Made available in DSpace on 2014-06-11T19:25:35Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-07-31Bitstream added on 2014-06-13T19:53:31Z : No. of bitstreams: 1 000741594.pdf: 1238321 bytes, checksum: 928f3598dad58d02baa22076c51e969a (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / As enzimas NAD(P)H oxidases ou família NOX tem sido considerada a principal fonte de espécies reativas de oxigênio (ERO) em vários tipos celulares. O aumento da biodisponibilidade de ERO e do sinal redox (estresse oxidativo) têm sido associados ao início e ou progressão de doenças crônicas como a hipertensão. Inibidores da NAD(P)H oxidase, como a apocinina, foram desenvolvidos e seus efeitos anti-hipertensivos têm sido estudados. O objetivo deste estudo foi verificar se o tratamento crônico com apocinina previne o desenvolvimento da hipertensão, da disfunção endotelial e da hipertrofia ventricular esquerda em Ratos Espontaneamente Hipertensos (SHR) e avaliar os possíveis mecanismos envolvidos nestes efeitos. Para isto, ratos normotensos Wistar e SHR foram tratados com apocinina (30 mg/kg/dia, diluída na água de beber) da quarta até a décima semana de vida. Foram realizados experimentos in vivo para avaliação de valores basais de pressão arterial (média - PAM, sistólica - PS e diastólica - PD), freqüência cardíaca (FC) e as respostas às drogas hipotensoras, acetilcolina (ACh) e nitroprussiato de sódio (NPS) e pressoras, fenilefrina (Phe) e angiotensina II (ANGII). Experimentos in vitro foram realizados para determinar se o tratamento com apocinina promove alterações na concentração citosólica de cálcio intracelular ([Ca2+]), de óxido nítrico ([NO]) e de espécies reativas de oxigênio ([ERO]) nas células endoteliais (citometria de fluxo), estimuladas ou não com acetilcolina; na expressão proteica (Western Blotting) de enzima óxido nítrico sintase endotelial... / The enzymes NAD(P)H oxidases or family NOX has been considered the main source of reactive oxygen species (ROS) in various cell types. Increased ROS bioavailability and altered redox signaling (oxidative stress) have been implicated in the onset and/or progression of chronic diseases, including hypertension. NAD(P)H oxidase inhibitors, such as apocynin were developed and their antihypertensive effects have been studied. The aim of this study was to determine whether chronic treatment with apocynin prevents the development of hypertension, endothelial dysfunction and left ventricular hypertrophy in spontaneously hypertensive rats (SHR) and to evaluate the mechanisms involved in these effects. Normotensive Wistar rats and SHR were treated with apocynin (30 mg/kg/day, diluted in the drinking water) from the fourth to the tenth week of life. The studies in vivo were performed to assess baseline blood pressure (mean arterial pressure - MAP, systolic - SBP, and diastolic blood pressure - DBP), heart rate (HR) before and after the administration of acetylcholine (ACh), sodium nitroprusside (SNP), phenylephrine (Phe) and angiotensin II (ANG II). We performed experiments in vitro to determine whether the treatment with apocynin causes changes in: cytosolic concentration of intracellular calcium ([Ca2+]), nitric oxide ([NO]), and reactive oxygen species ([ROS]) in endothelial cells (flow cytometry) stimulated or not with acetylcholine; protein expression (Western blotting) of enzyme endothelial nitric oxide synthase (eNOS) and of soluble guanylate cyclase... / FAPESP: 11/04619-0 / FAPESP: 11/20998-0

Made available in DSpace on 2015-06-17T19:33:52Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-27. Added 1 bitstream(s) on 2015-06-18T12:47:54Z : No. of bitstreams: 1 000830123.pdf: 3340415 bytes, checksum: 6ff6732f5faa2204891e545e0e18bd75 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Introdução: o estresse e o consumo de etanol são importantes fatores de risco cardiovascular. Objetivos: avaliar os efeitos da exposição ao estresse e do consumo de etanol, isoladamente e em associação sobre a pressão arterial e a reatividade da aorta torácica in vitro. Métodos: ratos Wistar machos adultos (8- 10 por grupo) foram separados em grupos: controle, etanol (20% de etanol na água de beber por 6 semanas), estresse (contenção 1h/dia 5 dias/semana durante 6 semanas) e etanol/estresse (ambos procedimentos em associação). A pressão arterial sistólica caudal (PAS), a concentração plasmática de corticosterona e a capacidade antioxidante do plasma foram avaliadas. Curvas concentração-efeito à noradrenalina na ausência ou presença de ioimbina (bloqueador-α2), L-NAME (inibidor da sintase do óxido nítrico), ou indometacina (inibidor da ciclooxigenase); à fenilefrina; e à angiotensina II na ausência e presença de losartan (bloqueador-AT1), PD123-319 (bloqueador-AT2), L-NAME, ou indometacina foram obtidas em anéis de aortas intactas e desnudadas de endotélio. Concentração efetiva 50% (CE50) e resposta máxima (RM) foram comparadas entre os grupos utilizando MANOVA/Tukey. P < 0,05 foi considerado estatisticamente significativo. Resultados: a exposição ao estresse, isoladamente e em associação ao consumo de etanol aumentou a PAS. Estresse ou estresse em associação aumentou as RM à noradrenalina em aortas intactas. Esta hiperreatividade foi abolida pela remoção do endotélio e pela presença de indometacina ou ioimbina, mas não foi alterada pela presença de L-NAME. Por sua vez, o consumo de etanol isoladamente não alterou a reatividade à noradrenalina. As respostas à fenilefrina em aortas com e sem endotélio e à noradrenalina em aortas sem endotélio permaneceram inalteradas independentemente do protocolo. Etanol e estresse, isoladamente e em associação, não alteraram a reatividade da aorta ... / Introduction: stress and ethanol consumption are important cardiovascular risk factors. Objectives: to evaluate the effects of stress exposure and ethanol consumption, alone and in association on blood pressure and thoracic aorta reactivity in vitro. Methods: Wistar adult male rats (8-10 per group) were separated into groups: control, ethanol (20% ethanol in their drinking water for 6 weeks), stress (restraint 1h/day 5 days/week for 6 weeks) ethanol/stress (both procedures in association). Caudal systolic blood pressure (SBP), plasma corticosterone and plasma antioxidant capacity were evaluated. Concentrationeffect curves to noradrenaline in the absence or presence of yohimbine (α2- blocker), L-NAME (inhibitor of nitric oxide synthase) or indomethacin (cyclooxygenase inhibitor); phenylephrine; and angiotensin II in the absence and presence of losartan (AT1-blocker), PD123-319 (AT2-blocker), L-NAME or indomethacin were obtained from the intact and denuded-endothelium aortas. 50% effective concentration (EC50) and maximum response (MR) were compared between groups using MANOVA/Tukey. P < 0.05 was considered statistically significant. Results: exposure to stress, alone and in association with ethanol consumption increased SBP. Stress and stress in association increased the MR to noradrenaline in intact aortas. This hyperreactivity was abolished by both removal of the endothelium and the presence of indomethacin or yohimbine, but was not changed by the presence of L-NAME. In turn, the consumption of ethanol alone did not alter the reactivity to noradrenaline. Responses to phenylephrine in aortas with and without endothelium and to noradrenaline in aortas without endothelium remained unchanged regardless of protocol. Ethanol and stress, alone and in association, did not alter the reactivity of intact aorta to angiotensin II. PD123-319 decreased MR to angiotensin II in intact rat aortas of ethanol and ethanol/stress groups compared to the ...

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:42Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-08-04Bitstream added on 2014-06-13T18:51:10Z : No. of bitstreams: 1 franzen_aa_me_jabo.pdf: 432317 bytes, checksum: 6e76f84b35fefc0d8afc5bb52873a43f (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / O endotélio corneal é essencial para a manutenção da transparência da córnea, é necessário um número mínimo de células endoteliais para a manutenção desta transparência. As alterações morfológicas e morfométricas do endotélio da córnea de gatos decorrentes do avanço da idade não estão ainda compreendidas e elucidadas. Objetivou-se estudar os parâmetros morfológicos e morfométricos do endotélio da córnea de gatos de diferentes idades, utilizando-se a microscopia especular. Avaliaram-se a densidade celular, a área celular média, o pleomorfismo e o polimegatismo. Empregaram-se 18 animais da espécie felina (Felis catus - LINNAEUS, 1758), machos ou fêmeas, subdivididos em três grupos com 6 animais cada, designados por: G1 (animais com idade entre 1 a 3 meses); G2 (animais com idade entre 5 a 12 meses) e G3 (animais com idades entre 24 a 40 meses). A microscopia especular de contato revelou que com o avanço da idade a densidade celular endotelial diminuiu, a área celular média e o pleomorfismo aumentaram e o polimegatismo apresentou valores constantes nos 3 grupos estudados. / The corneal endothelium is essential to maintain the corneal transparency. Morphological and morphometric changes in the feline corneal endothelium as a function of age are little known. The purpose of this study was investigating the effect of age on endothelial morphology and morphometry in cats. The corneal endothelium was studied throught contact specular microscopy. The exam presented data as cell density, average cell area, polymegathism and pleomorphism. A total of 16 cats were evaluated in this study. The subjects were divided in three groups with six cats (Felis catus - LINNAEUS, 1758): G1 (cats with 1 to 3 months old); G2 (cats with 5 to 12 months old); G3 (cats with 24 to 40 months old). The specular microscopy revealed decrease of cell density with age. The cell area increase and pleomorphism increase as function of age. The polymegathism showed constants values on the three groups.

Orientador: Fabio Trindade Maranhão Costa / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-16T04:27:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Carvalho_BrunaOliveirae_D.pdf: 26161582 bytes, checksum: 03a823d75454c98764eb80bc3c4a356d (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: Malária vivax foi por muito tempo considerada uma infecção benigna, porém, complicações frequentes nas infecções por P. falciparum, como a malária cerebral, síndrome respiratória aguda (ARDS), disfunção hepática, trombocitopenia grave e baixo peso ao nascer devido à infecção placentária, também têm sido observadas em pacientes infectados por P. vivax. Na malária falciparum, estes sintomas estão associados à adesão de eritrócitos infectados por P. falciparum (Pf-IE) que se ligam a diversos receptores do hospedeiro, incluindo CD36, ICAM-1 e CSA. No entanto, não há evidência direta do seqüestro de eritrócitos infectados por P. vivax (Pv-IE) e uma possível capacidade citoadesiva permanecia por ser demonstrada. Pv-IE coletados de pacientes da Amazônia brasileira foram enriquecidos por gradiente de Percoll ® e a capacidade de citoadesão parasitária foi testada em um grupo de células que expressam receptores endoteliais sabidamente envolvidos na citoadesão de P. falciparum, em condições estáticas e em um sistema que mimetiza o fluxo sanguíneo. Mostramos que Pv-IE citoaderem sob condições estáticas e de fluxo, embora em níveis cerca de 10 vezes inferiores aos observado para P. falciparum. Demonstramos ainda que a citoadesão de P. vivax pode ser mediada por membros da família VIR, proteínas expressas na superfície de eritrócitos infectados e codificadas por uma superfamília de genes variantes (vir). Estes dados abrem perspectivas para uma melhor compreensão do fenômeno patológico relacionado com a malária vivax grave incluindo a descoberta de ligantes parasitários e receptores do hospedeiro / Abstract: Vivax malaria has been considered for a long time a benign infection; however severe complications, as observed in P. falciparum, such as cerebral malaria, acute respiratory distress syndrome (ARDS), liver dysfunction, severe thrombocytopenia and low birth weight due placental infection have also been reported worldwide for P. vivax-infected patients. In falciparum malaria, these symptoms are associated to sequestration of P. falciparum-infected erythrocytes (Pf-IE) that bind to several host receptors, including CD36, ICAM-1 and CSA. Nonetheless, direct evidence of P. vivax-infected erythrocytes (Pv-IE) sequestration is missing and binding analyzes of this species is lacking. Pv-IE obtained from patients in the Brazilian Amazon were enriched by Percoll® gradient and parasite adherence was tested to a panel of cells expressing endothelial receptors known to mediate cytoadhesion of P. falciparum, in static and flow conditions. Here we show that mature Pv-IE cytoadhere both under static and flow conditions, albeit at levels about 10-fold lower than those observed for P. falciparum. We further demonstrate that cytoadhesion by P. vivax was in part mediated by members of the VIR family, parasite-derived proteins expressed at the infected erythrocyte surface and encoded by a superfamily of variant genes (vir). These data open perspectives for a better understanding of the pathological phenomenon related to severe P. vivax malaria, including the discovery of novel parasite ligand(s) and host receptor(s) / Doutorado / Imunologia / Doutor em Genetica e Biologia Molecular

Orientadores: Heitor Moreno Junior, Juan Carlos Yugar Toledo / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-12T18:08:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Souza_LeoniAdrianade_D.pdf: 2182223 bytes, checksum: 8e22db6a7776453957b37130a24a1a82 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: Segundo o VII JNC, Hipertensão arterial refratária (HAR) é definida como sendo a elevação persistente dos níveis pressóricos (acima de 140 mmHg) à despeito de tratamento farmacológico tríplice, pleno, incluindo um diurético, em pacientes com boa adesão e sem causas secundárias de hipertensão arterial ou pseudo-hipertensão. Quando exposto aos fatores de risco, como a hipertensão arterial (HA), o endotélio apresenta alterações funcionais denominadas genericamente de disfunção endotelial, onde ocorre principalmente uma menor biodisponibilidade de óxido nítrico (NO) e de substâncias vasodilatadoras ou uma maior produção de substâncias vasoconstritoras. O objetivo deste trabalho foi avaliar a função do endotélio vascular no leito venoso e arterial em pacientes com HAR. Após a triagem e adesão rigorosa, os 86 pacientes foram seqüencialmente incluídos no estudo, dos quais 33 foram caracterizados como hipertensos resistentes (HAR), 50,7±8,5 anos, 28 pacientes como hipertensos controlados (HA), 54,9±12,0 anos e 25 normotensos controle (NT), 35,8±12,1anos. Todos os grupos foram submetidos ao exame da função endotelial venosa pela técnica da veia dorsal da mão (DHVT), do endotélio arterial pela vasodilatação mediada pelo fluxo (VMF) e velocidade de onda de pulso (VOP). Os principais resultados do presente estudo mostraram: a) diferença estatisticamente significante entre os grupos HAR e NT (p<0,05) em relação à vasodilatação endotélio dependente no leito venoso, o mesmo não ocorrendo com a venodilatação induzida por nitroprussiato de sódio (endotélio independente); b) alterações funcionais do leito arterial dependente do endotélio, através da vasodilatação mediada pelo fluxo entre os grupos HAR e NT (p<0,0005) e HA e NT (p<0,003) e a vasodilatação não dependente do endotélio perante estímulo farmacológico entre os grupos HAR e NT (p<0,0001) e HA e NT (p<0,01); c) rigidez arterial constatada pela VOP entre os grupos HAR e NT (p<0,0001) e HA e NT (p<0,03). Pacientes HAR apresentam disfunção vascular venosa, observada pela diminuição da venodilatação endotélio dependente, caracterizada por redução da complacência de veia dorsal da mão (CVDM) em resposta à administração de acetilcolina, assim como ocorre diminuição da vasodilatação mediada pelo fluxo e NTG (artéria braquial), mensuradas pela técnica da vasodilatação mediada pelo fluxo (VMF) e aumento da rigidez arterial / Abstract: Refractory Hypertension (RH) is conventionally defined as a persistent elevation in blood pressure (systolic > 140 or diastolic > 90 mmHg), even on a triple drug regimen at maximal doses including a diuretic, in patients with good adhesion and without secondary causes of hypertension or pseudo-hypertension. When exposed to risk factors, such as hypertension, the endothelium presents functional alterations, denominated endothelial dysfunction, with a reduced bioavailability of nitric oxide (NO) and vasodilation agents or an increased production of vasoconstrictor agents. The objective of this work was to evaluate the vascular endothelial function in venous and arterial networks of patients with RH After careful selection, a total of 86 patients were included in the study; 33 were characterized as resistant hypertensives (50.7±8.5 years), 28 as controlled hypertensives (54.9±12.0 years) and 25 as apparently healthy volunteers (35.8±12.1 years). All participants were submitted to an evaluation of the venous endothelial function by the dorsal hand vein technique, the arterial endothelium by flow-mediated vasodilation and the Arterial Stiffness. The main results of this study showed: a) a significant difference between the RH and NT Groups (p< 0.05) in respect to endothelial-dependent vasodilatation in the venous network; this was not seen in endothelium-independent vasodilatation induced by sodium nitroprusside; and b) functional alterations of the arterial network as seen by endothelial-dependent vasodilation comparing the RH and NT (p<0.0005) and CH and NT (p<0.003) and endothelial independent vasodilatation on evaluating the pharmacological response comparing RH and NT (p<0.0001) and CH and NT (p<0.01); and c) arterial stiffness by pulse wave velocity comparing the RH and NT Groups (p<0.0001) and CH and NT (p<0.03). RH patients present with venous vascular dysfunction, identified by a decrease in the endothelium-dependent vasodilatation characterized by a reduction in compliance of the dorsal hand vein in response to the administration of acetylcholine. Additionally, a decrease in nitroglycerin-induced flow-mediated vasodilatation (brachial artery) was observed and elevated arterial stiffness / Doutorado / Doutor em Farmacologia

Orientador: Otavio Rizzi Coelho / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-09T10:24:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_DanielaCamargode_M.pdf: 4905974 bytes, checksum: 11a4b3e52ec646efdd7037efda375b87 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: No Brasil, o consumo de cocaína e derivados intensificou-se nas últimas décadas. Em 2001, 1.076.000 de pessoas admitiram o uso prévio. O uso abusivo evidenciou eventos cardiovasculares associados a tais substâncias. Para pesquisar alterações cardiovasculares e fatores de risco, este estudo observacional transversal avaliou pacientes usuários e ex-usuários de cocaína e derivados, atendidos pela disciplina de psiquiatria do Hospital de Clínicas da Universidade Estadual de Campinas, entre novembro de 2004 e abril de 2006. Estes foram encaminhados para tratamento de dependência química e não por sintomas cardiovasculares como queixa principal. Inclusos 40 usuários menores de 70 anos, e excluídos portadores de doenças limitantes à realização dos exames do protocolo. Submeteram-se à avaliação de consumo, abstinência e caracterização amostral por meio de questionário. Seguiu-se anamnese geral, direcionada e exame físico. Solicitados: radiografia de tórax; avaliação laboratorial; eletrocardiograma; ecocardiograma com Doppler, fluxo a cores e Doppler tecidual; teste ergométrico e avaliação de reatividade endotelial por vasodilatação mediada pelo fluxo, segundo as diretrizes da American College of Cardiology. Quando indicado, os pacientes foram encaminhados para investigação invasiva e tratamento de fatores de risco. A análise estatística determinou médias, mediana e porcentagem de ocorrência de eventos e utilizou-se o teste X ² e Teste Exato de Fisher para avaliar significância estatística entre ocorrência de eventos pouco freqüentes. A amostra constituiu-se de maioria homem, branco, solteiro, com idade entre 17 e 50 anos (média de 32,25), com comorbidades mais freqüentes: litíase renal, rinossinusite, DPOC e hepatite tipo C. Os consumos de tabaco (fator de risco cardiovascular mais prevalente) e álcool, iniciados em idade escolar, com freqüência de 82,5% e 89,7% respectivamente; o de canabis ativa de 97,5%, sendo a maioria usuária de outras substâncias psicoativas e consumidora de mais de uma droga simultaneamente. O consumo de cocaína, de início mais tardio e freqüência de uso maior que cinco dias por semana, sendo o consumo em pó e crack admitido por 67,5% dos pacientes. Quanto à presença de sintomas, a angina típica relacionou-se a maior risco de eventos isquêmicos (P=0.003), mas tende a ser minimizada pelos usuários. O exame físico não apresentou alterações significativas relacionadas ao consumo. Ao realizarem os exames, os pacientes apresentavam abstinência média de 88 dias e mediana de 30 dias. O exame laboratorial que se relacionou ao uso de cocaína e derivados foi proteína C reativa. O eletrocardiograma e o teste ergométrico não apresentaram alterações significativas. Ao ecocardiograma as alterações encontradas foram compatíveis com dados da literatura. A presença de alteração de reatividade endotelial mediada pelo fluxo foi detectada em 71% dos pacientes, e a abstinência menor que 60 dias foi estatisticamente significativo (p=0,002), podendo indicar ação tóxica ao endotélio, levando a menor vasodilatação endotélio dependente, aumentando o risco cardiovascular destes pacientes. Ao cateterismo cardíaco evidenciaram-se lesões obstrutivas significativas em dois casos, já suspeitos de isquemia, pela anamnese dirigida e exames iniciais. Não foi possível a avaliação prospectiva de 64% dos pacientes que não atenderam à reconvocação / Abstract: In Brazil, cocaine consumption has been increased in the last decades, about 1.076.000 of people admitted the previous use in 2001. This abusive use evidenced cardiovascular events related to such substances. To research cardiovascular alterations and risk factors, this observational traverse study evaluated cocaine users, assisted by psychiatry discipline of the Hospital de Clinicas of the Universidade Estadual de Campinas, between November 2004 and April 2006. These patients were directed for treatment of chemical dependence and not for cardiovascular symptoms as main complaint. 40 patients were included, smaller then 70 years old, and were excluded those who had limitable diseases, and couldn¿t accomplish the protocol. They underwent the evaluation of consumption, abstinence and personal characteristics through a questionnaire. General and directed anamneses and physical exam were proceeded. Evaluation exams were requested: thorax x-ray; laboratorials; electrocardiogram; echocardiogram with Doppler, color and tissue Doppler; stress test and flow mediated vasodilatation, according to the American College of Cardiology guidelines. When needed, the patients were directed for other investigation and treatment of risk factors. The statistical analysis determined averages, medium and percentage of occurrence of events and the X ² test, and Exact Test of Fisher were used to evaluate statistical significance among occurrence of events a little frequency. The sample was constituted of majority man, white, single, aged between 17 and 50 years (average of 32,25). The tobacco (more prevalent risk factor) and alcohol consumption (initiated in school age) have the frequency of 82,5% and 89,7% respectively; the one of canabis activates of 97,5%. The most of the patients used to use other substances and consumed more than one illegal drug simultaneously. Cocaine consumption, have a latter age of beginning its frequency of use was more than five days a week, and the powdered and crack consumption admitted by 67,5% of the patients. As for the presence of symptoms, the typical angina linked the largest risk of cardiovascular events (P=0.003), but this pain tends to be minimized by the users. The physical exam didn't present significant changes related to the consumption. At the time of the exams, the patients presented medium abstinence of 30 days. The C protein was the laboratorial exam that appears to be linked to the cocaine use. The electrocardiogram and the stress test didn't present significant alterations. The echocardiogram found alterations that were compatible within literature data. The endothelial reactivity change was detected in 71% of the patients, and the smaller abstinence than 30 days until 60 days was statistically significant (p=0,002), and could indicate a cocaine endothelial action, taking to smallest vasodilatation, increasing the cardiovascular risk of these patients. To the coronary cathetherism were evidenced significant obstructive lesions in two cases, already suspected to have ischemic disease. It was not possible to do the prospective evaluation of 64% of the patients that didn't assist to the recall / Mestrado / Clinica Medica / Mestre em Clinica Medica

Orientador: Marta Helena Krieger / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-15T17:17:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Wanschel_AmarylisClaudineBonitoAzeredo_D.pdf: 3059995 bytes, checksum: afbb018ffe3bb06b61c7420a0fa4664f (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: O objetivo deste trabalho foi avaliar a biodisponibilidade do óxido nítrico (NOo) nas disfunções cardiovasculares, especificamente na hipertrofia ventricular esquerda e na aterosclerose. Para tanto, realizamos dois estudos em camundongos deficientes do receptor de LDL (LDLr-/-): o primeiro realizado em continuidade aos estudos desenvolvidos anteriormente em nosso grupo de pesquisa, os quais demonstraram a ação do doador de NOo na prevenção da hipertrofia ventricular esquerda e na proteção contra arritmia via indução do acoplamento adrenoceptor-beta2 (ß2AR) à proteína G inibitória (Gi); e no segundo estudo, foi avaliada a biodisponibilidade de NOo na fase inicial da aterogênese, com objetivo de caracterizar as alterações sistêmicas e locais. No primeiro estudo mostramos que o doador de NOo, S-Nitroso-N-acetilcisteína (SNAC) administrado, promoveu ação cardioprotetora contra o remodelamento cardíaco via redução do estresse oxidativo e apoptose celular, os quais foram determinados pelas medidas ventriculares da produção de superóxido (O-o2) e peróxido de hidrogênio (H2O2) e pelo índice de morte celular por apoptose. Esta ação cardioprotetora foi vista no aumento da expressão e no conteúdo de S-nitrosação do ß2AR. Estes efeitos foram associados à cardioproteção contra a arritmia via indução do acoplamento ß2AR à Gi. O objetivo do segundo estudo foi avaliar a biodisponibilidade de NOo na fase inicial da aterogênese em camundongos LDLr-/- no curso temporal de 15 a 60 dias de dieta, com a quantificação de parâmetros sistêmicos representados pela pressão arterial, perfil lipidêmico e ateroma, bem como de parâmetros locais representados pela atividade e expressão da via NO/NOS e suas modificações póstraducionais no processo inflamatório via CD40-CD40L. Camundongos LDLr-/-submetidos à dieta rica em gordura apresentaram progressão do tamanho do ateroma no curso temporal analisado, contudo não foi associado a similares incrementos nos níveis de dislipidemia. Não foram detectadas alterações na pressão arterial do fenótipo hipertenso deste animal. Contudo, localmente foi verificado incremento na atividade da eNOS via fosforilação de resíduos de serina 1179 (S1179) em 30 dias de dieta rica em gordura, que pode ser considerado um mecanismo emergencial à aterosclerose . Posteriormente, com a evolução do ateroma (60 dias) houve redução desta ativação, bem como do conteúdo de proteínas S-nitrosadas. O desenvolvimento de ateroma em 30 e 60 dias induzido pela dieta mostrou aumento da atividade inflamatória por meio da denitrosação de tióis críticos da via CD40. Portanto, a análise das alterações no curso temporal apresentou somente mudanças locais como alteração na biodisponibilidade de NOo, ativação inflamatória via denitrosação do receptor CD40 e redução do conteúdo de S-nitrosação total, enquanto as alterações sistêmicas neste período de tempo ainda não são evidentes / Abstract: The objective of this study was to evaluate the bioavailability of nitric oxide (NOo) in cardiovascular disorders, specifically on the left ventricular hypertrophy and atherosclerosis. Therefore, we performed two studies with LDL receptor-deficient mice (LDLr-/-): the first one was performed in sequence to the studies previously developed in our research group, which showed the NOo donor action on the prevention of left ventricular hypertrophy and protection against arrhythmia via induction of the coupling from beta adrenoceptor-2 (ß2AR) to the inhibitory G protein (Gi); and the second study,it was evaluated the bioavailability of NOo to characterize the systemic and local alterations in the early stages of atherogenesis. The first study showed that the administration of NOo donor S-Nitroso-N-Acetylcysteine (SNAC) promoted cardioprotective action by blocked the cardiac remodeling through reduction of oxidative stress and of apoptosis, which were determined by measures of ventricular superoxide (O-o2) and hydrogen peroxide (H2O2) production and the cell death index, respectively. This cardiprotective action was charactherized by the increase of expression and content of S-nitrosation of ß2AR. These effects were associated with cardioprotection against arrhythimia via induction of ß2AR coupling Gi. The objective of the second study was to evaluate the bioavailability of NOo in the LDLr-/- mice early atherogenesis in LDLr-/ - mice from 15 to 60 days, with the quantification of systemic parameters represented by the blood pressure, lipidemic profile and atheroma as well as local ones represented by the activity and expression of NO/NOS pathway and its post-translational modifications on the inflammatory process via CD40- CD40L. Mice LDLr-/ - maintained on high-fat diet showed progression of atheroma size, although it was not associated with similar increase in dyslipidemic profile. No changes in blood pressure were detected in the hypertensive phenotype of this animal. However, increased activity of eNOS via phosphorylation of Ser1179 (S1179) at 30 days of high-fat diet was detected and it can be considered an emergential mechanism to early atherosclerosis. The development of atheroma (60 days) blocked that activation as well as the protein content of S-nitrosated. The atheroma induced at 30 and 60 days by high-fat diet revealed increase inflammatory activity through denitrosation of critical thiols via CD40. Therefore, the analysis of changes in this time course showed only local changes as changes on NOo bioavailability alteration inflammatory activation via denitrosation of CD40 receptor and the content of total S-nitrosation reduction. However, systemic changes in this period of time have not been evident yet / Doutorado / Fisiologia / Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Cristina Pontes Vicente / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-26T00:19:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Godoy_JulianaAparecidaPretode_D.pdf: 5686269 bytes, checksum: 95147a9fe0fec8d741716bf7ed2bd30e (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: A aterosclerose é uma doença que acomete os vasos sanguíneos através da formação exacerbada de placas de gordura, interrompendo o fluxo de sanguíneo. A intervenção cirúrgica mais utilizada nesses casos é a angioplastia coronária percutânea, entretanto, esse procedimento pode ocasionar uma lesão ao endotélio, onde os processos trombótico e inflamatório são iniciados. Neste processo ocorre o recrutamento de células inflamatórias e a migração e adesão das células progenitoras endoteliais (CPE) para o local da lesão de modo a recuperar o dano endotelial. As CPE são células existentes na população de células mononucleares (MNC) da medula óssea e podem estar envolvidas no processo de reparo endotelial. Os glicosaminoglicanos, como o dermatan sulfato (DS) e o condroitin sulfato fucosilado (CSF), são moléculas que atuam como agentes antitrombóticos, anticoagulantes e anti-inflamatórios. Neste estudo, analisamos a influência do DS e CSF e da terapia com CPE na inflamação e trombose após lesão arterial em camundongos selvagens (C57BL06) e deficientes em apolipoproteína E (ApoE-/-). Todos os animais foram submetidos a um procedimento cirúrgico na artéria carótida comum esquerda, mimetizando a lesão causada por angioplastia em humanos. Proteínas/fatores envolvidos nos processos iniciados logo após a lesão endotelial foram analisados por western blotting (ICAM-1, P-selectina, eNOS e SDF-1) e por Elisa (TNF-?, IL-10, SDF-1 e TGF-?); as artérias carótidas lesionadas foram analisadas histologicamente para se verificar a formação de trombo e a atividade de gelatinases por zimografia `in situ¿. Todas as análises foram realizadas 1 e 3 dias após a lesão arterial. Observamos nos camundongos C57BL/6 que o tratamento com DS foi capaz de diminuir a reação inflamatória inicial e, ao mesmo tempo, estimular a migração de células progenitoras para o local da lesão; tal resultado foi observado em relação ao uso de CSF, apesar deste não prevenir a formação de trombo. A terapia utilizando MNC isoladas ou em conjunto com DS ou CSF aumentou a resposta inflamatória inicial. O uso de CPE também ocasiona essa resposta, mas quando utilizamos a EPC junto com DS obtemos uma menor resposta inflamatória e, ao mesmo tempo, aumento da expressão de eNOS, melhorando o tônus vascular. Nos camundongos ApoE-/-, os tratamentos não foram capazes de melhorar a resposta inflamatória; o tratamento com CPE e CSF foi o mais eficaz, diminuindo a resposta inflamatória e melhorando o tônus vascular. Concluímos que as terapias com os glicosaminoglicanos (DS ou CSF) foram capazes de diminuir as respostas trombóticas e inflamatórias iniciais. Além disso, que a injeção de MNC leva a um aumento da resposta inflamatória provavelmente devido ao caráter inflamatório destas células. Concluímos, que os GAGs podem estar atuando como moléculas de quimioatração das células ao mesmo tempo em que evitam a trombose e inflamação iniciais exacerbadas e que podem ser utilizados como agentes coadjuvantes na terapia celular para a recuperação de dano endotelial / Abstract: Atherosclerosis is a disease that undertakes blood vessels by exacerbated atheroma plaque formation, and blocking blood flow. The most used surgical intervention in these cases is the angioplasty, however, this procedure can cause a lesion to the endothelium, where thrombotic and inflammatory processes are initiated, recruiting inflammatory cells to the lesion site and also promoting migration and adhesion of endothelial progenitor cells (EPC) in order to recovery endothelial damage. Glycosaminoglycans (GAGs), like dermatan sulfate (DS) and fucosilated chondroitin sulfate (FCS), are molecules that act as antithrombotic, anticoagulant and anti-inflammatory agents. EPC are cells that exist in bone marrow mononuclear (MNC) cells fraction population and can be involved in vascular repair. In this study, we analyzed the influence of DS and FCS and cellular therapy using EPC in inflammation and thrombosis after arterial lesion in wild-type (C57BL6) and apolipoprotein E deficient (ApoE-/-) mice. All animals were submitted to a surgical procedure in the left common carotid artery, mimicking the lesion caused by angioplasty in humans. Proteins/factors involved in the initial process after an endothelial lesion were analyzed by western blotting (ICAM-1, P-selectina, eNOS and SDF-1) and by Elisa (TNF-?, IL-10, SDF-1 and TGF-?); lesioned carotid artery were analyzed histologically to verify thrombus formation and gelatinase activity by zimography `in situ¿. All analyzes were done 1 and 3 days after arterial lesion. We observed that C57BL6 mice treatment with DS was able in decrease the initial inflammatory reaction and, at the same time, stimulate progenitor cells migration to the lesion site; this result was also observed in relation to FCS use, despite its did not prevent thrombus formation. Therapy using MNC alone or with DS or FCS increased the initial inflammatory response. Use of EPC also promoted this response but when used together with DS, we can obtain a decreased inflammatory response and, at the same time, an increased in the eNOS expression, improving vascular tonus. In ApoE-/- mice, treatments were not able in improving inflammatory response; treatment with EPC and FCS was the one with best action, decreasing inflammatory response and improving the vascular tonus. GAGs (DS or FCS) therapy was able to decrease the initial inflammation. Besides, MNC injection leads to an increase in inflammation probably due to its inflammatory characteristics. We conclude that GAGs can be acting quimio-atracting molecules to the cells and, at the same time, avoiding the initial thrombosis and inflammation after injury and they can be used as supporting agents in cellular therapy use to help in vascular recovery after injury / Doutorado / Biologia Celular / Doutora em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Eros Antonio de Almeida / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-18T12:06:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ozaki_MichikoRegina_D.pdf: 2408149 bytes, checksum: 859e32381ddd8c14c86054feca0e96a2 (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: A regressão da aterosclerose é ainda um campo muito amplo a ser pesquisado, com mecanismos a serem desvendados, sendo o coelho um animal utilizado internacionalmente para fins de pesquisa, nesta área. Este trabalho foi realizado com objetivo de verificar a evolução e involução da aterosclerose em coelhos hipercolesterolêmicos e sua relação com a função endotelial, lípides plasmáticos, colesterol e peroxidação tecidual e quantificação de aterosclerose. Foram utilizados 30 coelhos da raça Nova Zelândia, com peso inicial de 3,0 a 3,5 kg e divididos em 6 grupos (n=5): G1 - animais não hipercolesterolêmicos; G2 - animais hipercolesterolêmicos; G3 - animais hipercolesterolêmicos, seguidos por 4 meses de dieta não hipercolesterolêmica; G4 - animais hipercolesterolêmicos, seguidos por 1 mês de dieta não hipercolesterolêmica e tratamento com rosuvastatina (5,0mg/animal/dia); G5 - animais hipercolesterolêmicos, seguidos por 2 meses de dieta não hipercolesterolêmica e tratamento com rosuvastatina (5,0mg/animal/dia); G6 - animais hipercolesterolêmicos, seguidos por 4 meses de dieta não hipercolesterolêmica e tratamento com rosuvastatina. (5,0mg/animal/dia). Sendo que os animais dos grupos G2 a G6 foram alimentados com dieta hipercolesterolêmica composta de colesterol a 0,5% e 10% de gordura de coco por um período de 4 meses. Ao final do experimento foram dosados no plasma: colesterol total, triglicérides e HDL-c. A LDL-c foi estimada através da formula de Friedwald. Em segmentos de aorta, dosou-se colesterol e MDA, assim como foi medida a função endotelial utilizando-se de curvas de concentração/efeito com acetilcolina. A quantificação de aterosclerose foi verificada macroscopicamente na aorta corada pelo sudam IV, e microscopicamente em fragmentos corados com hematoxilina-eosina e estudados por microscopia óptica. A quantificação foi realizada por software especifico. Os valores do colesterol total, LDL-c, HDL-c, triglicérides, colesterol e peroxidação teciduais, nos diferentes grupos de animais, foram examinados por teste estatístico não paramétrico de Kruskall-Walls, seguido do teste de comparação múltipla de Dunn. As curvas que expressam a função endotelial foram comparadas por analise de variância (ANOVA) para medidas repetidas. Considerando-se valores significativos "p"<0,05. Os parâmetros, tanto bioquímicos, quanto teciduais estiveram aumentados no G2 em relação ao G1. A suspensão da dieta hipercolesterolêmica não foi suficiente para retornar os parâmetros teciduais aos do grupo G1. Os grupos tratados com rosuvastatina G4, G5 e G6, tiveram os lípides plasmáticos diminuídos significativamente; porem, em relação ao colesterol e peroxidação teciduais apenas nos animais do G6 ocorreu diminuição significativa. Em relação a função endotelial, somente, os animais do grupo G6 apresentaram melhora significativa. Apenas a suspensão da dieta não foi eficiente para melhorar os valores teciduais do colesterol, peroxidação lipídica, função endotelial e involuir a aterosclerose. O tratamento prolongado com rosuvastatina alem da suspensão da dieta hipercolesterolêmica, diminuiu o colesterol e peroxidação lipídica teciduais, melhorou a função endotelial e produziu involução da aterosclerose / Abstract: Regression of atherosclerosis is still a very broad field to be searched, with mechanisms to be explored, the rabbit is an animal used internationally for research in this area. This work was carried out aiming at checking the progress and regression of atherosclerosis in hypercholesterolemic rabbits and its relation to endothelial function, lipid peroxidation and plasma and tissue. We used 30 New Zealand white rabbits initially weighing 3.0 to 3.5 kg and divided into six groups (n=5): G1: not hypercholesterolemic animals, G2: hypercholesterolemic animals, G3: hypercholesterolemic animals, followed by four months of not hypercholesterolemic diet; G4: hypercholesterolemic rats, followed by a month of not hypercholesterolemic diet and treatment with rosuvastatin (5.0mg/animal/day), G5: hypercholesterolemic rabbits, followed by two months of diet does not hypercholesterolemic and treatment with rosuvastatin (5.0mg/animal/day) G6: hypercholesterolemic animals, followed by four months of diet does not hypercholesterolemic and treatment with rosuvastatin. (5.0mg/animal/day). The animals in groups G2 to G6 were fed a hypercholesterolemic diet composed by 0.5% cholesterol and 10% coconut oil for a period of four months. At the end of the experiment were measured in plasma: total cholesterol, triglycerides and HDL-C. The LDL-C was estimated by the Friedwald formula. In aortic segments dosed 0cholesterol and MDA, as well as measured endothelial function through curves of concentration-effect with acetylcholine. Quantification of atherosclerosis in the aorta was observed macroscopically stained sudam IV, and microscopic fragments stained with hematoxylin-eosin and studied by light microscopy. Quantification was performed by specific software. The values of total cholesterol, LDL-C, HDL-C, triglycerides, cholesterol and tissue peroxidation in different groups of animals were examined by nonparametric statistical test Kruskal-Walls, followed by multiple comparison test of Dunn. The curves expressing endothelial function were compared by analysis of variance (ANOVA) for repeated measures. Considering the significant values "p"<0.05. The parameters, both biochemical and tissue were increased for G2 compared to G1. The suspension of the hypercholesterolemic diet was not enough parameters to return the tissue to the G1. The groups treated with rosuvastatin G4, G5 and G6, plasma lipids were significantly decreased, but in relation to cholesterol peroxidation and tissue in animals only significant decrease in the G6. Regarding the endothelial function, only the animals of the G6 group showed significant improvement. Only the suspension of the diet was not effective for improving the tissue values of cholesterol, lipid peroxidation, endothelial function and regress atherosclerosis. Prolonged treatment with rosuvastatin, besides the suspension of hypercholesterolemic diet decreased cholesterol and tissue lipid peroxidation, improved endothelial function and produced regression of atherosclerosis / Doutorado / Ciencias Basicas / Doutor em Clínica Médica

Orientador: Sonia Maria Oliani / Banca: Claudia Regina Bonini Domingos / Banca: Janetti Nogueira de Francischi / Resumo: Introdução: A proteína anexina A1 (ANXA1) está envolvida principalmente na regulação dos processos inflamatórios, proliferativos, crescimento e diferenciação celular. Embora esses efeitos tenham sido explorados em diversas investigações, são raros os estudos na angiogênese. A terapia angiogênica consiste no controle do crescimento vascular, e a descoberta da ação da proteína ANXA1 nesse processo resultaria no desenvolvimento de novos procedimentos terapêuticos. Objetivo: em função da importância do entendimento da ação reguladora da ANXA1 na formação de novos vasos, o objetivo das nossas investigações foi avaliar, in vivo e in vitro, o mecanismo de ação dessa proteína sobre a angiogênese, na vigência do fator de crescimento do endotélio vascular - subtipo A (VEGF-A). Métodos: Nas investigações in vivo avaliamos os efeitos da ANXA1 sobre a cinética de formação de novos vasos da rede microcirculatória da região dorsal da pele de camundongos BALB/c selvagens (WT) e destituídos do gene para ANXA1 (AnxA1-/-). Na linhagem de células endoteliais de veias umbilicais humanas (HUVEC) investigamos o efeito da ANXA1 na viabilidade celular, proliferação, migração, formação de tubos, aderência e expressão de moléculas de adesão. Resultados: Os animais WT tratados com o peptídeo ANXA12-26 (1 mg/kg) ou VEGF e, os AnxA1-/- tratados com VEGF (10 ng/10 μL) apresentam aumento da neovascularização na pele. Nas células HUVEC, a análise da viabilidade não mostra diferenças significantes com ANXA12-26 nas concentrações de 1, 10 e 30 μM. Enquanto, a proliferação celular aumenta com o VEGF e/ou tratamento com ANXA12-26 (1 μM). No entanto, a migração celular aumenta após o tratamento com ANXA12-26 (10 μM) e, associado ao VEGF, nas concentrações de 10 e 30 μM. A tubulogênese aumenta após indução com VEGF e não altera após tratamento com ANXA12-26 (1, 10 ou 3... / Abstract: Introduction: The annexin A1 protein (ANXA1) is mainly involved in the regulation of inflammation, proliferative, growth and cell differentiation. Although these effects have been studied in several investigations, are scarce the studies in angiogenesis. The angiogenic therapy consists in the vascular growth control, and the discovery of ANXA1 protein action in this process result in the development of new therapeutic procedures. Aim: According to the importance of understanding the ANXA1 regulatory action in the new vessels formation, the objective of our research was to evaluate in vivo and in vitro, the action mechanism of this protein on angiogenesis, in the presence of the growth factor vascular endothelial - subtype A (VEGF-A). Methods: In vivo investigations have evaluated the ANXA1 effects on the kinetics of formation of new vessels of microcirculatory network of dorsal skin of BALB/c wild (WT) and ANXA1 depleted (AnxA1-/-) mice. In endothelial cells from human umbilical vein lineage (HUVEC) investigated the effect of ANXA1 on cell viability, proliferation, migration, tube formation, cell adhesion and molecules adhesion expression. Results: The WT animals treated with peptide ANXA12-26 (1 mg/kg) and VEGF and the AnxA1-/- animals treated with VEGF (10 ng/10 μL) show an increase of neovascularization in the skin. In HUVEC cells, the viability analysis does not show significant differences with ANXA12-26 at concentrations of 1, 10 and 30 μM. While, the cell proliferation increases with VEGF and/or ANXA12-26 treatments (1 μM). However, cell migration increases after ANXA12-26 treatment (10 μM) and, associated with VEGF, in concentrations of 10 and 30 μM. The tubulogenesis increases after induction with VEGF and does not change after ANXA12-26 treatment (1, 10 or 30 μM). In contrast, VEGF associated with ANXA12-26 (10 μM) enhance the formation of tubular structures. The ANXA12-26 peptide increases the expression of β3 integrin... / Mestre