Unidad de práctica para optar al título de Químico y Farmacéutico / La Leucemia Linfoblástica Aguda (LLA) es la neoplasia más común en edad pediátrica. Los pacientes clasificados en alto riesgo serán expuestos a tratamientos agresivos, una de las drogas que será administrada será metotrexato, justo después de terminada la fase de inducción. Esta droga presenta una excelente eficacia en el tratamiento de LLA-RA, pero también va asociado a una gran posibilidad de apariciones de efectos secundarios. Es por esto que en la actualidad los esfuerzos están puestos en poder hacer los medicamentos mucho más eficientes y seguros. Este estudio retrospectivo se realizó recopilando los niveles plasmáticos en hora 24 y hora 42, después de iniciada la infusión de metotrexato altas dosis en pacientes que fueron atendidos en la unidad de oncología del HLCM entre los años 2011 y 2014. Con los niveles plasmáticos de cada hora se trataron de relacionar con posibles efectos secundarios, especialmente el relacionado con el deterioro renal. Este estudio pudo establecer que la concentración plasmática en hora 42 es un buen predictor. Ya que se estableció que al estar este valor en el rango considerado como seguro los pacientes presentaron tiempos de hospitalización menores. Aunque no fue posible establecer una relación clara entre los valores plasmáticos de metotrexato y la aparición de un deterioro renal agudo

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Programa de Pós-Graduação em Saúde Animal, 2013. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2013-06-11T14:21:24Z No. of bitstreams: 1 2013_FlaviaAzevedoCavalcantideMelo.pdf: 964407 bytes, checksum: 9986b138d5f3ea1d005ba1fadea4d05d (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2013-06-12T11:34:48Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_FlaviaAzevedoCavalcantideMelo.pdf: 964407 bytes, checksum: 9986b138d5f3ea1d005ba1fadea4d05d (MD5) / Made available in DSpace on 2013-06-12T11:34:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_FlaviaAzevedoCavalcantideMelo.pdf: 964407 bytes, checksum: 9986b138d5f3ea1d005ba1fadea4d05d (MD5) / Sendo a leucemia viral felina (FeLV) uma doença complexa que afeta, principalmente o sistema imunológico e hematológico do gato, o objetivo desse estudo foi quantificar as alterações morfológicas no timo e baço de animais naturalmente infectados e negativos. Para avaliação do timo, foram quantificados os timócitos, tecido adiposo, corpúsculos tímicos, tecido conjuntivo, colágeno tipo I e colágeno tipo III. Nesse caso, foram utilizados cinco animais no grupo de animais negativos (Gc) e dois animais positivos (Gd). Os timócitos nos animais FeLV negativos (Gc) e positivos (Gd) variou em média de 55,16%±6,15 e 44,81%±6,15 (p=0,39); os adipócitos variaram em média de 42,14%±5,97 (Gc) e 53,42%±11,3 (Gd) (p=0,34); os vasos sanguíneos variaram de 0,85%±0,24 (Gc) e 1,75%±0,52 (Gd) (p=0,15); os corpúsculos tímicos estiveram apenas presentes em 0,68%±0,19 dos animais negativos (Gc). O tecido conjuntivo variou de 12,05%±0,68 (Gc) e de 10,34%±0,62 (Gd) (p=0,009). A presença do colágeno tipo I (p=0,30) e do tipo III (p=0,59) foi de, respectivamente, 1,73%±0,3 e 0,44%±0,09 no Gc e, 1,44%±0,36 e 0,44%±0,13 no Gd. Para o estudo do baço, foram quantificados a polpa vermelha, a polpa branca e o tecido conjuntivo; foram utilizados cinco animais no grupo negativo (Gc) e quatro animais do grupo positivo (Gd). O peso e o volume dos baços dos animais variou em média, respectivamente, de 9,44g±1,96 e 10ml3±2,58 no Gc e de 17,83g±10,66 e 17,25ml3±10,92 no Gd, ambos os dados foram estatisticamente significativos. A polpa vermelha nos animais FeLV negativos (Gc) e positivos (Gd) variou em média de 73,08%±3,13 e 73,85%±4,53 (p=0,39); a polpa branca de variou em média de 6.02%±2,02 no Gc e 8,38%±2,92 no Gd (p=0,34); o tecido conjuntivo variou em média de 13, 28%±1,69 no Gc e de 12,11%±2,51 no Gd. Em ambos os casos, apenas a quantificação de corpúsculos tímicos e o peso dos baços tiveram diferença estatística entre os grupos; nos demais dados não houve diferença, demonstrando que a infecção pela FeLV não foi capaz de alterar a arquitetura normal dos órgãos estudados. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Being the viral feline leukemia virus (FeLV) a complex disease that affects mostly the immune and hematologic system of the cat, the aim of this study was to quantify morphological changes in the thymus and spleen of cats positives and negatives. For evaluation of the thymus were quantified thymocytes, adipose tissue, thymic corpuscles, connective tissue, collagen type I and type III. In this case, were used five animals at group control (Gc) and two animals at diseased group (Gd). The thymocytes at negative FeLV animals (Gc) and positives (Gd) differ on the average of 55,16% ±6.15 to 44.81% ±6.15 (p=0.39); the adipocytes differ from 42.14%±5.97 (Gc) to 53.42%±11.3 (Gd) (p=0.34); the blood vessels changed from 0.85%±0.24 (Gc) to 1.75%±0.52 (Gd) (p=0.15); the thymic corpuscles were detected only 0.68%±0.19 at negatives animals (Gc). The connective tissue changed from 12.05%±0.68 (Gc) to 10.34%±0.62 (Gd) (p=0.009). Collagen presence type I (p=0.30) and type III (p=0.59) were, respectively from 1.73%±0.3 to 0.44%±0.09 at Gc and from 1.44%±0.36 to 0.44%±0.13 at Gd. To spleen study, were quantified red pulp, white pulp and connective tissue; were used five animals in negative group (Gc) and four animals in positive group (Gd). The weight and volume of the spleens of the animals differ on the average of, respectively, 9.44g±1.96 and 10ml3±2.58 and the Gc and 17.83g±10.66 17.25 ml3±10.92 in Gd, both were statistically significant. The red pulp in FeLV negatives animals (Gc) and positives (Gd) differ on the average of 73.08%±3.13 and 73.85%±4.53 (p=0.39); the white pulp varied average of 6.02%±2.02 and in Gc 8.38%±2.92 in Gd (p=0.34), connective tissue changed from 13.28%±1.69 in Gc and 12.11%±2.51 in Gd. In both cases, only the quantification of thymic corpuscles and the weight of spleens had a statistical difference between groups; the other data were no difference, demonstrating that infection by FeLV was unable to modify the normal architecture of the organs studied.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Ciências Médicas, 2013. / Submitted by Jaqueline Ferreira de Souza (jaquefs.braz@gmail.com) on 2013-11-12T13:47:22Z No. of bitstreams: 1 2013_SteniaGoncalvesMagalhaes_Parcial.PDF: 33635 bytes, checksum: c1ca8c430aea7ee69607855309d66338 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2013-11-20T13:20:28Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_SteniaGoncalvesMagalhaes_Parcial.PDF: 33635 bytes, checksum: c1ca8c430aea7ee69607855309d66338 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-11-20T13:20:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_SteniaGoncalvesMagalhaes_Parcial.PDF: 33635 bytes, checksum: c1ca8c430aea7ee69607855309d66338 (MD5) / A leucemia é um grupo heterogêneo de neoplasias hematológicas resultante de várias alterações genéticas. A análise das alterações cromossômicas em pacientes com leucemia tem uma aplicação direta no diagnóstico, prognóstico e tratamento. Além disso, o estudo da expressão gênica oferece uma importante fonte para compreender as consequências moleculares das alterações genéticas em leucemia. Os objetivos desse trabalho foram: (a) identificar a presença de alterações cromossômicas em pacientes ao diagnóstico com hipótese de LLA B, LMA e LMC atendidos no Hospital de Base do Distrito Federal, possibilitando a incorporação do protocolo de diagnóstico molecular; (b) analisar o perfil da expressão do gene SIDT1 em amostras clínicas leucêmicas ao diagnóstico, linhagens de células leucêmicas e em indivíduos não leucêmicos. Deste modo, a detecção das alterações cromossômicas foi realizada em 48 amostras com suspeita de leucemia. As alterações cromossômicas recorrentes detectadas foram: BCR-ABL1, p190 (1), E2A-PBX1 (1), PML-RAR_ (2) e BCR-ABL1, p210 (9). A análise quantitativa da expressão do gene SIDT1 foi realizada em 80 amostras a partir de três grupos de pacientes leucêmicos (LLA, LMA e LMC) antes de iniciar o tratamento, sete linhagens de células leucêmicas (697, RS4, 11, Nalm-6, Jurkat, REH, HL-60 e K562) e amostras de indivíduos não leucêmicos, as quais foram utilizadas como controle. Os resultados da análise demonstraram que o gene SIDT1 foi regulado negativamente nas sete linhagens de células leucêmicas humanas analisadas, principalmente para as linhagens de células 697, REH e HL-60 quando comparado com as amostras não leucêmicas. A linhagem celular K562 não apresentou qualquer expressão do gene SIDT1. Nas amostras clínicas analisadas também foi observado que o gene SIDT1 foi regulado negativamente principalmente na LMA. O estudo das alterações cromossômicas possibilitou incorporar a metodologia de diagnóstico molecular no Hospital de Base do Distrito Federal, como exame de rotina dos pacientes com suspeita de leucemia para auxiliar na avaliação dos pacientes. Estudos futuros são necessários para compreender a desregulação do gene SIDT1 ocasionada por diferentes tipos de alterações cromossômicas. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Leukemia is a heterogeneous group of hematologic malignancies resulting from multiple genetic alterations. The analysis of chromosomal abnormalities in leukemia patients has a direct application in the diagnosis, prognosis and treatment. Furthermore, the study of gene expression provides an important source for understanding the molecular consequences of genetic alterations in leukemia. The aims of this study were: (a) to identify the presence of chromosomal abnormalities in patients with a presumptive diagnosis of B ALL, AML and CML treated at Hospital de Base do Distrito Federal, enabling the incorporation of molecular diagnostic protocol; (b) to analyze the expression profile of SIDT1 gene in clinical samples of leukemia patients at diagnosis, leukemic cell lines and in non-leukemic. Therefore, the detection of chromosomal abnormalities was performed on 48 samples of suspected leukemia. The recurrent chromosomal alterations were detected: BCR-ABL1, p190 (1), E2A-PBX1 (1), PML-RAR_ (2) and BCR-ABL1, p210 (9). Quantitative analysis of SIDT1 gene expression was performed in 80 samples from three groups of leukemia patients (ALL, AML and CML) before starting treatment, seven lines of leukemic cells (697, RS4, 11, Nalm-6, Jurkat, HEK, HL-60 and K562) and non-leukemic samples from individuals, which were used as controls.. The analysis results showed that the SIDT1 gene is negatively regulated in the seven human leukemia cell lines examined, especially for cell lines 697, HL-60 and REH when compared to the non-leukemic samples. The K562 cell line showed no expression of the SIDT1 gene. SIDT1 gene has also been observed to be negatively regulated in the samples, especially in AML. The study of chromosomal abnormalities allowed to incorporate the molecular diagnostics methodology in the Hospital de Base do Distrito Federal, as a routine examination for patients with suspected leukemia to assist in the evaluation of patients. Future studies are needed to understand the dysregulation of SIDT1 gene caused by different types of chromosomal alterations.

Submitted by Irene Nascimento (irene.kessia@ufpe.br) on 2015-05-21T18:13:44Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação - Matheus Filgueira Bezerra.pdf: 1273109 bytes, checksum: 6d941505fbd1fa66ae0aee92822b04dd (MD5) / Made available in DSpace on 2015-05-21T18:13:44Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação - Matheus Filgueira Bezerra.pdf: 1273109 bytes, checksum: 6d941505fbd1fa66ae0aee92822b04dd (MD5) Previous issue date: 2014-11-19 / Capes / Leucemia mielóide aguda (LMA) é uma doença de caráter multifatorial e heterogênea. Alterações somáticas no código genético recorrentes na LMA são causadas principalmente por agentes químicos e físicos nocivos ao DNA, associados a falhas nos sistemas de reparo. Pesquisas realizadas na última década sugerem que metilação aberrante e polimorfismos genéticos em genes supressores tumorais e genes do metabolismo de radicais livres podem estar envolvidos na leucemogênese. O presente estudo teve como objetivo investigar a associação entre polimorfismos nos genes TP53 codon 72, GSTT1, GSTM1 e hipermetilação da região promotora do gene BRCA1 com a leucemia mielóide aguda. Duzentos e vinte e três pacientes adultos diagnosticados com LMA e 202 indivíduos adultos são (controles) foram genotipados para polimorfismos no TP53, GSTT1 e GSTM1 e 55 pacientes com AML de novo foram avaliados para metilação no BRCA1. As frequências observadas para o TP53 foram: 33,6% ARG/ARG, 44,4% ARG/PRO e 22% PRO/PRO nos pacientes e 38,3% ARG/ARG, 48,5 ARG/PRO e 12,8% PRO/PRO nos controles. O alelo PRO foi associado à susceptibilidade ao desenvolvimento de LMA no modelo genético recessivo (p=0.0198), no co-dominante (p=0.0291) e no alélico (p=0.0438). O polimorfismo do GSTT1 foi observado em 23% dos pacientes e em 27% dos controles (p=0,297). O polimorfismo do GSTM1 foi observado em 45% dos pacientes e em 43% dos controles (p=0,573) e a co-ocorrência dos dois polimorfismos foi observada em 12% dos casos e 8,5% dos controles (p=0.286). Nenhuma associação foi encontrada entre os polimorfismos nos genes GSTs e LMA. O gene BRCA1 não foi encontrado hipermetilado em nenhum dos 55 pacientes analisados. Os resultados do presente estudo apontam que o polimorfismo do TP53 parece favorecer a leucemogênese. Em contrapartida, os polimorfismos no GSTT1, GSTM1 e metilação do BRCA1 parecem não ter relevância na leucemia mielóide aguda.

Submitted by Irene Nascimento (irene.kessia@ufpe.br) on 2015-05-21T18:40:29Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação - Matheus Filgueira Bezerra.pdf: 1273109 bytes, checksum: 6d941505fbd1fa66ae0aee92822b04dd (MD5) / Made available in DSpace on 2015-05-21T18:40:29Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação - Matheus Filgueira Bezerra.pdf: 1273109 bytes, checksum: 6d941505fbd1fa66ae0aee92822b04dd (MD5) Previous issue date: 2014-11-19 / CAPES / Leucemia mielóide aguda (LMA) é uma doença de caráter multifatorial e heterogênea. Alterações somáticas no código genético recorrentes na LMA são causadas principalmente por agentes químicos e físicos nocivos ao DNA, associados a falhas nos sistemas de reparo. Pesquisas realizadas na última década sugerem que metilação aberrante e polimorfismos genéticos em genes supressores tumorais e genes do metabolismo de radicais livres podem estar envolvidos na leucemogênese. O presente estudo teve como objetivo investigar a associação entre polimorfismos nos genes TP53 codon 72, GSTT1, GSTM1 e hipermetilação da região promotora do gene BRCA1 com a leucemia mielóide aguda. Duzentos e vinte e três pacientes adultos diagnosticados com LMA e 202 indivíduos adultos são (controles) foram genotipados para polimorfismos no TP53, GSTT1 e GSTM1 e 55 pacientes com AML de novo foram avaliados para metilação no BRCA1. As frequências observadas para o TP53 foram: 33,6% ARG/ARG, 44,4% ARG/PRO e 22% PRO/PRO nos pacientes e 38,3% ARG/ARG, 48,5 ARG/PRO e 12,8% PRO/PRO nos controles. O alelo PRO foi associado à susceptibilidade ao desenvolvimento de LMA no modelo genético recessivo (p=0.0198), no co-dominante (p=0.0291) e no alélico (p=0.0438). O polimorfismo do GSTT1 foi observado em 23% dos pacientes e em 27% dos controles (p=0,297). O polimorfismo do GSTM1 foi observado em 45% dos pacientes e em 43% dos controles (p=0,573) e a co-ocorrência dos dois polimorfismos foi observada em 12% dos casos e 8,5% dos controles (p=0.286). Nenhuma associação foi encontrada entre os polimorfismos nos genes GSTs e LMA. O gene BRCA1 não foi encontrado hipermetilado em nenhum dos 55 pacientes analisados. Os resultados do presente estudo apontam que o polimorfismo do TP53 parece favorecer a leucemogênese. Em contrapartida, os polimorfismos no GSTT1, GSTM1 e metilação do BRCA1 parecem não ter relevância na leucemia mielóide aguda.

Submitted by Isaac Francisco de Souza Dias (isaac.souzadias@ufpe.br) on 2016-03-04T18:42:09Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) BARBORA JM. TESE DOUTORADO. 2015. CORREÇÃO6.pdf: 2119998 bytes, checksum: f5d1a53f68d4c45b66f765da723a127a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-04T18:42:09Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) BARBORA JM. TESE DOUTORADO. 2015. CORREÇÃO6.pdf: 2119998 bytes, checksum: f5d1a53f68d4c45b66f765da723a127a (MD5) Previous issue date: 2015-05-20 / No Brasil, os registros de câncer de base populacional mostram uma incidência de câncer infantil de 154,3 casos por milhão, dos quais as leucemias respondem pelo maior percentual. Dentre as leucemias, a leucemia linfóide aguda (LLA) corresponde a cerca de 80% dos casos e até metade do século passado era considerada uma doença fatal. Graças ao melhor conhecimento da doença, a introdução de novas drogas com protocolos terapêuticos adequados e ao melhor tratamento de suporte, tornou-se uma doença curável. Contudo, os avanços terapêuticos resultaram em um número cada vez maior de sobreviventes e de efeitos a longo prazo na saúde e na qualidade de vida desta população. O excesso de peso é um dos efeitos colaterais mais bem documentados e uma série de mecanismos etiológicos foram propostos, incluindo características relacionadas ao paciente e ao tratamento. No entanto, ainda não está claro quais os fatores associados ao excesso de peso e ao ganho de peso durante o tratamento entre pacientes tratados com protocolos terapêuticos mais modernos bem como entre aqueles tratados em regiões com recursos limitados. Desta forma, o presente estudo teve como principal objetivo analisar a frequência de excesso de peso e o incremento do índice de massa corporal-para-idade (IMC/I) durante o tratamento, assim como os fatores associados em sobreviventes de LLA tratados em centro de referência do Nordeste do Brasil. Este foi um estudo retrospectivo do tipo série de casos, com dados do diagnóstico ao follow-up, realizado com 210 pacientes tratados conforme o protocolo LLA–Recife–2005, entre agosto de 2005 e outubro de 2013. Dados clínicos e antropométricos foram coletados do prontuário eletrônico e o diagnóstico nutricional realizado a partir do escore Z do índice Altura-para-Idade (ZA/I) e do escore Z do IMC/I (ZIMC/I), segundo Organização Mundial de Saúde. Considerou-se baixa estatura ZA/I < 2 desvios-padrão e excesso de peso ZIMC/I > 1 desvio-padrão. O modelo de regressão logística foi construído para examinar os potenciais preditores de excesso de peso em dois pontos: (1) término do tratamento; (2) no último follow-up. Os resultados demonstraram 24,3% de excesso de peso ao diagnóstico com tendência ao aumento durante e após tratamento. Em todas as fases a média de ZIMC foi superior à referência, com incremento importante na fase de indução e de manutenção. Excesso de peso no baseline e grupo de risco da LLA mostraram-se independentemente associados ao excesso de peso ao término, enquanto excesso de peso ao baseline e crescimento linear associados ao excesso de peso no follow-up. Houve contribuição do ZIMC/I do diagnóstico, da variação do IMC/I (ΔZIMC/I) da fase de manutenção e da ΔZIMC/I do tratamento como um todo para a chance de excesso de peso ao término. Esses resultados levaram a concluir que houve incremento significante na frequência de excesso de peso e no ZIMC/I durante e após tratamento ativo, com destaque na fase de manutenção. E ainda que o excesso de peso no baseline comportou-se como principal fator associado ao excesso de peso no término do tratamento e no follow-up. / In Brazil, population-based cancer registries show an incidence of childhood cancer of 154.3 cases per million, of which leukemias account for the greatest percentage. Among leukemia, acute lymphoblastic leukemia (ALL) accounts for about 80% of cases and until half of the last century it was considered a fatal illness. Thanks to the best knowledge of the disease, the introduction of new drugs with appropriate treatment protocols and to best supportive care it has become a curable disease. However, therapeutic advances have resulted in an increasing number of survivors and of long-term effects on health and quality of life in this population. Overweight is one of the most well-documented side effects and a variety of etiological mechanisms have been proposed, including characteristics related to the patient and treatment. However, it remains unclear which factors associated with overweight and weight gain during treatment between patients treated with more modern treatment protocols as well as among those treated in areas with limited resources.Thus, this study aimed to analyze the frequency of overweight and the increase of body mass index-for-age (BMI/A) during treatment, as well as the associated factors in ALL survivors treated in center reference of Northeast Brazil. This was a retrospective case series study with data from diagnosis at the end of treatment, carried out with 210 survivors of ALL treated according to the ALL-RE-2005 protocol (LLA-Recife-2005) between August 2005 and October 2014. Clinical and anthropometric data were collected from electronic medical records and the nutritional diagnosis made from the index Z scores Height-for-age (H-Z/A) and Z score of BMI/A (BMI-Z/A), according to World Health Organization. It was considered short stature H-Z/A <1 standard deviation and excess weight BMI-Z/A > 1 standard deviation. The logistic regression model was constructed to examine the potential overweight predictors in two points: (1) completion of treatment; (2) at the last follow-up. The results showed 24.3% of overweight diagnosis with a tendency to increase during and after treatment. At all stages the average BMI-Z was higher than the reference, with a significant increase in the induction and maintenance phases. Overweight at baseline and risk group of ALL were independently associated with excess weight at the end, while overweight at baseline and linear growth associated with overweight at follow-up. There was contribution of BMI-Z/A of diagnosis, of variation in the BMI/A (ΔBMI-Z / A) of maintenance phase and of ΔBMI-Z/A treatment as a whole for the chance of being overweight at the end. These results led to conclude that there was a significant increase in the frequency of overweight and BMI-Z/A during and after active treatment, especially in the maintenance phase. And while overweight at baseline behaved like main factor associated with overweight at the end of treatment and at follow-up.

Orientador: Irene Lorand-Metze / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-05T02:42:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pereira-Cunha_FernandaGoncalves_M.pdf: 18014184 bytes, checksum: 6e22ea867f4a1fb74e5f242860b5e339 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: A Leucemia aguda se caracteriza pela proliferação clonal da célula tronco hematopoética substituindo o tecido normal da medula óssea. A recente classificação da OMS incorpora características cito genéticas e imunofenotípicas que apresentam impacto prognóstico. Nós examinamos a distribuição e impacto na sobrevida de vários antígenos de linhagem e maturação usados na rotina de imunofenotipagem dos pacientes com leucemia aguda ao diagnóstico.Os casos foram diagnosticados pelo hemograma, citologia da medula óssea, citoquímica, citogenética e imunofenotipagem através de um painel de triagem de 3 cores (CD45, CD3, CD7, CDI9, CD13, CD33 e HLA-DR) e painéis secundários para LLA de linhagem B (CDI0, CD20, k e À de citoplasma e superfície) e LMA (CD2, CDI4, CDI5, CD34, CD56 e MPO). A expressão dos antígenos foi medida pela intensidade média de fluorescência (CMF) por citometria de fluxo usando o programa Paint-a-gate. Nós analisamos 5 pacientes com LLA de linhagem T. Mediana de idade: 29 anos (14-51).80% dos casos foram diagnosticadosapenas com o painel de triagem.O CD13 foi o marcador de linhagem cruzada mais expresso (80%). Analisamos 31 pacientes com LLA de linhagem B. Mediana de idade: 27 anos (7-67). O painel de triagem definiu a linhagem de 61% dos casos e com o secundário diagnosticamos todos os outros. Os antígenos de linhagem cruzada mais expressos foram os CD13 (35%) e CD33 (38%). Na análise multivariada de Cox a idade e o CMF do CD45 foram fatores preditivos de pior sobrevida.Analisamos 35 pacientes com LMA.Mediana de idade: 51 anos (11-79). O painel de triagem definiu todos os casos. Os subtipos FAB predominantes foram M2 e M4. Nós detectamos 2 sub populações de blastos com fenótipos diferentes em 5 casos e 3 em 1 caso. O marcador de imaturidade CD7 foi expresso em 20% dos casos, os marcadores de linhagem cruzada, CD2 e CD19 em 11% e observamos assincronismode maturação em 20% com CD34/CD15 e 22% com CD34/CD56positivos.Na análise multivariadade Cox o CMF do CD45 e MPO, a idade, cariótipo e número de leucócitos foram fatores preditivos de pior sobrevida. Pela medida da intensidade média de fluorescência dos antígenos nós pudemos detectar parâmetros prognósticos bem como sub populações de blastos fenotipicamente diferentes, que não tiveram influência na sobrevida, mas podem dificultar o estudo de doença residual mínima por citometria de fluxo, visto que a quimioterapiapode selecionar uma das populações / Abstract: Acute leukemia is characterized by a c1onal proliferation of haematopoietic stem cell substituting the normal bone marrow. The recent WHO c1assification for acute leukemia separates entities by recurrent cytogenetic abnormalities and immunophenotypic features presenting prognostic impact. We have examined the distribution and impact on survival of the expression of severallineage and maturation linked antigens used in routine immunophenotyping of patients with de novo acute leukemía. Cases were diagnosed by peripheral blood counts,bone marrow cytology, cytochemistry, cytogenetics and immunophenotyping using a first screening panel with 3 colors (CD45, CD3, CD7, CDI9, CD13, CD33 e HLA-DR) and secondary panel for precursor B ALL (CDI0, CD20, k e À) and AML (CD2, CDI4, CD15, CD34, CD56 e MPO). Antigen expression was measured by mean fluorescence intensity (MFI) by flow cytometry using the Paint-a-gate software. We analysed 5 cases of T-ALL. Median age: 29 years (14-51). In 80% of the cases were defined by primary panel. CD13 was the most expressed cross-lineage marker (80%). We analysed 31 cases ofB-ALL. Median age: 27 years (7-67). In 61% of the cases were defined by screening panel and the remaining, by secondary panel defined others. CD13 (35%) and CD33 (38%) were the cross-lineage markers most expressed. In Cox multivariate analysis, MFI of CD45 and age were significant for worse prognosis. We analysed 35 cases of AML. Median age: 51 years (11-79). The screening panel defined all cases. Predomínant FAB types were M2 and M4. In 5 cases we could detect 2 phenotypically different blast subpopulations and in 1 case we detected 3 subpopulations. The immaturity marker CD7 was expressed in 20% ofthe cases, the cross-lineage CD2 and CD19 were expressed in 11% of the cases and we could observe asynchronous in 20% with co-expression of CD34/CD15 and 22% with co-expression of CD34/CD56. In Cox multivariate analysis, MFI of CD45 and MPO, age, WBC and karyotype were significant for worse survival. By measuring the fluorescence intensity of the antigens, we could detect prognostic parameters as well as phenotypically different blast subsets. These did not influence survival, but may represent a pitfall in studies of mínimal residual diseaseby flow cytometry, as chemotherapy may select one of these subsets / Mestrado / Ciencias Basicas / Mestre em Clinica Medica

Orientadores: Irena Gyongyver Heidemarie Lorand Metze, Andrew John George Simpson / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-31T15:08:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Lopes_LuizFernando_D.pdf: 20884404 bytes, checksum: 5073c7c7a170b4c793430172ec387443 (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: No presente estudo foi investigado um tipo de instabilidade específica dos linfócitos que, segundo dados de literatura, pode estar relacionado com o desenvolvimento de neoplasias "de novo" ou associadas ao aparecimento de neoplasias secundárias. Esta instabilidade estudada é definida através da freqüência de rearranjos que ocorrem entre o segmento V no receptor de células T no locus gamma (7p14-15) e do segmento J do receptor de células T no locus beta (7q 35). Desta forma, os objetivos deste estudo foram: 1) utilizando o gene lnorido Vy/JJ3como marcador, estudar a instabilidade gênica induzida pela quimioterapia antineoplásica em pacientes pediátricos portadores de leucemia linfocítica aguda ou tumores sólidos; 2) estudar o grau de reversibilidade desta instabilidade após o final da exposição aos agentes quimioterápicos e 3) demonstrar a validade da abordagem de estudo da recombinação, avaliando os produtos da "nested PCR" de DNA genômico dos pacientes em gel de poliacrilamida, posteriormente revelado pela prata (abordagem ainda não descrita na literatura para o estudo do gene em questão). Foram analisadas 210 amostras de DNA de indivíduos agrupados desta maneira: sem neoplasia- 30 indivíduos, 90 pacientes com LLA ( 15 pré Qt, 15 com QT 3-6 meses e 15 com 9 a 12 meses, 15 pacientes após término entre 6 e 12 m, 15 após 2 a 4 anos e 15 após 5 anos ou mais) e 90 pacientes com Tumor Sólido, também subagrupados da mesma forma que os pacientes com LLA. Todos os 210 pacientes foram classificados com resultado positivo ou negativo para o rearranjo, de acordo com a presença ou ausência da banda esperada após a segunda PCR Para cada indivíduo foram estudadas 6 diferentes quantidades de DNA (525ng, 350,175,35,17.4, e 8.75) e, em cada uma delas, chamamos de positivo ou negativo para o rearranjo de acordo com 'a presença ou ausência da banda visualizada no gel revelado. Foi determinada a média da freqüência do rearranjo Vy/Jp para cada grupo. O grupo de pacientes durante a quimioterapia foi comparado com a média da freqüência dos rearranjos pré e pós-quimioterapia separadamente para o grupo de LLA e TS. As médias foram comparadas utilizando-se o teste de Kruskal-Wallis. As comparações múltiplas foram feitas através do método Tukey-HSD. A média da fteqüência de rearranjos foi de 10,2/105 células para os pacientes com LLA que estavam expostos aos quimioterápicos no período de 3 a 6 meses e para o grupo em tratamento entre 9 a 12 meses foi de 13,8/105. Para o grupo controle (30 indivíduos) e para o grupo com LLA pré-tratamento os valores foram 1,3/105e 3,11105. O estudo estatístico comparando grupos -controle, LLA pré-QT e LLA durante QT - mostrou tratar-se de valores altamente significativos (p < 0,001). No grupo de pacientes com Tumor Sólido, a média da freqüência de rearranjos durante o tratamento foi de 9,2 e 9,11105 células respectivamente para 3 a 6 meses de tratamento e 9 a 12 meses. O grupo controle, sem neoplasia, foi o mesmo descrito acima e a média de rearranjo foi de 1,3/105 e para os TS pré-quimioterapia foi de 0,6/105 células. Novamente o estudo estatístico comparando grupos -controle, TS pré QT e TS durante QTmostrou tratar-se de valores altamente significativos(p < 0,002). Desta forma pode-se concluir que: 1) o método utilizando gel de poliacrilamida corado pela prata pode ser substituído pelo gel de agarose corado com brometo de etídio e hibridizado pela técnica de Southem Blot, sem prejuízo dos resultados e com a vantagem de ser mais rápido, de menor custo e da não-necessidade de utilização de material radioativo e 2) os resultados do estudo indicam que os pacientes apresentaram instabilidade gênica onde a presença do gene ln'brido Vy/Jf3pôde ser observada em freqüência mais elevada durante a fase de tratamento com quimioterapia / Abstract: The ftequency of the hybrid Vy/J[3 trans-rearrangement in peripheral blood lymphocytes (PBL) was analysed in a transversal study of pediatric patients (n=210) with acute lymphoblastic leukemia (ALL) and solid tumours (ST). DifIerent amounts of DNA were used as template for a nested PCR in order to evaluate the ftequency ofhybrid Vy/J[3 genes, using silver-stained gels. The ftequency of the rearrangement was evaluated in groups before, during and afier therapy. A great1y increased ftequency of Vy/J[3transrearrangement was found in PBL of both groups of patients during exposure to chemotherapeutic agents as compared to patients before chemotherapy. In patients that had finished treatment, the ftequency of the rearrangement feUprompt1yto the baseline levels in ST but showed a slow decrease in ALL, where increased levels could be found until 4 years afier the end oftreatment. We hypothesize that the chemotherapeutic agents are able to induce the Vy/J[3trans-rearrangement, but this is transient in most cases. It remains to be determined the exact relation between the persistence of the rearrangement and the occurrence of secondary leukemia / Doutorado / Clinica Medica / Doutor em Clínica Médica

Orientador: Sara Teresinha Olalla Saad / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-16T01:25:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rodrigues_PatriciaCristina_D.pdf: 2756759 bytes, checksum: c32a31ef7786358790e9e69edaf2c2db (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: A proteína humana ANKHD1 (Ankyrin Repeat Single KH Domain containing 1) foi inicialmente descrita em células de adenocarcinoma de próstata humano (LNCaP), e sua expressão também é observada em diversas linhagens leucêmicas. ANKHD1 é homóloga a proteína Mask (Multiple Ankyrin repeat and single KH domain) de Drosophila melanogaster, relacionada com diferenciação, sobrevivência e proliferação de fotorreceptores dos olhos de drosófila. Interações diretas entre ANKHD1 e SHP2, proteína que exerce um papel crítico na hematopoiese, foram descritas nas linhagens mielóide K562, de adenocarcinoma de próstata, LNCaP, e em linhagem de mieloma múltiplo RPM1 8226. Porém pouco se sabe sobre a função de ANKDH1 e seu papel na leucemogênese. O objetivo do presente estudo foi investigar o envolvimento da ANKHD1 em processos biológicos relacionados com a leucemogênese. Para tal utilizamos duas abordagens metodológicas principais: inibição e hiperexpressão de ANKHD1. A inibição de ANKHD1 em linhagem LNCaP foi seguida de rastreamento das demais alterações gênicas associadas através de microarray. O microarray realizado mostrou 706 genes cuja expressão foi aumentada e 159 genes cuja expressão foi diminuída. Os genes foram agrupados em 26 classes funcionais, sendo que diversos genes conhecidos por regularem ciclo celular e apoptose tiveram seu perfil de expressão alterada. Importante ressaltar que a inibição de ANKHD1 resultou em aumento significativo da expressão de um grande número de Histonas, sugerindo seu papel no controle epigenético. Dentre as modulações validadas, algumas foram verificadas também em amostras provenientes de portadores de leucemia. Neste estudo, foi demonstrada a baixa expressão gênica de ANKHD1 em amostras de 38 pacientes com diagnóstico de leucemia aguda, quando comparadas às células de medula óssea normal. Uma vez que esta amostra leucêmica se mostrou como um modelo natural de inibição de ANKHD1, a expressão de outros genes modulados no array foi testada, e o gene BMF, que se mostrou aumentado no array, se mostrou também mais expresso em amostras de leucemias, confirmando a oposição de expressão destes dois genes. Simultaneamente, células de leucemia aguda e mielodisplasia foram submetidas à ação de diversas drogas usadas no tratamento dessas doenças mostrando aumento de expressão de ANKHD1. Estes dados em conjunto com os observados no microarray sugerem a participação da ANKHD1 na via de JAK/STAT1 e vias de controle epigenético. A segunda abordagem utilizada neste trabalho foi a hiperexpressão ANKHD1, isoformas 1 e 2, em linhagens tumorais, seguidas da detecção de expressão protéica de ANKHD1 em cotransfecção com os genes Siva e Vpr. As proteínas Siva e Vpr foram recentemente descritas como capazes de interagir fisicamente com as isoformas 1 e 2 de ANKHD1 respectivamente. Tanto a proteína a Siva quanto a Vpr foram atribuídos papéis de indução de apoptose em linfócitos T. Observou-se que ao cotransfectarmos Siva ou Vpr com ANKHD1 houve diminuição de expressão de ANKHD1 tanto para a isoforma 1 quanto para isoforma 2 (western blotting) e também se observou que a isoforma 1 de ANKHD1 é citoplasmática assim como ocorre com a Mask de drosófila, porém a isoforma 2 se mostrou predominantemente nuclear em microscopia de fluorescência. A análise funcional da hiperexpressão de ANKHD1 seguida de análise por FACS sugere diminuição de apoptose em células leucêmicas. Em conclusão, o presente estudo identificou diversos possíveis participantes da via de sinalização de ANKHD1 por análise microarray, relatou a diminuição da sua expressão em amostras de pacientes portadores de leucemia, bem como o aumento de sua expressão em linhagens leucêmicas sob a ação de diversos tratamentos correntemente utilizados no combate de desordens hematopoiéticas. Descrevemos também o aumento de expressão da expressão do gene BMF nas mesmas amostras em que há diminuição de ANKHD1, corroborando os dados encontrados no microarray da inibição de ANKHD1. Descrevemos também pela primeira vez a localização nuclear da isoforma 2 de ANKHD1, confirmando todas as previsões computacionais de localização de ANKHD1. Os resultados aqui descritos sugerem que ANKHD1 esteja envolvida com o fenótipo anormal da célula leucêmica e permitirão direcionar novos estudos com o objetivo de melhor elucidar as funções específicas de ANKHD1 na hematopoiese / Abstract: The human protein ANKHD1 (Ankyrin Repeat Single KH Domain containing 1) was initially described in Human prostate adenocarcinoma cells (LNCaP), and can also be expressed in many different leukemic cell lines. ANKHD1 is homologous to the Drosophila melanogaster Mask protein (Multiple Ankyrin repeat and single KH domain), related to differentiation, proliferation and survival in photoreceptors of Drosophila eyes. Direct interactions between ANKHD1 and SHP2, a protein that plays a critical role in hematopoiesis, have been described in the myeloid cell line K562, in prostate adenocarcinome, LNCaP, and in multiple myeloma cell line RPM1 8226. Nevertheless, little is known of the function of ANKDH1 and its role in leukemogenesis. The purpose of this work was to investigate the involvement of ANKHD1 in biological processes related to leukemogenesis. For this purpose, we used two main methodological approaches: ANKHD1 inhibition and overexpression. The inhibition of ANKHD1 in LNCaP cell lines was followed by the tracking through microarray of the remaining associated genetic alterations. Microarray revealed 706 genes with upregulated expression and 159 genes with downregulated expression; the genes were gathered in 26 functional groups and many genes, known for regulating cell cycle and apoptosis, had alterations in their expression profile. Importantly, inhibition of ANKHD1 resulted in significant increase in the expression of a large number of Histones, suggesting its role in epigenetic control. Among the validated modulations, some were also observed in the samples collected from leukemia patients. In this study, the downregulation of ANKHD1 was demonstrated in samples collected from 38 acute leukemia patients when compared to normal bone marrow cells. As this leukemic sample represented a natural model of inhibition of ANKHD1, the expression of other genes processed through array were tested, and the BMF gene, which was upregulated in the array, was also more elevated in leukemia samples. Simultaneously, cells of acute leukemia and myelodysplasia were subjected to the action of various drugs used to treat these diseases showing increased expression of ANKHD1. These data together with those observed in the microarray suggest the participation of ANKHD1 towards JAK/STAT1 and pathways of epigenetic control. The second approach used in this work was the ANKHD1overexpression, isoforms1 and 2, in tumor lines, followed by the detection of protein expression in cotransfection with Siva and Vpr genes. The proteins Siva and Vpr have been recently described as being capable of physical interaction with the isoforms 1 and 2 of ANKHD1, respectively. The role of inducing apoptosis in T lynphocytes was attributed to both Siva and Vpr. By cotrasfecting Siva and Vpr with ANKHD1 a reduction of ANKHD1 expression to isoform 1 as well as to isoform 2 (western blotting) was obtained and isoform 1 of ANKHD1 was observed to be citoplasmatic, such as occurs with drosophila Mask, although isoform 2 happened to be predominantly nuclear in the fluorescence microscope. Functional analysis of overexpression of ANKHD1 followed by FACS analysis suggests reduction of apoptosis in leukemic cells. Finally, this study identified many possible participants in the signaling pathway of ANKHD1 by microarray analysis, and related the reduction of its expression in leukemia patients, as well as the increasing of its expression in leukemic cell lines under the effect of many different treatments currently used against hematopoietic disorders. We also described the increasing of BMF expression in the same samples where we found a reduction of ANKHD1, corroborating all the data we obtained from the ANKHD1 inhibition microarray. In addition, we described, for the first time, the nuclear location of ANKHD1's isoform 2, confirming all the computer-aided predictions regarding the location of ANKHD1. The results herein described suggest that ANKHD1 could be involved with the abnormal phenotype of leukemic cells and these results could guide further studies towards elucidating the specific functions of ANKHD1 in hematopoiesis / Doutorado / Biologia Estrutural, Celular, Molecular e do Desenvolvimento / Doutor em Fisiopatologia Medica

Made available in DSpace on 2014-06-12T18:01:07Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo3047_1.pdf: 3228564 bytes, checksum: 23acd94f90ada864423eb7173c3cd7c9 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2010 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A análise citogenética convencional e molecular nas leucemias do lactente (LL) é de fundamental importância para estabelecer alterações cromossômicas e que definem grupos e subgrupos de risco. Este estudo caracterizou alterações cromossômicas em 83 lactentes, oriundos do Centro de Oncohematologia do Hospital Universitário Oswaldo Cruz e Centro de Transplante de Medula Óssea do Instituto Nacional do Cancer (CEMO/INCA) no período de julho/2000 a agosto/2010, sendo 73 casos de leucemias agudas (LA) e 10 de síndrome mielodisplásica (SMD). As Leucemias agudas foram classificadas como leucemia linfoblástica aguda (LLA) (47 casos), leucemia mielóide aguda (LMA) (23 casos) e leucemias ambíguas (3 casos). A idade dos pacientes com leucemia linfoblástica aguda variou de 5 dias a 22 meses, com proporção entre os sexos de 1:1. A idade dos casos de leucemia mielóide aguda variou de 2 a 21 meses, sendo 15 masculinos e 7 femininos. Os subtipos morfológicos foram leucemia mielóide com diferenciação (M2), leucemia mielomonocítica (M4), leucemia mielomonocítica eosinofílica (M4eo), leucemia monoblástica (M5) e leucemia megacarioblástica (M7). O bandeamento G (GBG) revelou anormalidades da região 11q23 em 38% dos casos de leucemia linfoblástica e em 50% dos casos de leucemia mieloblástica. O rearranjo do gene MLL por hibiridização in situ foi observado em 65% e 39% das leucemias linfoblásticas e leucemia mielóide, respectivamente. Nos casos com síndrome mielodisplásicas, a idade variou entre 20 dias a 20 meses, sendo seis do sexo masculino e quatro do feminino. Sete casos foram leucemia mieloblástica em portadores de S.Down, destes seis eram leucemias megacarioblásticas (LMA-K/LMA-M7) e uma leucemia mielóide sem diferenciação (LMA-MO). Todas as leucemias megacarioblásticas tiveram cariótipos complexos com translocações envolvendo o cromossomo 1. Os métodos de Hibridização in situ (FISH), multicolor FISH (M-FISH) e bandeamento cromossômico multicolorido (MCB), foram essenciais nos casos duvidosos pelo GBG, nos cariótipos complexos e nos casos de cromossomos marcadores