Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 431857.pdf: 2482469 bytes, checksum: b7a25df1538a26027ad365149defa70e (MD5) Previous issue date: 2011-03-04 / A condi??o cr?tica de sa?de ? causada pela intera??o de fatores gen?ticos e ambientais. Embora cada fator de risco em si j? esteja parcialmente sob controle gen?tico, estudos prop?em a exist?ncia de efeitos adicionais causados por genes de susceptibilidade; estes estudos iniciaram sugerindo variantes gen?ticas isoladas que poderiam aumentar o risco do paciente criticamente enfermo. Paralelamente, h? evid?ncias crescentes de que a inflama??o desempenha tamb?m um papel central nos pacientes com condi??es cr?ticas de sa?de. Durante a situa??o cr?tica, os fatores de risco cl?nicos e bioqu?micos convencionais s?o muito importantes, mas o estado inflamat?rio do paciente pode modular a gravidade do processo patol?gico. A inflama??o pode estar envolvida em todas as fases do desenvolvimento e das conseq??ncias da doen?a cr?tica, sendo o processo inflamat?rio um agente central da morbi-mortandade do paciente criticamente doente. Assim, controlando o estado inflamat?rio pode-se aumentar a chance do indiv?duo ter um melhor / pior desfecho. O CD14 (cluster of diferenciation 14) ? um receptor padr?o de reconhecimento de mol?culas envolvidas na resposta imune inata contra fatores ex?genos e end?genos de estresse. Os co-receptoes do CD14 mais importantes s?o TLR2, TLR4 (Toll-like Receptors), que s?o receptores transmembrana que mediam a resposta inflamat?ria por endotoxinas, e ativam a via do fator nuclear kappa B (NF-kappa B). O fator de necrose tumoral (TNF-α) ? outra citocina relevante no ?mbito do processo de inflama??o. Mas, al?m de seu papel protetor na imunidade inata, essas citocinas pr?-inflamat?rias podem exercer tamb?m efeitos patog?nicos. Em 2006, foi avaliada a influ?ncia do polimorfismo de nucleot?deo ?nico (SNP) -260C>T CD14 em uma amostra de 85 pacientes criticamente enfermos. Com uma distribui??o aleat?ria de gen?tipos para as caracter?sticas cl?nicas, como tempo de interna??o do paciente na Unidade de Terapia Intensiva (UTI), idade e tempo de perman?ncia hospitalar, foi observado que os pacientes -260TT CD14 apresentaram maiores ?ndices de sobreviv?ncia quando comparados com os portadores do alelo -260C CD14. Em 2009 foi testado uma amostra de 514 pacientes em estado cr?tico se o gen?tipo -260TT CD14 ocorreria mais frequentemente entre os sobreviventes do que entre os pacientes falecidos. Este estudo publicado mostrou que os resultados de 2006 se confirmaram com uma maior robustez. O SNP -260C>T CD14 foi um fator protetor para a sobreviv?ncia em pacientes gravemente doentes: houve uma frequ?ncia superior de sobreviventes homozigotos -260TT CD14. Estes resultados surgiram com a hip?tese de a maior frequ?ncia do gen?tipo -260TT CD14 em pacientes de UTI sobreviventes seria, possivelmente, explicada por um efeito de sinaliza??o na imunidade inata. Naquele momento (2009), a literatura atual estava sugerindo que a an?lise de uma s?rie de marcadores gen?ticos polim?rficos poderia ser mais informativa do que a an?lise de um ?nico polimorfismo. Ciente destas informa??es buscou-se a analisar SNPs em outros genes que codificam prote?nas com a??es sin?rgicas com o CD14 para verificar se eles tamb?m poderiam ser informativos no desfecho dos pacientes com condi??es cr?ticas de sa?de. Verificou-se a heran?a de variantes nos genes TLR2, TLR4, e TNF-α, os quais poderiam atuar em sinergia com o SNP -260C>T CD14 durante a condi??o cr?tica. Foram obtidos resultados que mostraram que SNPs 2029C>T e 2258G>A do TLR2, 896A>G e 1196C>T do TLR4 e o - 308G>A do TNF-α, isoladamente, n?o desempenham um papel significantemente not?vel no desfecho da doen?a cr?tica. No entanto, ao se realizar uma an?lise combinada com a heran?a do -260C>T CD14, foi detectado uma taxa de sobreviv?ncia significativamente maior no grupo de pacientes duplo homozigoto -260TT CD14/-308GG TNF-α. Na an?lise ajustada com o duplo gen?tipo as principais vari?veis cl?nicas preditoras de mortalidade, foram observadas que o duplo gen?tipo -260TT CD14/-308GG TNF-α foi um fator importante de prote??o para a sobreviv?ncia. Conectado ao efeito ben?fico do -260TT CD14, o gen?tipo -308GG TNF-α foi protetor contra a relatada superexpress?o de TNF-α causada por alelo -308A TNF-α. Em conclus?o, os resultados ap?iam a hip?tese de que a intera??o entre os SNPs funcionais - 260TT CD14 e -308GG TNF-α pode estar influenciando o desfecho de pacientes criticamente enfermos

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:30:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 393358.pdf: 4895507 bytes, checksum: 9eba41c68f55060563cbb2a7cf544bf8 (MD5) Previous issue date: 2007-07-04 / Este estudo avaliou a vasculatura dos linfonodos submandibulares em diferentes tempos cicatriciais de ferida cir?rgica produzida em ventre de l?ngua de ratos Wistar machos. Atrav?s da microscopia eletr?nica de varredura (MEV), foram avaliados 123 linfonodos pela t?cnica de moldagem vascular, e em microscopia de luz, foram avaliados 232 linfonodos atrav?s de cortes histol?gicos corados com HE, nos tempos 2, 3, 7, 10, 14 e 21 dias p?s-operat?rios. Analisando os cortes histol?gicos, verificou-se que o interior dos n?dulos foliculares apresentou uma quantidade pequena de vasos sangu?neos, ficando estes concentrados na por??o basal desses n?dulos. Quando os grupos experimentais foram comparados entre si, constatou-se maior quantidade de vasos sangu?neos aos 21 dias p?s-operat?rios, n?o diferindo significativamente dos tempos de 2, 7 e 14 dias. Quando os grupos experimentais foram comparados aos controles, constatou-se diferen?a significativa aos 2, 3, 14 e 21 dias p?s-operat?rios em rela??o ao n?mero m?dio de vasos sangu?neos. Durante a an?lise dos modelos vasculares atrav?s da MEV, mensurouse a ?rea dos n?dulos foliculares e os di?metros dos capilares que circundam esses n?dulos. Observou-se um aumento significativo no di?metro dos capilares a partir do segundo dia, que persistiu at? o d?cimo dia p?s-operat?rio. A ?rea dos n?dulos foliculares aumentou significativamente somente a partir do terceiro dia e esse aumento persistiu at? o d?cimo-quarto dia p?s-operat?rio. A angiog?nese por intussuscep??o foi vista em todos os grupos avaliados, no entanto, em maior quantidade no segundo e terceiro dia p?s-operat?rio (83,33% e 80% respectivamente). Observou-se, no presente estudo, que o aumento do di?metro dos capilares ocorreu anteriormente ao aumento da ?rea dos n?dulos foliculares, e que a quantidade de vasos sangu?neos foi semelhante na por??o basal dos n?dulos foliculares e na regi?o perif?rica ao c?rtex profundo.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:32:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 418273.pdf: 1037092 bytes, checksum: 5a2ba543e2c3ec3378833ba7e8ef063f (MD5) Previous issue date: 2009-04-29 / Introdu??o: O cortic?ide inalat?rio ? considerado o f?rmaco mais efetivo e seguro no controle da asma persistente, tanto em adultos quanto em crian?as. Pacientes com asma grave podem apresentar resist?ncia ao cortic?ide, com repercuss?o cl?nica vari?vel. Os mecanismos de resist?ncia aos cortic?ides t?m sido estudados h? d?cadas na popula??o adulta. No entanto, resist?ncia aos cortic?ides em asma n?o foi estudada em crian?as. O objetivo do presente estudo ? analisar a sensibilidade ao cortic?ide das c?lulas mononucleares de sangue perif?rico em crian?as com asma persistente grave. M?todos: Crian?as com asma persistente (entre 6-15 anos de idade) foram divididas em tr?s grupos (graves, moderados e leves), e comparadas com crian?as saud?veis. Testes de fun??o pulmonar e testes cut?neos foram realizados em todas as crian?as asm?ticas estudadas. C?lulas mononucleares do sangue perif?rico foram isoladas e cultivadas in vitro e analisada a prolifera??o mit?geno-induzido, bem como a sensibilidade celular a dexametasona. Resultados: Foram inclu?das 57 crian?as com asma e 18 crian?as no grupo controle. Em rela??o ? prolifera??o dos linf?citos, pacientes com asma apresentaram menor prolifera??o celular (p<0,05) quando comparados com o grupo controle. Al?m disto, em rela??o ? gravidade, somente pacientes com asma moderada apresentaram prolifera??o menor quando comparados com o grupo controle (p<0,05). No teste de sensibilidade para dexametasona, n?o houve diferen?a entre os pacientes com asma e o grupo controle. No entanto, foi observada uma menor sensibilidade dos pacientes com asma leve para dexametasona (p<0,05). Pacientes com asma grave apresentaram sensibilidade a dexametasona semelhante ao grupo controle. Conclus?es: Crian?as com asma grave n?o s?o resistentes ao cortic?ide em an?lise in vitro de c?lulas mononucleares perif?ricas. Nossos achados sugerem que a resist?ncia aos cortic?ides em pacientes com asma grave pode ser um processo adquirido durante a vida.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:34:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 418046.pdf: 4060677 bytes, checksum: 5a23c04f46b75d342b7b1205a3877568 (MD5) Previous issue date: 2009-10-27 / Introdu??o: s?ndrome metab?lica (SM) ? definida como um conjunto de anormalidades aterotromb?ticas e inflamat?rias. Seus portadores apresentam predisposi??o aumentada a morbi-mortalidade por doen?as cardiovasculares (DCV) e diabetes mellitus tipo 2 (DM2). Diversos biomarcadores inflamat?rios, do metabolismo lip?dico, oxidativo e isqu?mico, ligados a fisiopatologia da SM t?m sido investigados. Recentes estudos sugerem que a albumina modificada pela isquemia (IMA) ? um biomarcador de isqu?mia e que seus n?veis elevados representam uma poss?vel indica??o de disfun??o microvascular em pacientes com SM. Objetivo: investigar a associa??o de marcadores lipidicos, oxidativos e inflamat?rios potencialmente associados a processos isqu?micos em pacientes com s?ndrome metab?lica. Material e m?todos: estudo prospectivo, do tipo caso-controle, onde foram inclu?dos 32 (30,2%) indiv?duos saud?veis (grupo controle C) e 74 (69,8%) indiv?duos com SM (grupo caso SM). Os indiv?duos com SM foram recrutados no ambulat?rio de risco cardiometab?lico do Servi?o de Cardiologia do Hospital S?o Lucas da Pontif?cia Universidade Cat?lica do Rio Grande do Sul e os saud?veis foram recrutados na Universidade Federal de Santa Maria (UFSM - alunos, funcion?rios e professores). O crit?rio diagn?stico de SM utilizado foi o NCEP-ATPIII. Glicose, colesterol total (CT), HDL e triglicer?deos (TG) foram determinados por m?todo enzim?tico colorim?trico (Ortho-clinical Diagnostics); LDL foi determinada pela equa??o de Friedwald; Prote?na C ultra Sens?vel (PCR-us) foi determinada por nefelometria, autoanticorpo anti-LDL-oxidada (anti-OxLDL) e LDL oxidada (OxLDL) foram determinadas por ensaio imunoenzimatico (ELISA); IMA foi mensurada por ensaio colorim?trico com cobalto. Resultados: a amostra incluiu 34 homens e 72 mulheres. A m?dia de idade do grupo C foi 55,2?8,8 anos e do grupo SM 57,6?8,3 anos (p=0,142). O grupo SM apresentou maior IMC (32,6?6,1 kg/m2, p=0,0001), press?o arterial sist?lica (147?26,8 mmHg, p=0,001), press?o arterial diast?lica (85,9?15,9 mmHg, p=0,01), glicose (133,7?68,7 mg/dL, p=0,001), CT (204?58,1 mg/dL, p=0,001), LDL (114,4?49,5 mg/dL, p=0,001), TG (214,9?/34,8 mg/dL, p=0,001) em compara??o com o grupo C. N?veis de IMA, PCR-us, IL-6, OxLDL e anti-OxLDL foram significativamente mais elevados (0,618?0,1355, p=0,0001; 1,72?0,964, p=0,0001; 53,20?14,52, p=0,0001; 0,662?0,461, p=0,001; 27,822?17,010, p=0,001) respectivamente no grupo SM, em rela??o ao grupo C. A an?lise multivariada mostrou associa??o entre n?veis elevados de IMA e SM e esta foi independente de sexo, idade DM2 e hipercolesterolemia (p=0,0405). Conclus?o: no presente estudo, observou-se associa??o entre IMA, biomarcadores inflamat?rios, do metabolismo lip?dico e oxidativo com SM, indicando que esses indiv?duos portadores de SM est?o mais propensos a desencadearem processos aterotromb?ticos. Estudos adicionais envolvendo intera??es gen?ticas e ambientais em pacientes com SM podem contribuir para elucidarmos o potencial papel cl?nico da IMA, para que se torne um preditor de eventos aterotromb?ticos, com vistas ? diminui??o da morbi-mortalidade cardiovascular.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:35:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 458575.pdf: 2405331 bytes, checksum: 33fd1d0ad3d3f11fcf5b9cd9b9bff218 (MD5) Previous issue date: 2014-02-27 / Introduction: Psychiatric disorders are among the most common diseases and represent an important public health problem. The neurobiological processes implicated in the pathophysiology of neuropsychiatric disorders are not fully known. Exposure to adverse events in early life increases the risk of developing neuropsychiatric conditions in adulthood, including affective disorders and psychosis. In rodents, maternal separation (MS) is commonly used as a model of exposure to stress in early life. MS may cause long-term effects on brain function, including cellular, neurochemical and behavioral changes. The involvement of pro -inflammatory cytokines in neuropsychiatric disorders has attracted increasing interest from researchers. Topiramate is an antiepileptic drug that has proven to exhibit neuroprotective properties in animal models of brain injury, reducing neuronal damage in animal models of neonatal hypoxic ischemia and attenuating memory deficits. Objectives: To investigate the effect of Topiramate (Top) in reversing cognitive impairment in rats submitted to neonatal stress induced by MS and compare with Valproic Acid (Val), which was previously studied by our research group. Furthermore, to investigate the effects of neonatal stress with and without treatment with Val and Top on BDNF, TNF- &#945;, and Interleukin 10 (IL-10) levels. Methodology: Study on animal model of stress exposure in neonatal period (method of MS), in male rats. Treatment with Top and Val in adulthood: one group received 10mg/kg of Top orally once a day for 14 days, the other group received 100mg/kg of Top in the same period, another group received Val 200mg/kg orally in the same period, and the other group received the same corresponding amount in milliliters also orally of saline solution (control group). Behavioral tests (motor/exploratory activity, recognition memory), and analyzes of BDNF, TNF- &#945; , and IL-10 levels were performed in adulthood. Results: The MS during the neonatal period causes memory impairment in adult rats. The treatment in adults with Top caused injury to memory when used, independently of maternal separation. Likewise, it also failed to reverse the damage caused by MS. Pharmacological treatment with Val in adulthood reversed long-term (LTM) memory deficits induced by MS and caused an improvement in short-term memory (STM) in rats separated from the mother. The MS induced a significant increase in IL -10 when the separated-saline (MS - Sal) was compared with the control group (non-separated-saline, NS-Sal). Statistical comparisons of TNF-&#945; levels, indicated that the group subjected to MS which received saline (MS - Sal) showed a significant increase in the levels of TNF-&#945; in the hippocampus when compared with the control group. Similarly, the levels of TNF-&#945; in the group MS-Sal were also increased in cortex, compared to NS-Sal group. The MS induced a significant decrease in BDNF levels in the hippocampus, when the group MS-Sal was compared with the control group. No statistically significant difference was observed in the comparison of BDNF in prefrontal cortex. Conclusions: MS leads to persistent memory deficits and increases levels of the anti-inflammatory cytokine, IL-10, and of the pro-inflammatory cytokine, TNF-&#945;, and decreases levels of BDNF in adulthood. Val partially alleviated these memory deficits, while Top was ineffective. Surprisingly, the two drugs were able to recover levels of cytokines in brain regions studied. / Introdu??o: Os transtornos psiqui?tricos est?o entre as doen?as mais comuns e representam um importante problema de sa?de p?blica. Os processos neurobiol?gicos implicados na fisiopatologia dos transtornos neuropsiqui?tricos ainda n?o s?o totalmente conhecidos. A exposi??o a eventos adversos no in?cio da vida aumenta o risco de desenvolvimento de condi??es neuropsiqui?tricas na idade adulta, incluindo transtornos afetivos e psicose. Em roedores, a separa??o materna (SM) tem sido correntemente utilizada como um modelo de exposi??o ao estresse no in?cio da vida. A SM poder causar efeitos ? longo prazo na fun??o cerebral, incluindo altera??es celulares, neuroqu?micas e comportamentais. O envolvimento das citocinas pr? e antiinflamat?rias nas doen?as psiqui?tricas tem despertado cada vez mais o interesse dos pesquisadores. O topiramato ? um medicamento anti-epil?ptico que provou apresentar propriedades neuroprotetoras em modelos animais de les?o cerebral, reduzindo o dano neuronal em modelos animais de isquemia hip?xica neonatal e atenuando os d?ficits da mem?ria. Objetivos: Investigar o efeito do Topiramato (Top) na preven??o do preju?zo cognitivo em ratos Wistar submetidos a estresse neonatal, induzido pela SM e comparar com o ?cido Valpr?ico (Val). Investigar o efeito do estresse neonatal com e sem o tratamento com Top e Val sobre os n?veis de BDNF, TNF- &#945; e Interleucina 10 (IL-10). Metodologia: Estudo com modelo animal de exposi??o a estresse no per?odo neonatal (m?todo SM), em ratos machos. Tratamento com Top e Val na idade adulta: um grupo recebeu 10mg/Kg via oral de Top uma vez ao dia por 14 dias, o outro grupo recebeu 100mg/kg de Top no mesmo per?odo, outro grupo recebeu 200mg/kg via oral de Val no mesmo per?odo, e o outro grupo recebeu a mesma quantidade correspondente em mililitros tamb?m por via oral de solu??o salina (grupo controle). Testes comportamentais (atividade motora/explorat?ria, mem?ria), an?lises de BDNF, TNF &#945;, IL10 foram realizados na idade adulta. Resultados: A SM durante o per?odo neonatal causa preju?zo de mem?ria em ratos adultos. O tratamento na idade adulta com Top ocasionou preju?zo ? mem?ria quando utilizado independente da SM. Assim como, tamb?m n?o conseguiu reverter os danos ocasionados pela SM. O tratamento farmacol?gico com Valproato (Val) na vida adulta reverteu os d?ficits de mem?ria de longa- dura??o (LTM) induzidos pela priva??o materna e provocou uma melhora na mem?ria de curta-dura??o (STM) nos ratos separados da m?e. A SM induziu um aumento significativo nos n?veis de IL-10 quando o grupo separado-salina (S Sal) foi comparado com o grupo controle n?o separado-salina (NS-Sal). As compara??es estat?sticas dos n?veis de TNF-&#945;, indicaram que o grupo submetido ? SM que recebeu solu??o salina (S-Sal) apresentou um aumento significativo nos n?veis de TNF-&#945; no hipocampo quando comparado com o grupo de controle. Do mesmo modo, os n?veis de TNF-&#945; de animais do grupo S -Sal foram tamb?m aumentados no c?rtex, quando comparado com o grupo de NS Sal. A SM induziu um decr?scimo significativo nos n?veis de BDNF no hipocampo, quando o grupo S-Sal foi comparado com o grupo controle. Nenhuma diferen?a estatisticamente significativa foi observada na compara??o do BDNF no c?rtex pr?-frontal. Conclus?es: A SM induz a d?ficits de mem?ria persistentes e aumenta os n?veis da citocina anti-inflamat?ria, a IL-10, e da citocina pr? - inflamat?ria, o TNF-&#945;, e diminui os n?veis de BDNF na idade adulta. O Val parcialmente amenizou esses d?ficits de mem?ria, enquanto que o Top foi ineficaz. Surpreendentemente, as duas drogas foram capazes de recuperar os n?veis das citocinas nas regi?es cerebrais estudadas.

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:03:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 LeonardoARS_DISSERT.pdf: 3694454 bytes, checksum: 6813d4e2275c599aa11e18b29a511e71 (MD5) Previous issue date: 2010-09-17 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico / Galactans are polysaccharides sulfated present in the cell wall of red algae. Carrageenans are galactans well known in the food industry as gelling polysaccharides and for induce inflammatory process in rodents as animal model. The extraction of polysaccharides from A. multifida has been carried out by proteolysis and precipitation in different volumes of acetone, which produced three fractions (F1, F2, and FT). Chemical and physical analyses revealed that these fractions are sulfated galactan predominantly. Results of the antioxidant activity assays showed that all of these fractions have antioxidant activity and that was associated with sulfate content of the analysis of reducing power and total antioxidant capacity. However, these fractions were not effective against lipid peroxidation. The fraction FT presented higher activity on the APTT test at 200 &#956;g (> 240 s). The assessment of the hemolytic activity showed that the FT fraction has the best activity, increasing lyses by the complement system to 42.3% (50 &#956;g) (p< 0,001). The fraction FT showed the best yield, anticoagulant and hemolytic activity between the three fractions and therefore it was choose for the in vivo studies. The Inflammation assessment using the FT fraction (50 mg / kg MB) showed that the cellular migration and the IL-6 production increased 670.1% (p< 0,001) and 531.8% (p< 0,001), respectively. These results confirmed its use as an inflammation inducer in animal model. Cytotoxicity assay results showed that all fractions have toxic effects on 3T3 and HeLa cells after exposition of 48 hours, except when 100 &#956;g for both F1 and FT were used. These results arise the discussion whether these polysaccharides it should be used as additive in foods, cosmetics and medicines. / Galactanas s?o polissacar?deos sulfatados presentes na parede celular de algas vermelhas. Carragenanas s?o galactanas bem conhecidas na ind?stria de alimentos como polissacar?deos gelificantes e para induzir o processo inflamat?rio em roedores como modelo animal. A extra??o de polissacar?deos de A. multifida foi realizada por prote?lise e precipita??o em diferentes volumes de acetona, que produziu tr?s fra??es (F1, F2, e FT). An?lises f?sicas e qu?micas revelaram que essas fra??es s?o predominantemente galactanas sulfatados. Resultados dos ensaios de atividade antioxidante mostraram que todas essas fra??es apresentam atividade antioxidante e que esteve associada ao teor de sulfato na an?lise da redu??o da pot?ncia e capacidade antioxidante total. No entanto, estas fra??es n?o foram eficazes contra a peroxida??o lip?dica. A fra??o FT apresentou maior atividade no teste de APTT a 200 mg (> 240 s). A avalia??o da atividade hemol?tica mostrou que a fra??o FT tem a melhor atividade, aumentando a lise pelo sistema complemento para 42,3% (50 mg) (p< 0,001). A fra??o FT apresentou o melhor rendimento, atividade anticoagulante e hemol?tica entre as tr?s fra??es e por isso foi escolhido para os estudos in vivo. A avalia??o da inflama??o com a fra??o FT (50 mg / kg MB) mostrou que a migra??o celular e a produ??o de IL-6 aumentaram 670,1% (p< 0,001) e 531,8% (p< 0,001), respectivamente. Estes resultados confirmam a sua utiliza??o como indutor de inflama??o em modelo animal. Resultados do teste de citotoxicidade mostraram que todas as fra??es t?m efeitos t?xicos nas c?lulas 3T3 e HeLa ap?s a exposi??o de 48 horas, exceto quando 100 mg para os F1 e FT foram utilizados. Estes resultados levantam a discuss?o se estes polissacar?deos devem ser usados como aditivo em alimentos, cosm?ticos e medicamentos

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:03:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 NorbertoKVM_DISSERT.pdf: 2522986 bytes, checksum: 6298d49730e0d9c9d5418ad46a9b33f5 (MD5) Previous issue date: 2011-02-22 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / Studies indicate that several components were isolated from medicinal plants, which have antibacterial, antifungal, antitumor and anti-inflammatory properties. Sepsis is characterized by a systemic inflammation which leads to the production of inflammatory mediators exacerbated by excessive activation of inflammatory cells and disseminated intravascular coagulation (DIC), in which the human neutrophil elastase plays an important role in its pathogenesis. Several epidemiological studies suggest that components of plants, especially legumes, can play a beneficial role in reducing the incidence of different cancers. A chymotrypsin inhibitor of Kunitz (Varela, 2010) was purified from seeds of Erythrina velutina (Mulungu) by fractionation with ammonium sulfate, affinity chromatography on Trypsin-Sepharose, Chymotrypsin-Sepharose and ion exchange chromatography on Resource Q 1 ml (GE Healthcare) in system FPLC / AKTA. The inhibitor, called EvCI, had a molecular mass of 17 kDa determined by SDS-PAGE. The purified protein was able to inhibit human neutrophil elastase (HNE), with an IC50 of 3.12 nM. The EvCI was able to inhibit both pathways of HNE release stimulated by PAF and fMLP (75.6% and 65% respectively). The inhibitor also inhibited leukocyte migration in septic mice about 87% and prolonged the time of coagulation and inhibition factor Xa. EvCI showed neither hemolytic activity nor cytotoxicity. EvCI showed a selective antiproliferative effect to HepG2 cell lines with IC50 of 0.5 micrograms per milliliter. These results suggest EvCI as a molecule antagonist of PAF / fMLP and a potential use in fighting inflammation related disorders, disseminated intravascular coagulation (DIC) and cancer / Estudos indicam que v?rios componentes medicinais foram isolados de vegetais, os quais apresentam atividades antibacterianas, antif?ngicas, antitumorais e anti-inflamat?rias. Sepse ? caracterizada por uma inflama??o sist?mica que tem como conseq??ncia a produ??o exarcebada de mediadores inflamat?rios, pela excessiva ativa??o de c?lulas inflamat?rias e coagula??o intravascular disseminada (CIVD), na qual a elastase neutrof?lica humana exerce um papel importante na sua patog?nese. Diversos estudos epidemiol?gicos sugerem que componentes de vegetais, especialmente de leguminosas, podem desempenhar um papel ben?fico na redu??o da incid?ncia de diferentes tipos de c?ncer. Um inibidor de quimotripsina do tipo Kunitz (Varela, 2010) foi purificado de sementes de Erythrina velutina (Mulungu) por fracionamento com sulfato de am?nio, cromatografias de afinidade em Tripsina-Sepharose e Quimotripsina-Sepharose e cromatografia de troca i?nica em Resource Q 1 mL (GE Healthcare), em sistema FPLC/AKTA. O inibidor, denominado EvCI, apresentou uma massa molecular de 17 kDa, determinada por SDS-PAGE. A prote?na purificada foi capaz de inibir a elastase de neutr?filos humanos (ENH), apresentando um IC50 de 3,12 nM. O EvCI foi capaz de inibir ambas as vias de libera??o de ENH estimuladas por PAF e fMLP (75,6% e 65%, respectivamente). O inibidor tamb?m inibiu a migra??o leucocit?ria em camundongos s?pticos em cerca de 87% e prolongou o tempo de coagula??o com inibi??o do fator Xa. EvCI n?o apresentou atividade hemol?tica nem citot?xica. EvCI apresentou um efeito antiproliferativo seletivo para linhagens de c?lulas HepG2 com IC50 de 0,5 &#956;g /mL. Estes resultados sugerem o EvCI como uma mol?cula antagonista dos receptores PAF/fMLP e um potencial emprego no combate a dist?rbios relacionados a inflama??o, coagula??o intravascular disseminada (CIVD) e cancer

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:03:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MariliaSNS_TESE.pdf: 2303324 bytes, checksum: d055f1a32ee94b3ffe5f389dbf9dffe0 (MD5) Previous issue date: 2014-04-08 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico / Compounds derived from fungi has been the subject of many studies in order to broaden the knowledge of their bioactive potential. Polysaccharides from Caripia montagnei have been described to possess anti-inflammatory and antioxidant properties. In this study, glucans extracted from Caripia montagnei mushroom were chemically characterized and their effects evaluated at different doses and intervals of treatment. It was also described their action on colonic injury in the model of colitis induced by 2,4,6-trinitrobenzene sulfonic acid (TNBS), and its action on cells of the human colon carcinoma (HT-29). Compounds extracted of C. montagnei contain high level of carbohydrates (96%), low content of phenolic compounds (1.5%) and low contamination with proteins (2.5%). The (FT-IR) and (NMR) analysis showed that polysaccharides from this species of mushroom are composed of &#945;- and &#946;-glucans. The colonic damage was evaluated by macroscopic, histological, biochemical and immunologic analyses. The results showed a reduction of colonic lesions in all groups treated with the glucans of Caripia montagnei (GCM). GCM significantly reduced the levels of IL-6 (50 and 75 mg/kg, p < 0.05), a major inflammatory cytokine. Biochemical analyses showed that such glucans acted on reducing levels of alkaline phosphatase (75 mg/kg, p < 0.01), nitric oxide (p < 0.001), and myeloperoxidase (p < 0.001). These results were confirmed microscopically by the reduction of cellular infiltration. The increase of catalase activity suggest a protective effect of GCM on colonic tissue, confirming their anti-inflammatory potential. GCM displayed cytostatic activity against HT-29 cells, causing accumulation of cells in G1 phase, blocking the cycle cell progression. Those glucans also showed ability to modulate the adhesion of HT-29 cells to Matrigel? and reduced the oxidative stress. The antiproliferative activity against HT-29 cells displayed by GCM (p <0.001) can be attributed to its cytostatic activity and induction of apoptosis by GCM / Compostos derivados de fungos tem sido alvo de muitos estudos a fim de desenvolver o conhecimento acerca de seu potencial bioativo. Polissacar?deos de Caripia montagnei j? foram descritos por possu?rem propriedades anti-inflamat?ria e antioxidante. Neste estudo, os polissacar?deos extra?dos do fungo Caripia montagnei foram caracterizados quimicamente e seus efeitos sobre as les?es intestinais foram avaliados em diferentes intervalos de tratamento no modelo de colite induzida por ?cido 2,4,6 - trinitrobenzenossulf?nico (TNBS), verificou-se ainda sua a??o sobre c?lulas do carcinoma de c?lon humano, HT-29. Na an?lise realizada no extrato obtido de C. montagnei foi verificado que este ? formado principalmente, por carboidratos (96%) apresentando um baixo teor de compostos fen?licos (1,5%) e baixa contamina??o prot?ica (2,5%). As an?lises por espectroscopia de infra vermelho (FT-IR) e resson?ncia magn?tica nuclear (RMN) mostraram que os polissacar?deos desta esp?cie de fungo s?o &#945; e &#946; -glucanas. O dano col?nico foi avaliado por an?lises macrosc?picas, histol?gicas, bioqu?micas e imunol?gicas. Os resultados mostraram a redu??o das les?es no c?lon em todos os grupos tratados com as glucanas (GCM). GCM reduziram significativamente os n?veis de IL-6 (50 e 75 mg/Kg, p < 0,05), uma importante citocina inflamat?ria. As an?lises bioqu?micas mostraram que essas glucanas atuaram na redu??o dos n?veis de fosfatase alcalina (75 mg/Kg, p < 0,01), ?xido n?trico (p < 0,001) e mieloperoxidase (p < 0,001). Estes resultados foram confirmados pela redu??o da infiltra??o celular observado microscopicamente. O aumento da atividade da catalase, sugere um efeito protetor de GCM no tecido do c?lon, o que confirma o seu potencial anti-inflamat?rio. GCM mostraram atividade citost?tica sobre as c?lulas HT-29, causando ac?mulo de c?lulas na fase G1 e impedindo, assim, a progress?o do ciclo celular. As glucanas deste estudo tamb?m mostraram habilidade em modular a ades?o de c?lulas HT-29 ao Matrigel? e reduzir o estresse oxidativo nessas c?lulas. A atividade antiproliferativa contra c?lulas HT-29 exibida por GCM pode ser atribu?da ? sua a??o citost?tica ou indu??o da apoptose por essas glucanas

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:03:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 FernandaMA_DISSERT.pdf: 1930320 bytes, checksum: c3649a60e9f9467edceceaa5b07c7a8c (MD5) Previous issue date: 2013-03-01 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / Heparin, a sulfated polysaccharide, was the first compound used as an anticoagulant and antithrombotic agent. Due to their structural characteristics, also has great potential anti-inflammatory, though such use is limited in inflammation because of their marked effects on coagulation. The occurrence of heparin-like compounds that exhibit anticoagulant activity decreased in aquatic invertebrates, such as crab Goniopsis cruentata, sparked interest for the study of such compounds as anti-inflammatory drugs. Therefore, the objective of this study was to evaluate the potential modulator of heparin-like compound extracted from Goniopsis cruentata in inflammatory events, coagulation, and to evaluate some aspects of its structure. The heparin-type compound had a high degree of N-sulphation in its structure, being able to reduce leukocyte migration into the peritoneal cavity at lower doses compared to heparin and diclofenac sodium (anti-inflammatory commercial). Furthermore, it was also able to inhibit the production of nitric oxide and tumor necrosis factor alpha by activated macrophages, inhibited the activation of the enzyme neutrophil elastase in low concentrations and showed a lower anticoagulant effect in high doses as compared to porcine mucosal heparin. Because of these observations, the compound extracted from crab Goniopsis cruentata can be used as a structural model for future anti-inflammatory agents / A heparina, um polissacar?deo sulfatado, foi o primeiro composto utilizado como anticoagulante e agente antitromb?tico. Devido ?s suas caracter?sticas estruturais, possui ainda um grande potencial anti-inflamat?rio, entretanto tal uso na inflama??o ? limitado em raz?o de seus efeitos acentuados na coagula??o. A ocorr?ncia de compostos semelhantes ? heparina que apresentam atividade anticoagulante diminu?da em invertebrados aqu?ticos, como o caranguejo Goniopsis cruentata, despertou o interesse para o estudo de tais compostos como f?rmacos anti-inflamat?rios. Diante disso, o objetivo do presente trabalho foi avaliar o potencial modulador do composto semelhante ? heparina extra?do do Goniopsis cruentata em eventos inflamat?rios, coagula??o, al?m de avaliar alguns aspectos de sua estrutura. O composto tipo heparina apresentou alto grau de N-sulfata??o em sua estrutura, sendo capaz de reduzir a migra??o leucocit?ria para a cavidade peritoneal em doses mais baixas em rela??o ? heparina e ao diclofenaco de s?dio (anti-inflamat?rio comercial). Al?m disso, foi capaz ainda de inibir a produ??o de ?xido n?trico e fator de necrose tumoral alfa por macr?fagos ativados, inibiu a ativa??o da enzima neutrof?lica elastase em concentra??es baixas e apresentou um menor efeito anticoagulante em doses altas em compara??o com a heparina de mucosa su?na. Devido a essas observa??es, o composto extra?do do caranguejo Goniopsis cruentata pode ser utilizado como um modelo estrutural para futuros agentes anti-inflamat?rios

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:03:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 LucianaFC_DISSERT.pdf: 1219461 bytes, checksum: 86df41deecc523bb278b7a9bc3b86ec9 (MD5) Previous issue date: 2013-03-04 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / In recent years the heparin has been the subject of several studies that aim to expand its use as a therapeutic agent, due to its ability to modulate the activity of various proteins that play important roles in the regulation of pathophysiological processes. In several experiments and preclinical trials, heparin has demonstrated an anti-inflammatory role. However, its clinical use is limited, due to its strong anticoagulant activity and hemorrhagic complications. For this reason, considerable efforts have been employed in discovery of heparin analogous (heparinoid) with reduced side effects, that retain the anti-inflammatory properties of heparin. In this context, a heparinoid obtained from the head of Litopenaeus vannamei shrimp, which presents a structural similarity to heparin, showed, in previous studies, anti-inflammatory activity in a model of acute peritonitis with reduced anticoagulant effect in vitro and low hemorrhagic activity. Thus, the present work had as objective to evaluate the effect the heparinoid of the cephalothorax of gray shrimp on the acute inflammatory response in different times (3 or 6 hours after the induction of inflammatory stimulus), using the model of acute peritonitis induced in mice. It was also analyzed the HL effect over the activity of elastase, an enzyme involved in leukocyte recruitment. Furthermore to check if the different doses of heparin and heparinoid change the hemostatic balance in vivo, was assessed the effect of these compounds on the plasma clotting time in animals submitted to inflammation. The results show that in 3 hours, all doses of heparinoid were able to prevent efficiently in the acute inflammatory process without any anticoagulant effects, unlike the extrapolation dose of heparin, which has induced a large hemorrhage due its high anticoagulant activity. However, 6 hours after induction of inflammation, only the dosages of 0.1 and 1.0 &#956;g/Kg of heparin and 1.0 &#956;g/Kg of heparinoid kept anti-migratory effect, without changing of the hemostatic balance. These results indicate that the anti-migratory effect of theses compounds depends on the dosage and time of inflammatory stimulus. The HL and heparin were also able to inhibit the activity of the enzyme elastase. The discovery of this bioactive compound in the cephalothorax of shrimps can arouse great interest in biotechnology, since this compound could be useful as a structural model interesting for the development of new therapeutic agents for peritonitis / Nos ?ltimos anos a heparina tem sido alvo de diversos estudos que visam ampliar seu uso como agente terap?utico, devido ? sua habilidade de modular a atividade de v?rias prote?nas que desempenham pap?is importantes na regula??o de processos fisiopatol?gicos. Em diversos experimentos e ensaios pr?-cl?nicos, a heparina tem demonstrado papel anti-inflamat?rio. Entretanto, seu uso cl?nico ? limitado, devido ? sua forte atividade anticoagulante e complica??es hemorr?gicas. Por essa raz?o, consider?vel esfor?o tem sido empregado na descoberta de an?logos da heparina (heparin?ide) com reduzidos efeitos colaterais, que retenham as propriedades anti-inflamat?rias da heparina. Nesse contexto, um heparin?ide (HL) obtido da cabe?a do camar?o Litopenaeus vannamei, de semelhan?a estrutural ? heparina, apresentou em estudos pr?vios atividade anti-inflamat?ria em modelo de peritonite aguda, com reduzido efeito anticoagulante in vitro e baixa atividade hemorr?gica. Assim, o presente trabalho teve como objetivo avaliar o efeito deste heparin?ide sobre a resposta inflamat?ria aguda em diferentes tempos (3 ou 6 horas ap?s a indu??o do est?mulo inflamat?rio), utilizando o modelo de peritonite aguda induzida em camundongos. Foi analisado tamb?m o efeito do HL sobre a atividade da elastase, uma enzima envolvida no recrutamento de leuc?citos. Al?m disso, para verificar se as diferentes doses do heparin?ide e da heparina alteram o equil?brio hemost?tico in vivo, foi avaliado o efeito desses compostos sobre o tempo de coagula??o do plasma nos animais submetidos ? inflama??o. Os resultados revelam que em 3 horas, todas as doses do heparin?ide foram capazes de interferir de forma eficiente no processo inflamat?rio agudo sem apresentar efeito anticoagulante e interfer?ncia no equil?brio hemost?tico, ao contr?rio da dose de extrapola??o da heparina que induziu forte hemorragia, al?m de apresentar alta atividade anticoagulante. Entretanto, no tempo de 6 horas ap?s a indu??o da inflama??o, apenas as doses de 0,1 e 1,0 &#956;g/Kg da heparina e 1,0 &#956;g/Kg do heparin?ide mantiveram o efeito antimigrat?rio, sem alterar o equil?brio hemost?tico. Esses resultados indicam que o efeito antimigrat?rio depende do tempo e da dose administrada. O HL e a heparina tamb?m foram capazes de inibir a atividade da enzima elastase. A descoberta desse composto bioativo no cefalot?rax do camar?o poder? despertar grande interesse biotecnol?gico, pois este composto poderia servir como um modelo estrutural interessante para o desenvolvimento de novos agentes terap?uticos espec?ficos para a peritonite