Submitted by Sara Ribeiro (sara.ribeiro@ucb.br) on 2018-11-16T19:33:03Z No. of bitstreams: 1 ClaudiaSofiadeFreitasCorreiaPopovTeseParcial2017.pdf: 709320 bytes, checksum: 74c3fb3e34fa9828bc490124e9d19b7b (MD5) / Approved for entry into archive by Sara Ribeiro (sara.ribeiro@ucb.br) on 2018-11-16T19:33:23Z (GMT) No. of bitstreams: 1 ClaudiaSofiadeFreitasCorreiaPopovTeseParcial2017.pdf: 709320 bytes, checksum: 74c3fb3e34fa9828bc490124e9d19b7b (MD5) / Made available in DSpace on 2018-11-16T19:33:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ClaudiaSofiadeFreitasCorreiaPopovTeseParcial2017.pdf: 709320 bytes, checksum: 74c3fb3e34fa9828bc490124e9d19b7b (MD5) Previous issue date: 2018-12-13 / Anurans represent a valuable source of bioactive molecules. These substances constitute a primary line of defense against predators and pathogenic microorganisms such as bacteria and fungi. Secreted peptides by granular glands represent a source of potential pharmacological agents with diverse functions. The structural and functional characterization of these biomolecules allows a better understanding of their function and biotechnological applications. Thus, in this work, the new peptides were isolated from H. raniceps with variable size between 11 and 16 amino acid residues, all of which contain two cysteines in their primary structure and with immunomodulatory activity: AC12, DK16 and RC11. A nuclear magnetic resonance analysis allowed to determinate a structure of these β-sheet molecules, as well as the presence of disulfide bridges that gives stability to the peptides. Regarding the structural analysis, none of the samples showed effective antimicrobial action. The immunomodulatory action profile of the samples was also checked. For this, a cytotoxicity essay of the molecules was initially tested. AC12 and DK16 did not reduce the viability of RAW 264.7 cells, decreasing inflammatory markers such as NO, IL-12 and TNF-α. They also decreased IL-10 production, a pro-inflammatory cytokine, but associated with several types of neoplasms. The peptide RC11 was shown to be toxic in RAW 264.7 strain. However, all samples were shown to be safe when tested at different concentrations in erythrocytes of Balb/c mice, presenting low hemolysis rates. In the in vivo tests, the three peptides reduced the paw edema caused by carrageenan, standing out the peptide AC12. Such data were corroborated by histological analysis of paw tissue. Regarding the immunomodulatory action with carrageenan-induced peritonitis assay, peptide AC12 was again the most significant, reducing the TNF-α dosed from the peritoneal lavage and increasing IL-10. In conclusion, AC12 has shown to be a good candidate as an anti-inflammatory agent, and could be used in the treatment of several inflammatory conditions. / Os anuros representam uma fonte valiosa de moléculas bioativas. Essas substâncias constituem a linha de defesa primária contra predadores e microrganismos patogênicos como bactérias e fungos. Peptídeos secretados pelas glândulas granulares representam uma fonte de potenciais agentes farmacológicos com funções diversas. A caracterização estrutural e funcional dessas biomoléculas permite um melhor entendimento da sua função e aplicações biotecnológicas. Assim, neste trabalho foram descritos três novos peptídeos isolados de H. raniceps com tamanho variável entre 11 e 16 resíduos de aminoácidos, todos eles contendo duas cisteínas na sua estrutura primária e com propriedades imunomoduladoras: AC12, DK16 e RC11. A análise por ressonância magnética nuclear permitiu determinar a estrutura dessas moléculas em folha-β, bem como a presença de pontes de dissulfeto que fornecem resistência e estabilidade às moléculas. Referente à análise estrutural, nenhuma das amostras mostrou ter ação antimicrobiana efetiva. Foi também verificado o perfil de ação imunomoduladora das amostras. Para tal, inicialmente foi testada a citotoxicidade das moléculas. AC12 e DK16 não alteraram a viabilidade das células RAW 264.7, diminuindo marcadores inflamatórios como NO, IL-12 e TNF-α. Também diminuíram a produção de IL-10, uma citocina pró-inflamatória, porém, associada a vários tipos de neoplasias. O peptídeo RC11 mostrou ser tóxico na linhagem RAW 264.7. Porém, todas as amostras mostraram-se seguras quando testadas em diferentes concentrações em eritrócitos de camundongos Balb/c, apresentando taxas de hemólise pouco significativas. Nos testes in vivo, os três peptídeos reduziram o edema da pata provocado por carragenina, sobressaindo o peptídeo AC12. Tais dados foram corroborados pela análise histológica do tecido da pata. Relativamente à ação imunomoduladora no ensaio de peritonite provocada por carragenina, novamente, o peptídeo AC12 teve destaque, reduzindo o TNF-α dosado do lavado peritoneal e aumentando a IL-10. Deste modo, o peptídeo AC12 mostrou ser um bom candidato a agente anti-inflamatório, podendo ser utilizado no tratamento de diversos quadros inflamatórios.

Orientador: Claudia Maria Bertan Membrive / Banca: Rui Machado / Banca: Cecílio Viega Soares Filho / Resumo: Estratégias farmacológicas são empregadas para reduzir a mortalidade embrionária em fêmeas bovinas. Objetivou se comparar o efeito do Flunixin Meglumine (FM), Somatotropina Recombinante Bovina (bST) e/ou Gonadotrofina Coriônica Humana (hCG) na redução da mortalidade embrionária em vacas Nelore no período compreendido entre o 15º e 19º dias da gestação, baseando se na taxa de concepção aos 40 dias de gestação. A hipótese é que vacas tratadas com FM, bST e/ou hCG, apresentam menor mortalidade embrionária e maiores taxas de concepção. Vacas Nelores (n=975), lactantes, com 35 a 70 dias pós parto, receberam no D 10 um dispositivo intravaginal contendo 1g de Progesterona (DIB®) associado a uma njeção de 2mg de Benzoato de Estradiol (Gonadiol®), via intramuscular (IM). No D 2 o dispositivo foi removido e os animais receberam uma injeção de 112,5Cg de D Cloprostenol (Preloban®); 300UI de Gonadotrofina Coriônica Eqüina (Folligon®) e 1mg de Cipionato de Estradiol (ECP®), todos via IM. Após 48 horas da última injeção (D0), as fêmeas foram submetidas à inseminação artificial em tempo fixo (IATF) e sete dias após foram divididas equitativamente em oito grupos para receberem um dos seguintes tratamentos: não tratadas (Grupo Controle; n= 124); FM no D16 (Grupo FM; n=122); bST no D7 (Grupo bST; n=119); bST no D7 + FM no D16 (Grupo bST + FM; n=121); hCG no D7 (Grupo o hCG; n=124); hCG no D7 + FM no D16 (Grupo hCG + FM; n=124); bST e hCG no D7 (Grupo bS T + hCG; n=120) ou bST e hCG no D7 + FM no D16 (Grupo bS T + hCG +FM; n=121). Utilizou se 2.500UI de hCG (Chorulon®), IM; 500mg de bST (Boostin®), via subcutânea, na fossa ísqueo retal e 2,2mg/Kg de FM (Banamine®), IM. Amostras de sangue foram coletadas no D7 e D16, para mensuração das concentrações plasmáticas de progesterona (P4) por radioimunoensaio. O diagnóstico de gestação foi realizado 40 dias após... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Pharmacologic strategies are employed to reduce the embryonic mortality in bovine females. The aim of the study was to compare the effect of Flunixin Meglumine (FM), Recombinant Bovine Somatotropin (bST) and/or Human Corionic Gonadotropin (hCG) on the reduction of embryonic mortality in Nelore cows in the period between the 15th and 19th days of gestation, based on conception rate at 40 days gestation. The hipothesis is that, cows treated with FM, bST and/or hCG, show lower embryo mortality and greater conception rates. Lactating Nelore cows (n=975), 35 to 70 days postpartum, received on D 10 an intravaginal device containing 1g of Progesterone (DIB®) associated with an injection of 2mg of estradiol benzoate (Gonadiol®), i.m. On D 2 the device was removed and the animals received one injection of 112,5Cg of D Cloprostenol (Preloban®); 300UI of Equine Chorionic Gonadotropin (Folligon®) and 1mg of Estradiol Cipionate (ECP®), all through i.m. route. After 48 hours from the last injection (D0), the cows were submitted to Fixed Timed Artificial Insemination (FTAI) and seven days later were divided equitably in eight groups and received one of the following treatments: untreated (Group Control; n= 124); FM on D16 (Group FM; n=122); bST on D7 Group bST; n=119); bST on D7 + FM on D16 (Group bST+FM; n=121); hCG on D7 (Group hCG; n=124); hCG on D7 + FM on D16 (Group hCG+FM; n=124); bST and hCG on D7 (Group bST+hCG; n=120) or bST and hCG on D7 + FM on D16 (Group bST+ hCG+FM; n=121). Used 2.500UI of hCG (Chorulon®), IM; 500mg of bST (Boostin®), through subcutaneous route, on the ischiorectal fossa and 2,2mg/Kg of FM (Banamine®), i.m. Blood samples were collected on D7 and D16, to measure plasmatic progesterone (P4) concentration through radioimuneassay. Pregnancy diagnosis was performed by ultrasound exam 40 days after FTAI. The variable rate design was analyzed by logistic... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador : André Gonzaga dos Santos / Banca: Marcio Adriano Andréo / Banca: Cleverton Roberto de Andrade / Banca: Rosangela Gonçalves Peccinini / Banca: Jean Leandro dos Santos / Resumo: Casearia sylvestris Sw. (Salicaceae) é uma espécie vegetal arbórea ou arbustiva conhecida como "guaçatonga", utilizada na medicina popular por suas propriedades antisséptica, antiofídica, antiulcerativa, anti-inflamatória e cicatrizante. A partir da droga vegetal (folhas) desenvolveu-se tratamento prévio e controle de qualidade, com o objetivo de caracterizar a planta como matéria-prima farmacêutica. O extrato etanólico foi produzido a partir de 2,0 Kg da droga vegetal e o rendimento da extração foi de 11,8% (p/p). Foi realizada uma extração em fase sólida (EFS) com o extrato etanólico seco de folhas de C. sylvestris. A partir da fração EFSCs2 foi isolada uma substância por cromatografia em coluna de fase normal que foi identificada por análises espectrométricas como a casearina J. Análises cromatográficas foram realizadas para identificação e quantificação de diterpenos clerodânicos no extrato etanólico e suas frações. Os diterpenos clerodânicos caseargrewiina F, casearinas B e X foram identificados e o teor de diterpenos clerodânicos totais foi determinado por CLAE-DAD no extrato EEtCs e na fração EFSCs2, cujos valores foram 27,4% e 50,6%, respectivamente. Das análises por cromatografia líquida de alta eficiência foram também obtidos os teores de casearina J e caseargrewiina F no extrato etanólico das folhas, cujos valores foram de 2,35 e 1,1%, respectivamente. Para avaliarmos a atividade anti-inflamatória foi realizado o ensaio do edema de pata em ratos sendo os resultados obtidos promissores comparando-se à indometacina e tanto frações (EFSCs 1 e 2) como substâncias purificadas (Casgw F e Cas B) não apresentaram grau de lesão gástrica nos animais quando analisados macroscopicamente, ao contrário da indometacina que apresentou grau 5 (máximo) de lesão pelo índice de ulceração. Na atividade anti-inflamatória crônica (artrite)... / Abstract: Casearia sylvestris Sw (Salicaceae) is a tree or shrub known as "guaçatonga" used in folk medicine for its antiseptic, antiophidian, antiulcerogenic, anti-inflammatory and wound healing properties. From the leaves it was developed pretreatment and quality control, in order to characterize the plant as pharmaceutical raw material. The ethanol extract was produced from 2.0 kg of the plant drug, and the extraction yield was 11.8% (w/w).It was performed a solid phase extraction (EFS) with 20.0 g of the ethanol extract of dried leaves of C. sylvestris. The purification was carried out in three steps, including a solid phase extraction by means of silica and activated carbon, normal-phase column chromatography and aqueous reversed-phase high efficiency chromatography. The diterpenes caseargrewiin F, casearins B and X. were used as standards. The clerodane type diterpenes were identified and quantified via HPLC-DAD in the extract EEtCs and EFSCs2 fraction whose values were 27.4% and 50.6%, respectively. From EFSCs2 fraction it was isolated a substance identified via spectrometric analysis as casearin J, existing in the literature. From the HPLC-UV analysis the casearin J and caseargrewiin F contents were gotten in the leaves ethanol extract, which values were 2.35 and 1.1% respectively. In order to evaluate the anti-inflammatory activity, rat's paw edema was performed where the results were promising regarding to indomethacin and, either extract (EEtCs), fractions (EFSCs 1 and 2) and purified substances (Cas B and CasgwF) showed no gastric wound in the animals stomach when macroscopically examined, in opposite to indomethacin that showed wound level 5 (maximum) on the ulceration index. In the chronic anti-inflammatory activity (arthritis) the reestablishment of the joints proportion for the group treated with dexamethasone (1 mg / kg) was 80 % and for the group treated with the ... / Doutor

Orientador: Ana Paula Girol / Coorientador: Sonia Maria Oliani / Banca: Ana Cláudia Polli Lopes / Banca: Wanessa Silva Garcia Medina / Resumo: O processo de reparo de lesões térmicas pode ser dividido nas fases de inflamação, proliferação e remodelação. No seu processo de desgranulação, os mastócitos (MCs) liberam fatores quimiotáticos, citocinas e proteases, como triptase e quimase, para o meio extracelular, contribuindo na degradação da matriz lesada e síntese de uma nova. Além disso, estudos indicam que os MCs armazenam a proteína anti-inflamatória anexina A1 (AnxA1), envolvida na inflamação, apoptose, crescimento e diferenciação celular. Contudo, não se conhecem relatos da expressão e função da AnxA1 no reparo de queimaduras. Diante disso, os objetivos desse estudo foram quantificar e avaliar a ativação, acúmulo de histamina e heterogeneidade para triptase e quimase dos MCs, bem como, verificar a expressão da AnxA1, quantificar macrófagos, e dosar as citocinas TNF-α, IL-1β, IL-6, IL-10 e a quimiocina MCP-1 em modelo de queimadura de segundo grau em ratos Wistar. Para o desenvolvimento da lesão os animais foram anestesiados e submetidos à aplicação de um bloco metálico aquecido no dorso. Os animais foram divididos em grupos controles e tratados com pomada de sulfadiazina de prata a 1% (SDP 1%). As análises foram realizadas em 3, 7, 14 e 21 dias após injúria, e também em fragmentos de pele normal. Avaliações macroscópicas e histopatológicas da cicatrização confirmaram as características de queimadura de segundo grau e a melhor evolução da cicatrização nos animais tratados. A quantificação dos MCs mostrou grande quantidade de células intactas na pele normal e redução significante dessas células nas fases de inflamação (dia 3) e de proliferação (dia 7). Nas fases de proliferação de matriz (dia 14) e remodelação (dia 21) foi verificada maior quantidade de MCs nos animais controles e essas células foram observadas, principalmente, desgranuladas no dia 14 e... / Abstract: The repair process of thermal injury can be divided into phases of inflammation, proliferation and remodeling. The mast cells (MCs) in their degranulation process, release chemotactic factors, cytokines and proteases, as tryptase and chymase, to the extracellular environment contributing to the degradation of damaged matrix and synthesis of a new one. Moreover, studies indicate that MCs store the antiinflammatory protein annexin A1 (AnxA1) which involved in inflammation, apoptosis, growth and cell differentiation. However, there are no known reports of the expression and function of AnxA1 in burns repair. Thus, the objectives of this study were to quantify, assess the activation, histamine accumulation and heterogeneity for tryptase and chymase of MCs, as well as, check the expression of AnxA1, associated with macrophages quantification and the levels of TNF-α, IL-1β, IL-6, IL-10 and MCP-1 in a second degree burn model in rats. For the development of the lesions, animals were anesthetized for applying a water-heated metal block in the dorso. The animals were divided into control and treated or not with the cream of silver sulfadiazine 1% (SDP 1%). The analyzes were performed on 3, 7, 14 and 21 days after injury, and also in normal skin fragments. Macroscopic and histopathological evaluations of healing confirmed the burning characteristics of second degree and the better progress of wound repair in treated animals. Quantification of MCs showed large amount of intact cells in normal skin and a significant reduction of these cells in the stages of inflammation (day 3) and proliferation (day 7). In the phases of matrix proliferation (day 14) and remodeling (day 21) it was observed increased amount of MCs, only in the control animals, and these cells were mainly degranulated on day 14, but intact on day 21. Also, in the treated group on day 7 and in both groups on day 14, it was ... / Mestre

Orientador: Sonia Maria Oliani / Coorientador: Cristiane Damas Gil / Banca: Eloisa Amália Vieira Ferro / Banca: Claudia Regina Bonini Domingos / Resumo: Introdução: A inflamação ocular é geralmente tratada com glicocorticoides, cujos efeitos colaterais estimulam novas estratégias terapêuticas. Nesse aspecto, destacamos a Galectina-1 (Gal-1), proteína com potencial anti- inflamatório, cuja ação em tecidos oculares foi pouco investigada. Objetivo: No presente estudo avaliamos a expressão da Gal-1 nas células epiteliais pigmentadas da retina humana (ARPE-19), após ativação pelo inflamógeno lipopolissacarídeo (LPS) e tratamentos com a Gal-1 recombinante humana (hrGal-1). Métodos: Para avaliar o efeito anti-inflamatório da Gal-1, as células ARPE-19 foram cultivadas em meio DMEM:F-12 completo (controle), ativadas pelo LPS (10 µg/mL) e tratadas com hrGal-1 (0,04; 0,4 e 4 µg/mL) ou glicocorticoide dexametasona (Dex: 1µM), nos períodos de 2, 8, 24 e 48 horas. Nessas condições, avaliamos a citotoxicidade dos tratamentos farmacológicos por ensaios de viabilidade celular e, a expressão da Gal-1 endógena nas células ativadas pelo LPS e tratadas com Dex, por meio da imunocitoquímica ultraestrutural. Nos sobrenadantes, em todos os tempos experimentais, analisamos os níveis das citocinas IL-6, IL-8, IL-10, TNF-α, IL-1β e MCP-1 pelo método de ELISA. Com a finalidade de determinar a especificidade do efeito da hrGal-1, via domínio reconhecedor de carboidrato (CRD) sobre as células ARPE-19, adicionamos nas culturas os açúcares com ou sem afinidade pelo CRD (respectivamente β-galactose ou sucrose - 100mM) e, após 8 horas, os sobrenadantes foram coletados para análise das citocinas pró-inflamatórias IL- 6 e IL-8. Ainda, investigamos a expressão da enzima ciclo-oxigenase 2 (COX- 2), um importante mediador do processo inflamatório, nos períodos de 8 e 24 horas, por imunofluorescência. Resultados: Os ensaios de viabilidade celular mostram que os diferentes tratamentos... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Introduction: Ocular inflammation has often been treated with glucocorticoids, however, collateral side effects stimulate the search for new therapeutic strategies. In view of this, we emphasis on Galectin-1 (Gal-1), a protein with anti-inflammatory potential that has been poorly investigated in ocular tissues. Aim: The aim of this paper is to evaluate the expression and mechanism of action of Gal-1 in human retinal pigment epithelial cells (ARPE-19 cells) activated by lipopolysaccharide (LPS) and treated with recombinant human Gal- 1 (hrGal-1). Methods: To assess the anti-inflammatory effect of Gal-1, ARPE- 19 cells were cultured in DMEM: complete F-12 (control), activated by LPS and treated with hrGal-1 (0,04; 0,4 e 4 µg/mL)or glucocorticoid dexamethasone (Dex: 1μM) at 2, 8, 24 and 48 hours. Under these conditions, we evaluated the cytotoxicity of pharmacological treatments by cell viability assays, and the expression of the endogenous Gal-1 in cells activated by LPS and treated with Dex by ultrastructural immunocytochemistry. In the supernatants of these cells, in all experimental periods, we analyzed the levels of IL-6, IL-8, IL-10, TNF-α, IL-1β and MCP-1 by ELISA. In order to determine the specificity of the effect of hrGal-1 via carbohydrate recognizer domain (CRD) on ARPE-19 cells, we added sugars to the culture with or without their affinity for the CRD (respectively β-galactose or sucrose - 100 mM), and these supernatants were collected after 8 hours for analysis of pro-inflammatory cytokines IL-6 and IL-8. We also analyzed the expression of the cyclooxygenase-2 (COX-2) enzyme, an important inflammatory process mediator, at 8 and 24 hours by immunofluorescence. Results: The assays of cell viability show that the different drug treatments have low cytotoxicity. The cells activated with... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

O vírus ZIKA pertence ao gênero Flavivírus e diversos trabalhos têm demonstrado que a infecção por esse vírus está associada com o desenvolvimento de anomalias congênitas fetais e doenças neurológicas como casos de microcefalia e de síndrome de Guillan-Barré. Com intuito de entender os mecanismos imunológicos de controle da replicação viral e na patogênese da doença, o objetivo do trabalho foi estabelecer um modelo experimental de infecção por vírus ZIKV em animais imunocompetentes e investigar a migração de leucócitos para o sistema nervoso central durante a infecção por esse vírus. Os animais C57BL/6 infectados por ZIKV apresentaram um aumento da carga viral no sistema nervoso central (SNC) após 24 horas de infecção e uma redução significativa após 48 e 72 horas de infecção. No entanto, os animais deficientes do receptor de IFN tipo I (IFNAR-/-) apresentaram uma alta carga viral após 48 e 72 horas de infecção. Nossos dados mostram que os animais IFNAR-/- são altamente suscetíveis a infecção com 100% de mortalidade na fase aguda da doença, enquanto os animais C57BL/6 são resistentes a infecção com 100% sobrevida por mais de 30 dias de infecção. A infecção com ZIKA induziu o recrutamento de duas subpopulações de monócitos CD11b+Ly6Chi e CD11b+Ly6Clo para o SNC de maneira dependente da sinalização de IFN tipo I. Uma vez que, os animais C57BL/6 apresentaram um aumento de monócitos no SNC após 48 horas de infecção, enquanto que os animais IFNAR-/- apresentaram o recrutamento dessas células somente após 72 horas de infecção. De maneira interessante, o recrutamento dos monócitos culminou com um aumento da expressão das citocinas IL-6 e IL-18 no SNC de animais C57BL/6, enquanto que a expressão dessas citocinas não foi encontrada no SNC de animais IFNAR-/-, sugerindo a importância da via de sinalização de IFN tipo I para a produção dessas citocinas. E por fim, demostramos que a migração dos monócitos para SNC de animais infectados com vírus ZIKA é dependente da produção de CCL2 produzida no cérebro de animais infectados e da expressão dos receptores de quimiocinas CCR2 e CCR5. Uma vez que, animais deficientes para CCR2 (CCR2-/-) e CCR5 (CCR5-/-) apresentaram uma redução da frequência dos monócitos CD11b+Ly6Chi para o SNC em comparação aos animais C57BL/6 após a infecção. De maneira geral, nossos dados mostram que os animais C57BL/6 são resistentes à infecção por ZIKV, uma vez que a via de sinalização de IFN do tipo I está envolvida no recrutamento de monócitos inflamatórios para SNC e consequente controle da replicação viral. O desenvolvimento de um modelo experimental de infecção por vírus ZIKV abre perspectivas para o entendimento dos mecanismos de controle da replicação viral e sobre a patogênese da doença. / The ZIKA virus belongs to the genus Flavivirus, several studies have demonstrated that the infection by this virus is associated with the development of fetal congenital anomalies and neurological diseases, such as microcephaly and Guillan-Barré syndrome. In order to elucidate the immunological mechanisms of the viral replication control and the disease pathogenesis, the study aim was to establish an experimental model of ZIKV infection in immunocompetent animals and investigate the leukocytes migration to the central nervous system during this virus infection. ZIKV infected C57BL/6 animals demonstrated an increased viral load in the central nervous system (CNS) after 24 hours of infection and a significant reduction after 48 and 72 hours of infection. However, type I INF receptor deficient mice (IFNAR-/-) had a high viral load after 48 and 72 hours of infection. Our data demonstrated that IFNAR-/- animals are highly susceptible to infection with 100% mortality during the acute phase of the disease, while C57BL/6 mice are resistant with 100% survival for more than 30 days of infection. ZIKA infection induced the recruitment of two monocytes subpopulation CD11b+Ly6Chi and CD11b+Ly6Clo to the CNS in a dependent manner of type I INF signaling. C57BL/6 mice showed an increase of monocytes in the CNS after 48 hours of infection, whereas IFNAR-/- mice recruited these cells only after 72 hours of infection. Interestingly, the monocytes recruitment culminated in an increased expression of IL-6 and IL-18 in C57BL/6 mice CNS, while these cytokines expression was not observed in the CNS of IFNAR-/- animals, thus suggesting the importance of type I INF signaling pathway for these cytokines production. Finally, we have demonstrated that the monocytes migration to the CNS from animals infected with ZIKA virus is dependent of CCL2 production in the brain of infected animals, as well as the expression of the chemokine receptors CCR2 and CCR5. Given that CCR2 (CCR2-/-) and CCR5 (CCR5-/-) deficient animals demonstrated a frequency reduction of CD11b+Ly6Chi monocytes to the CNS compared to C57BL/6 mice after infection. Overall, our data demonstrate that C57BL/6 animals are resistant to ZIKV infection, since the type I INF signaling pathway is involved in the inflammatory monocytes recruitment to the CNS and subsequent viral replication control. The development of an experimental model of ZIKV infection open perspectives for the understanding of viral replication control mechanisms and disease pathogenesis.

Orientador: Yara Marcondes Machado Castiglia / Banca: Marco Aurélio Marangoni / Banca: Leopoldo Muniz da Silva / Banca: Eliana Marisa Ganem / Banca: Norma Sueli Pinheiro Módolo / Resumo: O parecoxibe, único anti-inflamatório inibidor seletivo da COX-2 disponível para uso parenteral, tem comprovada eficácia analgésica no tratamento de dor pós-operatória. No entanto, seus efeitos adversos renais não estão esclarecidos, principalmente em situações de hipoperfusão renal, como hemorragia e hipovolemia. A isquemia renal estimula a produção de mediadores inflamatórios como citocinas, responsáveis pelo início e progressão da inflamação e lesão renal. O objetivo desta pesquisa foi avaliar se o pré-tratamento com dose única de parecoxibe tem influência na função, na lesão celular e na resposta inflamatória do rim de ratos submetidos à hemorragia aguda intra-operatória. Quarenta e quatro ratos Wistars adultos anestesiados com sevoflurano foram divididos, de forma aleatória, em quatro grupos (n=11 animais por grupo): grupo placebo/ sem hemorragia (Plac/SH); grupo parecoxibe/ sem hemorragia (Pcx/SH); grupo placebo/ hemorragia (Plac/H) e grupo parecoxibe/ hemorragia (Pcx/H). Receberam bolus endovenoso em dose única de parecoxibe (20mg/kg em 2 mL/kg) ou placebo (solução salina isotônica 2mL/kg) de acordo com a distribuição por grupos, e solução de para-aminohipurato de sódio (PAH) - 1 mg seguido de 1 mg/h - e de iotalamato de sódio (IOT) - 0,5 mg seguido de 0,25 mg/h, até o final do experimento. Os animais dos grupos com hemorragia sofreram sangria correspondente a 30% da volemia (em três etapas de retirada de 10% com intervalos de 10 minutos). Amostras de sangue foram colhidas para determinação do hematócrito e das concentrações de PAH, IOT e das citocinas séricas (IL-1α, IL-1β, IL-6, IL-10 e TNF-α) após trinta minutos da administração do bolus de parecoxibe ou placebo (momento Mi) e trinta minutos após o terceiro tempo de sangria (momento Mf). Foi realizada nefrectomia bilateral, seguida do sacrifício dos ratos. Os rins coletados foram divididos ... / Abstract: Parecoxib, the only selective COX-2 inhibitor available for parenteral use, has proven analgesic efficacy in the treatment of postoperative pain. However, adverse renal effects are not clear, especially in situations of renal hypoperfusion, such as hemorrhage and hypovolemia. Renal ischemia stimulates the production of inflammatory mediators, such as cytokines, responsible for the onset and progression of inflammation and renal injury. The aim of this study was to evaluate whether pretreatment with a single dose of parecoxib affects the function, cell injury and inflammatory response of the kidney of rats subjected to acute intraoperative hemorrhage. Forty-four adult Wistar rats anesthetized with sevoflurane were randomized into four groups (n = 11 animals per group): placebo/ without hemorrhage (Plac/NH); parecoxib/ without hemorrhage (Pcx/NH); placebo/ hemorrhage (Plac/H), and parecoxib/ hemorrhage (Pcx/H). They all received a single dose of intravenous parecoxib (20mg.kg-1 at 2 mL.kg-1) or placebo (isotonic saline 2mL.kg-1) according to group distribution. They also received solution of sodium para-aminohippurate (PAH) - 1 mg followed by 1 mg.h-1, and iothalamate sodium (IOT) - 0.5 mg followed by 0.25 mg.h-1, until the end of the experiment. Animals in groups with hemorrhage suffered bleeding corresponding to 30% of volemia (three-stage withdrawal of 10% with a 10 minute interval). Blood samples were collected to measure hematocrit and concentrations of PAH, IOT and serum cytokines (IL-1α, IL-1β, IL-6, IL-10 and TNF-α) thirty minutes after administration of bolus of parecoxib or placebo (Mi) and thirty minutes after the third time of bleeding (Mf). Bilateral nephrectomy was then performed, followed by sacrifice of the rats. Kidneys were longitudinally divided into two halves - one for histological analysis and the other to obtain the renal supernatant of proteins for determination of tissue cytokines (IL-1α, IL-1β, IL-6, IL-10 ... / Doutor

Objetivo: Este trabalho avaliou as condições periodontais em mulheres com câncer de mama, sob tratamento quimioterápico, e monitorou o efeito do tratamento periodontal nas condições clínicas e sistêmicas dessas pacientes. Materiais e Métodos As pacientes foram divididas em quatro grupos: pacientes controles saudáveis (SAU) (n=16); pacientes com câncer e sem doença periodontal (CAN) (n=15); pacientes que não tinham câncer porém que tinham doença periodontal (DP) (n=18); e pacientes com câncer e com doença periodontal (CAN-DP) (n=10). Os parâmetros clínicos avaliados foram: Índice de Placa (IP), Índice Gengival (IG), Profundidade de Sondagem (PS), Nível Clínico de Inserção (NCI) e os parâmetros hematológicos (proteína C-reativa-PCR) e a contagem total de neutrófilos (PMN) foram avaliados no baseline, aos 45 dias e aos 90 dias após terapia periodontal não-cirúrgica. Resultados: No baseline, os grupos DP e CAN-DP exibiram maiores valores de PS, NCI, IP, IG (p&#9633; 0,01 e p&#9633;0,01) do que os grupos SAU e CAN. Os níveis de PCR não apresentaram diferença estatística (p>0,05) entre os grupos experimentais, e a contagem de neutrófilos foi estatisticamente maior para o grupo DP (p<0,05). Após o tratamento periodontal, observou-se uma redução significativa (p<0,05) de PS no grupo CAN e no grupo DP aos 90 dias em relação ao baseline. O grupo DP exibiu um ganho de inserção clínica significante aos 45 e 90 dias em relação ao baseline (p<0,05). Houve redução significativa do índice de placa aos 45 e 90 dias para os grupos SAU, DP e CAN-DP (p&#9633;0,05). Todos os grupos exibiram redução significativa no IG tanto ao 45 quanto aos 90 dias (p<0,05). Entretanto, aos 90 dias, essa redução foi estatisticamente maior para o grupo SAU do que para o grupo CAN (p<0,05). Aos 90 dias pós-tratamento periodontal, o grupo CAN-DP exibiu maior frequência de bolsas residuais (p<0,05), menor redução de profundidade de sondagem (p<0,05) e maior risco de progressão da doença (p<0,05) do que o grupo DP. Os grupos PD e CAN apresentaram uma redução nos níveis da PCR aos 45 dias. Esta redução foi estatisticamente significativa para o grupo PC e CAN, além disso, o grupo CAN mostrou uma diferença estatisticamente significativa aos 90 dias quando comparado ao baseline. O grupo DP teve uma significativa redução de neutrófilos aos 45 dias, quando comparado aos valores do baseline. Conclusão: Os resultados deste estudo não conseguiram detectar a associação entre doença periodontal e câncer. Embora o tratamento periodontal reduz os marcadores clínicos inflamatórios de gengivite e de periodontite e os parâmetros hematológicos tanto em pacientes saudáveis como nos pacientes com câncer e em quimioterapia. Porém, essa redução é mais palpável nos pacientes sem câncer mostrando que a doença e/ou a quimioterapia prejudica o controle inflamatório. / The association between periodontal disease and cancer has been recently established and the logic behind it is that inflammation is a common factor between both diseases, although all the involved mechanisms in this association have to be clarified. Furthermore, periodontal infection/inflammation may be aggravated during chemotherapy and contribute for systemic inflammatory process. Objective: This study compared the periodontal status in healthy and breast cancer patients before chemotherapy and monitored the effect of periodontal treatment in the clinical and systemic conditions. Materials and Methods: The subjects were allocated into four groups: healthy patients (H) (n = 16); cancer patients without periodontal disease (CAN) (n = 15); periodontally compromised patients (PC) (n = 18); and cancer and periodontally compromised patients (CAN-PC) (n = 10). The clinical parameters: probing depth (PD), clinical attachment level (CAL), plaque index (PI) and gingival index (GI); the hematological parameters: C-reactive-protein (CRP) and neutrophils (PMN) were accessed at baseline, 45 and 90 days after non-surgical periodontal therapy. The differences intra and inter-groups were verified by the analysis of variance of two criteria followed by the Post-Hoc test of Bonferroni (p<0,05) and for hematologic parameters were verified by the Friedman test and by the Mann-Whitney test (p<0,05). Results: At baseline, there was no difference between the two periodontally healthy and the two periodontally compromised groups regarding the clinical parameters; there were no statistically significant differences for PCR; and PMN were statistically higher for the PC groups (p&#9633;0,05). After the periodontal treatment there was a significant reduction (p&#9633;0,05) of PD in the CAN group and in the PC group at 90 days post therapy comparing to baseline (p&#9633;0,05). There was a significant reduction on the PI at 45 and 90 days for the H group, PC and CAN-PC groups (p&#9633;0,05). All groups had a significant reduction on GI at 45 and 90 days after treatment (p&#9633;0,05). However, this reduction was statistically more pronounced in the H group than in the CAN group (p&#9633;0,05). At 90 days post periodontal treatment, the CAN-PC group exhibited a greater frequency of residual periodontal pockets (p&#9633;0,05), less PD reduction (p&#9633;0,05) and a greater risk of periodontitis progression (p&#9633;0,05) than the PC patients. The PC and the CAN groups showed a statically significant reduction in PCR levels at 45 days (p<0,05), furthermore the CAN group showed also statistically significant differences reduction in PCR levels at 90 days (p<0,05). The PC group had a significant reduction in the PMN at 45 days when compared to baseline values. Conclusion: The results of this study have failed to detect the association between periodontal disease and cancer. The periodontal treatment reduces the inflammatory markers of gingivitis and periodontitis and the hematological markers, however, this reduction is more pronounced in patients without cancer, showing that the disease and/or the chemotherapy impair the inflammatory control.

A O-glicosilação com N-acetil-glucosamina (O-GlcNAc) é uma modificação póstraducional altamente dinâmica, controlada por duas enzimas: a OGT, responsável por catalisar a adição de N-acetil-glucosamina no grupo hidroxila dos resíduos de serina e treonina; e a OGA, que catalisa a remoção de O-GlcNAc das proteínas modificadas. Condições crônicas de aumento de proteínas O-GlcNAc estão associadas a disfunções vasculares e a efeitos negativos no coração. No entanto, os efeitos agudos produzidos pelo aumento de O-GlcNAc estão associados a uma melhora na função cardíaca, redução dos níveis vasculares de mediadores pró-inflamatórios. Neste estudo testamos a hipótese que o aumento agudo da modificação por O-GlcNAc reduz os níveis sistêmicos de citocinas pró-inflamatórias, como IL-1?, IL-6 e TNF-?, bem como a ativação do fator de transcrição NF-?B, reduzindo o processo inflamatório e disfunção vascular em animais com endotoxemia. Foram utilizados camundongos C57BL6/J que receberam lipopolissacarídeo (LPS) para o desenvolvimento de endotoxemia severa (LPS sev, 20 mg/Kg, i.p.) ou veículo (controle). Os animais também receberam glucosamina (GlcN; 300 mg/Kg; i.v.; 30 min antes do LPS), ThG (150 ?g/Kg, i.v.; 12 h antes do LPS) ou veículo e foram sacrificados 6 horas após a indução da endotoxemia com LPS. Os tratamentos prévios com GlcN e ThG aumentaram a sobrevida dos animais (50 % e 60 % na endotoxemia sev). A determinação dos níveis sistêmicos de IL-1?, IL-6 e TNF-? e da expressão gênica vascular destas citocinas [mRNA (2-??CT) em aorta e leito mesentérico] demonstrou que os tratamentos prévios com GlcN e ThG reduziram a expressão de IL- 1?, IL-6 e TNF-? em animais com endotoxemia. O tratamento prévio com GlcN atenuou, mas não normalizou a hipotensão arterial causada pela endotoxemia por LPS. Não foram observadas alterações de reatividade na artéria aorta de animais que receberam LPS, ou LPS + GlcN. Entretanto, os tratamentos prévios com GlcN e ThG atenuaram a refratariedade a vasoconstrictores observada em artéria mesentérica de resistência de animais que receberam somente LPS. O aumento dos níveis de proteínas glicosiladas, com GlcN e ThG, em cultura de macrófagos provenientes da medula óssea de camundongos C57BL6/J corroboram os resultados descritos acima. Os níveis de citocinas no sobrenadante da cultura de macrófagos, bem como a expressão gênica destas citocinas, e a produção de nitrito por estas células foram menores em células submetidas ao tratamento com GlcN e ThG. Além da endotoxemia por LPS, avaliamos os efeitos do tratamento com GlcN em um modelo de ligadura e perfuração do ceco (CLP) e os resultados corroboram os dados obtidos nos animais com endotoxemia e na cultura de macrófagos. Portanto, o aumento agudo da modificação por O-GlcNAc em animais com endotoxemia por LPS promove aumento da sobrevida dos animais, redução nos níveis de citocinas pró-inflamatórias, como IL-1?, IL-6 e TNF-? e redução da disfunção vascular e hipotensão arterial. Conclusão: Aumento agudo de O-GlcNAc reduz o processo inflamatório e atenua eventos cardiovasculares associados a endotoxemia por LPS, sugerindo que essa via representa um possível alvo em condições de resposta inflamatória sistêmica. / The post-translational modification of proteins by O-GlcNAcylation (O-GlcNAc) is highly dynamic and modulates cell-signaling processes. Chronic conditions that increase the levels of O-GlcNAc-modified proteins are associated with vascular disorders. However, acute increases in O-GlcNAc levels reduce the release of proinflammatory mediators and negatively regulate inflammatory processes by decreasing e.g. NF-?B activation. This study tested the hypothesis that acute increases of O-GlcNAc levels reduce mortality and inflammatory processes in experimental models of sepsis. Male C57BL6/J mice received lipopolysaccharide (LPS) for the development of severe (LPS sev, 20 mg / kg, i.p.) endotoxemia or vehicle (control). Mice also received glucosamine (GlcN; 300 mg / kg, iv; 30 min) or ThG (150 ?g / kg, iv; 12 h) or vehicle before LPS administration. Mice were killed 6 hours after LPS. The acute increase of OGlcNAc modification in animals with LPS-induced endotoxemia increased survival, reduced levels of proinflammatory cytokines such as IL-1?, IL-6 and TNF-? and attenuated vascular dysfunction and arterial hypotension. Treatments with GlcN and ThG reduced IL-1?, IL-6 and TNF-? [plasma levels and vascular gene expression [mRNA] (2- ??CT) in the aorta and mesenteric bed] in animals with endotoxemia. GlcN and ThG also attenuated the decreased vasoconstrictor responses and hypotension induced by LPS. Increased levels of glycosylated proteins decreased levels (in the supernatant) and expression of cytokines in cultured bone marrow-derived macrophages from C57BL6/J mice. GlcN treatment produced similar effects in an experimental model that closely resembles human sepsis, the cecum ligation and perforation (CLP) model. Conclusion: Acute increase of O-GlcNAc reduces the inflammatory process and attenuates cardiovascular events associated with LPS endotoxemia, suggesting that this pathway represents a possible target under conditions of systemic inflammatory response.

Ácido clorogênico (ACG) é o termo utilizado para designar um grupo de compostos fenólicos oriundos da reação de esterificação entre ácidos hidroxicinâmicos (p-cumárico, caféico e ferúlico) e ácido quínico. São amplamente encontrados em produtos naturais e exercem ações antioxidantes, citotóxicas, antitumorais, antibacterianas, antifúngicas e antiinflamatórias. Apesar da descrição dos seus efeitos antiinflamatórios em diferentes modelos experimentais, a literatura é carente quanto suas ações específicas em funções inflamatórias de neutrófilos. Assim, o objetivo do presente trabalho foi investigar os efeitos do ACG sobre funções de neutrófilos in vitro. Neutrófilos foram obtidos do lavado peritoneal de ratos Wistar, machos, 4 horas após a injeção local de glicogênio de ostra a 1% e foram incubados, na presença ou ausência de LPS, com ACG nas concentrações de 25, 50, 100 ou 1000 &#181;M. A viabilidade celular (exclusão por trypan-blue), a secreção de citocinas e prostaglandina E2 (ensaio imunoenzimático); a produção de óxido nítrico (reação de Griess); a expressão de moléculas de adesão (citometria de fluxo); a aderência e a quimiotaxia foram avaliadas. Os resultados obtidos mostraram que o ACG não afetou as secreções do fator de necrose tumoral-&#945;,de interleucina 1&#946;, do óxido nítrico e de prostaglandina E2 em condições basais ou após estimulação pelo LPS. Diferentemente, a incubação com ACG inibiu a aderência de neutrófilos à cultura primária de célula endotelial de microcirculação de ratos e a quimiotaxia in vitro frente ao peptídeo formilado (N-formilmetionil- leucil-fenilalanina). Estes últimos efeitos podem estar associados à ação do ACG sobre a expressão de moléculas de adesão, já que o ACG elevou a expressão de L-selectina e reduziu as expressões de &#946;2 integrina e da molécula de adesão plaqueta e endotélio. Os dados obtidos não foram dependentes de alterações da viabilidade celular. Em conjunto, os resultados mostram que o ACG possui efeito direto sobre funções de neutrófilos responsáveis pela interação ao endotélio microvascular e pela migração orientada em resposta a estímulo inflamatório. Estes efeitos podem contribuir, pelo menos em parte, para redução da migração de neutrófilos para focos de inflamação na vigência de tratamento com ACG amplamente descrita na literatura. / Chlorogenic acid (CGA) is the term utilized to design a group of phenolic compounds from the sterification reaction between the hydroxycinnamic acids (p-coumaric, caffeic and ferulic acid) and the quinic acid. They are largely found in natural products and exert anti-oxidant, citoxic, anti-tumoral, anti-bactericidal, anti-fungicidal and anti-inflammatory activity. Besides the description of its anti-inflammatory effect in different experimental models, the literature is scarse regarding its specific actions in neutrophil inflammatory functions. Therefore, the aim of this present work was to investigate the CGA effects on neutrophils functions in vitro. Neutrophils were obtained from the peritoneal lavage of male Wistar rats four hours after a local injection of oyster glycogen 1% and were incubated, in the presence or absence of LPS, with CGA in the concentrations of 25, 50, 100 or 1000 &#181;M. The cellular viability (trypan-blue exclusion), the cytokines secretions (enzyme-linked immunosorbend assay), production of nitric oxide (Greiss reaction); adhesion molecules expression (flow citometry), adherence and chemotaxis in vitro were assessed. The results shows that the CGA did not affect the secretion of the tumor necrosis factor-&#945; , of nitric oxide and prostaglandin E2 and only the incubation with 50&#181;M of CGA inhibited the secretion of Interleukin 1&#946; after stimulation with LPS. Differently, the incubation with CGA inhibited the adherence of neutrophils on the primary culture of endothelial cell from the micro-circulation of rats and the chemotaxis in vitro against formylated peptide (fenyl-metyl-leucyl-alanin). This lasts effects might be associated with the action of CGA on the expression of adhesion molecules, hence this compound was capable of elevate the expression of L-selectin and reduce the expression of &#946;2 integrin and PECAM-1. The data here obtained are not dependent of cellular viability alterations. In conjunct, the data here obtained shows that the CGA has direct effect on neutrophils functions responsible of the interaction with the micro vascular endothelium and the oriented migration in response to an inflammatory stimuli. These effects can contribute, at least in part, to the decreased neutrophil migration in the inflammatory focus in the presence of CGA treatment.