A glicoproteína oligodendrocítica da mielina (MOG) e proteína básica da mielina (MBP) têm sido implicadas como os antígenos-alvo mais importantes nos processos desmielinizantes do sistema nervoso central (SNC), e mais importantes autoantígenos que surgiram dos estudos com o modelo animal para a esclerose múltipla (EM), a encefalomielite autoimune experimental (EAE). Os primeiros autoanticorpos detectados no soro e liquido cefalorraquidiano (LCR) de pacientes com EM foram anticorpos contra antígenos da mielina. O diagnóstico diferencial da EM inclui a presença de bandas oligoclonais (BOCs) no LCR e ausência no soro, demonstrando dessa forma síntese intratecal de imunoclobulinas G (IgG). As técnicas de detecção de anticorpos mais utilizadas atualmente são ELISA, ensaio baseado em células e western blot (WB). Neste contexto, o estudo da anti-MOG e anti-MBP e seu papel na EM podem ser estudados através da técnica de espectroscopia de força atômica (AFS). Esta é uma técnica altamente sensível que permite a detecção molecular, com a interação de uma ponta funcionalizada de microscópio de força atômica (AFM) com uma amostra, a qual fornece desta forma a força de adesão (Fad) específica para o sistema. Nesta pesquisa, foi inserido na ponta de AFM funcionalizada os peptídeos encefalitogênicos MOG92-106 e MBP85-99, para detectar e estudar os anticorpos específicos IgG anti- MOG92-106 e MBP85-99, no soro e LCR de pacientes na amostra, utilizando a técnica AFS. Sendo assim, este estudo foi realizado de forma inédita utilizando a AFS, auxiliando diretamente na investigação da EM e doenças desmielinizantes relacionadas. / Myelin oligodendrocyte glycoprotein (MOG) and myelin basic protein (MBP) have been implied as the most important target antigens in demyelinating processes of central nervous system (CNS) and the most important antigens candidates whom arised from the animal model for multiple sclerosis (MS), the experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE). The first autoantibodies detected in serum and cerebrospinal fluid (CSF) of MS patients were antibodies against myelin antigens. Differential diagnostic to MS includes the presence of oligoclonal bands (OCBs) in CSF and absence in serum, which demonstrate intrathecal IgG synthesis. Most applied techniques to detection of antibodies nowadays are ELISA, cell-based assay and western blot (WB). In this context, the study of anti-MOG role in e disease may be supported through its detection by atomic force spectroscopy (AFS) technique. AFS is a highly sensitive technique that allows molecular detection as a functionalized atomic force microscope (AFM) tip interacts with the sample, providing the system specific adhesion force (Fad). In this research, it was attached in the functionalized AFM tip the notable encephalitogenic peptides MOG92-106 and MBP85-99 to detect and study the specific antibodies anti-MOG92-106 and anti-MBP85-99 on the sample with AFS technique. Thus, this study was applied for the first time in research with AFS, assisting directly to MS and other demyelinating diseases investigation.

OBJETIVO: avaliar a capacidade do eletrorretinograma de padrão reverso de campo total (PERG) e multifocal (PERGmf) de detectar alterações funcionais da retina em pacientes com afecções desmielinizantes e compressivas da via óptica anterior; estudar a correlação entre as amplitudes do PERG e PERGmf com as espessuras das camadas internas da retina obtidas pela tomografia de coerência óptica (TCO) e com a perda de campo visual avaliada pela perimetria computadorizada padrão (PCP). MÉTODOS: cento e cinquenta e dois olhos de 28 pacientes com esclerose múltipla (EM), 38 com espectro da neuromielite óptica (NMO) com ou sem neurite óptica (NO) prévia e 30 olhos de 26 controles normais foram submetidos ao PERG, à TCO para avaliação da camada de fibras nervosas da retina (CFNR) peripapilar e camadas internas da retina na mácula e à PCP. Os olhos estudados foram divididos em 4 grupos: grupo 1. EM com NO; grupo 2. EM sem NO; grupo 3. NMO; grupo 4. Mielite transversa longitudinal extensa. Os achados foram comparados utilizando-se as equações de estimativas generalizadas. As correlações entre os achados do PERG, da TCO e da PCP foram avaliadas pela correlação de Pearson ou Spearman e pela análise de regressão linear. Para avaliação dos pacientes com doenças compressivas da via óptica anterior, foram estudados 25 olhos de pacientes com defeito campimétrico temporal e atrofia em banda (AB) do nervo óptico decorrente de compressões quiasmáticas já tratadas e 25 olhos de 25 controles normais pelo PERGmf, a TCO e a PCP. As comparações entre olhos com AB e controles foram feitas usando análise de variância (ANOVA). As correlações entre achados do PERGmf, da TCO e da PCP foram avaliadas pela correlação de Pearson ou Spearman e pela análise de regressão linear. RESULTADOS: comparado com controles, as amplitudes do PERG foram significativamente reduzidas em olhos de pacientes com NMO e EM com NO, mas não mostraram diferenças significativas em olhos de pacientes com EM sem NO e mielite transversa longitudinal extensa. Correlações significantes foram encontradas entre os valores de amplitude de N95, a espessura da camada de células ganglionares da retina e a espessura da CFNR peripapilar. As reduções de amplitudes do PERG também foram significativamente associadas à perda de sensibilidade do campo visual. Na avaliação de pacientes com AB do nervo óptico, as amplitudes do PERGmf foram significativamente reduzidas nos quadrantes temporais quando comparados com controles. Não houve diferenças de amplitude nos setores nasais. Correlações significativas foram encontradas entre as amplitudes do PERGmf, a espessura macular total e a CFNR peripapilar no setor temporal e a perda de sensibilidade do campo visual. CONCLUSÕES: O PERG foi capaz de detectar perda funcional em pacientes com EM e NMO com NO prévia e suas amplitudes foram significativamente correlacionadas com a espessura das camadas internas da retina e camada de fibras nervosas peripapilar. As amplitudes do PERGmf foram capazes de demonstrar perda funcional em pacientes com AB do nervo óptico e apresentaram correlações significantes com a perda de sensibilidade do campo visual e as medidas de espessura macular total e da CFNR peripapilar / PURPOSE: To evaluate the ability of full-field and multifocal (mf) pattern electroretinogram (PERG) parameters to detect functional changes of the retina in patients with demyelinating and compressive diseases of the anterior visual pathway; to study the relationship between the PERG (full field and multifocal) amplitudes, optical coherence tomography (OCT)-measured inner retinal layers measurements and visual field sensitivity loss on standard automated perimetry (SAP). METHODS: one hundred fifty-two eyes of 28 patients with multiple sclerosis (MS), 38 with neuromyelitis optica (NMO) spectrum with or without previous episodes of optic neuritis (ON) and 30 eyes of 26 normal controls underwent PERG, OCT macular and peripapillary retinal nerve fiber layer measurements and SAP. The eyes of the patients were divided into 4 groups: group 1. EM with ON; group 2. EM without ON; group 3. NMO; group 4. Longitudinally extensive transverse myelitis (LETM). The findings were compared using the generalized estimating equations (GEE). The correlations between the findings of the PERG, OCT and SAP were assessed by Pearson correlation coefficients or Spearman\'s rank correlation coefficients and linear regression analysis. For evaluation of patients with compressive diseases of the anterior visual pathway, 25 eyes of patients with temporal visual field defect and band atrophy (BA) of the optic nerve due to chiasmal compression and 25 eyes of 25 normal controls were studied by mfPERG, OCT and SAP. Comparisons between BA and control eyes were made using variance analysis (ANOVA). The correlations between the findings mfPERG, OCT and SAP were evaluated by Pearson correlation coefficients or Spearman\'s rank correlation coefficients and linear regression analysis. RESULTS: compared to controls, PERG amplitudes were significantly reduced in eyes of patients with MS with ON and NMO, but not in eyes with MS without ON and longitudinal extensive transverse myelitis. Significant correlations were found between N95 amplitudes values, OCT-measured macular ganglion cell layer thickness, total retinal thickness, and temporal peripapillary RNFL thickness.The reduced mfPERG amplitudes were also significantly associated with loss of visual field sensitivity. In the evaluation of patients with BA of the optic nerve, mfPERG amplitudes were significantly reduced in the temporal quadrants when compared with controls. There were no differences in the amplitudes values in the nasal sectors. Significant correlations were found between mfPERG amplitudes, OCT-measured total macular thickness and peripapillary RNFL in the temporal sector and the loss of sensitivity of the visual field. CONCLUSIONS: full-field PERG measurements were able to detect functional loss in patients with MS and NMO with previous episodes of ON and PERG amplitudes were significantly correlated with inner retinal layers thicknesses and peripapillary RNFL. Multifocal PERG amplitudes were able to demonstrate functional loss in patients with BA of the optic nerve and showed significant correlations with visual field sensitivity loss and OCT-measured total macular and peripapillary RNFL thickness

Made available in DSpace on 2016-04-27T18:47:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Isabella Bastos de Quadros.pdf: 525864 bytes, checksum: 3b2418c0bf5a7af2e07ce0ab5da4f6bc (MD5) Previous issue date: 2012-06-01 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The history of Leide Moreira, with Amyotrophic Lateral Sclerosis and whose eye globe is the single voluntary muscle movement preserved, was used as a metaphor to discuss how inhospitable life conditions may suggest, besides extreme fragility, capacity to modify one‟s life. Although this is about a life experience not belonging exclusively to old age, it may be enhanced in this phase due to proximity to finitude. Reflection on a body beyond the physical body, deconstructing the mind-body dichotomy and, as a result, think old age and longevity without saying no to body changes and human finitude and, through each individual‟s journey, consider the last phase of life, just like all the others, must be vested in both individual and group purposes and meanings, constantly building a personal history together with the hero that lies inside us all.The reflection on the hero‟s journey is what this study is based upon because it emphasizes the fact that crisis need a lonely diving into personal and group unconsciousness which lead to changes, discoveries and, as a consequence, new perception towards the world by seeking a more conciliatory position between consciousness and unconsciousness. A wider horizon and the never seen before, always present throughout life, point out conflicts and inequalities, whose rejuvenated body cannot help to mitigate, on the contrary, it deepens the human abysm between what one wants to be and what one actually is. Fable, myth and poetry itself are means through which human beings trigger their own personal development which are getting more and more neglected nowadays due to reluctance to look beyond rationality. Such a metaphor makes explicit how health does not necessarily mean the elimination of a disease and it shows that there are possibilities to achieve emotional well being and keep on giving meaning to what is there to be lived, despite conflicts inherent to human beings and under any human condition whether in health or in sickness. As for such a destructive phase of life, the whole capability inside it to rebuild or modify should also be considered because a resistant power emerges through it, able to generate a new order of existence. The immovable and unresponsive body, in spite of such important limitations, is still a surface of contact: it can affect and be affected. Leide Moreira‟s journey as a metaphor helps us increase our understanding of what longevity means within the contemporary society and mainly of what the limitations and capacity for reformulation in old age are. Facing the longevity scenery whose experience serves as a guide to events never seen before, it is relevant to consider how far we are preparing ourselves to such extended existence / A história de Leide Moreira, com Esclerose Lateral Amiotrófica e cujo único movimento muscular voluntário preservado é o globo ocular, foi utilizada como metáfora para refletir acerca de como condições inóspitas de vida sugeririam, além de fragilidade extrema, capacidade de reformulação da própria vida. Trata-se de vivência não exclusiva da velhice, mas que pode se potencializar nessa fase pela proximidade com a finitude. Reflexão sobre um corpo para além do físico, desconstruindo a dicotomia corpo-mente e, por meio disso, pensar o envelhecimento e a longevidade sem negar as alterações corporais nem a finitude humana e, pela jornada de cada indivíduo, considerar que a fase última da vida, como todas as demais, precisa ser investida de propósito e significado individual e coletivo, formando incessantemente uma história pessoal em parceria com o herói que nos habita a todos. A reflexão sobre a jornada do herói baseia este estudo justamente por enfatizar que as crises necessitam de um mergulho solitário no inconsciente pessoal e coletivo que promove transformações, descobertas e, consequentemente, novas percepções de mundo a partir da busca de um caminho conciliatório entre consciente e inconsciente. O horizonte mais amplo e o inédito que se faz sempre presente ao longo da vida evidenciam os conflitos e desigualdades, cujo corpo rejuvenescido não ajuda a amenizar, pelo contrário, intensifica o abismo humano entre o que se quer ser e o que se é. A fábula, o mito e a poesia são instrumentos utilizados pelo ser humano como propulsores do seu desenvolvimento pessoal, cada vez mais negligenciados na contemporaneidade por causa da relutância de se enxergar além do racional. Essa metáfora explicita o quanto saúde não significa implicitamente a eliminação da doença, mostrando que há possibilidades apesar dos conflitos inerentes ao ser humano. E em qualquer condição humana de saúde ou doença, de produzir bem-estar emocional e continuar conferindo significado para o que é vivido. Ao considerarmos a faceta destrutiva da vida, é preciso ressaltar toda a capacidade de reconstrução ou de reformulação nela contida porque, por meio dela, emerge um poder que resiste, capaz de gerar nova ordem de existência. O corpo imóvel, inerte. Mas apesar das limitações significativas, continua superfície de contato: afeta e é afetado. A trajetória de Leide Moreira como metáfora ajuda a melhor compreender a condição da longevidade na sociedade contemporânea, principalmente as limitações e capacidade de reformulação na velhice. Considerando o cenário da longevidade, cuja vivência é permeada por acontecimentos inéditos, é relevante pensar até que ponto nos preparamos para uma existência tão alongada

Made available in DSpace on 2016-04-25T19:21:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Gina Corsi Amoroso.pdf: 993941 bytes, checksum: bbe04d47c9d5bbc1e5a41ad8f0d5fd82 (MD5) Previous issue date: 2009-11-18 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The Multiple Sclerosis (MS) is a progressive disease, with no cause and no cure. The health professionals who treat MS people have as a principal role improve their quality of life. By relieving theirs symptoms, getting patient emotionally stronger to help them cope with their disabilities and help then to find better solutions to adapt with physical, emotional and social impairments. As MS has no cause and no cure the MS people can use the religion beliefs as a important tool to cope with MS .Because they can find in religion same reasons for having MS, consolation and courage to deal with theirs impairment . This study has the objective to know the MS people religious beliefs to analyze how it influence in quality of life their quality of life. Methods; open interviews, were used to find out about the religious beliefs and questionnaires Functional Assessment of Multiple Sclerosis (FAMS) and The spiritual/ religious Coping,(SRC) were used to measure their quality of life and the way MS people use their faith to cope with stress. The result show that there is a statistic significant relation between FAMS and SRC. And the type of religious beliefs does not influence in the quality of life. Conclusion; The religions beliefs of MS people in this study showed rich and varied and meaningful and the way that this people can use their faith to cope with stress situations can influence in their quality of life / A Esclerose Múltipla é uma doença progressiva, sem causa definida e sem cura. Os profissionais da área da saúde que tratam pessoas com Esclerose Múltipla têm como principal objetivo ajudá-las a desenvolver a sua qualidade de vida. Como amenizar os sintomas clínicos, fortalecer o/a paciente emocionalmente para que lide com as perdas e buscar soluções que o/a ajudem na adaptação a novas condições físicas, emocionais e sociais. Por não ter causa definida e nem cura, supõe-se que a religião tenha um papel significativo no enfrentamento da Esclerose Múltipla. Os/as portadores/as desta encontram na religião explicação para a doença, consolo e força para enfrentar suas dificuldades do seu dia-a-dia. Este estudo tem como objetivo conhecer a crença religiosa de portadores/as de Esclerose Múltipla que freqüentam a Associação Brasileira de Esclerose Múltipla, localizada na cidade de São Paulo, para após analisar a influência desta na qualidade de vida. Para isto, foi utilizado método qualitativo - por meio de entrevistas abertas e semi-estruturadas, a fim de colher dados sobre a crença religiosa -, associado a método quantitativo - por meio da aplicação dos questionários Functional Assesment of Multiple Sclerosis (FAMS) e Escala de Coping, Religioso- Espiritual (CRE). Os resultados relevantes das análises dos dados qualitativos em cruzamento com os dados quantitativos mostram que há relação significativa entre as escalas FAMS e CRE. Já o tipo de crença religiosa aparentemente não influencia a qualidade de vida de pessoas com EM. Conclui-se que a crença religiosa das pessoas portadoras de Esclerose Múltipla pesquisadas é variável, rica e significativa e que a maneira com que essa crença é utilizada no dia-a-dia para lidar com situações estressantes pode influenciar a qualidade de vida destas pessoas

Introdução: Os mecanismos envolvidos na progressão da doença renal crônica (DRC) independentemente de sua etiologia, não estão totalmente esclarecidos. O controle do fósforo(P) sérico é uma meta essencial a ser alcançada no tratamento de pacientes com DRC. Inicialmente, a importância deste controle era atribuída a participação do P na patogênese do hiperparatireoidismo secundário. Atualmente sabe-se que a hiperfosfatemia aumenta a mortalidade desses pacientes. Distúrbios do metabolismo mineral participam da progressão da DRC, porém os mecanismos envolvidos na fisiopatologia, não foram esclarecidos. Objetivo: Avaliar o efeito isolado da sobrecarga de P e de diferentes concentrações de paratormônio (PTH) na progressão da doença renal em ratos urêmicos. Materiais e métodos: Ratos Wistar machos adultos foram submetidos à paratireoidectomia (PTX) e nefrectomia 5/6 (NX), a seguir implantamos mini bombas osmóticas com diferentes concentrações de PTH ou veículo. Realizamos 2 experimentos. Experimento 1: Animais que receberam dietas com diferentes conteúdos de P (1,2% ou 0,2% dieta rica e pobre respectivamente).Estes animais receberam infusão fisiológica de PTH (1-34 rat PTH 0,022/100g/h). No experimento 2, os animais receberam as mesmas dietas porém infusão elevada de PTH (1-34 rat PTH 0,11/100g/h). Os animais controles (grupo controle e sham) foram os mesmos para os dois experimentos. A alimentação dos animais foi controlada por pair feeding e a pressão arterial caudal (PAC) foi aferida semanalmente. Após 8 semanas os animais foram sacrificados.Creatinina corrigida por peso, P, cálcio,PTH e hematócrito foram analisados. No tecido renal quantificamos a fibrose intersticial (FI), esclerose glomerular(EG) e o número de células apoptóticas. Avaliamos, no tecido renal a expressão de ED-1, alfa-actina, angiotensina II e TGF-beta. Resultados: Animais NX que receberam infusão fisiológica de PTH e dieta rica em P desenvolveram mais FI, EG, e maior expressão de ED-1. Os animais que receberam infusão elevada de PTH apresentaram maiores níveis tensionais. Foi demonstrado uma correlação entre os marcadores inflamatórios (TGF-beta e Angio II) confirmando a associação entre estes fatores no processo de fibrogênese. O número de células apoptóticas foi maior nos grupos NX que receberam PTH em concentração elevada. Conclusão: Neste estudo, a sobrecarga de P atuou na progressão da DRC ativando principalmente vias inflamatórias e o excesso de PTH agiu piorando a hipertensão arterial. / Introduction: The mechanisms involved in the progression of chronic kidney disease (CKD), regardless of its etiology, have yet to be well elucidated. Serum phosphorus control is an essential target to be achieved in the treatment of patients with CKD. Initially, the importance of this control was attributed to the participation of phosphorus (P) in the pathogenesis of secondary hyperparathyroidism. It is currently known that hyperphosphatemia increases mortality in these patients. Disturbances of the mineral metabolism participate in the progression of CKD; however, the mechanisms involved in pathophysiology remain unclear. Objective: To evaluate the isolated effect of phosphorus overload and different PTH concentrations in the progression of kidney disease in uremic rats. Materials and methods: Adult male Wistar rats were submitted to parathyroidectomy and nephrectomy 5/6; subsequently, we implanted mini osmotic pumps with different concentrations of PTH or vehicle. We carried out 2 experiments. Experiment 1: Animals who received diets with different P contents (1.2% or 0.2% rich and poor diet, respectively). These animals received infusion of PTH solution (1-34 rat PTH 0.022/100g/h). In experiment 2, the animals received the same diets; however, with high PTH infusion (1-34 rat PTH 0.11/100g/h). Control animals (control group and sham) were the same for both experiments. Food intake of the animals was controlled by pair feeding, and caudal artery pressure (CAP) was measured weekly. After 8 weeks, the animals were sacrificed. Creatinine, phosphorus, calcium, PTH and hematocrit were analyzed. Interstitial fibrosis (IF), glomerular sclerosis (GS), and number of apoptotic cells were quantified in the renal tissue. ED-1 expression, alfa-actin, angiotensin II and TGF-beta were evaluated in the renal tissue, as well. Results: NX animals that received infusion of PTH solution and P-rich diet developed more IF and GS, and greater ED-1 expression. The animals that received high PTH infusion presented higher tensional levels. A correlation was demonstrated between inflammatory markers (TGF-beta and Angio II) confirming the association between these factors in the fibrogenesis process. The number of apoptotic cells was higher in NX groups that received PTH in high concentration. Conclusion: In this study, phosphorus overload acted in the progression of CKD activating inflammatory pathways; in addition, excess PTH worsened arterial hypertension.

O transplante autólogo de células-tronco hematopoéticas (TACTH) tem se mostrado mais eficaz como tratamento das formas graves da esclerose sistêmica (ES) do que a imunossupressão convencional (IS), porém os mecanismos imunológicos envolvidos com a resposta terapêutica não estão completamente elucidados. Células mononucleares do sangue periférico e soro/plasma foram coletados de 31 pacientes com ES antes e semestralmente, até 36 meses pós-transplante, e de 16 pacientes com ES não-transplantados tratados com IS. A função tímica foi avaliada por RT-qPCR dos valores de b- e signal joint (sj)-T-cell receptor excision circles (TREC), sendo a taxa de proliferação intratímica (n) calculada pela fórmula: n=LOG(sjTREC/bTREC)/LOG2. A história replicativa das células B e a função medular foram quantificadas pelos valores de coding-joint (Cj) e sj-kappa-deleting recombination excision circles (sjKREC) e a taxa de proliferação das células B no sangue periférico (N) foi calculada pela fórmula: N=LOG(Cj/sjKREC)/LOG2. O comprimento telomérico foi avaliado por RT-qPCR e estimado pela razão T/S (Telomere repeat copy number/Single-copy gene copy number). As células recém-emigradas do timo (RET) CD3+CD4+CD31+CD45RA+, T reguladoras (Tregs) CD4+CD25hiFoxP3+(GITR+/CTLA-4+), naïve CD19+CD27-IgD+, Bm2 CD19+CD38lowIgD+, B reguladoras (Bregs) CD19+CD24hiCD38hi, senescentes CD8+CD28- CD57+ e exaustas PD1+ foram quantificadas por citometria de fluxo. O TCR foi sequenciado por sequenciamento de nova geração e o perfil de citocinas séricas inflamatórias e pró- fibróticas foi avaliado por CBA-Flex e ELISA. Observamos que os valores de sjTREC e bTREC diminuíram aos 6 meses pós-TACTH, retornando a valores basais aos 12 meses, correlacionando com o número de RET e promovendo maior diversidade do TCR. Não houve mudança na taxa de divisão de timócitos. A contagem de Tregs aumentou aos 12 meses pósTACTH, correlacionando com valores de sjTREC e apresentando maior expressão de GITR e CTLA-4. A partir dos 12 meses, até o final do acompanhamento, os valores de sjKREC aumentaram, enquanto que os de Cj permaneceram estáveis, correlacionando com aumento da contagem de células B naïve e Bm2, e resultando em uma menor taxa de divisão de células B. Houve aumento de Bregs de 6 meses a um ano após o TACTH, cujos níveis correlacionaramse com aqueles de sjKREC, e apresentando maior produção de IL-10 mediante estímulo com CPG±CD40L do que antes do transplante. O comprimento telomérico diminuiu aos 6 meses pós-TACTH e correlacionou-se com níveis elevados de células senescentes que expressavam FoxP3, aliado a um aumento de expressão de PD1 pelas células T e redução dos níveis séricos de IL-6, IL-1b e proteína C reativa. Seis pacientes recaíram após o transplante, apresentando menor expressão de FoxP3, GITR e CTLA-4 pelas Tregs, diminuição da contagem de Breg e da diversidade do TCR. Adicionalmente, a remissão clínica foi associada a maior expressão de PD1 por células T e B e baixos níveis séricos de TGF-b, IL-6, IL-1b, IL-17A, MIP-1a, GCSF e IL-12. Portanto, o aumento de células T e B reguladoras geradas de novo pós-TACTH, associado à renovação do repertório de células T, alta expressão de PD1 e baixos níveis séricos de mediadores inflamatórios e prófibróticos, estão relacionadas com a resposta clínica dos pacientes com ES ao transplante. / Autologous hematopoietic stem cell transplantation (AHSCT) is more effective for patients with severe systemic sclerosis (SSc) than conventional immunosuppression (IS). However, the immunological mechanisms associated with the therapeutic efficacy of AHSCT are not fully elucidated. Peripheral blood mononuclear cells and serum/plasma were collected from 31 SSc patients before and semiannually, until 36 months post-transplant, and from 16 nontransplanted SSc patients treated with IS. Thymic function was measured by RT-qPCR quantification of ?- and signal joint (sj)-T-cell receptor excision circles (sjTREC) and intrathymic T-cell division (n) was calculated by the formula: n=LOG(sjTREC/?TREC)/LOG2. Bcell replication history and bone marrow function were assessed by coding-joint (Cj) and sjkappa-deleting recombination excision circles (sjKREC). B-cell divisions in the peripheral blood (N) were calculated by the formula: N=LOG(Cj/sjKREC)/LOG2. CD3+CD4+CD31+CD45RA+ recent thymic emigrants (RTE), CD4+CD25hiFoxP3+ (GITR+/CTLA-4+) regulatory T-cells (Tregs), CD19+CD27-IgD+ naïve B-cells, CD19+CD38lowIgD+ Bm2 B-cells, CD19+CD24hiCD38hi regulatory B-cells (Bregs), CD8+CD28-CD57+ senescent cells and PD1+ exhausted cells were quantified by FACS (fluorescence-activated cell sorting). The T-cell receptor (TCR) was sequenced by New Generation Sequencing and the profile of inflammatory and pro-fibrotic serum cytokines was evaluated by CBA-Flex (cytometric bead-array) and ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay). sjTREC and ?TREC values decreased at 6 months post-AHSCT, returning to pretransplant values at 12 months, correlating with RTE counts and associated with higher diversity of the TCR. There was no change in thymocyte division rates. At 12 months postAHSCT, Treg counts increased and correlated with sjTREC values, presenting increased expression of GITR and CTLA-4 when compared to pre-transplant levels. From 12 months until the end of follow-up, sjKREC values increased, while those of Cj remained stable, correlating with increased counts of naïve and Bm2 B-cells, resulting in reduced rate of B-cell division. There was an increase of Breg frequency from 6-months until one-year after AHSCT, correlating with sjKREC values and presenting higher IL-10 production after stimulation with CPG±CD40L than before transplantation. Telomere length decreased at 6 months post-transplant and correlated with elevated levels of FoxP3-expressing senescent cells, together with increased expression of PD1 by T-cells and reduced serum IL-6, IL-1b and C-reactive protein levels. Six patients relapsed after transplantation, presenting lower expression of FoxP3, GITR, CTLA-4 by Tregs, decreased Breg counts and reduced TCR diversity. In addition, clinical remission was associated with increased PD1 expression by T and B cells and low serum levels of TGF-?, IL-6, IL-1, IL-17A, MIP-1, G-CSF and IL-12. Therefore, newly-generated regulatory T and B cells after AHSCT, associated with T-cell repertoire renewal, high PD1 expression and low serum levels of inflammatory and profibrotic mediators associate with clinical outcomes of SSc patients after AHSCT.

Submitted by Setor de Tratamento da Informa??o - BC/PUCRS (tede2@pucrs.br) on 2016-06-22T19:31:46Z No. of bitstreams: 1 DIS_PEDRO_COSTA_KLEIN_COMPLETO.pdf: 6980963 bytes, checksum: a6ac65c82ee1febce8c50b5771036f44 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-22T19:31:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DIS_PEDRO_COSTA_KLEIN_COMPLETO.pdf: 6980963 bytes, checksum: a6ac65c82ee1febce8c50b5771036f44 (MD5) Previous issue date: 2016-03-29 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / The white matter lesion detection is an important procedure for the diagnostic of Multiple Sclerosis in patients. As important as the detection, monitoring the progression of the disease, by calculating the volumes of the lesions, also shows itself necessary. In clinical practice, this procedure is done manually by a professional or, in many cases, only a qualitative analysis is made. The manual nature of this procedure implies in a series of deficiencies on the procedure, such as variations between diagnoses from different experts on the same subject and variation between diagnostics from the same expert to the same subject at distinct moments. Yet, the manual procedure shows itself time consuming, due the large amount of slices acquired by exam and the need for a careful analysis from the expert to quantify the lesions. In order to avoid these problems, automatic approaches for Multiple Sclerosis lesion detection and quantification using computer aided diagnostic systems are proposed. These methods, mostly, demand for the acquisition of an extra modality of magnetic resonance images, where the anatomy of the brain is evidenced, thus allowing the white matter lesion identification. This additional exam goes beyond the scope of the traditional clinical practice, which implies in additional costs and prevents the method of being applied to old exams, for monitoring the disease progression. This work proposes a method for automatic detection and segmentation of Multiple Sclerosis Lesions that uses only the modality of magnetic resonance exam adopted for clinical practice, using probabilistic atlases spatially aligned to the patient?s exams for identifying the brain structures. The results obtained through the usage of the method into a set of 24 patients and 6 healthy controls of different ages, showed that the developed method is capable of detecting white matter lesions with some precision. However, the quantification of these lesions was impaired mostly due divergences between the white matter probabilistic atlas and the real white matter region of the exams. / A detec??o de les?es de subst?ncia branca ? um procedimento importante para o diagn?stico da Esclerose M?ltipla em pacientes. T?o importante quanto a detec??o, o acompanhamento da progress?o da doen?a, por meio do c?lculo da volumetria destas les?es, tamb?m se mostra necess?rio. Na pr?tica cl?nica, este procedimento ? realizado manualmente por um profissional, ou em muitas vezes ? somente realizada uma an?lise qualitativa. O car?ter manual deste procedimento implica em uma s?rie de defici?ncias no procedimento como varia??es entre diagn?sticos de diferentes especialistas para um mesmo paciente e varia??es entre diagn?sticos de um mesmo especialista para um mesmo paciente em momentos distintos. Ainda, a tarefa manual mostra-se muito custosa em tempo, devido ao grande n?mero de fatias adquiridas por exame e a necessidade de uma an?lise cuidadosa do especialista para a quantifica??o das les?es. Com o intuito de evitar estes problemas, abordagens autom?ticas para detec??o e quantifica??o de les?es de Esclerose M?ltipla atrav?s do uso de sistemas de diagn?stico auxiliado por computador v?m sendo propostas. Estes m?todos autom?ticos, em sua maioria, demandam a aquisi??o de uma modalidade adicional de imagem de resson?ncia magn?tica, na qual ficam evidenciadas as estruturas anat?micas do c?rebro, permitindo assim a identifica??o de les?es em subst?ncia branca. Este exame adicional foge ao escopo tradicional da pr?tica cl?nica, o que implica em custos adicionais e impede que estes m?todos sejam aplicados em exames antigos, para acompanhamento da progress?o da doen?a. Este trabalho prop?e um m?todo para detec??o e segmenta??o autom?tica de les?es de Esclerose M?ltipla que utiliza apenas a modalidade de exame de resson?ncia magn?tica utilizada na pr?tica cl?nica, utilizando para identifica??o das estruturas cerebrais atlas probabil?sticos alinhados ao espa?o do paciente. Os resultados obtidos atrav?s do emprego do m?todo em um conjunto de 24 pacientes e 6 controles de diferentes faixas et?rias, mostram que o m?todo desenvolvido ? capaz de detectar les?es de subst?ncia branca com certa precis?o. Entretanto a quantifica??o destas les?es mostrou-se prejudicada principalmente por diverg?ncias entre o atlas probabil?stico de subst?ncia branca e a regi?o real de subst?ncia branca nos exames.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Comparar e caracterizar, por intermédio dos protocolos de avaliação da deglutição, os achados fonoaudiológicos na fase preparatória oral e oral da deglutição nos pacientes avaliados nos dois grupos de doenças (DM/PM e ES). Foram identificados 80 pacientes com diagnóstico de dermatopolimiosite e esclerose sistêmica, de ambos os sexos, atendidos no ambulatório de Colagenoses do serviço de Reumatologia do Hospital Universitário Pedro Ernesto (HUPE-UERJ). Foram excluídos os indivíduos abaixo de 18 anos e acima de 60 anos (24) e com outras doenças e/ ou comorbidades. Dos 56 pacientes restantes, 73,2% (41) apresentavam ES e 26,8% (15) DM/PM. Após a assinatura do termo de consentimento livre e esclarecido, os indivíduos foram submetidos à avaliação clínica estrutural e funcional da deglutição pelo pesquisador, que é fonoaudiólogo. O estudo revelou elevada prevalência de alterações oromiofuncionais e da deglutição na fase preparatória oral e oral propriamente dita nos pacientes com ES para a consistência sólida, que geram disfagia oral e alta, e não somente uma disfagia baixa como tem sido apresentado na literatura médica. O estudo reforçou que as mulheres são as mais acometidas pelas doenças autoimunes e que os homens são em menor número. O fonoaudiólogo deve ser parte integrante da equipe interdisciplinar que atende esses pacientes. / Compare and Characterize by means of evaluation protocols of swallowing, speech-language findings in oral and oral preparatory phase of swallowing in patients evaluated in both groups of diseases (DM / PM and SS). We identified 80 patients with dermatomyositis and systemic sclerosis, of both sexes, Collagen outpatient clinic of the Rheumatology Service of Hospital Universitário Pedro Ernesto (HUPE-UERJ). We excluded individuals below 18 years and above 60 years (24) and other diseases and / or comorbidities. Of the 56 remaining patients, 73.2% (41) had SS and 26.8% (15) DM / PM. After signing an informed consent, subjects underwent structural and functional clinical assessment of swallowing, the researcher who is a speech and audiologist therapist. The study revealed high prevalence of oromiofunctionals and oral phase swallowing in patients with SS to solid food dysphagia and oral generating not only a high and low dysphagia as has been shown in medical literature. The study reinforced that women are more affected by autoimmune diseases, and that men are fewer. The speech and audiology therapist must be part of the interdisciplinary team that deals with these patients

Recentemente, descobrimos que coelhos, Nova Zelândia, imunizados com colágeno tipo V humano mais adjuvante de Freund apresentavam fibrose e vasculite de órgãos normalmente afetados na esclerose sistêmica. Deste modo, nós estudamos o processo de fibrilogênese para identificar possíveis fatores envolvidos na alteração do remodelamento observado neste modelo de esclerodermia. Adicionalmente, fizemos uma comparação preliminar com pele humana obtida de pacientes com esclerodermia (n=3). Coelhos fêmeas, Nova Zelândia (n=14), foram imunizados subcutaneamente com duas doses de 1mg de colágeno V mais adjuvante completo de Freund, com intervalo de 30 dias, seguido de duas imunizações em adjuvante incompleto de Freund, via intramuscular, com intervalo de 15 dias. Os animais do grupo controle (n- 14) foram inoculados somente com adjuvante completo e incompleto de Freund, nas mesmas condições dos imunizados. Foram realizadas análises histológicas das peles dos animais e pacientes através da coloração com tricrômico de Masson e imunofluorescêcia, a fim de detectar fibras de colágeno e interação dos colágenos I, III e V. A análise da pele dos animais demonstrou depósito precoce de fibras de colágeno na derme após 7 dias da sensibilização, com aumento destes depósitos após 75 e 120 dias respectivamente. Depósito de colágeno na pele e atrofia de anexos foram mais intensos nos animais sacrificados em 120 dias e se correlacionaram com a quantidade aumentada de colágeno. Surpreendentemente, o colágeno V foi expresso em animais e pacientes, formando fibras densas e atípicas na derme. Sugerimos que esta expressão anômala de colágeno V, morfologicamente diferente, possa justificar o remodelamento observado na placa esclerodérmica / Recently, we discovered that New Zealand rabbits immunized with human type V collagen plus Freund`s adjuvant presented fibrosis and vasculitis of organs usually affected in systemic sclerosis. In this way, we studied the fibrillogenesis process regarding to identify any possible factor involved in altered remodeling observed in this scleroderma-like model. Additionally, we done a very preliminary comparison with human skins obtained from scleroderma patients (N=3). Female New Zealand rabbits (N=14) were immunized subcutaneously with two doses of 1mg collagen V plus complete Freunds adjuvant at a 30 days interval, followed by two additional intramuscular booster immunizations in incomplete Freunds adjuvant at a 15-day interval. Animals from control group (N=14), were only inoculated with complete and incomplete Freunds adjuvant given at same conditions of collagen type V group. Histological analysis of skins from animals and patients were done by Massons trichrome staining, and immunofluorescence method used to detect collagen fibers and interactions of types I, III and V collagen in the remodeling process. The analysis of animal skins showed precocious collagen fibril deposits in the dermis after 7 days of immunization and increase of this process in 75 and 120 days. Skin collagen deposit and atrophy of annexes were progressively more intense in late sacrificed animals and correlated with increased amount of collagen deposition. Surprisingly, type V collagen was over expressed both in animals and patients, forming dense and atypical collagen fibers in the dermis. We suggest that this anomalous expression of morphologically different type V collagen could justify the remodeling observed in scleroderma plaque

Introdução: A imunização de coelhos saudáveis com colágeno do tipo V (COLV) reproduz as principais manifestações da esclerose sistêmica (ES), incluindo fibrose, vasculopatia e produção de autoanticorpos específicos da doença. Estudos preliminares mostraram que, tanto na derme de animais imunizados com COLV (COLV-IM), como na derme de pacientes com ES, observa-se deposição aumentada de COLV anômalo, mas não se sabe qual a relevância clínica deste achado. O remodelamento da matriz extracelular é precoce nos animais COLV-IM, ocorrendo já no sétimo dia após a imunização, o que sugere que o COLV esteja relacionado com a injúria endotelial, evento primário envolvido na patogênese da ES. Desta forma, os objetivos do presente estudo foram avaliar a expressão de COLV na derme de controles saudáveis e de pacientes com ES e sua correlação com espessamento cutâneo, atividade e duração da doença; assim como pesquisar uma possível associação entre a deposição deste colágeno na derme com a expressão de marcadores de apoptose e de ativação endotelial em pacientes e no modelo animal induzido pela imunização com COLV. Pacientes e Métodos: Biópsias de pele de pacientes com ES (N=18, 6 com doença precoce e 12 com doença tardia) e de controles (N=10) pareados por idade e sexo, assim como biópsias de pele de coelhos imunizados com COLV + adjuvante de Freund (COV-IM, N=6) ou adjuvante de Freund (N=6) foram avaliadas. Nos pacientes com ES, o espessamento cutâneo foi avaliado por meio do escore de Rodnan Modificado (MRSS) e a atividade da doença foi calculada pelo índice de atividade de Valentini. Para realizar a quantificação por histomorfometria, o COLV na derme foi identificado por imunofluorescência. Caspase-3, endotelina-1, CTGF, TGF e VEGF nas células endoteliais dérmicas foram marcados por imunohistoquímica. Nos pacientes e nos controles, o COLV proveniente da cultura de fibroblastos dérmicos foi quantificado por PCR RT em tempo real e caracterizado por eletroforese, imunoblotting e reconstrução tridimensional, por meio da microscopia confocal. Resultados: O depósito de COLV foi maior na derme de pacientes com doença precoce, quando comparados aos controles e aos pacientes com doença tardia. A atividade e a duração da ES estiveram associadas com o depósito de COLV. A expressão de RNA mensageiro das cadeias COLV1 COLV2 foi aumentada em relação aos controles e a reconstrução tridimensional confirmou a presença de fibras anômalas de COLV. Observou-se maior expressão de caspase-3, endotelina-1, CTGF, TGF e VEGF nas células endoteliais dos pacientes com ES, quando comparados aos controles. Houve correlação positiva entre o depósito de COLV e a expressão de caspase-3, endotelina-1 e CTGF. Ao comparar-se os coelhos COLV-IM com os controles, observou-se aumento significativo da expressão de COLV aos 7 dias e de endotelina-1 aos 210 dias após a imunização. Embora de maneira não significativa, verificou-se maior expressão de caspase-3, CTGF e VEGF nos animais COLV-IM e, quando os animais foram comparados ao longo do tempo, percebeu-se maior expressão de COLV no sétimo dia após a imunização na derme dos animais COLV-IM, diminuindo no trigésimo dia e voltando a subir aos 75 dias e aos 210 dias. A caspase-3 e a endotelina-1 comportaram-se de maneira semelhante. Conclusão: Estes resultados sugerem que o COLV possa agir como um possível gatilho envolvido na patogênese da ES, agindo como um indutor de ativação e de apoptose endotelial, que por sua vez poderia resultar em maior expressão de COLV, perpetuando o processo de remodelamento observado na pele dos pacientes com ES / Introduction: The immunization of healthy rabbits with type V collagen (COLV) reproduces the main characteristics of systemic sclerosis (SSc), such as fibrosis, vasculopathy and specific auto-antibodies. Preliminary studies demonstrated that both COLV-immunized rabbits (COLV-IM) and SSc patients exhibit increased expression of abnormal COLV in the dermis, but the clinical relevance of this finding is unknown. The remodeling of the extracellular matrix is an early event in COLV-IM rabbits that can be detected by the seventh day after immunization; this observation suggests that COLV is involved in endothelial injury, one of the first manifestations of the disease. Thus, the objectives of this study were to evaluate COLV expression in the dermis of healthy controls and SSc patients and to determine the correlation of this expression with skin thickness, disease activity and duration and search for a possible association between this collagen with apoptosis and activation of endothelial cells markers in patients and in animal model induced by immunization with COLV. Patients and Methods: Skin biopsies from 18 patients (6 early-stage and 12 late-stage) and 10 healthy controls as well as skin biopsies from rabbits immunized with COLV (COLV-IM) and Freund adjuvant (N=6) or Freund adjuvant alone (N=6) were evaluated. Skin thickening assessment was performed with the Modified Rodnan Skin Score (MRSS), and activity was calculated using the Valentini Disease Activity Index. To perform quantification by histomorphometry, COLV was identified by immunofluorescence, and caspase-3, endothelin-1, CTGF, TGF and VEGF in dermal endothelial cells were labeled by immunohistochemistry. In SSc patients and healthy controls, COLV from dermal fibroblast culture was quantified by real-time RT-PCR and characterized by electrophoresis, immunoblotting and tridimensional reconstruction by confocal microscopy. Results: COLV deposition was increased in the dermis of the patients with early disease compared with the healthy controls and the patients with late disease. SSc activity and disease duration were associated with dermal COLV deposition. COLV1 and COLV2 mRNA expression levels were higher in SSc, and a tridimensional reconstruction of SSc dermal heterotypic fibers confirmed the presence of abnormal COLV. The dermal endothelial cell expression of caspase-3, endothelin-1, CTGF, TGF and VEGF was higher in the SSc patients than in the controls. There was a positive correlation between COLV deposition and caspase-3, endothelin-1 and CTGF expression. When the COLV-IM rabbits were compared with the controls, there was a significant increase in the expression of COLV 7 days after the immunization and a significant increase in the expression of endothelin-1 210 days after the immunization. The expression of caspase-3, CTGF and VEGF was higher in the COLV-IM animals than in the control rabbits, although not significantly, and when the rabbits were compared over time, the expression of COLV was higher in the dermis of the COLV-IM animals 7 days after immunization, decreasing at 30 days and increasing again at 75 and 210 days. Caspase-3 and endothelin-1 exhibited similar behavior. Conclusion: these results suggest that COLV can be a possible trigger involved in the pathogenesis of SSc, acting as an inducer of endothelial apoptosis and activation that could result in higher expression of COLV, perpetuating the remodeling process observed in SSc skin