Orientador: Valdecir Farias Ximenes / Coorientador: Luiz Marcos da Fonseca / Banca: Maria Luiza Zeraik / Banca: Iêda Maria Marinez Paino / Banca: Daniel Rinaldo / Banca: Iracilda Zeppone Carlos / Resumo: Inúmeras patologias têm a sua gênese e/ou progressão relacionadas à produção desregulada de intermediários oxidantes. O complexo multienzimático NADPH oxidase é um dos componentes de maior relevância neste contexto, pois é uma das principais fontes de ânion superóxido no organismo animal. Sendo expresso em inúmeros tecidos, incluindo leucócitos e células do tecido endotelial, o desenvolvimento de inibidores eficientes deste complexo enzimático poderá significar uma nova terapêutica para o tratamento de doenças inflamatórias crônicas. Com objetivo de explorar a relação entre a estrutura molecular, as propriedades químicas e atividades biológicas, utilizamos o éster fenetílico do ácido cafeico (CAPE) como inibidor do complexo enzimático NADPH oxidase e comparamos sua eficácia com o seu precursor ácido cafeico e os derivados, éster fenetílico do ácido cinâmico e o ácido clorogênico, correlacionando-os a respeito a sua hidrofobicidade, propriedades redox e inibição do complexo NADPH oxidase em leucócitos ativados. A hipótese seria de que um aumento da hidrofobicidade provocado pela esterificação do ácido cafeico poderia facilitar o seu acesso à membrana celular e assim alterar seu efeito como possível inibidor de NADPH Oxidase. Os resultados, em ensaios in vitro, mostraram que as alterações na hidrofobicidade não provocaram alterações significativas no potencial de oxidação e potencial antioxidantes dos compostos testados. Quando testados em leucócitos ativados (modelos ex vivo),... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Several diseases have their genesis and / or progression related to unregulated production of oxidants intermediates. The multienzymatic complex NADPH oxidase is one of the most important components in this context because it is a major source of superoxide anion in animal organisms. It is expressed in numerous tissues, including leukocytes and endothelial tissue cells. Developing effective inhibitors of this enzyme complex may indicate a new therapy for the treatment of chronic inflammatory diseases. Several studies have described numerous anti-inflammatory properties attributed to caffeic acid phenethyl ester (CAPE), an active component found in propolis. In order to explore the relationship between the molecular structure, chemical properties and biological activities, we used CAPE to inhibit the enzyme complex NADPH oxidase and compare its efficacy with the its precursor caffeic acid and derivatives, phenethyl ester of cinnamic acid and chlorogenic acid, correlating them with regard to hydrophobicity, redox properties and inhibition of NADPH oxidase complex on activated leukocytes. The hypothesis was that an increase of hydrophobicity caused by the esterification of caffeic acid could facilitate access to cell membranes and thereby alter its effect as a possible inhibitor of NADPH oxidase. The results (in vitro), showed that the changes in hydrophobicity did not provoke significant changes in the oxidation potential and antiradical potency of the tested compounds. But whe... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Carlos Alberto Petta / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-06T11:01:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pinto_AlessandraCachutePeloggia_D.pdf: 1211304 bytes, checksum: 68153a393e793af5d893cd7402ea8641 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: As alterações no padrão de sangramento são praticamente universais em usuárias de métodos contraceptivos contendo somente progestógenos, sendo uma importante causa de descontinuação destes métodos. Este estudo foi desenvolvido com o intuito de se avaliar as quimiocinas Interleucina 8 e 6 CKine no endométrio de usuárias do sistema intra-uterino liberador de levonorgestrel e correlacioná-las com as populações de leucócitos, células natural killer uterinas e mastócitos. Amostras de endométrio foram obtidas de dois grupos de usuárias do sistema intra-uterino liberador de levonorgestrel: 11 mulheres em amenorréia e 15 mulheres com algum tipo de sangramento. Os leucócitos foram determinados através de anticorpos específicos para neutrófilos, células natural killer uterinas e mastócitos. Foi realizada imuno-histoquimica para identificação das quimiocinas. Os neutrófilos encontravam-se em pequeno número, não havendo diferença entre os dois grupos. As células natural killer uterinas encontravam-se em número maior no grupo com sangramento (p<0,0001). Não houve diferença entre o número total de mastócitos e mastócitos ativados, porém houve um aumento da área extracelular positiva para triptase (p<0,05) nas mulheres com sangramento. As quimiocinas Interleucina-8 e 6CKine mostravam-se abundantes no estroma e no epitélio, não havendo diferença entre os dois grupos. Houve maior número de células natural killer uterinas e maior área extracelular positiva para triptase em pacientes que apresentavam sangramento. Apesar de não haver diferença entre o número total de mastócitos e mastócitos ativados e das quimiocinas Interleucina-8 e 6CKine, as células natural killer uterinas e os produtos dos mastócitos podem ter exercido papel importante na perda da integridade endometrial em usuárias do sistema intra-uterino de levonorgestrel / Abstract: Changes in the bleeding pattern are almost universal in women using progestin-only methods of contraception, and are a frequent cause of discontinuation of these methods. The present study was designed to assess endometrial chemokines in users of the Levonorgestrel intrauterine system and correlate them with leukocyte populations, uterine natural killer cells, and mast cells. Endometrium was obtained from two groups of Levonorgestrel intrauterine users: 11 amenorrhoeic women and 15 women with some form of bleeding pattern. Leukocytes were assessed using specific antibodies for neutrophils, uterine natural killer cells and mast cells. Immunohistochemistry was performed to locate chemokines 6Ckine and Interleukin-8. Neutrophils were few and without differences between the two groups. Uterine natural killer cells were significantly higher in the bleeding group (p< 0.0001). There was no difference between the total number of mast cells and activated mast cells but there was a greater extracellular area stained for mast cell tryptase (p<0.05) in women with bleeding. Chemokines 6CKine and Interleukin-8 were abundant in the stroma and in the epithelium and there was no difference between the groups. We observed more uterine natural killer cells in users with bleeding, and a greater extracellular area stained for mast cell tryptase, although there were no differences between the number of mast cells and activated mast cells or the chemokines 6CKine and Interleukin-8. Uterine natural killer cells and mast cells products may play a role in provoking break-through bleeding in long term users of the levonorgestrel intrauterine system / Doutorado / Tocoginecologia / Doutor em Tocoginecologia

Orientador: Paulo Cesar Giraldo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-03T05:18:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Feitoza_SandraBaptistadoNascimento_M.pdf: 568737 bytes, checksum: eb7d47efd6ad295a16c4f248ce39c18d (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: Com a finalidade de investigar e comparar as células de defesa presentes na mucosa vaginal de mulheres com (vaginose bacteriana e candidíase vaginal) e sem vulvovaginites, foram avaliados esfregaços de 128 mulheres atendidas no Ambulatório de Infecções Genitais (AIG) do Departamento de Tocoginecologia (DTG) do Centro de Atenção Integral à Saúde da Mulher (CAISM), Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP) e Centro de saúde comunitário (CECOM), no período de junho à dezembro de 2001. Os esfregaços foram preparados com raspado de parede vaginal lateral à direita colhidos com cotonete estéril. A lâmina era rapidamente colocada em frasco de vidro contendo álcool 95% para fixação e posterior coloração com hematoxilina-eosina. Estudou-se sistematicamente a presença de células do tipo neutrófilos, linfócitos, macrófagos, eosinófilos, e plasmócitos em 32 mulheres com diagnóstico de candidíase vaginal, 32 com vaginose bacteriana e 64 sem infecção. Foram analisados dez campos microscópicos por lâmina em ocular de 10X e objetiva de 40X. Além do esfregaço citado, foram realizados exame bacterioscópico a fresco e corado pelo gram, pH vaginal e o teste das aminas. O diagnóstico final foi resultante da associação destes procedimentos. A análise estatística foi feita utilizando-se o teste Exato de Fisher e testes não paramétricos de Kruskal-Wallis, Mann-Whitney e teste de Dunn para comparações múltiplas. No grupo de mulheres com candidíase vaginal houve uma predominância de células do tipo neutrófilos (mediana: 67,5) e linfócitos (mediana: 2,5), sendo esse achado significante em relação ao grupo de mulheres com vaginose bacteriana (mediana 3,0 e 0 respectivamente - p<0,01) e, com o grupo controle apenas houve significância para os neutrófilos (mediana 20,5 - p<0,01). Houve também diferenças significativas entre os controles e o grupo de mulheres com vaginose bacteriana no caso dos neutrófilos (p<0,01). Os outros tipos celulares não foram significantes em todos os grupos analisados. Os resultados mostraram ser possível, de maneira fácil e simples, a identificação e quantificação das células de defesa pesquisadas. As células do tipo neutrófilo foram as mais encontradas em todos os grupos, seguidas dos linfócitos e já em menor proporção, observou-se a presença dos eosinófilos e macrófagos. Os plasmócitos foram encontrados em apenas uma paciente com candidíase vaginal. Nas pacientes com vaginose bacteriana notou-se uma diminuição acentuada das células de defesa. Morfologicamente essas células são iguais às células sanguíneas e parecem manter a mesma proporcionalidade / Abstract: The aim of this study was to investigate and compare defense cells in the vaginal mucosa of women with (bacterial vaginosis and vaginal candidiasis) and without vulvovaginitis. One hundred and twenty-eight (128) women were examined at the Genital Infections Outpatient Clinic (GIOC) in the Tocogynecology Department at the Center for the Integral Care of Women¿s Health (CAISM) in the State University of Campinas (UNICAMP) and the Community Health Center (CECOM) from June to December, 2001. Smears were prepared with scrapes taken from the right lateral vaginal wall and collected with a sterile cotton-tipped applicator. The glass slide was rapidly placed in a glass flask containing 95% alcohol for fixation and subsequent hematoxylin-eosine staining. The presence of cells such as neutrophils, lymphocytes, macrophages, eosinophils and plasma cells were systematically studied in 32 women diagnosed with vaginal candidiasis, 32 diagnosed with bacterial vaginosis and 64 without infection. Ten fields per slide were scanned using a 10x ocular lens and a 40x objective lens. The diagnosis was made considering the fresh and gram-stained bacterioscopic exams, vaginal pH and the whiff test (for amine). Statistical analysis was done applying the Fisher exact test, the Kruskal-Wallis and Mann-Whitney nonparametric tests and the Dunn test for multiple comparisons. In the group of women with vaginal candidiasis, the predominant types of cells were neutrophils (median: 67.5) and lymphocytes (median:2.5), this finding being significant compared to the group of women with bacterial vaginosis (median:3.0 and 0-p<0.01), respectively. Compared to the control group, only neutrophils were significant (median:20.5-p<0.01). There were also significant differences between the controls and the group of women with bacterial vaginosis regarding neutrophils (p<0.01). The other cell types were not significant in all the groups analyzed. Results showed that it was possible to identify and quantify the defense cells investigated in an easy and simple manner. Neutrophils were the most frequently found cells in all groups, followed by lymphocytes and a lower proportion of eosinophils and macrophages. Plasma cells were found in only one patient from the vaginal candidiasis group. In the bacterial vaginosis group, a pronounced overall reduction in these cells was observed. Morphologically, these cells are equivalent to blood cells and seem to maintain the same proportions / Mestrado / Tocoginecologia / Mestre em Tocoginecologia

Made available in DSpace on 2014-06-12T22:57:03Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo3031_1.pdf: 1754444 bytes, checksum: 53cbd48111ca69c7b68c302a5586c1d8 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2011 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O objetivo do presente estudo foi comparar parâmetros do sistema imunológico inato de crianças menores de dois anos internadas por desnutrição grave, no Instituto de Medicina Integral Professor Fernando Figueira (IMIP), e submetidas ao tratamento preconizado pela OMS, em dois momentos, na admissão e na alta hospitalar com crianças eutróficas. Foram estudadas 15 crianças com desnutrição grave na admissão hospitalar e 10 na ocasião da alta, entre os meses de abril e outubro de 2010, houve uma perda de 5 crianças na alta hospitalar, 2 devido à quantidade de sangue insuficiente e 3 por não autorização dos pais ou responsáveis. A avaliação do grupo desnutrido foi realizada em até 24 horas do internamento e no dia da alta hospitalar. Para comparação com o grupo desnutrido, foram estudadas 10 crianças eutróficas atendidas no Serviço de Puericultura do IMIP. Para cada criança, foi coletada uma alíquota sanguínea de 4ml, para as dosagens imunológicas. Na admissão foram analisados o leucograma, taxa de fagocitose e a atividade oxidante dos monócitos. Na alta, foram avaliados o leucograma, a proteína C reativa (PCR), proteínas totais e frações, taxa de fagocitose e a produção dos radicais livres: ânion superóxido e óxido nítrico pelos monócitos. No grupo desnutrido predominou o sexo masculino e a idade variou entre 4 e 16 meses. A maioria das crianças apresentava desnutrição do tipo marasmática e de causa secundária a outras patologias, principalmente a cardiopatia congênita, e as principais causas do internamento foram a diarréia e pneumonia. Em relação ao grupo controle, também prevaleceu o sexo masculino e a idade variou entre 6 e 14 meses. O tempo médio de internamento do grupo desnutrido foi de 13,5±6,7 dias, sendo maior nos pacientes com desnutrição secundária. Na admissão hospitalar, as crianças desnutridas mostraram redução significativa no número de linfócitos (C=56,9±4,5; D=45,0±16,5), da capacidade fagocitária (C=36,9±1,6; D=31,833±0,9), da liberação do ânion superóxido tanto na primeira hora (1h: C=6,8±0,5; D=4,7±0,4) quanto na segunda hora (C=12,3±0,6; D=7,3±0,8) e do óxido nítrico (C=7,1±0,6; D=4,0±0,2) quando comparadas ao grupo controle. Na alta, o grupo desnutrido apresentou redução signficativa nos valores de linfócitos (C=56,9,8±1,5; D=39,7±1,1) e da produção de superóxido na segunda hora (C=12,3±0,6; D=7,8±0,9) e de óxido nítrico (C=7,1±0,6; D=4,6±0,1) quando comparadas ao grupo controle. Em conclusão, a desnutrição grave acarretou prejuízos na imunocompetência tanto na admissão quanto na alta hospitalar. O número de linfócitos e a atividade oxidante dos monócitos não foram recuperados na alta, o que pode comprometer a efetividade na destruição de antígenos e a função microbicida de monócitos.

Orientador: Andrei Moroz / Resumo: As membranas de hemácias e leucócitos são compostas por centenas de antígenos que desempenham diversas funções relacionadas a homeostase, metabolismo celular e podem estar envolvidos em processos de rejeição de transplantes, doenças hemolíticas e reações transfusionais. Para a detecção desses antígenos são utilizados anticorpos monoclonais e a obtenção destes anticorpos envolve diversas etapas que culminam na caracterização dos produtos obtidos. Esta etapa é crítica e envolve diferentes técnicas, incluindo a Proteômica na descrição da proteína-alvo de cada anticorpo monoclonal. O objetivo deste estudo foi caracterizar anticorpos monoclonais de especificidade anti-eritrocitária e anti-leucocitária produzidos pelo Laboratório de Engenharia Celular (LEC) do Hemocentro de Botucatu. Foram selecionados um clone e um hibridoma produtores de anticorpos anti-eritrocitários, e um clone produtor de anticorpos anti-leucocitários, pertencentes ao banco de células do LEC. As células foram expandidas em cultura, foi realizado Western Blotting (WB) e cada banda proteica reconhecida pelos anticorpos (antígenos) foi analisada por Espectrometria de Massas, segundo técnicas proteômicas. Outros testes adicionais foram realizados, como técnicas imuno-hematológicas, citometria de fluxo e imuno-histoquímica. Após expansão, retestagem e verificação de reatividade contra hemácias humanas, e a seleção dos dados de outros estudos até então não explorados, na técnica de WB os anticorpos reconheceram dive... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Red blood cell and leukocyte membranes are composed of hundreds of antigens that perform various functions related to homeostasis, cell metabolism and may be involved in transplant rejection, hemolytic disease and transfusion reactions. Monoclonal antibodies are used to detect these antigens and the obtaining of these antibodies involves several steps that culminate in the characterization of the obtained products. This step is critical and involves different techniques, including Proteomics to descript the target protein of each monoclonal antibody. The aim of this study was to characterize anti-erythrocyte and anti-leukocyte monoclonal antibodies produced by the Laboratory of Cellular Engineering (LEC) of the Blood Center of Botucatu. Anti-erythrocytes clone and hybridoma antibody producers and a clone that produces anti-leukocyte antibodies, belonging to the LEC cell bank were selected. Cells were expanded in culture, it was realyzed Western Blotting (WB) technique and each protein band recognized by the antibodies (antigens) was analyzed by Mass Spectrometry according to proteomic techniques. Others tests were realized, such as immunohematology techniques, flow cytometry and immunohistochemistry. After expansion, retesting and verification of reactivity against human red blood cells, and selection of data from other studies not exploited, in the WB technique, the antibodies recognized several spots. After analysis by Mass Spectrometry, it was identified, with good reliabi... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2012-06-05T20:42:15Z No. of bitstreams: 1 Bruno Antonio Veloso Cerqueira Inflamação, hemólise e ativação celular....pdf: 113176346 bytes, checksum: 334b7eba1166d09c726b10fc80dc284d (MD5) / Made available in DSpace on 2012-06-05T20:42:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bruno Antonio Veloso Cerqueira Inflamação, hemólise e ativação celular....pdf: 113176346 bytes, checksum: 334b7eba1166d09c726b10fc80dc284d (MD5) Previous issue date: 2011 / Universidade Federal da Bahia. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, Bahia, Brasil / A anemia falciforme (AF) é uma desordem genética caracterizada por hemólise, estresse oxidativo, infecções recorrentes, estado inflamatório crônico e eventos de oclusão vascular, com ocorrência de crises de dor, danos teciduais e possibilidade de óbito precoce. Os eventos vasculares na AF envolvem a participação de hemácias, leucócitos, células endoteliais, plaquetas, fatores da coagulação e proteínas plasmáticas. Neste estudo, avaliou-se o papel de marcadores hematológicos, de hemólise, inflamação e de ativação celular na fisiopatologia da ativação endotelial na AF. Foi realizado um estudo de corte transversal, seguido por caso-controle. Quarenta e cinco (45) indivíduos com AF em estado estável, com idade média 20,5 anos participaram do estudo. O perfil de hemoglobinas foi confirmado por HPLC. Os marcadores bioquímicos foram investigados por kits específicos; a expressão de moléculas na superfície dos leucócitos por citometria de fluxo e a quantificação de citocinas e moléculas de adesão solúveis por ELISA. Níveis elevados de lactato desidrogenase (LDH) e bilirrubinas foram associados a eventos de Síndrome Torácica Aguda e úlcera de perna, respectivamente. A leucocitose foi observada em pacientes com histórico de hepatomegalia e úlcera de perna. Os pacientes com histórico de terapia transfusional apresentaram concentrações aumentadas da aspartato aminotransferase (AST) e contagem de reticulócitos. Os níveis diminuídos de HDL estiveram associados a eventos de sequestro esplênico e esplenomegalia. A expressão do CD11b em neutrófilos, linfócitos e monócitos foi maior nos pacientes que nos controles; entretanto, a expressão do CD62L nos neutrófilos foi menor nos pacientes do que nos controles antes e após o desafio com o lipopolissacarídeo bacteriano (LPS). A expressão do CD11b e CD32 em neutrófilos teve correlação positiva com plaquetas e com o LDL, respectivamente. A expressão do CD62L em neutrófilos apresentou correlação negativa com plaquetas. A expressão do CD11b e CD18 em linfócitos teve correlação positiva com o ácido úrico e com a molécula de adesão vascular solúvel 1 (VCAM-1s), respectivamente. A expressão do CD62L em linfócitos foi negativamente correlacionada com o número de plaquetas, molécula de adesão intercelular solúvel 1 (ICAM-1s) e TNF-alfa. A expressão do CD32 em monócitos foi menor nos pacientes que nos controles e apresentou correlação negativa com a AST e hemoglobina S. A expressão reduzida do CD32 em monócitos de pacientes foi associada ao aumento da LDH, enquanto que a expressão do CD62L nessas células apresentou correlação positiva com o HDL e com as concentrações de hemoglobina. Os níveis de IL-18 e do ácido úrico foram associados a marcadores de hemólise, de disfunção endotelial e citocinas e podem representar a participação do complexo inflammasome. Os resultados apresentados sugerem o papel importante de biomarcadores na avaliação do perfil clínico de pacientes com AF, além de sugerir a provável influência de moléculas expressas na superfície de leucócitos, da IL-18 e do ácido úrico no processo inflamatório crônico e na gravidade clínica da AF. Acreditamos que a interação desses biomarcadores envolve processos complexos relacionados à hemólise, inflamação e ativação celular com importância na avaliação da gravidade dos eventos vasculares presentes na AF. Em conjunto, todos esses marcadores podem ser considerados como alvos terapêuticos promissores em intervenções clínicas futuras na doença. / Sickle cell anemia (SCA) is a common, severe monogenetic disorder characterized by chronic hemolysis, oxidative stress, frequent infections, a chronic inflammatory state and recurrent occlusions of the microcirculation, resulting in painful crises, organ damage and premature death. Vaso-occlusive episodes in SCA involve interactions between sickle red blood cells, endothelial cells, leukocytes, platelets, coagulation factors and plasma proteins. Herein, we evaluated the role of oxidative stress, inflammation and the profile of cell activation on pathophysiology of vascular occlusion in SCA. We conducted a cross-sectional study, followed by case control study. Forty-five SCA patients without general symptoms, median age 20.5 years, were included in this study. Hemoglobin profile was confirmed by HPLC; biochemical markers by biochemical kits; surface molecule expressions on leukocytes were determined by flow cytometry and the concentration of cytokines and soluble adhesion molecules were measured by ELISA kits. The increase serum levels of lactate dehydrogenase (LDH) and bilirubins were associated with acute thoracic syndrome and leg ulcer respectively. The clinic aspects like hepatomegaly and leg ulcer were associated with increase number of leukocyte. The blood transfusion therapy was associated positively with aspartate aminotransferase (AST) levels and reticulocytes number. The decreased levels of HDL-C were associated with splenic sequestration and splenectomy. The surface CD11b expression of neutrophils, lymphocyte and monocytes in patients was higher than in controls; however, CD62L expression on neutrophils was lower in patients than in controls before and after lipopolysaccharide (LPS) challenge. CD11b and CD32 expression level on neutrophils were positively correlated with platelet counts and LDL-C levels respectively. CD62L expression on neutrophils was negatively correlated with platelet counts. CD11b and CD18 expression levels on lymphocytes were positively correlated with uric acid and soluble vascular adhesion molecule 1(sVCAM-1) levels respectively. CD62L expression on lymphocyte was negatively correlated with platelet count, soluble intercellular adhesion molecule 1 (sICAM-1) and TNF-alpha levels. CD32 expression on monocytes in patients was lower than in controls, further correlated negatively with AST and hemoglobin S. Decrease CD32 expression on monocytes was associated with high LDH levels and CD62L expression was positively correlated with HDL-C and hemoglobin concentration. The IL-18 and uric acid plasma concentrations were correlated closely with markers of hemolysis, endothelial dysfunction and cytokine levels, possibly representing the participation of inflammasome complex. We believe that the interaction of these biomarkers involve complex processes related to hemolysis, inflammation and cellular activation with importance in assessing severity of the vascular events on the SCA. So, together, all these biomarkers can be considered as promising therapeutic targets in future clinical interventions in SCA

O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos da concentração subletal de 0,3 ppm da FSA de petróleo em parâmetros do sistema imune inato e hepático de Rachycentron canadum após o período de 7 e 14 dias. Observou-se uma diminuição do fator de condição dos animais expostos por 14 dias, comparado ao grupo controle. A contagem diferencial de leucócitos mostrou um aumento do número de leucócitos após 7 dias, e uma diminuição destes após 14 dias. A atividade da enzima lisozima no grupo exposto por 14 dias foi maior em comparação ao grupo controle. Foram observadas, ainda, alterações nos tecidos branquiais, renais e hepáticos, após análises histológicas nos grupos expostos a FSA. Notou-se um aumento do índice hepatossomático e da atividade da enzima AST dos animais expostos a FSA. Não foi observada atividade da enzima ALT em todos os grupos. Conclui-se que a concentração de 0,3 ppm da FSA de petróleo altera parâmetros do sistema imune inato e hepáticos de R. canadum, podendo causar imunossupressão e comprometimento do sistema de biotransformação. / The objective of this study was to evaluate the effects of sublethal concentration of 0.3 ppm of the petroleum WSF in parameters of the innate immune system and hepatic of Rachycentron canadum, after the periods of 7 and 14 days. It was observed a decrease in condition factor of animals exposed for 14 days compared to control group. The differential leukocyte count showed an increased number of total leukocytes after 7 days and decreased after 14 days. The activity of the lysozyme enzyme in group exposed for 14 days was higher compared to the control group. There were, also, changes in gill, kidney and liver tissues in groups exposed to WSF of petroleum for 7 and 14 days. It was noted an increase of the hepatosomatic index and AST enzyme activity of animals exposed WSF. It was not observed activity of the enzyme ALT in all groups. It was concluded that the sublethal concentration of 0.3 ppm of the WSF of petroleum alters parameters of the innate immune system and hepatic of R. canadum that may cause immunosuppression and biotransformation system impairment.

A presente investigação teve o objetivo de avaliar quantitativa e qualitativamente a celularidade de cabras hígidas criadas no Estado de São Paulo, assim como correlacionar as células somáticas do leite com os leucócitos presentes no sangue, informações que, além de raras em relação à glândula mamária de cabras sadias, são extremamente conflitantes. Foram colhidas amostras de cada metade mamária, provenientes de 51 cabras hígidas das raças Saanen, Alpina e Toggenburg, em diferentes fases de lactação, pertencentes a diferentes criatórios do Estado de São Paulo. As amostras de leite foram submetidas ao California Mastitis Test (CMT), a contagem eletrônica de células somáticas e microscopia direta, utilizando o corante de verde de metil e pironina-Y, além da citocentrifugação para a avaliação dos leucócitos; com as amostras de sangue foi realizado o leucograma. Associando-se os escores do CMT com a contagem celular eletrônica foram encontrados os valores medianos de 181.000, 578.000, 628.000, 1.421.500 e 5.542.000, respectivamente. Já na contagem celular por microscopia direta os valores medianos obtidos foram de 74.991, 271.396, 71.420, 640.995 e 5.049.394, correspondendo, respectivamente aos escores negativo, traços, 1+, 2+ e 3+. Relacionando-se as contagens celulares de acordo com as fases da lactação, os valores medianos obtidos não apresentaram diferenças significativas entre as fases inicial, intermediária e final da lactação tanto para a contagem eletrônica quanto para a contagem microscópica direta, respectivamente. A correlação entre a contagem celular automática e microscópica direta foi de 88%. Não foram encontradas diferenças significativas quando se comparou a contagem de células somáticas nas glândulas direita e esquerda, tanto na contagem automática quanto na microscópica direta. Os valores relativos dos leucócitos presentes no leite foram determinados, obtendo-se os valores médios e desvios-padrão de 77,0 ± 30,5%; 76,5 ± 20,9% e 65,3 ± 25,6% de neutrófilos, 2,24 ± 3,26%; 2,04 ± 2,33% e 2,14 ± 2,81% de linfócitos e 22,6 ± 20,2%, 21,4 ± 20,0% e 23,0 ± 16,2% de monócitos, correspondendo às fases inicial, intermediária e final da lactação, respectivamente. No sangue, determinou-se o valor total de leucócitos, obtendo-se o valor médio de 8525 ± 3244 células/mL. Os valores relativos médios dos diferentes tipos de leucócitos presentes no sangue de cabras sadias foram de 56,8 ± 11,8% de neutrófilos, 38,5 ± 11,8% de linfócitos, 2,8 ± 1,7% de monócitos e 1,9 ± 1,6% de eosinófilos. Correlacionando-se os leucócitos presentes no sangue com os presentes no leite, não foram observadas correlações significativas, porém, quando se analisou os leucócitos do sangue com as fases da lactação, foram encontradas diferenças significativas nos valores relativos médios de neutrófilos e linfócitos, respectivamente, na fase final da lactação. Os resultados obtidos permitiram concluir que existiu diferença entre a contagem celular automática e a microscópica direta na determinação do número de células somáticas no leite caprino; os valores celulares aumentam conforme o escore do CMT, o leucócito predominante no leite e sangue de cabras hígidas é o neutrófilo e existe relação íntima entre o neutrófilo e o linfócito no sangue de cabras, sendo estes influenciados pela fase da lactação. / The present investigation had the objective to evaluate quantitatively and qualitatively the celularity of created healthy goats in Sao Paulo state, as well as correlating the somatic cells of milk with the leukocytes in the blood, information that, beyond rare in relation to the mammary gland of healthy goats, are extremely conflicting. Samples of each mammary half had been harvested, proceeding from 51 Saanen, Alpina and Toggenburg healthy goats, in different phases of lactation, from the different breeders of Sao Paulo state. The milk samples had been submitted to California Mastitis Test (CMT), the electronic counting of somatic cells and direct microscopy, using the pyronin Y-methyl green stain, beyond the cytospin centrifuge for the evaluation of leukocytes; with the samples of blood the leucogram was carried through. Associating you prop up of the CMT with electronic the cellular counting had been found the medium values of 181.000, 578.000, 628.000, 1.421.500 and 5.542.000, respectively. Already in the cellular counting for direct microscopy the gotten medium values had been of 74.991, 271,396, 71,420, 640,995 and 5.049.394, corresponding, respectively to negative, traces, 1+, 2+ and 3+ scores. Becoming related the cellular counting in accordance with the phases of the lactation; the gotten medium values had not presented significant differences between the phases, initial, intermediate and final of the lactation in such for the electronic counting how much for the direct microscopically counting, respectively. The correlation between the automatic and direct microscopically counting cellular was of 88%. Significant differences had not been found when the counting of somatic cells in the glands was compared right and left, as much in the microscopically automatic counting in the direct one. The relative values of the leucocytes gifts in milk had been determined, getting the average values and 77,0 ± 30,5%; 76,5 ± 20.9% and 65,3 ± 25.6% of neutrophils, 2,24 ± 3,26%; 2,04 ± 2.33% and 2,14 ± 2.81% of lymphocytes and 22,6 ± 20.2%, 21,4 ± 20.0% and 23,0 ± 16.2% of monocytes, corresponding the phases initial, intermediate and final of the lactation, respectively. In the blood, the total value of leucocytes was determined, getting itself the average value of 8525 ± 3244 céls/mL. The average relative values of the different types of leukocytes gifts in the blood of healthy goats had been of 56,8 ± 11.8% of neutrophils, 38,5 ± 11.8% of lymphocytes, 2,8 ± 1.7% of monocytes and 1,9 ± 1.6% of eosinophils. Correlating the leukocytes gifts in the blood with the gifts in milk, significant correlation had not been observed, however, when it analyzed the leucocytes of the blood with the phases of the lactation, significant differences in the average relative values of neutrophils and lymphocytes had been found, respectively, in the final phase of lactation. The gotten results allow to conclude that difference between the automatic cellular counting and the direct microscopically one in the determination of the somatic frame number in goat milk exists, the cellular values increase as prop up it of the CMT, the predominant leucocyte in milk and blood of healthy goats is neutrophil, exists close relation between neutrophil and lymphocytes in the blood of goats, being these influenced by the phase of the lactation.

O presente estudo teve por objetivo avaliar quantitativa e qualitativamente os fagócitos presentes no leite de búfalas (Bubalus bubalis) hígidas criadas nos Estado de São Paulo. Para tal, o experimento foi subdividido em três etapas, designadas capítulos, conforme os objetivos: (1) determinar e estudar a celularidade do leite de búfalas hígidas; (2) estabelecer metodologia adequada para a recuperação das células somáticas do leite de búfalas, possibilitando a avaliação in vitro; (3) descrever e avaliar as provas de atividade fagocítica das células presentes no leite de búfalas hígidas, através de testes de mensuração direta (espraiamento e fagocitose de partículas de Zymosan) e por testes indiretos, que mensuram os metabólitos de oxigênio gerados na “explosão respiratória". Foram colhidas 132 amostras de leite de 35 búfalas hígidas (sem alterações ao exame físico da glândula mamária, bem como resultado da prova de CMT e exame microbiológico negativos). Após as avaliações do CMT, da CCS, da contagem diferencial, da viabilidade celular, do exame bacteriológico, dos testes de fagocitose, de espraiamento e da liberação de peróxido de hidrogênio, concluiu-se que: (1) os resultados das contagens de células somáticas, microscópica e automática, foram semelhantes, mas a predominância celular diferiu conforme a técnica empregada, sendo identificadas percentualmente mais células mononucleares na lâmina de suspensão celular citocentrifugada, e mais polimorfonucleares no leite submetido à técnica de Prescott e Breed; o leite diluído e citocentrifugado permitiu melhor avaliação da morfologia celular sendo identificados: 61,1% de monócitos e macrófagos; 32,9% de neutrófilos; 5,3% de linfócitos e 0,7% de eosinófilos; os fagócitos mononucleares apresentaram uma acentuada plasticidade na estrutura, com variados padrões morfológicos; (2) a baixa celularidade do leite necessitou maiores volumes da amostra mas, o aumento do volume da amostra aumenta a concentração celular obtida, mas não de forma ilimitada pois pode passar a comprometer a viabilidade das mesmas pelo excesso de manipulação e tempo exigidos pelas amostras mais volumosas; não foi necessária a elicitação, sendo possível a recuperação de 2 x 106 células viáveis/mL de leite de búfalas hígidas com 500 mL de leite, no mínimo; (3) os macrófagos aderidos espraiaram significativamente, além de apresentarem correlação com outro marcador de ativação celular, no caso, a liberação de peróxido de hidrogênio; mais da metade dos macrófagos aderidos fagocitaram partículas de Zymosan; os fagócitos mantêm sua capacidade de liberar peróxido de hidrogênio, espontaneamente ou não, em grau máximo, com uma significativa variação entre amostras / The aim of this study was to make a quantitative and a qualitative evaluation of phagocytes from healthy buffaloes (Bubalus bubalis) milk bred in Sao Paulo state. For this purpose, the experiment was divided in three parts, called chapters, as specific objectives: (1) establish and study the cellularity of healthy buffaloes milk; (2) establish an adequate method for the recuperation of somatic cells from buffaloes milk, making possible an in vitro evaluation; (3) standardize and evaluate the phagocytic activity tests of cells from healthy buffaloes milk, through direct measurement methods (spreading and phagocytosis of Zymosan particles) and indirect methods, which measure the oxygen metabolites from the respiratory burst. Milk samples (n=132) of healthy 35 buffaloes (without alterations on the physical examination of the mammary gland, and also negative results on CMT and microbiologic exams) were obtained. After the evaluations of CMT, SCC, differential cells count, cellular viability, bacteriologic exam, phagocytic tests, spreading and hydrogen peroxide liberation, the conclusions were: (1) the results of somatic cells count, microscopic and automatic, were similar but the cellular predominance differed with the utilized method, being percentually identified more mononuclear cells on slide of cytocentrifugation cellular suspension and more polymorphonuclear on milk submitted to the Prescott and Breed methods; the diluted and cytology by cytocentrifugation of milk permitted a best evaluation of the cellular morphology, being identified: 61.1% of monocytes and macrophages; 32.9% of neutrophils; 5.3% of lymphocytes and 0.7% of eosinophils; mononuclear phagocytes showed a high plasticity on structure with many morphological patterns; (2) a lower cellularity on milk requires higher quantities of the samples but an increase on sample volume increases cellular concentrations obtained, not on an unlimited way because it can compromise the cells viability with the excess of manipulation and time required by the biggest samples; it was not necessary the elicitation, being possible the recuperation of 2 x 106 viable cells/mL on milk of healthy buffaloes with 500 mL of milk minimum (3) adherent macrophages spreaded and were correlated with hydrogen peroxide release; majority of adherent macrophages phagocyted Zymosan particles; milk phagocytes showered a high oxidative metabolism, undependably of PMA stimulation, but with a great individual variation.

A Virola surinamensis, também conhecida como ucuúba branca, é muito difundida na floresta amazônica e, popularmente, usada no tratamento de erisipelas, cólicas e dispepsias. Estudos experimentais demonstraram atividades anti-parasitárias de diferentes componentes da planta contra Schistosoma mansoni, Plasmodium falciparum, Leishmania donovani e Trypanosoma cruzi. Com a possibilidade de utilização farmacológica da planta evidencia-se a necessidade de avaliar os possíveis efeitos sobre o sistema hematopoético. O presente trabalho teve por objetivo verificar os efeitos da grandisina, uma lignana extraída da Virola surinamensis, sobre o sistema hematopoético, em camundongos. Para tanto, foram avaliados os seguintes parâmetros: números globais de eritrócitos, leucócitos e plaquetas no sangue periférico, celularidade na medula óssea e baço (utilizando câmara de Neubauer); contagem diferencial de leucócitos no sangue periférico e medula óssea (em extensões coradas com May-Grünwald/ Giemsa); caracterização da população de linfócitos da medula óssea e baço (por imunocitoquímica). A grandisina, em dose única de 100?g/g de peso corpóreo induziu, no sangue periférico, diminuição significativa do número de leucócitos totais, linfócitos e neutrófilos, após 7 e 14 dias, e redução significativa do número de monócitos, após 14 dias do tratamento. Houve uma tendência de aumento do número de células nucleadas da medula óssea após 7 dias da administração da substância, com aumento significativo após 14 dias do tratamento, mas não ocorreu nenhuma alteração na celularidade do baço. Foi observado aumento das células da linhagem linfocítica e monocítica em evolução, na medula óssea, após 7 e 14 dias do tratamento, enquanto no sangue periférico, o número de linfócitos e monócitos continuaram reduzidos. A grandisina, na dose de 100?g/g de peso corpóreo, por cinco dias, provocou uma redução no número de leucócitos, linfócitos, monócitos e neutrófilos no sangue periférico após 7 dias do tratamento. Houve uma tendência de redução do número de leucócitos, linfócitos e monócitos, com redução significativa do número de neutrófilos, após 14 dias da administração da substância. O número de células da medula óssea reduziu, após 7 e 14 dias do tratamento. Quanto a celularidade do baço, não foi observado qualquer alteração. Ocorreu ainda uma redução no número de células mononucleares e polimorfonucleares em evolução na medula óssea, após 7 e 14 dias do tratamento. No experimento de dose única, a imunohistoquímica dos sedimentos medulares mostrou uma tendência de diminuição do número de Linfócitos T totais, Linfócitos T imaturos e Linfócitos B, após 14 dias do tratamento. No experimento de dose seriada houve redução destas populações de linfócitos, após 7 e 14 dias do tratamento, somente na medula óssea. Os resultados obtidos neste estudo demonstram que a dose de 100?g/g de peso corpóreo, tanto em dose única como seriada, causa importantes alterações nas células sanguíneas indicando que, para o uso terapêutico, doses inferiores a estas devem ser avaliadas. / Virola surinamensis, also known as ucuuba branca, is widespread in the Amazon forest and, popularly, used in the treatment of erysipelas, colic and dyspepsia. Experimental studies have shown antiparasitic activities of different components of the plant against Schistosoma mansoni, Plasmodium falciparum, Leishmania donovani and Trypanosoma cruzi. The potential pharmacological use of the plant points towards the need to evaluate the possible effects on the hematopoietic system. The present work aims to verify the effects of grandisin, a lignan extracted from Virola surinamensis, on the hematopoietic system of mice. The following parameters were evaluated: the number of erythrocytes, leukocytes and platelets on peripheral blood, cell counts on bone marrow and spleen (with Neubauer chamber); differential leukocyte count on peripheral blood and bone marrow (on smears stained with May-Grünwald/Giemsa); the characterization of lymphocytes on bone marrow and spleen (by immunocytochemistry). The grandisin in a single dose of 100?g/g of body weight induced, on peripheral blood, significant decrease in the total count of leukocytes, lymphocytes and neutrophils, after 7 and 14 days and a significant decrease in the number of monocytes, after 14 days of treatment. A tendency in the increase of nucleated bone marrow cells occurred after 7 days of administration of the substance, with a significant increase after 14 days of treatment, but no alteration in the spleen cells occurred. An increase in the cells of lymphocytic and monocytic lineages was observed in evolution, in bone marrow after 7 and 14 days of treatment whereas in peripheral blood the number of lymphocytes and monocytes maintained low. Grandisin, administered during five consecutive days with a daily dose of 100?g/g of body weight, caused a decrease in the number of leukocytes, lymphocytes, monocytes and neutrophils in peripheral blood after 7 days of treatment. A tendency of decrease in the number of leukocytes, lymphocytes and monocytes occurred with a significant decrease in the number of neutrophils, after 14 days of administration of the substance. The number of bone marrow cells decreased after 7 and 14 days of treatment. For the spleen cells no alterations were observed. A decrease in the number of mononuclear and polimorfonuclear cells in evolution on bone marrow after 7 and 14 days of treatment was observed. In a single dose experiment, the immunocytochemistry of medullar sediments showed a tendency of decrease in the total number of T lymphocytes, T immature lymphocytes and B lymphocytes after 14 days of treatment. The serial dose caused a decrease in the population of lymphocytes after 7 and 14 days of treatment in bone marrow. The results obtained in this study demonstrated that the dose of 100?g/g of body weight, either in single or in serial doses, cause important alterations on blood cells indicating that for therapeutic use inferior doses must be evaluated.