Vaccinia virus (VACV) is an enveloped DNA virus, member of the Orthopoxviridae genus. VACV genome size is about 200 kbp. This huge genome capacity allows VACV to encode a set of factors that are non-essential for virus replication and spread in vitro. While these factors are needed for interfering with host immune responses, VACV remains strongly immunogenic. Cell-mediated and humoral immune responses in atopic disorders are deregulated to a certain extent, leading to complications in case of infection or vaccination with vaccines based on replicating viruses, such as eczema vaccinatum caused by VACV. VACV effects on immune responses consist among others in the inhibition of expression of type I interferon (IFN) at various levels - for example in a specific inhibition of phosphorylation of the interferon regulatory factor-3 (IRF-3) via inhibition of the activity of TANK-binding kinase 1 (TBK 1) that normally phosphorylates IRF-3. Phosphorylation allows IRF-3 to translocate into the nucleus where it initiates transcription of IFNβ followed by induction of expression of IFN and interferon stimulated genes. Expression of these genes is shut down when IRF-3 activity is inhibited. To overcome this block, a recombinant VACV expressing murine IRF-3 under VACV p7.5 promotor (WR-IRF3) was generated....

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 425543.pdf: 747447 bytes, checksum: 25a6005ed4d57ac7cb87a5a7d22ed8de (MD5) Previous issue date: 2010-03-31 / O envelhecimento est? associado com o decl?nio progressivo nas fun??es do sistema imunol?gico (imunosenesc?ncia), tanto na imunidade humoral quanto na imunidade mediada por c?lulas, resultando em maior suscetibilidade a infec??es e c?ncer, al?m da diminui??o na capacidade de responder a vacinas. As c?lulas dendr?ticas (DCs) s?o as mais poderosas e eficientes apresentadoras de ant?genos (APC), desempenhando um papel primordial na apresenta??o e conseq?ente resposta imune mediada por c?lulas T. Poucos estudos enfocam a atividade das c?lulas dendr?ticas no envelhecimento, sendo que a maioria dos dados s?o relativos ?s fun??es das c?lulas T. As intera??es entre as c?lulas dendr?ticas e as c?lulas T afetam o processamento e consequente apresenta??o de ant?genos, influenciando a efetividade das respostas imunes mediadas por c?lulas T. Este trabalho teve como objetivo avaliar a capacidade estimulat?ria de c?lulas dendr?ticas de camundongos velhos em uma resposta espec?fica T CD4+ comparada ? resposta imune de camundongos jovens. Para isso, c?lulas T de camundongos transg?nicos TEa, espec?ficas para o complexo Ea:IAb foram transferidas para camundongos normais C57Bl/6, c?lulas T de camundongos jovens para animais velhos e jovens, e c?lulas T de camundongos velhos para animais velhos e jovens. Os resultados demonstram que, ap?s imuniza??o com o ant?geno EaRFP, tanto as c?lulas T jovens quanto as c?lulas T velhas foram estimuladas de modo semelhante por c?lulas dendr?ticas jovens. Contudo, c?lulas dendr?ticas de animais velhos n?o foram capazes de estimular suficientemente as c?lulas T de animais velhos nem mesmo as c?lulas T de animais jovens. Enquanto ambas as c?lulas T, jovens e velhas, adquiriram o fen?tipo CD44+ quando transferidas para os animais jovens, c?lulas T jovens transferidas para animais velhos n?o adquiriram o mesmo fen?tipo. Esse fato sugeriu que c?lulas dendr?ticas de animais velhos possuem baixa capacidade de estimular c?lulas T, mesmo que essas c?lulas venham de um animal jovem. N?s hipotetizamos que esse resultado poderia estar ligado a um n?mero extremamente diminu?do de c?lulas dendr?ticas nos animais velhos, ou ainda em uma defici?ncia em um dos sinais fornecidos pelas c?lulas dendr?ticas no priming de linf?citos T (apresenta??o de ant?geno ou sinais coestimulat?rios). O n?mero total de c?lulas dendr?ticas foi significativamente menor em camundongos velhos comparado a camundongos jovens. Al?m disso, o n?mero de c?lulas apresentando ant?geno foi menor no linfonodo drenante de animais velhos, e a express?o de CD86 por c?lulas dendr?ticas de animais velhos n?o foi diferente da dos animais jovens. Os resultados sugerem que a diminui??o da capacidade de apresenta??o de ant?geno apresentada no envelhecimento ? cr?tica para a perda do potencial estimulat?rio de c?lulas T CD4+ por c?lulas dendr?ticas.

Orientador: Gervásio Henrique Bechara / Banca: Hélio José Montassier / Banca: Osvaldo Augusto Brasil Esteves Sant'Anna / Resumo: No hospedeiro bovino o nível de resistência ao carrapato Rhipicephalus (Boophilus) microplus varia de acordo com a raça sendo os fenótipos contrastantes herdáveis. O presente trabalho explora esses fenótipos a fim de estabelecer os perfis das respostas imunes, humoral e inflamatória, correlacionados com resistência em raça zebuína (Nelore) e susceptibilidade em raça taurina (HPB). Os animais foram expostos a infestação natural pelo R.(B.) microplus e amostras de soros foram coletadas em pontos estratégicos da cinética das infestações. Os níveis de imunoglobulinas totais (IgG1 e IgG2), bem como os de anticorpos IgG1, IgG2 e IgE anti-extrato de ovo, anti-extrato de larva não alimentada e anti-saliva foram determinados. Elementos da resposta inflamatória, como as principais proteínas de fase aguda e óxido nítrico, também foram dosados. Os resultados obtidos mostram que as infestações muito intensas, em hospedeiros suscetíveis, são capazes de modular os níveis séricos de IgG1 e IgG2 total, diminuindo-os significativamente em relação aos níveis observados durantes infestações menores. Também modulam negativamente a produção de todos os anticorpos específicos IgG1 e IgG2 avaliados a nível sistêmico. Bovinos susceptíveis ao carrapato produzem níveis mais altos de anticorpos IgE para todos os antígenos. O fenótipo susceptivel de infestação se diferencia pela maior freqüência do alótipo de IgG?2a, herdado por herança Mendeliana co-dominante. Animais suscetíveis, quando infestados, produzem níveis mais altos da proteína de fase aguda a1- glicoproteína ácida, de padrão anti-inflamatório, enquanto que animais resistentes produziram relativamente mais proteínas de fase aguda pró-inflamatórias, haptoglobina e amilóide sérica A. Em ambas as raças não houve diferença nos níveis de transferrina e óxido nítrico sistêmico, porém a produção de ambos é influenciada pelos níveis de infestação. / Abstract: In bovine hosts resistance to the cattle tick, Rhipicephalus (Boophilus) microplus, varies according to the breed, being the phenotypes of infestations inherited. The present work exploits these contrasting phenotypes in order to determine the profile of the humoral, inflammatory and acute phase responses that are correlated with resistance seen in a zebuine breed (Nelore) and susceptibility seen in a taurine breed (Holstein). Bovines were exposed to natural infestations with R.(B.) microplus and they presented, as expected, different levels of infestation that also varied in intensity according to the season of the year. Samples of sera were collected at strategic points during the kinetics of different cycles of infestations. The levels of total serum IgG1 and IgG2 immunoglobulins, as well as those of IgG1, IgG2 and IgE anti-egg extracts, anti-unfed larvae extracts and anti-saliva antibodies were measured. Components of the inflammatory response, nitric oxide, as well as acute phase proteins, were also measured. The results show that very intense infestations in ticksusceptible bovines modulate the serum levels of IgG1 and IgG2, which are significantly diminished relative to those observed during less intense infestations. Intense infestations also modulate the production of all specific IgG1 and IgG2 antibodies. Susceptible animals produced more specific IgE, suggesting that this isotype does not participate in resistance against ticks. The susceptible cattle also have a higher frequency of IgG?2a , which are encoded by Mendelian co-dominant alleles. When infested susceptible animals produced higher levels of the anti-inflammatory acute phase protein, a1-acid glycoprotein, whereas resistant animals produced relatively higher levels of the pro-inflammatory proteins, haptoglobin and serum amyloide A. / Mestre

Orientador: Tereza Cristina Cardoso da Silva / Banca: Roberto Gameiro de Carvalho / Banca: Luiz Eduardo Corrêa Fonseca / Banca: Andrea Fontes Garcia / Banca: Lídia Luciana Ravagnani / Resumo: O Brasil possui um dos maiores rebanhos de bovinos mundialmente. Estes animais estão expostos constantemente a agentes virais causadores de patologias. Dentre estes, o herpesvírus bovino 1 (BHV1) e 5 (BHV5) apresentam grande importância epidemiológica. O BHV1 causa infecções respiratórias e genitais, enquanto que o BHV5 meningoencefalite. As proteínas de membrana presentes nos herpesvírus os tornam capazes de infectar as células do hospedeiro. Com afinidade a distintas células, desenvolvem sua capacidade de infecção, apresentam mecanismos de sobrevivência à morte celular programada e a resposta imunológica. As interações vírus-hospedeiro são fundamentais no entendimento de aspectos relacionados a transmissão viral, capacidade de infecção e progressão da doença. Para este fim, se faz necessário compreender elementos fundamentais, como a modulação da função mitocondrial e a replicação do BHV, bem como os níveis de apoptose nas células do hospedeiro. De igual importância, é indispensável entender o comportamento de genes apoptóticos que estão relacionados à infecção por BHV5 e seus envolvimentos na viabilidade celular. Estes achados contribuem para o entendimento da imunopatogenia do BHV, auxiliam a evitar a disseminação destes agentes e são de grande valia para o desenvolvimento de vacinas / Abstract: Brazil has one of the largest cattle hers worldwide. These animals are constantly exposed to pathological viral agents. Bovine herpesvirus 1 (BHV1) and BHV5 have great epidemiological importance. BHV1 is causative agent of respiratory and genital infections, while BHV5 causes meningoencephalitis. Herpesvirus membrane proteins allow them to infect the host cells. They present affinity to different types of cells, develop mechanisms to survive programmed cell death, and immune response. Virus-host interactions are essential to understand aspects related to viral transmission, capacity of infection and disease progression. To this end, it is necessary to understand the fundamental elements related to the modulation of mitochondrial function and replication of BHV, as well as apoptosis levels in the host cells. It is crucial to understand the behavior of apoptotic genes related to BHV5 infection and cell viability. These findings contribute to understanding the BHV immunopathogenesis, help to prevent the spread of these agents, and are of great value to the development of vaccines / Doutor

Os insetos desenvolveram um sistema imune eficiente contra parasitas e patógenos, que compreende a resposta celular e a humoral. Os mecanismos celulares envolvem a fagocitose e a encapsulação pelos hemócitos, enquanto que as respostas humorais incluem a ativação da Profenoloxidase, e a síntese pelo corpo gorduroso dos peptídeos antimicrobianos, que são liberados na hemolinfa. Duas vias de sinalização intracelular, Toll e Imd, controlam a expressão dos genes codificadores dos peptídeos antimicrobianos. A análise do Genoma da abelha Apis mellifera permitiu a identificação dos genes dessas vias. No entanto, pouco se conhece do mecanismo de resposta imune nessas abelhas. Desta maneira, nos propusemos analisar a transcrição de genes efetores da resposta imune (abaecina, hymenoptaecina, defensina, transferrina, profenoloxidase), assim como os genes integrantes das vias de sinalização, tais como os genes de reconhecimento de microorganismos (PGRP, GNBP) e ainda, os de sinalização (cactus, relish, dorsal 1-B). Avaliamos também possíveis proteínas implicadas na resposta imune, como as proteínas de estocagem Vitelogenina, Hexamerina 70a, Lipoforina I/II e Lipoforina III. Finalmente, analisamos o efeito da nutrição e do envelhecimento sobre a imunidade em abelhas. Para análise da expressão dos genes das vias de sinalização, as abelhas foram infectadas com bactérias Serratia marcescens ou Micrococcus luteus por injeção ou via alimentação. A infecção com esses microorganismos provocou a transcrição de peptídeos antimicrobianos e de transferrina em altas quantidades após 3 e 12 horas de tratamento, além da alteração na quantidade de transcritos de outros genes. O papel dos genes profenoloxidase e dorsal na imunidade, descritos como codificadores de importantes proteínas em outros insetos, foi avaliado através da metodologia de silenciamento gênico por RNA de interferência. Observamos a diminuição da transcrição do gene alvo, mostrando a eficiência da metodologia. No entanto, a simples injeção de um RNA de fita dupla foi capaz de ativar o sistema imune de abelhas. Este efeito contribuiu para a dificuldade de atribuição do papel da Profenoloxidase na imunidade de abelhas. Contudo, os resultados de silenciamento de dorsal e suas isoformas, nos levaram a considerar que dorsal 1-A ou dorsal 2 participam da via de sinalização intracelular para produção de peptídeos antimicrobianos, principalmente de defensina. Em relação às proteínas de estocagem, tanto a quantidade de transcritos quanto de proteínas diminui após infecção com bactérias, indicando que estas proteínas estão envolvidas de alguma forma no processo de imunidade em abelhas. Além disso, consumo de alimentos ricos em proteína aumentou os níveis de transcritos das proteínas de estocagem, o que muito provavelmente favorece a manutenção da capacidade de resposta imune de abelhas. O efeito do envelhecimento no declínio da imunidade foi analisado em abelhas nutridoras (novas) e forrageiras (velhas) de uma colônia típica. Além disso, foram utilizadas abelhas de uma colônia single-cohort, que eram de uma mesma idade, mas algumas eram nutridoras, enquanto outras eram forrageiras. Todas as abelhas, independentemente da idade ou comportamento, foram capazes de ativar o sistema imune após infecção pela bactéria S. marcescens. No entanto, as abelhas com o comportamento de forrageira, independentemente da idade, sempre foram mais susceptíveis a infecções que as nutridoras. Este fato se deve, muito provavelmente, às diferenças fisiológicas entre essas abelhas, que proporciona às nutridoras maior competência à sobrevivência. / Insects have developed an efficient immune system against parasites and pathogens, which is comprised of both cellular and humoral responses. The cellular mechanisms involve phagocytosis and encapsulation by hemocytes, whereas the humoral responses include activation of prophenoloxidase and synthesis of antimicrobial peptides by the fat body, which are released into the hemolymph. Two signaling pathways, Toll and Imd, control the expression of genes encoding antimicrobial peptides. Genome-wide analyses of the honey bee, Apis mellifera, have identified predicted genes for these signaling pathways. However, immune response mechanisms in honey bees were not yet in depth studied. We analyzed the transcription of effector genes (abaecin, hymenoptaecin, defensin, transferin, prophenoloxidase), as well as other immune genes, such as pathogen recognition genes (PGRP, GNBP) and signaling genes (cactus, relish, dorsal 1- B). We also investigated the role of the storage proteins Vitellogenin, Hexamerin 70a, Lipophorin I/II and Lipophorin III in the honey bee immunity. Finally, we analyzed the effect of nutrition and aging on honey bee immunity. Gene expression of signaling pathway components was assessed in honey bees that had been infected with the bacteria Serratia marcescens or Micrococcus luteus through injection or oral challenge. Honey bees infected with these microorganisms had strong up-regulation of antimicrobial peptide genes and of transferin, and also other changes in transcript abundance after 3 and 12 hours of challenge. The roles of prophenoloxidase and dorsal in the immune response, described as genes encoding important proteins in other insects, were also investigated. In this case we used RNA interference (RNAi) to silence the expression of these genes. RNAi efficiently silenced the target genes. However, injection of doublestranded RNA in honey bees induced a reaction by the immune system. This made it difficult to determine the role of prophenoloxidase in honey bee immunity. Yet, silencing of dorsal and its isoforms led us to consider dorsal 1-A or dorsal 2 as members of the signaling pathways that produce antimicrobial peptides, especially defensin. The abundance of storage proteins transcripts and proteins was lower in infected bees than in controls, giving evidence that these proteins participate in the immune process in honey bees. Moreover, protein consumption caused up-regulation of genes encoding storage proteins, which may favor the maintenace of the immune response capacity. The effect of aging on decline in immunity was analyzed in (young) nurse bees and (old) foragers from normal free-flying colony. We also examined bees from a single-cohort colony, in which all individuals were at the same age; but some were nursing, while others were foraging. All the bees, independent of age or behavior, were able to activate the immune system after infection with S. marcescens. However, foragers, independent of age, were always more susceptible to infections than were nurse bees. This is probably due to physiological differences between bees, which confers to the nurses more competence to survivorship.

O diabetes mellitus (DM) é uma doença com prevalência e morbidade elevadas em todo o mundo, sendo que o DM1 é responsável por 5-10% dos casos. A vitamina D, hormônio de ação pleiotrópica, pode melhorar o curso do DM1, embora os mecanismos não estejam completamente elucidados. Dessa forma, ampliar o conhecimento sobre a ação desse hormônio pode auxiliar no prognóstico, bem como na compreensão dos possíveis mecanismos envolvidos na prevenção do DM. Neste trabalho, foram avaliados os efeitos fisiológicos da suplementação de vitamina D (800 UI/dia/sete dias; via oral) em camundongos machos (n=31; linhagem C57BL/6) distribuídos em quatro grupos: Controle + Água (CA; n=9); Controle + Vitamina D (CV; n=9); Diabético + Água (DA; n=6) e Diabético + Vitamina D (DV; n=7). Os camundongos tornados diabéticos (aloxana, 60 mg/Kg, intravenosa), quando comparados aos controles, exibiram redução do peso corporal e concentrações plasmáticas de glicose mais elevadas durante o período experimental de 10 dias (características do estado insulinopênico). Entretanto, a suplementação com vitamina D não alterou essa condição. Camundongos tornados diabéticos, em relação aos controles, exibiram redução do peso corporal (p<0,05) e concentrações plasmáticas de glicose (p<0,001) mais elevadas durante o período experimental. Animais suplementados com vitamina D apresentaram, em relação aos controles, níveis de 25(OH)D mais elevados (CA vs CV, p<0,001; DA vs DV, p<0,001). Níveis séricos maiores de ureia (CA vs DA, p<0,05; CA vs DV, p<0,01; CV vs DA, p<0,05; CV vs DV, p<0,01) e creatinina (CA vs DA, p<0,001; CA vs DV, p<0,001; CV vs DA, p<0,001; CV vs DV, p<0,001), espessamento da cápsula de Bowman, hipertrofia glomerular e destruição de hepatócitos foram observados em camundongos diabéticos em relação aos controles. Entretanto, a suplementação com vitamina D não alterou estas condições. O grupo DA apresentou menor nível sérico de albumina em relação aos grupos CA (p<0,05) e CV (p<0,05); níveis inferiores de hemoglobina (p<0,05) e hematócrito (p<0,05) em relação ao grupo DV; e menor leucometria (p<0,05) e mononucleares sanguíneos (p<0,05) em relação ao grupo CA. Os resultados sugerem que a vitamina D possa influenciar a resposta imunológica em animais diabéticos, modulando hematócrito, hemoglobina, bem como os níveis séricos de albumina / Diabetes mellitus (DM) is a disease with high prevalence and morbidity worldwide, and the DM1 is responsible for 5-10% of cases. The vitamin D hormone pleiotropic action, can improve the course of T1DM, although the mechanisms are not fully elucidated. Thus, better understanding the action of this hormone can aid in prognosis as well as in understanding the possible mechanisms involved in the prevention of diabetes. We evaluated the physiological effects of vitamin D (800 IU/day/seven days, v.o.) in male mice (n=31, C57BL/6 strain) divided into four groups: Control + Water (CW, n=9); Control Vitamin D + (CV n=9); Diabetic + Water (DW, n=6) Diabetic + Vitamin D (VD, n=7). The mice induced-diabetes by alloxan (60 mg/kg, i.v.), when compared to controls, exhibited reduced body weight and plasma glucose concentrations were higher during the experimental period of 10 days (features insulinopenic state). However, vitamin D supplementation did not alter this condition. Diabetic mice, compared to controls, exhibited reduced body weight (p<0,05) and plasma glucose concentrations (p <0.001) higher during the trial period. Animals supplemented with vitamin D showed higher levels of 25 (OH) D than controls (CW vs CV, p <0,001; DW vs DV, p<0,001). Higher serum urea (CW vs. DW, p <0,05; CW vs DV, p <0,01; CV vs DA, p <0,05; CV vs DV, p <0,01) and creatinine (CW vs. DW, p <0,001; CW vs DV, p <0,001; CV vs DW, p <0,001; CV vs DW, p <0,001), thickening of Bowman\'s capsule, glomerular hypertrophy and destruction of hepatocytes were observed in diabetic mice compared to controls. However, vitamin D supplementation did not alter these conditions. The DW group showed lower serum albumin compared to CW (p<0,05) and CV (p<0,05) groups; lower hemoglobin (p<0,05) and hematocrit (p <0,05) compared to the DV group; and lower leukocyte counts compared to CW (p <0,05) and mononuclear blood (p <0,05) compared to the CW group. The results suggest that Vitamin D may influence the immune response in diabetic animals, modulating hematocrit, hemoglobin and serum albumin

Objetivou-se identificar parâmetros bioquímicos, hematológicos e imunológicos, sistêmicos e locais, associados a modelo de risco de mastite bovina, da secagem ao final do período de transição da lactação subsequente, de vacas submetidas a antimicrobiano e selante na secagem. Foram utilizadas 34 vacas da raça Holandesa, divididas em três grupos: grupo controle (GC; n = 13); grupo antimicrobiano (GA; n = 10) composto animais que receberam antimicrobiano intramamário; grupo selante (GS; n = 11), composto por animais que receberam selante intramamário. Foram coletadas amostras de leite e sangue onde avaliou-se hemograma, metabolismo oxidativo de neutrófilos (NBT), imunoglobulinas, bioquímica, e CMT, contagem de células somáticas, isolamento microbológico do colostro e leite e imunoglobulinas do leite nos 60 dias que antecederam o parto (M1), no dia do parto (M2), três, sete, 15, 21, 30 dias pós-parto (M3, M4, M5, M6 e M7). Os dados foram analisados pelo software Stata utilizando um modelo de regressão logística. As variáveis foram analisadas primeiro individualmente para verificar o significado e em seguida, em combinação, para avaliar o efeito das variáveis individuais. Na primeira fase da análise, empregou-se modelo logístico para cada variável relacionada com os achados clínicos, com valores de P inferiores a 0,20 foram considerados como uma variável selecionada e passada para a próxima fase da análise. Dentro o modelo final, foram usadas variáveis selecionadas na primeira fase para desenvolver um modelo logístico multivariado em que as variáveis com P&le;0.05 foram retidas no modelo final. Foi possível identificar que alterações nos parâmetros, proteína, albumina e fibrinogênio, servem de biomarcadores associados à mastite bovina. Alterações metabólicas específicas e características do período de transição, nos parâmetros sanguíneos, sobrepõem o efeito dos protocolos de secagem empregados e, sugere-se que o perfil sistêmico da vaca o periparto está associado à mastite / Objective identify biochemical, hematological and immunological systemic and local, associated with Bovine Mastitis risk model, drying at the end of the transitional period of the subsequent lactation cows treated with antimicrobial and sealant to dry. 34 cows were used the Dutch race, divided into three groups: control group (GC; n = 13); antimicrobial Group (GA; n = 10) animals receiving antimicrobial intramamário; sealant Group (GS; n = 11), composed of animals that received intramamário sealant. Milk samples were collected and evaluated blood where blood count, neutrophil oxidative metabolism (NBT), immunoglobulins, biochemistry, and CMT, somatic cell count, microbológico isolation of colostrum and milk and milk immunoglobulins in the 60 days preceding childbirth (M1) on the day of delivery (M2), three, seven, 15, 21, 30 days postpartum (M3, M4, M5, M6 and M7). Data were analyzed by the software Stata using a logistic regression model. The variables were analyzed individually to check the meaning and then, in combination, to evaluate the effect of individual variables. In the first phase of the analysis, logistic model was used for each variable related to the clinical findings, with P values less than 0.20 were considered as a variable selected and passed to the next stage of analysis. In the final model, selected variables were used in the first phase to develop a multivariate logistic model in which the variables with P &le; 0.05 were retained in the final model. It was possible to identify changes in the parameters, protein, albumin and Fibrinogen, serve as biomarkers associated with Bovine Mastitis. Specific metabolic changes and characteristics of the transitional period, blood parameters, overlapping the effect of drying employees and protocols, it is suggested that the systemic profile the periparto cow is associated with mastitis

Tendo em vista a ocorrência de alterações no sistema imune relacionadas ao hipertireoidismo e à participação do sistema complemento (SC) em processos imunológicos, torna-se importante investigar se os hormônios tireoidianos teriam algum efeito sobre o SC. O SC é composto de uma série de proteínas séricas e de membrana que estão envolvidas em processos da resposta imune. Considerando que os hormônios tireoidianos estão envolvidos em uma série de processos biológicos, e que tanto o hipo- quanto hipertireoidismo podem acarretar alterações importantes nestes processos, os objetivos deste trabalho foram estudar o impacto de níveis séricos elevados de hormônios tireoidianos sobre a atividade do sistema complemento e produção de anticorpos. Foram utilizados ratos machos wistar para o modelo experimental de hipertireoidismo, investigando-se a atividade lítica das vias clássica/lectina e alternativa através de ensaios hemolíticos; os níveis séricos de fator B da via alternativa através do emprego de reagente deficiente de fator B; e a produção de anticorpos anti-hemácia de carneiro (SRBC) empregando ELISA (enzyme linked immunosorbent assay) e ensaios de plaque forming cell (PFC). O hipertireoidismo induzido não resultou em alterações da atividade lítica das vias clássica/lectina. Entretanto, a elevação dos níveis séricos de hormônios tireoidianos provocou uma redução da atividade lítica de via alternativa, de forma significante em doses de 1, 5, 50 e 100g de levotiroxina/200g de peso animal após 14 dias de tratamento, e com dose a partir de 0,15g de triiodotironina/200g de peso animal, após 7 e 12 dias de tratamento. Os níveis séricos funcionais de fator B foram reduzidos nestas condições. Além disso, ocorre redução da resposta de produção de anticorpos em ratos tratados com T3 e imunizados com SRBC. Estes resultados mostram que níveis elevados de hormônio tireoideano reduzem a capacidade funcional da via alternativa do SC , avaliada pelo desencadeamento da lise em decorrência da interação com hemácias de coelho. Esta redução poderia levar a uma menor geração de fragmentos com atividade nos processos de seqüestro e apresentação do antígeno e interação com as células envolvidas na resposta imune, resultando em títulos menores de anticorpos produzidos. Estudos adicionais são necessários para avaliar estas possibilidades. As observações deste estudo podem auxiliar para o melhor entendimento do impacto biológico das disfunções hormonais sobre a atividade do sistema complemento. / Considering the alterations of the immune system that occur in the hyperthyroidism, and the involvement of the complement system (CS) in immune processes, this work aimed to investigate the effect of high levels of thyroid hormones on the CS and on the antibody production. The CS comprehends a group of serum and membrane proteins which activation leads to the generation of protein fragments or complexes with important biologic functions, such as participation in events of the immune response. Wistar adult male rats treated with thyroid hormones were used as experimental model of hyperthyroidism, to evaluate the lytic activity of classical/lectin and alternative pathways of the CS through hemolytic assays; the serum levels of factor B employing serum deficient of this component (RB); and the production of anti-sheep red blood cells (SRBC) antibodies through enzyme linked immunosorbent (ELISA) and plaque forming cell (PFC) assays. Classic and lectin pathways activity was not affected in the hyperthyroidism. However in this condition the alternative pathway activity was significantly reduced at doses of 1; 5; 50 and 100 g of thyroxine (T4) /200g of animal weight/day after 14 days of treatment, or crescent doses starting from 0,15 g of triiodothyronine (T3) for periods of 7 and 12 days of treatment. The serum levels of factor B were also reduced in these conditions. In addition, there was a reduction of the antibody response in rats treated with T3 and immunized with SRBC. These results show that the functional capacity of alternative pathway is decreased in consequence of high levels of thyroid hormones as evaluated by its lytic potency triggered by the rabbit erythrocytes. This could them lead to a reduced generation of complement fragments active in antigen sequestering and presentation, and on the interaction of cells in the immune response decreasing the antibody production. Additional studies are required to evaluate these possibilities.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2017-02-10T11:11:21Z No. of bitstreams: 1 Edvaldo Cavalcanti de LIma Neto.pdf: 1484364 bytes, checksum: 176b6dea99569a96a24729551d8d6cab (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-10T11:11:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Edvaldo Cavalcanti de LIma Neto.pdf: 1484364 bytes, checksum: 176b6dea99569a96a24729551d8d6cab (MD5) Previous issue date: 2006-02-20 / Viruses are among the most harmful pathogens found in aquaculture and are the most numerous and diverse of the pathogenic agents described to crustaceans. The knowledge about genes associated to immunity viral response, as well as the relationships between pathogen and host still very incomplete. Moreover, shrimp cell lines are not available, thus limiting primary systems of cellular culture to assist searches in genomic expression. The Expressed Sequence Tags (ESTs) analyses have become a common tool used to identify genes involved in some specific biological functions, particularly in organisms in which genomic data are not available. The Laboratory of Applied Genetics (LAGA) of the Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE) is one of the members of the Shrimp EST Genome Project (ShEST), assisting on sequencing and search for genes related to shrimp immune response against the viral infections. Libraries of different tissues (muscle, hepatopancreas, ocular peduncle)and different larval stages of Litopenaeus vannamei were sequenced using BigDye Terminator Sequencing Kit (Applied Biosystems) or ET-Dye Terminator (Amersham/GE Healthcare) and M13 universal primer (5'-TGTAAAACGACGGCCAGT-3'). The sequences were analyzed in automated sequencers MegaBace1000 (Amersham/GE Healthcare) and Applied Biosystems 377 (ABI377). These sequences were analyzed using the Basic Local Alignment Search Tool (BLAST). The results presented homology with interferon system proteins, like 2’,5’-Oligoadenylate binding protein, Toll like receptors, JAK/STAT and Interferon like protein. The 2’,5’-Oligoadenylate binding protein would be the first protein related to interferon system described in shrimps. A lot of sequences are still need to be investigated to complete the whole genome of Litopenaeus vannamei, nevertheless there are indications that this animal has a complex antiviral defense system, similar to interferon. / Os vírus estão entre os patógenos mais danosos encontrados na aqüicultura e são os mais numerosos e diversificados descritos para os crustáceos. O conhecimento sobre os genes associados à resposta imune viral, bem como a relação entre patógenos e hospedeiro ainda é escasso. Além disso, não há disponibilidade de linhas de célula para camarões, o que limita os sistemas primários de cultura celular, que por sua vez subsidiam pesquisas voltadas à expressão gênica. A análise de Seqüências Expressas Identificadas Expressed Sequence Tags (ESTs) tem se tornado uma prática comumente utilizada para identificar genes envolvidos em funções biológicas específicas, especialmente em organismos onde os dados genômicos ainda não estão disponíveis. O Laboratório de Genética Aplicada (LAGA) da Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE) é um dos participantes do projeto genoma EST do camarão Litopenaeus vannamei (ShEST) auxiliando no seqüenciamento e busca de genes de L. vannamei que atuam na resposta imune dos camarões contra as infecções virais. Foram seqüenciadas bibliotecas de diferentes tecidos (músculo, hepatopâncreas, pedúnculo ocular, etc) e diferentes fases larvais de Litopenaeus vannamei usando BigDye Terminator Sequencing Kit (Applied Biosystems) ou ET-Dye Terminator (Amersham/GE Healthcare) e o primer M13 universal (5'-TGTAAAACGACGGCCAGT-3'). As seqüências foram analisadas em seqüenciadorores automáticos MegaBace1000 (Amersham/GE Healthcare) e Applied Biosystems 377 (ABI377). Estas seqüências foram analisadas usando-se a Basic Local Alignment Search Tool (BLAST). Os resultados obtidos apresentaram homologia com proteínas do sistema interferon, como 2’,5’-Oligoadenylate binding protein, Toll like receptors (TLRs), JAK/STAT e interferon like protein (IntlP). A 2’,5’-Oligoadenylate binding protein pode ser a primeira proteína descrita para camarões que está relacionada ao sistema interferon. Muitas seqüências ainda precisam ser processadas para completar o genoma de Litopenaeus vannamei, contudo já há indícios de que este tenha um complexo sistema de defesa contra vírus, semelhante ao sistema interferon.

O Trypanosoma cruzi, parasita causador da doença de Chagas, apresenta isolados virulentos e de baixa virulência. Exploramos o envolvimento do sistema imune nos baixos níveis de parasitemia de camundongos infectados com parasitas de baixa virulência Sylvio X10/4. Camundongos C57Bl/6 WT não apresentam parasitemia patente após 24 horas da infecção, e a análise da carga parasitária revelou que a maioria dos parasitas vão para o fígado e baço. O envolvimento dos anticorpos naturais foi descartado, e uma pequena participação do sistema complemento sugerida. Já camundongos IFN-<font face=\"Symbol\">gKO infectados apresentaram parasitemia intermitente nas primeiras semanas, e isto não pôde ser atribuído à deficiência na produção de proteínas de fase aguda. Anticorpos específicos parecem cruciais para o controle do parasita; além disso, animais que apresentam apenas IgM são resistentes à infecção. Assim, sugerimos que a rápida saída que segue a inoculação do Sylvio X10/4 é um processo de remoção ativa e, em longo prazo, não somente a IgG, mas a IgM tem um papel importante na proteção. / Trypanosoma cruzi, the parasite responsible for Chagas´ disease, displays virulent isolates and low-virulence ones. We explored the involvement of the immune system in the low level parasitemia of mice infected with low-virulence Sylvio X10/4 parasites. C57BL/6 WT mice do not show patent parasitemias after 24 hours after infection and the parasite load revealed that most parasites go to the liver and spleen. The involvement of natural antibodies was discarded and a small participation of the complement system was suggested. However, infected IFN-<font face=\"Symbol\">gKO mice showed intermittent patent parasitemias in the first weeks of infection and this can not be attributed to deficiency in the production of acute phase proteins. Parasite-specific antibodies seem crucial for parasite control, in addition, animals that have only IgM are resistant to infection. Thus, we suggest that the rapid clearance that follows Sylvio X10/4 inoculation is an active removal process and, at the long run, not only IgG, but also IgM play an important role in protection.