Anthracnose of tomato was first described by Chester in 1891. It has been of economic importance to the growers of canning tomatoes nearly ever since. Anthracnose is cause by Colletptrochum phomoides (sacc.) Chester which appears to have different physiologic and morphologic forms. There is evidence that it is a soil organism but this remains to be definitively proved. The organism has a broad pH range and different isolates show different temperatures opimums but about the same temperature range for growth. The organism does not show the “dual phenomenon” but does sector frequently. Sectors are morphologically different from the parent mycelium and offers an explanation as to the origin of different strains of the organism. / Master of Science

A viabilidade econômica da produção de etanol de segunda geração (2G) depende do desenvolvimento de tecnologias eficientes e baratas para a hidrólise da biomassa lignocelulósica. Em particular, o grande consumo de água nas plantas de processamento de biomassa pode inviabilizar o processo. As xilanases são enzimas chave na hidrólise enzimática da xilana para a produção de etanol 2G e atualmente é grande o interesse na identificação de xilanases tolerantes a altas concentrações salinas, bem como aos subprodutos de etapas de pré-tratamento da biomassa, o que permitiria reduzir o volume de água empregado em etapas de lavagem e/ou a substituição da água doce pela água do mar. Neste contexto, os objetivos deste trabalho foram a purificação e caracterização bioquímica e cinética de uma endo-xilanase halotolerante e termoestável produzida por uma linhagem de C. graminicola isolada da floresta Amazônica (Brasil). A enzima pura (Excg1) apresentou massa molecular aparente de 20,0 ± 2,4 kDa em SDS-PAGE e 17,3 ± 1,9 kDa por filtração em gel, sugerindo que a enzima nativa é monomérica. O teor de carboidratos totais de Excg1 foi de 97,0 ± 3,7 % (m/m) e o seu ponto isoelétrico correspondeu a 9,200 ± 0,018. A enzima manteve cerca de 85% da atividade controle na presença de NaCl 0,5 mol/L. Em ausência e presença de NaCl em concentração 0,5 mol/L a temperatura e o pH ótimos de atividade de Excg1 foram 65 ºC e 5,5, respectivamente, enquanto na presença de NaCl 2,5 mol/L o pH ótimo foi alterado para 6,0. Excg1 mostrou-se bastante termoestável a 50ºC, com tempo de meia-vida de 48 h na ausência do substrato. Já na presença de NaCl 2,5 mol/L a termoestabilidade foi substancialmente maior, com atividade residual de 75% após o mesmo intervalo de tempo. Excg1 apresentou excelente estabilidade na faixa de pH de 3,0-10,0 na ausência de sal, mantendo-se também completamente estável entre pH 4,0 e 10,0 na presença de NaCl em concentração 0,5 e 2,5 mol/L. Os parâmetros cinéticos determinados para a hidrólise de xilana Beechwood por Excg1 na ausência de NaCl foram Vmax= 481,3 ± 34,0 U/mg e KM= 3,7 ± 0,3 mg/mL, resultando em eficiência catalítica (kcat/KM) de 36,9 mL/s.mg. Parâmetros muito similares foram determinados na presença de NaCl 0,5 mol/L, porém em presença do sal em concentração 2,5 mol/L ocorreu diminuição da afinidade aparente pelo substrato e redução da velocidade máxima, resultando em eficiência catalítica 2,3 vezes menor. Já a hidrólise de xilana Birchwood em ausência de sal ocorreu com constante de afinidade aparente similar e eficiência catalítica cerca de 18% maior, se comparada à hidrolise de xilana Beechwood na mesma condição. Excg1 foi tolerante a K+, Na+, Pb2+, Ni2+, Zn2+, Mn2+, Mg2+, Co2+, Ca2+ e Sr2+ em concentração 10 mmol/L, além de Cu2+, Al3+, Cr3+ e Fe3+ em concentração 1 mmol/L. Além disso, Excg1 foi tolerante a diferentes solventes orgânicos e a acetato. A análise dos produtos de hidrólise de xilana Beechwood por Excg1 revelou que os produtos principais formados foram xilobiose e xilotriose com uma ramificação de ácido 4-O-metilglucurônico. A presença de NaCl 0,5 mol/L não afetou este padrão de hidrólise e a enzima mostrou também boa tolerância aos produtos de hidrólise. Em conjunto, as propriedades de Excg1 sugeriram bom potencial de aplicação na sacarificação da biomassa lignocelulósica, particularmente em condições de salinidade elevada e/ou em presença de resíduos de etapas de pré-tratamento, o que é potencialmente interessante para viabilizar economicamente processos de produção de etanol 2G. / The economic viability of the production of second-generation (2G) ethanol depends on the development of efficient and inexpensive technologies for the hydrolysis of lignocellulosic biomass. In particular, the large consumption of water in the biomass processing plants can make the process unfeasible. The xylanases are key enzymes in the enzymatic hydrolysis of xylan aiming the production of 2G ethanol and there is currently great interest in identifying xylanases tolerant to high salt concentrations and to the byproducts from biomass pretreatment steps, allowing the reduction of the volume of water used in washing steps and/or the replacement of fresh water by sea water. In this context, the objectives of this work were the purification and the biochemical and kinetic characterization of a salt-tolerant and thermostable endoxylanase produced by a strain of C. graminicola isolated from the Amazon forest (Brazil). The pure enzyme (Excg1) showed apparent molecular mass of 20.0 ± 2.4 kDa by SDS-PAGE and 17.3 ± 1.9 kDa by gel filtration, suggesting that the native enzyme is monomeric. The total carbohydrate content of Excg1 was 97.0 ± 3.7% (m/m) and its isoelectric point corresponded to 9.200 ± 0.018. The enzyme retained approximately 85% of control activity in the presence of 0.5 mol.L-1 NaCl. In the absence and presence of NaCl at 0.5 mol.L-1 concentration, the optimum reaction temperature and pH of Excg1 were 65 ° C and 5.5, respectively, while in the presence of 2.5 mol.L-1 NaCl the optimum pH was altered to 6.0. Excg1 was highly thermostable at 50 °C, with a half-life of 48 h in the absence of substrate. In the presence of 2.5 mol.L-1 NaCl the thermal stability was greatly increased, and a residual activity of 75% was determined after 48 h at 50 ºC. Excg1 showed excellent stability in the pH range from 3.0 to 10.0 in the absence of salt, and was likewise completely stable at pH 4.0-10.0 in the presence of NaCl at the concentrations 0.5 mol.L-1 and 2.5 mol.L-1. The kinetic parameters for the hydrolysis of Beechwood xylan by Excg1 in the absence of salt were Vmax = 481.3 ± 34.0 U.mg-1 and KM = 3.7 ± 0.3 mg.mL-1, with a catalytic efficiency (kcat/KM) of 36.9 mL.s-1.mg-1. Similar parameters were determined in the presence of 0.5 mol.L-1 NaCl, while in the presence of a higher salt concentration (2.5 mol.L-1) decreases in the apparent affinity for the substrate and in the maximum velocity were observed, resulting in a catalytic efficiency 2.3 fold lower. In comparison with Beechwood xylan, the hydrolysis of Birchwood xylan in the absence of salt occurred with similar apparent affinity and catalytic efficiency about 18% greater. Excg1 was tolerant to 10 mmol.L-1 K+, Na+, Pb2+, Ni2+, Zn2+, Mn2+, Mg2+, Co2+, Ca2+ or Sr2+, and also to Cu2+, Al3+, Cr3+ e Fe3+ at 1 mmol.L-1 concentration. Furthermore, the enzyme was tolerant to various organic solvents and acetate. The analysis of Beechwood xylan hydrolysis products by Excg1 revealed that the main products were xylobiose and xylotriose with a 4-O-methylglucuronic acid branch. The presence of 0.5 mol.L-1 NaCl has not affected the hydrolysis pattern and the enzyme showed good tolerance to the hydrolysis products. Altogether, the properties of Excg1 suggested good potential for the saccharification of lignocellulosic biomass, particularly under high salinity conditions and/or in the presence of residues of pre-treatment steps, which is potentially interesting for the economically viable production of 2G ethanol.

Made available in DSpace on 2017-07-25T19:30:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Hellen Christine Prochno.pdf: 2394554 bytes, checksum: 2bef91782af17469f52e15e3757a8eec (MD5) Previous issue date: 2013-11-18 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The objectives of this study were to measure the resistance/susceptibility of the sixteen maize inbred lines to anthracnose leaf blight (Colletotrichum graminicola (Ces.) G. W. Wils.) and estimate the genetic parameters associated with resistance, as well as study the inheritance of resistance and the genic action involved in the generations descended from crosses between maize inbred lines (Zea mays L.). Firstly, sixteen maize lines were screened for resistance/susceptibility to anthracnose leaf blight in three trials conducted in a randomized block design, with four replications. The plants inoculations were performed when the plants were six to seven completely expanded leaves in two times, the second made seven days after the first inoculation. To quantify the disease severity, six evaluations were performed at weekly intervals, initiated after the first symptoms appear, by use a note scale with amplitude from 1 to 6. Were used the data obtained in the second, fourth and sixth evaluation and data of the area under the disease progress curve (AUDPC) to perform analyzes and estimates of genetic parameters. To study the inheritance of resistance in maize to anthracnose leaf blight, were estimated the genetic parameters of six families derived from crosses between resistant and susceptible lines to C. graminicola. Each family consisted of six generations (P1, P2, F1, F2, RC1 e RC2), which were evaluated for resistance in two trials implanted in a randomized block design in a split-plot, where in the plots were studied the families effects and in splits the generations effects, with three replications. Were used the data estimated in second, fourth and sixth evaluation for the performed the statistical and genetic analysis. The results showed the existence of genetic variability for resistance/susceptibility to anthracnose leaf blight in all inbred lines studied. The inbred lines L 04-2, L 23-1, L 87-3, L 99-4 e L 118-4 stood out for keep the resistance pattern, showing the lowest values of AUDPC in the three trials, were considered important source of resistance to C. graminicola. The estimates genetic parameters indicated low participation of environmental effects on the resistance/susceptibility expression to anthracnose leaf blight and showed the possibility of genetic gains with the artificial selection. The results indicated predominance of additive effects in the inheritance of maize resistance to anthracnose leaf blight in the six families analyzed, explaining up to 99,39% of the phenotypic variation. The high heritability coefficients (broad and narrow sense) observed indicated ease in the artificial selection process by breeding programs. The heterosis estimates were high and negatives in all families studied, revealing the ability of resistant inbred lines (LR 04-2 e LR 23-1) in transmitting the resistance genes for generations affiliated, resulting in lower disease severity. The results showed that the inheritance of maize resistance to anthracnose leaf blight is oligogenic. Predominance of additive genic action, associated with high heritability estimates and oligogenic genetic control, assuming that genetic gains with artificial selection will reach success in the breeding programs that search develop resistant maize populations to anthracnose leaf blight. / Os objetivos do presente trabalho foram avaliar a resistência/suscetibilidade de dezesseis linhagens endogâmicas de milho à antracnose foliar (Colletotrichum graminicola (Ces.) G. W. Wils.) e estimar os parâmetros genéticos associados à resistência, bem como estudar o modo de herança da resistência e a ação gênica envolvida nas gerações descendentes de cruzamentos entre linhagens endogâmicas de milho (Zea mays L.). Primeiramente, dezesseis linhagens de milho foram avaliadas quanto a resistência/suscetibilidade à antracnose foliar em três experimentos instalados no delineamento de blocos casualizados, com quatro repetições. As inoculações das plantas foram realizadas quando as plantas estavam com seis à sete folhas completamente expandidas, em dois momentos, sendo a segunda realizada sete dias após a primeira inoculação. Para a quantificação da severidade da doença, foram realizadas seis avaliações com intervalo semanal, iniciadas após o aparecimento dos primeiros sintomas, pela utilização de uma escala de notas com amplitude de 1 a 6. Foram utilizados os dados obtidos na segunda, quarta e sexta avaliação e os dados da área abaixo da curva de progresso da doença (AACPD) para a realização das análises estatísticas e estimativas dos parâmetros genéticos. Para o estudo da herança envolvida na resistência de milho à antracnose foliar, estimou-se os parâmetros genéticos de seis famílias derivadas dos cruzamentos entre linhagens resistentes e suscetíveis à C. graminicola. Cada família foi constituída de seis gerações (P1, P2, F1, F2, RC1 e RC2), as quais foram avaliadas para resistência em dois experimentos implantados no delineamento de blocos casualizados, em esquema de parcelas subdivididas, onde nas parcelas foi estudado o efeito de famílias e nas subparcelas o efeito das gerações, com três repetições. Foram utilizados os dados estimados na segunda, quarta e sexta avaliação para a realização das análises estatísticas e genéticas. Os resultados evidenciaram a existência de variabilidade genética para a resistência/suscetibilidade à antracnose foliar no conjunto de linhagens estudadas. As linhagens L 04-2, L 23-1, L 87-3, L 99-4 e L 118-4 destacaram-se pela manutenção do padrão de resistência, apresentando os menores valores de AACPD nos três experimentos, sendo consideradas importantes fontes de resistência a C. graminicola. As estimativas dos parâmetros genéticos indicaram baixa participação dos efeitos ambientais na expressão da resistência/suscetibilidade à antracnose foliar e evidenciaram a possibilidade de ganhos genéticos com a seleção artificial. Os resultados indicaram predomínio dos efeitos genéticos aditivos na herança da resistência de milho à antracnose foliar nas seis famílias analisadas, explicando até 99,39% da variação fenotípica. Os elevados coeficientes de herdabilidade (sentido amplo e restrito) observados indicam facilidade no processo de seleção artificial pelos programas de melhoramento. As estimativas de heterose foram altas e negativas em todas as famílias estudadas, revelando a capacidade das linhagens resistentes (LR 04-2 e LR 23-1) em transmitir os genes de resistência para as gerações filiais, resultando na menor severidade da doença. Os resultados demonstraram que a herança da resistência do milho à antracnose foliar é oligogênica. Predomínio de ação gênica aditiva, associada às altas estimativas de herdabilidade e controle genético oligogênico, permitem inferir que os ganhos genéticos com a seleção artificial lograrão êxito nos programas de melhoramento que buscam desenvolver populações de milho resistentes à antracnose foliar.

Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2017-03-20T14:31:46Z No. of bitstreams: 1 Luis Gustavo Chaves da Silva.pdf: 1253285 bytes, checksum: 0a1b6f21c6f4abf5783394812a777ab7 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-20T14:31:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Luis Gustavo Chaves da Silva.pdf: 1253285 bytes, checksum: 0a1b6f21c6f4abf5783394812a777ab7 (MD5) Previous issue date: 2011-02-28 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / The anthracnose, fungal disease caused by Colletotrichum gloeosporioides, stands out as an important disease of cashew (Anacardium occidentale), which may lead to losses of over 40% in production. The cashew nut is the most important agricultural product of the state of Ceará, about 350 thousand hectares, generating more than 100 thousand direct/indirect jobs and exports over 150 million dollars in almonds. It is also important for the states of Piauí and Rio Grande do Norte. There are few and outdated research about disease and the needs basic information for programs improvement and integrated management of diseases. By presenting large morphological and genetic variability, it is difficult to generalize basic aspects of the species. The aim of this study was to characterize populations of C. gloeosporioides occurring on cashew trees in various regions of Brazil. Used 220 isolates obtained from cashew leaves, from 22 different areas of the states: Amazonas, Ceará, Maranhão, Paraíba, Pernambuco, Piauí, Rio Grande do North and São Paulo. Proceeded with pathogenic tests and molecular markers species-specific to all isolates. Then a representative from each collection area was selected to perform the other ratings, which are: morphological, molecular, epidemiological and physiological. The species-specific markers β-tubulin and ITS, noted the existence of only one group of 10 isolates of the same area, not being confirmed for C. gloeosporioides or C. acutatum, but morphological characteristics of C. gloeosporioides. Using seven primers ISSR markers and 100 representatives in 22 areas, it was possible identify the formation of four distinct genetic groups of C. gloeosporioides, where the unmarked isolated by ITS or β-Tubulin, not was contained in one or in groups. With the pathogenic test using 5 clones, it was possible to distinguish three groups and another 3 isolates distinct from other. Conclude that the species C. gloeosporioides is prevalent in cashew plantations in the areas studied. / A Antracnose, doença fúngica ocasionada por Colletotrichum gloeosporioides, destaca-se como doença importante do cajueiro (Anacardium occidentale), podendo levar a perdas de mais 40% na produção. A castanha de caju é o produto agrícola mais importante do estado do Ceará, com cerca de 350 mil hectares plantados, geração de mais de 100 mil empregos diretos e indiretos e exportações acima de 150 milhões de dólares em amêndoas. Também é importante para os estados do Piauí e Rio Grande do Norte. Há poucas e desatualizadas pesquisas sobre a doença, havendo a necessidade de informações básicas para os programas de melhoramento e manejo integrado da fitomoléstia. Por apresentar grande variabilidade morfológica e genética, torna-se difícil a generalização de aspectos básicos da espécie. O objetivo deste trabalho foi caracterizar populações de C. gloeosporioides que ocorrem em cajueiros de diversas regiões do Brasil. Foram usados 220 isolados, obtidos de lesões de folhas de cajueiro, provenientes de plantios de 22 áreas distintas dos estados do Amazonas, Ceará, Maranhão, Paraíba, Pernambuco, Piauí, Rio Grande do Norte e São Paulo. Procedeu-se com testes de patogenicidade e marcadores moleculares espécie específicos para todos isolados. Em seguida, um representante de cada área de coleta foi selecionado para realização das demais avaliações, sendo elas: morfológicas, moleculares, epidemiológicas e fisiológicas. Os marcadores espécie específicos ITS e β-Tubulina, constataram a existência de apenas um grupo de 10 isolados de uma mesma área, não sendo confirmados para C. gloeosporioides ou C. acutatum, porém com características morfológicas de C. gloeosporioides. Usando 7 primers ISSR e 100 marcadores nos representantes das 22 áreas, foi possível identificar a formação de 4 grupos genéticos distintos de C. gloeosporioides, onde o isolado não marcado por ITS ou β-Tubulina, não ficou contido em nem um dos grupos. Com o teste de patogenicidade utilizando 5 clones, foi possível diferenciar 3 grupos e mais outros 3 isolados distintos dos demais. Conclui-se que a espécie C. gloeosporioides é prevalente em plantios de cajueiro nas áreas estudas.

Made available in DSpace on 2017-07-10T17:37:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Meirieli_Nunes.pdf: 901193 bytes, checksum: d63c3c2da32297b8ebfb98726e565477 (MD5) Previous issue date: 2016-02-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The aim of this study was to evaluate the effects of the application of chemical and alternative products in the control of anthracnose and bacterial blight common and the agronomic characteristics of the bean. The experimental design was a randomized block design with eight treatments and four replications. The treatments were: control; Trichoderma asperellum; Copper hydroxide; Trifloxystrobin + Prothioconazole; Trifloxystrobin + tebuconazole; + Thiophanate methyl ester; Pyraclostrobin and Fentin Hydroxide, for both experiments (crop harvest of the waters and dry), all applied in V4 and R6 stage. The cultivar used was the IPR Tangara. Compared to control plants treated with copper hydroxide, the two growing seasons, in general, they had less severe in the pods, both anthracnose and for the common bacterial blight. Plants treated with T. asperellum, the two growing seasons, in general, showed the severity pods for both anthracnose and for the common bacterial blight similar plants that have been treated with Trifloxystrobin + Prothioconazole fungicides, Trifloxystrobin + Tebuconazole, thiophanate + Methyl, Fentin hydroxide and Pyraclostrobin. During the spring, plants treated with Trifloxystrobin + Prothioconazole showed higher grain yield, although not differ from other fungicides. During the spring, plants were treated with T. asperellum and plants that have been treated with fungicides, were statistically similar productivity except the plants treated with Trifloxystrobin + Prothioconazole. In the season of drought, plants treated with Trifloxystrobin + Tebuconazole, Thiophanate Methyl +, Pyraclostrobin Hydroxide and Fentin had higher grain yield, but did not differ from other chemical treatments and plants that have been treated with T. asperellum / O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos da aplicação de produtos químicos e alternativo no controle da antracnose e crestamento bacteriano comum e nas características agronômicas do feijoeiro. O delineamento experimental utilizado foi o de blocos casualizados, com oito tratamentos e quatro repetições. Os tratamentos utilizados foram: Testemunha; Trichoderma asperellum; Hidróxido de cobre; Trifloxistrobina + Protioconazol; Trifloxistrobina + tebuconazol; Tiofanato + Metílico; Piraclostrobina e Hidróxido de Fentina, para ambos os experimentos (safra das aguas e safra da seca), todos aplicados no estádio V4 e R6. A cultivar utilizada foi a IPR Tangara. Em relação a testemunha, plantas tratadas com Hidróxido de Cobre, nas duas épocas de cultivo, de maneira geral, apresentaram menor severidade nas vagens, tanto para a antracnose, como para o crestamento bacteriano comum. Plantas tratadas com T. asperellum, nas duas épocas de cultivo, de maneira geral, apresentaram severidade nas vagens, tanto para a antracnose, como para o crestamento bacteriano comum semelhante as plantas que foram tratadas com os fungicidas Trifloxistrobina + Protioconazol, Trifloxistrobina + Tebuconazol, Tiofanato + Metílico, Hidróxido de Fentina e Piraclostrobina. Na safra das águas, plantas tratadas com Trifloxistrobina + Protioconazol, apresentaram maior produtividade de grãos, apesar de não diferir dos demais fungicidas. Na safra das águas, plantas que foram tratadas com T. asperellum e plantas que foram tratadas com fungicidas, tiveram produtividade estatisticamente semelhante, exceto as plantas tratadas com Trifloxistrobina + Protioconazol. Na safra da seca, plantas tratadas com Trifloxistrobina + Tebuconazol, Tiofanato + Metílico, Piraclostrobina e Hidróxido de Fentina apresentaram maior produtividade de grãos, porém não diferiu dos demais tratamentos químicos e das plantas que foram tratadas com T. asperellum

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:28Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-02-27Bitstream added on 2014-06-13T19:16:23Z : No. of bitstreams: 1 frigeri_t_me_jabo.pdf: 214550 bytes, checksum: a1c65c9e88fd5fc622a8f30d3f3a9e22 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / O objetivo dessa pesquisa foi verificar a influência de Macrophomina phaseolina, Colletotrichum dematium f. truncata e Colletotrichum lindemuthianum na qualidade fisiológica de sementes de feijoeiro, em especial nos resultados do teste de condutividade elétrica. Foram utilizadas sementes das cultivares Carioca e FT Nobre. As sementes foram infectadas com os fungos em meio de cultura BDA sem e com restrição hídrica (acrescido de manitol a -1,0 MPa). Nos tratamentos testemunhas foram utilizados os mesmos meio de cultura, porém, sem a presença dos fungos. Para cada tratamento as sementes foram sobrepostas nos meios de cultura por 16 horas para M. phaseolina e por 48 horas para o caso de C. dematium f. truncata e C. lindemuthianum. Após secagem natural foram realizados testes de sanidade, germinação em areia e de vigor, como, índice de velocidade de emergência, peso da matéria seca da plântula, teste de frio, teste de envelhecimento acelerado e condutividade elétrica. Também foram realizadas análises na água de embebição das sementes no teste de condutividade elétrica, determinando-se as concentrações de potássio, cálcio e magnésio, assim como nos meios de cultura utilizados com e sem a sobreposição de sementes, para verificação da hipótese de consumo de nutrientes das sementes pelos fungos... / The aim of this research was to verify the influence of Macrophomina phaseolina, Colletotrichum dematium f. truncata and Colletotrichum lindemuthianum in the physiological quality of bean seeds, special in the results of electrical conductivity test. There were used seeds from Carioca and FT Nobre cultivars. The seeds were artificially inoculated with fungi M. phaseolina, C. dematium f. truncata and C. lindemuthianum in BDA medium culture with and without hydric restriction (it was added -1,0 MPa manitol). In the control treatment there was used the same medium culture without the presence of the fungi. For each treatment the seeds were placed on the medium culture for 16 hours for M. phaseolina and 48 hours for C. dematium f. truncata and C. lindemuthianum. After a nature dry, seeds were evaluated, by the blotter test, sand germination and vigor tests: speed of emergence index, seedlings dry weigh, cold, accelerated aging and electrical conductivity tests. Analyses from the imbibition water of the seeds in the electrical conductivity test, were also done a measuring of concentrations of potassium, calcium and magnesium, as well as in the medium culture used with and without the seeds, to verify the hypothesis of seeds nutrients consumption by the fungi...(Complete abstract, click electronic address below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:31Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-10-01Bitstream added on 2014-06-13T20:37:30Z : No. of bitstreams: 1 rinaldo_d_me_jabo.pdf: 315574 bytes, checksum: 39e42659f57f8c9f9b87dc45b848c015 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A “queda prematura dos frutos cítricos” é causada pelo fungo Colletotrichum acutatum. O controle eficiente da doença baseia-se na pulverização com fungicidas na época da florada. Esta é considerada a principal doença fúngica do sudoeste paulista, para tanto o trabalho foi instalado em pomar comercial na cidade de Santa Cruz do Rio Pardo / SP, e teve por finalidade avaliar a eficiência de algumas misturas formuladas de fungicidas, adicionados ou não com Cloreto de Benzalcônio (CB). Utilizou-se os seguintes tratamentos: T1) tratamento testemunha; T2) CB 10g ia/100L; T3) CB 5g ia/100L; T4) Famoxadona+Mancozebe (FA + MA) 6,25+625 g ia/100L; T5) FA + MA + CB 6,25+62,5+10 g ia/100L; T6) Carbendazim (CA) 50 g ia/100L; T7) CA + CB 50+5 g ia/100L; T8) CA + CB 50+10 g ia/100L; T9) Fenilpiridinilamina (FE) 25 g ia/100L; T10) FE + CB 25+10 g ia/100L; T11) Trifloxistrobina+Tebuconazol (TR + TE) 4+8 g ia/100L; T12) TR + TE + CB 4+8+10 g ia/100L; T13) 1ª aplicação foi usado Difenoconazol 6,25 g ia/100L e nas três subseqüentes foi utilizado Carbendazim 50 g ia/100L, Convencional da fazenda (CF) + CB 10g ia/100L em todas aplicações; T14) CF. Os tratamentos foram compostos de 4 aplicações, nos estádios de “cabeça de alfinete”, “cotonete”, flor aberta e ¾ de queda de pétalas, as avaliações foram feitas medindo a quantidade de flores com sintomas, numero médio efetivo de frutos e produtividade mediante a contagem dos frutos na colheita. Os tratamentos T11 e T12 mostraram-se os mais eficientes no controle da doença, já os tratamentos compostos por Cloreto de Benzalcônio não foram eficiente quando aplicados isoladamente e quando misturados para os tratamentos (T5; T12; T13;) embora não haja diferença estatística significativa proporcionou um acréscimo em produtividade fazendo-se necessário a realização de estudos complementares / The postbloom fruit drop (PFC) is caused by Colletotrichum acutatum. Fungicide application during bloom is the main measure of control. PFC is considered the main fungal disease of the southwest of Sao Paulo State, for both the work was installed in a commercial orchard in Santa Cruz do Rio Pardo and aimed at evaluating the efficiency of fungicides formulated mixtures, added or not with benzalkonium chloride (BC). The treatment utilized were:T1) control; T2) - BC 10g ia/100L; T3) BC 5g ia/100L; T4) famaxodone + mancozeb (FA + MA) 6.25 + 625g ia/100L; T5) FA + MA + (BC) 62.5 + 6.25 + 10g ia/100L; T6) carbendazim (CA) 50g ia/100L; T7) CA + BC 50 + 5g ia/100L; T8) CA + BC 50 + 10g ia/100L; T9) phenylpyridinamine (PH) 25g ia/100L; T10) PH + BC 25 + 10g ia/100L, T-11 trifloxystrobin + tebuconazol (TR + TE) 4 + 8g ia/100L; T12) TR + TE + BC 4 + 8 + 10g ia/100L; T13) first application with difenoconazol 6.25g ia/100L, and three application subsequent carbendazim 50g ia/100L. Conventional farm application (CF) added with BC 10g ia/100L in all applications; T14) BC. The treatments consisted of 4 applications, in stages of pin head, ‘hollow ball’, and flowers open and ¾ of petal fall, the assessments were made by measuring the amount of flowers with symptoms, effectives average number of fruits and number of fruit at harvest. The treatments T11 and T12 were the most effective for disease control, the treatments with benzalkonium chloride not provided efficient when applied alone or in mixture in tank with the treatments (T5; T12; T13), although not observed difference significant, provided a increased productivity, necessity studies complements

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:42:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1757825 bytes, checksum: 4e0395e0f72e73520cb71461e4c59bbe (MD5) Previous issue date: 2012-07-24 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The common bean (Phaseolus vulgaris L.) is a major component of the diet in Brazil and an important primary source of protein and iron. Brazil is the largest common bean producer and the yield of this crop in the country could be higher if it were not, among other reasons, for the numerous diseases affecting this crop. Among the fungal diseases affecting the aerial portion of the plant are the angular leaf spot, caused by Pseudocercospora griseola, and anthracnose, caused by Colletotrichum lindemuthianum. These diseases can cause losses of more than 70% depending on weather conditions, degree of resistance of the cultivar and pathogenicity of the fungal isolates. Understanding how plants respond to pathogen attack is of fundamental importance for the development of resistant cultivars that can ensure the sustainability of agricultural production. This work aimed to identify proteins differentially expressed by the common bean genotype AND 277 in response to P. griseola and C. lindemuthianum. Two independent experiments were conducted. In the first one, leaf samples were collected and evaluated 12, 24 and 48 hours after inoculation (h.a.i.) with P. griseola race 31.31. In the second one, leaf samples were collected and evaluated 12 and 48 h.a.i. of C. lindemuthianum race 73 of. Protein samples were extracted by the phenol-SDS method and separated by two-dimensional electrophoresis. Proteins differentially expressed between inoculated and non-inoculated plants were excised from the gels, cleaved with trypsin and analyzed by mass spectrometry. In the first experiment, 13 differentially expressed proteins were identified, five were detected only in inoculated plants, three showed increased expression and five had reduced expression upon inoculation. These proteins are associated with the defense process, hormone synthesis, photosynthesis, metabolism of reactive oxygen species, cellular respiration and porphyrin synthesis. In the second experiment, 35 differentially expressed proteins were identified, 13 of which were present only in inoculated plants and six only in non- inoculated plants, 10 had increased expression and six were reduced upon inoculation. These proteins participate in cellular detoxification processes, defense against pathogens, metabolism of reactive oxygen species, photosynthesis, cellular respiration, protein biosynthesis and signaling. These results contribute for a better understanding of the defense response of common bean to these pathogens. The identified proteins and their corresponding genes (candidate genes) can be used as tools breeding programs to develop resistant plants. / O feijoeiro comum (Phaseolus vulgaris L.) é um dos principais componentes da dieta do brasileiro além de ser uma importante fonte primária de proteína e ferro. O Brasil é o maior produtor dessa leguminosa. Um dos fatores que limitam a produtividade brasileira é o grande número de doenças. Dentre as doenças fúngicas da parte aérea destacam-se a mancha angular causada por Pseudocercospora griseola e a antracnose, causada por Colletotrichum lindemuthianum. Essas doenças podem causar perdas superiores a 70% dependendo das condições climáticas, suscetibilidade da cultivar e patogenicidade dos isolados. A compreensão de como as plantas respondem ao ataque de patógenos é de fundamental importância para o desenvolvimento de cultivares resistentes que possam garantir a sustentabilidade da produção agrícola. Com este trabalho objetivou-se identificar proteínas diferencialmente expressas pelo genótipo de feijoeiro comum AND 277 em resposta a P. griseola e C. lindemuthianum. Foram realizados dois experimentos independentes. No primeiro, foram avaliadas amostras de folhas coletadas 12, 24 e 48 horas após a inoculação (h.a.i.) da raça 31.31 de P. griseola. No segundo, foram avaliadas amostras de folhas coletadas 12 e 48 h.a.i. da raça 73 de C. lindemuthianum. Amostras de proteínas foram extraídas pelo método fenol-SDS e separadas por eletroforese bidimensional. Proteínas diferencialmente expressas entre plantas inoculadas e não inoculadas com o patógeno foram excisadas dos géis, clivadas com tripsina e analisadas por espectrometria de massa. No primeiro experimento, foram identificadas 13 proteínas diferencialmente expressas, sendo que cinco foram detectadas somente nas plantas inoculadas, três apresentaram aumento de expressão e cinco tiveram redução da expressão após inoculação. Essas proteínas estão associadas a processos de defesa, síntese de hormônios, fotossíntese, metabolismo de espécies reativas de oxigênio, respiração celular e síntese de porfirinas. No segundo experimento, foram identificadas 35 proteínas diferencialmente expressas, sendo que 13 estavam presentes somente nas plantas inoculadas e seis somente nas plantas não inoculadas, 10 proteínas tiveram aumento de expressão e seis tiveram redução após a inoculação. Essas proteínas participam de processos de detoxificação celular, defesa contra patógenos, metabolismo de espécies reativas de oxigênio, fotossíntese, respiração celular, biossíntese de proteínas e sinalização. Esses resultados contribuem para um melhor entendimento do mecanismo de resposta de defesa do feijoeiro comum a esses patógenos. As proteínas identificadas e os genes que as codificam (genes candidatos) poderão auxiliar como ferramentas em programas de melhoramento genético no desenvolvimento de plantas resistentes.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:52:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 297814 bytes, checksum: 8b9399570272dbe1ec41db69f73626b6 (MD5) Previous issue date: 2006-08-28 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The gene encoding nitrate reductase in Colletotrichum lindemuthianum, nit1, was isolated and characterized. Its nucleotide sequence and regulation in response to different nitrogen sources were analyzed. The gene nit1 has 2,787 base pairs (bp) bearing a single 696 bp intron starting at nucleotide 1,808. This intron is localized in a conserved region when compared to introns present in nitrate reductase genes of other fungi. Hovever, its similarity with them is restricted to the consensus splicing regions. Four TATC sequences, possibly related to binding of the general positive regulatory protein NIT2, were found in the upstream regulatory region of nit1, as well as other consensus sequences such as TATA and GC boxes. A putative binding site for NIT4, a specific regulatory protein, was also found in the 340 position. There is a putative mRNA polyadenilation site at the downstream 2,826 position. The protein translated from nit1 comprises 905 amino acid residues with a molecular mass of 101,1 kDa and presents high degree of identity with the cognate proteins in Metarhizium anisopliae (62,43 %), Magnaporte grisea (62,27%), Verticillium fungicola (60,15%), Botryotinia fuckchiana (58,30%), and Aspergillus fumigatus (51,93%). In mycelia cultivated in the presence of nitrate, nit1 was expressed after 15 min. Transcription was repressed in mycelia grown in medium containing either ammonium, urea, or glutamine. On glutamine, the level of transcription was apparently basal. / O gene que codifica para a nitrato redutase de Colletotrichum lindemuthianum, nit1, foi isolado e caracterizado. Sua seqüência e regulação em resposta a diferentes fontes de nitrogênio foram analisadas. A análise da seqüência do gene nit1 indicou que ele possui 2.787 pb com um único íntron de 69 pb iniciando no nucleotídeo 1.808. Este íntron está localizado numa região conservada de íntrons presentes no gene da nitrato redutase em outros fungos. No entanto, a identidade entre eles se restringe às regiões consenso responsáveis pela excisão. A região reguladora do gene nit1, além das seqüências consenso gerais, apresenta quatro seqüências TATC responsáveis pela ligação da proteína reguladora geral positiva NIT2. Um possível sítio da ligação da proteína reguladora da via específica, NIT4, também foi localizado nessa região, na posição -340. Além disso, na região 3 não traduzida foi encontrado um possível sítio para poliadenilação do mRNA localizado na posição 2.826. A proteína deduzida do gene nit1 gerou uma seqüência de 905 aminoácidos com massa molecular de 101,1 kDa e apresentou alta identidade com as proteínas correspondentes em Metarhizium anisopliae (62,43%), Magnaporthe grisea (62,27%), Verticillium fungicola (60,15%), Botryotinia fuckeliana (58,30%) e Aspergillus fumigatus (51,93%). A expressão do gene nit1 em C. lindemuthianum foi avaliada em micélios cultivados em diferentes fontes de nitrogênio, em condições de ativação e repressão. O gene foi expresso na presença de nitrato a partir de 15 minutos após entrar em contato com esta fonte de nitrogênio, tendo atingido a expressão máxima com 360 minutos. A transcrição foi reprimida em micélios cultivados em amônio, uréia e glutamina. Em glutamina, após 60 minutos de repressão, não foi possível detectar a presença de transcritos desse gene.

Made available in DSpace on 2016-12-08T16:44:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PGPV07MA021.pdf: 2854765 bytes, checksum: dbbb75b021e8df0dd3a1c258932c3574 (MD5) Previous issue date: 2007-02-26 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The apple is a temperate clime fruit with larger dispersion, consumption and the more marketed all over the world as fresh fruit. The apple production has been committed by the incidence of diseases, in which Apple Leaf Spot (ALS), whose causal agent is the Colletotrichum spp. Nowadays this disease is one of the largest concerns of the producers and researchers. The origin of this disease in apple tree plants is not still well known. Studies based on the phylogeny allow to relate evolutionarily the organisms and characterize possible divergence mechanisms origin. This will contribute in disease control and prevention of new races sprout. The objective of this work was to study the variation of the ITSs rDNA among apple tree pathogenic isolates of Colletotrichum spp. from apple, citrus and feijoa. All isolates were first cultivated on PDA, for one week at 24oC. In the PCR amplification of the rDNA was used initiators ITS1 and ITS4. The amplified fragment was digested with restriction enzymes (Rsa I, Alu I, Hinf I, Hpa II, Hha I, Xho I, Acc I, Eco RI and Taq I). The revelation was in 2% agarose gel. It was obtained a great variation with products of the cleaved PCR products, from 90 to 500 pb. The amplified fragment was purified (QIAquick Gel Extraction Kit 250 - Unisciense of Brazil) and the fragment (ITS of the rDNA) was sequenced for all isolates. The sequences were aligned with the ClustalW software and the phylogenetic tree was constructed in the Mega 3.1 software. The products obtained in the PCR amplification of the rDNA region (ITS1-5,8S-ITS2), with the initiators pair ITS1 and ITS4 revealed a fragment with approximately 600 pb, for all the isolated analyzed. Through the analysis for the ARDRA was possible to separate isolates groups in haplotypes, which was efficient for the correlation between haplotypes and hosts, containing in a same haplotypes of the same host. It was possible to group the isolates of Colletotrichum in species, using the phylogenetic tree, independent of his host. All of the obtained sequences presented more than 93% of similarity, fact that reinforces the hypothesis that the Colletotrichum spp., causal agent of ALS, is nearly related with citrus and feijoa Colletotrichum / A maçã é a fruta de clima temperado de maior dispersão, consumo e a mais comercializada como fruta fresca em todo o mundo. A produção de maçã no Brasil tem sido comprometida pela incidência de várias doenças, das quais a Mancha Foliar da Gala (MFG), cujo agente causal são espécies de Colletotrichum spp., tem sido, atualmente, uma das maiores preocupações dos produtores e pesquisadores. A origem desta doença em macieira ainda não está bem esclarecida e a utilização de estudos baseados na filogenia permitem relacionar os organismos evolutivamente, caracterizando possíveis mecanismos de divergência evolutiva e a origem do patógeno, contribuindo na adoção de medidas de controle e prevenção quanto ao surgimento de novas raças. O presente trabalho objetivou estudar a variação do DNA ribossomal, (rDNA) entre isolados de Colletotrichum spp. patogênicos em macieira, em citros e goiaba serrana. Todos os isolados foram cultivados em meio BDA, por uma semana a 24oC. A amplificação do rDNA foi realizada utilizando-se iniciadores ITS1 e ITS4, seguida pela digestão da região ITS (espaçador interno transcrito) com enzimas de restrição (Rsa I, Alu I, Hinf I, Hpa II, Hha I, Xho I, Acc I, Eco RI e Taq I). Os produtos obtidos na amplificação da região ITS1-5,8S-ITS2 do rDNA revelaram um fragmento de aproximadamente 600 pares de bases (pb), para todos os isolados analisados. Todos os fragmentos amplificados foram clivados, obtendo uma grande variação, a qual foi de 90 a 500 pb. Utilizando a técnica de ARDRA (Amplified Ribosomal DNA Restriction Analysis) foi possível separar e agrupar os isolados em haplótipos, a qual foi eficiente para a correlação entre haplótipo e hospedeiros, agrupando em um mesmo haplótipo isolados do mesmo hospedeiro. O fragmento amplificado foi purificado com kit QIAquick Gel Extraction Kit 250 (Qiagen, Hilden, Germany) e as amostras foram seqüenciadas na região ITS do rDNA de todos os isolados. As seqüências foram alinhadas no software ClustalW e a árvore filogenética foi construída no software Mega 3.1. Com o seqüenciamento de DNA foi possível inferir sobre a possível espécie de fungo que pertence o segmento de DNA analisado. A região ITS do rDNA mostrou-se muito eficaz para estudos de filogenia. A partir da árvore filogenética foi possível agrupar os isolados de Colletotrichum por espécies, independente do seu hospedeiro. Todas as seqüências obtidas apresentaram valores superiores a 93% de similaridade, fato esse, que reforça que o Colletotrichum spp., causador da MFG, possui relações de parentesco com o isolados de Colletotrichum spp. isolados de citros e de goiaba serrana