O status oxidativo do espermatozoide atua sobre ele de diferentes formas, desde a capacitação até a fecundação do oócito. No entanto, as espécies reativas de oxigênio (EROs) podem ser benéficas ou prejudiciais dependendo do contexto celular. Tendo em vista a baixa proteção antioxidante do sêmen criopreservado, associado às sucessivas manipulações que antecedem a fecundação in vitro, entender como esta célula se comporta em um ambiente oxidante e os impactos deste sobre o embrião é de suma importância. Com isto, o objetivo deste trabalho foi propor um modelo dose-dependente para o estudo do estresse oxidativo sobre o espermatozoide e possível impacto no desenvolvimento embrionário. Para isto, no experimento 1, palhetas de sêmen criopreservado de touros (n=5) da raça Nelore foram submetidas à incubação por 1 hora a 38,5 ºC e 5% CO2, com doses crescentes de peróxido de hidrogênio (0; 12,5; 25; e 50 µM). Ao final da incubação, os parâmetros de motilidade foram avaliados pelo sistema Computer Assisted System Analysis (CASA). No experimento 2, foram escolhidas duas doses de peróxido de hidrogênio com base nos resultados do experimento 1: alta (50 µM), baixa (12,5 µM) e também um controle (0 µM). Os espermatozoides foram incubados com as respectivas doses de peróxido de hidrogênio por 1 hora, e ao final da incubação foram utilizados para a fecundação in vitro (D=0). Neste experimento, além das análises do CASA, foram feitas avaliações do status oxidativo (CellROX® green e 2'-7'diacetato de diclorofluoresceína - DCFH), do potencial mitocondrial (JC-1), da cromatina (LA) e da capacitação espermática (clortetraciclina). Os embriões foram avaliados com relação à taxa de clivagem rápida (30 horas pós-inseminação), taxa de clivagem (D=3), taxa de desenvolvimento (D=5) e taxa de blastocisto (D=8). Para análise estatística foi utilizado o modelo de regressão polinomial, considerando p≤0,05. Tanto no experimento 1 quanto no experimento 2 houve detrimento dose-dependente do peróxido de hidrogênio sobre o padrão de movimento e de porcentagem de células móveis. Houve aumento dose-dependente da porcentagem de células positivas para CellROX® células capacitadas e positivas para o LA. Com relação às taxas de clivagem e de blastocisto, houve diminuição da porcentagem de embriões clivados e de blastocistos, conforme a dose de peróxido de hidrogênio foi aumentada. Referente à taxa de desenvolvimento embrionário, houve bloqueio das estruturas em 2-4 células. Nestas condições, o espermatozoide quando exposto a um ambiente oxidante, apresenta alterações no padrão de motilidade, no status oxidativo e na capacitação, sendo que estas interferem de forma negativa no desenvolvimento embrionário, desde o início da clivagem até a formação do blastocisto. / Oxidative status may influence spermatozoa by distinct mechanisms, from capacitation to oocyte fertilization. However, reactive oxygen species (ROS) could be beneficial or harmful depending on cellular context. Due to the low levels of antioxidant enzymes of cryopreserved semen, associated to successive manipulations prior to in vitro fertilization (IVF), it is momentous to understand the mechanism involved on sperm status in such conditions and the further impact on embryo development. The present study aimed to assess the possible impact of a dose-dependent model for sperm oxidative stress on embryo development. In experiment 1, straws from five Nelore bulls were subjected to a 1 hour incubation at 38,5 ºC and 5% CO2, with increase doses of hydrogen peroxide (0; 12,5; 25; e 50 &microM). At the end of incubation period, motility parameters were evaluated by Computed Assisted System Analysis (CASA). Based on the results of the experiment 1, experiment 2 was designed to study a high (50 µM) and a low (12,5 µM) dose of hydrogen peroxide and also a control (0 µM). Sperm samples were incubated with each dose for 1 hour and subsequently used for in vitro fertilization (D=0). Samples were analyzed by CASA, oxidative status (CellROX® green and 2'-7' diclorofluorescein diacetate - DCFH), mitochondrial potential (JC-1), chromatin (LA) and sperm capacitation status (chlortetraciclin). Embryos were evaluated based on fast cleavage rate (30 hours pos-insemination), cleavage rate (D=3), development rate (D=5) and blastocyst rate (D=8). Statistical analysis was performed by polynomial regression model, considering significant a p≤0,05. A dose-dependent deleterious effect of hydrogen peroxide was observed on most motility variables evaluated by CASA, including the percentage of motile cells. Similarly, a dose-dependent increase was observed on the percentages of positive cells for CellROX®, capacitated sperm and also for LA. A decrease on the percentage of cleaved embryos and blastocyst was observed as hydrogen peroxide increased. Interestingly, a blockage was detected during the 2-4 cell stage. In these conditions when exposed to oxidative environment, sperm may present disabled motility characteristics, oxidative status and premature capacitation and such abnormalities result on impaired embryo development, from the first cleavage to blastocyst.

Introdução: A Videofluoroscopia da Deglutição (VFD) é um exame dinâmico e permite a avaliação de todo o processo da deglutição, entretanto, a maioria dos estudos publicados relata apenas alterações na orofaringe e transição faringoesofágica, não sendo rotina o estudo do esôfago. O objetivo da presente pesquisa foi verificar a prevalência de alterações na fase esofágica à VFD em pacientes com disfagia cervical. Métodos: Pacientes com queixa de disfagia cervical submetidos à Videofluoroscopia da Deglutição incluindo estudo esofágico entre maio de 2010 e maio de 2012 tiveram seus exames revisados retrospectivamente. Os pacientes foram classificados em dois grupos: Grupo I - sem diagnóstico etiológico pré-estabelecido e Grupo II – com diagnóstico de doença neurológica. Durante o exame os pacientes ingeriram três consistências de alimento (líquido, pastoso e sólido) contrastadas com sulfato de bário e 19 itens foram analisados segundo protocolo. A fase esofágica foi considerada alterada quando apenas um dos itens avaliados estivesse comprometido. Resultados: Trezentos e trinta e três (n=333) pacientes consecutivos foram estudados com 213 (64%) no Grupo I e 120 (36%) no Grupo II. Alterações esofágicas foram identificadas em 104 (31%) pacientes, sendo a prevalência maior no Grupo I (36,2%), principalmente, nos itens clareamento esofágico (16,9%) e contrações terciárias (16,4%). Pudemos observar que 12% dos indivíduos do Grupo I apresentaram somente alteração em fase esofágica. Conclusão: Avaliação da fase esofágica durante a Videofluoroscopia da Deglutição identificou alterações esofágicas em um terço dos pacientes com queixa de disfagia cervical, principalmente no grupo sem diagnóstico etiológico pré-estabelecido. / Introduction: Videofluoroscopic Swallowing Study (VFSS) is a dynamic exam and allows the evaluation of the complete swallowing process. However, most published studies have only reported alterations in the oropharynx and pharyngoesophageal transition, leaving the analysis of the esophagus an under researched area. The goal of this study was to investigate the prevalence of alterations in the esophageal phase thorough VFSS in patients with cervical dysphagia. Methods: Consecutive patients with cervical dysphagia who underwent VFSS including esophageal analysis between May 2010 and May 2012 had their exams retrospectively reviewed. Patients were classified into two groups: Group I - without a pre-established etiological diagnosis and Group II - with neurological disease. During the exam, the patients ingested three different consistencies of food (liquid, pasty and solid) contrasted with barium sulfate and 19 items were analyzed according to a protocol. The esophageal phase was considered abnormal when at least one of the evaluated items was compromised. Results: Three hundred and thirty-three (n = 333) consecutive patients were studied - 213 (64%) in Group I and 120 (36%) in Group II. Esophageal alterations were found in 104 (31%) patients, with a higher prevalence in Group I (36,2%), especially on the items esophageal clearance (16,9%) and tertiary contractions (16,4%). It was observed that 12% of individuals in Group I only presented alterations on the esophageal phase. Conclusion: Evaluation of the esophageal phase of swallowing during VFSS detects abnormalities in patients with cervical dysphagia, especially in the group without pre-established etiological diagnosis.

Submitted by Helena Bejio (helena.bejio@unioeste.br) on 2019-02-06T16:57:43Z No. of bitstreams: 2 Dissertação Carla Rosane Kosmann.pdf: 790665 bytes, checksum: 9ba5338adc46a33d1fa873abcb4d6970 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2019-02-06T16:57:43Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação Carla Rosane Kosmann.pdf: 790665 bytes, checksum: 9ba5338adc46a33d1fa873abcb4d6970 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2016-02-24 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The root-knot nematodes are pathogens of great economic importance for many craps, as tomato, for promoting a reduction in crop productivity. Thus, control methods are required and the use of plant extracts is gaining emphasis due their compounds with nematicide and resistance induction properties. The objective of this work was evaluate the control of Meloidogyne incognita in susceptible and resistant tomato plants treated with avocado seed extract (Persea americana Mill.) incorporated into the hydrogel. To obtain the extract, avocado seeds were cut and left in methanol for 24 h and passed through two vacuum filtering. The obtained solution was evaporated on a rotary evaporator and resuspended in distilled water containing Tween 80 (0.6%) to give concentrations of 100, 200, 400, 800 and 1.000 mg L-1 of red color (RE) and brown color (BE) extract. The control treatment was distilled water + Tween 80 (0.6%). Hatching of juvenile second stage (J2) and motility and mortality of J2 were evaluated. From the in vitro results, we selected the most efficient concentration in controlling nematode, incorporating the hydrogel and dried in an oven. Then, this material at different doses (0; 0.1; 0.25; 0.5; 0.75 and 1.0 g pit1) were added to the soil before the transplantation of the tomato. Three days after transplanting was made the inoculation with 2.067 eggs and J2 of M. incognita. Thirty days after inoculation were evaluated: relative chlorophyll content (SPAD index), total volume of root, number of galls and eggs mass, viability of the egg mass, number of eggs and J2 per root and 100 cm3 of soil. With the data obtained from this test in a greenhouse, a new experiment was carried out from the dose that provided the best control of the nematode. This was then added to extract pits containing different concentrations (0, 1.000, 2.000, 4.000, 6.000, and 8.000 mg L-1) in the hydrogel. After 30 days of inoculation with 2.184 eggs and J2 of M. incognita, there were the same described above ratings. For in vitro assays, the extracts promoted a reduction of J2 hatched, with the concentration of 1.000 mg L-1 of RE, the most effective in this reduction. The mobility and mortality of J2 were not affected by different concentrations of the extracts. In vivo, referring to the first assay, the dose of 1.0 g pit-1 controlled the nematode in susceptible plants, and therefore was chosen for use in the second assay. In this latter, the concentration of 8.000 mg L-1 was the most effective to control M. incognita. / Os nematoides das galhas são patógenos de grande importância econômica para várias culturas, como o tomateiro, por promoverem redução da produtividade. Métodos de controle com a utilização de extratos vegetais vem ganhando ênfase por apresentarem compostos nematicidas e indutores de resistência. O objetivo deste trabalho foi avaliar o controle de Meloidogyne incognita em tomateiros suscetível e resistente, tratados com extratos de sementes de abacate (Persea americana Mill.), veiculado em hidrogel. Para a obtenção do extrato, sementes de abacate foram cortadas e deixadas em metanol por 24 h, e passadas por duas filtragens à vácuo. A solução obtida foi roto-evaporada e ressuspensa em água destilada contendo Tween 80 (0,6%), obtendo-se as concentrações de 100, 200, 400, 800 e 1.000 mg L-1 dos extratos de coloração vermelha (EV) e marrom (EM). O tratamento controle foi representado por água destilada + Tween 80 (0,6%). Foram avaliadas a eclosão de juvenis de segundo estádio (J2) e a motilidade e mortalidade de J2. A partir dos resultados in vitro, selecionou-se a concentração mais eficiente no controle do nematoide, incorporando-a em hidrogel, que foi posteriormente seco em estufa. Após, diferentes doses deste material (0; 0,1; 0,25; 0,5; 0,75 e 1,0 g cova-1) foram adicionadas às covas realizadas para o transplante dos tomateiros. Três dias após o transplante ocorreu a inoculação com 2.067 ovos e J2 de M. incognita. Após 30 dias da inoculação foram avaliados: teor relativo de clorofila (índice SPAD), volume total de raiz, número de galhas e de massas de ovos, viabilidade das massas de ovos, número de ovos e J2 por sistema radicular e por 100 cm3 de solo. Com os dados obtidos deste ensaio em casa de vegetação, um novo experimento foi realizado, a partir da dose que proporcionou o melhor controle do nematoide. Esta foi então adicionada às covas contendo diferentes concentrações do extrato (0, 1.000, 2.000, 4.000, 6.000, e 8.000 mg L-1) no hidrogel. Passados 30 dias da inoculação com 2.184 ovos e J2 de M. incognita, foram realizadas as mesmas avaliações descritas anteriormente. Para os ensaios in vitro, o aumento da concentração dos extratos promoveu uma diminuição dos J2 eclodidos, sendo a concentração de 1.000 mg L-1 do EV, a mais efetiva nesta redução. Quanto à motilidade e mortalidade de J2, estas não foram afetados pelas diferentes concentrações dos extratos. In vivo, referente ao primeiro ensaio, a dose de 1,0 g cova-1 proporcionou maior redução deste fitonematoide em plantas suscetíveis, sendo, portanto, a escolhida para a incorporação nas covas dos tomateiros do segundo ensaio. Neste, a concentração de 8.000 mg L-1 foi a que proporcionou o controle mais eficaz de M. incognita.

Orientador: Madileine Francely Américo / Resumo: A contratilidade do músculo liso e o trânsito gastrintestinal (GI) são importantes parâmetros da motilidade, cujas alterações podem comprometer a absorção de nutrientes e a biodisponibilidade de fármacos. Diversos fármacos apresentam efeitos adversos associados ao trato GI e, mesmo aqueles utilizados para controlar esses efeitos, podem provocar alterações importantes na motilidade ainda pouco conhecidas. Camundongos das linhagens C57BL/6 e BALB/c são amplamente utilizados nas pesquisas biomédicas, entretanto poucos estudos consideram os parâmetros motores GI. Diante de métodos escassos para avaliar a motilidade in vivo e da importância de conhecer a fisiologia básica dos camundongos, bem como o efeito de fármacos sobre o trato GI, objetivou-se: 1) desenvolver protocolo para avaliação da contratilidade duodenal e trânsito gastrintestinal por meio da Biosusceptometria de Corrente Alternada (BAC), e avaliar comparativamente a morfologia e função gastrintestinal de camundongos das linhagens BALB/c e C57BL/6J e, 2) avaliar o efeito GI do tratamento com cisplatina e a influência da dexametasona como antiemético. A partir deste trabalho foi possível implementar um protocolo experimental inédito, por meio da BAC, para avaliar a contratilidade duodenal e o trânsito gastrintestinal em camundongos. Após prévia implantação de marcador magnético no duodeno de camundongos, observou-se uma alta e uma baixa frequência de contração, expressas em ciclos por minuto (cpm). BALB/c e C57BL/6J apre... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The smooth muscle contractility and gastrointestinal (GI) transit are important parameters of motility, whose alterations may compromise nutrient absorption and bioavailability of drugs. Several drugs have side effects associated with the GI tract and, even those used to control these effects may cause significant changes in motility that are still poorly understood. Mice C57BL/6 and BALB/c strains are widely used in biomedical research, but a few studies consider the GI motor parameters. In front of scarce methods to evaluate the in vivo motility and the importance of knowing the basic physiology of the mice, as well as the effect of drugs on the GI tract. Then, the objectives of this study were 1) to develop protocol for the evaluation of duodenal contractility and gastrointestinal transit through Alternating Current Biosusceptometry (ACB), and comparing the morphology and gastrointestinal function of BALB/c and C57BL/6J mice, and 2) to evaluate the GI effect of cisplatin treatment and the influence of dexamethasone as an antiemetic. From this work, it was possible to implement an original experimental protocol, through the BAC, to evaluate the duodenal contractility and the gastrointestinal transit in mice. After the previous implantation of a magnetic marker in the duodenum of mice, a high and low frequency of contraction, expressed in cycles per minute (cpm), was observed. BALB/c and C57BL/6J presented a high frequency of 40 cpm, while the low frequency in BALB/c was 29 ... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

A inseminação artificial é utilizada como uma importante ferramenta para o melhoramento reprodutivo, tanto com sêmen resfriado ou congelado. O primeiro experimento teve como objetivo identificar um tampão de pH para resfriamento de sêmen de pôneis por 48 horas a 5°C e 15°C. O efeito de cinco tampões (TES (ácido N-tris (hidroximetil) metil-2-aminoetanosulfônico), PIPES (ácido piperaxín-N,N'-bis(2-etanosulfônico)), BES (ácido N,N-Bis(2-18hidroxietil)-2-aminoetanosulfônico), MES (ácido 4-morfolinoetanosulfônico) e HEPES (ácido N-2-hidroxietilpiperazina-N’-2-etanosulfônico)) foi avaliado em um diluente composto de leite em pó desnatado e glicose. Os testes do diluente com os tampões BES, MES e TES foram conduzidos com o sêmen fresco de oito pôneis e no sêmen resfriado por 48 h a 15°C. Uma amostra de cada grupo foi utilizada para análise da motilidade, pH, osmolaridade, teste hiposmótico, atividade mitocondrial (MTT) e integridade de membrana através das sondas fluorescentes. O pH e a osmolaridade dos diluentes sem o sêmen também foram avaliados. Os dados foram analisados por análise de variância e pelo teste de Tukey, quando P < 0.05 foi significante. A osmolaridade do sêmen diluído não variou entre diluentes e foi para o BES 350.91 ± 11.24 mOsm, MES 350.41 ± 11.76 mOsm e TES 350 ± 12.96 mOsm. O pH do sêmen após diluição nos respectivos diluentes variou entre as horas avaliadas (P < 0.05) e não variou com o passar do tempo o que evidencia o efeito tamponante dos diluentes. A osmolaridade dos diluentes foi similar entre os tampões BES (366 ± 5.47 mOsm), MES (370 ± 6.12 mOsm) ou TES (371 ± 5.47 mOsm) a fresco e sem adição de sêmen. Já o pH variou (P < 0.05) de acordo com o tampão. No experimento a 5°C ocorreu decréscimo na porcentagem de motilidade total, progressiva e local do sêmen resfriado após 24 h e 48 h comparado a avaliação a fresco em todos os grupos. No entanto, a porcentagem de espermatozoides móveis a fresco, 24 h e 48 h a 5°C entre tratamentos foi similar. A porcentagem de espermatozoides reativos ao teste hiposmótico, e com atividade mitocondrial não diferiu entre tratamentos. No experimento a 15°C o vigor e motilidade total, progressiva e local foram similares entre os tampões BES, MES e TES em cada período avaliado. A osmolaridade do sêmen diluído não variou entre diluentes e foi para o BES 360.93 ± 10.52 mOsm, MES 361.47 ± 6.79 mOsm e TES 361.56 ± 7.68 mOsm. Devido as características individuais de cada tampão o pH do sêmen diluído variou entre os diluentes com os tampões utilizados. A porcentagem de espermatozoides reativos ao teste hiposmótico, com atividade mitocondrial e membrana intacta observada com CFDA e PI não diferiu entre tratamentos. Evidenciou-se que tanto BES, MES ou TES podem ser utilizados no armazenamento e transporte do sêmen de pôneis durante 48 h a 5°C ou 15°C. O segundo experimento teve como objetivo foi avaliar a influência da suplementação de ácidos graxos poli-insaturados sobre a qualidade de sêmen de pôneis da raça Brasileira a fresco e após congelamento. Oito pôneis receberam sua dieta convencional não suplementada (grupo controle) ou dieta convencional e 70 g de farinha de alga Schizochytrium sp rica em DHA (grupo PUFA). O efeito da Vitamina E (1 mM, DL-α-tocoferol), adicionada ao diluente de congelamento para sêmen também foi avaliado sobre a qualidade seminal, antes e após o congelamento do sêmen. O sêmen foi coletado a cada 15 dias durante 60 dias. Os garanhões tratados passaram a controle e vice-versa após um intervalo de sessenta dias. O sêmen foi avaliado a fresco e após o congelamento. Motilidade e vigor foram avaliados a fresco. Após o descongelamento motilidade, funcionalidade de membrana, integridade de membrana e análise computadorizada da motilidade foram avaliados. Os valores médios para os parâmetros avaliados a fresco no grupo PUFA e controle foram similares. Os valores médios da motilidade total, progressiva e local, hiposmótico, CFDA/PI e análise computadorizada de sêmen suplementados com DHA e o grupo controle pós-descongelamento não diferiram. A associação da suplementação de DHA e Vitamina E adicionada ao diluente não potencializou a capacidade antioxidante do diluente durante o congelamento. A associação da suplementação de DHA e Vitamina E adicionada ao diluente resultou em diminuição da motilidade total e progressiva comparada ao grupo não suplementado (controle). A suplementação de 70 g de farinha de alga Schizochytrium sp rica em DHA e ou a inclusão de 1 mM de vitamina E ao diluente de congelamento de sêmen em pôneis da raça Brasileira não foi eficiente para promover melhoria na viabilidade seminal após a coleta ou mesmo após o congelamento. / Artificial insemination with cooled and frozen semen is an important tool for breeding industry. The first experiment aimed to identify a pH buffer for cooling semen of ponies for 48 h at 5°C and 15°C. The effect of five buffers (TES (N-tris (hydroxymethyl) methyl-2-aminoethanesulfonic acid), PIPES (piperaxin-N, N'-bis (2-ethanesulfonic acid)), BES (N, N-Bis (N-2-hydroxyethylpiperazine-N'-2-ethanesulfonic acid)) was evaluated in a extender composed of skimm milk powder and glucose. Analysis with the BES, MES and TES buffers were performed in fresh semen of eight ponies and in cooled semen for 48 h at 15°C. A sample from each group was used for analysis of motility, pH, osmolarity, hyposmotic test, mitochondrial activity (MTT) and membrane integrity through fluorescent probes. The pH and osmolarity of the extenders without semen were also evaluated. Data were assessed by analysis of variance and Tukey's test, when P <0.05 was considered significant. Osmolarity of the diluted semen did not differ between extenders and was for BES 350.91 ± 11.24 mOsm, MES 350.41 ± 11.76 mOsm and TES 350 ± 12.96 mOsm. The pH of the semen after dilution in the respective extenders varied between the hours (P <0.05) and did not change over time as evidenced by the buffering effect of the extenders. Extender osmolarity was similar between BES (366 ± 5.47 mOsm), MES (370 ± 6.12 mOsm) or TES (371 ± 5.47 mOsm) buffers after dilution and without addition of semen. The pH varied (P <0.05) according to the buffer. In the experiment at 5°C all treatments showed a decrease in the percentage of total, progressive and local motility of the cooled semen after 24 h and 48 h compared to the fresh. However, in the percentage of motile sperm to fresh, 24 h and 48 h at 5°C between treatments was similar. Percentage of spermatozoa reactive to the hyposmotic test, and with mitochondrial activity did not differ between treatments. In the experiment at 15°C total, progressive and local vigor and motility were similar between BES, MES and TES buffers in each period. Osmolarity of the diluted semen did not differ between extenders and was for BES 360.93 ± 10.52 mOsm, MES 361.47 ± 6.79 mOsm and TES 361.56 ± 7.68 mOsm. Due to the individual characteristics of each buffer, diluted semen pH varied between the extenders with the buffers used. Percentage of spermatozoa reactive to the hyposmotic test, with mitochondrial activity and intact membrane observed with CFDA and PI did not differ between treatments. We concluded that BES, MES or TES can be used in the storage and transport of ponies semen for 48 h at 5°C or 15°C. The second experiment aimed to evaluate the influence of polyunsaturated fatty acid supplementation in the fresh and after freezing semen of Brazilian ponies. Eight ponies received their conventional diet (control group) or conventional diet and 70 g of DHA-rich Schizochytrium sp algae meal (PUFA group). The effect of Vitamin E (1 mM, DL-α-tocopherol) added to the freezing diluent for semen was also evaluated on seminal quality, before and after freezing. Semen was collected every 15 days during 60 days. Stallions were reversed in treatments after an interval of sixty days. Semen was evaluated fresh and after freezing. Motility and vigor were estimated in the fresh semen. After thawing motility, membrane functionality, membrane integrity and computed motility analysis were evaluated. Mean values for fresh parameters evaluated in the PUFA and control groups were similar. Mean values of total, progressive and local motility, hyposmotic, CFDA/PI and computerized analysis of semen supplemented with DHA and post-thaw control group did not differ. The combination of DHA and Vitamin E supplementation added to the diluent did not potentiate the antioxidant capacity of the diluent during freezing and resulted in decreased total and progressive motility compared to the non-supplemented group. Supplementation of 70 g of DHA-rich microalgae Schizochytrium sp and the addition of 1 mM vitamin E to the semen freezing diluent in Brazilian ponies was not efficient to promote improvement in seminal viability after collection or even after freezing.

Orientador: José Antônio Marques / Banca: Angélica Trazzi Bento de Moraes / Banca: Paola Castro Moraes / Banca: Júlio Carlos Canola / Banca: Elzylene Léga / Resumo: A detomidina é um dos fármacos mais utilizados para a sedação de muares, porém não há dose estabelecida para esta espécie sendo indicado utilizar uma dose 50% maior que a indicada para equinos. Assim, o objetivo deste estudo foi avaliar a eficácia e os efeitos cardiovasculares da detomidina em muares comparando duas doses diferentes, a utilizada em equinos ( G1 - 0,02 mg/kg) e a dose 50% maior (G2 - 0,03 mg/kg). Para isso, foram utiizados 6 muares (2 machos e 4 fêmeas), adultos (339±27 kg), os animais receberam as duas doses com espaçamento mínimo de 7 dias, formando assim dois grupos experimentais com 6 animais cada. Antes da aplicação (M0) da detomidina pela via intravenosa e 5, 15, 30, 45 e 60 minutos após a aplicação (M5; M15; M30; M45; M60, respectivamente) foram avaliados frequência cardíaca, frequência respiratória, motilidade intestinal, altura da cabeça, além dos parâmetros ecocardiográficos: diâmetro interno do ventrículo esquerdo ao final da sístole e da diástole, fração de encurtamento, fração de ejeção, volume do ventrículo esquerdo ao final da sístole e da diástole, volume sistólico e débito cardíaco. A altura da cabeça do G2 permaneceu significativamente menor até o M60 quando comparado ao M0 do mesmo grupo, já do G1 ficou significativamente menor até o M45 quando comparado ao basal. O débito cardíaco do G1 foi significativamente menor nos M5, M15, M30 quando comparado ao M0 doG1, já do G2 permaneceu significativamente menor, quando compardo ao M0 do G2, do M5 ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Detomidine is the drugs most used for sedation of mules, but there is no established dose for this species being indicated to use a dose 50% greater than indicated for horses. Thus, the objective of this study was to evaluate the efficacy and cardiovascular effects of detomidine in mules comparing two different doses, the used in horses (G1 - 0.02 mg / kg) and the 50% higher dose (G2 - 0.03 mg / kg). For this, 6 muares (2 males and 4 females), adults (339 ± 27 kg) were used, the animals received the two doses with a minimum spacing of 7 days, thus forming two experimental groups with 6 animals each. Before the application (M0) of detomidine intravenously and 5, 15, 30, 45 and 60 minutes after the application (M5, M15, M30, M45, M60, M60, respectively) were evaluated heart rate, respiratory rate, intestinal motility, height of the head, in addition to the echocardiographic parameters: internal left ventricular diameter at the end of systole and diastole, fraction of shortening, ejection fraction, left ventricular volume at the end of systole and diastole, systolic volume and cardiac output. The head height of G2 remained significantly lower until M60, whereas G1 was significantly lower up to M45, cardiac output of G1 was significantly lower in M5, M15, M30, whereas G2 remained smaller than M5 at M45. Concluding that mules receiving a 50% higher dose of detomidine remained sedated for a longer period, but the cardiovascular effects were also longer. / Doutor

Introdução: A doença do refluxo gastroesofágico (DRGE) tem alta prevalência no mundo ocidental e é uma das causas mais freqüentes de consultas médicas. A sua definição abrange tanto sintomas quanto lesões secundárias ao refluxo do conteúdo gastro-duodenal para o esôfago e órgãos adjacentes e, também, uma definida diminuição na qualidade de vida dos indivíduos afetados. DRGE pode apresentar-se em duas formas: uma com erosões - forma erosiva - e a outra sem erosões - forma não-erosiva - ao exame endoscópico do esôfago. Essa última, também denominada internacionalmente, como non-erosive reflux disease ou NERD é, hoje, reconhecida como a mais freqüente apresentação da doença do refluxo. Indivíduos com a forma NERD têm sintomas clínicos semelhantes aos da forma erosiva tais como pirose, regurgitação, dor torácica, tosse crônica, etc... mas sua resposta ao tratamento com fármacos que bloqueiam o refluxo ácido, do tipo inibidores da bomba de prótons, é inferior aos com a forma erosiva. Na verdade pacientes com NERD constituem um grupo heterogêneo com diferentes etiopatogenias, no qual apenas um subgrupo tem refluxo ácido comprovado. A qualidade de vida relacionada à saúde em indíviduos com NERD é inferior a da população geral, mas eventuais diferenças entre indivíduos com refluxo ácido patológico e não patológico à pHmetria são desconhecidas. Objetivo: Identificar pacientes com NERD e medir a sua qualidade de vida relacionada à saúde entre indivíduos com e sem refluxo ácido à pHmetria esofágica prolongada. Pacientes e métodos: Indivíduos com sintomas suspeitos para doença do refluxo gastroesofágico encaminhados para estudo por pHmetria esofágica prolongada que preenchessem os critérios para NERD e que não utilizassem medicações para refluxo gastresofágico ou para depressão nos últimos seis meses, foram convidados a participar da pesquisa e responderam ao questionário, auto-aplicável, SF-36 composto por 36 questões com a geração de escores em 8 domínios (capacidade funcional, aspectos físicos, dor, estado geral de saúde, vitalidade, aspectos sociais, aspectos emocionais e saúde mental). Os escores desse grupo foram comparados com os de um controle histórico da população geral e entre indivíduos com refluxo ácido patológico e não patológico à pHmetria. Resultados: entre 179 indivíduos, 42 foram incluidos, com idade média de 45 anos, sendo 30 (71,4%) mulheres. Os escores dos indivíduos com NERD foram inferiores aos da população geral em todos os domínios sendo, estatísticamente significativos nos domínios: aspectos físicos, dor, vitalidade, aspectos emocionais e saúde mental. Os escores entre indivíduos com resultados para refluxo ácido patológico e não patológico à pHmetria, não apresentaram diferenças significativas entre si para os oito domínios avaliados pelo SF-36. Conclusões: a qualidade de vida relacionada à saúde entre indivíduos sintomáticos com NERD e refluxo ácido patológico e não patológico à pHmetria esofágica prolongada é semelhante.

A inseminação artificial é utilizada como uma importante ferramenta para o melhoramento reprodutivo, tanto com sêmen resfriado ou congelado. O primeiro experimento teve como objetivo identificar um tampão de pH para resfriamento de sêmen de pôneis por 48 horas a 5°C e 15°C. O efeito de cinco tampões (TES (ácido N-tris (hidroximetil) metil-2-aminoetanosulfônico), PIPES (ácido piperaxín-N,N'-bis(2-etanosulfônico)), BES (ácido N,N-Bis(2-18hidroxietil)-2-aminoetanosulfônico), MES (ácido 4-morfolinoetanosulfônico) e HEPES (ácido N-2-hidroxietilpiperazina-N’-2-etanosulfônico)) foi avaliado em um diluente composto de leite em pó desnatado e glicose. Os testes do diluente com os tampões BES, MES e TES foram conduzidos com o sêmen fresco de oito pôneis e no sêmen resfriado por 48 h a 15°C. Uma amostra de cada grupo foi utilizada para análise da motilidade, pH, osmolaridade, teste hiposmótico, atividade mitocondrial (MTT) e integridade de membrana através das sondas fluorescentes. O pH e a osmolaridade dos diluentes sem o sêmen também foram avaliados. Os dados foram analisados por análise de variância e pelo teste de Tukey, quando P < 0.05 foi significante. A osmolaridade do sêmen diluído não variou entre diluentes e foi para o BES 350.91 ± 11.24 mOsm, MES 350.41 ± 11.76 mOsm e TES 350 ± 12.96 mOsm. O pH do sêmen após diluição nos respectivos diluentes variou entre as horas avaliadas (P < 0.05) e não variou com o passar do tempo o que evidencia o efeito tamponante dos diluentes. A osmolaridade dos diluentes foi similar entre os tampões BES (366 ± 5.47 mOsm), MES (370 ± 6.12 mOsm) ou TES (371 ± 5.47 mOsm) a fresco e sem adição de sêmen. Já o pH variou (P < 0.05) de acordo com o tampão. No experimento a 5°C ocorreu decréscimo na porcentagem de motilidade total, progressiva e local do sêmen resfriado após 24 h e 48 h comparado a avaliação a fresco em todos os grupos. No entanto, a porcentagem de espermatozoides móveis a fresco, 24 h e 48 h a 5°C entre tratamentos foi similar. A porcentagem de espermatozoides reativos ao teste hiposmótico, e com atividade mitocondrial não diferiu entre tratamentos. No experimento a 15°C o vigor e motilidade total, progressiva e local foram similares entre os tampões BES, MES e TES em cada período avaliado. A osmolaridade do sêmen diluído não variou entre diluentes e foi para o BES 360.93 ± 10.52 mOsm, MES 361.47 ± 6.79 mOsm e TES 361.56 ± 7.68 mOsm. Devido as características individuais de cada tampão o pH do sêmen diluído variou entre os diluentes com os tampões utilizados. A porcentagem de espermatozoides reativos ao teste hiposmótico, com atividade mitocondrial e membrana intacta observada com CFDA e PI não diferiu entre tratamentos. Evidenciou-se que tanto BES, MES ou TES podem ser utilizados no armazenamento e transporte do sêmen de pôneis durante 48 h a 5°C ou 15°C. O segundo experimento teve como objetivo foi avaliar a influência da suplementação de ácidos graxos poli-insaturados sobre a qualidade de sêmen de pôneis da raça Brasileira a fresco e após congelamento. Oito pôneis receberam sua dieta convencional não suplementada (grupo controle) ou dieta convencional e 70 g de farinha de alga Schizochytrium sp rica em DHA (grupo PUFA). O efeito da Vitamina E (1 mM, DL-α-tocoferol), adicionada ao diluente de congelamento para sêmen também foi avaliado sobre a qualidade seminal, antes e após o congelamento do sêmen. O sêmen foi coletado a cada 15 dias durante 60 dias. Os garanhões tratados passaram a controle e vice-versa após um intervalo de sessenta dias. O sêmen foi avaliado a fresco e após o congelamento. Motilidade e vigor foram avaliados a fresco. Após o descongelamento motilidade, funcionalidade de membrana, integridade de membrana e análise computadorizada da motilidade foram avaliados. Os valores médios para os parâmetros avaliados a fresco no grupo PUFA e controle foram similares. Os valores médios da motilidade total, progressiva e local, hiposmótico, CFDA/PI e análise computadorizada de sêmen suplementados com DHA e o grupo controle pós-descongelamento não diferiram. A associação da suplementação de DHA e Vitamina E adicionada ao diluente não potencializou a capacidade antioxidante do diluente durante o congelamento. A associação da suplementação de DHA e Vitamina E adicionada ao diluente resultou em diminuição da motilidade total e progressiva comparada ao grupo não suplementado (controle). A suplementação de 70 g de farinha de alga Schizochytrium sp rica em DHA e ou a inclusão de 1 mM de vitamina E ao diluente de congelamento de sêmen em pôneis da raça Brasileira não foi eficiente para promover melhoria na viabilidade seminal após a coleta ou mesmo após o congelamento. / Artificial insemination with cooled and frozen semen is an important tool for breeding industry. The first experiment aimed to identify a pH buffer for cooling semen of ponies for 48 h at 5°C and 15°C. The effect of five buffers (TES (N-tris (hydroxymethyl) methyl-2-aminoethanesulfonic acid), PIPES (piperaxin-N, N'-bis (2-ethanesulfonic acid)), BES (N, N-Bis (N-2-hydroxyethylpiperazine-N'-2-ethanesulfonic acid)) was evaluated in a extender composed of skimm milk powder and glucose. Analysis with the BES, MES and TES buffers were performed in fresh semen of eight ponies and in cooled semen for 48 h at 15°C. A sample from each group was used for analysis of motility, pH, osmolarity, hyposmotic test, mitochondrial activity (MTT) and membrane integrity through fluorescent probes. The pH and osmolarity of the extenders without semen were also evaluated. Data were assessed by analysis of variance and Tukey's test, when P <0.05 was considered significant. Osmolarity of the diluted semen did not differ between extenders and was for BES 350.91 ± 11.24 mOsm, MES 350.41 ± 11.76 mOsm and TES 350 ± 12.96 mOsm. The pH of the semen after dilution in the respective extenders varied between the hours (P <0.05) and did not change over time as evidenced by the buffering effect of the extenders. Extender osmolarity was similar between BES (366 ± 5.47 mOsm), MES (370 ± 6.12 mOsm) or TES (371 ± 5.47 mOsm) buffers after dilution and without addition of semen. The pH varied (P <0.05) according to the buffer. In the experiment at 5°C all treatments showed a decrease in the percentage of total, progressive and local motility of the cooled semen after 24 h and 48 h compared to the fresh. However, in the percentage of motile sperm to fresh, 24 h and 48 h at 5°C between treatments was similar. Percentage of spermatozoa reactive to the hyposmotic test, and with mitochondrial activity did not differ between treatments. In the experiment at 15°C total, progressive and local vigor and motility were similar between BES, MES and TES buffers in each period. Osmolarity of the diluted semen did not differ between extenders and was for BES 360.93 ± 10.52 mOsm, MES 361.47 ± 6.79 mOsm and TES 361.56 ± 7.68 mOsm. Due to the individual characteristics of each buffer, diluted semen pH varied between the extenders with the buffers used. Percentage of spermatozoa reactive to the hyposmotic test, with mitochondrial activity and intact membrane observed with CFDA and PI did not differ between treatments. We concluded that BES, MES or TES can be used in the storage and transport of ponies semen for 48 h at 5°C or 15°C. The second experiment aimed to evaluate the influence of polyunsaturated fatty acid supplementation in the fresh and after freezing semen of Brazilian ponies. Eight ponies received their conventional diet (control group) or conventional diet and 70 g of DHA-rich Schizochytrium sp algae meal (PUFA group). The effect of Vitamin E (1 mM, DL-α-tocopherol) added to the freezing diluent for semen was also evaluated on seminal quality, before and after freezing. Semen was collected every 15 days during 60 days. Stallions were reversed in treatments after an interval of sixty days. Semen was evaluated fresh and after freezing. Motility and vigor were estimated in the fresh semen. After thawing motility, membrane functionality, membrane integrity and computed motility analysis were evaluated. Mean values for fresh parameters evaluated in the PUFA and control groups were similar. Mean values of total, progressive and local motility, hyposmotic, CFDA/PI and computerized analysis of semen supplemented with DHA and post-thaw control group did not differ. The combination of DHA and Vitamin E supplementation added to the diluent did not potentiate the antioxidant capacity of the diluent during freezing and resulted in decreased total and progressive motility compared to the non-supplemented group. Supplementation of 70 g of DHA-rich microalgae Schizochytrium sp and the addition of 1 mM vitamin E to the semen freezing diluent in Brazilian ponies was not efficient to promote improvement in seminal viability after collection or even after freezing.

Made available in DSpace on 2015-12-10T14:23:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-07-14. Added 1 bitstream(s) on 2015-12-10T14:29:32Z : No. of bitstreams: 1 000854732.pdf: 3835428 bytes, checksum: 4cf17ee516a8e0b0badde61a0f9d3d5c (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O vírus de Epstein-Barr (Epstein-Barr virus - EBV) infecta latentemente mais de 90% da população humana. A infecção viral está associada ao desenvolvimento de alguns cânceres, incluindo o carcinoma de nasofaringe. Alguns estudos sugerem a contribuição na evasão imune e progressão dos cânceres causados pelo EBV. Diferentes variantes da proteína latente de membrana 1 (LMP1), principal produto do EBV, são discriminadas, principalmente, por variações nos domínios transmembrana e carboxi-terminais da proteína. O domínio C-terminal de LMP1 é capaz de ativar vias de sinalização intracelular que regulam os fenômenos de migração e invasão celular. Adicionalmente, induz síntese de produtos que degradam a matriz extracelular e favorecem a angiogênese. Até o momento, não se sabe se diferentes variantes de LMP1 apresentam propriedades distintas no que se refere a esses fenômenos do escape imune e progressão tumoral. Assim sendo, no presente estudo avaliamos a influência das variantes de LMP1 sobre a capacidade de migração e invasão celular in vitro e a imunomodulação de HLA-ABC e HLA-DR, CD80, CD83, CD54, CD40 e PD-L1 nas linhagens celulares HEK293T e NP69. Observamos que as variantes Alaskan, Med+, China 1 e China 2 induziram a migração celular da linhagem NP69 de maneira distinta quando comparadas entre si e com a célula sem LMP1. Observamos, também, maior capacidade de invasão celular das células HEK293T-China 2 em comparação à HEK293T. Com relação à expressão de moléculas envolvidas na modulação da resposta imune, observamos que a transfecção de LMP1 aumentou a expressão de CD80 e CD83 apenas nas células NP69-Alaskan, e de CD54 e PD-L1 de maneira similar nas células NP69-LMP1. Conclui-se, portanto, que LMP1 promove migração distinta das células NP69-LMP1 e invasão de células HEK293T-China 2, e modula a expressão de moléculas envolvidas no escape imunológico / The Epstein-Barr virus (EBV) latently infects more than 90% of human adults. Viral infection is associated to the development of some cancers, including nasopharyngeal carcinoma. Oncogenic potential of the virus is usually studied in terms of its capacity to transform the infected cells nevertheless some studies suggest that the EBV infection may also contribute to immune evasion, and cancer progression. Several latent membrane protein 1 (LMP1) variants are described, discriminated mainly by variations in its C-terminal and the transmembrane domains of the protein. LMP1 C-terminal domain activate intracellular signaling pathways that regulated cell migration; moreover, LMP1 upregulate the expression of cell proteins with roles in extracellular matrix remodeling and angiogenesis. Currently it is unknown whether different LMP1 variants possess distinct properties regarding biological phenomena relevant to immune evasion, and cancer progression. Thus, in the present study we evaluated the in vitro migration and invasiveness, and immunomodulation of HLA-ABC, HLA-DR, CD80, CD83, CD54, CD40, and PD-L1 of HEK293T cells, and NP69 cells. We observed that Alaskan, Med+, China 1, and China 2 stimulates distinctly migration of NP69 when compared to cell without LMP1. We also saw that HEK293T-China 2 had a pronounced cellular invasion when compared to HEK293T. In regard of expression of molecules involved in immune response modulation, we observed that LMP1 enhanced expression of CD80, and CD83 in NP69-Alaskan cells; and CD54, and PD-L1 in a similar level in NP69-LMP1 cells. In summary, LMP1 promote distinct cellular migration in NP69LMP1 cells, and HEK293T-China 2 invasion, and is capable of modulate molecules involved in immune evasion

Submitted by FERNANDA DE OLIVEIRA BARBOSA null (feobarbosa@hotmail.com) on 2016-04-11T19:18:08Z No. of bitstreams: 1 DIssertação_Fernanda_de_Oliveira_Barbosa.pdf: 3283611 bytes, checksum: 0f6c2b0766490591a0e2a8457d08fef4 (MD5) / Approved for entry into archive by Juliano Benedito Ferreira (julianoferreira@reitoria.unesp.br) on 2016-04-13T12:50:17Z (GMT) No. of bitstreams: 1 barbosa_fo_me_jabo.pdf: 3283611 bytes, checksum: 0f6c2b0766490591a0e2a8457d08fef4 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-13T12:50:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 barbosa_fo_me_jabo.pdf: 3283611 bytes, checksum: 0f6c2b0766490591a0e2a8457d08fef4 (MD5) Previous issue date: 2016-02-29 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Salmonella Enteritidis (SE) causa o paratifo aviário em aves e frequentemente está relacionada aos surtos de infecção alimentar em seres humanos. A contribuição do flagelo versus motilidade na interação patógenohospedeiro requer estudos mais aprofundados. Para melhor entendimento da contribuição individual desses fatores de virulência em aves, pintinhos de um dia de vida foram desafiados oralmente com estirpe selvagem de SE, uma mutante não-móvel mas flagelada (SE ΔmotB) e outra mutante aflagelada (SE ΔfliC). Excreção fecal e colonização de fígado, baço e conteúdo cecal pelas estirpes de SE foram avaliadas. Além disso, também foi realizada a avaliação das alterações macroscópicas e microscópicas. Nos estágios iniciais da infecção, ambos mutantes mostraram menor capacidade de colonizar o ceco, além de menor recuperação no baço por SE ΔfliC comparando a estirpe selvagem SE. Após 7 dpi não havia diferenças na contagem das três estirpes em conteúdo cecal, fígado e baço. Análises histopatológicas demonstraram que estirpes flageladas (SE ΔmotB e SE) induziram reatividade linfóide em inglúvio, ceco, íleo e fígado. No entanto, nos estágios iniciais da infecção a estirpe SE ΔfliC não estimulou a reatividade linfóide em lâmina própria de ceco e íleo mas induziu discretos focos necróticos em fígado. Portanto, neste estudo a presença de estrutura flagelar e motilidade parece exercer um papel nos estágios iniciais da colonização intestinal e infecção sistêmica por SE nas aves. / Salmonella Enteritidis (SE) causes fowl paratyphoid in poultry often related to outbreaks of food-borne diseases in humans. The contribution of flagella and motility in host pathogen interaction require further investigation. To better understand the individual contribution of these virulence factors in poultry, one day old chickens were challenged orally with wildtype strain of SE, a nonmotile but fully flagellated (SE ΔmotB) and aflagellated mutant (SE ΔfliC). Faecal excretion and colonization of liver, spleen and cecal contents by the SE strains were assessed. Additionally, the assessment of gross and microscopic alterations was also performed. At the early stages of infection both mutants showed lower capacity to colonize the ceca, besides the lower recovering in spleen of SE ΔfliC comparing to the wild type of SE. After 7 dpi there were no differences among the counts of the three strains in ceca, liver and spleen. Histopathological analyses demonstrated that flagellated strains (wild type SE and SE ΔmotB) induced lymphoid reactivity in crop, ceca, ileum and liver. On the other hand, in the early stages of infection, SE ΔfliC strain did not stimulate lymphoid reactivity in lamina propria of ceca and ileum but induced discrete necrotic foci in liver. Thus in the present study the flagellar structure and motility seemed to play a role at the early stages of the intestinal colonization and systemic infection by SE in the chicken. / FAPESP: 2014/02014-1