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Histologia endometrial, densidade, calibre microvascular e matriz-metaloproteinase-3 em usuarias do sistema intra-uterino liberador de levonorgestrel ou do implante subdermico liberador de nestorone com e sem sangramento endometrialRibeiro, Marilia Oliveira 26 June 2006 (has links)
Orientadores : Carlos Alberto Petta, Liliana A. L. de Angelo Andrade / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-06T18:51:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1
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Previous issue date: 2006 / Resumo: Atualmente, os métodos anticoncepcionais somente com progestógenos estão sendo usados por um número cada vez maior de mulheres. Estes são de alta eficácia e de longa duração. Dentre eles encontram-se o sistema intra-uterino liberador de levonorgestrel (SIU-LNG) e o implante subdérmico liberador de nestorone (NES). Nas usuárias destes métodos, as mudanças no padrão do fluxo menstrual são quase universais e a imprevisibilidade do sangramento uterino constitui a principal causa de descontinuação dos mesmos. O objetivo deste estudo de corte transversal foi verificar diferenças quanto aos aspectos histológicos em hematoxilina-eosina (HE) e através de reações imunoistoquímicas em biópsias endometriais nas usuárias do SIU-LNG ou do implante subdérmico liberador de NES, em grupos com e sem sangramento uterino, após seis meses de uso dos métodos. Sujeitos e Métodos: Foram avaliadas e submetidas à biópsia endometrial 58 usuárias do SIU-LNG, subdivididas em 29 casos em cada grupo com e sem sangramento e 20 usuárias do implante subdérmico liberador de NES, sendo 14 no grupo com sangramento e 6 sem sangramento. Após a avaliação morfológica em HE o material foi submetido a reações imunoistoquímicas para os marcadores CD34 (avaliação dos vasos da mucosa) e MMP-3 (matriz-metaloproteinase-3), enzima relacionada aos processos de colapso do endométrio. Resultados: Dentre as usuárias do SIU-LNG, o aspecto histológico mais freqüente foi o endométrio progestacional. Não houve correlação significativa entre a presença do sangramento e a idade, paridade, cor, índice de massa corpórea, tempo de uso do SIU-LNG e o padrão menstrual prévio ao uso do SIU-LNG. Também não houve diferença estatisticamente significante com relação aos dados morfológicos analisados de endometrite, necrose estromal, erosão de superfície com reepitelização focal, colapso estromal, pseudoestratificação glandular, edema estromal, densidade e calibre vasculares. O perímetro e o maior diâmetro glandular foram significativamente maiores no grupo sem sangramento. Um número maior de leucócitos foi a única característica histológica significante, que se relacionou à ocorrência de sangramento endometrial nas usuárias de SIU-LNG. A imunoexpressão da MMP-3 foi significativamente maior no grupo com sangramento. Com relação às usuárias do implante subdérmico liberador de NES, o padrão histológico endometrial mais freqüente foi o progestacional. Não houve correlação entre a classificação histológica e a presença ou não de sangramento endometrial. Não houve diferenças entre os grupos com e sem sangramento com relação à ocorrência de endometrite, necrose estromal, erosão de superfície com reepitelização focal, colapso estromal, pseudoestratificação glandular, edema estromal, perímetro e diâmetros glandulares, número de leucócitos, densidade e maior diâmetro vascular e a imunoexpressão da MMP-3. O maior número de glândulas endometriais foi a única característica morfológica significante no grupo sem sangramento. Conclusões: Nas usuárias do SIU-LNG houve evidente correlação da importância dos leucócitos e da MMP-3 na perda da integridade endometrial no grupo com sangramento, porém o mesmo não foi observado em usuárias do implante subdérmico liberador de NES. Os resultados obtidos sugerem a necessidade de se seguir avaliando os leucócitos endometriais, bem como suas interações enzimáticas, incluindo as MMP na busca dos mecanismos patogênicos do sangramento endometrial em usuárias de anticoncepcionais somente com progestógenos / Abstract: Progestogen-only contraception is being used by an increasing number of women. It has a long term and high efficacy. Among these methods, there is the levonorgestrel intrauterine system (LNG-IUS) and the Nestoroneâ (NES)-releasing contraceptive implant. However, the changes of menstrual patterns are almost universal and unpredictable and remains the main reason for discontinuation of the method. Objective: This was a cross sectional study. It aimed to investigate the endometrial histology and immunohistochemical reations in users of LNG-IUS or NES-releasing contraceptive implant, for more than six months, in women with and without endometrial bleeding. Methods: In users of LNG-IUS endometrial biopsy was obtained in a total of 58 healthy volunteers, twenty-nine women in each group: with or without endometrial bleeding. In users of (NES)-releasing contraceptive implant in 20 womens, 14 with and 6 without endometrial bleeding. Results: In users of LNG-SIU, histological analysis revealed that the majority of samples displayed a progestin-modified appearance. There was no significant difference between the two groups comparing age, body mass index, duration of contraceptive use, parity, ethnicity and menstrual pattern previous to use of LNG-IUS. There was no significant difference in the evaluation of endometritis, stroma collapse, superficial erosion, glandular pseudo stratification, oedema, density and caliber microvascular. The perimeter and the major glandular diameter were the only characteristics significantly higher in the group without bleeding. A number significantly higher of leukocytes was found in the group with bleeding. This was the only histological characteristic correlated with the endometrial bleeding in these groups. MMP-3 showed a significantly higher number of reactive cells in the bleeding group. In users of NES-releasing contraceptive there was no significant difference between the two groups comparing clinical characteristics. The histological analysis of the endometrial tissue showed a predominance of progestogenic pattern endometrium in both groups. There was no significant difference in the evaluation of endometritis, stroma collapse, superficial erosion, glandular pseudo stratification, oedema, perimeter, glandular diameter, leukocytes, endometrial vascular density and caliber and the rate of cells expressing MMP-3. Conclusions: These finding provide no evidence microvascular pattern but, point to the importance of the leukocytes and MMP-3 expression for loss of endometrial integrity and abnormal bleeding in women using LNG-IUS. This pattern was not observed in users of NES-releasing contraceptive. The results suggest the necessity of others evaluations about endometrial leukocytes, theirs enzymatics interactions, including the MMP in progestogen-only contraception / Doutorado / Tocoginecologia / Doutor em Tocoginecologia
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Contagem celular total e diferencial no leite e sangue de cabras hígidas criadas no Estado de São Paulo / Total and differential cellular count in milk and blood from healthy goats bred in Sao Paulo stateKarina Medici Madureira 30 January 2006 (has links)
A presente investigação teve o objetivo de avaliar quantitativa e qualitativamente a celularidade de cabras hígidas criadas no Estado de São Paulo, assim como correlacionar as células somáticas do leite com os leucócitos presentes no sangue, informações que, além de raras em relação à glândula mamária de cabras sadias, são extremamente conflitantes. Foram colhidas amostras de cada metade mamária, provenientes de 51 cabras hígidas das raças Saanen, Alpina e Toggenburg, em diferentes fases de lactação, pertencentes a diferentes criatórios do Estado de São Paulo. As amostras de leite foram submetidas ao California Mastitis Test (CMT), a contagem eletrônica de células somáticas e microscopia direta, utilizando o corante de verde de metil e pironina-Y, além da citocentrifugação para a avaliação dos leucócitos; com as amostras de sangue foi realizado o leucograma. Associando-se os escores do CMT com a contagem celular eletrônica foram encontrados os valores medianos de 181.000, 578.000, 628.000, 1.421.500 e 5.542.000, respectivamente. Já na contagem celular por microscopia direta os valores medianos obtidos foram de 74.991, 271.396, 71.420, 640.995 e 5.049.394, correspondendo, respectivamente aos escores negativo, traços, 1+, 2+ e 3+. Relacionando-se as contagens celulares de acordo com as fases da lactação, os valores medianos obtidos não apresentaram diferenças significativas entre as fases inicial, intermediária e final da lactação tanto para a contagem eletrônica quanto para a contagem microscópica direta, respectivamente. A correlação entre a contagem celular automática e microscópica direta foi de 88%. Não foram encontradas diferenças significativas quando se comparou a contagem de células somáticas nas glândulas direita e esquerda, tanto na contagem automática quanto na microscópica direta. Os valores relativos dos leucócitos presentes no leite foram determinados, obtendo-se os valores médios e desvios-padrão de 77,0 ± 30,5%; 76,5 ± 20,9% e 65,3 ± 25,6% de neutrófilos, 2,24 ± 3,26%; 2,04 ± 2,33% e 2,14 ± 2,81% de linfócitos e 22,6 ± 20,2%, 21,4 ± 20,0% e 23,0 ± 16,2% de monócitos, correspondendo às fases inicial, intermediária e final da lactação, respectivamente. No sangue, determinou-se o valor total de leucócitos, obtendo-se o valor médio de 8525 ± 3244 células/mL. Os valores relativos médios dos diferentes tipos de leucócitos presentes no sangue de cabras sadias foram de 56,8 ± 11,8% de neutrófilos, 38,5 ± 11,8% de linfócitos, 2,8 ± 1,7% de monócitos e 1,9 ± 1,6% de eosinófilos. Correlacionando-se os leucócitos presentes no sangue com os presentes no leite, não foram observadas correlações significativas, porém, quando se analisou os leucócitos do sangue com as fases da lactação, foram encontradas diferenças significativas nos valores relativos médios de neutrófilos e linfócitos, respectivamente, na fase final da lactação. Os resultados obtidos permitiram concluir que existiu diferença entre a contagem celular automática e a microscópica direta na determinação do número de células somáticas no leite caprino; os valores celulares aumentam conforme o escore do CMT, o leucócito predominante no leite e sangue de cabras hígidas é o neutrófilo e existe relação íntima entre o neutrófilo e o linfócito no sangue de cabras, sendo estes influenciados pela fase da lactação. / The present investigation had the objective to evaluate quantitatively and qualitatively the celularity of created healthy goats in Sao Paulo state, as well as correlating the somatic cells of milk with the leukocytes in the blood, information that, beyond rare in relation to the mammary gland of healthy goats, are extremely conflicting. Samples of each mammary half had been harvested, proceeding from 51 Saanen, Alpina and Toggenburg healthy goats, in different phases of lactation, from the different breeders of Sao Paulo state. The milk samples had been submitted to California Mastitis Test (CMT), the electronic counting of somatic cells and direct microscopy, using the pyronin Y-methyl green stain, beyond the cytospin centrifuge for the evaluation of leukocytes; with the samples of blood the leucogram was carried through. Associating you prop up of the CMT with electronic the cellular counting had been found the medium values of 181.000, 578.000, 628.000, 1.421.500 and 5.542.000, respectively. Already in the cellular counting for direct microscopy the gotten medium values had been of 74.991, 271,396, 71,420, 640,995 and 5.049.394, corresponding, respectively to negative, traces, 1+, 2+ and 3+ scores. Becoming related the cellular counting in accordance with the phases of the lactation; the gotten medium values had not presented significant differences between the phases, initial, intermediate and final of the lactation in such for the electronic counting how much for the direct microscopically counting, respectively. The correlation between the automatic and direct microscopically counting cellular was of 88%. Significant differences had not been found when the counting of somatic cells in the glands was compared right and left, as much in the microscopically automatic counting in the direct one. The relative values of the leucocytes gifts in milk had been determined, getting the average values and 77,0 ± 30,5%; 76,5 ± 20.9% and 65,3 ± 25.6% of neutrophils, 2,24 ± 3,26%; 2,04 ± 2.33% and 2,14 ± 2.81% of lymphocytes and 22,6 ± 20.2%, 21,4 ± 20.0% and 23,0 ± 16.2% of monocytes, corresponding the phases initial, intermediate and final of the lactation, respectively. In the blood, the total value of leucocytes was determined, getting itself the average value of 8525 ± 3244 céls/mL. The average relative values of the different types of leukocytes gifts in the blood of healthy goats had been of 56,8 ± 11.8% of neutrophils, 38,5 ± 11.8% of lymphocytes, 2,8 ± 1.7% of monocytes and 1,9 ± 1.6% of eosinophils. Correlating the leukocytes gifts in the blood with the gifts in milk, significant correlation had not been observed, however, when it analyzed the leucocytes of the blood with the phases of the lactation, significant differences in the average relative values of neutrophils and lymphocytes had been found, respectively, in the final phase of lactation. The gotten results allow to conclude that difference between the automatic cellular counting and the direct microscopically one in the determination of the somatic frame number in goat milk exists, the cellular values increase as prop up it of the CMT, the predominant leucocyte in milk and blood of healthy goats is neutrophil, exists close relation between neutrophil and lymphocytes in the blood of goats, being these influenced by the phase of the lactation.
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Efeitos da concentração subletal da fração solúvel em água (FSA) de petróleo em paramêtros do sistema imune inato e hepáticos do peixe marinho Rachycentron canadum (LINNAEUS, 1766). / Effects of sublethal concentration of water-soluble fraction (WSF) of petroleum on parameters of the innate immune system and hepatic of marine fish Rachycentron canadum (LINNAEUS, 1766).Karina Fernandes Oliveira Rezende 22 October 2015 (has links)
O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos da concentração subletal de 0,3 ppm da FSA de petróleo em parâmetros do sistema imune inato e hepático de Rachycentron canadum após o período de 7 e 14 dias. Observou-se uma diminuição do fator de condição dos animais expostos por 14 dias, comparado ao grupo controle. A contagem diferencial de leucócitos mostrou um aumento do número de leucócitos após 7 dias, e uma diminuição destes após 14 dias. A atividade da enzima lisozima no grupo exposto por 14 dias foi maior em comparação ao grupo controle. Foram observadas, ainda, alterações nos tecidos branquiais, renais e hepáticos, após análises histológicas nos grupos expostos a FSA. Notou-se um aumento do índice hepatossomático e da atividade da enzima AST dos animais expostos a FSA. Não foi observada atividade da enzima ALT em todos os grupos. Conclui-se que a concentração de 0,3 ppm da FSA de petróleo altera parâmetros do sistema imune inato e hepáticos de R. canadum, podendo causar imunossupressão e comprometimento do sistema de biotransformação. / The objective of this study was to evaluate the effects of sublethal concentration of 0.3 ppm of the petroleum WSF in parameters of the innate immune system and hepatic of Rachycentron canadum, after the periods of 7 and 14 days. It was observed a decrease in condition factor of animals exposed for 14 days compared to control group. The differential leukocyte count showed an increased number of total leukocytes after 7 days and decreased after 14 days. The activity of the lysozyme enzyme in group exposed for 14 days was higher compared to the control group. There were, also, changes in gill, kidney and liver tissues in groups exposed to WSF of petroleum for 7 and 14 days. It was noted an increase of the hepatosomatic index and AST enzyme activity of animals exposed WSF. It was not observed activity of the enzyme ALT in all groups. It was concluded that the sublethal concentration of 0.3 ppm of the WSF of petroleum alters parameters of the innate immune system and hepatic of R. canadum that may cause immunosuppression and biotransformation system impairment.
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Estudo das propriedades bioquímicas da enzima alfa-glicosidase ácida de pacientes com doença de Pompe em diferentes amostras biológicas : comparação com a enzima de indivíduos normaisMezzalira, Jamila January 2014 (has links)
A Doença de Pompe (DP), também conhecida como Doença de Armazenamento do Gligogênio Tipo II, é uma doença lisossômica de depósito (DLD) causada pela deficiência da enzima α-glicosidase ácida (GAA). A GAA catalisa a clivagem das ligações glicosídicas α-1,4 e α-1,6 da molécula de glicogênio, e sua deficiência gera um acúmulo intralisossomal de glicogênio em vários tecidos. Esse acúmulo é expressivo no tecido muscular, e com isso surge o aparecimento dos sintomas clínicos. Clinicamente, a DP manifesta-se através de um amplo espectro de fenótipos, que apresentam em comum a ocorrência de fraqueza muscular progressiva. O diagnóstico da DP é realizado através da medida da atividade enzimática em células sanguíneas e tecidos ou por análise da mutação gênica. O padrão-ouro para o diagnóstico é a medida da atividade da GAA em amostras de fibroblastos e, embora este tipo de diagnóstico seja definitivo, amostras de sangue também estão sendo utilizadas. A medida da atividade das enzimas lisossomais vem sendo atualmente realizada em amostras de sangue impregnado em papel filtro (SPF) como método de triagem neonatal e de populações de alto risco. Sabendo que a Terapia de Reposição Enzimática para DP já está disponível e melhora a sobrevida dos pacientes, o diagnóstico precoce da DP é essencial, deve ser adequado e de fácil acesso para que o tratamento inicie cedo e seja mais eficaz. Assim, este estudo teve como objetivo avaliar algumas caracteristicas bioquímicas e cinéticas da enzima em amostras de leucócitos totais e SPF de modo a observar as diferenças quanto ao seu comportamento, entre controles e pacientes, estabelecer valores de coeficientes de variação para as técnicas e observar o efeito do uso de diferentes concentrações do inibidor acarbose. A GAA de pacientes com DP mostrou um comportamento diferente do observado em controles saudáveis em termos dos parâmetros analisados (Km, Vmax, estabilidade térmica), em leucócitos totais. Em SPF, GAA mostrou um comportamento diferente do observado nos controles saudáveis em termos de pH ótimo e estabilidade térmica; e valores de Km e Vmax para GAA foram estabelecidos somente em SPF de controles saudáveis. O uso do inibidor acarbose é essencial para a análise enzimática da GAA em amostras de leucócitos totais e SPF por inibir seletivamente a isoenzima MGA e assim, garantir o diagnóstico da DP. Os valores de coeficiente de variação estabelecidos para as técnicas em leucócitos e SPF estão dentro do aceitável e expressam boa precisão e reprodutibilidade das técnicas. A técnica fluorimétrica usando o substrato 4- Metilumbeliferil-α-D-glicopiranosideo em leucócitos é confiável podendo ser utilizada para diagnóstico definitivo e padrão da Doença de Pompe; em SPF, pode contribuir para melhorar a triagem desta doença, diferenciando pacientes com PD de indivíduos normais, tornando o processo de investigação e diagnóstico mais preciso e confiável. / Pompe disease (PD), also known as Glycogen Storage Disease Type II, is a lysosomal storage disorder (LSD) caused by the deficiency of the acid α-glucosidase enzyme (GAA). GAA catalyzes the cleavage of the glycosidic bonds α-1,4 and α-1,6 of the glycogen molecule, and when GAA activity is deficient glycogen accumulates intralysosomally in several tissues. This accumulation is significant in muscle tissue, which leads to the onset of clinical symptoms. Clinically, PD is manifested through a wide escpectro phenotypes, which have in common the occurrence of progressive muscle weakness. PD is diagnosed by measuring GAA activity in blood cells and tissues or by gene mutation analysis. The gold standard for diagnosis is the measurement of GAA activity in fibroblast samples and although this diagnosis is definitive, blood samples are also being used. Lysosomal enzyme activity currently has been measured in dried blood spot (DBS) samples as a method for screening newborns and high-risk populations. Since enzyme replacement therapy is already available for PD and improves patient life expectancy, the early PD diagnosis is crucial and must be appropriate and easily available so that the treatment can be initiated early and be more effective. Thus, this study aimed to evaluate some biochemical and kinetic characteristics of the enzyme in samples of total leukocytes and DBS in order to observe the differences in behavior between controls and patients, establish values of coefficients of variation for the techniques and observe the effect of using different concentrations of inhibitor acarbose. GAA from PD patients showed a different behavior from that observed in healthy controls in terms of the analyzed parameters (Km, Vmax, thermal stability) in total leukocytes. In DBS, GAA showed a different behavior from that observed in healthy controls in terms of optimum pH and thermal stability. Km and Vmax values for GAA were established only in DBS healthy controls. The use of acarbose inhibitor is essential for enzymatic analysis of GAA in total leukocyte and DBS samples for selectively inhibiting MGA isozyme and thereby secures the diagnosis of PD. The coefficients of variation values established for techniques in leukocytes and DBS are acceptable, precise, and can be appropriately reproduced. The fluorimetric technique using 4- methylumbelliferyl-α-D-glucopyranoside substrate in leukocytes is reliable and can be used for definitive diagnosis of Pompe disease; in DBS, can help to improve the screening of this disease, differentiating PD patients from normal individuals, making the research process and more accurate and reliable diagnosis.
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Epigenetic mechanisms involved in the interaction between diet and the expression of inflammation-related genes / Mecanismos epigenéticos envolvidos na interação entre a dieta e a expressão de genes relacionados com a inflamaçãoRocha, José Luiz Marques 19 February 2016 (has links)
Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2016-12-19T15:29:42Z
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Previous issue date: 2016-02-19 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Mecanismos epigenéticos estão envolvidos na regulação da expressão gênica, incluindo metilação do DNA e microRNA (miRNA) que desempenham um papel crucial no desenvolvimento e manutenção de complicações metabólicas. Portanto, os objetivos deste estudo foram: 1) Avaliar o efeito de uma estratégia para perda de peso com base no padrão mediterrâneo (dieta RESMENA) na expressão de alguns genes e miRNAs relacionados com inflamação em células brancas do sangue (WBC) de indivíduos com síndrome metabólica (MetS); 2) Estudar in vitro a ação de alguns miRNAs selecionados na expressão de genes relacionados com a inflamação em células humanas de leucemia monocítica aguda (THP-1). Além disso, investigar o papel regulador de ácidos graxos (ácido palmítico, ácido oleico, ácido eicosapentaenoico e ácido docosahexaenoico) na expressão destes miRNAs em monócitos, macrófagos e macrófagos activados por LPS (AcM); 3) Explorar em células mononucleares de sangue periféricos (PBMC) de jovens adultos aparentemente saudáveis, a relação entre os níveis de metilação do DNA (LINE1, TNF e IL6) e os parâmetros antropométricos, bioquímicos, clínicos, nutricionais e marcadores do estado inflamatório e do estresse oxidativo. Para isso, 2 estudos foram conduzidos em duas populações distintas, além de um estudo in vitro. No primeiro, características clínicas, antropométricas e bioquímicas de 40 indivíduos com MetS (20 homens e 20 mulheres, idade: 48.8 ± 10 anos; IMC: 35.4 ± 4.4 kg/m 2 ) foram avaliadas antes e depois de 8 semanas de uma dieta hipocalórica (-30% das necessidades energéticas) baseada no padrão alimentar mediterrânico. A ingestão de nutrientes foi avaliada com um questionário de frequência alimentar. O RNA total foi isolado a partir de WBC e a expressão de alguns miRNAs e mRNAs (IL6, TNF, ICAM- 1, IL-18, SERPINE1, VCAM-1) foram avaliados por meio de qRT-PCR. Para melhor compreensão dos dados, um estudo in vitro foi desenvolvido. THP-1 foram diferenciadas em macrófagos e ativados com LPS durante 24 horas. Os três tipos celulares foram transfectados com miR-Let7b-5p, miR-155-3p ou controle negativo. E a expressão dos miRNAs e genes foi realizada por qRT-PCR. Para o terceiro objetivo, foram utilizados dados de um estudo transversal com 156 indivíduos (91 mulheres, 65 homens com idade média: 23.1 ± 3.5 anos; IMC: 22.0±2.9 kg/m 2 ). Foram avaliados parâmetros antropométricos, bioquímicos clínicos, e alguns componentes dos sistemas de defesa antioxidante e resposta inflamatória. Além disso, a metilação do DNA e a expressão de alguns genes foram analisadas em PBMC. A intervenção nutricional RESMENA melhorou características antropométricas e bioquímicas dos participantes. A expressão de miR-155-3p foi diminuída enquanto Let-7b foi fortemente aumentada após 8 semanas de intervenção nutricional. As alterações na expressão de let-7b, miR- 125b, miR-130a, miR-132-3p e miR-422b foram associadas com mudanças na qualidade da dieta, quando avaliada pelo índice de alimentação saudável. Além disso, o baixo consumo de lipídios e de gordura saturada foram associados com maior expressão de let-7b após o tratamento dietético. A transfecção in vitro do miR-155-3p levou ao aumento da expressão de IL6 nos três tipos celulares analisados. Da mesma forma, SERPINE1 foi regulado positivamente em monócitos e macrófagos. No entanto, TLR-4 foi regulado negativamente em monócitos e macrófagos transfectados com esse miRNA. Após transfecção com let-7b, TNF/IL6 e SERPINE1 foram reprimidos em monócitos e AcM, respectivamente. Além disso, o tratamento com ácido oleico foi capaz de aumentar a expressão de miR-155 em monócitos quando comparado com o tratamento de DHA, mas não em relação com as células controle. Por outro lado, o ácido oleico, aumentou a expressão de let-7b em macrófagos e AcM. Finalmente, os resultados de metilação do DNA mostraram que a adiposidade foi menor entre os indivíduos com maior metilação global do DNA (LINE-1). Indivíduos com maior metilação do DNA apresentaram maior ingestão diária de calorias, ferro e riboflavina. No entanto, os indivíduos que apresentaram menor porcentagem de metilação do DNA relataram maior consumo de cobre, niacina e tiamina. Curiosamente, o grupo com maior metilação de LINE-1 teve menor porcentagem de fumantes e mais pessoas que praticavam atividade física. Além disso, a porcentagem de metilação de TNF foi negativamente associada com o perímetro da cintura, relação cintura-quadril e relação cintura-estatura. Os nossos dados sugerem que a modulação da expressão de miRNAs e metilação de DNA por meio de uma abordagem nutricional podem ser uma alternativa futura ou adjunta à terapia farmacológica atual. Além disso, este estudo amplia o entendimento de como os ácidos graxos podem atuar nas células imunológicas relacionadas com a inflamação. / Epigenetic mechanisms are involved in the regulation of gene expression including microRNAs (miRNA) and DNA methylation; and play a crucial role in the development and maintenance of pathophysiological complications. Therefore, the aims of this work were: 1) To evaluate the effect of a weight loss strategy based on the Mediterranean dietary pattern (RESMENA diet) on expression of some selected inflammation-related genes and miRNAs in white blood cells (WBC) of individuals with metabolic syndrome (MetS); 2) To clarify in vitro the roles of selected miRNAs on the expression of inflammation-related genes in human acute monocytic leukemia cells (THP-1). Moreover, we investigated the regulatory role of fatty acids (palmitic acid, oleic acid, eicosapentaenoic acid and docosahesaenoic acid) on the expression of these miRNAs in monocytes, macrophages and LPS-activated macrophages (AcM); 3) To explore in young and apparently healthy adults, the relation between DNA methylation levels of LINE-1, TNF and IL6 in periferal blood monoclear cells (PBMC) and anthropometric, biochemical, clinical, dietary, inflammatory and oxidative stress parameters. To the first aim, the clinical, anthropometric, and biochemical characteristics of 40 individuals with MetS (20 men, 20 women; age: 48.8±10.02y; BMI: 35.41±4.42 kg/m 2 ) were evaluated before and after an 8 weeks hypocaloric (-30% of energy requeriments) diet based on the Mediterranean dietary pattern. Food consumption and nutrient intake were assessed with a food frequency questionnaire and 48-h weighed food records. Total RNA was isolated from WBC and the expression of some inflammation-related miRNAs and mRNAs (IL-6, TNF, ICAM-1, IL-18, SERPINE1, VCAM-1) was assessed by qRT- PCR. To achieve the second aim, THP-1 were differentiated into macrophages and activated with LPS for 24 hours. The three cell types were transfected with miR-Let-7b- 5p and miR-155-3p mimics or negative control. qRT-PCR analyses were performed to evaluate selected genes with potential role in inflammatory pathways related to these miRNAs. To the third aim, one hundred fifty-six individuals (91 women, 65 men; age: 23.1±3.5 years; BMI: 22.0±2.9 kg/m 2 ) were evaluated for anthropometric, biochemical and clinical markers, including some components of the antioxidant defense system and inflammatory response. Moreover, DNA methylation of LINE-1, TNF and IL6 and the expression of some inflammation-related genes were analyzed in PBMC. The RESMENA nutritional intervention improved mostly anthropometric and biochemical features. The expression of miR-155-3p was decreased in PBMC, whereas let-7b was strongly upregulated as a consequence of the diet treatment. However, they were not correlated with the expression of the pro inflammatory genes in the same cells. The changes in the expression of let-7b, miR-125b, miR-130a, miR-132-3p, and miR-422b were associated with changes in diet quality when assessed by the Healthy Eating Index. Moreover, low consumption of lipids and saturated fat were associated with higher expression of let-7b after the nutritional intervention. The in vitro transfection of miR-155-3p mimic led to upregulation of IL6 in the three cell types analyzed. In the same way, SERPINE1 was upregulated in monocytes and macrophages. However, TLR-4 was downregulated in transfected monocytes and macrophages. After transfection with let-7b mimic, TNF/IL6 and SERPINE1 expression were downregulated in monocytes and AcM, respectively; however, TNF, IL6 and SERPINE1 were upregulated in macrophages. In addition, oleic acid was able to increase the expression of miR-155 in monocytes when compared with the DHA treatment but not in relation with non-treated cells. On the other side, oleic acid increased the expression of Let-7b in macrophages and AcM. Finally, the results from DNA methylation in young adults showed that adiposity was lower among individuals with higher LINE-1 methylation. On the contrary, body fat-free mass was higher among those with higher LINE-1 methylation. Individuals with higher LINE-1 methylation had higher daily intakes of calories, iron and riboflavin. However, those individuals who presented lower percentages of LINE-1 methylation reported higher intakes of copper, niacin and thiamin. Interestingly, the group with higher LINE-1 methylation had a lower percentage of current smokers and more individuals practicing sport. On the other hand, TNF methylation percentage was negatively associated with waist circumference, waist-to-hip ratio and waist-to-height ratio. Our data suggest that the modulation of the expression of miRNAs and DNA methylation through a nutrition approach might be a future alternative or adjunct to current pharmacologic therapy targeting endogenous miRNAs or target genes. Furthermore, this study also expands the understanding of the role of fatty acids in the epigenetic regulation in immune cells.
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Caracterização da reação inflamatória induzida pelo veneno da serpente Bothrops insularis: Influxo leucocitário, liberação de mediadores inflamatórios e mecanismos envolvidos nesses efeitos / Characterization of the inflammatory reaction induced by Bothrops insularis snake venom: leukocyte influx, release of inflammatory mediators and mechanisms involved in this effectsSouto, Pollyana Cristina Maggio de Castro 05 February 2010 (has links)
Este estudo teve por objetivos: i) caracterizar o influxo leucocitário induzido pelo veneno de Bothrops insularis (VBi); ii) avaliar a liberação de PGD2 e PGE2, TXA2 e LTB4 e das quimiocinas MCP-1 e KC induzida pelo VBi; iii) analisar a ação do VBi quanto a expressão protéica das enzimas ciclooxigenases (COX -1 e -2) e iv) avaliar a participação dos metabólitos das COX-1 e -2 e 5-LO no influxo leucocitário. O VBi causou aumento de leucócitos circulantes e do influxo de leucócitos PMN e MN para o local de sua injeção. Ainda, veneno induziu a liberação de PGD2, PGE2, TXA2 e LTB4, da MCP-1, mas não da KC, além da expressão protéica de COX-2. O tratamento dos animais com indometacina, etoricoxibe ou zileuton inibiu o influxo de leucócitos induzido pelo VBi na 12ª h. Em conclusão, o VBi tem capacidade de induzir influxo de leucócitos e liberação de mediadores inflamatórios para o local de sua injeção. O influxo leucocitário relaciona-se aos metabólitos das COX -1 e -2, 5-LO, da MCP-1 e do aumento de leucócitos circulantes / In this study the effects of Bothrops insularis venom (BiV) on the leukocyte influx, on the circulating leukocyte numbers and release of mediators, such as PGD2, PGE2, TXA2, LTB4, MCP-1 and KC into the local of its injection. Moreover, the role of eicosanoids in the BiV- induced leukocyte influx was assessed by selected pharmacological treatments. PMN were accumulated from 6 up to 24 h and MN cells from 3 up to 72 h when injected into the peritoneal cavity of mice. Moreover, BiV increased blood leukocyte at 3 h after injection and incresed the levels of PGD2, PGE2, TXA2, LTB4, MCP-1 at distinct periods of time. In addition, BiV induced the protein expression of COX-2 from 1 up to 12 h and the BiV-induced leukocyte influx was reduced by indomethacin or etoricoxib or zileuton at 12 h after injection. In conclusion, BiV is able to induce leukocyte influx and increase of blood leukocyte numbers. Moreover, the ability of BiV to induce expression of COX-2 and release of inflammatory mediators is relevant for the leukocytes influx into the local of its injection
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Estudo da metilação global do DNA no sangue periférico de cães sadios e cães com câncer / Global DNA methylation in peripheral blood of healthy dogs and dogs bearing cancerEpiphanio, Tatiane Moreno Ferrarias 07 December 2017 (has links)
O linfoma não-Hodgkin (LNH) é bastante prevalente em cães e atualmente é aceito como modelo comparativo da doença em humanos. Padrões aberrantes de metilação de DNA parecem exercer um papel chave no desenvolvimento de tumores hematopoiéticos nos seres humanos, constituem um mecanismo especial de controle transcricional e podem ser influenciados por alterações genéticas e ambientais. Os efeitos da metilação global do DNA têm sido raramente investigados em cães, principalmente em processos neoplásicos. O objetivo do presente estudo foi quantificar a metilação global do DNA em leucócitos sanguíneos de cães portadores de LNH, comparando com a metilação global do DNA de leucócitos sanguíneos de cães sadios e identificar genes diferentemente metilados nas mesmas amostras. Para isto, utilizou-se o DNA obtido da capa leucocitária de amostras de sangue venoso periférico de 10 cães sadios e 9 cães com LNH multicêntrico. Para imunofenotipagem dos linfomas, aplicou-se o painel imunocitoquímico de anticorpos anti-CD79a, anti-PAX5 e anti-CD3. O índice de proliferação celular foi obtido por meio da contagem de núcleos positivos para Ki-67. A metilação global do DNA dos leucócitos foi quantificada pelo método High Performance Liquid Chromatography (HPLC) e visualmente (por escores) em amostras submetidas a imunocitoquímica (ICQ) com o anticorpo anti-5-metil citosina (5MetCyt). Para a identificação de genes diferentemente metilados entre ambos os grupos avaliados, utilizou-se a técnica de beadchip com o ensaio Infinium Methylation EPIC BeadChip humano (850K). Como resultados, em ambos os métodos (HPLC e ICQ), os leucócitos sanguíneos de cães portadores de LNH apresentaram metilação global do DNA significantemente inferior à dos cães sadios (HPLC: p= 0,027 / ICQ: p= 0,015). Das 853.307 ilhas CpGs investigadas no microarranjo, houve hibridização de 34.574 sondas nas amostras caninas. Desse total, observou-se diferença significante em nível de metilação de 606 sondas, e por meio da análise das similaridades homólogas e ortólogas, identificou-se 550 genes diferentemente metilados entre os dois grupos. Nosso estudo foi pioneiro em sugerir que cães com LNH apresentam hipometilação global do DNA de leucócitos circulantes quando comparados a cães sadios. Apesar de termos usado amostras caninas em um ensaio desenvolvido especificamente para o DNA humano (Infinium Methylation EPIC BeadChip) foi possível a identificação de genes diferentemente metilados e possíveis novos alvos com potencial preventivo ou terapêutico. Futuros estudos epidemiológicos são necessários para correlacionar o padrão de metilação de leucócitos com o risco de desenvolver linfomas e utilizá-lo como biomarcador / Non-Hodgkin\'s lymphoma is quite prevalent in dogs and it is currently accepted as a comparative model for the disease in humans. Aberrant patterns of DNA methylation appear to play a key role in the development of hematopoietic tumors in humans, constitute a special mechanism of transcriptional control and may be influenced by genetic and environmental variations. The effects of methylation have been rarely investigated in dogs, especially in neoplastic processes. The aim of the current study is to quantify the global DNA methylation of blood from dogs bearing non-Hodgkin\'s lymphoma, comparing them with the methylation content and pattern of healthy dogs and identify differently methylated genes in the same samples. For this, the DNA obtained from the buffy coat of peripheral venous blood samples from 10 healthy dogs and 9 dogs with multicentric non-Hodgkin\'s lymphoma were used. For immunophenotyping of lymphomas, the immunocytochemical panel of anti-CD79a, anti-PAX5 and anti-CD3 antibodies were applied. The cell proliferation index was performed by counting positive nuclei with anti-Ki-67. The global methylation of leukocyte DNA was quantified by the High Performance Liquid Chromatography (HPLC) method and visually (by scoring) in samples subjected to immunocytochemistry (ICQ) with the anti-5-methyl cytosine antibody (5MetCyt). For the identification of differently methylated genes between both groups, the bead chip technique was used with the Infinium Methylation EPIC BeadChip human assay (850K). As a result, in both methods (HPLC and ICQ), dogs with non-Hodgkin\'s lymphoma had a lower amount of methylation than healthy dogs (HPLC: p = 0.027 / ICQ: p = 0.015). Of the 853,307 CpGs investigated in the microarray, there were 34,574 probes hybridized in the canine samples. From this total, significant difference was observed in the methylation level of 606 probes and through the homologous and orthologous similarities, 550 differently methylated genes were identified between the two groups. Our study was a pioneer in suggesting that dogs bearing non-Hodgkin\'s lymphoma presented DNA global hypomethylation of circulating leukocytes when compared to healthy dogs. Although we used canine samples in an assay developed specifically for human DNA (Infinium Methylation EPIC BeadChip) it was possible to identify differently methylated genes and possible new targets with preventive or therapeutic potential. Future epidemiological studies are needed to correlate the methylation pattern of leukocytes with the risk of developing lymphomas and to use it as a biomarker
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Expressão do complexo receptor CD74 - CD44 para o fator de inibição de migração de macrófagos (MIF) na interface materno placentária em camundongos. / MIF receptors at maternal fetal interface in mice.Martucci, Mariane Ferracin 10 May 2011 (has links)
Este estudo determinou a expressão gênica e a localização tecidual de receptores do fator de inibição da migração de macrófagos (MIF) na interface materno-placentária em camundongos aos 7,5, 10,5, 13,5 e 17,5 dias de gestação (ddg). Observou-se expressão gênica dos receptores na decídua durante todo o período estudado. CD74 e CD44 foi imunolocalizado em células deciduais, endoteliais e leucócitos, sugerindo que estas populações são presuntivos alvos do diálogo parácrino trofoblasto-decídua. No compartimento fetal, a expressão de CD74 ocorreu aos 7.5 e 17,5 ddg e de CD44, durante a gestação. RNAm dos receptores, mas não imunolocalização destes foi observada no trofoblasto aos 7,5 ddg, sugerindo mecanismos reguladores pós-transcricionais. Como a sinalização mediada por MIF requer CD74 para ativação de CD44, a baixa expressão de CD74 aos 10,5 e 13,5 ddg sugere sinalização limitada. Os resultados sugerem que a placenta fetal tem populações específicas expressando CD44-CD74 no final da gestação, o que pode ser determinante para a ativação celular mediada pelo MIF. / The study determined the gene expression and tissue localization of the macrophage migration inhibitory factor (MIF) receptors (CD74-CD44) at the maternal placental interface in mice, on gestation days (gd) 7.5, 10.5, 13.5 and 17.5. We observed the gene expression of the receptors to the decidua in all gestation days. CD74-CD44 were immunolocalized in decidual and endothelial cells and, leukocytes, suggesting these cells are presumptive targets for trophoblast-decidual paracrine dialogue. In the fetal compartment, expression of CD74 occurred on gd7.5 and 17.5 and of CD44 during all pregnancy. mRNA for both receptors, but not immunolocalization was detected on the gd7.5-trophoblast, suggesting post-transcriptional regulatory mechanism. As MIF-mediated signaling requires CD74 for activation of CD44, low expression of CD74 on gd10.5 and 13.5 suggests restriction of MIF effect. The results suggest fetal placenta has specific populations expressing CD74-CD44 in the final pregnancy, which can be a determining factor in mechanisms of cellular activation mediated by MIF.
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Interações neuro-imunes envolvidas na gênese da hipersensibilidade nociceptiva herpética e pós-herpética / Neuro-immune interactions involved in the genesis of herpetic and postherpetic nociceptive hypersensitivitySilva, Jaqueline Raymondi 28 August 2014 (has links)
Herpes Zoster é uma doença causada pela reativação do vírus Varicela Zoster nos gânglios sensoriais, caracterizada pelo desenvolvimento de lesões na pele e dor. Não há modelos animais disponíveis para estudo da patofisiologia da doença. No entanto, um modelo murino que utiliza o HSV-1 tem sido usado para tal fim, visto que os animais desenvolvem lesões zosteriformes e desenvolvem hipersensibilidade na pata infectada. Não há dados na literatura acerca da resposta imune que se desenvolve nos gânglios da raiz dorsal destes animais. Logo, o objetivo deste trabalho foi o de avaliar células e mediadores inflamatórios presentes nos gânglios da raiz dorsal e sua relação com a hiperalgesia durante a infecção cutânea por HSV-1. Durante a fase aguda da infecção, os camundongos desenvolveram hiperalgesia nas patas ipsilaterais a partir do 3 dia pós-infecção, que perdurou até o 7 dia pós-infecção. A maior carga viral foi detectada nos gânglios L4, L5 e L6, os quais compõem o nervo ciático, que inerva a área infectada. O tratamento dos animais infectados com dexametasona ou fucoidina resultou na redução do comportamento de hiperalgesia, a partir do 5 dia pós-infecção, que corresponde ao período em que a migração de leucócitos passa a aumentar nos gânglios da raiz dorsal. Macrófagos, neutrófilos e linfócitos T CD4 foram detectados nos gânglios durante a infecção aguda. No entanto, linfócitos T CD8 estavam ausentes. A expressão do mRNA de TNF- e COX-2 estava aumentada nos gânglios, e o tratamento de animais infectados com drogas inibidoras de ambos resultou na redução da hiperalgesia. Os receptores do tipo Toll-like e da IL-1 não participam da geração da hipersensibilidade herpética. Após 50 dias da infecção, constatou-se que alguns animais apresentavam comportamento de hiperalgesia irreversível, semelhante à neuralgia pós-herpética humana (NPH). Não houve diferença significativa na incidência da NPH em animais de linhagens ou sexos diferentes. Ainda, o tratamento com drogas anticonvulsivantes e antidepressivas, mas não com morfina e anti-inflamatórios, resultou na redução transiente da hiperalgesia. Neste período, não há participação da inflamação na manutenção da hiperalgesia. A expressão de TNF- e COX-2 retorna aos níveis basais, e não são mais detectados neutrófilos e macrófagos. No entanto, a migração de linfócitos T CD4+ e CD8+ aos gânglios aumenta de maneira tempo-dependente. Durante a NPH, detectou-se uma intensa ativação das células satélites gliais, que contribuem para a manutenção da hiperalgesia pós-herpética. Nossos resultados demonstram que a manutenção hiperalgesia herpética é resultado da intensa resposta inflamatória que ocorre nos gânglios da raiz dorsal infectados, com aumento da produção de TNF- e COX-2, importantes mediadores para a hipersensibilidade. No entanto, durante a neuralgia pós-herpética, não há participação de células ou mediadores inflamatórios, mas de células da glia, as quais são importantes na manutenção da hiperalgesia. / Herpes Zoster is a disease caused by reactivation of varicella zoster virus in sensory ganglia, characterized by dermal rash and pain. There are no animal models available to study the pathophysiology of the disease. A murine model of HSV-1 infection on the hind paw skin has been used to study HZ, since mice develop HZ-like skin lesions and pain-related responses. There are no data available about the immune response in dorsal root ganglion (DRG) of these mice. Thus, the aim of this study was to evaluate cells and inflammatory mediators present in DRGs and its relationship with hiperalgesia during HSV-1 cutaneous infection. During the acute phase of infection, mice developed hyperalgesia in ipsilateral paws from 3 days post-infection, which persisted until 7 days post-infection. The highest viral load was detected in ganglia L4, L5 and L6. Treatment of infected mice with fucoidin or dexamethasone resulted in the reduction of hyperalgesic behavior, from the 5th post-infection day, which corresponds to the period in which leukocyte migration increase in the dorsal root ganglia. Macrophages, neutrophils and CD4 + T lymphocytes were detected in the ganglia during acute infection. However, CD8 + T lymphocytes were absent. The mRNA expression of TNF- and COX-2 was increased in dorsal root ganglia, and the treatment of infected mice with drugs that inhibits both mediators resulted in reduced hyperalgesia. The Toll-like receptors and IL-1 does not participate in the generation of herpetic hypersensitivity. After 50 days of infection, it was found that some animals presented irreversible hyperalgesic behavior, like human post-herpetic neuralgia (PHN). There was no significant difference in the incidence of PHN in animals of different genders or strains. Furthermore, treatment with anticonvulsant and antidepressant drugs, but not morphine and anti-inflammatory, resulted in transient reduction of hyperalgesia. In this period, there is no participation of inflammation in the hyperalgesia maintenance of. The expression of TNF- and COX-2 returns to baseline levels, and neutrophils and macrophages are no longer detected. However, the migration of CD4 + and CD8 + to ganglia increases in a time-dependent manner. During NPH, an intense activation of glial cells satellites was detected, that contributes to the maintenance of post-herpetic hyperalgesia. Our results demonstrate that herpetic hyperalgesia maintenance is a result of an intense inflammatory response that occurs in the infected dorsal root ganglia, with increased production of TNF- and COX-2. However, during post-herpetic neuralgia, there is involvement of glial cells, which are important in hyperalgesia maintenance.
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Estudo do impacto da fibropapilomatose em Chelonia mydas (LINNAEUS, 1758) (Testudines, Cheloniidae) / Impact study of fibropapillomatosis in Chelonia mydas (LINNAEUS, 1758) (Testudines, Cheloniidae)Rossi, Silmara 10 August 2007 (has links)
Chelonia mydas, denominada tartaruga verde, é uma tartaruga marinha que freqüenta o litoral brasileiro para alimentação e nidificação e é considerada em perigo de extinção pela IUCN (2006). A fibropapilomatose, doença caracterizada por tumores cutâneos benignos (fibropapilomas), é uma das mais importantes ameaças à sobrevivência dessa espécie. Pesquisas sugerem o envolvimento de agentes infecciosos virais em associação com fatores ambientais e genéticos. Foram estudadas 47 tartarugas provenientes do litoral do estado de São Paulo, sendo 18 sem fibropapilomas e 29 acometidas. Dados de biometria das tartarugas, quantidade, localização e tamanho dos tumores foram anotados. O objetivo do trabalho foi avaliar a função dos leucócitos sangüíneos e o perfil hematológico das tartarugas acometidas ou não. As células receberam estímulo de Saccharomyces cerevisiae e Staphylococcus aureus para avaliação da fagocitose e miristato-acetato de forbol (PMA) para avaliação do burst oxidativo. Foram identificadas três populações celulares: heterófilos, monócitos e linfócitos. Os monócitos foram as células responsáveis pela fagocitose e pelo burst oxidativo. Animais com fibropapilomas apresentaram intensidade de burst oxidativo basal e induzido por PMA maior. No entanto, animais sem fibropapilomas apresentaram maior intensidade de fagocitose (estimulada por Saccharomyces cerevisiae). Foi realizado hemograma completo e a análise estatística demonstrou que houve diferença significativa (p<0,05), entre animais com e sem tumores, apenas para HCM (Hemoglobina Corpuscular Média) e os animais com fibropapilomatose apresentaram a menor média para esse parâmetro. A patogenia ainda é pouco elucidada, fato preocupante porque esta doença acomete muitas tartarugas jovens. Doenças relacionadas à poluição são um fator relevante para a redução populacional de animais e para o desequilíbrio dos ecossistemas. / Chelonia mydas, called green turtle, is a sea turtle that feeds and nests in brazilian coast and is considered endangered (Red List - IUCN, 2006). The fibropapillomatosis, disease characterized as benign cutaneous tumor (fibropapillomas), is a threat to Chelonia mydas. Studies suggest that fibropapillomatosis cause may be an association of virus, environmental and genetic factors. We studied 47 turtles from São Paulo north coast, twenty nine with fibropapillomas and 18 without this disease. The biometry of the turtles, quantity, localization and size of the tumors was registered. The goal of this work was to evaluate the leukocytes function and blood profile of the turtles with and without fibropapillomatosis. The cells were stimulated with Saccharomyces cerevisiae and Staphylococcus aureus to phagocytosis evaluation and phorbol miristate-acetate (PMA) to oxidative burst evaluation. Three populations cells were identified: heterophils, monocytes and lymphocytes. The monocytes were the responsible cells to phagocytosis and oxidative burst. The monocytes of the turtles with fibropapillomas displayed the higher oxidative burst fluorescence intensity (basal and stimulated).However, the monocytes of the turtles without fibropapillomas displayed the higher phagocytosis fluorescence intensity. The blood count and the statistics analysis were significant (p<0,05) only for MCH (Mean Corpuscular Hemoglobin) among turtles with and without fibropapillomas, the animals with fibropapillomatosis showed the minor average. The pathogenesis of fibropapillomatosis is still unclear and is a threat to green turtle survive because this disease affect young green turtles. Diseases related with pollution are a relevant factor for the reduction of animal population and ecosystem unbalance.
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