Made available in DSpace on 2016-04-04T12:35:27Z (GMT). No. of bitstreams: 2 rafaella_reis_ioc_mest_2014.pdf: 1575570 bytes, checksum: 5c1e218abcd29ee34857d52a4ba58b7a (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A Síndrome de Wiskott-Aldrich (WAS) é uma imunodeficiência associada a infecções recorrentes, câncer e autoimunidade. Ela é causada por mutações no gene que codifica a molécula WASP (\201CWiskott-Aldrich syndrome protein\201D), envolvida na reorganização do citoesqueleto de actina em células de origem hematopoiética. Camundongos deficientes em Wasp (WKO) apresentam migração leucocitária e proliferação linfocitária deficientes, e desenvolvem colite. Esse processo inflamatório está associado a eventos de imunodesregulação importantes, como participação exacerbada de células Th2 e diminuição de células T regulatórias (Treg) no timo e baço desses animais. Assim, esse trabalho visa caracterizar as células Treg tímicas e avaliar os mecanismos potencialmente relacionados à diminuição dessas células no timo de camundongos WKO. Nas análises de CD25 e CD122, importantes para a diferenciação de células Treg, observamos uma diminuição na expressão de CD25 na população de células CD4+CD8-Foxp3+, além de uma diminuição no número percentual dessa população. As células Treg tímicas de animais WKO apresentaram níveis normais de CD122 e de moléculas de ativação, mas mostraram uma diminuição na expressão da molécula funcional CD39, responsável pela hidrólise tecidual de ATP Saliente-se ainda que estudos sobre a morte celular ex-vivo, a transmigração in vitro mediada por S1P e a localização intratímica de células Treg não revelaram diferenças significativas na comparação entre animais WKO e seus controles. De forma interessante, precursores tímicos de células Treg CD4+CD8-CD25+Foxp3- também se apresentaram diminuídos em WKO, assim como as células Treg Helios+. Além disso, observamos um aumento importante na expressão basal de pSTAT-5 nas células Treg nos camundongos WKO e também nos precursores dessas células. Nossos resultados indicam uma participação importante da proteína Wasp no desenvolvimento de células Treg tímicas, mas apontam para a necessidade de estudos mais detalhados sobre os mecanismos envolvidos na geração deficiente de células Treg em camundongos WKO / The Wiskott - Aldrich syndrome (WAS) is an immunodeficiency associated with recurrent infections, malignancies and autoimmunity. It is caused by mutations in the gene encoding WASP (Wiskott - Aldrich syndrome protein), a molecule involved in the actin cytoskel eton rearrangements in hematopoietic cells. Wasp deficient mice (WKO) show impaired leukocyte migration and lymphocyte proliferation, and also develop colitis. This inflammatory process is associated with important immunodysregulation events, such as exac erbated participation of Th2 cells and decreased numbers of regulatory T cells (Treg) in the thymus and spleen of these animals. Thus, this study aims to characterize the thymic Treg cells and evaluate the potential mechanisms involved in the decreased num ber of these cells in the thymus of WKO mice. In the analysis of CD25 and CD122, important molecules for the differentiation of Treg cells, we observed a decreased expression of CD25 in the CD4 + CD8 - Foxp3 + cells, and a decrease in the percentage number of t his population. WKO Treg cells showed normal levels of CD122 and activation molecules, but present a decreased expression of the functional marker CD39, molecule responsible for ATP hydrolysis in the tissues. Also, it is important to point out that studies about ex vivo cell death, S1P - mediated in vitro transmigration and intratymic localization of Treg cells revealed no significant differences between WKO animals and their controls. Interestingly, both CD4 + CD8 - CD25 + Foxp3 - Treg precursors and Helios + Treg c ells are reduced in WKO thymus. More over, we also observed an important increase in the basal expression of pSTAT - 5 in Treg cells of WKO mice and their precursors. Altogether, our results indicate an important role of Wasp in thymic Treg cell development, and point to the necessity of further studies on the mechanisms involved in the generation of Treg cells in WKO mice.

Justificativa: O processo de envelhecimento está associado com o aumento demasiado na produção das espécies reativas de oxigênio (EROS). Dentre as estratégias que as células desenvolveram ao longo da evolução para combater o estresse celular, destacam-se as proteínas de choque térmico (HSP). Em especial, a HSPA1A (HSP72) é importante para recuperação de proteínas danificadas, impedindo a agregação das mesmas no citoplasma. O processo de envelhecimento parece estar associado a um declínio nos níveis das HSPs, resultando na perda do controle da proteostase, atrofia muscular, resistência à insulina e incapacidade de reparo após dano. Já é demonstrado na literatura que o exercício físico aumenta a expressão de HSPA1A, o que, possivelmente, exerce função protetora durante o envelhecimento e reduz a inflamação sistêmica clássica encontrada em idosos. Mais recentemente, tem se verificado que HSPA1A pode ser encontrada tanto dentro quanto fora das células, apresentando funções diferentes. Intracelularmente (iHSP70), apresenta função protetora, anti-inflamatória e anti-apoptótica, enquanto que no meio extracelular (eHSP70) apresenta um importante papel imunológico, com função pró-inflamatória e pró-apoptótica. Objetivos: A presente dissertação esta dividida em três partes distintas, denominados como estudos 1, 2 e 3. No primeiro estudo, o objetivo foi comparar a resposta ao choque térmico (leucócitos expostos a temperatura elevada – 42º C por 2 horas) em diferentes populações: indivíduos de meia-idade, idosos e idosos com diabetes do tipo 2. No segundo estudo, o objetivo foi verificar a influência de um protocolo de treinamento de força na relação da HSPA1A extra e intracelular em leucócitos, do dano oxidativo, das adaptações neuromusculares e morfológicas, em indivíduos de meia-idade Finalmente, no último estudo, serão mostrados dados preliminares da resposta de indivíduos idosos ao mesmo protocolo e parâmetros do estudo dois. Metodologia: No primeiro estudo os voluntários foram divididos em três grupos: Meia Idade (49,36±3,61 anos), Idosos (63,57±3,25 anos) e Idosos Diabéticos (68,9± 7,8 anos; HbA1c 7±0,67 %). Foram realizadas coletas de sangue para posterior indução ao choque térmico e avaliação da eHSP70. Nos estudos dois e três, indivíduos de meia-idade (40-59 anos) e idosos (60-75 anos), respectivamente, foram randomicamente alocados nos grupos Controle ou Treinado. O treinamento durou doze semanas com frequência de três vezes por semana. Cada sessão de treinamento incluía nove exercícios de força tanto para membros inferiores quanto superiores e três exercícios funcionais (subir um lance de escadas, sentar e levantar e subir e descer de uma caixa). Antes e após esse período foram realizadas coletas de sangue para posterior análise da HSPA1A extracelular e intracelular em leucócitos, avaliação de peroxidação lipídica (TBARS), atividade antioxidante (SOD e CAT), nitritos e do perfil lipídico. Foram realizadas avaliações de composição corporal, força e teste de consumo máximo de oxigênio Resultados: A resposta ao choque térmico (avaliada pela capacidade das células em exportar eHSP70 quando submetidas a uma temperatura elevada) parece ser igual entre indivíduos de meia-idade e idosos saudáveis. Curiosamente, em indivíduos idosos e com diabetes, esta resposta parece estar bloqueada, indicando que a resistência à insulina e o diabetes tem um papel dominante na capacidade da resposta ao estresse. Quando indivíduos de meia-idade (estudo 2) foram submetidos ao treinamento de força, os mesmos responderam com ganhos de força, melhora da capacidade funcional e aumentos na massa muscular. No entanto, a resposta ao choque térmico (eHSP70 e iHSP70) não foi modificada pelo treinamento, possivelmente pelo fato de que esta se encontrava normal. Os dados preliminares do estudo 3 mostram que, em idosos saudáveis, ocorreram ganhos de força, melhora da capacidade funcional, redução do tecido adiposo visceral (VAT) e melhora da resposta ao choque térmico após o treinamento, no entanto, considerando o baixo n amostral, essa resposta ainda deve ser confirmada em estudos posteriores Conclusão: A ausência de resposta ao choque térmico em Diabéticos está relacionada com resistência à insulina e inflamação, de modo que o treinamento de força parece ser uma alternativa eficaz para contornar esse quadro. Em relação ao efeito do treinamento, em sujeitos de Meia Idade, ele mostra-se eficaz para reduzir as chances de sarcopenia e dinapenia e possíveis doenças relacionadas ao processo do envelhecimento. Os dados preliminares em idosos saudáveis demonstram que, além de diminuir as chances de sarcopenia e dinapenia, o treinamento parece eficaz para reduzir inflamação sistêmica, visto que houve redução do VAT e aumento da resposta ao choque pós-treinamento. Este projeto é financiado pelo CNPq, Edital Universal (Processo nº 482398/2013-2). / Introduction: The aging process is associated with increase in the production of reactive oxygen species (ROS). Among the strategies that the cells developed during the evolution to counteract the cellular stress, we highlight the heat shock proteins (HSP). In particular, HSPA1A (HSP72) is important for the recovery of damaged proteins, preventing them from aggregating into the cytoplasm. The aging process appears to be associated with a decline in HSP levels, resulting in loss of proteostasis control, muscle atrophy, insulin resistance, and inability to repair after damage. It has been demonstrated in the literature that exercise increases the expression of HSPA1A, which possibly exerts protective function during aging and reduces the classical systemic inflammation found in the elderly. More recently, it has been found that HSPA1A can be found both inside and outside the cells, exhibiting different functions. Intracellularly (iHSP70), it has a protective, anti-inflammatory and anti-apoptotic function, whereas in the extracellular environment (eHSP70) it has an important immunological role, with pro-inflammatory and pro-apoptotic function. Objectives: This dissertation is divided into three distinct parts, called studies 1, 2 and 3. In the first study, the objective was to compare the response to heat shock (leukocytes exposed to high temperature - 42º C for 2 hours) in different populations: middle-aged, elderly and elderly individuals with type 2 diabetes. In the second study, the objective was to verify the influence of a resistance training protocol on the relationship of extra and intracellular HSPA1A in leukocytes, oxidative damage, neuromuscular and morphological adaptations in middle-aged individuals. Finally, in the last study, preliminary data from the response of elderly subjects to the same protocol and parameters of study two will be shown Methods: In the first study the volunteers were divided into three groups: Middle Age (49.36 ± 3.61 years), Elderly (63.57 ± 3.25 years) and Diabetic Elderly (68.9 ± 7.8 years; HbA1c 7 ± 0.67%). Blood samples were collected for further induction of heat shock and evaluation of eHSP70. In studies two and three, individuals of middle age (40-59 years) and elderly (60-75 years), respectively, were randomly assigned to the Control or Trained groups. The training lasted twelve weeks three times a week. Each training session included nine strength exercises for both lower and upper limbs and three functional exercises (climbing a flight of stairs, sitting and getting up and going up and down a box). Blood samples were collected for analysis of extracellular and intracellular HSPA1A in leukocytes, lipid peroxidation (TBARS), antioxidant activity (SOD and CAT), nitrite and lipid profile. Body composition, strength and maximal oxygen consumption tests were performed. Results: The response to heat shock (assessed by the ability of cells to export eHSP70 when submit to elevated temperature) appears to be equal between middle-aged and healthy elderly individuals. Interestingly, in elderly individuals with diabetes, this response appears to be blocked, indicating that insulin resistance and diabetes play a dominant role in the ability to respond to stress. When middle-aged individuals (study 2) underwent strength training, they responded with strength gains, improved functional capacity, and increases in muscle mass. However, the response to heat shock (eHSP70 and iHSP70) was not modified by training, possibly because the response was normal. Preliminary data from study 3 show that, in healthy elderly, strength gains, functional capacity improvement, visceral adipose tissue (VAT) reduction and improved heat shock response after training occurred, however, considering the low n sample , this response has yet to be confirmed in later studies. Conclusion: The lack of response to heat shock in diabetics is related to insulin resistance and inflammation, so resistance training seems to be an effective alternative to circumvent this condition. Regarding the training effect, in middleaged subjects, it is effective in reducing the chances of sarcopenia and dynapenia and possible diseases related to the aging process. Preliminary data in healthy older adults demonstrate that, in addition to decreasing the chances of sarcopenia and dynapenia, training seems effective in reducing systemic inflammation, since there was a reduction in VAT and increased post-training shock response. This project is funded by the CNPq, Edital Universal (Process nº 482398/2013-2).

Made available in DSpace on 2016-12-23T13:56:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TESE FINAL PDF VERSAO DOIS.pdf: 1354947 bytes, checksum: 1bc7e4f84a54161e556e8a34e37633c9 (MD5) Previous issue date: 2007-06-14 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O objetivo deste trabalho foi avaliar aspectos da resposta imune celular em pacientes portadores de FD em diferentes estágios da doença. Amostras de sangue periférico de 22 pacientes, portadores de FD, foram coletadas em três fases da doença: fase aguda, Dia 0 (até 48 horas após o início dos sintomas), fase de convalescença, Dia 7 (uma semana após a primeira coleta) e fase pós-cura, Dia 60 (60 dias após a primeira coleta). As células mononucleares do sangue periférico foram marcadas com anticorpos específicos para diferentes populações e subpopulações celulares, e marcadores de ativação, CD25, CD69 e HLA-DR. Os resultados revelaram que os pacientes portadores de FD em todas as fases da doença, mas principalmente na fase aguda, apresentaram menor número de plaquetas. Foi também observado, na fase aguda da doença, um menor número de leucócitos circulantes, com diminuição do número de neutrófilos, monócitos e linfócitos. A análise de subpopulações de linfócitos revelou que a diminuição do número dessas células era devido ao menor número de linfócitos B, T CD4+ e T CD8+. A análise de células NK mostrou que pacientes, na fase aguda da doença, apresentaram um menor número destas células mas, com uma maior porcentagem de células NK na população de linfócitos totais. Com relação ao estado de ativação das células os dados revelaram que, na fase aguda da doença, os pacientes apresentaram maior porcentagem de T CD4+ e T CD8+ expressando CD69, com aumento mais pronunciado em linfócitos T CD8+. Além disso, foi demonstrada uma maior porcentagem de linfócitos T CD4+HLA-DR+ e TCD4+CD25+, na fase aguda da doença e uma maior porcentagem de linfócitos T CD8+HLA-DR+ na fase de convalescença. A análise de associação, entre parâmetros hematológicos e o fenótipo das células mononucleares do sangue periférico com a presença de sinais e sintomas, da doença revelou que pacientes com doença mais grave apresentaram um menor percentual de linfócitos CD8+HLA-DR+ em relação aos pacientes com doença branda. Em relação aos demais parâmetros avaliados, não encontrou-se nenhuma diferença entre os dois grupos avaliados. Em suma, os dados sugerem que a resposta imune do hospedeiro é importante para a eliminação do vírus. Entretanto, estudos adicionais ainda são necessários para avaliar a influência da resposta imune na patogênese da infecção pelo vírus Dengue. / The objective of the present study was to examine the PBMC immunological status of patients with Dengue Fever during different stages of disease. Blood samples from 22 patients with Dengue Fever, were collected at three different stages of the disease: at acute phase, Day 0 (1-2 days after disease onset), convalescent phase, Day 7 (7 days after the first sample) and post-cure phase, Day 60 (60 days after the first sample). Peripheral blood mononuclear cells were stained using fluoresceinlabeled monoclonal antibodies to both PBMC subset markers and the activation markers, such as CD69, CD25 and HLA-DR, and analyzed using flow cytometry. The results have showed lower platelets count compared to control group, on the different stages of Dengue Fever. In acute phase, the white blood cells counts in patients with Dengue Fever were lower, with decreased numbers of monocytes, neutrophils and lymphocytes. The same was observed for absolute numbers of B cells, CD4+ and CD8+ T cells. The results show a lower number of NK cells on acute phase of Dengue Fever, but an increase was observed on percentage of NK cells in total lymphocytes. Concerning the activation status of the peripheral blood cells, our results have demonstrated that the percentage of CD8+ T and CD4+T cells expressing CD69 was significantly higher, and this increased was more evidenced on CD8+ T cells. Moreover was demonstrated a higher percentage of T CD4+HLA-DR+ and CD4+CD25+, on acute phase of the disease and a higher percentage of T CD8+HLA-DR+ on convalescent phase. The association analysis between the hematological parameters and the immunological status of the peripheral blood mononuclear cells with the presence of clinical manifestations of the disease has revealed that severe Dengue Fever patients presented a lower percentage of CD8+HLA-DR+ T lymphocytes, compared with the mild Dengue Fever patients. Therefore, data presented here suggest that host immune response is important to clearance viral. However, additional studies were needed to evaluate the role of immune response in the immunopathological mechanism during Dengue virus infection.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:08Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-06-30Bitstream added on 2014-06-13T18:41:44Z : No. of bitstreams: 1 pagnano_lo_dr_jabo.pdf: 626602 bytes, checksum: 91e708f2a8ad849761e7177151a3d66e (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / O objetivo deste trabalho foi avaliar o potencial de cicatrização de uma fração de proteína extraída do látex da seringueira em diferentes concentrações (0,01% e 0,001%) associada a diferentes biomateriais (Fibracol plusÒ e ácido hialurônico a 1%). Utilizaram-se 36 coelhos albinos da raça Nova Zelândia Branco submetidos à realização de 4 feridas em cada orelha. Dividiu-se o experimento em etapas de acordo com a análise do período pós-operatório (3º, 7º, 14º e 21º dias), sendo utilizados 9 animais para cada etapa. Na primeira etapa (3º dia de pósoperatório), os animais foram numerados aleatoriamente de 1 a 9, sendo que em 3 animais, nas orelhas esquerdas, as feridas foram tratadas com solução salina (T1) e nas orelhas direitas, as feridas foram tratadas com membrana de Fibracol plus® + FrHb1 a 0,01% (T2). Em outros 3 animais, realizaram-se os mesmos procedimentos, diferenciando os tratamentos, onde nas feridas das orelhas esquerdas o tratamento foi com Fibracol plus® (T3) e nas feridas das orelhas direitas Fibracol plus® + FrHb1 a 0,001% (T4). Nos 3 animais restantes, seguiram-se os mesmos procedimentos, inserindo nas feridas das orelhas esquerdas ácido hialurônico a 1% + FrHb1 a 0,01% (T5) e nas feridas das orelhas direitas ácido hialurônico a 1% + FrHb1 a 0,001% (T6). Os animais foram sacrificados no 3º dia de pós-operatório e as feridas foram analisadas macroscopicamente e em seguida separadas para a análise histológica. Estes procedimentos foram repetidos para as etapas de 7, 14 e 21 dias de pós-operatório. Os segmentos de tecidos com as feridas foram fixados em solução de Bouin por 24 horas, e processados rotineiramente, para inclusão em paraplast e posterior avaliação histológica e morfométrica. A morfometria foi realizada por meio do sistema... / The aim of this study was to evaluate the potential for healing of a fraction of protein extracted from the latex of rubber trees in different concentrations (0.01% and 0.001%) associated with various biomaterials (Fibracol plus®1 and hyaluronic acid to 1%). There were used 36 New Zealand White rabbits underwent achievement of 4 wounds on each ear. The experiment was divided into stages according to the analysis of the postoperative period (3, 7, 14 and 21 days), and 9 animals used for each step. In the first stage (day 3 post-surgery), animals were randomly numbered from 1 to 9, with 3 animals in the left ear, the wounds were treated with saline (T1) and the right ear, the wounds were treated with membrane of Fibracol plus® + FrHb1 to 0.01% (T2). In 3 other animals, the same procedures were held, differing treatments, where the wounds of the left ear they were treated with Fibracol plus® (T3) and the wounds of the right ears Fibracol Plus® + FrHb1 to 0.001% (T4). In the 3 remaining animals, there was followed by the same procedures, including the ears wounds hyaluronic acid at 1% + FrHb1 to 0.01% (T5) and right ears wounds of hyaluronic acid 1% + FrHb1 a 0.001% (T6). The animals were sacrificed at 3 days postoperatively and the wounds were examined macroscopically and then separated for histological analysis. These procedures were repeated on the steps of 7, 14 and 21 days postoperatively. The segments of the injured tissues were fixed in Bouin solution for 24 hours and routinely processed for inclusion in paraplastic and subsequent histologic and morphometric evaluation. The morphometry was performed using the image analyzing system (Image Pro-PLUS2) and the evaluation of healing was done by enumeration of leukocytes and fibroblasts. The data were subjected to statistical analysis (ANOVA and Tukey test at 5%)... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:21:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DissWMJ.pdf: 1908548 bytes, checksum: ce0f41a2d326cd2c20167496826208d6 (MD5) Previous issue date: 2004-01-22 / Universidade Federal de Minas Gerais / A síndrome de Down (SD) é a anomalia genética mais freqüente em humanos e apresenta características como retardo mental, malformações cardíacas, defeitos do sistema imunológico, risco aumentado de desenvolvimento de leucemia e doença de Alzheimer, entre outras. Seus fenótipos são causados pela trissomia total ou parcial do cromossomo 21 (CH21) e provavelmente se originam devido a um desequilíbrio dos produtos gênicos deste cromossomo. Inserido em um contexto de Genômica Funcional , o presente trabalho analisou o perfil de expressão gênica de leucócitos de portador da SD na busca de informações sobre o provável padrão molecular anômalo do transcriptoma do paciente. Para tanto, utilizou-se a técnica de Análise Serial da Expressão Gênica (SAGE). Foram listadas e analisadas diferenças entre os transcriptomas de leucócitos de indivíduos normais e de portador de SD. Verificou-se que a condição de SD comparada a não portadores apresenta baixa expressão relativa de transcritos envolvidos com o sistema imune e o metabolismo, além de transcritos ribossomais. Alguns transcritos diferencialmente expressos foram selecionados como possíveis candidatos ao envolvimento com a SD no contexto celular de leucócitos. Eles serviram também para validar os dados da SAGE. Assim, foi realizado o primeiro estudo de análise de expressão gênica em larga escala envolvendo transcriptoma de portadores de SD e utilizando a SAGE. Com isto foi disponibilizado um conjunto de dados importantes para estudos futuros que visem esclarecer a patogênese da SD.

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:36:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DissFMBT.pdf: 987220 bytes, checksum: 107f58e278ff027f5e79eec4c744b5d5 (MD5) Previous issue date: 2006-02-26 / A síndrome de Down (SD) é a anomalia genética mais freqüente em humanos e apresenta características como retardo mental, malformações cardíacas, defeitos do sistema imunológico, risco aumentado de desenvolvimento de leucemia e doença de Alzheimer, entre outras. Seus fenótipos são causados pela trissomia total ou parcial do cromossomo 21 (CH21) e provavelmente se originam devido a um desequilíbrio dos produtos gênicos deste cromossomo. Inserido em um contexto de Genômica Funcional , o presente trabalho analisou o perfil de expressão gênica de leucócitos de portador da SD na busca de informações sobre o provável padrão molecular anômalo do transcriptoma do paciente. Para tanto, utilizou-se a técnica de Análise Serial da Expressão Gênica (SAGE). Foram listadas e analisadas diferenças entre os transcriptomas de leucócitos de indivíduos normais e de portador de SD. Verificou-se que a condição de SD comparada a não portadores apresenta baixa expressão relativa de transcritos envolvidos com o sistema imune e o metabolismo, além de transcritos ribossomais. Alguns transcritos diferencialmente expressos foram selecionados como possíveis candidatos ao envolvimento com a SD no contexto celular de leucócitos. Eles serviram também para validar os dados da SAGE. Assim, foi realizado o primeiro estudo de análise de expressão gênica em larga escala envolvendo transcriptoma de portadores de SD e utilizando a SAGE. Com isto foi disponibilizado um conjunto de dados importantes para estudos futuros que visem esclarecer a patogênese da SD.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:26Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-09-21Bitstream added on 2014-06-13T20:44:55Z : No. of bitstreams: 1 dagnone_as_dr_jabo.pdf: 2655933 bytes, checksum: 8f6122da8b67a36f40a31689501140e2 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Este estudo foi realizado objetivando-se detectar e identificar a presença de material genômico de agentes pertencentes à Família Anaplasmataceae em 55 cães com inclusões citoplasmáticas encontrados em células leucocitárias granulocíticas, monocíticas e plaquetas, compatíveis com infecção por Ehrlichia canis, E. chaffeensis, E. ewingii, A. phagocytophilum, A. platys ou Neorickettsia risticii. A ocorrência natural de Babesia canis também foi avaliada pois vetor Rhipicephalus sanguineus, é o principal carrapato encontrado em cães no Brasil. Também objetivou-se realizar, através da utilização de técnicas de Seqüenciamento de um fragmento do gene 16S rRNA, a caracterização parcial dos fragmentos das amostras positivas encontradas neste estudo, e comparar as seqüências dos fragmentos obtidos com as seqüências apresentadas previamente no GenBank, iniciando a realização de estudos filogenéticos das seqüências encontradas. Amostras de sangue foram colhidas de 25 e 30 cães atendidos nos Hospitais Veterinários da Universidade Estadual Paulista-Unesp, Câmpus de Jaboticabal-SP e Universidade para o Desenvolvimento do Estado e da região do Pantanal-UNIDERP, Campo Grande- MS, respectivamente. Dentre as inclusões citoplasmáticas encontradas neste estudo foi observado uma grande diversidade na morfologia, tamanho, coloração e localização das inclusões. DNA de agentes Família Anaplasmataceae foram detectados em 45/55 das amostras sangüíneas examinadas (81,8%), sendo destas 32 (58,18%) e 13 (23,63%) positivas para Ehrlichia canis e Anaplasma platys, respectivamente. Dez animais que foram incluídos neste estudo por apresentarem inclusões citoplasmáticas foram negativos quando uma segunda confecção de esfregaço de papa leucocitária corada pelo Giemsa foi realizada, e também... / The aim of this study was to evaluate the natural occurrence of Anaplasmataceae agents (Ehrlichia canis, E. chaffeensis, E. ewingii, A. phagocytophilum, A. platys and Neorickettsia risticii) using molecular techniques. For this purpose a group of fifty-five supposedly infected dogs from two different Brazilian states (São Paulo and Mato Grosso do Sul) that showed suggestive Anaplasmataceae agent intracitoplasmic inclusions in white blood cells and platelets were analysed. The natural occurrence of Babesia canis was also evaluated, because its vector is also Brazilian dog tick, Rhipicephalus sanguineus. Sequencing of a partial phragment of 16S rRNA gene from the positive samples were performed to conduct phylogenetic study. The evaluated blood cells of the studied dog population displayed a wide variety in shapes, sizes, stain pattern and localization of the inclusions. Anaplasmataceae DNA were amplified in 45/55 (81.8%) examined blood samples. Thirty-two samples were positive for E. canis (58.18%) and thirteen for Anaplasma platys (23.63%). Ten animals were negative by PCR and an analyses of a second Buffy coat smear. The obtained nucleotide sequences were analysed for similarity of the 16S rRNA gene sequence using Blast with other sequences available in the GenBank database. The sequences obtained from E. canis positive were closely related to E. canis from Spain (Acession number AY 394465) presenting an identity percentage of between 94.82% and 99.67%. Sequences from Anaplasma sp and Anaplasma platys positive samples were closely related to A. platys from Venezuela (Genbank Acession number AF 399917) presenting an identity betwwen 96.52% and 99.69%, and A. platys from Spain (Genbank Acession number AY 530 806\0 presenting... (Complete abstract, click electronic access below)

Made available in DSpace on 2015-04-09T12:28:26Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-24Bitstream added on 2015-04-09T12:47:34Z : No. of bitstreams: 1 000811235.pdf: 1201122 bytes, checksum: 960bb25216fc143f12cb2f974cbd4170 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / A inflamação é o principal fator contribuinte para inúmeras desordens oculares, podendo levar à cegueira e, em geral, são os glicocorticoides os medicamentos frequentemente administrados. No entanto, os efeitos adversos desses fármacos, limitam os seus usos. A proteína endógena galectina-1 (Gal-1) é capaz de controlar o processo de transmigração e apoptose dos leucócitos, contribuindo para a homeostase da reação inflamatória. No entanto, a expressão da Gal-1 em tecidos oculares normais e inflamados tem sido pouco estudada. Investigar a expressão e o mecanismo de ação da proteína endógena Gal-1 nos tecidos oculares de ratos na uveíte induzida por endotoxina (EIU) e o efeito anti-inflamatório da administração da galectina-1 recombinante (rGal-1). Ratos machos (Rattus norvegicus) foram anestesiados e inoculados na pata direita com lipopolissacarídeo (LPS) (1mg/Kg) para o desenvolvimento da uveíte e, após, divididos nos seguintes grupos experimentais (n=12/grupo): EIU 24 e 48h; EIU 24h e tratamento intraperitoneal com rGal-1 (3μg/animal), 15 minutos após o LPS. O sangue foi coletado para detecção da porcentagem de leucócitos polimorfonucleares positivos para as moléculas de adesão L-selectina (CD62L) e β2-integrina (CD11b), por citometria de fluxo. No humor aquoso (HA) foram quantificadas as células inflamatórias pela câmara de Neubauer. Os olhos, após enucleação, foram processados para análises histopatológicas, dosagens dos níveis das citocinas MCP-1, IL-1β, TNF-α, IL-6 e IL-10 por painéis Milliplex MAP e análises da expressão da Gal-1 endógena por imuno-histoquímica e Western blotting. A EIU 24h provocou sinais esperados de inflamação, incluindo intenso recrutamento de neutrófilos (Nɸs) nos tecidos oculares, HA e sangue, e liberação de citocinas pró-inflamatórias. O tratamento com rGal-1 atenuou os efeitos ocorridos na EIU por meio da inibição do infiltrado de Nɸs nos tecidos oculares ... / Inflammation is the main contributing factor for many eye disorders, and may lead to blindness and, in general, glucocorticoids are the drugs frequently administered. However, the side effects of these drugs limit their use. Endogenous protein galectin-1 (Gal-1) is able to control the process of apoptosis and transmigration of leukocytes, contributing to the homeostasis of inflammation. However, the expression of Gal-1 in normal and inflamed ocular tissues has been little studied. Investigate, in vivo, the expression and mechanism of action of endogenous protein Gal-1 in ocular tissues of rats in endotoxin-induced uveitis (EIU), and anti-inflammatory effect of administration of recombinant galectin-1 (rGal-1). Male rats (Rattus norvegicus) were anesthetized and inoculated in the right footpad with lipopolysaccharide (LPS) (1mg/kg) for developing uveitis, and after it divided into the following experimental groups (n=12/group): EIU 24 and 48h; EIU for 24h and treated intraperitoneally with rGal-1 (3μg/animal), 15 minutes after LPS. Blood was collected for detecting the percentage of positive cells for the adhesion molecules L-selectin (CD62L) and β2-integrin (CD11b) in polymorphonuclear leukocytes (PMNs), by flow cytometry. Inflammatory cells was quantified in aqueous humor (AqH) in the Neubauer chamber. After enucleation, the eyes were processed for histopathological analysis, dosage levels of MCP-1, IL-1β, TNF-α, IL-6 and IL-10 cytokine by panels Milliplex MAP and analysis of the expression of endogenous Gal-1 by immunohistochemistry and Western blotting. EIU 24h provoked expected signals of inflammation, including intense recruitment of neutrophils (Nɸs) in ocular tissues, AqH and blood, and release of proinflammatory cytokines. Treatment with rGal-1 attenuated the effects occurring in the EIU by inhibiting the infiltration of Nɸs in eye tissues and the AqH, percentage decreased of CD62L+ cells and, also, suppressing the ... / FAPESP: 2012/02759-1

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:56Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-12-13Bitstream added on 2014-08-13T17:59:59Z : No. of bitstreams: 1 000768012.pdf: 1144331 bytes, checksum: d3f7c1114ef80b0385803a9abbad76d5 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Objetivo: Analisar a composição corporal, contagem leucocitária e concentração circulante de adipocinas de adolescentes obesos treinados, submetidos a 20 semanas de treinamento concorrente, e não treinados de ambos os gêneros. Metodologia: Amostra composta por 22 adolescentes, com idade média de 12,7 anos (DP=1,68), classificados como obesos. Realizou-se avaliação de composição corporal por meio da antropometria, densitometria óssea e ultrassonografia, além de leucograma completo e análises de concentrações circulantes de adipocinas. A amostra foi distribuída em grupo controle e grupo treinamento, sendo realizada a intervenção por meio do treinamento concorrente com duração de uma hora/aula. Realizou-se as análises estatísticas por meio da Análise descritiva, Teste t de student pareado, Anova fatorial, correlação de Pearson e regressão linear utilizando o programa SPSS, versão 17.0, e a significância de p<0,05. Resultados: Após intervenção houve modificações significativas na composição corporal, entretanto não observou-se alterações nas variáveis sanguíneas. Há correlações entre sexo e percentual de gordura total e no tronco, massa magra total e na região androide, além disso, sexo somado ao treinamento possui relação com massa corporal total, massa de gordura total, tecidos da região androide (massa magra, gordura e tecido), gordura intra-abdominal e monócitos. A concentração de TNF-α correlacionou-se com a idade, peso, massa de gordura, massa magra e gordura subcutânea e ao aplicar as variáveis de composição corporal em uma regressão linear todas as variáveis mantiveram interação com o TNF-α, entretanto, quando ajustado por idade, peso e sexo, apenas a massa de gordura e massa magra. Em relação à contagem leucocitária apenas a IL-6 correlacionou-se com os linfócitos e manteve-se na modelo de regressão. Conclusão: Adolescentes obesos submetidos ao treinamento concorrente... / Objective: To analyze the effects of 20 weeks of concurrent training in body composition, concentrations of pro and anti-inflammatory adipokines and leukocyte of obese adolescents of both genders. Methods: The sample consisted of 22 adolescents, with a mean age of 12.7 years (SD = 1.68), classified as obese. Assessment of body composition was performed by means of anthropometry, DEXA and ultrasound, and to assess the concentration of leukocytes and adipokines made biochemical analyzes. The sample was divided into control group and training group. The intervention group was training through the concurrent training, comprising 50 % of the time aerobic exercise and 50 % of the time resistance exercise, during 1 hour/session. Statistical analyzes (descriptive analysis, paired Student t test, Anova factorial, Pearson correlation and linear regression) were performed using SPSS, version 17.0, and statistical significance set at p<0,05. Results: After intervention there were significant changes in body composition, however not observed changes in blood variables. There is correlation between sex and percentage of total and trunk fat and total and android region of lean mass, moreover, the training has added sex ratio with total body mass, total fat mass, android region tissues (lean mass, fat mass and tissue), intra-abdominal fat and monocytes. The concentration of TNF-α correlated with age, weight, fat mass, lean mass and subcutaneous fat and to apply the body composition variables in a linear regression all variables maintained interaction with TNF-α, however, when adjusted for age, weight and sex, only fat mass and lean mass. Regarding the leukocyte count only IL-6 was correlated with cells and remained on the regression model. Conclusion: Obese adolescents submitted to concurrent training presented significant changes in body composition, however, do not change the leukocyte counts. Moreover, body composition variables, particularly fat...

Orientador: Aureo Evangelista Santana / Banca: Andrigo Barboza de Nardi / Banca: Ana Paula Massae Nakage Canesin / Banca: Paola Castro Moraes / Banca: Rosemeri de Oliveira Vasconcelos / Resumo: O presente estudo teve como objetivos avaliar seqüencial e temporalmente o quadro leucocitário de dez cães portadores de linfoma em remissão, submetidos à alta dose de ciclofosfamida, durante o uso do estimulador de colônia de granulócitos (GCSF, filgrastine) seguido ou não do transplante autólogo de medula óssea (TMO), bem como quantificar células CD34+ no sangue periférico dos referidos cães. Para tal avaliação foram utilizados três grupos experimentais, sendo o grupo 1 (G1) formado por cinco animais em remissão de linfoma que passaram por alta dose de ciclofosfamida e TMO seguido do uso de G-CSF; o grupo 2 (G2) formado por cinco animais em remissão de linfoma que sofreram alta dose de ciclofosfamida seguida do uso de G-CSF e o grupo 3 (G3) formado por dez animais saudáveis que receberam apenas o G-CSF. O transplante consistiu na colheita de medula óssea, preparo e congelamento da bolsa que continha células medulares em suspensão, condicionamento do paciente com 500mg/m2 de ciclofosfamida, infusão das células hematopoéticas e aplicação do G-CSF. Para avaliar a recuperação hematopoética pós-transplante foi realizado leucograma e análise citométrica do sangue nos dias 7, 8, 9, 10 e 11 após condicionamento. O nadir médio dos neutrófilos segmentados (NS) no grupo com transplante de medula óssea (G1) foi 425 NS/mL, e no grupo sem TMO (G2) foi 637,4 NS/μL e ocorreu sete dias após alta-dose de quimioterápico em ambos os grupos. A duração média da neutropenia foi de três dias. Nenhum animal apresentou febre ou sepse após a alta dose de ciclofosfamida. A dose de 5μg/kg/dia durante quatro dias de filgrastine foi insuficiente na mobilização adequada de células CD34+ nos três grupos estudados, sendo necessários novos estudos para este propósito. Desta maneira, pode-se comprovar o fato de que o uso do G-CSF leva a reduções significativas na incidência... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aims of this research were to provide an analysis of several counts of leucocytes values in dogs with lymphoma in remission phase, undergone to high-dose chemotherapy with cyclophosphamide, during treatment with granulocyte colonystimulating factor (G-CSF, filgrastine), followed or not by autologous bone marrow transplantation (BMT), as well to quantify CD34+ cells of peripheral blood from that dogs. For this purpose, three experimental groups were considered. Five dogs in clinical remission undergone to high-dose chemotherapy with cyclophosphamide and BMT, followed by G-CSF use were included in group 1 (G1), while group 2 (G2) was consisted by five dogs undergone to high-dose chemotherapy with cyclophosphamide, followed by G-CSF. Group 3 (G3) was composed of ten healthy dogs undergone to GCSF only. Transplantation consisted of bone marrow harvest, managing and freezing bags containing lifted marrow cells, cyclophosphamide conditioning (500mg/m2), hematopoietic cells infusion and treatment with G-CSF. After transplantation, hematopoietic recovery was evaluated by means of leukograms and flow cytofluorimetrical analysis on days 7, 8, 9, 10 and 11 after conditioning. Mean nadir neutrophil (NS) counts in group undergone transplantation (G1) was 425 NS/mL versus 637,4 NS/μL in group without BMT (G2). Nadir was observed on the seventh day after high-dose chemotherapy in both groups and neutropenia mean time was three days. Fever or sepsis was not observed in any dog after high-dose cyclophosphamide. Four days of filgrastine treatment in dose of 5μg/Kg, daily, was not enough to mobilize CD34+ cells appropriately in three groups analyzed, requiring new studies for this purpose. Considering these results, it is possible to conclude that G-CSF significantly reduces the incidence, severity and duration of neutropenia / Doutor