Made available in DSpace on 2016-08-15T20:31:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 CaioRMO_DISSERT.pdf: 4090638 bytes, checksum: b7507f10f52ebe87761d7eafda429ed0 (MD5) Previous issue date: 2010-08-20 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / EP24.15 (endopeptidase 24.15, EC.3.4.24.15) also know as thimet-oligopeptidase is a metal dependent peptidase involved in the metabolism of neuropeptides as well as MHC-I peptides and more recently important as regulator of protein/protein interactions. The aim of this work is to verify the tissue and cellular distribution of EP24.15 in the lymphoid tissues (thymus, spleen, lymph nods) by means of immunohistochemistry technique. The analysis revealed that EP24.15 is expressed throughout the studied organs, nevertheless the tissue distribuition showed some areas that contained several labeled cell and others devoid of labeling. The cytoplasmic labeling was more frequent if compared to nuclear one. Macrophage is the cell type more fequently labled. The results suggest that it can be involved in the MHC-I peptide metabolism as well as CTLs differentiation. / EP24.15 (endopeptidase 24.15, EC.3.4.24.15) também conhceida por thimet-oligopeptidase é uma metaloendopeptidase que está envolvida no metabolismo de neuropeptídeos, bem como na apresentação de antígenos via MHC-I e mais recentemente como um importante regulador das interações proteína/proteína. O objetivo do presente trabalho é verificar a distribuição tecidual e celular da EP24.15 nos tecidos linfóides (timo, baço e linfonodo) através da técnica de imunohistoquímica. A análise dos resultados revelou que a EP24.15 foi expressa em todos os órgãos estudados, no entanto a distribuição tecidual mostrou áreas com várias células marcadas e outras sem marcação. A distribuição citoplasmática foi mais frequente que a nucelar. O marcrófago foi o tipo celular mais frequentemente marcado. Os resultados sugerem que a enzima pode estar envolvida no metabolismo de peptídeos via MHC-I bem como na diferenciação de CTLs.

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2012-11-30T21:17:29Z No. of bitstreams: 1 Juliana Perrone Bezerra De Menezes Avaliacao do papel... - 2005.pdf: 32348298 bytes, checksum: 109d71b2fb835421caaa135becd309de (MD5) / Made available in DSpace on 2012-11-30T21:17:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Juliana Perrone Bezerra De Menezes Avaliacao do papel... - 2005.pdf: 32348298 bytes, checksum: 109d71b2fb835421caaa135becd309de (MD5) Previous issue date: 2005 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, Bahia, Brasil / Micobactérias ambientais podem ser encontradas em água, solo, poeira, alimentos e animais. A importância do estudo dessas micobactérias tem aumentado nos últimos anos, principalmente, devido a predisposição de pacientes com imunodeficiência à infecção por essas espécies de micobactéria. Além disso, a exposição a micobactérias ambientais pode constituir um dos fatores associados à baixa eficácia da imunização com a vacina BCG. As manifestações da doença, assim como a manutenção da infecção micobateriana, dependem da interação entre a micobactéria e o sistema imune do hospedeiro. O presente trabalho teve como objetivo avaliar a resposta de macrófagos peritoneais de camundongos susceptíveis BALB/c infectados com M intracellulare ou M fortuitum. Macrófagos peritoneais de camundongos BALB/c foram infectados por M intracellulare ou M fortuitum e as diferenças entre essas duas espécies quanto à capacidade de infectar e sobreviver no interior de macrófagos primários, tratados ou não com IFN-y, e produzir óxido nítrico foram avaliadas. Foi observado que os macrófagos infectados com M fortuitum apresentam um maior percentual de células infectadas que aqueles infectados com M. intracellulare, após 4, 24 e 48 horas de infecção. Entretanto, tanto M. fortuitum quanto M intracellulare são capazes de sobreviver no interior de macrófagos peritoneais, pois não há alteração da carga bacilar dessa duas espécies de micobactéria ao longo da infecção. Observamos ainda que M. intracellulare induziu uma maior produção de óxido nítrico por macrófagos primários infectados e tratados por IFN-y que M fortuitum. No entanto, o pré-tratamento com IFN-y não alterou o percentual de células infectadas nem a viabilidade de M intracellulare ou M. fortuitum. Os dados obtidos neste trabalho mostram que, in vitro, M. fortuitum e M. intracellulare interagem de formas distintas, levando á diferentes respostas do macrófago e a destinos intracelulares distintos. Além disso, mostramos que M intracellulare e M. fortuitum são resistentes ao óxido nítrico produzido por macrófagos após ativação por IFN-y. / Environmental mycobacteria are found in water, soil, dust, food and animals. Environmental Mycobacterium importance has increased in the last few years, mostly because of immunodeficient patient predisposition to infection. Moreover, exposure to environmental mycobacteria could be associated to low levels of protection induced by immunization with BCG. Disease manifestations as well as infection outcome depend on interaction between mycobacteria and host immune system. The goal of this work was to evaluate peritoneal macrophage response, from the susceptible BALB/c mice, to M. intracellulare or M. fortuitum infection. Peritoneal inflammatory macrophages, pre-activated or not with IFN-y, were infected by M. intracellulare or M fortuitum and diferences between these two species related to the capacity to infect macrophages, to survive intracellularly and to induce NO production were evaluated. It was observed that the percentage of M. fortuitum-xnÍQoXQá cells was higher related to M. intracellulare-míecieá ones, after 4, 24 and 48 hours of infection. In addition, both M. fortuitum and M. intracellulare presented the ability to survive in peritoneal macrophages. It was also observed that in response to IFN-y activation, M. intracellulare induced higher NO production thanM fortuitum. However, pre-activation with IFN-y did not modify, neither the percentage of M. intracellulare and M. fortuitum infected cells, nor intracellular bacillum survival. These data demonstrate that, in vitro., M. fortuitum and M. intracellulare differently interact with macrophages, inducing diferent macrophage reponses and that both M. intracellulare and M fortuitum are resistant to NO production upon IFN-y activation.

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2014-10-29T13:31:11Z No. of bitstreams: 1 Beatriz Rocha Simone Dias Vacúolos....pdf: 43303992 bytes, checksum: 310fce5b6b7557207067a51be3ca3c64 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-10-29T13:31:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Beatriz Rocha Simone Dias Vacúolos....pdf: 43303992 bytes, checksum: 310fce5b6b7557207067a51be3ca3c64 (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / A Leishmania é um parasito intracelular obrigatório que vive e se multiplic adentro dos vacúolos parasitóforos em macrófagos no hospedeiro vertebrado. Apesar dos vacúolos induzidos por diferentes espécies de Leishmania apresentarem semelhanças bioquímicas, esses compartimentos apresentam diferenças significativas nos seus tamanhos. Os vacúolos parasitóforos induzidos por Leishmania mexicana e Leishmania amazonensis apresentam grandes dimensões e contêm uma grande quantidade de amastigotas, enquanto que os induzidos por Leishmania major e Leishmania donovani são pequenos e com pouco espaço ao redor das amastigotas. Estudos recentes demonstraram que compartimentos induzidos por microrganismos intracelulares são capazes de interagir com a via autofágica e esta pode controlar ou promover o estabelecimento da infecção a depender da natureza do microrganismo. Até o momento, poucos estudos foram realizados para avaliar o papel da autofagia na biogênese e maturação dos vacúolos parasitóforos induzidos por Leishmania. Recentemente, foi demonstrado que em macrófagos de camundongos BALB/c, a indução de autofagia provoca um aumento na carga parasitária de L. amazonensis, no entanto, não é capaz de aumentar a carga parasitária de L. major. Além disso, estudos indicam que vacúolos parasitóforos de L. mexicana adquirem macromoléculas do citoplasma da célula hospedeira por meio de microautofagia. Uma vez que L. amazonensis integra o mesmo complexo que L. mexicana, nossa hipótese é que vacúolos parasitóforos induzidos por L. amazonensis interagem com a via autofágica.Assim, o presente estudo tem como bjetivo verificar e comparar a participação da autofagia na infecção por L. amazonensis ou L. major em macrófagos murinos. Para este fim, avaliamos quanto a características autofágicas, os vacúolos parasitóforos induzidos por L. amazonensis ou L. major em macrófagos de camundongo CBA e analisamos a influência da superexpressão de LC3 sobre a sobrevivência de L. amazonensis ou L. major em macrófagos infectados. Inicialmente, macrófagos de camundongos CBA foram infectados com L. amazonensis ou L. major e incubados com ysoTracker, marcador de compartimentos lisossomais, ou DQ-BSA, marcador de compartimentos degradativos. Além disso, foi avaliada a presença de LAMP, proteína lisossomal, e LC3, proteína específica de autofagossomo, na membrana destes vacúolos. Em seguida, a co- localização dos parasitos com os vacúolos parasitóforos contendo estes marcadores foi quantificada. Nossos resultados demostraram um maior percentual de co-localização tanto do LysoTracker como doDQ-BSAcom parasitos em vacúolos no interior de macrófagos infectados com L. major em comparação com aqueles infectados com L. amazonensis. No entanto, não houve diferença no percentual de co-localização de LAMP com L. major ou L. amazonensis e foi observado um maior percentual de co-localização do LC3 com parasitos em macrófagos infectados com L. amazonensis em comparação com aqueles infectados com L. major. Posteriormente, avaliamos o efeito da superexpressão da LC3 na infecção por L. amazonensis ou L. major. Células de linhagem macrofágica RAW foram transfectadas com o plasmídeo contendo a sequência codificante para a LC3 e infectadas com L. amazonensis ou L. major. Nós observamos uma reduçãono percentual de infecção por L. amazonensis e L. major nas células RAW- pmRFP-LC3 em comparação às controle. Essa diminuição na infecção se deu por inibição da fagocitose de L. amazonensis e L. major pois os parasitos continuam a interagir com a membrana das células RAW-pmRFP-LC3, mas não são internalizadas. Em conjunto, estes dados demonstram que os vacúolos parasitóforos de L. amazonensis e L. major interagem com compartimentos da via autofágica de forma distinta e que a superexpressão de LC3 reduz a fagocitose de L. amazonensis e L. major por células RAW, o que resulta na redução da infecção / Leishmania is an intracellular parasite that lives and multiplies within parasitophorous vacuoles in macrophages in the vertebrate host. Despite the fact that vacuoles induced by different species of Leishmania present biochemical similarities, these compartments have significant differences in their sizes and composition. The parasitophorous vacuoles induced by Leishmania mexicana and Leishmania amazonensis are large and contain a large number of amastigotes, while vacuoles induced by Leishmania major and Leishmania donovani are small and tight. Recent studies have demonstrated that depending on the type of intracellular microorganism, the induced compartments can interact with the autophagic pathway and control or promote the establishment of infection. To date, few studies have been conducted to evaluate the role autophagic process plays in the biogenesis and maturation of parasitophorous vacuoles induced by Leishmania. Recently, it has been demonstrated that in macrophages of BALB/c mice, the induction of autophagic causes an increase in parasitic load of L. amazonensis, but not L. major. Furthermore, other studies indicate that L. mexicana-induced parasitophorous vacuoles acquire macromolecules from the cytoplasm of the host cell through microautophagy. Once L. amazonensis belongs to the same complex that L. mexicana, our hypothesis is that L. amazonensis-induced parasitophorous vacuoles interact with the autophagic pathway. Thus, the present study aims to evaluate and compare the role autophagic process plays in Leishmania infection. We evaluated L. amazonensis- or L. major-induced parasitophorous vacuoles regarding their autophagic characteristics and we analyzed the influence of the overexpression of LC3 on the survival of parasites in infected macrophages. Initially, macrophages of CBA mice were infected with L. amazonensis or L. major and incubated with a marker of lysosomal compartments, LysoTracker, or a marker of degrading compartments, DQ-BSA. In addition, we evaluated the presence of the lysosomal membrane protein, LAMP-1, and a protein specific of autophagossomes, LC3 in the membrane of these vacuoles. Then, the colocalization of parasites with the marker labeled-compartments was quantified. Our results demonstrated a higher percentage of colocalization of both LysoTracker and DQ-BSA with parasites in vacuoles within macrophages infected with L. major in comparison with those infected with L. amazonensis. However, there was no difference in the percentage of colocalization of LAMP with L. major or L. amazonensis. We also observed a higher percentage of LC3-co-localizing with parasites in macrophages infected with L. amazonensis in comparison with those infected with L. major. Subsequently, we evaluated the effect of overexpression of LC3 in macrophages infected with L. amazonensis or L. major. RAW cells were transfected with the plasmid containing the coding sequence for the LC3 (RAW-pmRFP-LC3) and then were infected with L. amazonensis or L. major stationary phase promastigotas. A reduction was observed in the percentage of infected RAW-pmRFP-LC3 cells with L. amazonensis and L. major compared to control cells. This decrease in the percentage of infected cells is due to the inhibition of phagocytic ability of RAW-pmRFP-LC3 cells, since the parasites continue to interact with cell membrane, but is not internalized. Together, these findings show that L. amazonensis- and L. major-induced parasitophorous vacuoles interact differently with compartments of the autophagic pathway and that the overexpression of LC3 reduces phagocytosis of both L. amazonensis and L. major by RAW-pmRFP-LC3 cells resulting in the reduction of infection.

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2015-02-10T16:31:37Z No. of bitstreams: 1 Vinicius Costa Souza Ferreira, Papel do fator... 2014.pdf: 10087481 bytes, checksum: 8c34a10bbc4c46304eaf9166412e6f0f (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2015-02-10T16:31:51Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Vinicius Costa Souza Ferreira, Papel do fator... 2014.pdf: 10087481 bytes, checksum: 8c34a10bbc4c46304eaf9166412e6f0f (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2015-02-10T16:32:18Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Vinicius Costa Souza Ferreira, Papel do fator... 2014.pdf: 10087481 bytes, checksum: 8c34a10bbc4c46304eaf9166412e6f0f (MD5) / Made available in DSpace on 2015-02-10T16:32:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Vinicius Costa Souza Ferreira, Papel do fator... 2014.pdf: 10087481 bytes, checksum: 8c34a10bbc4c46304eaf9166412e6f0f (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / A leishmaniose visceral é causada pelo parasita Leishmania infantum. A infecção ocorre quando flebótomos infectados se alimentam na derme do hospedeiro vertebrado, inoculando o parasita. A infecção produz uma resposta com diversas moléculas inflamatórias, como os mediadores lipídicos. O fator de ativação de plaquetas (PAF) é um potente mediador lipídico derivado de um lisofosfolipídio. PAF participa da fisiologia normal da célula e possui um perfil pró-inflamatório. A participação de mediadores lipídicos, como eicosanóides e PAF, já foi identificada na imunopatogênese das leishmanioses. PAF gerado pelo hospedeiro tem efeito leishmanicida e de controle da infecção por L. amazonensis. PAF-acetilhidrolases (PAF-AH) são fosfolipases A2 que hidrolisam PAF e foi demonstrado que PAF-AH podem ser um fator de virulência devido a essa habilidade. O objetivo desse estudo foi avaliar o papel do PAF e de uma PAF-AH na infecção de macrófagos por L. infantum. Foi observado que PAF 1μM, quando adicionado durante e após a infecção, foi capaz de diminuir 50% da infecção após 72 horas, bem como a viabilidade dos parasitas dentro dos macrófagos num mecanismos independente do seu receptor PAFR e da produção de óxido nítrico. PAF 10μM interrompeu o crescimento de promastigotas de L. infantum em cultura axênica. Uma PAFAH, com elevada identidade e semelhança com PLA2/PAF-AH de outros tripanossomatídeos, foi identificada no genoma de L. infantum. A clonagem e expressão recombinante produziu uma proteína de cerca de 69kDa, com atividade PAF-AH. Frações celulares do parasita, enriquecidas com estruturas de membrana também apresentaram atividade PAF-AH. Os resultados indicam que PAF é capaz de diminuir a infecção de macrófagos por L. infantum e que o parasita possui uma PAF-AH funcional possivelmente envolvida com sua virulência. / Visceral leishmaniasis is caused by Leishmania infantum parasites. Infection occurs when infected sandflies feed on vertebrate host skin delivering the parasite which survive, multiply and spread on the parasitophorous vacuoles of macrophages. The inflammatory response during the infection leads to the production of diverse bioactive molecules, as lipid mediators. The platelet activating factor (PAF) is a lipid mediator derived from a lysophospholipid. PAF has a role in normal cellular physiology, acting as proinflamatory molecule. The participation of some lipid mediators, as eicosanoids and PAF has been identified in leishmaniasis. PAF produced by the host is able to kill the parasite and control the infection by L. amazonensis. PAF-acetylhydrolases (PAF-AH) are phospholipases A2 (PLA2) that hydrolyse PAF, and possibly involved in pathogen virulence. The aim of this study was to evaluate the role of PAF on macrophages infection by L. infantum and identify a PAF-AH expressed by the parasite. PAF 1μM, added during and after the infection, was able to reduce approximately 50% of infection, as well as, the viability of parasites inside macrophages. Apparently this reduction occurs by an classical PAF receptor and nitric oxide production independent mechanism. PAF 10μM inhibited L. infantum promastigotes growing in axenic culture. A PAF-AH with high identity to PLA2/PAF-AH of others trypanosomatids was identified in L. infantum genome. The cloning and recombinant expression produced a 69kDa protein with PAF-AH activity. Cellular fractions from parasites, with membrane structures also presented PAF-AH activity. The results suggest that PAF is able to decrease machophage infection by L. infantum witch has a functional PAFAH possibly related to its virulence

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2016-02-04T14:23:59Z No. of bitstreams: 1 Nivea Farias Luz Ativação...2015.pdf: 10567971 bytes, checksum: 1479b4bbd75d3db2ffcf895208002d81 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2016-02-04T14:24:19Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Nivea Farias Luz Ativação...2015.pdf: 10567971 bytes, checksum: 1479b4bbd75d3db2ffcf895208002d81 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-04T14:24:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Nivea Farias Luz Ativação...2015.pdf: 10567971 bytes, checksum: 1479b4bbd75d3db2ffcf895208002d81 (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz, Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / A Leishmaniose visceral (LV) apresenta ampla distribuição geográfica e é fatal caso não seja tratada. As manifestações hematológicas são constantes na LV e em casos não tratados os pacientes evoluem à óbito por sangramento maciço ou anemia grave. Neste cenário, mecanismos ligados à morte celular, hemólise, metabolismo do heme e atividade da enzima heme oxigenase podem estar envolvidos na imunopatogênese da LV. A heme oxigenase (HO) tem importantes propriedades regulatórias e está envolvida em processos fisiológicos e patofisiológicos como citoproteção e inflamação. Nesse projeto testamos a hipótese de que a ativação da enzima heme oxigenase-1 (HO-1) favorece a infecção por Leishmania infantum chagasi, principal agente etiológico da LV humana no Brasil e de que mecanismos de morte celular inflamatória induzida por heme estão associados com a resistência ao parasita. Nossas observações nesse trabalho indicam que a enzima HO-1 é induzida em macrófagos durante a infecção por L. chagasi e que a indução farmacológica da HO-1, pela CoPP aumenta a carga parasitária de macrófagos infectados por L. chagasi e reduz a produção de mediadores próinflamatórios. Além disso, a HO-1 favorece um ambiente anti-inflamatório onde prevalece a presença de IL-10 sobre a de TNF. Macrófagos derivados de medula óssea de camundongos deficientes no gene HO-1 têm menor carga parasitária, quando infectados por L. chagasi em comparação aos macrófagos de camundongos selvagens. Além disso, pacientes com LV apresentam maiores níveis de heme-oxigenase 1 e de heme no soro. Nossas observações indicam que heme é capaz de induzir necroptose em macrófagos humanos, e de que moléculas da via da necroptose estão associadas com a resistência na infecção por Leishmania. A molécula RIPK1 controla a replicação de Leishmania por um mecanismo independente da produção de IL-1β, enquanto que a molécula PGAM5 depende de IL-1βpara controlar o crescimento do parasita. Por fim, encontramos que essas proteínas participam do controle da replicação por Leishmania em um modelo experimental de Leishmaniose cutânea. Esses achados indicam um potencial deletério para a HO-1 na infecção por L. chagasi, e um papel protetor da necroptose na infecção porLeishmania. / Visceral leishmaniasis (VL) is a widespread disease and is fatal if left untreated. Hematological manifestations are common in VL and untreated patients evolve to death from massive bleeding and severe anemia. In this scenario, mechanisms related to cell death pathways, hemolysis, heme metabolism and enzymatic activity of heme oxygenase may be involved in the immunopathogenesis of the disease. Heme oxygenase (HO) has important regulatory properties and is involved in patho-physiological processes such as cytoprotection and inflammation. This project tested the hypothesis that heme oxygenase- 1 (HO-1) activation favors Leishmania infantum chagasi infection, the main etiologic agent of human VL in Brazil, we also tested whether heme induced inflammatory cell death pathways are involved in resistance to Leishmania infection. Our observations indicate that HO-1 is induced in macrophages infected with L. infantum chagasi and pharmacological induction for HO-1 by CoPP increases parasite load of infected macrophages and reduces production on inflammatory mediators. In addition, HO-1 contributes to the anti inflammatory pathway that favors L. chagasi replication through a higher IL-10/TNF-α ratio in macrophages. We also observed that bone marrow derived macrophages knockout to HO-1 gene have a significant lower parasite load when infected by L. infantum chagasi than their wild type counterparts. Beyond this, we found that patients with VL presented higher systemic concentrations of HO- 1 and heme than healthy individuals. We found that heme is able to induce programmed necrosis “necroptosis” in human cells and that molecular players from necroptosis pathway contribute to resistance to Leishmania infection. RIPK1 controls Leishmania replication through a mechanism independent of IL-1β production, while PGAM5 requires IL-1β to control Leishmania replication. Finally, we found that RIPK1 and PGAM5 play an important role in controlling Leishmania replication in a cultaneous leishmaniasis experimental model. Our findings argue that HO-1 has a critical role in L. chagasi replication and necroptosis pathway is involved in resistance against Leishmania infection.

Os mecanismos exatos que comprometem o sistema imune em estados de desnutrição ainda não estão totalmente esclarecidos, sendo que a desnutrição modifica a funcionalidade das células efetoras da resposta inflamatória/infecciosa, ocasionando menor síntese de citocinas pró-inflamatórias, além de ocasionar alterações da hemopoese. Macrófagos apresentam papel chave tanto na resposta imune inata quanto adaptativa, e apresentam alta taxa de utilização do aminoácido glutamina, que é fundamental para o fornecimento de energia e nitrogênio. Nesse contexto, verifica-se que o metabolismo da glutamina em macrófagos desempenha um papel importante para a síntese de citocinas, sendo que a síntese de diversas citocinas é dependente da concentração extracelular de glutamina. Dada a importância desse aminoácido no organismo e que sob condições de estresse sua manutenção encontra-se prejudicada e diante do fato de que macrófagos utilizam altas taxas desse aminoácido para seu funcionamento propusemo-nos a estudar alguns aspectos da influência desse aminácido sobre células macrofágicas em situação de desnutrição protéica. Camundongos BALB/c, machos, submetidos à desnutrição protéica, após perda de aproximadamente 20% do peso corpóreo, foram eutanasiados. Hemograma, mielograma, e análise das concentrações séricas de glutamina, proteínas totais, albumina e pré-albumina séricas foram realizadas. Células macrofágicas coletadas da cavidade peritonial foram cultivadas, in vitro, com glutamina, em diferentes concentrações, e a capacidade de produção de TNF-α, IL-1 e IL-10, bem como a expressão de moléculas envolvidas na ativação da via do fator de transcrição NF-κB, foram quantificadas. Animais desnutridos apresentaram diminuição da concentração de glutamina plasmática e aumento do corticosterona circulante. Anemia, leucopenia e severa redução na celularidade da medula óssea com comprometimento do setor mielóide foram evidenciadas nos animais desnutridos, bem como diminuição da celularidade da cavidade peritonial com redução da população de células macrofágicas. Os resultados demonstram que a glutamina apresenta um efeito dose dependente na ativação de macrófagos peritoniais cultivados in vitro e estimulados com LPS por 30 minutos, mostrando-se capaz de induzir a uma menor produção de citocinas pró-inflamatórias como TNF-α e IL-1, e ao mesmo tempo aumentar a produção de IL-10, modulando negativamente a via de sinalização do fator de transcrição NF-κB, principal via para indução de genes da resposta inflamatória e imune, sendo essa modulação mais evidente nos animais desnutridos. Baseando-se nestes resultados, discutimos o papel do estado nutricional modificando a resposta do organismo frente a um estímulo inflamatório e o papel da glutamina, in vitro, em modular esse processo. / The exact mechanisms that commits the immune system in condition of malnutrition are still not fully understood, being that malnutrition modifies the functionality of effector cells in inflammatory/infectious response, leading a reduced synthesis of pro-inflammatory cytokines besides causing changes in hematopoiesis. Macrophages play an essential role on the innate and adaptive immune response, and have high utilization rate of the amino acid glutamine, which is essential for the supply of energy and nitrogen. In this context, it appears that the glutamine metabolism in macrophages is essential for the synthesis of cytokines and synthesis of several cytokines are dependent of the extracellular glutamine concentration. Given the importance of this amino acid in the body and knowing that in stress conditions situations its maintenance is impaired and besides that macrophages use high levels of this amino acid to function, we proposed to investigate some aspects of the influence of this amino acid on macrophages in a situation of protein malnutrition. BALB/c male, subjected to protein malnutrition, after attained about 20% loss of their original body weight were sacrificed. Hemogram, myelogram, and analysis of serum concentrations of glutamine, protein, albumin and prealbumin were evaluated. Macrophages collected from peritoneal cavity were cultivated, in vitro, with glutamine, at different concentrations and the TNF-α, IL-1 and IL-10 capacity of production, as well as the expression of molecules involved in the transcription factor NF-κB activation were evaluated. Malnourished animals showed lower plasma glutamine and increase of corticosterone levels. Anemia, leucopenia and severe reduction of cellularity of bone marrow with myeloid impaired, as well as reduction of the peritoneal cavity cellularity with reduced macrophages population were observed in malnourished animals. Data showed that glutamine has a dose dependent effect on peritoneal macrophages activation in vitro when stimulated with LPS for 30 minutes, being able to induce a decrease of pro-inflammatory cytokines production as TNF-α and IL-1, while at same time an increase of IL-10 production, modulating negatively the signaling pathway transcription factor NF-κB activation which is the main pathway to induce genes of the inflammatory and immune response, and this modulation was more pronounced in malnourished animals. Based on these results, we discuss the role of nutritional status modifying immune response face to inflammatory stimulus and the role of glutamine in vitro in modulating this process.

A idade entre o terceiro e o sexto mês de vida é um período peculiar para o estabelecimento da imunidade própria dos bezerros. Nesse intervalo, há susceptibilidade e índice de letalidade à broncopneumonias maiores, provavelmente devido à imaturidade do sistema imunológico pulmonar, quer seja por uma insuficiente resposta, nos primeiros momentos, quer seja por uma resposta citotóxica exagerada, no momento subsequente. A par disso, este trabalho teve o intuito de verificar o momento em que ocorre a maturidade do sistema imunológico, como se comportam os perfis Th1 e Th2 e a existência de uma resposta citotóxica exagerada, durante esta fase de estabelecimento da imunidade ativa dos bezerros. Para tal, estudaram-se as funções de fagocitose e metabolismo oxidativo de leucócitos sanguíneos e broncoalveolares, as classes de imunoglobulinas e citocinas incriminadas nos padrões de resposta linfocitária Th1 e Th2, em 10 bezerros da raça holandesa, sadios, avaliados em sete momentos experimentais, com intervalo quinzenal, entre o terceiro e o sexto mês de vida. Os dados foram submetidos à análise estatística, pela comparação entre as médias ou medianas, confrontadas pelo teste de Anova e Tukey, quando paramétricas, e pelo teste de Kruskal Wallis e Dunn, quando não paramétricas, considerando nível de significância P≤ 0,05 e tendência P≤ 0,10. Os dados que apresentaram dinâmicas semelhantes entre si foram submetidos ao teste de correlação de Pearson. Na região broncoalveolar, observaram-se um aumento progressivo das funções dos macrófagos alveolares, equilíbrio de secreção dos isotipos IgG1 e IgG2 e predominância de citocinas compatíveis com padrão de resposta Th1, até os 150 dias de vida dos bezerros. Aos 165 dias de vida, ocorreram diminuição da função celular, aumento dos títulos de IgG2 e aumento da citocina regulatória IL-10. Aos 180 dias, retornou-se o equilíbrio entre secreção de IgG1 e IgG2, diminuiram os teores de IL-10 e ocorreu tendência a aumento de IL-12, TNF-α e metabolismo oxidativo de macrófagos alveolares, o que permitiu concluir que a resposta imune tem característica própria, nesta faixa etária, e não se torna matura até os seis meses de vida. Apesar de os fagócitos pulmonares já estarem eficientes, a partir dos 135 dias de vida, tornam-se hiperresponsivos aos 150 dias de vida, momento em que gera consequentemente uma resposta regulatória e/ou humoral aos 165 dias de vida, para que aos 180 dias de vida, o equilíbrio entre os perfis Th1 e Th2 seja atingido / The age between the third and sixth month of life is a peculiar period for the establishment of active immunity of calves. There is a greater susceptibility and lethality by bronchopneumonia, probably due to the immaturity of the pulmonary immune system, whether by an insufficient response , in the first moments , whether by an exaggerated cytotoxic response in the subsequent time. So, this work aimed to verify when the maturity of the immune system occurs, how the Th1 and Th2 profiles behave and if there is an exaggerated cytotoxic response during this active phase for immunity of the calves without maternal interference. For this purpose we studied the functions of phagocytosis and oxidative metabolism of blood and bronchoalveolar leukocytes, classes of immunoglobulins and cytokines incriminated in lymphocyte response patterns Th1 and Th2, in 10 holstein healthy calves. They were sampled every fifteen days, during the third until sixth month of life. Data were statistically analyzed by comparing the means or medians, confronted by ANOVA test and Tukey, when the data were parametric, and by Kruskal Wallis and Dunn's test, when the data were nonparametric, level of significance p ≤ 0.05 and trend p ≤ 0.10. The data that showed similar dynamics between them were subjected to Pearson correlation test. In bronchoalveolar region, until 150 days of age, the alveolar macrophages functions increased progressively, the IgG1 and IgG2 isotypes secretion showed a balance, and the cytokines profile were compatible with Th1 response. At 165 days of age, there was a decrease of cellular function, an increased of IgG2 titers and the IL-10 secretion, a regulatory cytokine, increased. At 180 days of life, we observed a balance of IgG1 and IgG2 secretion, a decreased of IL-10 levels and a tendency to increase IL-12, TNF-α and alveolar macrophage oxidative metabolism. These results indicated that the calves have an active immune response with particularities for this age group and it does not become mature until six months of life. Despite of the macrophages alveolar are already efficiency from the 135 days of age, they become more reactive at 150 days. After this moment, a regulatory and/or humoral response begins at 165 days of life, as the balance of Th1 and Th2 profiles are reached at 180 days of calves life

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-05-18T12:21:04Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Arissa Felipe Borges - 2013.pdf: 8506033 bytes, checksum: 5e9de67542df7e057a413d653adfb783 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-05-18T13:20:11Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Arissa Felipe Borges - 2013.pdf: 8506033 bytes, checksum: 5e9de67542df7e057a413d653adfb783 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-05-18T13:20:11Z (GMT). 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Monocyte-derived macrophages were incubated with promastigote forms and the infection was assessed under light microscopy (infection index = % infected macrophages x the mean number of parasites per macrophage) after 4 h or 48 h incubation. The NBT assay was used to evaluate the production of superoxide anion. Treatment with PAF 10-10 M, 3 h before the addition of the parasites, increased infection index after 4 h of incubation (Medium vs PAF: 212 vs 324, p <0.05), whereas the infection decreased after 48 h of incubation when PAF was added together with parasites (554 vs 181, p <0.05). The effect of PAF seems to be on macrophages and not on parasites, since the treatment of parasites before incubation with the cells decreased the infection index after 4 h (p <0.05). It was observed that treatment of macrophages with rIFNg, PAF and LPS simultaneously intensified the decreasing of infection index, but the results were not significantly different of those from cultures treated with only PAF. Treatment of macrophages with a PAF antagonist, PCA 4248, 30 min before incubation with the parasites caused a significant increase of the infection index in a concentration-dependent manner (p <0.05) after 48 h. The effect of PCA 4248 was observed only when it was present during the first 4 h of incubation. The inhibition of the reactive oxygen intermediates (ROI) and nitric oxide (NO) production with apocynin and aminoguanidine, respectively, increased the infection (Medium vs apocynin: 200 vs 501; vs Aminoguanidine: 389, p <0.05). In parallel, it was showed that L. (V.) braziliensis induces the production of ROI (superoxide anion) which is further increased by exogenous or endogenous PAF. In conclusion, PAF modulates phagocytosis and increases the microbicidal activity depending on the concentration, contributing to the control of the human macrophage infection with L. (V.) braziliensis. The data showed that Leishmania (V.) braziliensis induces the production of ROI and NO in human macrophages, and suggested that PAF-enhanced microbicidal activity is mediated by an increased production of ROI. The data indicate that PAF activates human macrophages, and can play an important role in the control of the infection by L. (V.) braziliensis. / O fator ativador de plaquetas (PAF) é produzido por macrófagos durante a inflamação e infecções. O papel do PAF na leishmaniose, doença causada pelo protozoário Leishmania spp ainda não está completamente elucidado. Neste trabalho foi avaliado se o PAF é capaz de modular a infecção de macrófagos humanos com L. (V.) braziliensis. Macrófagos foram derivados de monócitos e incubados com formas promastigotas, sendo a infecção avaliada sob microscopia de luz (Índice de infecção = % macrófagos infectados x número médio de parasitos por macrófagos), após 4 h ou 48 h de incubação. O ensaio do NBT foi utilizado para avaliar a produção de ânion superóxido. O tratamento com o PAF 10-10 M, 3 h antes da adição dos parasitos, aumentou o índice de infecção após 4 h de incubação (Meio vs PAF: 212 vs 324, p < 0,05), enquanto diminuiu este índice após 48 h de incubação, quando o PAF foi adicionado junto com os parasitos (554 vs 181, p < 0,05). O efeito do PAF parece ser nos macrófagos e não nos parasitos, uma vez que o tratamento dos parasitos antes da incubação com as células diminuiu significantemente a infecção após 4 h (p < 0,05). Foi observado que o tratamento dos macrófagos com rIFNg, PAF e LPS simultaneamente, apesar de causar uma redução mais acentuada nos índices de infecção, não mostrou diferença estatisticamente significativa em relação ao tratamento com o PAF sozinho. O tratamento dos macrófagos com um antagonista de PAF, o PCA 4248, 30 min antes da incubação com os parasitos causou um aumento significante do índice de infecção, de maneira dependente da concentração (p < 0,05), após 48 h. O efeito do PCA 4248 foi observado somente quando este estava presente durante as primeiras 4 h de incubação. A inibição da produção de reativos intermediários do oxigênio (ROI) e óxido nítrico (NO), com apocinina e aminoguanidina, respectivamente, aumentou a infecção (Meio vs Apocinina 10-3 M: 200 vs 501; vs Aminoguanidina 10-3 M: 389, p < 0,05). Em paralelo, a quantificação da produção de ânion superóxido, demonstrou que L. (V.) braziliensis induz a produção de ROI e que esta produção pode ser aumentada pelo PAF exógeno ou endógeno. Em conclusão, o PAF modula a fagocitose e aumenta a atividade microbicida, dependendo da concentração, contribuindo para o controle da infecção de macrófagos humanos com L. (V.) braziliensis. A infecção de macrófagos humanos com L. (V.) braziliensis induz a produção de ROI e NO, sendo sugerido que o PAF aumenta a atividade microbicida dos macrófagos via aumento da produção de ROI. Os dados indicam que o PAF ativa os macrófagos humanos, podendo ser relevante no controle da infecção por L. (V.) braziliensis.

Submitted by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2015-10-15T19:25:17Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Ildefonso Alves da Silva Junior - 2013.pdf: 3624734 bytes, checksum: a431bde2aa4d96da0132f877c14e72bd (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2015-10-15T19:27:35Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Ildefonso Alves da Silva Junior - 2013.pdf: 3624734 bytes, checksum: a431bde2aa4d96da0132f877c14e72bd (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-10-15T19:27:35Z (GMT). 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(L.) amazonensis: MAB6 and PH8) were cultured in Grace´s insect medium and the amount of metacyclic forms was evaluated by using morphometry, Bauhinia purpurea lectin (BPL, to L. (Viannia) braziliensis) or 3A1-La antibody (to L. (L.) amazonensis) negative selection, flow cytometry and Complement-resistance test after 2, 6 and 10 days of culture. Human monocyte-derived macrophages from healthy donors, activated or not with interferon gamma (IFN) and lipopolysaccharide (LPS), were infected with parasites from different days of culture or with selected metacyclic forms with BPL/3A1-La (1:1 parasite: macrophage) for 24 or 72 h. Growth patterns were similar among the isolates. Stationary-phase promastigotes (6, 10 days) showed morphological changes such as a reduction of the cell body and an increase in the flagellum length, in comparison to the parasites of the 2nd day. Leishmania. (L.) amazonensis promastigotes of the 6th and 10th day of culture presented higher length of the cell body and flagellum than L. (Viannia) braziliensis isolates. In stationary phase there was a significant increase in the percentage of metacyclic forms detected by the four techniques used (M2903: 71-86%; IMG3: 41-85%; PPS6m: 39-76%; PH8: 38-69% e MAB6: 47-84%; 6th day, medians of the techniques used). Despite the four techniques demonstrated similar metacyclogenesis profiles for all isolates evaluated, metacyclic forms densities varied with the technique and the day of culture. The BLP/3A1-La selection consistently identified the highest frequencies of metacyclic forms for all isolates (6th day) among the four techniques. Metacyclogenesis of the isolates was confirmed in in vitro macrophage infection assays which showed a significant increase of the index of infection with parasites of the 6th and 10th day compared to those of the 2nd day (24 or 72 h). No significant differences in capability to infect macrophages were detected between unfractionated or 6th day-selected metacyclic forms. The isolates showed different profiles of susceptibility to macrophage microbicidal mechanisms. The M2903 and PH8 strains were the most susceptible whereas MAB6 isolate was the most resistant among the isolates. As high amounts of metacyclic forms were present in all isolate cultures, considering BPL/3A1-La selection, the results suggest that resistance/susceptibility to macrophage control mechanisms is an intrinsic characteristic of the isolates. To evaluate the metacyclogenesis of clinical isolates together with the ability of parasites to infect human macrophages sets the conditions for obtaining efficient parasites to establish a successful infection what is critical for the evaluation of the pathogenesis and natural immune response in leishmaniasis. / A Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA), causada por protozoários Leishmania, acomete a pele e/ou as mucosas nasal e orofaríngea. Durante o ciclo de transmissão, as formas promastigotas procíclicas crescem no intestino do inseto vetor e diferenciam-se em formas promastigotas metacíclicas infectantes, por um processo chamado de metaciclogênese, que também ocorre em culturas axênicas in vitro. O objetivo deste estudo foi avaliar a metaciclogênese in vitro de isolados L. (Viannia) braziliensis e L. (L.) amazonensis, provenientes de pacientes com diferentes formas clínicas de LTA, usando diferentes metodologias, e a capacidade destes isolados em infectar macrófagos humanos. As curvas de crescimento (L. (V.) braziliensis: IMG3, PPS6m, M2903 e L. (L.) amazonensis: MAB6 e PH8) foram realizadas em meio Grace e após 2, 6 e 10 dias de cultivo, a quantidade de formas metacíclicas foi avaliada por meio de morfometria, ensaio de seleção com a lectina de Bauhinia purpurea (BPL, para L. (V.) braziliensis) ou anticorpo 3A1-La (para L. (L.) amazonensis), citometria de fluxo e ensaio de resistência ao Complemento. Macrófagos humanos derivados de monócitos de doadores sadios, ativados ou não com interferon gama (IFN e lipopolissacarídeo (LPS), foram infectados com os parasitos de diferentes dias de cultivo ou formas metacíclicas selecionadas com BPL/3A1-La (1:1, parasito:macrófago) por 24 ou 72 h. Os perfis das curvas de crescimento in vitro foram similares para todos os isolados. Parasitos da fase estacionária do crescimento (6, 10 dias) apresentaram alterações morfológicas, como a diminuição do tamanho do corpo celular e um aumento do comprimento do flagelo, em relação aos parasitos do 2º dia. As formas promastigotas L. (L.) amazonensis do 6º e do 10º dia de cultura apresentaram maiores comprimentos do corpo celular e do flagelo do que os parasitos L. (V.) braziliensis. Na fase estacionária houve um aumento significante da porcentagem de formas metacíclicas detectadas pelas quatro técnicas (M2903: 71-86%; IMG3: 41-85%; PPS6m: 39-76%; PH8: 38-69% e MAB6: 47-84%; 6º dia, valores min e max). Apesar das quatro técnicas mostrarem um similar perfil de metaciclogênese para todos os isolados avaliados, as densidades de formas metacíclicas variaram conforme a técnica utilizada, dependendo do dia de cultura. A técnica de seleção com BPL/3A1-La foi a que detectou maiores frequências de formas metacíclicas para todos os isolados no 6o dia. A metaciclogênese dos isolados foi confirmada nos ensaios de infecção in vitro dos macrófagos, mostrando um aumento significante no índice de infecção com parasitos do 6º e 10º dia em relação àqueles de 2o dia (24 ou 72 h). Não foram atestadas diferenças entre os índices de infecção de macrófagos incubados com parasitos totais ou formas metacíclicas selecionadas do 6º dia. Os isolados mostraram diferentes perfis de suscetibilidade aos mecanismos microbicidas dos macrófagos. As cepas M2903 e PH8 foram mais suscetíveis, enquanto o isolado MAB6, mais resistente. Como as quantidades de formas metacíclicas nas culturas, considerando a técnica de seleção BPL/3A1-La, foram elevadas para todos os isolados, os resultados sugerem que a resistência/suscetibilidade aos mecanismos de controle dos macrófagos seja uma característica intrínseca do isolado. Avaliar a metaciclogênese de isolados clínicos, simultaneamente à capacidade dos parasitos em infectar macrófagos humanos, define as condições necessárias para a obtenção de parasitos eficientes em estabelecer uma infecção, para uma adequada avaliação da patogenia e da resposta imune natural na leishmaniose.

Submitted by Cláudia Bueno (claudiamoura18@gmail.com) on 2015-11-30T16:56:25Z No. of bitstreams: 2 Tese - Sheyla Maria Rondon Caixeta BONFIM - 2014.pdf: 8198505 bytes, checksum: 0f84b8e65f24477c5179e31a085ce655 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-12-01T06:39:29Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Sheyla Maria Rondon Caixeta BONFIM - 2014.pdf: 8198505 bytes, checksum: 0f84b8e65f24477c5179e31a085ce655 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-12-01T06:39:29Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese - Sheyla Maria Rondon Caixeta BONFIM - 2014.pdf: 8198505 bytes, checksum: 0f84b8e65f24477c5179e31a085ce655 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2014-06-06 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Paracoccidioides is a fungal human pathogen that causes systemic mycosis paracoccidioidomycosis (PCM). Infection occurs via inhalation of fungal propagules by the host and macrophages are important in the initial contention of the fungus through innate mechanisms. In this study, analysis of proteomic profile of yeast cells of Paracoccidioides, isolate Pb18, recovered from infection in macrophages J774 A1 so as to identify molecules that are expressed in this condition and could represent targets for new antifungal therapies. The analysis of differential protein expression could be detected 181 proteins with induction of expression and decreased expression was observed in 245 proteins in Pb18. The data show up regulation of proteins involved in the processes on the alternative carbon metabolism such as gluconeogenesis, beta-oxidation of fatty acids and amino acids catabolism. Proteins with decreased levels of expression include those related to protein synthesis and glycolysis. Aditionally proteins involved in oxidative stress response and cell defense exhibit increased levels of expression such as superoxide dismutase, heat shock proteins, cytochrome c peroxidase and thioredoxins. A mutant was generated to assess the importance of the enzyme cytochrome c peroxidase during infection suggesting involvement in a complex system of protection against oxidative stress, reinforcing role in the survival of the fungus. The proteomic profile of Paracoccididioides sp in response to internalization in macrophages, first described, reflects significant remodeling of fungal metabolism against oxidative stress and highlighting the versatility of the fungus to adapt to the hostile environment of the macrophage seeking new strategies survival. / O fungo Paracoccidioides é um patógeno humano causador da micose sistêmica paracoccidioidomicose (PCM). A infecção ocorre através da inalação de propágulos do fungo pelo hospedeiro e os macrófagos são importantes na contenção inicial do fungo por meio de mecanismos inatos. Neste estudo realizamos a análise do perfil proteômico de células leveduriformes de Paracoccidioides, isolado Pb18, recuperadas da infecção em macrófagos J774 A1 para identificar moléculas que são expressas nesta condição e poderiam representar alvos para novas terapias antifúngicas. Nas análises de expressão diferencial de proteínas foi possível detectar 181 proteínas com indução da expressão e a diminuição da expressão foi observada em 245 proteínas em Pb18. Os dados obtidos revelam a regulação positiva de proteínas nos processos envolvidos no metabolismo alternativo do carbono como gliconeogênese, beta-oxidação de ácidos graxos e catabolismo de aminoácidos. As proteínas com diminuição nos níveis de expressão incluem aquelas relacionadas à glicólise e síntese proteica. Ainda proteínas envolvidas na resposta ao estresse oxidativo e defesa celular apresentam aumento nos níveis de expressão tais como superóxido dismutase, proteínas de choque térmico, tioredoxinas e citocromo C peroxidase. Um mutante foi gerado para avaliar a importância da enzima citocromo c peroxidase durante a infecção sugerindo o envolvimento em um complexo sistema de proteção contra o estresse oxidativo, reforçando papel na sobrevivência do fungo. O perfil proteômico de Paracoccididioides spp em resposta à internalização em macrófagos, descrito pela primeira vez, reflete significativo remodelamento do metabolismo do fungo frente ao estresse oxidativo e ressalta a versatilidade do fungo em adaptar-se ao ambiente hostil do macrófago buscando novas estratégias de sobrevivência.