Introdução: Dentre as diversas formas modificadas da lipoproteína de baixa densidade (LDL), a LDL eletronegativa, LDL (-), contribui para o processo aterosclerótico, promovendo o recrutamento leucocitário para a intima arterial e modulando a resposta inflamatória. Mimotopos são moléculas que podem se ligar à porção variável de um anticorpo, a enzimas ou a receptores. Os peptídeos mimotopos da LDL (-) são moléculas capazes de mimetizar a conformação de epítopos expostos apenas quando a LDL sofre modificações in vivo. Objetivo: Avaliar os efeitos de peptídeos mimotopos da LDL(-), previamente selecionados pela técnica de phage display e denominados p1A3 e p2C7, em células endoteliais e macrófagos. Metodologia: Avaliou-se a atividade dos peptídeos mimotopos sobre a expressão de RNAm de genes relacionados tanto à ativação quanto à disfunção endotelial, assim como a atividade citotóxica e a captação dos peptídeos por células endoteliais (HUVEC, HAEC e EA.Hy 926). Verificou-se também a atividade pró-inflamatória dos peptídeos em cultura primária de macrófagos murinos derivados da medula óssea (BMDM), investigando-se a ativação do complexo proteico inflamassoma, assim como a internalização dos peptídeos por essas células, utilizando citometria de fluxo e microscopia confocal. Resultados: As células endoteliais e os macrófagos internalizaram os peptídeos mimotopos p1A3 e p2C7. Nos macrófagos houve inibição (50%) da internalização dos peptídeos p1A3 e p2C7 na presença de brefeldina A, indicando que esses peptídeos são majoritariamente captados por endocitose independente de clatrina. Nas células HAEC, observou-se 25% de inibição da captação de ambos os peptídeos se bloqueando o receptor scavenger LOX-1 com anticorpo anti-LOX-1. Quanto à atividade citotóxica, observou-se acentuada redução na atividade mitocondrial das células endoteliais EA.Hy 926 e HAEC apenas com o peptídeo p1A3, não sendo observada citotoxicidade para os macrófagos tanto para p1A3 quanto p2C7 nas concentrações estudadas (12,5 a 200 ug/mL). Nos macrófagos, o peptídeo p2C7 induziu o aumento da expressão de RNAm de genes relacionados com a polarização para o fenótipo M1 (iNOS, TNF-α, IL-1α) e da produção de •NO, assim como, a ativação do sinal 1 (transcricional) do complexo proteico inflamassoma, o que também se observou para a LDL (-). O peptídeo p1A3 modulou a expressão gênica da linhagem HAEC, diminuindo a expressão de RNAm dos genes relacionados à proliferação celular (VEGFr1 e 2, TGFβ, PDGFβ e eNOS). Conclusão: Os peptídeos mimotopos p1A3 e p2C7 interagem com as células endoteliais e macrófagos de maneiras distintas. O p2C7 induz uma resposta pró-inflamatória em macrófagos, mimetizando a LDL (-), sugerindo assim, que esse peptídeo possa atuar como um DAMP (padrão molecular associado ao perigo) importante para o processo inflamatório da placa aterosclerótica. / Introduction: Among the different subtypes of modified low-density lipoprotein (LDL), the electronegative LDL [LDL (-)] contributes to the progression of atherosclerosis, promoting leukocyte recruitment into the arterial intima and modulating the inflammatory response. Mimotopes are molecules capable of binding to the variable portion of an antibody, to enzymes or receptors. The mimotope peptides of LDL (-) are molecules mimicking the conformation of epitopes exposed only when LDL undergoes in vivo changes. Objective: To evaluate the effects of two mimotope peptides of LDL (-), previously selected the by phage display and called p1A3 and p2C7, on endothelial cells and macrophages. Methodology: We evaluated the activity of the mimotope peptides on gene mRNA expression related to both the activation and endothelial dysfunction as well as the cytotoxic activity and uptake of peptides by endothelial cells (HUVEC, HAEC and EA.Hy 926). It was also investigated the pro-inflammatory activity of the peptides on murine primary macrophage derived from bone marrow (BMDM), evaluating the activation of the protein complex inflammasome, as well as the internalization of peptides by these cells by flow cytometry and confocal microscopy. Results: The endothelial cells and macrophages internalized both peptides. In macrophages, brefeldin A inhibited the internalization of p1A3 and p2C7 around 50%, indicating that these peptides are mostly taken up by clathrin-independent bulk endocytosis. In HAEC it was observed a 25 % inhibition of the uptake of both peptides by blocking the LOX scavenger receptor with an anti-LOX-1 antibody. In relation to cytotoxicity, a reduction on mitochondrial activity was induced by p1A3 peptide only in endothelial cells (EA.Hy 926 and HAEC). No cytotoxic activity was observed for p2C7 peptide in macrophages or endothelial cells at the studied concentration range (12.5 to 200 µg/mL). In macrophages, the p2C7 peptide increased mRNA expression of genes related to the polarization to M1 phenotype (iNOS, TNF-α and IL-1α) and of •NO production, as well as, protein complex signal 1 activation (transcriptional) what was also observed for LDL (-). The p1A3 peptide modulated the expression of genes related with cell proliferation (VEGFr1 e 2, TGF?β, PDGFβ and eNOS) in HAEC. Conclusion: The mimotope peptides p2C7 and p1A3 interact with the endothelial cells and macrophages by different ways. The p2C7 induces a pro-inflammatory response in macrophages, mimicking LDL (-), thus suggesting that this peptide can act as a DAMP (Damage-associated molecular pattern) important in the inflammatory process of atherosclerotic plaque.

Com o avanço da idade observamos a queda na eficiência do Sistema Imunológico, estando relacionada ao aumento da morbidade e mortalidade em idosos. Dentre as células do sistema imunológico encontramos os macrófagos que garantem ao organismo a capacidade de defesa contra infecções, proliferação de células tumorais e reparo de tecidos. Uma das formas de reverter ou até mesmo restaurar algumas das funções imunológicas comprometidas com o processo de envelhecimento é a utilização da prática de exercício aeróbio moderado. Por este motivo, estudamos o efeito do treinamento moderado em natação sobre a função e o metabolismo de macrófagos de ratos envelhecidos. Em macrófagos obtidos da cavidade peritoneal, observamos uma melhora da capacidade funcional, através do aumento das funções de aderência, quimiotaxia e produção de peróxido de hidrogênio (H2O2) e óxido nítrico (NO-), que foram acompanhadas pelo aumento no metabolismo de glicose (aumento de consumo e da enzima hexoquinase), contribuindo para a melhora da função imune no envelhecimento. / Disorders of the immune function contribute to the high incidence of infections and cancer among elderly people. Macrophages play a crucial role in immune response, destroying bacteria, parasites, viruses and tumour cells through various mechanisms of action. Exercise is able to induce changes and modulate the immune response. The aim of the present work was to evaluate the function and metabolism of macrophages obtained from old rats submitted to moderate exercise training. Sedentary adult (2 – 4 months), old (15 – 18 months) and trained old rats were studied. The results show an increase in the function of macrophages obtained from the peritoneal cavity of trained old rats compared with old rats, regarding chemotaxis, hydrogen peroxide and nitric oxide production, as well a enhanced glucose consumption and increased maximal activity of the enzymes hexoquinase and glutaminase. In summary, our results indicate that exercise (moderate training) stimulates some functional aspects of macrophages of old rats, with a concomitant increase in glucose metabolism.

A artrite induzida por pristane (PIA) em camundongos AIRmax homozigotos para o alelo R e S do gene Slc11a1 foi usada para avaliar a influência do polimorfismo deste gene na resposta imune, mais especificamente na ativação de macrófagos peritoneais durante a PIA. Estudos anteriores mostraram que a presença do alelo S do gene Slc11a1 aumentou a incidência e a severidade da PIA em AIRmaxSS, sugerindo que este gene ou outro próximo esteja interagindo com o loci da inflamação para modular a PIA. O tratamento com pristane nos animais AIRmaxSS induziu infiltrado intenso composto por linfócitos, monócitos/macrófagos e neutrófilos. Macrófagos AIRmaxSS apresentaram perfis de expressão gênica e celular exacerbados durante a PIA, com expressão/produção elevada de H2O2, NO, IL-1b, IL-6, TNF-a e várias quimiocinas. Entretanto, o alelo R do gene Slc11a1 foi capaz de regular a intensidade de ativação do macrófago de forma mais eficiente que o alelo S e controlar desenvolvimento da artrite. Houve acometimento do rim, pulmão e timo durante a PIA. Nossos dados sugerem que o gene Slc11a1 modula a ativação dos macrófagos envolvidos na suscetibilidade a PIA e estas linhagens representam um modelo murino alternativo para o estudo da artrite reumatoide. / Pristane-induced arthritis (PIA) in AIRmax mice homozygous for Slc11a1 R and S allele was used in this study to characterize the role of Slc11a1 polymorphisms on immune response, more specifically in the activation of peritoneal macrophages during PIA. Previous reports showed the presence of S allele of Slc11a1 increased the incidence and severity PIA in AIRmaxSS, suggesting that this gene or another closed-linked gene interacts with inflammatory loci to modulate PIA. Pristane treatment induced intense infiltration of lymphocytes, monocytes/macrophages and neutrophils in AIRmaxSS animals. AIRmaxSS macrophages demonstrated exacerbated cellular and gene expression profiles during PIA, with higher expression/production of H2O2, NO, IL-1b, IL-6, TNF-a and chemokines. However, Slc11a1 R allele could be regulating macrophage activation intensity more efficiently than the S allele and control the development of arthritis. There was involvement of kidney, lung and thymus during PIA. Our data suggest that the Slc11a1 gene modulates macrophage activation involved in PIA susceptibility and these lines represent an alternative murine model of rheumatoid arthritis.

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As micobactérias têm preferência por tecidos bem oxigenados pelo pulmão onde irão desenvolver a infecção e ativação do sistema imunológico. Um dos primeiros tipos celulares envolvidos na tentativa de controle da infecção são os macrófagos residentes que irão fagocitar as micobactérias e produzir espécies reativas nitrogênio e oxigênio na tentativa de destruir o patógeno além de produzir citocinas que irão auxiliar na ativação da resposta imune adquirida. O tratamento da TB é feito através do uso de antibióticos, mas no período pré-antibióticos, a vitamina D (1,25(OH)2D3) era utilizada como forma de tratamento. A vitamina D é um hormônio esteroide que já se mostrou capaz de afetar a resposta imunológica a doenças infecciosas como a TB por meio da produção de catalecidina. Dessa forma, o objetivo do presente trabalho foi avaliar o efeito da vitamina D na atividade microbicida de macrófagos infectados com as linhagens atenuada (BCG) e selvagem (ATCC19274) de M. bovis. Foram utilizadas células da linhagem RAW 264.7 infectadas com as linhagens BCG e ATCC19274, tratadas com 1nM, 10nM e 100nM da forma ativa de vitamina D (1,25(OH)2D3). O teste de viabilidade celular demonstrou que as concentrações de 1,25(OH)2D3 utilizadas não são tóxicas para as células. Através da técnica de ELISA observamos que a 1,25(OH)2D3 tende a diminuir a produção das citocinas IL-6 e IL10. A contagem dos bacilos fagocitados realizada após coloração por Ziehl-Neelsen demonstrou que há diminuição na carga bacilar de forma proporcional ao aumento da concentração de 1,25(OH)2D3 corroborando com a diminuição da viabilidade das bactérias determinada pela contagem de CFU em lisado celular. Em relação à dosagem de óxido nítrico (NO), foi observado aumento proporcional à concentração de 1,25(OH)2D3. Em conclusão, esses dados sugerem que a diminuição na carga bacilar e menor número de CFU no lisado celular possa ser consequência do tratamento com 1,25(OH)2D3 que afeta algum mecanismo microbicida dos macrófagos, e que este mecanismo afetado pela 1,25(OH)2D3 possa ser a produção de óxido nítrico. / Tuberculosis (TB) is the second leading cause of death from infectious disease worldwide. The Mycobacterium bovis is one of the TB causing agent that disperses when the infected person coughs or sneezes releasing droplets containing mycobacteria. This mycobacteria have a preference for tissues well oxygenated such as lungs where they will develop the infection, initiating the immune response. One of the first cell types involved in controlling the infection are the resident macrophages which will phagocytose mycobacteria and within the phagosome, producing reactive species nitrogen and oxygen in an attempt to destroy the pathogen, in addition to cytokines production, which construct the acquired immune response. TB treatment is done by the use of antibiotics, but in the pre-antibiotic period, vitamin D was used as a treatment. Vitamin D is a steroid hormone that has been shown to affect the immune response to infectious diseases such as TB by catalecidina production. Thus, the objective of this study was to evaluate the effect of vitamin D in the microbicidal activity of macrophages infected with the attenuated (BCG) and virulent (ATCC19274) strains of M. bovis. For this study were used cell line RAW 264.7 infected with the BCG strains and ATCC19274, treated with 1nM, 10nM and 100nM of the active form of vitamin D. The cell viability test showed that the concentrations used are non-toxic. Through ELISA we observed that vitamin D tends to decrease the production of IL-6 and IL-10 cytokines. The bacilli count after Ziehl-Neelsen staining demonstrated that there is a reduction in bacterial load in proportion to the concentration of vitamin D, confirming the reduction of viability of bacteria determined by counting CFU. The dosage of nitric oxide (NO) showed increased proportional to the concentration of vitamin D. We can conclude that a reduction in bacterial load and CFU count may be a result of treatment with vitamin D that affects some microbicidal mechanism of macrophage, and that this mechanism affected by vitamin D may be nitric oxide production.

A leishmaniose é causada por tripanossomatídeos do gênero Leishmania que infectam preferencialmente macrófagos. Vários factores influenciam a forma e a severidade da doença: a espécies de Leishmania e a resposta imune do hospedeiro. Considerando a importância da ativação dos macrófagos na infecção, o potencial papel de CD100 na modulação da ativação dos macrófagos e os nossos dados anteriores de que CD100 solúvel (sCD100) aumenta a infectividade pelo parasita, pretendemos caracterizar os efeitos do CD100 na infecção por Leishmania (L.) amazonensis. Descobrimos que ambos, promastigotas e amastigotas, são mais infecciosos na presença de sCD100 e que o receptor CD72 é o responsável pelo aumento da infecção. Experimentos in vitro indicaram índice de infecção similares entre macrófagos nocautes para CD100 e selvagens, mas curiosamente, os animais nocautes infectados desenvolveram lesões significativamente menores do que os selvagens, sugerindo que sCD100 presente em outras células pode influenciar a formação da lesão. / Leishmaniasis is caused by trypanosomes of the genus Leishmania that preferentially infect macrophages. Several factors influence the form and severity of the disease: the species of Leishmania and the host immune response. Considering the importance of the activation of macrophages in infection, potential role of CD100 in the modulation of macrophage activation and our previous data that CD100 soluble (sCD100) increase the infectivity of the parasite, we intend to characterize the effect of CD100 in infection with Leishmania (L.) amazonensis. We found that both promastigotes and amastigotes, are most infectious in the presence of sCD100 and the CD72 receptor is responsible for the increased infection. In vitro experiments indicated similar infection rate of macrophages to CD100 knockouts and wild type, but interestingly, the infected knockout animals developed significantly smaller lesions than wild type suggesting that sCD100 present in other cells may influence lesion formation.

O aumento dos casos de diarreia causados por EPECa evoca a sua capacidade de adaptação e patogenicidade. O objetivo deste estudo foi investigar o comportamento da EPECa na interação com macrófagos (fagocitose e antifagocitose). O estudo da fagocitose das cepas LB7 (O55:H7), LB13 (O111:abH9) e BA487 (O55:H7) em macrófagos J774A1 mostrou sobrevivência intracelular em presença de NO. EPECa impede a maturação do vacúolo parasitóforo. A sobrevivência em macrófago derivado de C3H/HeJ, mutante do tlr4, foi reduzida e em macrófago de C57BL/6 não foi observada. O fator antigagocítico (Fa) secretado pela LB7, já detectado pelo grupo, apresenta natureza peptídica e a sua ação não é específica de EPEC, pois inibe também a fagocitose de Shigella e látex. A secreção do Fa foi avaliada em M9 e DMEM. O produto do fracionamento do sobrenadante do cultivo por SPE apresentou Fa em ambos meios. No entanto, a secreção em M9 é baixa e não foi detectada por HPLC. O Fa do DMEM obtido por HPLC mostrou-se citotóxico. Novos meios de cultivo deverão ser estudados para a identificação do Fa. / The increase in the numbers of diarrhea cases caused by aEPEC denotes its adaptability and pathogenicity. The objective of this study was to investigate the behavior of aEPEC in the interaction with macrophages (phagocytosis and anti-phagocytosis). Strains LB7 (O55:H7), LB13 (O111:abH9) and BA487 (O55:H7) were shown to survive within J774A1 macrophages in the presence of NO. aEPEC prevents maturation of the parasitophorus vacuole. Survival inside C3H/HeJ derived macrophages, mutant for tlr4, decreased and was not observed in C57BL/6 derived macrophages. The anti-phagocytic factor (AF), secreted by LB7 and previously detected by our group, is peptidic and its action is not specific to EPEC as it also inhibits phagocytosis of Shigella and latex. Secretion of AF was evaluated in M9 and DMEM. AF was detected after SPE fractionation of both culture media. However, the secretion in M9 is low and was not detected by HPLC. The DMEM HPLC fraction containing AF was cytotoxic. New culture media will be studied for the identification of AF.

A diabetes tipo 1 (DT1) está associada `a inflamação estéril (IE) e maior susceptibilidade a sepse. A sepse induz a síndrome da resposta inflamatória sistêmica (SIRS) e a inflamação pulmonar aguda (ALI). O leucotrieno (LT) B4 produzido condições inflamatórias induz a expressão de MyD88 em macrófagos (MA). Hipotetizamos que a DT1 induz a síntese de LTB4 promovendo a IE e isto contribui para SIRS, susceptibilidade a sepse e ALI. Os diabéticos apresentaram níveis elevados de LTB4 e IL-1b no soro e seu MA expressaram mais MyD88/STAT-1. A expressão de STAT-1 foi induzida por c-Jun de forma dependente de LTB4. O tratamento com insulina restaurou os níveis de LTB4 e STAT-1/MyD88 e a inibição de LTB4 restaurou os níveis de MyD88 e IL-1b. Na sepse, a inibição de 5LO prolongou a sobrevida dos diabéticos e diminuiu a SIRS menos IL-1b e IL-10 no soro e TNF-a e IL-1b na cavidade peritoneal. O pulmão dos diabéticos apresentaram ALI menos intensa que se correlacionou com um altos níveis de SOCS-1, baixos níveis de MyD88 e falha na ativação de NFkB nos macrófagos alveolares. / Type 1 diabetes (T1D) is associated with sterile inflammation (SI) and increased sepsis susceptibility. Sepsis induces Systemic Inflammatory Response Syndrome (SIRS) and Acute Lung Injury (ALI). Leukotriene (LT) B4 is produced in inflammatory conditions and induces MyD88 expression in macrophages (MA). We hypothesized that T1D induce LB4 that promotes SI contributing to SIRS, sepsis susceptibility and ALI. Diabetics presented higher levels of LTB4 and e IL-1b in the serum and MA expressed more MyD88/STAT-1. STAT-1 expression was induced by c-Jun on LTB4 dependent manner. Insulin treatment restored LTB4 and STAT-1/MyD88 levels and inhibition of LTB4 restored MyD88 and IL-1b levels. During sepsis, 5LO inhibition increased diabetics survival and inhibited SIRS- lower levels of IL-1b and IL-10 in the serum and TNF-a and IL-1b in the peritoneal cavity. Lungs from diabetics presented milder ALI that correlated with high levels of SOCS-1, low levels of MyD88 and impaired NFkB activation in alveolar macrophages.

Os piretróides sintéticos, em especial os do tipo II, como a cialotrina, são extensivamente utilizados para o controle de uma ampla variedade de ectoparasitas que acometem os animais de produção. Entretanto, no Brasil e em outros países, sua utilização vai além da saúde animal, sendo utilizados também em saúde pública, no controle de diversos vetores, como é o caso do vetor da dengue, dentre outros. Visto que a cialotrina modifica a atividade de macrófagos peritoneais, o objetivo deste trabalho foi investigar os prováveis mecanismos através dos quais este piretróide modifica a atividade destas células. Os presentes resultados, analisados em seu conjunto, mostram de maneira inequívoca que a cialotrina tem um efeito direto e/ou indireto sobre a atividade de macrófagos peritoneais. Especificamente, observou-se neste trabalho que o praguicida causou em ratos: 1 ? marcação fos positiva em neurônios do núcleo paraventricular do hipotálamo (NPH), após a dose de 3,0 mg/kg/dia; 2 - diminuição do percentual e intensidade de fagocitose de macrófagos peritoneais ativados e avaliados por citometria de fluxo; 3 - diminuição dose-dependente da produção de nitrito (NO2); 4 ? diminuição do percentual e intensidade de fagocitose de macrófagos peritoneais ativados, em ratos adrenalectomizados e/ou tratados com metirapona (inibidor da síntese de corticosterona) e RU 486 (antagonista de receptores glicocorticóides) com a finalidade de modular os níveis de glicocorticóides, e tratados com 3,0 mg/kg/dia de cialotrina; 5 ? aumento dos níveis de noradrenalina hipotalâmica em animais tratados com a dose de 3,0mg/kg/dia de cialotrina; 6 - diminuição do percentual e intensidade de fagocitose, bem como diminuição da produção de nitrito de macrófagos peritoneais ativados, em ratos simpatectomizados químicamente com 6-OHDA; 7 - diminuição dose dependente do percentual e intensidade de fagocitose, bem como da produção de nitrito de macrófagos peritoneais ativados e tratados in vitro com 10 e 100 nM de cialotrina. No entanto, não observamos: 1 ? alterações na produção de nitrito realizada por macrófagos peritoneais ativados, em ratos adrenalectomizados e/ou tratados com metirapona e RU 486; 2 - alterações na viabilidade celular induzida pelo tratamento in vitro com a cialotrina na concentração de 10 e 100 nM e 3 ? alterações nos efeitos da cialotrina sobre a atividade de macrófagos tratados in vitro com os ligantes de receptores benzodiazepínicos periféricos. Em conjunto, os presentes dados mostram que a cialotrina interfere com a atividade de macrófagos por atuar indiretamente, através da ativação do eixo Hipotálamo-Hipófise-Adrenal (HHA), e/ou diretamente sobre os mesmos modulando sua atividade. É muito provável que o efeito resultante do tratamento in vivo com este praguicida esteja ligado à somatória destas ações / Synthetic pyrethroids, particularly those of type II, such as cyhalothrin, are extensively used in agriculture for the control of a broad range of ectoparasites in farm animals. However, in Brazil and some other countries, these pyrethroids have also been used in public health, for the control of insects that are known to be vectors of diseases such as dengue. Since it has been suggested that cyhalothrin alters activity of peritoneal macrophages, the objective of our study was to investigate the putative mechanisms for the changes induced by pyrethroid in these cells. The results presented here show, in an unequivocal manner, that cyhalothrin has a direct or indirect (or both) effect on the activity of peritoneal macrophages. We specifically observed in this work that this pesticide induced in rats: 1- Fos-positive immunostaining in neurons of the paraventricular nucleus of the hypothalamus (NPH), after 3.0 mg/kg/day; 2 ? a reduction in the percentage and intensity of phagocytosis by activated peritoneal macrophages, evaluated by flow cytometry; 3 ? a dose-dependent reduction in nitrite production (NO2); 4 ? a reduction in the percentage and intensity of phagocytosis by activated peritoneal macrophage from adrenalectomized rats treated or not with metirapone (inhibitor of corticosterone synthesis) or RU 486 (antagonist of glicocorticoids receptors) with the propose of modulating the levels of glicocorticoids, and treated with 3.0 mg/kg/day of cyhalothrin; 5 ? an increase in the hypothalamic levels of noradrenaline in rats treated with 3.0 mg/kg/day of cyhalothrin; 6 ? a reduction in the percentage and intensity of phagocytosis and also a decrease in the production of nitrite by activated peritoneal macrophages, after chemical sympatectomy with 6-OHDA; 7 ? a dose-dependent reduction of the percentage and intensity of phagocytosis, and also a decrement in nitrite production by activated peritoneal macrophages treated in vitro with 10 and 100 nM of cyhalothrin. However, we found no differences on: 1 ? nitrite production by activated peritoneal macrophages after adrenalectomy, treated or not with metirapone or RU 486; 2 ?cell viability of peritoneal macrophages treated in vitro with 10 and 100 nM of cyhalothrin, and 3 ? the effects of cyhalothrin on macrophage activity after in vitro treatment with peripheral benzodiazepine receptor ligands. Altogether, the present results show that cyhalothrin interferes with the activity of peritoneal macrophages by acting indirectly, via activation of the hypothalamus-pituitary-adrenal axis, or directly on these cells, altering their activity. As a matter of fact, it is quite possible that the results of in vivo cyhalothrin treatment on macrophage activity would be related to the combined effect of these direct and indirect influences

INTRODUÇÃO: Os macrófagos associados aos tumores (MAT) sólidos estão relacionados à progressão ou à involução das neoplasias, dependendo da diferenciação em M1 ou M2. No carcinoma basocelular (CBC), as formas mais agressivas apresentam aumento de macrófagos às custas do fenótipo M2, se comparadas às formas não invasivas. O tratamento do CBC sólido pela Cirurgia Micrográfica de Mohs (CMM) proporciona elevados índices de cura, porém recidivas podem ocorrer. OBJETIVOS: Comparar a população total de macrófagos e as subpopulações M1 e M2 nos casos de CBC sólidos recidivados e não recidivados após exérese pela CMM. METODOLOGIA: Cortes histológicos obtidos a partir dos blocos de parafina de nove casos de CBC sólidos recidivados após CMM e de 18 casos de CBC sólido operados pela CMM não recidivados foram marcados imunoistoquimicamente para iNOS, CD204, CD163 e CD68. A expressão desses marcadores foi analisada pelo método de análise de imagens. RESULTADOS: Não foram encontradas diferenças significativas entre os grupos em relação à porcentagem média de células M1 (INOS), células M2 (CD163 e CD204) e total de células (CD68). CONCLUSÃO: A recidiva dos tumores estudados não ocorreu por influência do MAT, mas pode ser decorrente da falha técnica na realização da CMM ou de algum outro mecanismo imunológico desconhecido / INTRODUCTION: The macrophages associated with solid tumors (MAT) are related to the progression or regression of tumors, depending on the differentiation in M1 or M2. In basal cell carcinoma (BCC), the most aggressive forms show an increase in macrophages at the expense of M2 phenotype compared to non-invasive forms. The treatment of BCC solid by Mohs micrographic surgery (MMS) provides high cure rates, but relapses can occur. OBJECTIVES: To compare the total population of macrophages and subpopulations M1 and M2 in cases of recurrent BCC solid and not recurrent after excision by MMS. METHODS: Histological sections obtained from paraffin blocks of 9 cases of recurrent solid CBC after MMS and 18 cases of solid CBC operated by MMS not relapsed were labeled immunohistochemically for iNOS, CD204, CD163 and CD68. The expression of these markers was analyzed by image analysis. RESULTS: No significant differences were found between the groups in relation to the average percentage of M1 cells (INOS), M2 cells (CD163 and CD204) and total cells (CD68). CONCLUSION: The recurrence of the tumors studied did not occur under the influence of MAT, but may be due to technical failure in achieving MMS or some other unknown immune mechanism

O Histoplasma capsulatum é um fungo dimórfico, patogênico e responsável por graves lesões pulmonares. A infecção é adquirida pela inalação de conídios e posterior conversão para leveduras nos alvéolos e bronquíolos, onde são fagocitadas por macrófagos alveolares residentes e leucócitos que migram para o local da infecção. Recentemente, demonstramos que animais infectados com H. capsulatum e tratados com inibidor da síntese de prostaglandinas apresentaram diminuição de carga fúngica nos pulmões e baço, aumento da produção de nitrito e da fagocitose de leveduras por macrófagos alveolares, e maior sobrevivência, quando comparados com os animais somente infectados. Porém, neste estudo não foram determinados quais subtipos de prostaglandinas participam na patogênese da histoplasmose. Vários grupos de pesquisa têm demonstrado que PGD2 e PGE2 podem ter ações biológicas distintas quanto à remoção de microrganismos no hospedeiro. Desta maneira, é fundamental o entendimento do papel da PGD2 e da PGE2 nos mecanismos efetores dos macrófagos na defesa do hospedeiro, especialmente na histoplasmose. Portanto, o objetivo deste estudo foi investigar a participação da PGD2 e PGE2 na infecção experimental por H. capsulatum. Assim, demonstramos que a PGD2 aumentou a fagocitose e mecanismos microbicidas de macrófagos alveolares infectados in vitro com H. capsulatum. Observamos ainda que a 15dPGJ2, metabólito da PGD2, aumentou somente a fagocitose, e PGE2 inibiu os mecanismos efetores do macrófago. Mostramos ainda o aumento de BLT1 em macrófagos alveolares após adição de PGD2, e a possível ligação desta ao BLT1, e de LTB4 em DP2. Além disso, caracterizamos micropartículas de PLGA contendo PGD2 (MS-PGD2), e investigamos seus efeitos. O tamanho, carga elétrica e morfologia das micropartículas foram adequados para um tratamento intranasal e para fagocitose por macrófagos alveolares. As MS-PGD2 foram fagocitadas e capazes de ativar NF-B, e consequentemente, influenciar na produção de nitrito, IL-1, TNF-, IL-6 e TGF-. Com base nestes dados, avaliamos os efeitos do tratamento da MS-PGD2 ou da MS-PGE2 em animais infectados com H. capsulatum. Estas foram administradas via intranasal em animais infectados e tratados ou não com celecoxibe. Verificamos a diminuição da carga fúngica nos pulmões e baço, diminuição do infiltrador celular no espaço broncoalveolar e de citocinas inflamatórias no pulmão após tratamento com MS-PGD2. Contrariamente, após tratamento da MS-PGE2 observamos maior carga fúngica nos pulmões e baço, e aumento da inflamação no tecido e maior produção de IL-10. Além disso, demonstramos que no 21° dia após infecção, referente ao 7° dia após o término do tratamento com MS-PGD2, a carga fúngica manteve-se reduzida nos pulmões, comprovando assim a eficácia deste tratamento. Posteriormente, utilizando inibidores específicos, HQL-79 e CAY10526, mostramos respectivamente o papel protetor da PGD2 e o deletério da PGE2 na histoplasmose. Em conjunto, nossos dados contribuíram para o entendimento das funções antagônicas da PGD2 e PGE2 nesta micose. / Histoplasma capsulatum is a pathogenic dimorphic fungus and responsible for severe pulmonary lesions. Infection is acquired by inhalation of conidia and posterior conversion to yeasts in the alveoli and bronchioles, in which they are phagocyted by resident alveolar macrophages and leukocytes that migrate to the local infection. Recently, we demonstrate that mice infected by H. capsulatum and treated with inhibitor of prostaglandins synthesis presented a decrease in fungal burden in lungs and spleen, increase in nitrite production and uptake of yeasts by alveolar macrophages, and more survival, when compared with animals only infected. However, in this study, it was not determined what subtypes of prostaglandins participate in pathogenesis of histoplasmosis. Many research groups have demonstrated that PGD2 and PGE2 can have different biological effects regarding to microorganisms elimination in the host. Thus, it is primordial the understanding about the role of PGD2 and PGE2 on effector mechanisms of macrophages in host defense, especially in histoplasmosis. Therefore, the aim of this study was to investigate the role of PGD2 and PGE2 on experimental infection by H. capsulatum. So, we verify that PGD2 increased the uptake and microbicidal mechanisms of alveolar macrophages infected in vitro by H. capsulatum. 15dPGJ2, a PGD2 metabolite, increased only the phagocytosis, and PGE2 inhibited the effector mechanisms of macrophages. Among these results, we showed an increase of BLT1 expression on alveolar macrophages after addition of PGD2, and a possible binding of this mediator to BLT1, and of LTB4 to DP2. Later, as tool of therapeutic investigation, we used PGD2 encapsulation in biodegradable polymer, PLGA, in order to preserve its stability. Size, zeta potential and morphology were adequate for a possible intranasal treatment and uptake by alveolar macrophages. MS-PGD2 were phagocyted and able to activate NF-B, and consequently, to modulate nitrite, IL-1, TNF-, IL-6 and TGF- production. In this context, we purpose a treatment of the infection with MS-PGD2, in comparison to treatment with PGE2. MS-PGD2 were administrated via intranasal in infected mice, treated or not with celecoxib. We verify a decrease of fungal burden in lungs and spleen, less cellular infiltrate and decrease of some inflammatory cytokines. In contrast, after treatment of MS-PGE2, we observed greater fungal burden in the lungs and spleen, and an increase of the tissue inflammation and production of IL-10. Furthermore, we show that on day 21 after infection, referring to the 7th day after the treatment with MS-PGD2, fungal burden remained reduced in the lungs, thus proving the effectiveness of the treatment. Subsequently, using specific inhibitors, HQL-79 and CAY10526, respectively show the protective role of PGD2 and in deleterious to PGE2 in histoplasmosis. Together, our data contribute to the understanding of the antagonistic functions of PGD2 and PGE2 in this mycosis.