A estrongiloidíase é a infecção parasitária causada pelo nematódeo Strongyloides stercoralis. O diagnóstico definitivo é realizado pela visualização de larvas, principalmente nas fezes. Porém as técnicas parasitológicas têm baixa sensibilidade. As técnicas sorológicas apresentam-se como importante alternativa diagnóstica. Pesquisas apontam para a utilização de antígenos heterólogos solúveis, principalmente de Strongyloides venezuelensis. A identificação e caracterização dos antígenos de membrana podem fornecer fonte alternativa de antígenos e assim auxiliar o desenvolvimento das técnicas imunológicas. O presente trabalho teve como objetivo a avaliação das técnicas ELISA e WB frente a diferentes frações antigênicas de larvas filarioides de S. venezuelensis. Foram utilizadas amostras de sangue e fezes de 92 indivíduos, 20 indivíduos com estrongiloidíase (grupo I), 32 indivíduos com outras parasitoses (grupo II) e 40 indivíduos negativos (grupo III) pelos métodos de Lutz, cultura em placa de ágar e Rugai. Para preparação dos antígenos foram utilizadas larvas infectantes obtidas a partir de ratos infectados experimentalmente com S. venezuelensis. Seis frações antigênicas foram preparadas: frações salinas solúveis e de membrana (PBS 0,01M pH 7,2 e SDS 1%, SS e MS; Tris-HCl 25mM pH 7,5 e CHAPS 1%, ST e MT, respectivamente) e frações alcalinas solúvel e de membrana (NaOH 0,15M e SDS 1%, SA e MA, respectivamente). Para a técnica ELISA foram utilizadas placas sensibilizadas com 10ug/mL de antígeno, soro dos indivíduos diluídos 1:200 em PBS 0,05% Tween 3% de leite (PBSTM) e o conjugado (anti IgG-humana peroxidase) em PBSTM. As amostras foram consideradas positivas quando o Índice ELISA foi maior que 1. Para a técnica de WB os soros foram diluídos 1:100 em Tris-HCl 5% de leite (TM) e o conjugado (anti IgG-humana peroxidase) em TM. Após as técnicas sorológicas foram determinadas os parâmetros de diagnóstico pela curva ROC como sensibilidade (SE), especificidade (ES), Likelihood ratio (LR) além da determinação da acurácia diagnóstica (AC) e do índice Kappa (k). A técnica ELISA destacou as frações de membrana com melhor desempenho em relação aos parêmetros diagnósticos estudados (SE 95%, ES 94,4%, AC 94,8%, LR 17,1, k 0,848). O WB revelou componentes antigênicos imunodominantes variando de 260-10kDa, mas destacam-se as frações de 40-35kDa mais frequentes em todas frações antigênicas. Pela técnica de WB, a fração ST apresentou melhor desempenho em relação aos parêmetros diagnósticos estudados (SE 100%, ES 93,1%, AC 94,5, LR 14,4,k 0,854). A utilização das frações de membrana no imunodiagnóstico da estrongiloidíase humana torna-se fonte acessível e eficaz em relação às frações purificadas, não necessitando de gastos complementares para sua obtenção / Strongyloidiasis is a parasitic infection caused by a nematode Strongyloides stercoralis. The definitive diagnosis is made by the larvae visualization in stool samples. However parasitological techniques have low sensitivity. Serological techniques became as suitable diagnostic alternative. Research indicates for the soluble heterologous antigen utilization, mainly Strongyloides venezuelensis. Identification and characterization of membrane antigen may constitute an alternative source of antigen and then assist the development of serological techniques. The aim of this study was evaluate ELISA and WB techniques behind different antigenic fractions of S. venezuelensis´ infective larvae. A total of 92 serum and stool samples was analyzed, 20 from individuals with strongyloidisis (group 1), 32 with other parasitic diseases (group 2) and 40 from individuals with negative coproparasitology (group 3) using Lutz, agar plate culture and Rugai methods. For the antigen preparation infective larvae of S. venezuelensis from experimental infected rats were employed. Six antigenic fractions were prepareted: saline soluble and from membrane fractions (0.01M PBS pH 7.2, and 1% SDS, SS and MS; 25mM Tris-HCl pH 7.5, 1% CHAPS, MT and ST, respectively) and alkaline soluble and membrane fractions (0.15 M NaOH and 1% SDS, SA and MA, respectively). For ELISA technique, plates were sensitized with 10 ug/mL of antigen, serum samples were diluted 1:200 in 0.05% Tween in PBS 3% milk (PBSTM) and conjugate (anti-human IgG peroxidase) in PBSTM. Positive samples were considered when ELISA index was greater than 1. To WB technique, serum samples were diluted 1:100 in Tris-HCl 5% milk (TM) and conjugate (anti-human IgG peroxidase) in the TM. After serological techniques diagnostics parameters were determined by ROC curve how sensitivity (SE), specificity (ES), Likelihood ratio (LR) and determination of diagnostic accuracy (AC) and Kappa (k) index. ELISA technique highlighted the membrane fractions with better performance compared to parameters diagnoses studied (95% SE, 94.4% ES, 94.8% AC, 17.1 LR, 0.848 k). The WB revealed immunodominant antigenic components ranging from 260-10kDa, but there are the fractions of 40-35kDa more frequent in all antigenic fractions. WB technique showed ST fraction better performance in relation to the diagnostic parameters (100% SE, 93.1% ES, 94.5% AC, 14.4 LR, 0.854 k). Membrane fractions in the immunodiagnosis of human strongyloidiasis become an accessible and effective source of antigens in relation to the purified fractions, requiring no additional expense to obtain it

Estrongiloidíase é a infecção parasitária causada pelo nematódeo Strongyloides stercoralis. Em indivíduos imunocompetentes cursa de forma crônica e assintomática na maioria dos casos; entretanto em imunocomprometidos pode assumir as formas graves como a hiperinfecção e/ou estrongiloidíase disseminada. Diante da baixa sensibilidade do diagnóstico parasitológico, vêm sendo realizadas pesquisas envolvendo o imunodiagnóstico, sobretudo voltadas para variações na obtenção das frações antigênicas heterólogas utilizando Strongyloides venezulensis como fonte de antígeno. O presente trabalho teve como objetivo aprimorar o diagnóstico sorológico da estrongiloidíase humana utilizando técnicas imunoproteômicas. Foram utilizadas amostras de fezes e soro de indivíduos imunocompetentes, divididos em três grupos de acordo com o resultado do exame parasitológico (P: positivos para S. stercoralis; OP: com outras parasitoses; N: negativos para quaisquer parasitos ou comensais) e imunocomprometidos divididos em dois grupos de acordo com o resultado do exame parasitológico (S+ID: positivos para S. stercoralis e S-ID: negativos para S. stercoralis ou qualquer parasito). As amostras de soro dos cinco grupos de pacientes foram submetidas a testes sorológicos a partir das frações antigênicas heterólogas de S. venezuelensis solúvel (TS) e de membrana (TM) utilizando as técnicas ELISA, DOT ELISA e Western-blotting. O ELISA apresentou 95% de sensibilidade em ambas frações antigênicas e 91,8% e 93,8% de especificidade para TS e TM, respectivamente. A técnica foi capaz de detectar anticorpos anti-Strongyloides em 34,4% e 28,1% em pacientes do grupo S+ID utilizando os antígenos TS e TM, respectivamente. O DOT ELISA foi executado somente com a fração TM e apresentou 95% de sensibilidade e 85,7% de especificidade detectando 28,1% de positividade no grupo S+ID. A banda de 40-35 KDa foi a única frequente em todos indivíduos do grupo P e a mais frequente em pacientes S+ID (62,5% para TS e 53,1% para TM). Géis réplicas foram realizados, excisados nas regiões de identificação proteica e submetidos a identificação de proteínas por espectrometria de massas. As proteínas mais abundantes nas frações antigênicas TS e TM foram actina e galectina. A fração TS foi purificada em coluna de afinidade para galectina, dada sua capacidade de modulação do sistema imunológico. As frações não ligada (NL) e galectina (Gal) foram utilizadas como antígenos na técnica ELISA apresentando 90% de sensibilidade e 89,8 e 75% de especificidade para NL e Gal, respectivamente. Foram positivos no ELISA 34,4% e 18,1% das amostras do grupo S+ID utilizando as frações NL e Gal, respectivamente. As técnicas sorológicas utilizando variações antigênicas constituem ferramentas alternativas importantes de diagnósticos que podem ser aplicadas à estrongiloidíase humana, sobretudo na população imunocomprometida / Strongyloidiasis is a parasitic infection caused by nematode Strongyloides stercoralis. In immunocompetent patients, it is chronic and asymptomatic in the most of cases. However, in immunocompromised patients, it can take on severe forms such as hyperinfection and / or disseminated strongyloidiasis. Due to the parasitological diagnosis\'s low sensitivity, research involving the immunoassay has been carried out, primarily focused on changes in the heterologous antigenic fractions using Strongyloides venezulensis as a source of antigen. The present work aimed to improve the serological diagnosis of human strongyloidiasis using immunoproteomic techniques. Feces and sera samples from immunocompetent patients were used and divided into three groups according to parasitological examination result (P: positive for S. stercoralis, OP: with other parasites, N: negative for any parasites or commensal). Samples from immunocompromised patients were divided into two groups according to the parasitological examination result (S+ID: positive for S. stercoralis and S-ID: negative for S. stercoralis or any parasite). Serum samples from the five groups of patients were submitted to serological tests by S. venezuelensis soluble (TS) and from membrane (TM) heterologous antigenic fractions by ELISA, DOT ELISA and Western blotting techniques. The ELISA test showed 95% sensitivity in both antigenic fractions and 91.8% and 93.8% specificity for TS and TM, respectively. This technique was able to detect anti-Strongyloides antibodies in 34.4% and 28.1% in S+ID group by using the TS and TM antigens, respectively. DOT ELISA was performed only with the TM fraction and showed 95% sensitivity and 85.7% specificity, detecting 28.1% positivity in S+ID group. The 40-35 KDa band was the only present in all P group individuals and the most frequent in S+ID patients (62.5% for TS and 53.1% for TM). Replicate gels were made, excised in the protein identification regions and submitted to protein identification by mass spectrometry. The most abundant proteins in TS and TM antigenic fractions were actin and galectin. TS antigen was purified on a galectin affinity column, due the immune modulation ability. The non-bound (NL) and galectin (Gal) fractions were used as antigens in the ELISA technique with 90% of sensitivity and 89.8 and 75% of specificity for NL and Gal, respectively. 34.4% and 18.1% of S+ID group were positive in the ELISA by NL and Gal fractions, respectively. Serological techniques using antigenic variations are an important alternative diagnostic tool and can be applied to human strongyloidiasis, especially in the immunocompromised population

A estrongiloidíase é a infecção parasitária causada pelo nematódeo Strongyloides stercoralis. O diagnóstico definitivo é realizado pela visualização de larvas, principalmente nas fezes. Porém as técnicas parasitológicas têm baixa sensibilidade. As técnicas sorológicas apresentam-se como importante alternativa diagnóstica. Pesquisas apontam para a utilização de antígenos heterólogos solúveis, principalmente de Strongyloides venezuelensis. A identificação e caracterização dos antígenos de membrana podem fornecer fonte alternativa de antígenos e assim auxiliar o desenvolvimento das técnicas imunológicas. O presente trabalho teve como objetivo a avaliação das técnicas ELISA e WB frente a diferentes frações antigênicas de larvas filarioides de S. venezuelensis. Foram utilizadas amostras de sangue e fezes de 92 indivíduos, 20 indivíduos com estrongiloidíase (grupo I), 32 indivíduos com outras parasitoses (grupo II) e 40 indivíduos negativos (grupo III) pelos métodos de Lutz, cultura em placa de ágar e Rugai. Para preparação dos antígenos foram utilizadas larvas infectantes obtidas a partir de ratos infectados experimentalmente com S. venezuelensis. Seis frações antigênicas foram preparadas: frações salinas solúveis e de membrana (PBS 0,01M pH 7,2 e SDS 1%, SS e MS; Tris-HCl 25mM pH 7,5 e CHAPS 1%, ST e MT, respectivamente) e frações alcalinas solúvel e de membrana (NaOH 0,15M e SDS 1%, SA e MA, respectivamente). Para a técnica ELISA foram utilizadas placas sensibilizadas com 10ug/mL de antígeno, soro dos indivíduos diluídos 1:200 em PBS 0,05% Tween 3% de leite (PBSTM) e o conjugado (anti IgG-humana peroxidase) em PBSTM. As amostras foram consideradas positivas quando o Índice ELISA foi maior que 1. Para a técnica de WB os soros foram diluídos 1:100 em Tris-HCl 5% de leite (TM) e o conjugado (anti IgG-humana peroxidase) em TM. Após as técnicas sorológicas foram determinadas os parâmetros de diagnóstico pela curva ROC como sensibilidade (SE), especificidade (ES), Likelihood ratio (LR) além da determinação da acurácia diagnóstica (AC) e do índice Kappa (k). A técnica ELISA destacou as frações de membrana com melhor desempenho em relação aos parêmetros diagnósticos estudados (SE 95%, ES 94,4%, AC 94,8%, LR 17,1, k 0,848). O WB revelou componentes antigênicos imunodominantes variando de 260-10kDa, mas destacam-se as frações de 40-35kDa mais frequentes em todas frações antigênicas. Pela técnica de WB, a fração ST apresentou melhor desempenho em relação aos parêmetros diagnósticos estudados (SE 100%, ES 93,1%, AC 94,5, LR 14,4,k 0,854). A utilização das frações de membrana no imunodiagnóstico da estrongiloidíase humana torna-se fonte acessível e eficaz em relação às frações purificadas, não necessitando de gastos complementares para sua obtenção / Strongyloidiasis is a parasitic infection caused by a nematode Strongyloides stercoralis. The definitive diagnosis is made by the larvae visualization in stool samples. However parasitological techniques have low sensitivity. Serological techniques became as suitable diagnostic alternative. Research indicates for the soluble heterologous antigen utilization, mainly Strongyloides venezuelensis. Identification and characterization of membrane antigen may constitute an alternative source of antigen and then assist the development of serological techniques. The aim of this study was evaluate ELISA and WB techniques behind different antigenic fractions of S. venezuelensis´ infective larvae. A total of 92 serum and stool samples was analyzed, 20 from individuals with strongyloidisis (group 1), 32 with other parasitic diseases (group 2) and 40 from individuals with negative coproparasitology (group 3) using Lutz, agar plate culture and Rugai methods. For the antigen preparation infective larvae of S. venezuelensis from experimental infected rats were employed. Six antigenic fractions were prepareted: saline soluble and from membrane fractions (0.01M PBS pH 7.2, and 1% SDS, SS and MS; 25mM Tris-HCl pH 7.5, 1% CHAPS, MT and ST, respectively) and alkaline soluble and membrane fractions (0.15 M NaOH and 1% SDS, SA and MA, respectively). For ELISA technique, plates were sensitized with 10 ug/mL of antigen, serum samples were diluted 1:200 in 0.05% Tween in PBS 3% milk (PBSTM) and conjugate (anti-human IgG peroxidase) in PBSTM. Positive samples were considered when ELISA index was greater than 1. To WB technique, serum samples were diluted 1:100 in Tris-HCl 5% milk (TM) and conjugate (anti-human IgG peroxidase) in the TM. After serological techniques diagnostics parameters were determined by ROC curve how sensitivity (SE), specificity (ES), Likelihood ratio (LR) and determination of diagnostic accuracy (AC) and Kappa (k) index. ELISA technique highlighted the membrane fractions with better performance compared to parameters diagnoses studied (95% SE, 94.4% ES, 94.8% AC, 17.1 LR, 0.848 k). The WB revealed immunodominant antigenic components ranging from 260-10kDa, but there are the fractions of 40-35kDa more frequent in all antigenic fractions. WB technique showed ST fraction better performance in relation to the diagnostic parameters (100% SE, 93.1% ES, 94.5% AC, 14.4 LR, 0.854 k). Membrane fractions in the immunodiagnosis of human strongyloidiasis become an accessible and effective source of antigens in relation to the purified fractions, requiring no additional expense to obtain it

Introdução - A prática de reúso pela aplicação de esgotos tratados na agricultura atualmente é considerada parte integrante dos recursos hídricos por muitas nações. No entanto, oferece riscos à saúde da população pela presença de bactérias, cistos de protozoários, ovos de helmintos e vírus, capazes de sobreviver por longos períodos em ambientes desfavoráveis e apresentarem um curto tempo entre a infecção e o desenvolvimento da doença. Objetivo - Estabelecer medidas preventivas para o lançamento de efluentes nos ecossistemas aquáticos, controle sanitário na redução de patógenos transmitidos por águas contaminadas e a disposição de efluentes tratados em solos tropicais como ferramentas de auxílio do manejo integrado dos recursos hídricos em bacias hidrográficas, por meio do uso de metodologia de gerenciamento de risco com aplicação do Sistema APPCC, em um conjunto de tecnologias na produção de efluente tratado de esgoto de origem doméstica para avaliar o potencial de emprego em solos agrícolas. Métodos - A pesquisa foi desenvolvida na estação de tratamento de esgoto e no campo experimental para pesquisas de utilização de efluente na agricultura no município de Lins. Os indicadores biológicos estudados e os pontos de amostragem foram determinados através da utilização da metodologia de controle de qualidade Análise de Perigos e Pontos Críticos de Controle (APPCC). Foram coletadas amostras do solo irrigado e dos poços de monitoramento do lençol freático. As amostras foram submetidas a análises físico-químicas, microbiológicas e parasitológicas. Aos resultados obtidos foi aplicada a Avaliação Quantitativa do Risco Microbiológico, para a determinação do risco anual de infecção. Resultados - O efluente final apresentou concentrações médias de 8,13x105 NMP/100 mL de coliformes totais e 4,69x105 NMP/100 mL de Escherichia coli, não sendo observados ovos de helmintos. O solo apresentou maior concentração de coliformes totais e E. coli na camada superficial 1,01x106 e 8,70x103, diminuindo ao longo da profundidade. Os ovos de helmintos foram encontrados entre a superfície e os 15 cm de profundidade em concentrações entre 0,07 e 0,87 ovos/g de peso seco. Foi constatada a presença de adenovírus em concentração de 3,56x105 cópias genômicas/g entre os 5 e 10 cm de profundidade em 2015. Nos poços de monitoramento foram constatadas concentrações de coliformes totais variando entre < 1,00 e 1,01x103 NMP/100 mL e E. coli entre <1,00 e 1,00x100 NMP/100 mL. Não foi observada a presença de vírus entéricos. O risco anual de infecção estimado para E. coli no efluente final foi 1,02x10-2 pppa, no solo variou entre 2,68x10-3 e 7,59x10-3 pppa e nos poços de monitoramento variou entre 1,42x10-8e 4,38x10-9 pppa. Para os ovos de helmintos observados no efluente do tratamento primário o risco anual de infecção calculado foi 4,04x10-2 pppa e no solo variou entre 9,57x10-1 e 9,76x10-1 pppa. Conclusões No período da pesquisa, as amostras dos sistemas de tratamento de esgoto e de irrigação demonstraram atender as expectativas de remoção de patógenos condizentes aos seus parâmetros de projeto, havendo restrições para seu lançamento em corpos hídricos e aplicação na agricultura. O solo mostrou capacidade de retenção dos organismos patogênicos nos primeiros 60 cm de profundidade, reduzindo as suas concentrações a níveis inferiores a 1,00 NMP/100 mL nos aquíferos. / Introduction - Currently, the practice of reuse through the application of treated sewage in agriculture considers an integral part of water resources for many nations. However, threatens the health of the population by the presence of bacteria, protozoan cysts, helminth eggs and viruses able to survive for long periods in harsh environments and present a short time between infection and development of disease. Objective - Establish preventive measures for the release of effluents on aquatic ecosystems, sanitary control in the reduction of pathogens transmitted by contaminated water and the disposal of treated effluent in tropical soils as aid tools in integrated management of water resources in river basins. For this purpose it was employed as risk management methodology the Hazard Analysis and Critical Control Points system (HACCP) in a set of technologies in the treated effluent production of domestic sewage to assess the employment potential in agricultural soils. Methods - The study was conducted in the sewage treatment plant and in an adjoining experimental field situated at Lins city. The biological indicators and the sampling points were determined by using the quality control methodology Hazard Analysis and Critical Control Points (HACCP). Samples of irrigated soil and groundwater monitoring wells were collected. The samples were subjected to analysis, physical-chemical, microbiological and parasitological. The results obtained was applied to Quantitative Microbial Risk Assessment (QRMA), for determining the annual risk of infection. Results - The final effluent presented average concentrations of 8.13x105 MPN / 100 mL of total coliforms and 4.69x105 MPN / 100 mL of Escherichia coli, not being observed helminth eggs. The soil showed the highest concentration of total coliforms and E. coli in the surface layer and 1.01x106 8.70x103, decreasing along the depth. Eggs from helminths were found between the surface and 15 cm depth in concentrations from 0.07 to 0.87 eggs / g dry weight. It was found the presence of adenovirus in concentration 3.56x105 genomic copies / g between 5 and 10 cm depth in 2015. In monitoring wells total coliform concentrations were found ranging from <1.00 and 1.01x103 NMP / 100 mL and E. coli between <1.00 and 1.00x100 MPN / 100 mL. It was not observed the presence of enteric viruses. The estimated annual risk of infection to E. coli in the final effluent was 1.02x10-2 pppy, soil ranged from 2.68x10-3 and 7.59x10-3 pppy and monitoring wells ranged from 1.42x10-8 e 4.38x10-9 pppy. For helminth eggs observed in the effluent from the primary treatment, the annual risk of infection was calculated 4.04x10-2 pppy and soil ranged from 9.57x10-1 and 9.76x10-1 pppy. Conclusions - During the survey period, samples of sewage and irrigation treatment systems showed meet the expectation removal of pathogens consistent to its design parameters, with restrictions on its release in water and applied in agriculture bodies. The soil of pathogenic organisms showed retention capacity in the first 60 cm depth by reducing its concentration to levels below 1.00 MPN / 100 mL in aquifers.

Introdução - A prática de reúso pela aplicação de esgotos tratados na agricultura atualmente é considerada parte integrante dos recursos hídricos por muitas nações. No entanto, oferece riscos à saúde da população pela presença de bactérias, cistos de protozoários, ovos de helmintos e vírus, capazes de sobreviver por longos períodos em ambientes desfavoráveis e apresentarem um curto tempo entre a infecção e o desenvolvimento da doença. Objetivo - Estabelecer medidas preventivas para o lançamento de efluentes nos ecossistemas aquáticos, controle sanitário na redução de patógenos transmitidos por águas contaminadas e a disposição de efluentes tratados em solos tropicais como ferramentas de auxílio do manejo integrado dos recursos hídricos em bacias hidrográficas, por meio do uso de metodologia de gerenciamento de risco com aplicação do Sistema APPCC, em um conjunto de tecnologias na produção de efluente tratado de esgoto de origem doméstica para avaliar o potencial de emprego em solos agrícolas. Métodos - A pesquisa foi desenvolvida na estação de tratamento de esgoto e no campo experimental para pesquisas de utilização de efluente na agricultura no município de Lins. Os indicadores biológicos estudados e os pontos de amostragem foram determinados através da utilização da metodologia de controle de qualidade Análise de Perigos e Pontos Críticos de Controle (APPCC). Foram coletadas amostras do solo irrigado e dos poços de monitoramento do lençol freático. As amostras foram submetidas a análises físico-químicas, microbiológicas e parasitológicas. Aos resultados obtidos foi aplicada a Avaliação Quantitativa do Risco Microbiológico, para a determinação do risco anual de infecção. Resultados - O efluente final apresentou concentrações médias de 8,13x105 NMP/100 mL de coliformes totais e 4,69x105 NMP/100 mL de Escherichia coli, não sendo observados ovos de helmintos. O solo apresentou maior concentração de coliformes totais e E. coli na camada superficial 1,01x106 e 8,70x103, diminuindo ao longo da profundidade. Os ovos de helmintos foram encontrados entre a superfície e os 15 cm de profundidade em concentrações entre 0,07 e 0,87 ovos/g de peso seco. Foi constatada a presença de adenovírus em concentração de 3,56x105 cópias genômicas/g entre os 5 e 10 cm de profundidade em 2015. Nos poços de monitoramento foram constatadas concentrações de coliformes totais variando entre < 1,00 e 1,01x103 NMP/100 mL e E. coli entre <1,00 e 1,00x100 NMP/100 mL. Não foi observada a presença de vírus entéricos. O risco anual de infecção estimado para E. coli no efluente final foi 1,02x10-2 pppa, no solo variou entre 2,68x10-3 e 7,59x10-3 pppa e nos poços de monitoramento variou entre 1,42x10-8e 4,38x10-9 pppa. Para os ovos de helmintos observados no efluente do tratamento primário o risco anual de infecção calculado foi 4,04x10-2 pppa e no solo variou entre 9,57x10-1 e 9,76x10-1 pppa. Conclusões No período da pesquisa, as amostras dos sistemas de tratamento de esgoto e de irrigação demonstraram atender as expectativas de remoção de patógenos condizentes aos seus parâmetros de projeto, havendo restrições para seu lançamento em corpos hídricos e aplicação na agricultura. O solo mostrou capacidade de retenção dos organismos patogênicos nos primeiros 60 cm de profundidade, reduzindo as suas concentrações a níveis inferiores a 1,00 NMP/100 mL nos aquíferos. / Introduction - Currently, the practice of reuse through the application of treated sewage in agriculture considers an integral part of water resources for many nations. However, threatens the health of the population by the presence of bacteria, protozoan cysts, helminth eggs and viruses able to survive for long periods in harsh environments and present a short time between infection and development of disease. Objective - Establish preventive measures for the release of effluents on aquatic ecosystems, sanitary control in the reduction of pathogens transmitted by contaminated water and the disposal of treated effluent in tropical soils as aid tools in integrated management of water resources in river basins. For this purpose it was employed as risk management methodology the Hazard Analysis and Critical Control Points system (HACCP) in a set of technologies in the treated effluent production of domestic sewage to assess the employment potential in agricultural soils. Methods - The study was conducted in the sewage treatment plant and in an adjoining experimental field situated at Lins city. The biological indicators and the sampling points were determined by using the quality control methodology Hazard Analysis and Critical Control Points (HACCP). Samples of irrigated soil and groundwater monitoring wells were collected. The samples were subjected to analysis, physical-chemical, microbiological and parasitological. The results obtained was applied to Quantitative Microbial Risk Assessment (QRMA), for determining the annual risk of infection. Results - The final effluent presented average concentrations of 8.13x105 MPN / 100 mL of total coliforms and 4.69x105 MPN / 100 mL of Escherichia coli, not being observed helminth eggs. The soil showed the highest concentration of total coliforms and E. coli in the surface layer and 1.01x106 8.70x103, decreasing along the depth. Eggs from helminths were found between the surface and 15 cm depth in concentrations from 0.07 to 0.87 eggs / g dry weight. It was found the presence of adenovirus in concentration 3.56x105 genomic copies / g between 5 and 10 cm depth in 2015. In monitoring wells total coliform concentrations were found ranging from <1.00 and 1.01x103 NMP / 100 mL and E. coli between <1.00 and 1.00x100 MPN / 100 mL. It was not observed the presence of enteric viruses. The estimated annual risk of infection to E. coli in the final effluent was 1.02x10-2 pppy, soil ranged from 2.68x10-3 and 7.59x10-3 pppy and monitoring wells ranged from 1.42x10-8 e 4.38x10-9 pppy. For helminth eggs observed in the effluent from the primary treatment, the annual risk of infection was calculated 4.04x10-2 pppy and soil ranged from 9.57x10-1 and 9.76x10-1 pppy. Conclusions - During the survey period, samples of sewage and irrigation treatment systems showed meet the expectation removal of pathogens consistent to its design parameters, with restrictions on its release in water and applied in agriculture bodies. The soil of pathogenic organisms showed retention capacity in the first 60 cm depth by reducing its concentration to levels below 1.00 MPN / 100 mL in aquifers.

Submitted by Stephany Silva (stephany.silva@cpqam.fiocruz.br) on 2016-09-16T13:23:38Z No. of bitstreams: 1 2016portela-junior-nc.pdf: 1366854 bytes, checksum: b935336bcc69c9cc7ad7b64725f9fb61 (MD5) / Approved for entry into archive by Adagilson Silva (adagilson@cpqam.fiocruz.br) on 2016-09-16T19:29:26Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016portela-junior-nc.pdf: 1366854 bytes, checksum: b935336bcc69c9cc7ad7b64725f9fb61 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-16T19:29:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016portela-junior-nc.pdf: 1366854 bytes, checksum: b935336bcc69c9cc7ad7b64725f9fb61 (MD5) Previous issue date: 2016 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães. Recife, PE, Brasil / O gênero Biomphalaria possui espécies de grande relevância médica uma vez que atuam como hospedeiros intermediários naturais do parasita Schistosoma mansoni, causador da esquistossomose. Dentro desse gênero de moluscos, três espécies são tidas como hospedeiros naturais do parasita, Biomphalaria glabrata, B. straminea e B. tenagophila. O perfil de suscetibilidade à infecção por S. mansoni dentro do gênero é muito variado e muitas pesquisas buscam elucidar a dinâmica da relação parasita-hospedeiro intermediário na finalidade de criar novas medidas de controle da doença. Por isso, esse estudo tem como objetivo determinar o perfil bidimensional de proteínas que podem estar envolvidas na resposta imune contra o S. mansoni comparando duas espécies com diferentes perfis de susceptibilidade B. glabrata, B. straminea além de uma refratária ao S. mansoni, a B. straminea R3. Para isso, os caramujos de cada espécie foram divididos em dois grupos: Infectado, expostos aos miracídios do S. mansoni; e Controle, submetidos ao estresse do processo de infecção livre de miracídios. A hemolinfa foi retirada 24 horas após a exposição. Foi feito o extrato proteico total e determinada a concentração das proteínas totais para cada grupo investigado. As proteínas foram separadas por eletroforese bidimensional onde foi obtido o ponto isoelétrico e peso molecular de todos os spots nos géis. Estes géis foram comparados entre as condições expostos e não expostos ao parasita e os spots que se mostraram diferenciais foram utilizados para uma busca por homologia em bancos de dados de proteínas já descritas. Na dosagem proteica, a espécie B. glabrata se mostrou estável nas duas condições, enquanto que podemos observar aumento na concentração proteica nas duas linhagens de B. straminea. A presença de diversas proteínas homólogas envolvidas em processos metabólicos de adesão e reconhecimento celular, homeostase de ions entre outras relacionadas à resposta imune foram identificadas entre as espécies e na linhagem resistente (AU)

Made available in DSpace on 2016-12-23T13:53:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Jessica Nascimento Moraes Monteiro.pdf: 621105 bytes, checksum: 18de4ef14328874b3985d6471aa06448 (MD5) Previous issue date: 2012-12-10 / Phytotherapy is often used for parasitic diseases controlling in several animal species. This study aimed to evaluate the infective larvae (L3) of Ancylostoma spp. immersed in ethanol extract and Chenopodium ambrosioides L. essential oil in the in vitro test. It was used distilled water (negative control) and albendazole and commercial association of praziquantel, pyrantel pamoate and febantel (positive controls). The ethanol extract of C. ambrosioides L. at concentration of 0.5%, 1.0%, 2.0%, 3.0%, 4.0%, 5.0%, 6.0%, 8.0%, 10.0%, 12.0 % and 20% had insufficient activity to the larvicidal effect. The essential oil at concentration of 150μL.mL-1 was effective against L3. The formulation of a biscuit manipulated with a concentration of 37,5 μL.g-1 of the C. ambrosioides L essential oil reduced the number of eggs per gram of the dogs feces. Twenty-six adult dogs were divided into three groups for in vivo testing: F1 (biscuit without active ingredient), F2 (biscuit with C. ambrosioides L. active principle), F3 (biscuit with allopathic active ingredient). At the CBC, there were significant differences in F1 for values of red blood cells, hematocrit and mean corpuscular hemoglobin concentration (MCHC) and albumin in serum biochemistry. The F2 showed difference in MCHC and in biochemical the serum protein and globulin. The F3, lymphocytes and monocytes values in the blood count and albumin and globulin were different between M1 and M2. At the parasitological exam F1 remained parasitized, while the F2 reduced significantly the infection and F3 showed negative result in M2. It is concluded that the formulation of a biscuit manipulated with C. ambrosioides L essential oil reduced the Ancylostoma spp. infection in naturally infected dogs / A fitoterapia é frequentemente utilizada no controle das parasitoses de diversas espécies animais. Objetivou-se avaliar as larvas infectantes (L3) de Ancylostoma spp. imersas em extrato etanólico e óleo essencial de Chenopodium ambrosioides L. no teste in vitro. Utilizou-se água destilada (controle negativo) e albendazole e associação comercial de praziquantel, pamoato de pirantel e febantel (controles positivos). O extrato etanólico de C. ambrosioides L. nas concentrações 0,5%, 1,0%, 2,0%, 3,0%, 4,0%, 5,0%, 6,0%, 8,0%, 10,0%, 12,0% e 20% apresentaram insuficiente atividade para o efeito larvicida. O óleo essencial na concentração de 150μL.mL-1 foi eficaz contra L3. A formulação de biscoito manipulado com a concentração de 37,5μL.g-1 do óleo essencial C. ambrosioides L reduziu o número de ovos por grama de fezes dos cães. Vinte e seis cães adultos foram dividos em três grupos para o teste in vivo: F1 (biscoito sem princípio ativo), F2 (biscoito com princípio ativo de C. ambrosioides L.), F3 (biscoito com princípio ativo alopático). No hemograma, houve diferença significativa no F1 para os valores de hemácias, hematócrito e concentração de hemoglobina corpuscular média (CHCM) e albumina na bioquímica sérica. O F2 apresentou diferença no CHCM e na bioquímica a proteína sérica e globulina. O F3, os valores para linfócitos e monócitos no hemograma e a albumina e globulina foram diferentes entre o M1 e M2. No exame parasitológico o F1 manteve-se parasitado, enquanto o F2 reduziu de forma significativa a infecção e o F3 apresentou resultado negativo no M2. Conclui-se que a formulação de biscoito manipulado com óleo essencial C. ambrosioides L reduziu a infecção de Ancylostoma spp. em cães naturalmente parasitados

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:28:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 3335039 bytes, checksum: 432a8a4734747e35f11922a30da30b08 (MD5) Previous issue date: 2012-02-08 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / This study aimed at evaluating the disinfection process of sewage sludge from a UASB reactor by greenhouse solar drying. Seven lots of sewage sludge were monitored between February 2010 and May 2011, each lot referring to an event of sludge discharge from the UASB reactor. The monitoring period of time of the different sludge lots varied from 50 to 130 days, with sampling every week. The following variables were monitored: pH, moisture, total solids, total coliforms, Escherichia coli, total and viable helminth eggs. In addition, somatic coliphages spiking experiments were conducted in sludge samples dried in the same field greenhouse, as well as in samples dried in a laboratory incubator kept under controlled temperature. A high sludge dewatering during the drying treatment in the greenhouse was observed, with moisture and total solids contents reaching levels, respectively, below 10% and above 90% when the sludge was subjected to periods of treatment longer than 75 days. Microbial decay during sludge drying was variable, but effective. Exponential decay was quite clear for total coliforms and Escherichia coli, but not so much for total and viable helminth eggs. Regarding the bacterial removal, an influence of the temperature was noticed, with higher decreasing of total coliforms and E.coli in the warmer periods. E.coli concentrations below 10³ MPN/gTS (the CONAMA Resolution 375/2006 standard for Class A biosolids) were obtained with more than 60 days of treatment in the greenhouse. Calculated values of Kb 20 for E.coli varied widely, between 0.004 and 0.142 d-1. Wide variations in the decay of helminth eggs were also observed, with calculated values of Koh 20 for total eggs ranging between 0.008 and 0.035 d-1. Concentrations of viable helminth eggs were always low, requiring only 15 days to reach counts below 0.25 eggs/gTS (the CONAMA Resolution 375/2006 standard for Class A biosolids). The results of the spiking experiments conducted in the greenhouse also showed intense exponential decay of somatic coliphages, with high Kcs 20 values ranging between 0.187 and 0.248 d-1. In contrast, in the spiking experiments performed in laboratory under conditions of controlled temperature (30ºC) the decay was much less intense, with Kcs 20 values between 0.028 and 0.078 d-1. Finally, this work presents a model for estimating the microbiological quality of biosolids treated by greenhouse drying based on the microbiological quality of raw sewage. Using stochastic modeling (taking into account variations on the input variables) it was estimated that, with 60 days of sludge drying in the greenhouse, the probability of reaching the bacteriological quality established in COMANA Resolution 375/2006 for biosolids classes A and B (103 and 106 E.coli/gST, respectively) was 66.2% and 97% respectively. In the case of helminth eggs these chances were respectively 64.3% and 99.8%. That is, the results suggest high stability and reliability of the greenhouse drying treatment process of the UASB sewage sludge. / O presente trabalho teve como objetivo o acompanhamento da higienização de lodo de esgoto proveniente de reator UASB por secagem em estufa. Foram monitorados sete lotes de lodo, entre fevereiro de 2010 e maio de 2011, sendo cada lote referente a um evento de descarte de lodo do reator UASB. O tempo de acompanhamento dos vários lotes de lodo variou de 50 a 130 dias, com realização de coletas semanais. Foram monitoradas as seguintes variáveis: pH, umidade, sólidos totais, coliformes totais, Escherichia coli e ovos totais e viáveis de helmintos. Foram ainda realizados experimentos de inoculação de colifagos somáticos em lodos submetidos à secagem na mesma estufa de campo e também sob condições de temperatura controlada (estufa laboratorial). Foi observada elevada desidratação do lodo durante a secagem em estufa, sendo obtidos teores de umidade menores que 10% e de sólidos totais acima de 90% quando os lotes foram submetidos a períodos de tratamento superiores a 75 dias. O decaimento microbiano durante a secagem do lodo se mostrou variável, mas eficiente. Decaimento exponencial foi bastante nítido para coliformes totais e Escherichia coli, porém essa tendência não foi tão clara para os dados de ovos viáveis e totais de helmintos. Para a remoção das bactérias, foi possível perceber influência da temperatura (sazonalidade), com quedas das concentrações de coliformes totais e E.coli mais acentuada nos períodos mais quentes. Valores de E.coli abaixo de 10³ NMP/gST, limite estabelecido pela Resolução CONAMA 375/2006 para biossólido Classe A, foram obtidos com tempos de secagem acima de 60 dias. Os valores de Kb 20 calculados para E.coli foram bastante variáveis, entre 0,004 e 0,142 d-1. Variações amplas também foram observadas no decaimento de ovos de helmintos, com valores de Koh 20 calculados para ovos totais entre 0,008 e 0,035 d-1. As concentrações de ovos viáveis de helmintos foram sempre baixas, sendo necessários apenas 15 dias para se obter contagens abaixo de 0,25 ovos/gST (biossólido Classe A de acordo com a Resolução CONAMA 375/2006). Os resultados dos experimentos de campo de inoculação de colifagos somáticos também mostraram intenso decaimento exponencial para esse bacteriófago em estufa, com valores de Kcs 20 elevados e variando entre 0,187 e 0,248 d-1. Em contrapartida, nos experimentos de inoculação realizados em laboratório sob condições temperatura controlada (30ºC) o decaimento foi bem menos intenso, com valores de Kcs 20 entre 0,028 e 0,078 d-1. Por fim, o trabalho apresenta um modelo de estimativa da qualidade microbiológica de biossólidos tratados por secagem em estufa a partir da qualidade microbiológica do esgoto bruto. Por meio de modelagem estocástica (que leva em consideração variações em torno das variáveis de entrada) estimou-se que, com 60 dias de secagem em estufa, a probabilidade de alcançar a qualidade bacteriológica preconizada para as Classes A e B na Resolução CONAMA 375/2006 (103 e 106 E.coli/gST, respectivamente) seria de 66,2% e 97%, respectivamente. No caso dos ovos de helmintos essas chances seriam, respectivamente, de 64,3% e 99,8%. Ou seja, os resultados sugerem estabilidade e confiabilidade consideráveis do processo de tratamento por secagem em estufa do lodo de reator.

Orientador: Reinaldo José da Silva / Resumo: Nos últimos anos, os parasitas foram reconhecidos como importantes componentes dabiodiversidade global, dado os importantes papéis desempenhados por esses organismosem ecossistemas naturais. Embora o conhecimento sobre a diversidade de parasitas tenhaaumentado nas últimas décadas, o número de espécies de parasitas de peixes no Brasil érelativamente baixo quando comparado com a biodiversidade das espécies hospedeiras.Desta forma, o presente trabalho teve como objetivo realizar um levantamento dabiodiversidade dos parasitas de peixes procedentes de quatro locais em uma área sob ainfluência de Pequenas Centrais Hidrelétricas (PCHs) no rio Sapucaí-Mirim, Estado de SãoPaulo, Brasil, bem como avaliar a estrutura das comunidades de metazoários parasitas depeixes Characiformes e de quatro espécies do gênero Leporinus. Durante o período demarço de 2012 a julho de 2013, foram coletados 462 espécimes pertencentes a 16 espéciesde peixes das ordens Characiformes, Siluriformes, Gymnotiformes e Perciformes.Observou-se que 86,58% dos espécimes estavam parasitados por pelo menos um taxon demetazoário parasita. Os parasitas encontrados pertenciam a oito diferentes grupos(Myxozoa, Monogenea, Digenea, Cestoda, Nematoda, Acantocephala, Arthopoda eAnnelida), sendo coletado um total de 6.830 parasitas. Noventa e sete taxa de parasitasforam encontrados, sendo que a classe Monogenea foi o grupo que apresentou o maiornúmero de espécies, seguido do filo Nematoda e da s... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Recently, parasites have been recognized as important components of global biodiversitybecause the important roles played by these organisms in natural ecosystems. Althoughknowledge about the diversity of parasites has increased in recent decades, the number ofparasite species of fishes in Brazil is relatively low compared to the biodiversity of hostspecies. Thus, this study aimed to survey the biodiversity of fish parasites from foursampling sites in an area under the influence of Small Hydroelectric Power Plants in theSapucaí-Mirim River, São Paulo State, Brazil, as well as to evaluate the structure ofmetazoan parasite communities of Characiformes and four species of Leporinus sp. FromMarch 2012 to July 2013, 462 fish specimens of 16 species of Characiformes,Siluriformes, Perciformes, and Gymnotiformes were collected. It was observed that86.58% of fish specimens were parasitized by at least one metazoan parasite taxon. Theparasites found belonged to eight different groups (Myxozoa, Monogenea, Digenea,Cestoda, Nematoda, Acantocephala, Arthopoda and Annelida) and a total of 6,830parasites were collected and analyzed. Ninety-seven parasite taxa were found, andMonogenea was the group that had the highest number of species, followed by Nematodaand Digenea. The parasite communities of Characiformes showed mainly differencesamong the host species, although belonging to the same order or family. The sampling site,condition factor and the host body ... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Made available in DSpace on 2014-12-17T15:03:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 FernandaLC.pdf: 619525 bytes, checksum: b172a729547f262e355961911646e833 (MD5) Previous issue date: 2007-03-19 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico / The technology of anaerobic reactors for sanitary wastewater treatment has been extensively developed in Brazil, and today it is practically consolidated. They present several advantages, such as low construction and operating costs, and low sludge production, the anaerobic reactors are an attractive alternative to minimize problematic lack of basic sanitation in urban areas, and also of the rural areas. The anaerobic filters have been widely used in Brazil. It produces an effluent with low concentration of organic matter and solids suspended, besides conserving the nutrients, therefore, it is good for use in irrigation, but the practice must be associated with knowledge of the pathogens presence. The main objective of this study was to evaluate the efficiency of anaerobic filters in removal faecal coliforms and helminth eggs, and to verify if the effluent can be used for agricultural purposes, according to the World Organization of Health (WHO, 1989). The protocol used to enumerate helminths eggs was the modified Bailenger method, (Ayres and Mara, 1996) recommended by WHO for evaluation of raw effluent and treated effluent. The membrane filtration method was utilized to determine the concentrations of faecal coliforms. Three different systems of sewer treatment composed by anaerobic filters were analyzed. The results, in a general analysis, showed that all the researched systems reached a larger removal than 93% to helminth eggs, resulting in an effluent with smaller average than 1 egg/L. One of these systems, Sistema RN, reached a larger removal than 99%, confirming the good performance of the anaerobic filters in removal helminths eggs. Even with low concentrations of eggs in the influent, the filters were capable to remove this parameter efficiently. About faecal coliforms, it was observed for all the researched systems an effluent with 106 CFU/100mL. The high concentrations to faecal coliforms in the effluent just allow reuse for restricted irrigation, in agreement with the guidelines of WHO. Although the researched systems have not removed faecal coliforms efficiently, the results indicated a good efficiency of the anaerobic filters in removal helminth eggs / A tecnologia de reatores anaer?bios para o tratamento de esgoto sanit?rio vem sendo extensivamente desenvolvida no Brasil, e hoje encontra-se praticamente consolidada. Apresentando diversas vantagens, como baixos custos de constru??o e opera??o, e baixa produ??o de lodo, os reatores anaer?bios s?o uma alternativa bastante atrativa para a mitiga??o dos problemas de saneamento b?sico urbano, e tamb?m das ?reas rurais. Os filtros anaer?bios v?m sendo bastante aplicados no Brasil. Sua utiliza??o produz um efluente com baixa concentra??o de mat?ria org?nica e s?lidos suspensos, al?m de conservar os nutrientes, sendo por isso muito bom para irriga??o com fins produtivos, desde que sejam resguardados os cuidados com a presen?a de organismos patog?nicos. Este trabalho teve por objetivo avaliar a efici?ncia de filtros anaer?bios na remo??o de coliformes fecais e ovos de helmintos, e verificar se os mesmos atendem ?s recomenda??es sanit?rias para reuso em irriga??o, segundo a Organiza??o Mundial de Sa?de - OMS (WHO, 1989). Para enumera??o dos ovos de helmintos foi utilizada a t?cnica de Bailenger modificada (Ayres e Mara, 1996), que deu origem ? metodologia atualmente recomendada pela OMS para avalia??o de ?guas residu?rias brutas e tratadas. Para determina??o de coliformes fecais foi utilizado o m?todo da membrana filtrante. Foram analisados tr?s diferentes sistemas de tratamento de esgoto compostos por filtros anaer?bios. Numa an?lise geral dos resultados, observou-se que todos os sistemas pesquisados atingiram efici?ncia maior que 93% para remo??o de ovos de helmintos, resultando em um efluente final com valor m?dio menor que 1 ovo/L. Um dos sistemas, o Sistema RN, alcan?ou uma remo??o maior que 99%, confirmando o bom desempenho dos filtros anaer?bios na remo??o de ovos de helmintos. Mesmo com baixas concentra??es de ovos no afluente, os filtros foram capazes de remover eficientemente este par?metro. Em rela??o ? contagem de coliformes fecais, foi observado, para todos os sistemas pesquisados um efluente final com cerca de 106 UFC/100mL. As altas concentra??es de coliformes fecais no efluente dos filtros permitem a reutiliza??o apenas para irriga??o restrita, de acordo com as diretrizes da OMS. Apesar dos sistemas pesquisados n?o removerem eficazmente coliformes fecais, os resultados encontrados no presente estudo indicaram uma boa efici?ncia dos filtros anaer?bios na remo??o de ovos de helmintos