Orientador: Marta Helena Krieger / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-12T15:37:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dias_RodrigoGoncalves_D.pdf: 2107835 bytes, checksum: 6fd6d265e1589073318d2dfbcbfe35c1 (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: O Óxido Nítrico (NO) é um radical livre gasoso sintetizado nos vasos sanguíneos principalmente pela enzima óxido nítrico sintase endotelial (eNOS). No sistema cardiovascular ele está diretamente envolvido no controle do fluxo sanguíneo regional, especialmente na musculatura esquelética. O polimorfismo G894T do gene da eNOS vem sendo amplamente investigado e o alelo 894T, que resulta na troca do aminoácido glutamato por aspartato na posição 298 da enzima, parece estar associado ao desenvolvimento de doenças cardiovasculares. No entanto, não se conhece o efeito dessa variante genética na vasodilatação muscular. Neste estudo testou-se a hipótese de que a resposta reflexa de vasodilatação muscular durante o exercício isométrico de handgrip estaria atenuada em indivíduos portadores do alelo 894T. Em adição, que a resposta atenuada estaria ocorrendo em conseqüência de uma biodisponibilidade reduzida do NO e/ou aumento da atividade nervosa simpática vasoconstritora para a musculatura esquelética. Para testar tais hipóteses, 287 voluntários foram previamente genotipados e, deste total, 33 indivíduos saudáveis foram selecionados para representar 3 genótipos: GG (n=15, Idade=43±3 anos, IMC=22,9±0,3 kg/m2), GT (n=9, Idade=39±3 anos, IMC=24,6±1,2 kg/m2) e TT (n=9, Idade=40±4 anos, IMC=23,5±0,9 kg/m2). A freqüência cardíaca (FC; ECG), pressão arterial média (PAM; oscilométrico) e fluxo sangüíneo no antebraço (FSA; pletismografia de oclusão venosa) foram avaliados por 3 minutos no basal e 3 minutos durante o exercício isométrico de handgrip, realizado a 30% da máxima contração voluntária. Não houve diferença nos valores basais de FC, PAM, FSA e condutância vascular no antebraço (CVA) entre GG (69±2 bpm; 91±3 mmHg; 1,81±0,09 ml.min-1.100 ml-1; 2,03±0,12 unidades, respectivamente), GT (69±4 bpm; 94±2 mmHg; 1,80±0,23 ml.min-1.100 ml-1; 1,90±0,24 unidades) e TT (63±3 bpm; 95±3 mmHg; 1,79±0,17 ml.min-1.100 ml-1; 1,89±0,17 unidades). Em resposta ao exercício, a CVA foi significativamente menor no genótipo TT ('delta'=0,07±0,14 unidades, P=.002) quando comparado aos genótipos GG ('delta'=0,57±0,09 unidades) e GT ('delta'=0,64±0,20 unidades). Para investigar os mecanismos responsáveis pela vasodilatação reduzida no genótipo TT, o FSA foi estudado durante a infusão intra-arterial de L-NMMA (4 mg.min-1) e L-NMMA + fentolamina (4 mg.min-1 e 100µg.min-1), num subgrupo de 8 indivíduos com genótipo GG e 7 indivíduos com genótipo TT. Em adição, avaliou-se a xvi atividade nervosa simpática muscular (ANSM; microneurografia). Em resposta ao exercício, L-NMMA não alterou a CVA no genótipo TT ('delta'-0,05±0,20 vs. -0,09±0,18 unidades). Ao contrário, L-NMMA reduziu significativamente a CVA no genótipo GG ('delta'=0,79±0,14 vs. 0,14±0,09 unidades). Desta forma, a diferença entre os genótipos não foi mais observada (P=.62). L-NMMA + fentolamina aumentou similarmente a CVA em resposta ao exercício nos genótipos GG e TT ('delta'=1,16±0,26 vs. 0,56±0,24 unidades, P=.43). A PAM e a ANSM aumentaram significativamente e de forma similar em ambos os genótipos. Estes resultados permitem concluir que o polimorfismo G894T do gene da eNOS está associado à vasodilatação muscular reflexa diminuída em resposta ao exercício. Em adição, esta atenuação na vasodilatação nos indivíduos homozigotos para o alelo 894T parece ser primariamente mediada por uma biodisponibilidade reduzida do óxido nítrico, mas não por um aumento da atividade nervosa simpática muscular / Abstract: Nitric oxide (NO) is a free radical synthesized in vessels mainly by endothelial nitric oxide synthase (eNOS) enzyme. In the cardiovascular system NO is involved in the modulation of regional blood flow, mainly in the skeletal muscle. The G894T polymorphism of the eNOS gene has been extensively investigated, and the 894T allele that results in glutamate to aspartate exchange at the position 298 of the eNOS enzyme, has been associated with cardiovascular diseases. However, the effects of 894T allele on muscle vasodilatation are unknown. We hypothesized that the reflex forearm blood flow responses during handgrip isometric exercise would be attenuated in individuals carrying the 894T allele. In addition, these responses would be mediated by impairment in nitric oxide availability and/or an increase in vasoconstrictor sympathetic nerve activity to skeletal muscle. To test the previous hypothesis, 287 volunteers were previously genotyped, and 33 healthy individuals selected to represent three genotypes: GG (n=15, age=43±3 years, BMI=22.9±0.3 kg/m2), GT (n=9, age=39±3 years, BMI=24.6±1.2 kg/m2) and TT (n=9, age=40±4 years, BMI=23.5±0.9 kg/m2). Heart rate (HR; ECG), mean blood pressure (MBP; oscillometric cuff) and forearm blood flow (FBF; venous occlusion plethysmography) were recorded for 3 minutes at baseline and 3 minutes during isometric handgrip exercise performed at 30% of maximal voluntary contraction. Baseline HR, MBP, FBF and forearm vascular conductance (FVC) were similar among GG (69±2 bpm; 91±3 mmHg; 1.81±0.09 ml.min-1.100 ml-1; 2.03±0.12 units, respectively), GT (69±4 bpm; 94±2 mmHg; 1.80±0.23 ml.min-1.100 ml-1; 1.90±0.24 units) and TT (63±3 bpm; 95±3 mmHg; 1.79±0.17 ml.min-1.100 ml-1; 1.89±0.17 units). FVC responses to exercise were significantly lower in TT ('delta'=0.07±0.14 units, P=.002) when compared with GG ('delta'=0.57±0.09 units) and GT ('delta'=0.64±0.20 units). To investigate the mechanisms underlying the lowered vasodilatation in TT genotype, we studied FBF during brachial intra-arterial infusion of L-NMMA (4 mg.min-1) and L- NMMA + phentolamine (4 mg.min-1 and 100µg.min-1, respectively) in a subset of 8 GG and 7 TT individuals. In addition, we directly measured muscle sympathetic nerve activity (MSNA) by means of microneurography. L-NMMA did not significantly change FVC responses to exercise in TT when compared with saline control infusion ('delta'=- 0.05±0.20 vs. -0.09±0.18 units). In contrast, L-NMMA significantly reduced FVC in GG xviii genotype ('delta'=0.79±0.14 vs. 0.14±0.09 units), and the difference between genotypes were no longer observed (P=.62). L-NMMA + phentolamine increased similarly FVC responses to exercise in GG and TT individuals ('delta'=1.16±0.26 vs. 0.56±0.24 units, respectively, P=.43). MBP and MSNA increased significant and similarly throughout experimental protocols in GG and TT genotypes. We concluded that G894T gene eNOS polymorphism is functionally associated with impaired reflex muscle vasodilatation to exercise. In addition, the attenuated vasodilatation responsiveness to exercise in individuals who are homozygous for the 894T allele of the eNOS gene seems to be primarily mediated by a reduced nitric oxide bioavailability, but not increase in MSNA / Doutorado / Fisiologia / Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Orientadores: Heitor Moreno Junior, Juan Carlos Yugar Toledo / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-12T18:08:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Souza_LeoniAdrianade_D.pdf: 2182223 bytes, checksum: 8e22db6a7776453957b37130a24a1a82 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: Segundo o VII JNC, Hipertensão arterial refratária (HAR) é definida como sendo a elevação persistente dos níveis pressóricos (acima de 140 mmHg) à despeito de tratamento farmacológico tríplice, pleno, incluindo um diurético, em pacientes com boa adesão e sem causas secundárias de hipertensão arterial ou pseudo-hipertensão. Quando exposto aos fatores de risco, como a hipertensão arterial (HA), o endotélio apresenta alterações funcionais denominadas genericamente de disfunção endotelial, onde ocorre principalmente uma menor biodisponibilidade de óxido nítrico (NO) e de substâncias vasodilatadoras ou uma maior produção de substâncias vasoconstritoras. O objetivo deste trabalho foi avaliar a função do endotélio vascular no leito venoso e arterial em pacientes com HAR. Após a triagem e adesão rigorosa, os 86 pacientes foram seqüencialmente incluídos no estudo, dos quais 33 foram caracterizados como hipertensos resistentes (HAR), 50,7±8,5 anos, 28 pacientes como hipertensos controlados (HA), 54,9±12,0 anos e 25 normotensos controle (NT), 35,8±12,1anos. Todos os grupos foram submetidos ao exame da função endotelial venosa pela técnica da veia dorsal da mão (DHVT), do endotélio arterial pela vasodilatação mediada pelo fluxo (VMF) e velocidade de onda de pulso (VOP). Os principais resultados do presente estudo mostraram: a) diferença estatisticamente significante entre os grupos HAR e NT (p<0,05) em relação à vasodilatação endotélio dependente no leito venoso, o mesmo não ocorrendo com a venodilatação induzida por nitroprussiato de sódio (endotélio independente); b) alterações funcionais do leito arterial dependente do endotélio, através da vasodilatação mediada pelo fluxo entre os grupos HAR e NT (p<0,0005) e HA e NT (p<0,003) e a vasodilatação não dependente do endotélio perante estímulo farmacológico entre os grupos HAR e NT (p<0,0001) e HA e NT (p<0,01); c) rigidez arterial constatada pela VOP entre os grupos HAR e NT (p<0,0001) e HA e NT (p<0,03). Pacientes HAR apresentam disfunção vascular venosa, observada pela diminuição da venodilatação endotélio dependente, caracterizada por redução da complacência de veia dorsal da mão (CVDM) em resposta à administração de acetilcolina, assim como ocorre diminuição da vasodilatação mediada pelo fluxo e NTG (artéria braquial), mensuradas pela técnica da vasodilatação mediada pelo fluxo (VMF) e aumento da rigidez arterial / Abstract: Refractory Hypertension (RH) is conventionally defined as a persistent elevation in blood pressure (systolic > 140 or diastolic > 90 mmHg), even on a triple drug regimen at maximal doses including a diuretic, in patients with good adhesion and without secondary causes of hypertension or pseudo-hypertension. When exposed to risk factors, such as hypertension, the endothelium presents functional alterations, denominated endothelial dysfunction, with a reduced bioavailability of nitric oxide (NO) and vasodilation agents or an increased production of vasoconstrictor agents. The objective of this work was to evaluate the vascular endothelial function in venous and arterial networks of patients with RH After careful selection, a total of 86 patients were included in the study; 33 were characterized as resistant hypertensives (50.7±8.5 years), 28 as controlled hypertensives (54.9±12.0 years) and 25 as apparently healthy volunteers (35.8±12.1 years). All participants were submitted to an evaluation of the venous endothelial function by the dorsal hand vein technique, the arterial endothelium by flow-mediated vasodilation and the Arterial Stiffness. The main results of this study showed: a) a significant difference between the RH and NT Groups (p< 0.05) in respect to endothelial-dependent vasodilatation in the venous network; this was not seen in endothelium-independent vasodilatation induced by sodium nitroprusside; and b) functional alterations of the arterial network as seen by endothelial-dependent vasodilation comparing the RH and NT (p<0.0005) and CH and NT (p<0.003) and endothelial independent vasodilatation on evaluating the pharmacological response comparing RH and NT (p<0.0001) and CH and NT (p<0.01); and c) arterial stiffness by pulse wave velocity comparing the RH and NT Groups (p<0.0001) and CH and NT (p<0.03). RH patients present with venous vascular dysfunction, identified by a decrease in the endothelium-dependent vasodilatation characterized by a reduction in compliance of the dorsal hand vein in response to the administration of acetylcholine. Additionally, a decrease in nitroglycerin-induced flow-mediated vasodilatation (brachial artery) was observed and elevated arterial stiffness / Doutorado / Doutor em Farmacologia

Orientador: Edson Antunes / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-14T06:23:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bau_FernandoRicardo_M.pdf: 739046 bytes, checksum: e73f0e5383c7082e68c3cbf81bdfce5f (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: A síndrome da bexiga hiperativa atinge grande parte da população mundial, e gera sintomas que prejudicam a qualidade de vida dos portadores. Está associada com a hiperatividade do detrusor que se dá por um aumento das contrações espontâneas. Alguns estudos têm mostrado que a deficiência de NO é um dos fatores responsáveis por gerar estas contrações espontâneas. É sabido que o mecanismo de sinalização do NO envolve a ativação da guanilil ciclase solúvel e produção de GMPc. Atualmente, algumas drogas têm sido sintetizadas para mimetizar o efeito exercido pelo NO, tal como o BAY 41-2272, um potente estimulador da guanilil ciclase solúvel independente de NO. Vários trabalhos mostraram que o BAY 41-2272 causa relaxamento de vários tipos de musculatura lisa, podendo ser um composto com grande potencial terapêutico em doenças onde a via do NO/GMPc está prejudicada. O objetivo deste trabalho é investigar a capacidade do BAY 41-2272 de relaxar detrusor isolado de camundongo, coelho e rato in vitro e os mecanismos farmacológicos envolvidos na resposta relaxante. Camundongos C57b6 machos (30-40 g), coelhos New Zealand machos (2-3 kg) e ratos Wistar machos (250-300 g) foram anestesiados e mortos. As bexigas foram removidas e fragmentos de detrusor foram montados em banho para órgãos isolados contendo 10 ml de solução de Krebs. Curvas concentração-resposta ao BAY 41-2272 (10-9 - 10-4 M) foram construídas em tecidos précontraídos com carbacol (10 µM) ou KCl (80 mM), na ausência ou na presença de LNAME (inibidor da óxido nítrico sintase; 100 µM), ODQ (inibidor da guanilato ciclase solúvel; 100 µM), Sildenafil (inibidor da fosfodiesterase tipo-5; 10 µM), ou inibidores de canais de potássio (0,1 µM charibdotoxina + 1 µM apamina; 1µM tetraetilamônio; ou 10 µM glibenclamida). Curvas concentração-resposta ao nitroprussiato de sódio (SNP; 10-8 - 10-4 M), gliceril trinitrato (GTN; 10-8 - 10-4 M) e 8Br-GMPc (10-8 - 10-4 M) foram também construídas. Contrações induzidas por CaCl2 extracelular foram avaliadas na presença do BAY 41-2272, bem como o efeito no influxo de cálcio em plaquetas isoladas de coelho. Níveis de GMPc e AMPc foram avaliados após a estimulação do detrusor com BAY 41- 2272 (10 e 100 µM) e SNP (100 µM) na ausência ou na presença de ODQ (100 µM), através de imunoensaio enzimático (ELISA). O BAY 41-2272 produziu relaxamento de detrusor isolado de camundongos, ratos e coelhos de maneira concentração-dependente, com valores de resposta máxima de 61,3 ± 6,6%, 91,7 ± 5,9% e 95,1 ± 9,9%, respectivamente. Detrusor de coelhos foram selecionados para os experimentos subseqüentes. Os doadores de NO, SNP e GTN, bem com o 8Br-GMPc produziram um discreto relaxamento comparado ao BAY 41-2272. O tratamento dos tecidos com L-NAME (100 µM) ou sildenafil (10 µM) não afetou de maneira significativa o relaxamento induzido pelo BAY 41-2272. Entretanto, o ODQ (100 µM), reduziu significativamente a resposta ao BAY 41-2272. Os bloqueadores de canais de K+ (apamin + charibdotoxina, glibenclamida ou tetraetilamônio) também não afetaram a resposta relaxante do BAY 41-2272. O BAY 41-2272 (10 e 100 µM) elevou os níveis de GMPc em cerca de 14 e 20 vezes respectivamente, sem afetar os níveis de AMPc. Na menor concentração do BAY 41-2272 (10 µM), o ODQ aboliu a elevação dos níveis de GMPc, ao passo que na maior concentração do BAY 41-2272 (100 µM), o ODQ inibiu parcialmente a elevação dos níveis de GMPc. A adição de CaCl2 (0,01-30 mM) extracelular em detrusor isolado de coelhos causou contração de maneira concentração-dependente que foi significativamente reduzida pelo tratamento prévio com BAY 41-2272 (1 e 10 µM), sendo que este efeito não foi prevenido pelo ODQ. O BAY 41-2272 reduziu significativamente o aumento dos níveis intracelulares de cálcio em plaquetas de coelho induzido por trombina. Em resumo, o BAY 41-2272 produz relaxamento em detrusor isolado de camundongos, coelhos e ratos através da produção de GMPc e da inibição do influxo de cálcio que independe de GMPc / Abstract: Overactive bladder (OAB) is a highly prevalent condition that affects millions of people worldwide with a profound effect on quality of life. The bladder overactivity is related to spontaneous contractions of the detrusor smooth muscle causing an increase in the intravesical pressure and consequently stimulation of the micturirion reflex. Evidences suggest that impairment of nitric oxide (NO) signaling pathway may account for OAB. It is well established that NO signaling pathways involves soluble guanylate cyclase (sGC) stimulation and cyclic GMP production. Recently, pharmacological agents capable of directly stimulating soluble guanylate cyclase independenly of NO, such as BAY 41-2272 has been reported to produce relaxation of different types of smooth muscle, showing great therapeutic potential in disturbs which NO pathway is impaired. The present study aimed to evaluate the capacity of BAY 41-2272 to relax isolated mouse, rat and rabbit DSM and the mechanism underlying these response. C57b6 male mice, Wistar male rats and New Zealand male rabbits were anesthetized, and urinary bladder removed. DSM was transferred to 10-mL organ baths containing oxygenated and warmed Krebs-Henseleit solution. Tissues were connected to force-displacement transducers and changes in isometric force were recorded. Concentration-response curves to BAY 41-2272 (10-9 - 10-4M) were constructed, in previously contracted tissues with carbachol (10 µM) or KCl (80 mM), in the absence and in the presence of L-NAME (Nitric Oxide Synthase inhibitor; 100 µM), ODQ (sGC inhibitor; 100 µM), Sildenafil (phosphodiesterase type-5 inhibitor; 10 µM), or potassium channel blockers (0.1 µM charybdotoxin + 1 µM apamin; 1 µM tetraethylammonium; or 10 µM glybenclamide). Concentration-response curves to sodium nitroprusside (SNP; 10-8 - 10-4 M), glyceryl trinitrate (GTN; 10-8 - 10-4 M) and 8Br-cGMP (10-8 - 10-4 M) were also constructed. CaCl2-induced contractions in DSM and calcium influx in rabbit isolated platelets were evaluated in the presence of BAY 41-2272. Levels of cAMP and cGMP in DSM strips were determined after treatment with BAY 41-2272 (10 and 100 µM), SNP (100 µM) in the absence or in the presence of ODQ (100 µM) using specific EIA kit. BAY 41-2272 (0.001-100 µM) produced concentration-dependent DSM relaxations in mouse, rat and rabbit with maximal responses of 61.3 ± 6.6%, 95.1 ± 9.9% and 91.7 ± 5.9%, respectively. The NO-donors sodium nitroprusside and glyceryl trinitrate, as well as 8-bromo-cGMP also produced concentration-dependent rabbit DSM relaxations, but to a lesser extent than BAY 41-2272. Pretreatment with L-NAME (NO synthesis inhibitor) or sildenafil (phosphodiesterase-5 inhibitor) had no effect in BAY 41-2272- induced responses. However, the soluble guanylyl cyclase inhibitor ODQ significantly reduced BAY 41-2272-induced relaxantions. BAY 41-2272 (10 and 100 µM) increased the bladder cGMP levels by about of 14- and 20-fold, respectively, without affecting the cAMP levels. The cGMP increases in response to BAY 41-2272 and SNP were markedly reduced by ODQ. CaCl2 caused a concentration-dependent contraction in DSM strips and BAY 41- 2272 significantly reduced the contractile responses to extracellular Ca2+ in an ODQinsensitive manner. BAY 41-2272 also significantly reduced the increase of intracellular calcium levels induced by thrombin. This inhibitory effect was completely reverted after the treatment with ODQ. BAY 41-2272 relaxes DSM of the three animal species studied. BAY 41-2272-induced DSM relaxation involves mainly cGMP production, but an additional mechanism involving Ca2+ influx blockade independently of cGMP production appears to be involved / Mestrado / Farmacologia / Mestre em Farmacologia

Orientador: Marcelo Ganzarolli de Oliveira / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-08-08T04:10:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Simoes_MairaMartinsdeSouzaGodoy_M.pdf: 3432819 bytes, checksum: d31e48f8632d109b7dba6dbd370c37f6 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: Stents são malhas metálicas expansíveis usadas em procedimentos de angioplastia, para a desobstrução das artérias coronárias. Atualmente há um grande interesse na obtenção de stents revestidos com matrizes poliméricas eluidoras de drogas que impeçam a reoclusão da artéria (reestenose). S-nitrosotióis doadores de óxido nítrico (NO) como a S-nitrosoglutationa (GSNO) possuem potencial para a inibição da reestenose. Neste trabalho, placas metálicas e stents foram revestidos com filmes de PVA contendo GSNO (107 µmol/g) através da imersão em soluções de PVA/GSNO com concentrações de PVA de 0,5 a 10,0% m/v. Filmes de PVA/GSNO foram submetidos a ciclos de congelamento/descongelamento (C/D), e analisados em relação ao seu grau de cristalinidade, dissolução, intumescimento, morfologia e propriedades de difusão e eluição da GSNO. Análises por DSC e difração de raios X, mostraram que o grau de cristalinidade do PVA aumenta com o número de ciclos de C/D, e com a secagem por sublimação do filme congelado. O aumento da cristalinidade se reflete em uma diminuição da velocidade de eluição da GSNO para a fase aquosa e da velocidade de dissolução e grau de intumecimento da matriz. Os coeficientes de difusão (D) da GSNO através de filmes de PVA foram medidos utilizando-se uma cela tipo Franz com monitoramento espectrofotométrico. Verificou-se que os valores de D são menores nos filmes secos por sublimação e submetidos a um ciclo de C/D. Este resultado foi atribuído ao aumento da densificação da fase amorfa, obtido na secagem por sublimação. Os filmes secos por esta técnica, apresentaram uma estrutura tridimensional esponjosa constituída por filamentos interligados, revelada por microscopia eletrônica de varredura (MEV). Estimou-se que stents revestidos com PVA/GSNO, a partir de soluções de PVA 0,5 % (m/v) esterilizados com óxido de etileno a 45-55°C podem liberar cerca de 30 µmoles/g de PVA para a parede arterial e levaram à obtenção de revestimentos sem filmes entre as hastes metálicas / Abstract: Stents are expansible wire mesh tubes used in angioplasty procedures in order to widening the luminal diameter of the coronary arteries. There is currently a great interest in the development of stents coated with drug-eluting polymeric matrices, which are able to prevent future closure of artery (restenosis). S-nitrosothiols which are nitric oxide (NO) donors, like S-nitrosoglutathione (GSNO) have potential to inhibit restenosis. In the present work, metallic plates and stents were coated with GSNO (107 µmol/g)- containing PVA films through their immersion in PVA/GSNO solutions with PVA concentration ranging from 0.5 to 10.0% wt/v. PVA/GSNO films were submitted to freezing/thawing cycles (F/T) and analyzed concerning their crystallinity dissolution, swelling, morphology and GSNO diffusion and elution properties. DSC and X Ray diffraction analysis have shown that the PVA crystallinity degree increases with the increase in the number of F/T cycles, and with the drying of the frozen film by sublimation. The increase in cristallinity was reflected in a decrease of the rate of GSNO elution to the aqueous phase, dissolution rate and swelling degree of the matrix. The diffusion coefficients of GSNO through PVA films were measured using a Franz-like cell with spectrophotometric monitoring. It was verified that D values are lower in the films dried by sublimation and submitted to one FT cycle. This result was attributed to the increase in the densification of the amorphous phase obtained in the drying by sublimation. The films dried by this technique, displayed a spongelike three-dimensional structure made by interconnecting filaments, revealed by scanning electron microscopy (SEM). Stents coated with PVA/GSNO, from solution of PVA 0.5 % (wt/v) have avoided the formation of films between the wires of the stent mesh. It was estimated that these stents are able to release ca. 30 µmols/g of PVA to the arterial wall after sterilization with ethylene oxide at 45-55 °C / Mestrado / Físico-Química / Mestre em Química

Orientador: Licio Augusto Velloso / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-08T07:52:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_FernandoGanzarollide_D.pdf: 2241345 bytes, checksum: a0f9e9616ce36521fc221d40146a8e97 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: Angiotensina II (AngII) desempenha um papel importante na gênese da hipertrofia miocárdica. Grande parte do estímulo hipertrófico determinado pela AngII depende da ativação de sinalização intracelular envolvendo membros das famílias de transdutores de sinais mitogen-activated-protein kinase (MAPK) e Janus Kinase (JAK)/ signal transducer and activator of transcription (STAT). Agentes farmacológicos doadores de óxido nítrico (NO) estão sendo objeto de intensa pesquisa, atualmente, pelo seu potencial terapêutico em condições clínicas envolvidas na hipertrofia miocárdica. No presente trabalho, avaliamos a propriedade do S-nitroso-acetilcisteína (SNAC) de modular a transdução de sinal da AngII mediada por membros da família das MAPK e JAK/STAT em coração e cardiomiócitos isolados de ratos. SNAC foi capaz de reverter significativamente a ativação promovida pela AngII na via de sinalização JAK2/STAT1 e 3 em coração e cardiomiócitos. Além disso, SNAC reverteu a ativação por AngII em cJun-N-terminal Kinase (JNK)1/2/3. Entretanto, SNAC acentuou o efeito da AngII em Extracellular Regulated Kinase (ERK) 1 e 2. Finalmente, nem AngII nem SNAC exerceram qualquer efeito sobre p38MAPK. Como resultado, houve menor expressão dos immediate early genes c-jun e c-fos, bem como menor ativação por fosforilação da proteína c-Jun. Em resumo, o pré-tratamento de ratos e cardiomiócitos isolados com um potente doador de NO afeta a transdução do sinal da AngII resultando na modulação via-específica da expressão de genes precocemente induzidos. Tais resultados oferecem evidências para o efeito direto de um doador de NO sobre a transdução de sinal da AngII e proporcionam bases moleculares para as propriedades anti-hipertróficas desta classe de drogas / Abstract: Angiotensin II (AngII) plays an important role in the genesis of cardiac hypertrophy. Much of the growth stimulus delivered by AngII depends on the activation of intracellular signaling through members of the mitogen-activated-protein kinase (MAPK) and Janus kinase (JAK)/ signal transducer and activator of transcription (STAT) family of signal transducers. Pharmacological agents that act as donors of nitric oxide (NO) are currently under intensive investigation for their beneficial role in clinical conditions that produce cardiac hypertrophy. Here, we evaluated the property of S-nitroso-N-acetyl cysteine (SNAC) to modulate AngII signal transduction through members of the MAPK family and through JAK2/STAT-1 and 3 in heart and isolated cardiomyocytes of rats. SNAC significantly reversed AngII activation of the JAK2/STAT-1 and -3 signaling in heart and cardiomyocytes. In addition SNAC revered AngII activation of JNK1/2/3. However, SNAC enhanced the effect of AngII on ERK. Finally neither SNAC nor AngII exerted an effect on p-38. As a consequence, there was an abrogation in the enhanced expression of the immediately early genes c-jun and c-fos, as well the phosphorilation of c-Jun. In summary, the treatment of living rats and isolated cardiomyocytes with a potent NO donor affects AngII signal transduction on a pathway specific manner resulting on the modulation of early inducible gene expression. These results provide evidence for a direct effect of a NO donor upon AngII signal transduction, and grant a molecular basis for the anti-hypertrophic properties of this class of drugs / Doutorado / Clinica Medica / Doutor em Clínica Médica

Orientador: Mario Jose Abdalla Saad / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-08T15:02:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Zecchin_HenriqueGottardello_D.pdf: 4518336 bytes, checksum: db2ce3333dfb7dda86b0298470e924ca (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: A resistência seletiva à insulina através da via IRS/PI3-K/Akt/eNOS associada à ativação normal ou exacerbada da via de crescimento MAPK tem sido proposta como um possível elo entre situações de resistência à insulina e doença cardiovascular. Inicialmente demonstramos que animais com resistência à insulina e doença cardiovascular (o rato espontaneamente hipertenso, SHR) apresentam menor ativação da via IRS/PI3-K/Akt/eNOS e hiperativação/hiperexpressão da via da MAPK na aorta torácica, enquanto a ativação normal da via IRS/PI3-K/Akt/eNOS pode proteger o animal obeso, resistente à insulina e que não apresenta doença cardiovascular. Posteriormente, outras vias estimulatórias do crescimento celular, como a via JAK/STAT, foram estudadas no vaso de outro modelo animal de resistência à insulina e doença cardiovascular - o rato com obesidade induzida por dieta. Este modelo demonstrou que a redução da ativação da via PI3-K/Akt/eNOS ocorre em paralelo à hiperativação das vias da MAPK e JAK/STAT, e isso pode desempenhar função importante da patogênese da doença cardiovascular neste estado patológico. Em outro estudo foi demonstrado pela primeira vez que a acetilcolina pode ativar a eNOS de maneira cálcio-independente, através da via IRS/PI3-K/Akt utilizando para isso uma tirosina quinase intracelular, a JAK2. Em ratos com obesidade induzida por dieta, resistentes à insulina e com disfunção endotelial, foi demonstrado que há resistência na via da PI3-K/Akt/eNOS tanto em resposta à insulina quanto à acetilcolina, em decorrência de maior fosforilação inibitória do IRS-1 e da redução dos níveis teciduais da eNOS. Assim, o desequilíbrio entre a ativação reduzida da via IRS/PI3-K/Akt/eNOS e a maior ativação das vias de crescimento (MAPK e JAK/STAT) pode contribuir para o desenvolvimento de doença cardiovascular em estados de resistência à insulina / Abstract: The actions of acetylcholine on endothelium are mainly mediated through muscarinic receptors, which are members of the G protein-coupled receptor family. In the present study we show that acetylcholine induces rapid tyrosine phosphorylation and activation of Janus kinase 2 (JAK2) in rat aorta. Upon JAK2 activation, tyrosine phosphorylation of insulin receptor substrate-1 (IRS-1) is detected. In addition, acetylcholine induces JAK2/IRS-1 and IRS-1/phosphatidylinositol (PI) 3-kinase associations, downstream activation of Akt/protein kinase B, endothelial cell-nitric oxide synthase (eNOS), and extracellular signal-regulated kinase (ERK1/2). The pharmacological blockade of JAK2 or PI 3-kinase reduced acetylcholine-stimulated eNOS phosphorylation, NOS activity and aorta relaxation. These data indicate a new signal transduction pathway for IRS-1/PI 3- kinase/Akt/eNOS activation and ERK1/2 by means of JAK2 tyrosine phosphorylation stimulated by acetylcholine in vessels. Moreover, we demonstrate that, in aorta of obese rats (high-fat diet), there is an impairment in insulin- and acetylcholinestimulated IRS-1/PI 3-kinase pathway, leading to reduced activation with lower protein levels of eNOS associated with a hyperactivated ERK/MAP kinase pathway. These results suggest that in aorta of obese rats, there is not only insulin resistance, but also acetylcholine resistance, probably mediated by a common signaling pathway that controls the activity and the protein levels of eNOS / Doutorado / Medicina Experimental / Doutor em Fisiopatologia Medica

Orientadores: Francesco Langone, Leonilda Maria Barbosa dos Santos / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-08T19:17:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 RodriguezdelaHoz_CristianeLucia_D.pdf: 3716352 bytes, checksum: 29e8652cc135a71b48d8a6442b69e187 (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: A isoforma induzível da sintase do óxido nítrico (iNOS) e o fator de necrose tumoral-alfa (TNF-a) estão envolvidos em processos inflamatórios desmielinizantes como a síndrome de Guillain Barré e seu modelo animal, a neurite experimental auto-imune (EAN). A presença dessas moléculas foi investigada no sistema nervoso periférico de ratos Lewis em diferentes fases da EAN. Raízes nervosas oriundas dos segmentos medulares torácico 12 (T12) a lombar 3 (L3) (raízes adjacentes à intumescência lombar), cauda eqüina e nervos ciáticos foram coletados e processados para dupla imunofluorescência. Paralelamente, esses espécimes foram analisados quanto à desmielinização e degeneração axonal, por meio de histoquímica de Sudan Black e imunofluorescência para neurofilamentos, respectivamente. Todos os animais com EAN apresentaram células inflamatórias com imunorreatividade para iNOS e TNF-a, correspondendo a macrófagos e polimorfonucleares (neutrófilos). Essas células contendo iNOS e TNF-a foram observadas nos ratos Lewis exibindo os primeiros sinais clínicos da EAN. Sua população tornou-se numerosa durante a fase de agravamento do quadro clínico, diminuiu no decorrer da fase de recuperação e não foi observada nos animais clinicamente recuperados. Conforme o estágio da EAN, essas células contendo iNOS e TNF-a foram encontradas nas diferentes regiões nervosas analisadas. No início dos sinais clínicos observou-se algumas células iNOS/TNF-a-imunorreativas em vasos da cauda eqüina e do nervo ciático. Na fase em que os animais apresentaram paraparesia, houve um aumento dessa população celular ao redor de vasos e infiltrados inflamatórios nos gânglios sensitivos, na cauda eqüina e nas raízes nervosas T12-L3. Alterações na bainha de mielina e nos neurofilamentos não foram detectadas. Com a evolução da EAN, os animais desenvolveram paraparesia severa. Nesta fase, numerosas células com imunorreatividade para iNOS e TNF-a distribuíram-se ao redor de infiltrados inflamatórios e no tecido endoneural das raízes espinhais e do nervo ciático. Próximo às regiões de infiltrado, algumas fibras nervosas apresentaram bainha de mielina fragmentada ou mais delgada. Alguns axônios no nervo ciático exibiram imunomarcação dos neurofilamentos menos intensa, fragmentada ou aglomerada. Na fase de recuperação, raras células iNOS/TNF-a-imunorreativas foram encontradas em vasos das raízes nervosas T12-L3 e do nervo ciático. Em algumas raízes da cauda eqüina, essas células foram observadas em maior número. O auge da desmielinização foi verificado no nervo ciático nesse estágio, com a presença de vários fragmentos e ovóides de mielina. Os neurofilamentos imunomarcados, por sua vez, apresentaram-se contínuos, porém mais delgados do que os normais. Na fase de resolução da EAN não foram evidenciadas células duplamente imunorreativas. A bainha de mielina recobrou seu aspecto normal nas raízes nervosas, enquanto que no nervo ciático, bainhas de mielina e neurofilamentos imunomarcados delgados foram observados em meio a bainhas e imunomarcação de neurofilamentos mais grossas. Nossos resultados sugerem uma correlação entre a presença da iNOS e TNF-a nas diferentes regiões nervosas e os sinais clínicos exibidos pelo animal com EAN. Além disso, o acentuado processo desmielinizante que ocorre no nervo ciático é capaz de promover alterações estruturais nos neurofilamentos, provavelmente afetando o funcionamento normal dos axônios / Abstract:Inducible nitric oxide synthase (iNOS) and tumor necrosis factor-alpha (TNF-a) are involved in inflammatory processes such as Guillain Barré Syndrome and its animal model, Experimental Autoimmune Neuritis (EAN). In this study, the presence of these molecules was investigated in the peripheral nervous systems of Lewis rats at different stages of EAN. Thoracic 12 (T12) to lumbar 3 (L3) spinal roots adjacent to lumbar intumescence, cauda equina and sciatic nerves were obtained and processed for double immunofluorescence. These specimens were also analyzed for myelin and axonal degeneration using Sudan Black histochemistry and neurofilament immunolabelling, respectively. All the immunized animals showed double iNOS and TNF-a immunoreactivity in inflammatory cells such as macrophages and polymorphonuclears (neutrophils). These cells were observed in Lewis rats exhibiting the first clinical signs of EAN. Their population increased during the worsening of the disease, diminished during the recovery phase and had disappeared completely in clinically recovered rats. Depending on the EAN phase, iNOS and TNF-a bearing cells were found in the different regions of peripheral nervous system analyzed. At the onset of clinical signs, some iNOS and TNF-a immunoreactive cells were observed in vessels of the cauda equina and the sciatic nerve. In mildly paraparetic rats, an increase in the amount of these cells around vessels and inflammatory infiltrates in the dorsal root ganglia, cauda equina and T12-L3 spinal roots was observed. Changes in the myelin sheath and neurofilaments were not detected. As the EAN evolved, the rats developed severe paraparesis. At this stage, numerous iNOS and TNF-a bearing cells were observed around inflammatory infiltrates and in the endoneurium of the spinal roots and the sciatic nerve. Some nerve fibers near to infiltrated regions showed a thinner or even fragmented myelin sheath. Some sciatic nerve axons exhibited a less intense, fragmented or clustered neurofilament immunolabelling. During recovery stage, rare iNOS/TNF-a immunoreactive cells were detected in vessels of T12-L3 spinal roots and the sciatic nerve. An increased number of these cells was observed in some nerve fibers of cauda equina. The peak stage of demyelination was verified in the sciatic nerve by the presence of several myelin ovoids. Neurofilaments showed continuous immunolabelling, but were more slender than the neurofilaments in naïve rats. Double-immunoreactive cells were not evidenced during the recovery stage. In nerve roots, the myelin sheath recovered its normal appearance, while in sciatic nerves, slenderer myelin sheaths and immunolabelled neurofilaments were observed among thicker ones. Our results suggest that there is a close association between the presence of iNOS and TNF-a bearing cells in the various regions of the peripheral nervous system and the clinical signs exhibited by the animals. Furthermore, the acute demyelinating process in sciatic nerves also promotes structural changes, probably affecting the normal functioning of axons / Doutorado / Biologia Celular / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Marcia Regina Braga / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-09T08:23:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Kretzschmar_FernandadosSantos_M.pdf: 1298329 bytes, checksum: ea1fc8a628a790dbf39de684ebe6192d (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: Plântulas de soja (Glycine max L. Merr), crescidas sob alta concentração de CO2 em sistema de câmaras de topo aberto apresentam incremento na fotossíntese e ganhos de produtividade, podendo alterar a produção de metabólitos secundários de importância farmacológica. Este trabalho teve como objetivo analisar a síntese de flavonas, isoflavonas e pterocarpanos em plântulas de soja (IAC-18, resistente ao fungo causador do cancro da haste Diaporthe phaseolorum f. sp. meridionalis), cultivadas em atmosfera de 380 e 760 mmol mol-1 de CO2 e estimulada por diferentes eliciadores bióticos e abióticos. Fragmentos do b-glucano de Phytophthora megasperma, autoclavados de esporos de D. phaseolorum (Dpm) e moléculas doadoras de óxido nítrico (GSNO e SNP) foram utilizados como eliciadores. Os ensaios foram feitos aplicando-se os eliciadores sobre cotilédones destacados de plântulas de soja com 9 dias de idade (estádio VC). A exposição à 760 mmol mol-1 de CO2 estimulou a fotossíntese, aumentou a área e a massa fresca de cotilédones e folhas e resultou em incremento na produção de coumestrol, daidzeína, genisteína, luteolina e apigenina induzidas principalmente por SNP. Para gliceolinas e daidzina, o efeito estimulador do CO2 foi observado por indução apenas com o b- glucano. Parâmetros bioquímicos relativos aos carboidratos solúveis e estruturais das plântulas de soja também mostraram diferenças significativas entre os dois tratamentos com CO2. Os resultados obtidos reforçam a sugestão de que o incremento na disponibilidade de carbono pode modificar as defesas induzidas em soja contra patógenos, porém, essas alterações ocorrem em metabólitos específicos e dependem do eliciador utilizado / Abstract: Soybean seedlings (Glycine max L. Merr) grown in open top chambers under high CO2 concentrations have shown photosynthetic increment and increase in productivity, which in turn may modify the productio n of secondary metabolites with farmacological importance. The aim of this work was to analyze the synthesis of flavones, isoflavones and pterocarpans in soybean seedlings (IAC-18, a cultivar resistant to the causal agent of the stem canker disease Diaphorthe phaseolorum f. sp. Meridionalis), kept under 380 and 760 mmol mol-1 CO2 atmospheres stimulated by biotic and abiotic elicitors. The b-glucan from mycelial walls of Phythophytora megasperma, autoclaved espores of D. phaseolorum (Dpm) and the NO donors, GSNO and SNP, were used as elicitors. The assays were performed by applying the elicitors on detached cotyledons from 9 days old soybean seedlings (VC stage). The exposition to 760 mmol mol-1 of CO2 stimulated photosynthesis, increased the area and fresh mass of leaves and cotyledons, and raised the production of coumestrol, daidzein, genistein, luteolin and apigenin, mainly induced by SNP. For glyceollins and daidzin the CO2 stimulatory effect was observed only by the induction with the b-glucan. Biochemical parameters related to soluble and structural carbohydrates from soybean seedlings also showed significant differences between the two CO2 treatments. These results strengthen the suggestion that the increment in the carbon availability may modify the inducible defenses in soybean against pathogens. However, these alterations occur in specific metabolites and depend on the elicitor / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Marcelo Ganzarolli de Oliveira / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-08-09T16:40:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Simplicio_FernandaIbanez_D.pdf: 1516606 bytes, checksum: 8ee850e83207e6e98a9aec046efdba5d (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: Óxido nítrico (¿NO) produzido endogenamente em humanos é considerado um antioxidante efetivo na inibição da peroxidação lipídica. Todavia, no plasma e em células mamíferas, ¿NO circula principalmente como S-nitrosotióis primários (RSNOs). Neste trabalho, a peroxidação in vitro de comicelas do ácido linoleico-SDS (AL-SDS) e da lipoproteína de baixa densidade (LDL) catalisada por lipoxigenase de soja (SLO), íons Fe (II) e Cu (II), foram monitoradas na presença e na ausência de três RSNOs primários: S-nitrosocisteína (CISNO), S-nitroso-N-acetilcisteína (SNAC) e S-nitrosoglutationa (GSNO) a 37ºC. Medidas cinéticas e espectrofotométricas baseadas na formação de duplas conjugadas, adutos fluorescentes oxidados AL-lisina e na detecção eletroquímica de ¿NO livre, foram utilizadas para mostrar que RSNOs são antioxidantes mais potentes que seus tióis livres correspondentes (RSHs) em codições equimolar. Esses resultados são consistentes com o bloqueio da peroxidação do AL-SDS e LDL por RSNOs através da inativação dos radicais peroxil/alcoxil (LOO¿/LO¿) e pela transnitrosação com hidroperóxidos de AL pré-formado, levando a produtos nitrogenados de AL oxidado, que foram mostrados pela liberação de ¿NO livre por redução com ácido ascórbico. A ação antioxidante de SNAC e GSNO contra a peroxidação da LDL é refletida na quantidade reduzida de ¿NO livre detectado pela decomposição de RSNOs catalisados por Cu (II) na presença da LDL. Esses resultados indicam que RSNOs primários endógenos podem participar no bloqueio da peroxidação lipídica in vivo, não somente através da inativação primária dos radicais alcoxil/peroxil mas também através da inativação dos hidroperóxidos lipídicos pré-formados. A administração oral de SNAC previniu o princípio e progressão da doença não alcoólica do fígado gorduroso (NAFLD) em ratos Wistar alimentados com dieta deficiente em colina e reverteu a NAFLD em diferentes dietas com camundongos ob/ob. Esses efeitos foram correlacionados positivamente com um decréscimo na concentração de hidroperóxidos lipídicos no homogenatos de fígado e com habilidade dos RSNOs em previnir a peroxidação lipídica do ácido linoleico e da LDL in vitro / Abstract: Nitric oxide (¿NO) produced endogenously in humans is considered an effective chain-breaking antioxidant in the inhibition of lipid peroxidation. However, in the plasma and cells of mammals, ¿NO circulates mainly as primary S-nitrosothiols (RSNOs). In this work, the in vitro peroxidation of linoleic acid-SDS comicelles (LA-SDS) and of low density lipoprotein (LDL) catalyzed by soybean lipoxygenase (SLO), Fe (II) and Cu (II) ions, were monitored in the presence and absence of three primary RSNOs: S-nitrosocysteine (CySNO), S-nitroso-N-acetylcysteyne (SNAC) and S-nitrosoglutathione (GSNO) at 37 ºC. Kinetic and spectrophotometric measurements based on the formation of conjugated double bonds, fluorescent oxidized LA-lysine adducts and the electrochemical detection of free NO, were used to show that RSNOs are more potent antioxidants than their corresponding free thiols (RSHs) in equimolar conditions. These results are consistent with the blockage of LA-SDS and LDL peroxidation by RSNOs through the inactivation of peroxyl/alkoxyl (LOO¿/LO¿) radicals and through the transnitrosation with preformed LA hydroperoxides, leading to nitrogen-containing products of oxidized LA, which were shown to release free ¿NO upon reduction with ascorbic acid. The antioxidant actions of SNAC and GSNO against LDL peroxidation are reflected in a reduced amount of free NO detected upon Cu (II)-catalyzed decomposition of RSNOs in the presence of LDL. These results indicate that endogenous primary RSNOs may play a major role in blocking lipid peroxidation in vivo, not only through the primary inactivation of alkoxyl/peroxyl radicals but also through the inactivation of preformed lipid hydroperoxides. Oral administration of SNAC prevented the onset and progression of nonalcoholic fatty liver disease (NAFLD) in Wistar rats fed a choline-deficient diet and reversed NAFDL induced by different diets in ob/ob mice. These effects were positively correlated with a decrease in the concentration of lipid hydroperoxydes in liver homogenate and with the ability of RSNOs to prevent lipid peroxidation of linoleic acid and LDL in vitro / Doutorado / Físico-Química / Doutor em Ciências

Orientadores: Cassio Luis Zanettini Riccetto, Amedea Barozzi Seabra / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-15T02:17:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Palma_ThaisFigueiredo_M.pdf: 1617036 bytes, checksum: f7941fb5e12e641985c9bf7f687b9499 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: Introdução: A síndrome da bexiga dolorosa é uma condição crônica caracterizada por dor suprapúbica relacionada ao enchimento vesical, acompanhada por outros sintomas como urgência urinária, aumento de frequência urinária diurna e noctúria, na ausência de infecção urinária ou de outra doença comprovada. Em parte dos pacientes, a síndrome é atribuída ao processo inflamatório crônico inespecífico do interstício da camada muscular própria da bexiga, também denominada de cistite crônica intersticial (CI). Há relatos acerca da participação do óxido nítrico (NO) na fisiopatologia da CI. Dessa forma, o desenvolvimento de modelos de CI baseados na atividade pró-oxidante do NO poderá contribuir para a evolução do conhecimento acerca de novos métodos terapêuticos para essa condição. Objetivo: O objetivo desse estudo foi desenvolver um novo modelo experimental de indução de cistite intersticial através da instilação intravesical de solução doadora de óxido nítrico, a S-nitrosoglutationa - (GSNO) e compará-lo com um modelo já descrito na literatura, no qual a CI é induzida através da instilação de sulfato de protamina e cloreto de potássio (KCl). Material e Métodos: Foram utilizadas 40 ratas fêmeas (Wistar), divididas em quatro grupos: 1- Solução Salina + GSNO, 2 - Solução Salina + Solução Polimérica (veículo), 3 - Sulfato de Protamina + KCl, 4 - Sulfato de Protamina + GSNO. As ratas receberam uma aplicação (cinco animais) ou três aplicações (cinco animais) da substância correspondente a cada grupo por meio de instilação intravesical e, após seis dias (cinco animais) e nove dias (cinco animais), foram eutanasiados e suas bexigas foram extraídas para avaliação macroscópica e sob microscopia óptica. Resultados: Na avaliação macroscópica observou-se edema e hiperemia da mucosa em dois (22%) dos animais do grupo 1, em zero (0%) dos animais do grupo 2, em dez (100%) dos animais do grupo 3, e em cinco (50%) dos animais do grupo 4. No grupo 3 (Protamina + KCl) e no grupo 1 (Solução Salina + GSNO) observaram-se efeitos semelhantes no urotélio das ratas. Na análise microscópica, observou-se que os animais do Grupo 2 (solução salina + solução polimérica) apresentaram congestão vascular moderada nos dois momentos estudados, a qual foi significativamente menor que nos grupos 1, 3 e 4, após três instilações (p=0,0035). No grupo 3 (protamina +KCl) observou-se a congestão vascular de maior intensidade, sendo acentuada em 33,3% dos animais, nos dois momentos estudados. Em ambos os momentos estudados, a fibrose observada foi ausente ou de leve intensidade, em todos os grupos, sem diferenças significativas entre os grupos protamina e solução salina + GSNO. Observou-se fibrose significativamente maior nos Grupos 3 e 4 após nove dias (p = 0,0459), em relação aos animais controle (grupo 2). Todos os grupos apresentaram infiltrado neutrofílico, de intensidade variável, na avaliação realizada após seis dias, sem diferenças significantes (p=0,7277). Após nove dias, houve tendência de regressão do infiltrado neutrofílico, sem evidência de infiltrado acentuado em todos os grupos (p=0,2301). Após o estímulo inicial, observou-se tendência de regressão do edema ao longo do período de observação. Não foram identificadas diferenças significativas na evolução do edema entre os grupos em ambos os tempos estudados. Conclusão: O modelo proposto reproduziu de forma adequada os aspectos anatomopatológicos da cistite intersticial experimental. Considerando-se que parte das pacientes portadoras de cistite intersticial não apresenta sensibilidade a infusão intravesical de cloreto de potássio, o presente modelo poderá ser empregado para o estudo de novos alvos terapêuticos da cistite intersticial / Abstract: Introduction: Painful Bladder Syndrome is a chronic condition characterized by supra-pubic pain related to vesical filling, also presenting other symptoms as urgency, increased frequency and nocturia, in the absence of urinary tract infection or other proven diseases. In some patients, the syndrome is related to an inflammatory process of the detrusor, also denominated interstitial cystitis. There are findings that lead to a role of NO (Nitric Oxide) in patients with IC. The development of experimental models of IC based on the pro-oxidant activity of the NO may contribute to evolution of the knowledge regarding new therapies for this condition. Objective: The aim of this project is to develop a new experimental model for inducing IC through vesical instillation of a gel with NO donor, the S-nitrosoglutathione - (GSNO) in rats comparing to the gold standard cystitis induction method with protamine and potassium chloride. Material and Method: For that purpose we used 40 female Wistar rats, divided in four groups: 1- saline solution + GSNO, 2- Saline Solution + Polymeric Solution, 3- Protamine Sulphate + KCl, 4- Protamine Sulphate + GSNO. The rats received one dose (five animals) or three doses (five animals) of the corresponding substance through intravesical instillation, and after six days (five animals) or nine days (five animals) they were submitted to euthanasia and their bladders were removed for macroscopic evaluation and anatomic-pathologic study using optic microscopy. Results: In the macroscopic evaluation we observed edema and hiperemia of the mucosa in two (22%) of the animals in group 1, in none (0%) of the animals in group 2, in ten (100%) of the animals in group 3, and in five (50%) of the animals in group 4. In group 3 (Protamine + KCl) and in group 1 (Saline Solution + GSNO) were observed similar effects on the urothelium. In the microscopic analysis, the animals in group 2 (saline = excipient) showed moderate vascular congestion in both times of the stufy. And it was significantly smaller in groups 1, 3 and 4 after three instillations (p=0,0035). In group 3 (protamine + KCl) we observed vascular congestion with higher intensity, acute in 33.3% of the animals, in both times. We observed mild fibrosis in all groups, without significant differences between protamine and saline solution+ GSNO. Fibrosis was significantly higher in groups 3 and 4 (p=0.0459) after nine days when compared to control (group 2). All groups presented neutrophilic infiltrate of variable intensities after six days, with no statistical differences (p=0.7277). After nine days, there was a tendency of regression of the neutrophilic infiltrate, without evidence of acute infiltrate in all groups (p=0.2301). After initial stimuli, there was a tendency of regression of edema along the observation period. There were no significant differences in edema evolution in both times, among the groups. Conclusion: The proposed model reproduced properly the anatomic-pathologic aspects of the experimental interstitial cystitis. Considering that part of the patients with cystitis is not sensitive to intravesical potassium chloride, this model can be used for the study of new therapies for interstitial cystitis / Mestrado / Pesquisa Experimental / Mestre em Cirurgia