimental neurotoxoplasmosis. BALB/c mice were inoculated with T. gondii cysts and/or T. crassiceps cysticerci antigens. The animals were euthanized 60 or 90 days after the inoculation. The histopathologic analysis and the cytokine dosage from spleen cell culture were performed. The animals from the neurotoxoplasmosis group at 90 DAI (NT90) presented greater intensity of the lesions such as vasculitis, meningitis and microgliosis alongside with a Th1 immune profile with high dosages of IFNγ. While in the neurocysticercosis group at 60 DAI (NCC60) the lesions were more discrete with high dosages of IL4 displaying a Th2 immune profile. In the co-infected group the parenchyma lesions were more discrete. Also in the co-infected group there were lower dosages of IFNγ and higher dosages of IL4 in comparison to the NT90 group. It is possible to conclude that the T. crassiceps cysticerci antigens decreased the intensity of the lesions caused by the T. gondii infection inducing a Th2 immune response. / Resumo: O Toxoplasma gondii é um agente patogênico que pode causar doença sistêmica e local em indivíduos imunocompetentes e imunossuprimidos, podendo se mostrar agressivo, causando lesões no sistema nervoso central, órgãos viscerais, olhos e/ou gânglios linfáticos. A Neurocisticercose é a forma mais grave de cisticercose, sendo uma das principais helmintoses do sistema nervoso central, e podendo causar sintomas variados. Na infecção pela toxoplasmose, a resposta imunológica é tipicamente pró-inflamatória. Durante a coinfecção, este tipo de resposta pode causar a morte do parasito, causando a liberação dos antígenos. Desta forma, tornou-se necessário o desenvolvimento de um modelo experimental utilizando o T. gondii e os antígenos de cisticerco de T. crassiceps. O objetivo deste trabalho foi avaliar influência dos antígenos do cisticerco de Taenia crassiceps na modulação da resposta inflamatória na neurotoxoplasmose experimental. Para isso camundongos BALB/c foram inoculados com cistos de T. gondii e/ou antígenos de cisticercos e eutanasiados aos 60 ou 90 dias após a inoculação. Foi realizada análise histopatológica dos encéfalos e dosagem de citocinas a partir de cultura de células do baço. Os animais do grupo neurotoxoplasmose aos 90DAI (NT90) apresentaram maior intensidade de lesões, como vasculite, meningite e microgliose e perfil imune do tipo Th1, com dosagens elevadas de IFNγ, enquanto que o grupo neurocisticercose aos 60DAI (NCC60), as lesões foram mais discretas e dosagens elevadas de IL4, revelando perfil imune do tipo Th2. No grupo de animais coinfectados as lesões no parênquima foram mais discretas. Além disso, o grupo co-inoculado NT e NCC (COINF) apresentou dosagens baixas de IFNγ e aumentadas de IL4 em relação ao grupo NT90. Conclui-se que a inoculação de antígenos de T. crassiceps amenizou as lesões causadas pelo T. gondii induzindo uma resposta imunológica do tipo Th2.

Introdução: coinfecção Leishmania/HIV representa um grande problema de saúde visto que há maior recidiva e letalidade por leishmaniose visceral na população de pacientes vivendo com HIV/aids. No entanto, pouco se sabe a respeito da frequência da infecção por Leishmania em pacientes assintomáticos com HIV, que podem futuramente desenvolver doença plenamente manifesta. Ademais poucas informações sobre o desempenho dos métodos de diagnóstico laboratorial de leishmaniose em pacientes coinfectados estão disponíveis no Brasil e na América Latina. Objetivos: avaliar a frequência da infecção por Leishmania spp. em pacientes com HIV/aids em uma coorte de São Paulo/SP, a positividade dos métodos sorológicos e moleculares em pacientes com HIV/aids e as possíveis associações da positividade dos diferentes métodos laboratoriais com variáveis clínicas, laboratoriais e epidemiológicas. Material e métodos: estudo transversal, realizado com pacientes atendidos no Instituto de Infectologia Emílio Ribas com diagnóstico de infecção pelo HIV. A amostra foi calculada com base na prevalência da infecção por Leishmania spp. em pacientes com HIV/aids, estimada em estudos prévios. Foram incluídos 240 pacientes nesta amostragem, os quais foram submetidos à coleta de sangue periférico em dois tubos: um tubo seco para análise sorológica; um tubo contendo EDTA, para o diagnóstico molecular. As amostras foram submetidas aos seguintes testes diagnósticos: ELISA usando antígenos de L. major-like (ELISA L. major-like); ELISA usando antígenos de Leptomonas seymouri (ELISA Leptomonas); ELISA usando antígenos rk39 (ELISA rK39); ELISA usando antígenos rK28 (ELISA rK28); Reação de imunofluorescência indireta (RIFI); Teste de Aglutinação Direta (DAT); Reação em cadeia da polimerase (PCR) com os seguintes genes alvos: kDNA (PCR kDNA) e ITS-1 (PCR ITS-1). Resultados: a frequência, levando-se em consideração a positividade em pelo menos um dos métodos empregados, foi de 34,6%. Sessenta pacientes (25%) foram positivos para ELISA L. major-like; nove (3,8%) para ELISA Leptomonas; três (1,3%) para ELISA rK39; seis (2,5%) para ELISA rK28; onze (4,6%) para RIFI; quatro (1,7%) para PCR kDNA; 10 (4,2%) para PCR ITS-1. Nenhuma amostra foi positiva para DAT. Não houve associação da positividade dos testes com contato com área endêmica para LV ou presença de sintomas sugestivos de LV. Para ELISA L.major-like, ELISA Leptomonas e RIFI, houve associação entre valores de contagem de linfócitos T CD4+ e positividade dos testes. Conclusões: Houve uma alta prevalência da infecção por Leishmania spp. em pacientes infectados pelo HIV na amostra estudada, principalmente utilizando-se ELISA com antígeno total de L. major-like. Apesar de existir a possibilidade de reação cruzada com outros antígenos que possam ter influenciado na positividade de alguns testes, especialmente ELISA L. major-like, outros testes considerados altamente específicos para o diagnóstico de infecção por Leishmania também se apresentaram positivos, o que pode demonstra a magnitude da coinfecção Leishmania/HIV na amostra estudada. Houve associação entre positividade de alguns testes estudados e os valores de linfócitos T CD4+, com maior positividade destes testes em pacientes mais imunodeprimidos. Presença de sintomatologia ou epidemiologia para LV não tiveram influência na positividade dos testes diagnósticos / Introduction: Leishmania/HIV coinfection represents a major health problem since there is greater relapse and lethality due to visceral leishmaniasis in HIV infected population. However, there are few information about the frequency of Leishmania infection in asymptomatic HIV infected individuals, who may develop full-blown symptomatic disease in the future. In addition, few information about the performance of laboratory diagnostic methods for leishmaniasis in coinfected patients are available in Brazil and Latin America. Objectives: The main objective is evaluate the frequency of Leishmania spp. infection in HIV infected patients in a patient cohort from São Paulo/SP. This study also aims to evaluate the positivity of the serological and molecular methods in HIV/AIDS patients and the possible associations of the positivity of the different laboratory methods regarding to clinical, laboratory and epidemiological variables. Material and methods: a cross-sectional study including HIV infected patients treated at Institute of Infectious Diseases Emilio Ribas. The sample was calculated considering the frequency of Leishmania spp. infection in HIV infected patients estimated in previous studies. Two hundred and forty patients were included, whose were submitted to peripheral blood collection in two tubes: a dry tube for serological analysis; a tube containing EDTA, for molecular diagnosis. The samples were submitted to the following diagnostic tests: ELISA using L. major-like antigens (ELISA L. major-like); ELISA using Leptomonas seymouri antigens (ELISA Leptomonas); ELISA using rk39 antigens (ELISA rK39); ELISA using rK28 antigens (ELISA rK28); indirect fluorescent-antibody test (IFAT); direct agglutination test (DAT); polymerase chain reaction (PCR) with the following target genes: kDNA (kDNA PCR) and ITS-1 (ITS-1 PCR). Results: the frequency considering at least one test positive was 34.6%. Sixty patients (25%) were positive by ELISA L. major-like; nine (3.8%) by ELISA Leptomonas; three (1.3%) by ELISA rK39; six (2.5%) by ELISA rK28; eleven (4.6%) by IFAT; four (1.7%) by kDNA PCR; 10 (4.2%) by ITS-1 PCR. No sample was positive by DAT. There was no association between the positivity of the tests and history of having lived in a VL transmission area or presence of symptoms suggestive of VL. For ELISA L.major-like, ELISA Leptomonas and IFAT, there was an association between CD4+ T-lymphocyte counts and test positivity. Conclusions: there was a high prevalence of Leishmania spp. in HIV-infected patients included, mainly using ELISA with total L. major-like antigen. Although there is a possibility of cross-reaction with other antigens that can influence the positivity of some tests, especially ELISA L. major-like, other tests considered to be highly specific for the diagnosis of Leishmania infection were also positive, which may demonstrate the magnitude of Leishmania/HIV coinfection in the sample studied. There was an association between the positivity of some tests studied and the values of T CD4+ lymphocytes, with a higher positivity of these tests in more immunosuppressed patients. Presence of symptoms or epidemiology for VL had no influence on the positivity of the diagnostic tests

L'infection chronique ou occulte par le virus de l'hépatite B (HBV) est l'un des facteurs de risque les plusimportants pour le développement de carcinome hépatocellulaire viro-induit. Malgré la petite taille dugénome et les contraintes imposées par l'organisation de ce génome, le HBV présente une grandevariabilité génétique qui est le résultat des erreurs générées lors de l'étape de reverse transcription maisaussi, lors des processus de sélection et d'adaptation. Durant l'infection, une relation étroite hôte-viruss'établit. La population virale est caractérisée par la présence de quasi-espèces pouvant influencerl'évolution de la maladie hépatique et favoriser les phénomènes d'échappement. Le but de notre travail aété 1) d'étudier la variabilité virale associée aux infections occultes et l'impact de certaines modificationsde l'AgHBs (sY100C) sur la reconnaissance des tests de détection enzymatiques, et l'impact des mutations(sK122R, sD144E) sur la reconnaissance des anticorps anti-HBs d'un patient 2) de développer un nouveloutil d'amplification de génomes entiers de HBV que nous avons appliqué à l'étude préliminaire de quasiespècesd'un mutant Core. Cet outil d'amplification est plus sensible que les techniques existantes, et ilpermet l'étude des propriétés moléculaires et fonctionnelles des isolats virales. En conclusion, nous avonspu montrer que les processus d'échappement sont complexes, et font intervenir des facteurs du virus et del'hôte. Ce travail contribue à l'amélioration de la compréhension de la biologie de l'infection par le HBV,et illustre la complexité des interactions hôte-virus.

Les virus du Chikungunya (CHIKV) et de la dengue (DENV) sont deux virus émergents qui sévissent dans les régions tropicales et subtropicales du monde entier et qui sont transmis par les moustiques du genre Aedes. Ces dernières années, leur transmission a surtout progressé dans les zones urbaines et périurbaines touchant des millions d'individus et faisant de ces deux pathogènes des sujets majeurs de préoccupation pour la santé publique. Le Chikungunya et la Dengue sont des infections dites aiguës entrainant une mise en place rapide de la réponse immunitaire innée qui joue un rôle majeur dans le contrôle et l'évolution de la maladie. Les cellules Natural Killer (NK) représentent une population cellulaire clé de la réponse innée et jouent un rôle crucial dans les mécanismes de défense mis en place. A travers une étude ex vivo et in vitro, nous nous sommes intéressées à la caractérisation des cellules NK à travers (i) une étude phénotypique et fonctionnelle des cellules NK chez des patients infectés en phase aiguë par le CHIKV, DENV-2 ou par les deux virus et (ii) à la caractérisation des interactions entre les cellules NK et les cellules cibles infectées par le virus. L'ensemble de ces données contribue à mieux identifier l'implication des cellules NK dans le contrôle des infections par le CHIKV et DENV-2 permettant ainsi de mieux comprendre les mécanismes à l'origine des dérèglements de la réponse immunitaire. Au cours des dernières épidémies, plusieurs cas de patients coinfectés par les deux virus ont été répertoriés. De plus, l'expansion géographique des moustiques Aedes pourrait amener à une augmentation du nombre de cas de coinfections sans que les mécanismes sous jacents aux coinfections ne soient étudiés. Afin de pouvoir réponse à certaines questions concernant ce phénomène, nous avons mis en place un modèle expérimental de coinfection par CHIKV et DENV-2 chez le macaque Rhésus.

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2016-04-04T18:19:56Z No. of bitstreams: 1 Filipe Ferreira de Almeida Rego Fatores....pdf: 6473179 bytes, checksum: 008855484cf612885a04f114f51214ba (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2016-04-04T18:20:12Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Filipe Ferreira de Almeida Rego Fatores....pdf: 6473179 bytes, checksum: 008855484cf612885a04f114f51214ba (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-04T18:20:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Filipe Ferreira de Almeida Rego Fatores....pdf: 6473179 bytes, checksum: 008855484cf612885a04f114f51214ba (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, Ba, Brasil / Nesta tese foram realizados três trabalhos distintos sendo que todos envolvem identificar possíveis fatores genéticos ou clínicos relacionados com a infecção pelo HIV-1 ou pelo HTLV-1 ou por ambos. No primeiro trabalho nós objetivamos identificar mutações que poderiam estar relacionadas com o desenvolvimento da TSP/HAM ou carga proviral. Para isto sequenciamos a região LTR5’ do HTLV-1 por Ion Torrent para verificar mutações com baixa frequência. Nós encontramos mutações em 52 posições que estavam presentes em mais de um indivíduo, porém apenas 11 destas estavam presentes em TFBS previamente descritos. Três mutações que não estavam presentes em TFBS previamente descritos foram estatisticamente significantes quando comparadas entre os grupos," sendo" que" estes" sítios" podem" ser" importantes" para" a"mediação" da" transcrição" viral."No" segundo" estudo" nós" objetivamos determinar a prevalência do genótipo selvagem em Hlabisa, Kwazulu-Natal na África do Sul além de identificar possíveis fatores associados a presença deste genótipo em 220 pacientes submetidos a ART. O genótipo selvagem foi detectado em 28 amostras (12,7%). Selecionamos 11 pacientes para realizar o sequenciamento pelo Ion Torrent, nove confirmaram não ter mutações de resistência aos antirretrovirais em alta frequência. Foi encontrada uma alta contagem de CD4+ no início da terapia associado a falha terapêutica assim como uma alta carga viral antes da genotipagem e não foi encontrado associação entre aderência a terapia auto-reportada e a presença do genótipo selvagem. Aproximadamente um em cada oito adultos que falham a terapia possuem o genótipo selvagem sendo este dado confirmado através de sequenciamento de nova geração. Devido ao alto número de genótipos selvagem encontrados, o teste de resistência genotípica deve ser solicitado para se obter um melhor desfecho clinico em níveis individuais e populacionais. No terceiro estudo nós analisamos as diferenças na contagem de linfócitos T CD4+ entre indivíduos infectados apenas com o HIV-1 e indivíduos coinfectados HIV-1/HTLV-1 com falha terapêutica, além de analisarmos a soroprevalência do HTLV-1 em indivíduos infectados pelo HIV-1. Foram encontrados oito pacientes coinfectados (2,1%) dos 381 pacientes analisados. Nós não observamos nenhuma diferença estatística quando analisamos transversalmente os dados clínicos dos pacientes, exceto na primeira contagem de linfócitos T CD4+ após o início do tratamento que estava maior nos indivíduos coinfectados (p=0.03). A análise multivariada longitudinal mostrou que a media de linfócitos T CD4+ ao longo do tratamento, foi estatisticamente maior nos pacientes coinfectados levando em consideração características demográficas, carga viral, fatores relacionados a terapia, entre outros. Nos pacientes coinfectados também não foram encontrados marcadores de HLA relacionados com os supressores de elite do HIV-1. Os dados deste trabalho sugerem que os pacientes coinfectados em terapia antirretroviral deveriam ter um acompanhamento clínico diferenciado dos indivíduos apenas infectados pelo HIV-1, pois a coinfecção poderia estar levando ao aumento do número dos linfócitos T CD4+ sem um possível ganho de resposta imune. / We performed three studies to analyze risk factors associated with retroviruses infections. In the first study we attempted to analyze mutations related to TSP/HAM development or proviral load. For that purpose we have sequenced the LTR 5’ region of HTLV-1 by Ion Torrent. We found that mutations in 52 positions were present in more than one individual, but only 11 were present in the previously described TFBS. Three mutations that were not present in the previously described TFBS were statistically significant comparing groups. Despite the absence of previously described TFBS, these sites might be important for the viral transcription. In the second study we analyzed the prevalence of HIV-1 wild type genotype in adults failing first-line ART. A total of 220 adults were included. The wild type genotype was detected by population sequencing in 28 (12.7%). No major drug resistance mutations were detected by deep sequencing for 81.8% (9/11) of those sampled. Higher baseline CD4+ cell count was associated with a greater likelihood of wild type genotype as was a higher viral load prior to resistance testing but there was no evidence of an association between selfreported adherence and the presence of wild type genotype. Approximately one in eight adults failing first-line ART had wild type genotype and this result was confirmed trough deep sequencing in some samples. Access to genotypic resistance testing may be required in this region to achieve optimal individual-level and population-level outcomes. In the third study we proposed to verify the prevalence of HTLV-1 and to statistically assess differences in CD4+ counts between HTLV-1/HIV-1 co-infected and HIV-1 mono-infected patients living in rural KwaZulu-Natal. The HTLV-1 seroprevalence was 2.1% (8 out 381 patients). The patients were grouped by HTLV-1/HIV-1 co-infected and HIV-1 mono-infected status for the statistical analysis. There were no cross-sectional differences between the groups regarding CD4+ count before therapy, CD4+ count at genotype, age, gender, viral load, duration of ART, immunological failure, ART failure and first ART regimen. However, the first CD4+ count after treatment was higher in the co-infected group (p=0.03). A multivariate, longitudinal model showed that the mean CD4+ count over time for the HTLV-1/HIV-1 coinfected group was significantly higher than the HIV mono-infected group (p<0.05) when adjusting for demographic characteristics, viral load and ART treatment factors. This finding was independent of expression of HLA Class 1 genotypes previously associated with HIV-1 infected elite suppressors. This study suggests that the increase of CD4+ count after therapy suggests a differential clinical management for the HTLV-1/HIV-1 co-infected patients should be implemented.

Submitted by Izabel Franco (izabel-franco@ufscar.br) on 2016-10-06T14:50:10Z No. of bitstreams: 1 DissAAR.pdf: 2251339 bytes, checksum: c5d9f500d806b42e30a73dd665bef43d (MD5) / Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2016-10-20T13:50:34Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DissAAR.pdf: 2251339 bytes, checksum: c5d9f500d806b42e30a73dd665bef43d (MD5) / Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2016-10-20T13:50:40Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DissAAR.pdf: 2251339 bytes, checksum: c5d9f500d806b42e30a73dd665bef43d (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-20T13:50:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DissAAR.pdf: 2251339 bytes, checksum: c5d9f500d806b42e30a73dd665bef43d (MD5) Previous issue date: 2016-04-01 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / This is a qualitative based study, supported by methodological theoretical framework Speech Analysis of French Matrix, which seeks to understand these production processesin the relation of langua get o the historical and social externality of the subject. The study aimed to analyze the senses produced by the disease processin patients with TB/HIV. This proposal was developed with patients using the Care Center of Chronicle Infections of a city in the São Paulo state. The data collection was divided into two stages :the first stage was collected by the multi-professional team, through the Book of Registration and Monitoring of Tuberculosis Cases Treatment, the National Disease Reporting Information System(Sinan), TBWEB and socio demographic data in order to characterize the subjects of this investigation. In the second stage individual interviews were conductedwith06TB /HIV co-infected patients; the interviews were semi-structured and audio-recorded. The transcriptions were organized with ATLAS.ti7software feature, which facilitated the organization of empirical data. The results of this research demonstrate that some subject sin the interview and patient position assume a standard circulating conception in society, in which HIV is inextricably linked torisky behaviors (drug use and unprotected sex) that propitiate infection by this virus. In addition, was possible to observet he importance of the link between the patient and the health professional in strengthening and continuity of treatment. Considering the above, there is the need to strengthen the recommendations by the Health Ministry about the co-infection TB /HIV using health strategies or actions not only to patients and health professionals, but also t of families and care givers of these patients. / Trata-se de um estudo com a abordagem qualitativa, sustentado no referencial teórico metodológico Análise de Discurso de matriz francesa, o qual busca compreender os processos de produção de sentidos na relação da língua com a exterioridade histórica e social do sujeito. O estudo teve como objetivo analisar os sentidos produzidos pelo processo de adoecimento em doentes com TB/HIV. Esta proposta foi desenvolvida com pacientes que perpassam pelo Centro de Atendimento de Infecções Crônicas de um município do interior do Estado de São Paulo. A coleta de dados dividiu-se em duas etapas: A primeira etapa foi coletada junto a equipe multiprofissional, por meio do Livro de Registro e Acompanhamento de Tratamento de Casos de Tuberculose, ao Sistema de Informação de Notificação de Agravos Nacional (Sinan), do TBWEB, dados sócios demográficos a fim de caracterizar os sujeitos desta investigação. Na segunda etapa foram realizadas entrevistas individuais com os 06 sujeitos coinfectados TB/HIV, sendo estas semiestruturadas e áudio-gravadas. As transcrições foram organizadas com recurso do software ATLAS.ti 7, o qual facilitou a organização dos dados empíricos. Os resultados desta investigação demonstram que alguns sujeitos na posição de entrevistados e doentes, assumem uma concepção padrão circulante na sociedade, na qual o HIV está intrinsecamente ligado a comportamentos de risco (uso de drogas e relações sexuais sem proteção) que propiciam a infecção por este vírus. Além disso, foi possível observar a importância do vínculo entre o doente e o profissional de saúde, no fortalecimento e continuidade do tratamento. Diante do exposto, há necessidade do fortalecimento das recomendações pelo Ministério da Saúde acerca da co-infecção TB / HIV utilizando-se de estratégias ou ações de saúde voltadas não somente aos doentes e profissionais da saúde, mas também aos familiares e cuidadores desses doentes.

Introdução: coinfecção Leishmania/HIV representa um grande problema de saúde visto que há maior recidiva e letalidade por leishmaniose visceral na população de pacientes vivendo com HIV/aids. No entanto, pouco se sabe a respeito da frequência da infecção por Leishmania em pacientes assintomáticos com HIV, que podem futuramente desenvolver doença plenamente manifesta. Ademais poucas informações sobre o desempenho dos métodos de diagnóstico laboratorial de leishmaniose em pacientes coinfectados estão disponíveis no Brasil e na América Latina. Objetivos: avaliar a frequência da infecção por Leishmania spp. em pacientes com HIV/aids em uma coorte de São Paulo/SP, a positividade dos métodos sorológicos e moleculares em pacientes com HIV/aids e as possíveis associações da positividade dos diferentes métodos laboratoriais com variáveis clínicas, laboratoriais e epidemiológicas. Material e métodos: estudo transversal, realizado com pacientes atendidos no Instituto de Infectologia Emílio Ribas com diagnóstico de infecção pelo HIV. A amostra foi calculada com base na prevalência da infecção por Leishmania spp. em pacientes com HIV/aids, estimada em estudos prévios. Foram incluídos 240 pacientes nesta amostragem, os quais foram submetidos à coleta de sangue periférico em dois tubos: um tubo seco para análise sorológica; um tubo contendo EDTA, para o diagnóstico molecular. As amostras foram submetidas aos seguintes testes diagnósticos: ELISA usando antígenos de L. major-like (ELISA L. major-like); ELISA usando antígenos de Leptomonas seymouri (ELISA Leptomonas); ELISA usando antígenos rk39 (ELISA rK39); ELISA usando antígenos rK28 (ELISA rK28); Reação de imunofluorescência indireta (RIFI); Teste de Aglutinação Direta (DAT); Reação em cadeia da polimerase (PCR) com os seguintes genes alvos: kDNA (PCR kDNA) e ITS-1 (PCR ITS-1). Resultados: a frequência, levando-se em consideração a positividade em pelo menos um dos métodos empregados, foi de 34,6%. Sessenta pacientes (25%) foram positivos para ELISA L. major-like; nove (3,8%) para ELISA Leptomonas; três (1,3%) para ELISA rK39; seis (2,5%) para ELISA rK28; onze (4,6%) para RIFI; quatro (1,7%) para PCR kDNA; 10 (4,2%) para PCR ITS-1. Nenhuma amostra foi positiva para DAT. Não houve associação da positividade dos testes com contato com área endêmica para LV ou presença de sintomas sugestivos de LV. Para ELISA L.major-like, ELISA Leptomonas e RIFI, houve associação entre valores de contagem de linfócitos T CD4+ e positividade dos testes. Conclusões: Houve uma alta prevalência da infecção por Leishmania spp. em pacientes infectados pelo HIV na amostra estudada, principalmente utilizando-se ELISA com antígeno total de L. major-like. Apesar de existir a possibilidade de reação cruzada com outros antígenos que possam ter influenciado na positividade de alguns testes, especialmente ELISA L. major-like, outros testes considerados altamente específicos para o diagnóstico de infecção por Leishmania também se apresentaram positivos, o que pode demonstra a magnitude da coinfecção Leishmania/HIV na amostra estudada. Houve associação entre positividade de alguns testes estudados e os valores de linfócitos T CD4+, com maior positividade destes testes em pacientes mais imunodeprimidos. Presença de sintomatologia ou epidemiologia para LV não tiveram influência na positividade dos testes diagnósticos / Introduction: Leishmania/HIV coinfection represents a major health problem since there is greater relapse and lethality due to visceral leishmaniasis in HIV infected population. However, there are few information about the frequency of Leishmania infection in asymptomatic HIV infected individuals, who may develop full-blown symptomatic disease in the future. In addition, few information about the performance of laboratory diagnostic methods for leishmaniasis in coinfected patients are available in Brazil and Latin America. Objectives: The main objective is evaluate the frequency of Leishmania spp. infection in HIV infected patients in a patient cohort from São Paulo/SP. This study also aims to evaluate the positivity of the serological and molecular methods in HIV/AIDS patients and the possible associations of the positivity of the different laboratory methods regarding to clinical, laboratory and epidemiological variables. Material and methods: a cross-sectional study including HIV infected patients treated at Institute of Infectious Diseases Emilio Ribas. The sample was calculated considering the frequency of Leishmania spp. infection in HIV infected patients estimated in previous studies. Two hundred and forty patients were included, whose were submitted to peripheral blood collection in two tubes: a dry tube for serological analysis; a tube containing EDTA, for molecular diagnosis. The samples were submitted to the following diagnostic tests: ELISA using L. major-like antigens (ELISA L. major-like); ELISA using Leptomonas seymouri antigens (ELISA Leptomonas); ELISA using rk39 antigens (ELISA rK39); ELISA using rK28 antigens (ELISA rK28); indirect fluorescent-antibody test (IFAT); direct agglutination test (DAT); polymerase chain reaction (PCR) with the following target genes: kDNA (kDNA PCR) and ITS-1 (ITS-1 PCR). Results: the frequency considering at least one test positive was 34.6%. Sixty patients (25%) were positive by ELISA L. major-like; nine (3.8%) by ELISA Leptomonas; three (1.3%) by ELISA rK39; six (2.5%) by ELISA rK28; eleven (4.6%) by IFAT; four (1.7%) by kDNA PCR; 10 (4.2%) by ITS-1 PCR. No sample was positive by DAT. There was no association between the positivity of the tests and history of having lived in a VL transmission area or presence of symptoms suggestive of VL. For ELISA L.major-like, ELISA Leptomonas and IFAT, there was an association between CD4+ T-lymphocyte counts and test positivity. Conclusions: there was a high prevalence of Leishmania spp. in HIV-infected patients included, mainly using ELISA with total L. major-like antigen. Although there is a possibility of cross-reaction with other antigens that can influence the positivity of some tests, especially ELISA L. major-like, other tests considered to be highly specific for the diagnosis of Leishmania infection were also positive, which may demonstrate the magnitude of Leishmania/HIV coinfection in the sample studied. There was an association between the positivity of some tests studied and the values of T CD4+ lymphocytes, with a higher positivity of these tests in more immunosuppressed patients. Presence of symptoms or epidemiology for VL had no influence on the positivity of the diagnostic tests

Submitted by Isaac Francisco de Souza Dias (isaac.souzadias@ufpe.br) on 2016-03-04T17:16:30Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) MICHELINE OLIVEIRA LOBO PEREIRA DA COSTA- TESE DOUTORADO -23-10-2015.pdf: 15371820 bytes, checksum: 4afd4b560150641ba2dc59721bbb563e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-04T17:16:30Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) MICHELINE OLIVEIRA LOBO PEREIRA DA COSTA- TESE DOUTORADO -23-10-2015.pdf: 15371820 bytes, checksum: 4afd4b560150641ba2dc59721bbb563e (MD5) Previous issue date: 2015-01-23 / CAPES / O presente estudo avaliou o desempenho da metodologia citológica de base líquida (ThinPrep-TP) com o da citologia convencional de Papanicolaou (CC) no diagnóstico de alterações citopatológicas e de resultados insatisfatórios, sob a visão de um serviço público no estado de Pernambuco (LACEN-PE) e da Fundação Oncocentro de São Paulo (FOSP-SP). Também foram avaliadas as associações entre a presença de coinfecções genitais dos subtipos de Human papillomavirus (HPV) com Chlamydia trachomatis (CT) e/ou outras microfloras, com os diferentes estágios de alterações cervicais das pacientes. A população do estudo foi de 525 mulheres na faixa etária dos 18-65 anos, atendidas por demanda espontânea, pelas Unidades Básicas de Saúde no Estado de Pernambuco, no período de abril a novembro de 2011. Um questionário padronizado com informações sobre características sociodemográficas, sexuais, reprodutivas e de hábitos (tabagismo, consumo de bebidas alcoólicas e uso de drogas) foram obtidos de todas as pacientes do estudo. A presença de DNA do HPV e da CT foram diagnósticadas através da reação em cadeia da polimerase (PCR) e o exame citológico foi realizado para detecção das demais infecções. Para avaliar a relação das infecções genitais com a presença de alterações intraepiteliais cervicais, foi utilizado o teste exato de Fisher. Os resultados mostraram que 11,05% das pacientes tinham menos de 25 anos, 30,86% eram solteiras, 6,86% tiveram mais de 5 parceiros sexuais, 44% não faziam uso de métodos contraceptivos, 38,85% eram usuárias de álcool, 24,38% eram fumantes e 3,24% haviam consumido drogas. Além disso, 42,01% tinham queixas ginecológicas; e 12,19% história pregressa de doenças sexualmente transmissíveis (DST). Quando comparadas a eficiência das técnicas TP e CC sob a visão do LACEN-PE, observou-se que as duas metodologias avaliadas apresentaram fraca concordância entre os métodos (k=0,19;95%IC(0,11-0,26); p<<0,001). A metodologia TP reduziu a taxa de resultados insatisfatórios de 4,38% para 1,71% (×2= 5,28; p=0,02), e o número de alterações citopatológicas diagnosticadas aumentaram de 2,47% para 3,04%. Porém sob a avaliação da FOSP-SP, as duas metodologias apresentaram concordância (k=0,39;95%IC(0,29-0,50); p<<0,001). A metodologia TP apresentou taxas insatisfatórias e praticamente semelhantes de 3,20% para 3,60% (×2= 5,00; p=0,17), e de alterações citopatológicas de 5,60% para 4,20%. Em 87 casos, foram observadas alterações cervicais por uma das metodologias utilizadas; destas, em 83,91% foram detectados CT e 82,76% foram positivas para HPV, ocorrendo coinfecção em 65 casos (74,7%). Em 93,1% dos casos houveram alterações colposcópicas, observando-se uma associação estatisticamente significativa entre coinfecção HPV-CT e presença de lesão (p=0.037). Outras microfloras encontradas foram Gardnerella vaginalis (35,6%), cocos (18,4%), Candida sp (9,2%), Trichomonas vaginalis (6,9%), Lactobacillus sp (4,6%) e herpesvírus (1,15%). Flora mista (coinfecção por várias microfloras – com exceção de CT simultaneamente) ocorreram em 41,38% dos casos. No entanto, nenhuma associação da presença desses microrganismos não-virais e os herpesvírus com a gravidade das lesões intraepiteliais foram encontradas. Os subtipos de HPV mais frequentes foram 16 e 31 (34,3% e 17,15%, respectivamente). Porém nas lesões de maior gravidade, os mais prevalentes foram 16 e 18. Desta forma, concluimos que este estudo demonstra a superioridade da metodologia TP no diagnóstico citológico das amostras cervicais o que poderá contribuir na diminuição de possíveis perdas por repetição citológica e seguimento das pacientes. É importante chamar atenção para as infecções genitais, em especial a CT, que devem sem investigadas e tratadas adequadamente, haja vista, que coinfecções com o HPV estão associadas ao favorecimento de lesões cervicais, e podem evoluir a graus mais avançados. / This study evaluated the performance of cytological methodology net basis (ThinPrep-TP) with the conventional Pap cytology (CC) in the diagnosis of cytopathological findings and unsatisfactory results under the vision of a public service in the state of Pernambuco (LACEN -PE) and Oncocentro Foundation of São Paulo (FOSP-SP). We also evaluated whether there is an association between the presence of genital co-infections of human papillomavirus subtypes (HPV) with Chlamydia trachomatis (CT) and or other microflora, with the different stages of cervical abnormalities of patients. The study population of 525 women between the ages of 18-65 years, assisted by spontaneous demand, the Basic Health Units in the State of Pernambuco, in the period from April to November 2011. A standardized questionnaire with information on sociodemographic characteristics, sexual, reproductive habits (such as smoking, alcohol consumption and drug use) were obtained from all study patients. The presence of HPV DNA and CT were both diagnosed by polymerase chain reaction (PCR) and cytological examination was performed to detect other infections. To evaluate the relationship of genital infections with the presence of cervical intraepithelial changes, Fisher's exact test was used. The results showed that 11.05% of patients were under 25yrs, 30.86% were single, 6.86% had more than five sexual partners, 44% did not use contraception, 38.85% were users of alcohol, 24.38% smokers and 3.24% had used drugs before. Moreover, gynecological complaints were 42.01%; and 12.19% history of STD. When comparing the efficiency of two techniques used in diagóstico of cervical abnormalities in the view of LACEN-PE, it was observed that the two methodologies evaluated showed poor agreement between the methods (k = 0.19; 95% CI (0,11- 0.26), p << 0.001). TP method reduced the rate of unsatisfactory 4.38% to 1.71% (5.28 = 2 × p = 0.02) and the number of cytopathological changes diagnosed increased 2.47% to 3 04%. But in the assessment of FOSP-SP, the two methodologies showed reasonable agreement (k = 0.39; 95% CI (0.29 to 0.50); p << 0.001) .The TP methodology showed unsatisfactory results virtually rates similar 3.20% to 3.60% (× 2 = 5.00; p = 0.17), and cytological changes from 5.60% to 4.20%. In 87 cases, cervical abnormalities were observed by any of the methods used, and of these, 83.91% were detected CT, and 82.76% were positive for HPV, occurring co-infection in 65 cases (74.7%). In 93.1% of cases there were colposcopic changes, observing a statistically significant association between co-infection HPV-CT and presence of lesions (p = 0.037). Other microflora were found Gardnerella vaginalis (35.6%), coconut (18.4%), Candida sp (9.2%), Trichomonas vaginalis (6.9%), Lactobacillus sp (4.6%) and herpesviruses (1.15%). Mixed flora (co-infection with various microflora - CT exception with both) occurred in 41.38% of cases. However, no association between the presence of non-viral organisms and herpesviruses with the severity of intraepithelial lesions were found. The most common HPV subtypes there were 16 and 31 (34.3% and 17.15%, respectively). But in more severe injuries, the most prevalent were 16 and 18. Thus, we conclude that this study demonstrates the superiority of TP methodology in the cytological diagnosis of cervical samples which could contribute to decrease possible losses by repetition and cytologic follow-up of patients . It is important to draw attention to the genital infections, especially CT, which are not investigated and dealt with appropriately, given that co-infections with HPV are associated with the favoring of cervical lesions, and can progress to more advanced degrees.

Made available in DSpace on 2016-08-18T17:27:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao LUIS FERNANDO BOGEA PEREIRA.pdf: 908998 bytes, checksum: a39235dcff5d0b2b802f9a1440dd8254 (MD5) Previous issue date: 2014-04-28 / In 2007 were estimated 9.27 million TB cases, 1.4 million of these were also seropositive for HIV. That same year were 456 000 registered cases of deaths from TB who were also infected with HIV. The association between tuberculosis (TB) and HIV infection affects mortality in two ways: TB presents significant lethality for people infected with HIV, and HIV acts as an indirect cause of the increased incidence of TB. Has to analyze the prevalence and factors associated with TB / HIV in patients with tuberculosis in the state of Maranhão. We conducted a cross-sectional analytical study of time series of TB cases notified in the period 2001 to 2011 in the state of Maranhão, totaling 4,553 cases of tuberculosis. Information was collected from the database of State Department of State Health Information Disease Surveillance System (SINAN). To identify associations between outcome (TB / HIV) and the independent variables (age, sex, race / color, education, middle region, place of residence, clinical type, input type, foreclosure situation), we used regression Poisson with robust adjustment of variance. Prevalence ratios (PR) and the ranges of 95 % confidence intervals (95 % CI) were estimated. We found a prevalence of TB / HIV coinfection of 15,1 % in the state. The highest prevalence ranged from 52.9 % in 2001, 11.8% in 2011, and the minimum prevalence ranged of1, 8 % in 2001, 5.9% in 2011. The prevalence of anti - HIV tests ranged from 4.3 % in 2001, 65.9% in 2011. According to the crude analysis, the most significant associations for TB / HIV were males (p ≤ 0.001), age group 20-39 years (p = 0.003) and 40-59 years (p = 0.036) have ≤ 8anos study (p = 0.001), be transferred (p = 0.053), living on the west mesoregion state (p = 0.009) and have closure for oncompliance (p = 0.016) or death (p ≤ 0.001). In the adjusted analysis, both males, age 29-30 years ≤ 8 years, living in the middle region west of the state, like having closure due to death, proved significant for TB / HIV coinfection. On the other hand, the non-white category and Pulmonary TB is presented both as a protective factor in the crude analysis as adjusted, and age ≥ 60 years in only adjusted. High rate of TB / HIV in the state (15,1%), being clear that young males with low education may be contributing to this increase was observed. There needs to adopt specific strategies to monitor this clientele, seeking to reduce the rate of coinfection. / Em 2007 foram estimados 9,27 milhões de casos de TB no mundo, destes 1,4 milhão também eram soropositivos para o Vírus da Imunodeficiência Humana (HIV). Nesse mesmo ano foram registrados 456 mil casos de mortes por TB que também estavam infectados pelo HIV. A interação entre o Mycobacterium tuberculosis e o Vírus da Imunodeficiência Humana (HIV) afeta a mortalidade de duas formas: a TB traz uma importante letalidade para as pessoas infectadas pelo HIV, e o HIV atua como causa indireta do aumento da incidência da TB. Tem-se como objetivo analisar a prevalência e os fatores associados à coinfecção TB/HIV em portadores de tuberculose no estado do Maranhão. Realizou-se um estudo transversal analítico com os casos de TB notificados no período de 2001 a 2011 no estado do Maranhão, totalizando 4.553 casos . As informações foram coletadas a partir do banco de dados do Sistema de Informação de Agravos de Notificação (SINAN) da Secretaria de Estado de Saúde do Estado. Para identificar as associações entre desfecho (coinfecção TB/HIV) e as variáveis independentes (idade, sexo, raça/cor, escolaridade, mesorregião, zona de residência, forma clínica, tipo de entrada, situação de encerramento), utilizou-se a regressão de Poisson, com ajuste robusto da variância. Foram estimadas as razões de prevalência (RP) e os intervalos de 95% de confiança (IC 95%). Encontrou-se uma prevalência geral da coinfecção TB/HIV de 15,1% no Estado. A prevalência máxima variou de 52,9 % em 2001 a 11,8% em 2011, e a prevalência mínima variou de1,8 % em 2001 a 5,9% em 2011. A prevalência de testes anti-HIV realizados variou de 4,3% em 2001 a 65,9 % em 2011. De acordo com a análise bruta, as associações mais significativas para coinfecção TB/HIV foram o sexo masculino (p≤0,001), as faixas etárias de 20 a 39 anos (p=0,003) e 40 a 59 anos (p=0,036), ter ≤ 8anos de estudo (p=0,001), ser transferido (p=0,053), residir na mesorregião oeste do Estado (p=0,009) e ter encerramento por abandono (p=0,016) ou óbito (p≤0,001). Na análise ajustada, o sexo masculino, idade de 29 a 30 anos, ≤8 anos de estudo, residir na mesorregião Oeste do Estado, encerramento por óbito, permaneceram associados à coinfecção TB/HIV. Por outro lado, a categoria não branca e a forma clínica pulmonar apresentaram-se como fator protetor tanto na análise bruta como na ajustada, e a idade≥60 anos somente na ajustada. Foi observada alta taxa de coinfecção TB/HIV no Estado (15,1%), sendo nítido que jovens do sexo masculino com baixa escolaridade e o desfecho do tratamento por abandono ou óbito podem estar contribuindo para este aumento. Há necessidades de se adotar estratégias específicas de acompanhamento dessa clientela, buscando reduzir essa taxa de coinfecção.

Utilizando modelo de coinflamação tuberculose e alergia (TB/OVA), nosso grupo mostrou que camundongos BALB/c coinflamados apresentaram diminuição significativa no número de bacilos, associada com diminuição no infiltrado granulomatoso no pulmão, aumento na produção de leucotrieno B4 e no número de células CD8+, quando comparados ao grupo infectado com Mycobacterium tuberculosis (TB). No presente estudo, nosso objetivo foi avaliar os mecanismos envolvidos na restrição ao crescimento dos bacilos nos animais do grupo TB/OVA. Quatro estratégias foram usadas: I) Para avaliar o papel dos linfócitos CD8+ no modelo TB/OVA, foram utilizados camundongos deficientes para a molécula CD8 (CD8KO). Foi observado que não houve diferenças significativas no crescimento do bacilo no pulmão dos animais CD8KO-TB/OVA e WT-TB/OVA. No entanto, nos pulmões dos animais WT-TB/OVA houve maior crescimento de bacilos em relação aos animais WT-TB, diferente do previamente observado com os animais TB/OVA da linhagem BALB/c. Para avaliar o papel dos leucotrienos foram usadas as seguintes estratégias: II). Camundongos da linhagem 129Sv tratados com MK886, inibidor da enzima 5-lipoxigenase (5LO), envolvida na síntese de mediadores lipídicos; III) animais 129Sv, deficientes para a expressão da 5LO (5LOKO). Foi observado que o tratamento com MK886 não afetou o número de bacilos no pulmão do grupo coinflamado TB/OVA quando comparado ao grupo TB/OVA. Além disso, diferente do que foi previamente observado em animais BALB/c, os animais 129Sv coinflamados foram mais susceptíveis que os animais 129Sv infectados. Do contrário, animais 5LOKO-TB/OVA foram mais resistentes que os camundongos WT-TB/OVA. Para avaliar se alterações no infiltrado granulomatoso estavam relacionadas com o infiltrado de macrófagos no pulmão, usamos a quarta estratégia: IV) quantificação das populações de macrófagos M1 e M2. Foi observado que os animais TB/OVA apresentaram aumento da população de macrófagos M2 no pulmão, enquanto a população de macrófagos M1 manteve-se inalterada comparado-se ao grupo apenas infectado. A diminuição no crescimento de bacilos nos animais TB/OVA foi dependente dos macrófagos M2, pois animais deficientes para a expressão do receptor de IL-33 submetidos ao protocolo de coinflamação tiveram diminuição da população de macrófagos M2, e foram susceptíveis à infecção. Esses resultados mostram que a diminuição no crescimento de bacilos nos animais coinflamados TB/OVA é dependente do aumento da população de macrófagos M2. / Using model of coinfection allergy and tuberculosis (TB / OVA), our group showed that coinfected BALB/c showed a significant decrease in the number of bacilli, associated with a decrease in granulomatous infiltrate the lung, increased production of leukotriene B4 and the number of cells CD8+, compared to the group infected with Mycobacterium tuberculosis (TB). To evaluate the mechanisms involved in reducing the growth of bacilli in group TB/OVA, were used four strategies: I) To assess the role of CD8+ lymphocytes in model TB/OVA, we used mice deficient for the molecule CD8 (CD8KO).We was observed that the number of bacilli in the lungs of animals in the group CD8KO-TB/OVA and WT-TB/OVA was similar. However, the lungs of animals WT-TB/OVA growth of bacillus was higher compared to WT animals, TB, unlike what was previously observed with background genetic BALB/c. To evaluate the role of leukotrienes, we use the following strategies: II) strain 129Sv mice treated with MK886, an inhibitor of the enzyme 5-lipoxygenase (5LO), involved in the synthesis of lipid mediators, III) 129Sv animals deficient for the expression of 5LO (5LOKO). We observed that treatment with MK886 did not affect the number of bacilli in the lung of the coinfected group TB/OVA. Moreover, unlike what was previously observed in animals BALB/c mice, coinfected 129Sv were more susceptible than the animals infected 129Sv. On the contrary, 5LOKO-TB/OVA animals were more resistant than mice WT-TB/OVA. To assess whether changes in granulomatous infiltrates were related to macrophages, we use the fourth strategy: IV) quantification of macrophage populations M1 and M2. We observed that M2 population in animals TB/OVA showed increased lung. The decrease in bacilli growth of animals TB/OVA was dependent on macrophage M2, since animals deficient for the expression of IL-33 protocol submitted to coinfected protocol had decreased macrophage population M2, and were susceptible to infection. These results show that the reduction in growth of bacilli in coinfected animals TB/OVA is dependent increase in macrophage population M2.