A sintomatologia dolorosa é um dos principais estímulos capaz de caracterizar ações nocivas e, portanto, é um importante mecanismo de defesa. No estudo da dor orofacial, as alterações musculoesqueléticas de cabeça, pescoço e face caracterizam um grupo de sintomatologia dolorosa, denominadas de Disfunções Temporomandibulares (DTMs). As DTMs possuem etiologia multifatorial, incluindo alterações estruturais, sensoriais e influências emocionais-motivacionais, atingindo cada vez mais indivíduos na sociedade atual. Para o tratamento desta patologia é necessário o conhecimento detalhado dos mecanismos moleculares e fisiológicos envolvidos, os quais têm sido objetivo de alguns pesquisadores nos últimos anos. Entretanto, ainda se faz necessário a continuidade deste estudo para caracterização minuciosa das DTMs, com novas possibilidades de intervenção e tratamento da sintomatologia dolorosa. Como principais fatores associados à DTM, a inflamação e as alterações estruturais e moleculares da articulação temporomandibular (ATM) desempenham importante papel nesta patologia. Ainda, sabe-se que a dor, em particular a dor inflamatória, promove a ativação de mecanismos locais e sistêmicos, os quais liberam mensageiros fundamentais para a modulação da resposta do organismo, como proteínas e citocinas inflamatórias gerando a inflamação propriamente dita. Segundo a literatura, durante o estabelecimento da resposta inflamatória, muitas proteínas, principalmente as denominadas, metaloproteinases da matriz extracelular (MMPs), são responsáveis pela reabsorção de colágeno, e de outras macromoléculas estão intimamente envolvidas neste processo. Além disso, as MMPs também participam da reorganização no sistema nervoso que ocorre juntamente com os processos inflamatórios persistentes. Desde meados da década de 90, tem sido utilizado com considerável sucesso a laserterapia de baixa intensidade para o tratamento das DTMs na clínica odontológica. Dentro desta perspectiva, estudos demonstraram que este método de tratamento possui atividade antiinflamatória e colaboram no reparo tecidual. Estudo recente demonstrou que o desenvolvimento da inflamação bilateral das ATMs promoveu alteração das MMPs no gânglio trigeminal, bem como desencadeou um processo de alodinia mecânica e hiperalgesia orofacial. Desta forma, o presente projeto teve como objetivo, verificar se o uso da laserterapia de baixa intensidade (LLLT) altera a expressão das MMPs no gânglio trigeminal, nas diferentes fases de desenvolvimento da inflamação intraarticular, (1, 3, 5, 7 e 10 dias) bem como na alodinia mecânica e da hiperalgesia orofacial em ratos. Os resultados obtidos neste trabalho mostraram que a LLLT em ratos inflamação persistente das ATMs, induzida por administração de Adjuvante Completo de Freund, reduziu a alodinia mecânica, avaliada pelo teste de von Frey, bem como a hiperalgesia orofacial no teste da formalina. Adicionalmente, observou-se redução do aumento da MMP-9 e da MMP-2, nos ratos tratados com LLLT. / Painful symptoms is one of the main stimuli that characterizing threatening situation and represent an important defense mechanism. In the study of orofacial pain, musculoskeletal abnormalities of the head, neck and face featuring a group of painful symptoms, which are known as Temporomandibular Disorders (TMD). The TMDs have a multifactorial etiology, including structural changes, sensory and emotional-motivational influences. For the treatment of this pathology is necessary detailed knowledge of the physiological and molecular mechanisms involved, which have been the goal of several researchers in the last few years. However, it is still necessary to continue this study for detailed characterization of TMDs, with new possibilities for intervention and treatment of painful symptom. It is noteworthy that inflammation, as well as molecular and structural changes of the temporomandibular joint (TMJ) play an important role in TMD. Also, it is known that pain, particularly inflammatory pain, promotes the activation of local and systemic mechanisms which release essential mediators, such as proteins and inflammatory cytokines generating inflammation itself. Furthermore, during the establishment of the inflammatory response, many proteins, in particular, the extracelular matrix metalloproteinases (MMPs) are responsible for the resorption of collagen and other macromolecules. Moreover, MMPs also participate in the reorganization that occurs in the nervous system during persistent inflammatory processes. Since the 90s, has been used with considerable success to low intensity laser therapy for the TMD treatment in clinical dentistry. In addtion, studies have shown that this therapy has antiinflammatory activity and collaborate in tissue repair. A recent study has demonstrated that the development of bilateral inflammation of TMJs promote alteration of MMPs expression in the trigeminal ganglion, and triggered a process of orofacial mechanical allodynia and hyperalgesia. Thus, this study aimed to determine whether the use of low intensity laser therapy (LLLT) alters the expression and activity of MMPs in the trigeminal ganglion, at different stages of development of intraarticular inflammation (1,3, 5, 7 and 10 days), as well as mechanical allodynia and hyperalgesia orofacial in rats. So, the results showed that LLLT, reduced mechanical allodynia (as measured by the von Frey test), and orofacial hyperalgesia (formalin test) in rats submmitted to persistent inflammation of TMJs induced by administration of Freund\'s Complete Adjuvant (CFA). Additionally, whereas CFA administration induced an increase of MMP-9 and MMP-2 expression in the trigeminal ganglion, LLLT reduce these effects.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:07:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao mariana faleiro part 1.pdf: 60728 bytes, checksum: 82e5bf30cd60c4752f1de660f88797ed (MD5) Previous issue date: 2010-03-02 / Humans and dogs show dysplastic lesions in the prostate, such as prostatic intraepithelial neoplasms (PIN) and proliferative inflammatory atrophy (PIA), which are studied due to their malignance potential. The matrix metalloproteinases (MMP) are a family of proteolytic enzymes thought to play an important role in tumor invasion and metastasis in face of their ability to degrade the extracellular matrix (ECM) and basement membrane. The plasminogen activator (PA) system has been suggested to play a central role in cell adhesion, migration, wound healing, angiogenesis, inflammation, regulation of growth factors and tumor invasion. The receptor of plasminogen activator type activator (uPAR) is a component of the PA, with a range of expression in tumor cell and stromal cells. So, this study was aimed to evaluated the expression and correlation between MMP-2 (gelatinase A) and MMP-9 (gelatinase B) as well as the expression of uPAR in normal canine prostate tissue and also in tissue with proliferative disorders, including benign prostatic hyperplasia (HPB), PIA, PIN and carcinoma. And therefore establish relation among the role of these enzymes in the remodeling of the extracellular matrix (ECM) and in the process of tumor invasion and metastasis. For this, it was performed immunohistochemical staining in tissue microarray of 149 paraffin-embedded fragments of prostate tissue selected from 57 prostates of non-castrated adult dogs with or without prostatic diseases. A total of 298 cores were analyzed and it was made 363 diagnoses: 36 (9.9%) normal, 49 (13.5%) BPH, 132 (36.3%) PIA, 75 (20.7%) PIN and 71 (19.6%) carcinomas. It was observed differences in cytoplasmatic immunohistochemical staining by MMP-2 and MMP-9 antibodies in relation to the cell number and intensity of labeling of the acinar epithelial and stromal perilobular cells between normal tissue and in those with proliferative disorders. A correlation between MMP-2 and MMP-9 antibodies occurred just in canine prostates with PIA in relation to the number of labeled cells in acinar epithelium and perilobular stroma, as well as, the staining intensity in the perilobular stromal cells. In relation to uPAR, it was observed differences of immunohistochemical staining of uPAR antibodies in canine prostate. Likewise, there was over expression in dysplastic and neoplasic specimens, but not in normal and benign prostate tissue. A number of epithelial cells labeled for uPAR showed variation among the diagnoses, except between PIN and carcinoma. Less intensity of labeling was observed in acinar epithelial cells of normal prostates compared with PIA, PIN and carcinoma. However, in the normal cells and in those with PIA, there was a difference in the number of cells, as well as in the intensity of stromal labeling. The intensity of labeling of stromal perilobular cells was higher in the PIA. PIA-A (accentuated) and PIA-M (moderated) cells showed greater intensity staining stroma and stromal cells labeled for uPAR, respectively. Thus, this study concludes that there was variation in gelatinases and uPAR expression in canine prostate according to the lesion. Also, there was Less labeling in normal and BPH and higher in PIA, PIN and carcinoma prostate tissues. The correlation between MMP-2 and MMP-9 in canine prostates with PIA indicates that the inflammation likely influenced the activity of these enzymes with simultaneous increase in their expression. The uPAR high expression in inflammatory and neoplasic tissues suggests high ECM proteolytic activity in these situations / Nas espécies humana e canina lesões displásicas da próstata, como a neoplasia intra-epitelial prostática (PIN) e a atrofia inflamatória proliferativa (PIA), são estudadas quanto ao potencial de malignidade. As metaloproteinases (MMP) são enzimas proteolíticas envolvidas no processo de invasão tumoral e metástase, causando destruição de barreiras biológicas como a matriz extracelular (MEC) e a membrana basal (MB). O sistema ativador de plasminogênio (PA) compreende proteínas com ação na adesão celular, regulação da migração, cicatrização, angiogênese, inflamação, regulação de fatores de crescimento e invasão tumoral. O receptor de ativador de plasminogênio tipo uroquinase (uPAR) é um dos componentes do PA, com variação de expressão em células neoplásicas e estromais. Este trabalho teve por objetivo verificar a expressão e a correlação entre MMP-2 e MMP-9, assim como a expressão do uPAR no tecido prostático canino normal e com alterações proliferativas, incluindo a hiperplasia prostática benigna (HPB), a PIA, a PIN e o carcinoma, buscando avaliar o papel dessas proteínas no remodelamento da MEC e no processo de invasão tumoral e metástase. Para isso, foi realizada a imunoistoquímica em lâminas de microarranjo tecidual (TMA), com 149 cores selecionadas de 57 próstatas de cães adultos, não castrados, com ou sem histórico de afecções prostáticas. Foram analisados, para cada anticorpo, 298 cores, perfazendo 363 diagnósticos, sendo 36 (9,9%) normais, 49 (13,5%) HPB, 132 (36,3%) PIA, 75 (20,7%) PIN e 71 (19,6%) carcinomas. Foi possível observar diferença de imunomarcação citoplasmática de MMP-2 e MMP-9 em relação ao número de células e intensidade de imunomarcação nas células epiteliais acinares e estromais periacinares em relação aos diagnósticos. A correlação entre os anticorpos MMP-2 e MMP-9 ocorreu em próstatas caninas com PIA quanto ao número de células imunomarcadas no epitélio acinar e no estroma periacinar, bem como quanto à intensidade de imunomarcação nas células estromais periacinares. Quanto ao uPAR, houve diferença na imunomarcação em relação ao diagnóstico, com maior expressão nas displásicas e neoplásicas em relação ás normais e com HPB. O número de células epiteliais imunomarcadas para uPAR variou entre os diagnósticos, exceto entre PIN e carcinoma. Menor intensidade de imunomarcação epitelial foi constatada nas próstatas normais em relação às com PIA, PIN e carcinoma. Entre as normais e com PIA houve diferença no número de células e intensidade de imunomarcação estromal. A intensidade de imunomarcação estromal foi maior nas com PIA. As PIA-M (inflamação moderada) e PIA-A (inflamação acentuada) apresentaram maior intensidade de imunomarcação estromal e células estromais imunomarcadas para uPAR, respectivamente. Concluiu-se que há variação na expressão das gelatinases e do uPAR na próstata canina, de acordo com a lesão, com menor expressão nas normais e com HPB e maior naquelas com PIA, PIN e carcinoma. A correlação entre MMP-2 e MMP-9 em próstatas caninas com PIA indica que a inflamação influencia a atividade dessas enzimas, com aumento simultâneo na expressão de ambas no microambiente inflamatório. Ainda, o aumento na expressão do uPAR nos microambientes inflamatório e neoplásico sugere maior atividade proteolítica na MEC nesses casos

As metaloproteinases da matriz (MMPs) foram identificadas na saliva, na placa dental, na dentina e no cemento. Este trabalho teve como objetivos: Estudo I (I) - avaliar a expressão de MMP-2 e MMP-9 presentes na saliva total e parotidiana e no fluido gengival crevicular (FGC) de pacientes portadores e não portadores de lesões cervicais não cariosas (LCNC); Estudo II (II) - investigar se a presença de MMP-8 e -9/TIMPs poderia influenciar a remineralização de lesões artificialmente criadas na superfície radicular, com ou sem desgaste por abrasão. Os métodos utilizados foram: (I) Coleta de amostras de saliva e do FGC de 32 pacientes, com (n=16) e sem LCNC (n=16). A atividade gelatinolítica das MMPs foi avaliada através de análise zimográfica e Western Blot. (II): Espécimes de dentina humana radicular foram obtidos. O grupo controle G1(10) não sofreu nenhum tratamento. Os demais segmentos radiculares foram desmineralizados G2(60). O Grupo A não foi submetido à escovação e o Grupo B foi submetido à abrasão por escovação em uma máquina de escovação simulada. G2(10) foi apenas desmineralizado, G3(10) desmineralizado e remineralizado, e os Grupos G4(10), G5(10), G6(10), G7(10) foram desmineralizados e remineralizados em presença de tampão neutro, TIMP, MMP-8 e -9, MMP-8,-9 e TIMP, respectivamente. Para a análise elemental, as concentrações de Ca+2, P, Mg+2 assim como a relação molar Ca/P e Mg/Ca foram determinadas através de uma sonda eletrônica para microanálise (EPMA). A análise qualitativa por retrodispersão (BSE) foi realizada para demonstrar a distribuição global da densidade mineral. Os resultados (I) mostraram que a principal gelatinase presente, tanto na saliva total quanto no FGC, é a proMMP-9. Na saliva secretada pela glândula parótida, não foram detectadas bandas indicando a presença de gelatinases. Os resultados do estudo (II) indicaram que os espécimes escovados apresentaram maior conteúdo de Ca+2 a 20µm e maior conteúdo de Mg+2 a 30 e 50µm. Em presença de TIMPs, ocorreu uma redução do conteúdo de Ca+2 a 20µm. Para os espécimes não escovados, em todas as profundidades, as amostras incubadas com MMPs apresentaram maiores valores de Ca+2. Portanto, pode-se concluir que (I) a comparação entre pacientes com e sem LCNC mostrou não haver diferença estatisticamente significante quanto à atividade gelatinolítica; (II) quando não inibidas pelos TIMPs, as MMPs degradaram o colágeno completamente desmineralizado na superfície radicular, permitindo melhor recalcificação na superfície subjacente. Esse fenômeno foi também facilitado pela abrasão por escovação. / Matrix metalloproteinases (MMPs) have been identified in saliva, plaque, gingival crevicular fluid (GCF), dentin and cementum. Study (I) aimed at evaluating the presence and quantity of gelatinases MMP-2 and MMP-9 in total and parotid saliva and in GCF (GCF) of subjects with and without NCCL. Study (II) aimed at investigating whether the presence of matrix metalloproteinase (MMP)-8 and - 9/TIMPs would influence the remineralization of artificial root lesions with and without mechanical wear. (I) Total stimulated saliva, parotid saliva, and GCF from patients with (n=16) and without NCCL (n=16) were collected and assessed for gelatin zymography and for western immunoblot analysis. (II) Human root segments from Group A (n=35) were not brushed and from Group B (n=35) were subjected to machine-controlled brushing, simulating mechanical wear. Specimens from Group 1 (control, n=10) were left untreated. Group 2 (n=10), was just demineralized; Group 3 (n=10) was demineralized and remineralized. The other samples G4 (n=10), G5 (n=10), G6 (n=10), G7 (n=10) were subjected to remineralization with HEPES buffer, tissue inhibitor of matrix metalloproteinase-2 (TIMP-2), activated MMP-8 and MMP-9 and activated MMP-8, MMP-9 and TIMP-2, respectively. Ca+2, P, Mg+2 concentrations as well as Ca/P and Mg/Ca molar ratios were determined through an Electron Probe Microanalyser (EPMA). (I) Densitometric analysis revealed that the main gelatinase was proMMP-9. No statistically significant difference was observed for MMP-2 and MMP-9 levels, separately. In parotid saliva, gelatinolytic activity was very low or absent. Western immunoblots revealed that, while little immunoreactivity was detected for MMP-2, there was positive immunoreaction for MMP-9, both in total saliva and in GCF. Gelatinases do not seem to originate from parotid gland. (II) The results indicated that the brushed specimens presented higher Ca+2 levels at 20 µm and higher Mg+2 content at 30 and 50 µm. Ca+2 content at 20 µm decreased in the presence of TIMPs. For the non-brushed specimens, in all depths, samples incubated with MMPs showed highest Ca+2 values. It can be concluded that (I) the main gelatinase present in the oral cavity is MMP-9. No significant differences were found in total gelatinolytic activity among NCCL+ and NCCL- patients. (II) When not inhibited by TIMPs, MMPs degraded the completely demineralized collagen in the root surface, allowing for better recalcification in the deeper areas. This phenomenon was also facilitated by the brushing procedure.

A doença pulmonar obstrutiva crônica (DPOC) é uma das principais causas de morbidade crônica e mortalidade em todo o mundo e tem como principal manifestação o enfisema pulmonar, caracterizado pelo contínuo e progressivo remodelamento dos componentes da matriz extracelular (MEC). De acordo com estudos experimentais e clínicos esse remodelamento pode ser atribuído à ação proteolítica das metaloproteases de matriz (MMPs), especialmente da MMP-12, sobre os componentes da MEC, sendo a elastina considerada, até recentemente, a principal fibra alvo da proteólise. Dessa forma, só recentemente tem sido esclarecida a importância de outros componentes da MEC e outras MMPs, como as colagenases, no remodelamento da MEC. Sendo assim, o objetivo deste trabalho foi analisar a progressão do remodelamento das fibras no parênquima pulmonar e a expressão gênica das MMPs no início do desenvolvimento do enfisema. Para isso camundongos C57BL/6 receberam instilação intranasal de elastase pancreática suína (PPE 0,667 UI / Grupos ELA: n=40) ou o mesmo tratamento com solução salina (NaCl 0,9% / Grupos controle SAL: n=40). Os animais foram anestesiados, eutanasiados e separados em sub-grupos iguais (n=8) de acordo com o tempo após a instilação de PPE (1, 3, 6 horas, 3 e 21 dias) para remoção dos seus pulmões. Foram medidos o intercepto linear médio (Lm) e as proporções do volume de colágeno tipo I e tipo III, elastina e fibrilina. A expressão gênica para metaloproteinases (MMP-1a, MMP-1b, MMP-8, MMP-12 e MMP-13) no parênquima pulmonar foi avaliada por RT-PCR em tempo real. Os resultados demonstraram que o Lm aumentou desde 3 horas após a instilação de PPE, atingindo os maiores aumentos no 3º e 21º dias, sugerindo uma progressão no alargamento alveolar. Em comparação com o grupo SAL, os grupos ELA apresentaram uma diminuição no colágeno tipo I (no 3º dia) e colágeno tipo III (a partir de 6 horas até 3 dias) em tempos posteriores ao aumento da expressão gênica para MMP-8 (a partir de 3 até 6 horas) e - 13 (a partir de 1 até 6 horas). Após 21 dias, o colágeno tipo III apresentou aumento e o colágeno tipo I retornou a valores semelhantes aos do seu respectivo grupo controle. A expressão gênica para MMP-12 aumentou nos grupos ELA em tempos anteriores (3 e 6 horas) aos que constatamos a redução na proporção de elastina no pulmão (3º dia), reforçando a importância já estabelecida da MMP-12 na quebra deste componente da MEC. A proporção de volume de elastina aumentou no grupo ELA em relação ao respectivo grupo SAL no 21º dia. Não houve aumento na expressão gênica da MMP-1b em nenhum momento e a MMP-1a não teve expressão mensurável em nenhum dos grupos. Não foram observadas diferenças entre os grupos experimentais na avaliação da fibrilina. Nossos resultados serão úteis para melhor elucidar as alterações dinâmicas nos componentes da MEC e a importância, não só da metaloelastase, mas também das colagenases em estágios iniciais do enfisema, fornecendo novas ferramentas para futuros estudos sobre possíveis alvos terapêuticos / Chronic obstructive pulmonary disease (COPD) is a major cause of chronic morbidity and mortality worldwide and has as the major manifestation pulmonary emphysema in which the components of the extracellular matrix (ECM) are in a continuous process of remodeling. According to experimental and clinical studies that remodeling can be attributed to proteolytic action of matrix metalloproteinases (MMPs), particularly MMP-12, on the ECM components, with elastin being considered until recently, the primary target fiber of proteolysis. Therefore, only recently has been clarified the importance of other components of the ECM and other MMPs such as collagenases on ECM remodeling. Thus, the objective of this study was to analyze the progression of lung parenchymal fibers remodeling and the gene expression of MMPs in the early development of emphysema. For this C57BL/6 mice were given intranasal instillation of porcine pancreatic elastase (PPE 0,667 IU / ELA groups: n=40) or the same treatment with saline (0.9% NaCl / SAL Control groups: n=40). The animals were anesthetized and euthanized divided into equal sub-groups (n=8) according to time after PPE instillation (1, 3, 6 hours, 3 and 21 days) to remove their lungs. The mean linear intercept (Lm) and the volume proportions of type I and type III collagen, elastin and fibrillin were measured. Gene expression of metalloproteinases (MMP-1a, 1b-MMP, MMP-8, MMP-12 and MMP-13) in the lung parenchyma was evaluated by Real Time RT-PCR. The results demonstrated that the Lm has increased from 3 hours after PPE instillation, with the highest increases reached at 3rd and 21th day, suggesting a progression in the alveolar enlargement. Compared to SAL group, ELA group showed a decrease in type I collagen (3rd day) and collagen type III (from 6 hours to 3 days) on later times to the increase in MMP-8 gene expression (from 3 to 6 hours) and - 13 (from 1 to 6 hours). After 21 days, type III collagen showed an increase and collagen type I returned to values similar to those of their respective control group. Gene expression for MMP-12 increased on PPE groups in earlier times (3 and 6 hours) at which we detected reduction in elastin proportion in the lung (3rd day), reinforcing the importance already established of MMP-12 in the breakage of this ECM component. The elastin volume proportion increased in PPE group compared to respective SAL group at 21st day. There was no increase in MMP-1b gene expression at any time and MMP-1a shows no measurable expression in either group. There were no differences between the experimental groups in the evaluation of fibrillin. Our results will be useful to better elucidate the dynamic changes in ECM components and the importance not only of metalloelastase but also of collagenases in the early stages of emphysema, providing new tools for future studies of potential therapeutic targets

Introdução: Injúria Renal Aguda (IRA) é uma patologia grave e com elevada incidência em pacientes críticos. Apesar do avanço no conhecimento fisiopatológico ocorrido nas últimas décadas, pouco desse conhecimento foi traduzido em terapia para IRA já instalada. Medidas preventivas para evitar a progressão da IRA em momentos iniciais da injúria continuam a ser o principal foco na terapia da IRA. Nesse contexto, o diagnóstico e determinação precoce da gravidade da injúria renal são fundamentais para evitar a progressão para estágios mais graves e diminuir a morbidade e a mortalidade associadas à síndrome. Objetivos: O objetivo principal deste estudo, foi avaliar se o padrão de elevação dos biomarcadores permite a detecção precoce do diagnóstico de IRA. E os objetivos secundários foram avaliar se os biomarcadores podem auxiliar na predição da gravidade da IRA, na necessidade de diálise e óbito. Métodos: Estudo prospectivo, unicêntrico, entre janeiro de 2012 e janeiro de 2015. Foram avaliados e incluídos pacientes com critérios de alto risco para IRA nas Unidades de Terapia Intensiva (UTI) clínicas e cirúrgicas. Características clínicas e demográficas foram avaliadas no início da internação e a evolução laboratorial e hemodinâmica dos pacientes foram acompanhadas durante as primeiras 48 horas de internação na UTI. Os biomarcadores precoces de injuria renal aguda séricos e urinários, assim como a bioquímica e microscopia urinária, foram analisados a cada 12 horas durante este período. IRA foi definida pelo critério da creatinina do KDIGO. Episódios de IRA com resolução em 3 dias foram definidos como transitória (IRAt) e episódios com duração maior que 3 dias como persistente (IRAp). Resultados: Durante o período estudado foram avaliados 376 pacientes, dos quais 70 preencheram os critérios de inclusão e 32 (46%) evoluiram com IRA. Noventa porcento dos pacientes incluídos no estudo foram pacientes em pós-operatorio. Não houve diferença nas características basais entre os grupos com IRA e sem IRA. A fração de excreção de sódio (FENa) foi maior no grupo com IRAp à admissão, entretanto foi menor que 1% em todos os grupos. O gradiente transtubular de potássio (TTKG) foi significativamente maior no 4º e 5º momentos no grupo com IRAp quando comparado aos outros grupos. Os níveis de Neutrophil Gelatinase-Associated Lipocalin (NGAL), tanto séricos como urinários foram significativamente maiores no grupo com IRAp em relação ao grupo IRAt e não IRA, assim como Liver-type Fatty Acid-Binding Protein (L-FABP) e o Kidney Injury Molecule-1 (KIM-1). Não se constatou diferença significativa entre os grupos em relação ao Tissue Inhibitor of Metalloproteinases-1 (TIMP-1), alfa e pi-Glutathione-transferase (alfa- GST e pi-GST). Entre os pacientes com diagnóstico de IRA pela creatinina sérica nos primeiros 2 dias de UTI, o emprego do NGAL sérico e/ou urinário possibilitaram o diagnóstico mais precoce da IRA em relação à creatinina em 59,3 % e 27,6% dos pacientes, respectivamente. O NGAL sérico e urinário foram preditores independentes de mortalidade e de necessidade de terapia de substituição renal à análise multivariada. Conclusão: Na IRA persistente a bioquímica urinária apresentou diferenças em relação à FENa e ao TTKG. A performance do NGAL sérico e urinário nesta população conseguiu antecipar o diagnóstico da IRA em relação ao critério da creatinina. O NGAL sérico e urinário foram preditores independentes de necessidade de terapia de substituição renal e mortalidade / Background: Acute kidney injury (AKI) is a syndrome with high incidence in critical ill patients and associated with severe complications. Although important advances has been achieved in the understanding of its physiopathology, this knowledge have not resulted in improvements in therapy for AKI. Preventive measures to avoid AKI progress at the initial phases of injury are still the main goal of AKI therapy. Therefore, early diagnosis and assessment of disease severity are essential to prevent disease progression and to reduce morbidity and mortality. Objectives: The main goal of this study was to evaluate whether a panel of biomarkers would allow early detection of AKI. Secondary endpoints were to evaluate whether biomarkers can predict the severity of AKI, need for dialysis and mortality in high-risk critical ill patients. Methods: We performed a prospective study between January 2012 and 2015. We recruited patients admitted in intensive care unit (ICU) with high risk for AKI. Clinical and demographic characteristics were recorded. Urinary biomarkers and urine biochemistry were measured sequentially every 12 hours during the first two days of ICU stay. AKI was defined according to KDIGO creatinine criteria. Patients were classified as having transitory AKI (tAKI) or persistent AKI (pAKI). Results: Of the 376 patients initially evaluated, 70 met the inclusion criteria. Thirty-two patients (46 %) met KDIGO criteria for AKI. Ninety percent of the patients in this study were surgical. The baseline characteristics were similar among all groups. The fractional excretion of sodium (FENa) was higher in pAKI group, and it was < 1% in all groups. In patients who developed pAKI the transtubular potassium gradient (TTKG) was significantly higher at 36h and 48h. Plasma and urinary Neutrophil Gelatinase-Associated Lipocalin (NGAL), Liver-type Fatty Acid-Binding Protein (L-FABP) and Kidney Injury Molecule-1 (KIM-1) were significantly higher in the pAKI group as compared to the t AKI and non AKI groups in different times of evaluation. There was no difference in levels of Tissue Inhibitor of Metalloproteinases-1 (TIMP-1), alfa and pi-Glutathione-transferase (alfa-GST and pi-GST) within the groups during the first 48 h of ICU admission. Based on the cutoff levels, plasma and urinary NGAL would determine earlier diagnosis in 59.3% and 27.6% patients in the first two days of ICU, respectively. In the multivariate analysis, plasma and urinary NGAL were independent predictors of need for dialysis and mortality. Conclusions: In this study population, persistent AKI have alterations in urinary physicochemical parameters such as FENa and TTKG. Plasma and urinary NGAL were early biomarkers for AKI diagnosis. Plasma and urinary NGAL were independent predictors of dialysis and mortality

O remodelamento vascular é uma resposta adaptativa a estímulos específicos, participando da fisiopatologia de diversas doenças cardiovasculares. Devido à intersecção de fatores de risco cardiovasculares relacionados tanto ao remodelamento vascular como à calcificação vascular (CV), propomos a investigação de mecanismos que inter-relacionam tais condições. Postulamos que camundongos ob/ob com obesidade e resistência à insulina têm resposta exacerbada de remodelamento vascular associado à CV quando comparado aos camundongos controles C57BL/6 (C57) após estímulo com vitamina D3 (VD) in vivo. Camundongos C57 e ob/ob (OB) machos foram injetados com 8x103 UI/kg de vitamina D3 intraperitoneal (IP) ou solução fisiológica (CT) durante 14 dias (n=6). Houve aumento da circunferência da lâmina elástica externa da aorta, determinando aumento da área circunferencial do vaso em camundongos OBVD. A hipervitaminose D aumentou o comprimento da lâmina elástica interna da aorta, aumentando o lúmen vascular em camundongos OBVD. Ocorreu também diminuição da espessura da parede do vaso em camundongos OBVD, caracterizando remodelamento vascular positivo hipotrófico. Observamos ainda maior deposição de colágeno na parede do vaso e elastólise em camundongos OBVD. O remodelamento vascular positivo em camundongos OBVD se correlacionou diretamente com o aumento da calcificação na aorta (R2=0,8; p < 0,003). Aortas de camundongos OBVD apresentaram aumento na expressão de espécies reativas de oxigênio (ERO), que foi associado a aumento da atividade de metaloproteinases de matriz (MMP). Estes resultados fornecem evidências que camundongos obesos, insulino-resistentes, e com diabetes tipo 2 desenvolveram remodelamento vascular positivo hipotrófico correlacionado diretamente com calcificação vascular em camundongos OBVD após estímulo com vitamina D3. O desenvolvimento de remodelamento vascular positivo hipotrófico neste modelo murino é possivelmente mediado pela ativação de MMP na parede da aorta e a geração de ERO pode ter contribuído para a ativação de MMP no nosso modelo / Vascular remodeling is a vessel response to mechanical and hemodynamic stimuli, which is a major determinant of changes in vessel lumen caliber. The mechanisms that influence arterial remodeling include calcification. We hypothesized that ob/ob mice develop positive vascular remodeling associated with calcification. We quantify and assess mechanisms of vascular remodeling and vascular calcification in ob/ob mice (OB) after vitamin D3 stimulation (VD) or phosphate buffered saline (CT), compared with (C57BL/6) mice. Both ob/ob (OBVD) and C57BL/6 (C57VD) mice received 8x103 IU/day of (IP) vitamin D3 for 14 days. Control ob/ob (OBCT) and C57BL/6 (C57CT) mice received IP phosphate buffered saline (PBS) for 14 days (n=6). Hypervitaminosis D increased the external and internal elastic length in aortas from OB mice, resulting in increased total vascular area and lumen vascular area respectively, which characterizes positive vascular remodeling. OBVD mice decreased the aortic wall thickness, resulting in hypotrophic vascular remodeling. We demonstrated increases in collagen deposition, elastolysis and calcification in the aortas of OBVD mice. These results showed a positive correlation between expansive vascular remodeling and vascular calcification in OBVD mice (R2=0,8; p < 0,003). Furthermore, aorta from OBVD increased oxidative stress, coincidently with augmented metalloproteinase activity. Our data provide evidence that obese type 2 diabetes mellitus and insulin-resistant mice (ob/ob) developed positive hypotrophic vascular remodeling correlated directly with increased vascular calcification in OBVD mice after chronic vitamin D3 stimulation. The development of positive hypotrophic vascular remodeling in this mouse model is possibly mediated by the activation in the aortic wall of MMP and ROS may have contributed to the activation of MMP in our model

Os tumores hipofisários mesmo sendo, em sua maioria, benignos, podem apresentar comportamento invasivo, com extensão para seio cavernoso, seio esfenoidal e clivo. As metaloproteinases de matriz tipo 2 (MMP-2) e 9 (MMP-9) e o inibidor tecidual de metaloproteinases-2 (TIMP-2) têm sido estudados em relação ao comportamento invasivo desses tumores, em especial quanto à invasão do seio cavernoso. Esse estudo teve como objetivo avaliar a expressão proteica das MMP-2, MMP-9 e do TIMP-2 nos tumores hipofisários e sua relação com invasão do seio cavernoso e, de maneira inédita, investigar a expressão dessas proteínas em nível plasmático. Adicionalmente, foram avaliadas a expressão dos RNAs mensageiros (RNAm) das MMP-2 e TIMP-2 com intuito de correlacioná-las com a expressão proteica no tecido tumoral, bem como a expressão do marcador de proliferação Ki67. Foram selecionados 77 casos, todos com amostras de tumor emblocado em parafina para análise imuno-histoquímica (IHQ). Destes, foram coletadas amostras de tumor fresco em 29 pacientes e de sangue periférico pré-operatório em outros 29 casos. A expressão proteica plasmática foi detectada de forma semi-quantitativa utilizando um arranjo de anticorpos em membrana comercial. A expressão dos RNAm das MMP-2 e TIMP-2 foi avaliada por reação em cadeia da polimerase quantitativo (qPCR) em tempo real. Do total de casos, 20 pacientes apresentavam tumores com invasão para o seio cavernoso. A expressão proteica tumoral das MMP-2, MMP-9 e TIMP-2 apresentou-se aumentada no grupo invasivo, contudo esta diferença não foi estatisticamente significante em relação ao grupo não- invasivo. A expressão plasmática das MMP-9 e TIMP-2 também não mostrou diferença entre os dois grupos e não se correlacionou com a expressão tumoral. A expressão plasmática da MMP-2 não foi detectada em nenhum caso. Quanto à expressão do RNAm das MMP-2 e TIMP-2, também não houve diferença significante entre os grupos e nem correlação com a expressão proteica tecidual ou plasmática. Foi observada uma diferença significante na dimensão tumoral [3.6 (2.5-5.2) x 2.0 (1.3-2.7); P < 0.001] e no índice do Ki67 [1.05 (0.27-25) x 0.5 (0.2-1.0); P < 0.001] entre os grupos invasivo e não-invasivo respectivamente. Em conclusão, em nossa coorte, não foi encontrada relação entre a expressão tecidual e plasmática das MMP-2, MMP-9 e TIMP-2 e a invasão para o seio cavernoso nos adenomas hipofisários / Pituitary tumors, although mostly benign, may present invasive behavior, with extension to the cavernous sinus, sphenoid sinus and clivus. Type 2 (MMP-2) and type 9 (MMP-9) matrix metalloproteinases and the metalloproteinase tissue inhibitor type 2 (TIMP-2) have been studied in relation to the invasive behavior of these tumors, especially regarding invasion of the cavernous sinus. The aim of this study was to evaluate the protein expression of MMP-2, MMP-9 and TIMP-2 in pituitary tumors and its relation with invasion of the cavernous sinus and, in an unprecedented way, to investigate the expression of these proteins at the plasma level. Additionally, expression of MMP-2 and TIMP-2 messenger RNAs (mRNAs) was evaluated in order to correlate with protein expression in tumor tissue, as well as Ki67 proliferation marker expression. A total of 77 cases were selected, all of them with paraffin embedded tumor samples for immunohistochemical analysis (IHC). Of these, fresh tumor samples were collected in 29 patients and preoperative peripheral blood in another 29 cases. Protein plasma expression was detected semi-quantitatively using a commercial membrane antibody array. Expression of MMP-2 and TIMP-2 mRNAs was evaluated by quantitative realtime polymerase chain reaction (qPCR). Of the total cases, 20 patients presented tumors invasive to the cavernous sinus. Tumor protein expression of MMP-2, MMP-9 and TIMP-2 was increased in the invasive group, not reaching, however, statistically significant difference as compared with the non-invasive group. Plasma expression of MMP-9 and TIMP-2 also did not differ between the two groups and did not correlate with tumor expression. Plasma expression of MMP-2 was not detected in any case. Concerning MMP-2 and TIMP-2 mRNA expression, there was also no significant difference between groups and no correlation with tissue or plasma protein expression was observed. A significant difference was observed in tumor size [3.6 (2.5-5.2) x 2.0 (1.3-2.7); P < 0.001] and in the Ki67 index [1.05 (0.27-25) x 0.5 (0.2-1.0); P < 0.001] between the invasive and non-invasive groups respectively. In conclusion, in our cohort, no relationship was found between the tissue and plasma expression of MMP-2, MMP-9 and TIMP-2 and the invasion of the cavernous sinus in pituitary adenomas

Considerando-se a localização intra-óssea das lesões periapicais, o diagnostico clinico e dificultado e a avaliação radiográfica não fornece informações suficientes para o diagnostico de um periodonto apical sadio pós-tratamento. Dessa maneira, o objetivo deste estudo foi comparar os achados radiográficos e por tomografia computadorizada de feixe cônico com a avaliação microscópica após tratamento de canais radiculares em dentes de cães e avaliar a participação das metaloproteinases da matriz (MMPs) na lesão periapical e nos tecidos em processo de reparação, assim como em cistos e granulomas periapicais obtidos de humanos. A seguir, os mecanismos envolvidos na cementogênese apical foram investigados utilizando células do ligamento periodontal de humanos. Foram induzidas lesões periapicais em dentes de cães e o tratamento endodôntico foi realizado em sessão única ou apos utilização de um curativo de demora a base de hidróxido de cálcio [Ca(OH)2]. Avaliações radiográficas e tomográficas foram realizadas previamente, após a indução das lesões periapicais e 180 dias apos o tratamento endodôntico. Os tecidos periapicais foram avaliados por meio de microscopia de luz, imunofluorescência, imunoistoquímica e RT-PCR em tempo real. In vitro, células do ligamento periodontal foram utilizadas para avaliar os efeitos da estimulação com Ca(OH)2 nos processos de migração, proliferação, diferenciação celular e mineralização. As vias de sinalização envolvidas na diferenciação cementoblastica foram investigadas por meio de inibidores bioquímicos da via das proteínas quinases ativadoras de mitose (MAPK), bloqueadores de canais de cálcio e silenciadores de RNA para proteínas quinases reguladas por sinal extracelular (ERK-1 / ERK-2). De acordo com os resultados obtidos, a tomografia computadorizada permitiu a detecção de lesões periapicais com maior sensibilidade e acuracia que a radiografia periapical convencional, utilizando-se a avaliação microscópica como padrão-ouro. Histologicamente, as lesões periapicais experimentalmente induzidas apresentaram bactérias distribuídas pelo sistema de canais radiculares e lacunas de reabsorção do cemento e estavam associadas a desorganização das fibras colágenas e alta expressão de MMPs. A presença das MMPs em processos inflamatórios periapicais de humanos (cistos e granulomas) foi confirmada. Nos dentes com lesão periapical submetidos ao tratamento endodôntico em sessão única o desfecho do tratamento endodôntico foi caracterizado pela manutenção ou progressão da lesão periapical e alta expressão de MMPs. Por outro lado, nos dentes submetidos ao tratamento endodôntico utilizando o Ca(OH)2 como curativo de demora, maior numero de espécimes apresentaram regressão da lesão periapical e houve modulação da expressão de MMPs pelo tratamento. Neste grupo foi evidenciada neoformação de cemento no forame apical. Células do ligamento periodontal estimuladas com Ca(OH)2 expressaram proteínas especificas de cementoblastos (CEMP-1, CAP) e foram capazes de sintetizar nódulos de mineralização, mediados via ERK MAPK. A ação do Ca(OH)2 ocorreu via canais de cálcio, uma vez que o bloqueio destes canais inibiu a fosforização de ERK-1 e ERK-2 e, portanto, a expressão de CEMP-1 e CAP. CEMP-1 estimulou a migração, proliferação e mineralização mediada por células, exercendo um papel central na cementogenese, uma vez que o bloqueio de CEMP-1 inibiu a migração celular e mineralização. Juntos, estes resultados permitem concluir que a tomografia computadorizada e superior a radiografia periapical convencional para detecção de lesões periapicais refratarias ao tratamento de canais radiculares. Ainda, o tratamento endodôntico realizado utilizando o hidróxido de cálcio como curativo de demora propiciou um reparo apical e periapical mais favorável do que o tratamento endodôntico em sessão única, possivelmente devido a capacidade do Ca(OH)2 induzir a diferenciação de células do ligamento em células com um fenótipo cementoblastico e posterior mineralização. / Clinical diagnosis of apical periodontitis is difficult due to the intraosseous nature of the disease and radiographic evaluation does not provide sufficient information to determine a healthy apical periodontium following root canal therapy. Therefore, the aim of this study was to compare the radiographic and cone beam computed tomographic findings with microscopic evaluation following root canal treatment in dogs teeth. Then, the presence of matrix metalloproteinases (MMPs) in apical periodontitis and during the healing phase following treatment was evaluated and compared to the expression of MMPs in periapical cysts and granulomas obtained from human. Finally, the mechanisms involved in apical cementogenesis were investigated using human periodontal ligament cells. Apical periodontitis was induced in dogs teeth and then root canal treatment was performed in a single visit or using calcium hydroxide [Ca(OH)2] as the root canal dressing. Tomographic and radiographic evaluations were performed prior to and following induction of apical periodontitis, and 180 days following root canal therapy. Periapical tissues were evaluated by conventional light microscopy, immunofluorescence, immunohistochemistry, and real time RT-PCR. In vitro, periodontal ligament cells were used to evaluate the effects of Ca(OH)2 treatment on cell migration, proliferation, differentiation, and mineralization. The signaling pathways triggered by treatment with Ca(OH)2 were investigated using mitogen activated protein kinase (MAPK) biochemical inhibitors, calcium channel blockers, and extracellular regulated protein kinase (ERK-1 / ERK-2) silencing RNAs. Based on the results obtained, apical periodontitis was detected with higher sensitivity and accuracy by means of cone beam computed tomography compared to conventional periapical radiographs, using microscopic evaluation as the gold standard. Histological evaluation revealed that teeth with apical periodontitis presented microorganisms throughout the root canal system and in areas with resorption of cementum. Apical periodontitis was characterized by collagen fiber disorganization and high expression of MMPs. The presence and activity of MMPs was confirmed in periapical inflammatory diseases (cysts and granulomas) obtained from humans. Root canal treatment outcome was characterized by maintenance or progression of apical periodontitis and high expression of MMPs in teeth submitted to root canal treatment in a single visit, whereas root canal treatment outcome in teeth submitted to root canal treatment using Ca(OH)2 as the root canal dressing, higher number of teeth presented reduced apical periodontitis and lower expression of MMPs. In this group, cementum neogenesis was evident in the apical foramina. Periodontal ligament cells stimulated with Ca(OH)2 expressed cementoblastic specific proteins (CEMP-1, CAP) and were able to synthesize mineralized nodules via ERK MAPK. The effects of Ca(OH)2 occurred via calcium channels, since their blockade prevented ERK-1 and ERK-2 phosphorylation and therefore expression of CEMP-1 and CAP. CEMP-1 stimulated cell migration, proliferation, and mineralization and it was central to cementogenesis because blockade of activity of CEMP-1 prevented cell migration and mineralization. Taken together, these findings demonstrate that cone beam computed tomography is superior to conventional periapical radiography for detection of refractory apical periodontitis. Furthermore, the root canal treatment using Ca(OH)2 as the root canal dressing permitted a more favorable outcome than the root canal treatment performed in a single visit, probably due to the ability of Ca(OH)2 induce cementoblastic differentiation of periodontal ligament cells and mineralization.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:30:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao_alessandro_menna_alves.pdf: 813449 bytes, checksum: 43f43131b0d8e54633d172ea87ffa722 (MD5) Previous issue date: 2013-03-18 / This dissertation was divided into two distinct works, which can be summarized as follows: Article 1: The oral squamous cell carcinoma (OSCC) is the most prevalent malignance in mouth, being an important public health problem. The aim of this study was to evaluate the clinical and epidemiological profile of the OSCC cases registered in a center of clinical and histopathological diagnosis, located in Southern Brazil. Eight hundred and six individuals with OSCC and its variants were included in this study, over 1959-2012 period. The variables recorded from the files were: age, gender, skin color, tumor location, size and evolution time of the lesions (referred by the patients), as well as, the presence of pain lymph nodes, habits of tobacco and alcohol, and also the profession. OSSC was more frequent in males (76.6%), with the majority of cases distributed between 51 and 70 years old (53.9%). The most prevalent sites were lower lip vermilion [23.3% (20.4; 26.4)], followed by lateral border/ventral surface of the tongue [20.2% (17.5; 23.2)], gingiva/alveolar ridge [18.1% (15.5; 21.0)], and floor of the mouth [14.9% (12.5; 17.5)]. A strong association between outdoor occupation and OSCC in lower lip vermilion was found. The OSCC lesions located in tongue, gingiva/alveolar ridge and floor of the mouth were commonly more painful, bigger than 2 cm, and frequently presenting lymph nodes involvement. Most of the results confirm the data from literature. Mouth self-examination should be recommended and campaigns of prevention and early detection of OSCC should be periodically performed in order to increase people s feelings of personal risk. Article 2: Inside the tumor microenvironment (TM) the neoplastic cells are in dynamic crosstalk with the vascular and lymphatic endothelial cells in order to allow the tumor to growth and metastasize. Hypothesizing that there is a crosstalk between lymphatic endothelial cells and tumor cells from squamous cell carcinoma (SCC) that plays an important role in metastasis, we aimed to identify potential interactions between lymphatic endothelial cells and tumor cells lines from SCCs, through some in vitro assays. Primary adult human dermal lymphatic microvascular endothelial cells (HMVECs) and the human head and neck SCC cell lines like A431, UM-SCC-1, UM-SCC-22A and UM-SCC-22B were cultured in their specific media. UM-SCC cells lines were treated with rhIL-6, being VEGF-C expression checked by Elisa. Baseline IL-6 was evaluated in HMEVCs using the same assay. Also the IL-6 receptor (IL-6R) was analyzed by Western blot in UM-SCC cells. Conditioned media from HMVECs were prepared with different treatments and incubated with SCC A431 cells, in order to verify the MMPs enzymatic activities by gelatin zymography. Our results demonstrated that there are interactions between tumor cells and LECs, since the LECs-CM were able to enhance MMP-2 gelatinolytic activity. Moreover, we showed that LECs secrete IL-6, and different SCC lines have receptors for this cytokine. Therefore, our results indicate some potential interactions between LECs and TCs, being necessary other studies to elucidate the involved signaling pathways / Esta dissertação foi dividida em dois trabalhos distintos, os quais podem ser resumidos da seguinte maneira: Artigo 1: O carcinoma espinocelular oral (CEO) é o tumor maligno mais prevalente na cavidade oral, sendo um importante problema de saúde pública. O objetivo deste estudo foi avaliar o perfil clínico e epidemiológico dos casos registrados de CEO em um centro de diagnóstico clínico e histopatológico, localizado no Sul do Brasil. Oitocentos e seis indivíduos com CEO e suas variantes histológicas foram incluídos neste estudo, num período entre 1959 e 2012. As variáveis anotadas dos arquivos foram: idade, sexo, cor da pele, sítio, tamanho, tempo de evolução (relatado pelo paciente), assim como a presença de dor, linfonodos palpáveis, hábitos de tabagismo e etilismo, e a profissão. CEO foi mais prevalente em homens (76,6%), com a maioria dos casos distribuídos entre os 51 e 70 anos de idade (53,9%). Os sítios mais prevalentes foram vermelhão do lábio inferior [23,3% (20,4; 26,4)], seguido por borda lateral/ventre de língua [20,2% (17,5; 23,2)], gengiva/rebordo alveolar [18,1% (15,5; 21,0)], e assoalho bucal [14,9% (12,5; 17,5)]. Foi encontrada uma forte associação entre ocupações ao ar livre e CEO de vermelhão de lábio inferior. As lesões localizadas na língua, gengiva/rebordo alveolar e assoalho bucal foram comumente mais dolorosas, maiores que 2 cm, a frequentemente apresentavam envolvimento de linfonodos. A maioria dos nossos resultados confirmam os dados da literatura. O autoexame bucal deveria ser recomendado e campanhas de prevenção e detecção precoce do CEO deveriam ser realizadas periodicamente na tentativa de aumentar o sentimento pessoal em relação ao CEO. Artigo 2: Dentro do microambiente tumoral (MT), as células neoplásicas estão numa constante crosstalk com células endoteliais linfáticas (CELs) e sanguíneas a fim de permitir o crescimento tumoral e metástase. Supondo que haja um crosstalk entre as CELs e as células do carcinoma espinocelular (CE) que exerce um importante papel na metástase, nosso objetivo foi identificar potenciais interações entre as CELs e linhagens celulares de CE, através de alguns ensaios in vitro. Células endoteliais linfáticas primárias adultas humanas da microvasculatura dérmica (HMVECs) e as linhagens de CE A431, UM-SCC-1, UM-SCC-22A e UM-SCC-22B foram cultivadas nos seus meios específicos. UM-SCC foram tratadas com rhIL-6, sendo a expressão de VEGF-C verificada por Elisa. Produção natural de IL-6 pelas HMVECs foi avaliada da mesma maneira. A presença de receptor de IL-6 (IL-6R) foi analisada por Western Blot nas linhagens UM-SCC. Meios condicionados(MC) das HMVECs foram preparados com diferentes tratamentos e incubados com a linhagem A431, a fim de verificar a atividade genatinolítica das MMPs por zimografia. Nossos resultados demonstraram que há interações entre as células tumorais e as CELs, uma vez que MC-CELS foram capazes de aumentar a atividade genatinolítica da MMP-2. Além disso, nós mostramos que as CELs secretam IL-6, e diferentes linhagens de CE possuem receptores para esta citocina. Sendo assim, nossos resultados indicam potenciais interações entre as LECs e as células tumorais, sendo necessário outros estudos para elucidar as vias de sinalização envolvidas

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:30:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_anelise_fernandes_montagner.pdf: 2069040 bytes, checksum: f8827dc228fd6085f72280a7c6d30b98 (MD5) Previous issue date: 2013-08-29 / The aim of this study was to evaluate the influence of chlorhexidine digluconate and sodium hypoclorite application on dentin after acid ecthing on the performance of adhesive restorations subjected to aging of the adhesive interface. For this, three studies were performed (in vitro, in situ and a systematic review). The in vitro study aimed to evaluate the effect of chlorhexidine digluconate (CHX) and sodium hypochlorite (NaOCl) on the microtensile bond strength values (μTBS) in dentin after cariogenic challenge and aging. Thirty sound human molars were selected and randomly assigned into 3 dentin pre-treatments (control, 2% chlorhexidine and 10% NaOCl) and 4 different types of aging (control -C-, biofilm without cariogenic challenge -NCC-, biofilm with cariogenic challenge -CC- and 18-month water storage -WS-). The same etch-and-rinse adhesive system (Adper Single Bond 2, 3M ESPE) and composite resin (Z250, 3M ESPE) were used for all the groups (n=30). For NCC and CC groups, dental biofilm in microcosm derived from saliva of a healthy donor was added on the samples. The biofilm grew up in a defined medium enriched with mucin (DMM), with or without 10% sucrose, according to the group. After the experimental period, all the samples were cleaned up and microtensile test was carried out. The data, in MPa, were subjected to ANOVA and a post-hoc Tukey Test (p < 0.05). The pre-treatment did not influence the μTBS, for all the aging conditions (p = 0.188); however the type of aging statistically affected the bond strength (p = 0.000). The bond strength values showed the following trend: C = NCC < CC = WS. Cariogenic challenge and water storage aging affected the bond strength stability and the former seems to be a suitable short-term methodology to assess the degradation of the resin-dentin. The in vivo study aimed to evaluate the effect of chlorhexidine (CHX) application in etched dentin on the 6-month retention of restorations of noncarious cervical lesions (NCCLs). A randomized controlled splitmouth and blind trial was carried out. Patients (n = 42) with at least two noncarious cervical lesions were included. NCCLs were randomly assigned according to the type of tooth into two groups: control (application of a placebo solution) or experimental group (application of 2% CHX for 60s after acid etching). Class V restorations (n = 169) were performed with an etch-and-rinse adhesive system (Adper Single Bond 2) and a composite resin (Filtek Z350) according to the manufacturer instructions, by 10 previously trained operators. The restorations were evaluated by a calibrated examiner at 1 week (baseline) and 6-month using the FDI criteria. The outcome was retention of the restoration. The analysis of factors associated to the failure of restoration was carried out through Fisher s Exact Test (α = 0.05). After 6 months of follow-up, 3.4% (CI 95% 1.3 - 7.3) of the Class V restorations failed. There was no significant difference between control and CHX (p = 0.920). Regarding the cavity s variables, deeper (p = 0.024) and wider cavities (p = 0.004) showed more failures, and wedge-shaped cavities failed more than saucer-shaped ones (p = 0.033). Regarding the patient s variables, restorations in patients with lower salivation 8 showed a higher percentage of failure (p = 0.034). Both treatments provided acceptable clinical performance of the restorations. The use of CHX as a coadjuvant in dentin adhesion did not influence the retention of Class V restorations after 6 months of follow-up. The systematic review aimed to systematically review the literature for in vitro and ex vivo studies that evaluated the resin-dentin bond strength immediately and longitudinal with the use of MMP inhibitor on the adhesive procedure. The systematic review was conducted sourcing the following databases (Pubmed, TRIP, LILACS, Scielo, Cochrane and ISI web Science) with no publication year or language limit. From 1.336 potentially eligible studies, 48 were selected for full text analysis and 30 were included for review. Two independently reviewers selected the studies, abstracted information and assessed the risk of bias on standardize scales. The results showed high heterogeneity in some comparisons and showed no difference for CHX 2% and control at baseline, however after 6-month of aging the CHX 2% and 0.2% presented a trend showing higher bond strength values than control groups (p < 0.05). The literature review was possible to observe the trend towards the decreased of the bond strength through time most for the control groups than for the experimental one. From of the 30 studies included, only 5 studies (16.6%) presented medium risk of bias while 25 (83.4%) showed high risk of bias and none showed low risk of bias. The use of MMPs inhibitor did not negatively affect the immediate bond strength, and it influenced the bond strength values long-time regarding the dentin adhesion stability. / O objetivo deste estudo foi avaliar a influência da aplicação do digluconato de clorexidina (CRX) e hipoclorito de sódio (NaOCl) em dentina, após o condicionamento ácido, na performance da interface adesiva submetida a envelhecimento da interface adesiva. Para isto, foram realizados 3 estudos (in vitro, in vivo e revisão sistemática). O estudo in vitro objetivou avaliar o efeito do prétratamento da dentina nos valores de resistência de união (RU) após diferentes tipos de envelhecimentos da interface adesiva. A dentina de todos os espécimes foi submetida ao condicionamento com ácido fosfórico por 15s e em seguida a 3 tipos de pré-tratamento: água destilada (controle - soluçao placebo - 60s), digluconato de clorexidina 2% - 60s, ou hipoclorito de sódio 10% - 60s. O sistema desivo (Single Bond 2 3M/ESPE) foi aplicado na superfície dentinária conforme indicação do fabricante. Palitos resina-dentina foram obtidos e submetidos a 4 níveis de envelhecimento: controle (CO), biofilme sem desafio cariogênico (BSD), biofilme com desafio cariogênico (BCD) e armazenamento em água por 18 meses (AGU). Nos grupos com biofilme, modelo de microcosmo foi utilizado e o biofilme foi crescido em meio definido enriquecido com mucina, com (BCD) ou sem (BSD) sacarose por 14 dias. Após o período experimental os espécimes foram limpos e preparados para o teste de microtração e o padrão de fratura foi analisado. Os valores de RU, em MPa, foram submetidos a ANOVA e teste post hoc Tukey (p < 0,05). O pré-tratamento não influenciou nos valores de RU, para todos os envelhecimentos avaliados (p = 0,188), entretanto o tipo de envelhecimento estatisticamente influenciou os valores de RU (p = 0,000). O envelhecimento CO foi similar ao BSD, com valores RU maiores que o BCD e AGU. A interface adesiva foi negativamente afetada pelo desafio cariogênico e pela degradação em água. No estudo in vivo, com objetivo de avaliar a retenção de restaurações classe V em dentina tratada ou não com CRX, um ensaio clínico controlado randomizado, boca dividida e triplo-cego foi conduzido. Pacientes (n = 42) com no mínimo 2 lesões cervicais não cariosas (LCNC) foram selecionados. As LCNC foram randomizadas em 2 grupos: tratamento controle e tratamento experimental (CRX 2% - 60s). Restaurações (n = 169) foram realizadas com Single Bond 2 (3M EPSE) e Filtek Z350 por 10 operadores previamente treinados. As restaurações foram avaliadas por um examinador calibrado em 1 semana e 6 meses após, usando os critérios da FDI. A análise dos fatores associados às falhas nas restaurações foi conduzida através do teste exato de Fisher (α = 0,05). Após 6 meses de acompanhamento, 3,4% (IC95% 1,3 - 7,3) das restaurações falharam devido a retenção. Não houve diferença significante entre os tratamentos controle e CRX para retenção (p = 0,920) e para manchamento marginal (p = 0,734). Em relação às variáveis relativas à cavidade, cavidades com maior profundidade (p = 0,024) e com maior altura (p = 0,004) 6 apresentaram maior ocorrência de falhas. Ainda, cavidades em formato de V apresentaram mais falhas que aquelas em formato de U (p = 0,033). Quanto as variáveis relativas aos pacientes, restaurações em pacientes que apresentavam boca seca falharam em maior porcentagem (p = 0,034). O uso de clorexidina como um coadjuvante na adesão a dentina não influenciou na retenção das restaurações após 6 meses de acompanhamento. E a revisão sistemática teve o objetivo de revisar a literatura acerca de estudos in vitro que avaliaram a RU resina-dentina imediata e após envelhecimento com o uso de inibidores de MMPs no procedimento adesivo. A revisão sistemática foi conduzida em 6 databases (Pubmed, TRIP, LILACS, Scielo, Cochrane and ISI web Science) sem limite de ano ou língua. De 1.336 estudos potencialmente elegíveis, 48 foram selecionados para análise de todo texto e 30 estudos foram incluiídos na revisāo. Dois revisores selecionaram os estudos, extraíram as informações e dados e verificaram o risco de viés em escalas padronizadas. Os resultados demostraram uma grande heterogeneidade em algumas comparações e nāo mostraram diferenças entre clorexidina 2% e o grupo controle sem envelhecimento, porém após 6 meses de envelhecimento observou-se uma tendência a favor dos grupos controle (p < 0,05). Todavia, foi possível observar na revisāo de literatura descritiva a tendência da diminuiçāo dos valores de RU (porcentagem) ao longo do tempo, mais para o grupo controle do que para o grupo experimental. De 30 estudos incluídos, apenas 5 estudos (16,6%) apresentaram médio risco de viés, enquanto 25 estudos (83,4%) mostraram alto risco de vieés e nenhum mostrou baixo risco. Os inibidores de MMPs nāo afetaram negativamente a RU da resina a dentina sem envelhecimento, e nāo influenciaram os valores de RU após envelheciemento.