Submitted by TATIANE SAMPAIO BITTENCOURT (dratatisampaio@gmail.com) on 2018-04-11T16:45:24Z No. of bitstreams: 1 Dissertação final - Tatiane Sampaio Bittencourt - UNESP.pdf: 2306748 bytes, checksum: 2c8b1dc80443dde5641b966081d8e34f (MD5) / Approved for entry into archive by Silvana Alvarez null (silvana@ict.unesp.br) on 2018-04-16T15:54:30Z (GMT) No. of bitstreams: 1 bittencourt_ts_me_sjc.pdf: 2306748 bytes, checksum: 2c8b1dc80443dde5641b966081d8e34f (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-16T15:54:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 bittencourt_ts_me_sjc.pdf: 2306748 bytes, checksum: 2c8b1dc80443dde5641b966081d8e34f (MD5) Previous issue date: 2018-02-16 / O objetivo deste estudo foi avaliar in vitro o comportamento biológico celular da N-Acetilcisteína (NAC), diante da estimulação ou não pelo LPS bacteriano. Foram utilizados fibroblastos do ligamento periodontal, que ficaram em contato por 48 horas com as substâncias testadas: NAC, Hidróxido de cálcio p.a. (HC), Lipopolissacarídeo de Escheria Coli (LPS), NAC + LPS e HC + LPS. Para os grupos NAC + LPS, HC + LPS e LPS, as células foram estimuladas com 2µg/mL de LPS por 24 horas, previamente aos tratamentos descritos. Foram realizados os testes biológicos de viabilidade celular (XTT), Espécies Reativas de Oxigênio (ROS), Elisa (para as citocinas IL-6, IL-8, IL-10, IL-1β e TNF-α) e Micronúcleo (MNT). Os dados foram analisados estatisticamente pela análise descritiva e pelos testes ANOVA e Kruskall Wallis, seguido do teste Dunn (p˂0.05) para os testes de XTT, ROS e MNT, e para o teste Elisa foi realizado cálculo das médias e desvio padrão. Os resultados obtidos mostraram que NAC teve um bom comportamento, frente à agressão provocada pelo LPS, quanto à produção de ROS. HC apresentou maior viabilidade celular que NAC, embora NAC não tenha apresentado citotoxicidade. Em relação à expressão das citocinas, NAC foi capaz de reduzir o potencial inflamatório do LPS quando da análise do TNF- α e IL-1β. NAC foi capaz de reduzir a genotoxicidade do LPS, como mostrado pelo teste MNT. Concluiu-se que NAC apresentou um comportamento biológico satisfatório, pela viabilidade celular dos fibroblastos, pela redução da geração de ROS e do potencial inflamatório provocado pelo LPS, e por reduzir a sua genotoxicidade. / The purpose of this study was to evaluate in vitro the action of N-Acetylcysteine (NAC) and calcium hydroxide (CH) on biological activity, either without or with LPS stimulation in periodontal ligament fibroblasts (PDLF) cells. PDLF were placed in contact with NAC, CH, NAC + LPS, LPS and CH + LPS for 48 hours. PDLF were stimulated by bacterial LPS for 24 hours in NAC + LPS, LPS and CH + LPS groups, before the substances described above are applied. The LPS and NAC effect on cell viability was measured using a XTT test. Reactive oxygen species (ROS) production was evaluated using ROS/superoxide detection kit. Inflammatory cytokines (IL-6, IL-8, IL-10, IL-1β and TNF-α) were evaluated by enzyme-linked immunosorbent (ELISA) assay. Genotoxicity was measured using micronucleus test (MNT). The means and standard deviation for all tests were calculated. Data were analyzed statistically by descriptive analysis, ANOVA and Kruskall Wallis tests, followed by Dunn test (p˂.05). CH was superior to NAC on cellular viability, although NAC was not cytotoxic. The results showed that NAC was able to reduce ROS production of LPS. NAC was able to reduce the inflammatory potential of LPS by decreasing the TNF-α and IL-1β release. NAC was able to reduce the genotoxicity of LPS. It was concluded that NAC showed a satisfactory biological activity, presenting a minimal effect on cell viability of PDLF cells and reducing ROS production and inflammatory potential provoked by LPS, and to decrease its genotoxicity.

Objetivo: Avaliar o efeito da oxigenoterapia hiperbárica na cicatrização da anastomose esôfagojejunal em ratos gastrectomizados. Material e Métodos: Foram operados 40 ratos Wistar, adultos machos, com peso entre 322g e 506g. Os animais foram divididos aleatoriamente em dois grupos. No grupo A (controle), 20 ratos foram submetidos à gastrectomia total. No grupo B, 20 ratos foram igualmente gastrectomizados e receberam tratamento pósoperatório com oxigenoterapia hiperbárica por 90 minutos/dia durante sete dias. Todos os ratos foram sacrificados no oitavo dia de pós-operatório e avaliados de acordo com as seguintes variáveis em estudo:a) presença ou não de fístula anastomótica; b) avaliação da cicatrização da anastomose esôfagojejunal através da medida da força de ruptura à tração na linha da sutura segundo Hendriks & Mastboom; c) determinação da concentração de colágeno na anastomose, pelos critérios de Kovács. Para análise estatística comparativa entre os grupos foi utilizado o teste t de Student, considerando-se como significativo p <0,05. Resultados: Houve 20% de óbitos na amostra, sendo cerca de 60% no grupo A e os 40% restantes no grupo B (p=N.S.) . Ocorreu apenas uma fístula anastomótica em cada grupo, sendo que em ambos não houve morbidade relacionada ou óbito. As medidas de força de ruptura à tração na linha da sutura entre os grupos (p=0,528) e a determinação da concentração de colágeno na anastomose esôfagojejunal (p=0,89) não mostraram diferença estatisticamente significativa nos dois grupos. Conclusões: Utilizando parâmetros clínicos, mecânicos e bioquímicos para avaliar a anastomose esôfagojejunal, concluímos que no presente estudo a oxigenoterapia hiperbárica não interferiu no processo de cicatrização desta anastomose. / Purpose: To evaluate the effect of the hyperbaric oxygen therapy on the healing of the esophagojejunal anastomosis in gastrectomized rats. Material and Methods: 40 Wistar rats male adults with weighing between 322g to 506g were operated. The animals were divided in two ramdom groups.20 rats from group A (control group), were submitted to total gastrectomy. In group B, 20 rats were equally gastrectomized and received postoperative treatment with hyperbaric oxygen for 90 minutes/day during seven days. All rats were sacrificed on the eighth postoperative day and evaluated according to the following study variables :a) whether there were any anastomotic fistula or not; b) evaluating esophagojejunal anastomosis healing by measuring breaking strength at the suture line as per Hendriks & Mastboom; c) determining of the collagen concentration on the anastomosis, as per Kovács criteria. For the comparative statistical analyses between the groups, Student’s “t” test was used, whereas p<0,05 was significant. Results: There was a 20% rate of deceasing in the sample, whereas 60% occurred in group A and 40% in group B (p=N.S.). There was only one anastomotic fistula in each group, and in neither one occurred any morbidity or deaths related. Breaking strength measured at the suture line (p=0,528) and collagen concentration determined at the esophagojejunal anastomosis (p=0,89) did not present any significant statistical difference in either group. Conclusions: By using clinical, mechanical and biochemical parameters to evaluate the esophagojejunal anastomosis, it was possible to conclude that, in this study, hyperbaric oxygen therapy did not interfere with the healing process of the anastomosis.

Orientador: Ronan Jose Vieira / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-09T10:43:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Godoy_ArmandoCarlosFrancode_D.pdf: 1391626 bytes, checksum: 600da181d72c7d389f13d631605e7c01 (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: Esta pesquisa foi realizada como o objetivo de verificar se a fisioterapia respiratória favorece o surgimento de refluxo gástrico de dieta enteral para a cavidade orofaríngea em pacientes adultos, sedados, portadores de via aérea artificial e necessitando ventilação mecânica. Efetuou-se um estudo experimental prospectivo, utilizando-se o modelo estatístico caso-controle, empregou-se grupo experimenta~ o qual os pacientes recebiam tratamento fisioterápico e o grupo controle, o qual os pacientes não recebiam tratamento fisioterápico. A amostra foi composta por 20 pacientes em cada grupo, os quais recebiam dieta enteral por sonda de alimentação alocada no estômago. Utilizou-se como marcador do refluxo gástrico de dieta enteral o corante azul-de-metileno, injetado no intervalo entre a metade e a outra metade do volume total de dieta enteral infundida. Se os pacientes apresentassem colorações azuladas em suas secreções orofaríngeas, verificado por três profissionais da saúde no final do experimento, estaria evidenciado o refluxo de dieta enteral. Ao final de cada experimento, tanto no grupo controle como no grupo experimenta não foram encontradas, secreções azuladas, em nenhum paciente durante as inspeções da sua cavidade orofaríngea. Este fato nos permitiu concluir que a fisioterapia respiratória, neste grupo de pacientes, não propicia o refluxo de dieta enteral para a cavidade orofaríngea / Abstract: This research was carried through as the objective to evaluate the gastric index of reflux of enteral diet for the orofaringea socket caused by the respiratory therapeutic handling in adult patients, sedated, intubated and needing ventilation mechanics. A prospective experimental study was effected, using the statistical model case-control, was used the experimental group has controlled, which the patients did not receive handling physical therapy. The sample was composed of 20 patients who received enteral diet for sounding lead of feed leased in the stomach. The blue-of-methylene was used as marking of gastric reflux of enteral diet, which was introduced in the interval between the half and to another half of the total volume of the enteral diet. If the patients presented bluish coloration in its orofaringeas secretions; in the end of the experiment, were evidenced refluxes of enteral diet. To the end of each experiment, as much in the group has controlled as in the experimental group, nothing was found in any patient, during the inspections of itsorofaringeas sockets, bluish secretions. This fact led us to the conclusion that the physical therapy in this specific group of patients was not appropriate for the reflux of enteral diet for the orofaringea socket / Doutorado / Ciencias Basicas / Doutor em Clínica Médica

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / Apesar da importÃncia do saneamento ambiental para o bem-estar do homem e para a conservaÃÃo dos recursos naturais, uma grande parcela da populaÃÃo mundial nÃo tem acesso aos serviÃos bÃsicos de saneamento. Uma tÃcnica caseira que vem sendo estudada e aplicada em paÃses em desenvolvimento, como uma tecnologia segura para o tratamento microbiolÃgico de Ãgua à a desinfecÃÃo solar, SODIS. Este mÃtodo utiliza apenas o sol e garrafas PET como insumo. Atualmente, cerca de um milhÃo de pessoas utiliza regularmente o SODIS em 20 diferentes paÃses. O presente estudo avaliou a eficiÃncia de inativaÃÃo de coliformes termotolerantes segundo o efeito da aerobiose, por meio da agitaÃÃo manual das garrafas e da utilizaÃÃo de diferentes superfÃcies de exposiÃÃo sob as condiÃÃes climÃticas do Estado do CearÃ, bem como a viabilidade social deste mÃtodo em quatro comunidades inseridas em cenÃrios distintos (rural, litorÃno e urbano). Para tanto, compararam-se amostras agitadas e nÃo agitadas, e amostras expostas sobre superfÃcies distintas: concreto pintado de branco, concreto pintado de preto, telha de barro, telha de amianto e bacias de alumÃnio. Para o estudo da viabilidade social, foram aplicados questionÃrios aos usuÃrios do mÃtodo e analisadas amostras da Ãgua bruta e tratada pelo mÃtodo SODIS. Verificou-se que apesar da agitaÃÃo aferir uma concentraÃÃo de 0,75mg/L a mais de OD nas amostras agitadas, esse efeito nÃo foi capaz de aumentar significativamente a eficiÃncia de inativaÃÃo para essas amostras. O decaimento mÃdio bacteriano das amostras agitadas foi 1,10 vezes maior comparado Ãs amostras nÃo agitadas. Os dados obtidos na etapa de superfÃcie indicaram que tambÃm nÃo hà diferenÃa significativa (teste T de Student, nivel de confianÃa 0,05) de inativaÃÃo em expor as garrafas sobre qualquer uma das superfÃcies pesquisadas. O decaimento mÃdio bacteriano foi de: 0,3049h-1, 0,2624h-1, 0,3152h-1, 0,2747h-1, 0,2874h-1, respectivamente, para as amostras sobre o concreto pintado de branco, concreto pintado de preto, telha de amianto, telha de barro e bacia de alumÃnio. A mÃxima temperatura da Ãgua foi de 44ÂC e ainda assim obteve-se mais de 99,99% de remoÃÃo de coliformes termotolerantes em todos os ensaios. Em 67% dos ensaios, o SODIS foi capaz de inativar completamente concentraÃÃes de coliformes termotolerantes acima de 105 NMP.100mL-1 durante as seis horas de exposiÃÃo. O estudo de campo mostrou que o SODIS melhorou a qualidade microbiolÃgica da Ãgua das quatro comunidades pesquisadas. No entanto, a permanÃncia e em alguns casos a proliferaÃÃo do indicador foi verificado quando os usuÃrios expuseram as garrafas em locais sombreados. O SODIS foi bem aceito nas comunidades rurais e litorÃneas, atingindo nÃveis de aceitaÃÃo acima de 45%, se comparado aos da comunidade urbana, com apenas 8%. AlÃm da grande aceitaÃÃo do mÃtodo, mais de 80% dos usuÃrios responderam que iriam continuar a usar o SODIS. / Despite the importance of sanitation for well-being of the mankind and the natural resources conservation, still today a large number of people do not have access to wastewater system neither to public water supply. One technique which has being studied and applied in developing countries as a safe household water treatment method is solar disinfection, SODIS. The only two elements demanded to this method are PET bottles and the sun. Nowadays, around one million people use SODIS regularly in 20 different countries. This study evaluated the feacal coliform bacteria inactivation efficiency according to the effect of bottlesâ agitation and the use of differents exposition surfaces under of State of Cearà climatic conditions, as well as SODIS social viability in four communities at distinct geographical location (peri-urban, rural and coastal). To achieve this, agitated and non-agitated samples and five diferrents surfaces: concrete spotted in white color, concrete spotted in black color, abobe roofing tile, asbestos roofing tile and aluminum basins were investigated. To evaluate social acceptability, questionnaires had been applied to all users SODIS and raw water and treated water by SODIS were analyzed. It was verified that despite the agitation surveying a concentration more than 0,75mg/L of OD in the agitated samples, this effect was not capable to increase significantly the inactivation efficiency in these samples. The mean decay constant for bacterial population in agitated bottles was found to be a factor of 1.10 higher than in non-agitated bottles. The surface investigation indicated that no significant difference (paired StudentÂs T-test at P=0,05 significance level of log10 transformed data) in inactivating feacal coliforms by exposing the bottles over the five surfaces examined were observed. The mean decay constant for bacterial population was: 0,3049h-1, 0,2624h-1, 0,3152h-1, 0,2747h-1, 0,2874h-1, respectively for the sample exposed over concrete spotted in white color, concrete spotted in black color, abobe roofing tile, asbestos roofing tile and aluminum basins. The maximum water temperature reached was 44ÂC and still thus, it was obtained reduction more than 99.99% of feacal coliforms. In 67% of the assays, SODIS was capable to completely inactivate concentrations of feacal coliforms above 105 NMP.100mL-1 within six hours of exposition. The field study had shown that SODIS improved the microbiological water quality in the four communities. However, the permanence and in some cases the increase of feacal coliforms was verified when the users exposed the bottles in shaded areas. SODIS was well received in rural and coastal communities reaching acceptance levels over than 45%, compared to urban community, with only 8%. Beyond the great acceptance of the method, over 80% of the users answered that they would continue to use SODIS.

O interesse quanto ao uso de índices de eficiência alimentar na seleção de bovinos é crescente, pela sua associação com o custo de produção e impacto ambiental. O objetivo deste trabalho foi avaliar dois índices de eficiência, o consumo alimentar residual (CAR) e consumo e ganho residual (CGR) e suas relações com desempenho, características de carcaça, qualidade de carne, batimentos cardíacos e consumo de oxigênio em bovinos Nelore. Foram avaliados 84 animais para desempenho, peso de carcaça, rendimento, área de olho de lombo, espessura de gordura subcutânea, peso de vísceras e gordura interna. Foi avaliada a qualidade da carne de amostras não maturadas e maturadas (pH, força de cisalhamento, cor, perdas por cocção, capacidade de retenção de água, índice de fragmentação miofibrilar e gordura intramuscular). Para estimar a produção de calor (PC) pela metodologia do Pulso de O2 (O2P), 39 animais foram monitorados para frequência cardíaca, que foi calibrada para consumo de O2 em 18 deles. A PC foi estimada multiplicando-se o total de batimentos cardíacos diários pelo volume de O2/batimento e pela constante 4,89 kcal/LO2. Foram estudados os coeficientes de inclinação das retas entre CAR e CGR e as variáveis estudadas. O CAR não foi associado com o peso vivo e ganho de peso (P>0,05), porém animais eficientes consumiram 16,1% menos alimento (P<0,0001). Animais eficientes para CGR apresentaram consumo 11,7% menor e ganharam mais peso (P<0,01). O CGR não foi associado ao peso vivo metabólico médio (P>0,05), contudo foi associado ao peso vivo final (P=0,06). A PC estimada pela diferença entre energia retida e consumo de energia metabolizável foi maior nos animais ineficientes (P<0,0001), porém não foi diferente quando estimada pela metodologia do O2P (P>0,05). A frequência cardíaca (FC) e consumo de O2 não foram associados ao CAR e CGR (P>0,05), contudo a FC foi menor nos animais eficientes durante a calibração do O2 (P<0,05). Ambos os índices foram associados com mudanças na composição corporal; animais eficientes para CAR apresentaram menor teor de gordura subcutânea avaliada por ultrassom (P=0,08), e os eficientes para CGR apresentaram maior AOL (P<0,05). As características de qualidade da carne não foram associadas ao CAR, mas animais eficientes para CGR apresentaram intensidade da cor vermelha na carne menor e na gordura maior (P<0,05). Animais eficientes quanto ao CAR apresentaram menor peso de fígado e de gordura interna (P<0,05) sendo este efeito não observado para CGR. Os animais eficientes em ambos, CAR e CGR, apresentaram menor custo de produção resultando em aumento no lucro (P<0,01). O lucro foi fortemente associado à conversão alimentar, CGR e ganho de peso (r=-0,812; 0,72 e 0,61; P<0,0001) enquanto sua associação com CAR foi menor (r=-0,46; P<0,0001). As correlações fenotípicas sugerem que seleção de animais eficientes para CAR ou CGR pode reduzir custos na produção de bovinos de corte, com alteração na coloração da carne. O lucro tem maior correlação com o CGR que com CAR. Porém o CGR tem a possível desvantagem de ser fenotipicamente associado ao maior peso final o que pode indicar uma correlação genética para peso adulto. / There is growing interest in the use of feed efficiency in beef cattle, due to its relationship to production costs and environmental impact. Identification of variation in energy losses can explain differences in efficiency. The objective of this study was to evaluate measures of feed efficiency (residual feed intake - RFI and residual intake and gain _ RIG) and their relationships with performance, carcass characteristics, meat quality, heart rate and oxygen use in Nellore bulls. A group of 84 animals were evaluated for performance, carcass characteristics (weight, yield, loin eye area, fat thickness, weight of visceral and internal fat) and meat quality in fresh and aged meat samples (pH, shear force, cooking loss, water retention capacity, myofibrilar fragmentation index and intramuscular fat). To estimate heat production (HP) by O2 pulse methodology (O2P), 39 animals were monitored for heart rate (HR). A subgroup of 18 animals which was calibrated for O2 consumption determined over in 18 of them. HP was estimated multiplying daily heart beats by O2 volume per beat, assuming 4.89 kcal/LO2 as constant. The slope coefficient for each variable against RFI and RIG was studied. There was no association of RFI with weight (P>0.05) and weight gain (P>0.05), but efficient animals consumed 16.1% less feed (P<0.0001). Efficient animals for RIG consumed 11.7% less food (P<0.0001), but gained more weight than inefficient animals (P<0.01). There was no association between RIG and average metabolic weight (P>0.05), however RIG was related to final weight (P=0.06). HP estimated by the difference between retained energy and metabolic energy intake was higher for inefficient animals (P<0.001), for both RFI and RIG. However there was no effect on HP estimated by the O2P methodology (P>0.05). Heart rate (HR) and O2 consumption were not associated with RFI and RIG (P>0.05), but HR was lower in efficient animals during O2 calibration (P<0.05). There was a positive association of efficiency with a leaner gain composition, where efficient animals for RFI had of lower ultrasound subcutaneous fat (P=0.08), while efficient animals for RIG had higher loin eye area (P<0.05). There was no effect on meat quality parameters for RFI but in efficient animals for RIG, there was an effect on meat and fat color (P<0.05) compared to inefficient animals. Internal fat and liver weights were decreased in efficient animals according to RFI (P<0.05), but unchanged according to RIG (P>0.05). Efficient animals for RFI and RIG had lower cost of production resulting in increased profit (P<0.01). Profit was strongly associated with feed intake, RIG and weight gain (r =-0.81, 0.72 and 0.61, P<0.0001), whereas its association with RFI was lower (r =-0.46, P<0.0001). Efficient animals for RFI and RIG are more profitable with small decreases in fat and small increases in muscle content. Profit is better related to RIG than RFI. However, RIG had the disadvantage of increasing final test weight which could be genetically associated with mature weight.

Submitted by MARCIA ROVADOSCHI (marciar@unifra.br) on 2018-08-21T13:45:26Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_AlineGurskiBolzan.pdf: 1346835 bytes, checksum: dcfb6fbe9cb4f025fb74a266679ecdaf (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-21T13:45:26Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_AlineGurskiBolzan.pdf: 1346835 bytes, checksum: dcfb6fbe9cb4f025fb74a266679ecdaf (MD5) Previous issue date: 2018-02-19 / Introduction: Metabolic syndrome (MS) is a risk factor for the development of several comorbidities, such as atherosclerosis, diabetes mellitus, dyslipidemia, non-alcoholic hepatic steatosis, hypertension, insulin resistance, among others. Endothelial dysfunction, insulin resistance, dyslipidemia and abdominal obesity are events that may be associated with oxidative stress. This study aims to determine the relationship of MS with oxidative stress in elderly women. Methodology: This is a cross-sectional study of 79 elderly women. Blood samples were collected for the laboratory dosages of oxidative stress markers and biochemical tests related to MS. In addition, it was performed the anthropometric evaluation (weight, height, waist circumference) of the elderly women. Two articles were carried out, one relating MS to oxidative stress and the other relating nutritional status to oxidative stress. MS was classified using the criteria proposed by the National Cholesterol Education Program Adult Treatment Panel III (NCEP / ATPIII) and the nutritional status of the elderly women was classified according to Lipschitz. Oxidative damage was evaluated through the analysis of malondialdehyde (MDA) and dosages of antioxidant catalase (CAT) and glutathione (GSH) activity. Descriptive data analysis was performed using absolute and relative frequency measurements, central tendency (mean) and dispersion (standard deviation). The comparison between the means of the groups with and without MS, was evaluated by independent Student's t test and the correlations between the variables and the oxidative stress were evaluated through the Pearson correlation. These analyzes were conducted in the Statistical Package for Social Sciences (SPSS) software for Windowns version 22. p <0.05 was considered significant. Results: The mean age of the total participants was 70.3 (dp ± 8.2) years. In article 1, in which oxidative stress was associated with MS, we found a prevalence of 45.6% (n = 36) of MS. MDA levels were significantly higher in elderly women with MS and GSH levels were positively correlated with CAT activity and negatively correlated with diastolic blood pressure (DBP) in the elderly women with MS. In the elderly without MS, GSH correlated positively with body mass index (BMI) and abdominal circumference (WC) and CAT activity was positively correlated with age. MDA levels were negatively correlated with systolic blood 7 pressure (SBP). In article 2, which correlated nutritional status to oxidative stress, 57% (n = 45) of the elderly women were overweight. We found no significant difference in oxidative stress markers between the groups under study. The Pearson correlation test revealed a positive correlation between GSH levels and CAT activity and a negative correlation between GSH levels and mean DBP values. Conclusion: Our findings suggest that MS is linked to oxidative stress, demonstrated by statistically higher levels of MDA in elderly women with MS and negative correlation between GSH activity and DBP. However, overweight was not related to oxidative stress. Previous studies with the elderly are controversial, since some studies demonstrate relationship between overweight and levels of biomarkers of lipid oxidation and others not. / Introdução: A síndrome metabólica (SM) é fator de risco para o desenvolvimento de diversas comorbidades, como aterosclerose, diabetes mellitus, dislipidemia, esteato hepatite não alcoólica, hipertensão arterial, resistência à insulina, entre outras. A disfunção endotelial, resistência insulínica, dislipidemia e obesidade abdominal são eventos que podem estar associados ao estresse oxidativo. Este estudo teve o objetivo de determinar a relação da SM com o estresse oxidativo em mulheres idosas. Metodologia: Trata-se de um estudo transversal, constituído por 79 mulheres idosas. Coletaram-se amostras sanguíneas para as dosagens laboratoriais dos marcadores de estresse oxidativo e exames bioquímicos relacionados à SM. Além disso, foi realizada a avaliação antropométrica (peso, altura, circunferência abdominal) das idosas. Foram realizados dois artigos, um relacionando a SM com o estresse oxidativo e outro relacionando o estado nutricional com o estresse oxidativo. A SM foi classificada usando o critério proposto pelo National Cholesterol Education Programme Adult Treatment Panel III (NCEP/ATPIII) e o estado nutricional das idosas foi classificado segundo Lipschitz. O dano oxidativo foi avaliado através da análise da malondialdeído (MDA) e dosagens da atividade da defesa antioxidante catalase (CAT) e glutationa (GSH). A análise descritiva dos dados foi realizada através de medidas de frequência absoluta e relativa, tendência central (média) e dispersão (desvio-padrão). A comparação entre as médias dos grupos com e sem SM, foram avaliadas por teste t de Student independente e as correlações entre as variáveis e o estresse oxidativo foi avaliado através da correlação de Pearson. Estas análises foram conduzidas no software Statistical Package for the Social Sciences (SPSS) para Windowns versão 22. Considerou-se p<0,05 como significante. Resultados: A média de idade da amostra total foi de 70,3 (dp±8,2) anos. No artigo 1, no qual foi relacionado o estresse oxidativo com a SM, encontramos prevalência de 45,6% (n=36) de SM. Os níveis de MDA foram significativamente maiores nas idosas com SM e os níveis de GSH foram positivamente correlacionados com a atividade da CAT e negativamente correlacionados com a pressão arterial diastólica (PAD) nas idosas com SM. Já nas idosas sem SM, o GSH correlacionou-se positivamente com o IMC e Circunferência abdominal (CA) e a atividade da CAT correlacionou-se positivamente com a 5 idade. Níveis de MDA foram negativamente correlacionados com a pressão arterial sistólica (PAS). No artigo 2, que correlacionou o estado nutricional com o estresse oxidativo, 57% (n=45) das idosas tinham sobrepeso. Não encontramos diferença significativa nos marcadores de estresse oxidativo entre os grupos em estudo. O teste de correlação de Pearson revelou uma correlação positiva entre os níveis de GSH e a atividade da CAT e um correlação negativa entre os níveis de GSH e os valores médios de PAD. Conclusão: Nossos achados sugerem que a SM está vinculada ao estresse oxidativo, demostrado pelos níveis de MDA estatisticamente mais elevados nas idosas com SM e correlação negativa entre a atividade da GSH e a PAD. Já o sobrepeso não foi relacionado com o estresse oxidativo. Estudos anteriores com idosos são controversos, visto que alguns estudos demonstram relação entre o excesso de peso e níveis de biomarcadores da oxidação de lipídios e outros não.

Submitted by Biblioteca de Pós-Graduação em Geoquímica BGQ (bgq@ndc.uff.br) on 2016-03-22T15:19:27Z No. of bitstreams: 1 CARINE MACHADO DE ALMEIDA pos pre banca final 2(2).pdf: 5568479 bytes, checksum: 1a895c472c5982479e7968a63a1f834a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-22T15:19:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 CARINE MACHADO DE ALMEIDA pos pre banca final 2(2).pdf: 5568479 bytes, checksum: 1a895c472c5982479e7968a63a1f834a (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Universidade Federal Fluminense. Instituto de Química. Programa de Pós-Graduação em Geociências-Geoquímica. Niterói, RJ / A margem central peruana, no Pacífico leste é caracterizada por possuir sedimentos laminados, formados sob condições oceanográficas específicas, tais como intensa ressurgência, disoxia e alta taxa de sedimentação. Nesta região, a presença da Zona Mínima do Oxigênio (ZMO), inibe a bioturbação favorecendo a preservação de registros sedimentares de alta resolução e proporcionando enorme potencial para estudos paleoceanográficos e paleoclimáticos em escalas centenarias a interanuais, principalmente para períodos curtos de variabilidade climática. Estas variabilidades vêm sendo amplamente estudadas, principalmente por corresponder a importantes eventos climáticos recentes, tais como Anomalia Climática Medieval (ACM- 900 a 1350 A.D.) e Pequena Idade do Gelo (PIG- 1500 a 1800 A.D), o qual foi associados a mudanças nas atividades solar e vulcânica. Neste trabalho, a paleoecologia a geoquímica inorgânica e isotópica de foraminíferos bentônicos foram utilizados como proxies para avaliar fases de variabilidades na ventilação (oxigenação) e condições redox na interface sedimento/água da ZMO Peruana durante os últimos 1000 anos. Foram analisados sedimentos laminados de um box core e um gravity-core coletados na Plataforma Central Peruana (Pisco- ~ 14°S, 300m de profundidade). Os resultados paleoecológicos mostraram alterações na assembléia de foraminíferos sugerindo que para o período da ACM, a ZMO peruana apresentou maiores condições de postoxia (anoxia sem presença de sulfetos-H2S) e um deslocamento vertical para profundidades mais rasas, evidenciados principalmente pela presença das espécies Globobulimina auriculata e Cancris inflatus. Posteriormente, durante o período da PIG, os resultados mostraram uma maior oxigenação das águas de fundo, evidenciadas pela dissolução do carbonato e alta ocorrência de bioerosão. Finalmente, após a PIG, para o Período Moderno (PM ~1820 até o recente), o aumento da abundância de espécies indicadoras de anoxia e sulfetos, tais como Nonionella stela e Virgulinella fragilis, sugerem intensificação e expansão da ZMO para o recente. As análises geoquímicas nas testas de foraminíferos foram realizadas nas testas de Bolivina seminuda, somente para os períodos da PIG e PM. Os resultados das análises de laser ablation e isótopos de δ13C demonstraram ocorrência de calcificação secundária por carbonato inorgânico nas testas dos foraminíferos as quais evidenciaram mudanças biogeoquímicas nas águas intersticiais do fundo oceânico, principalmente após a PIG caracterizando também um aumento da anoxia de fundo. Os resultados de δ18O realizado para espécie B. seminuda não foram satisfatórios para o período de PIG devido a dissolução do carbonato e, para o período moderno, evidenciou uma diminuição da temperatura principalmente para os últimos 50 anos. As mudanças ocorridas na intensidade da ZMO peruana durante ACM e PIG foram relacionadas com as variabilidades zonais das temperaturas de superfície oceânicas (TSMs) do Pacífico Equatorial, além do gradiente de variabilidade norte sul da ZCIT (como?). Para o Período Moderno, além dos fatores de gradiente zonais das TSMs, sugere-se que as mudanças climáticas e fatores locais estejam influenciando e intensificando a ZMO na região estudada tornando-a extremamente anóxica e mais produtiva para o período pós pig / The central Peruvian margin, in the eastern Pacific, is characterized by intense upwelling and presence of an intense Oxygen Minimum Zone (OMZ), which favor a high sedimentation rates and deposition of laminated sediments without bioturbation respectively. These characteristics allow preservation of high-resolution sedimentary marine records with great potential to paleoclimatic and paleoceanographic reconstructions from the centennial to interannual time scale. These variabilities have been widely studied, mainly due to important recent paleoclimatic events such as Medieval Climate Anomaly (MCA, AD 900-1350) and the Little Ice Age (LIA-1500-1800 AD), which were associated with changes in solar and volcanic activities. In this work, the study of paleoecology and geochemistry of benthic foraminifera were used as proxy to access phases of greater or less oxygenation and redox conditions at the sediment/water interface in the Peruvian ZMO during the last 1000 years. Laminated sediments of a box core (B-14) and gravity-core (G10) retrieved in the Central Peruvian Shelf (Pisco-14°S, 300m depth) were sub-sampled and analyzed. The paleoecological reconstructions showed changes in the benthic foraminiferal assemblage suggesting, during the MCA, higher postoxic conditions (anoxia without the presence of sulfides, H2S) and a vertical offset to shallower depths evidenced mainly by the presence of Globobulimina auriculata and Cancris inflatsu species. A decrease in OMZ intensity was identified during the LIA which based on carbonate dissolution and high bioerosion occurrence. Finally, after the LIA, to the Modern Period (MP ~1820 to the recent), the increase of abundances of anoxia and sulfides proxy species such as Nonionella stella and Virgulinella fragilis, which were correlated with the intensification and expansion of OMZ toward the recent. The geochemical analyses at foraminiferal tests were done on Bolivina seminuda tests only for the LIA and MP. The results of the laser ablation and δ13C isotope analysis showed inorganic carbonate secondary calcification on the foraminiferal tests, which was correlated to biogeochemical changes in the interstitial waters of the ocean floor, especially after the LIA featuring also a rise in bottom anoxia. The results of δ18O performed on Bolivina seminuda for the LIA period were not satisfactory due to carbonate dissolution; for the Modern Period, on the other hand, there was a decrease of the temperature especially for the last 50 years. The variability on the intensity of Peruvian OMZ during the MCA and LIA were correlated to zonal variability of sea surface temperatures (SSTs) in the equatorial Pacific, besides the north-south gradient variability of the ITCZ. To the Modern Period, besides the oceanic gradient factors of SST, it is suggested that climate change and local factors could be intensifying the OMZ in the study region making it extremely anoxic toward recent.

O interesse quanto ao uso de índices de eficiência alimentar na seleção de bovinos é crescente, pela sua associação com o custo de produção e impacto ambiental. O objetivo deste trabalho foi avaliar dois índices de eficiência, o consumo alimentar residual (CAR) e consumo e ganho residual (CGR) e suas relações com desempenho, características de carcaça, qualidade de carne, batimentos cardíacos e consumo de oxigênio em bovinos Nelore. Foram avaliados 84 animais para desempenho, peso de carcaça, rendimento, área de olho de lombo, espessura de gordura subcutânea, peso de vísceras e gordura interna. Foi avaliada a qualidade da carne de amostras não maturadas e maturadas (pH, força de cisalhamento, cor, perdas por cocção, capacidade de retenção de água, índice de fragmentação miofibrilar e gordura intramuscular). Para estimar a produção de calor (PC) pela metodologia do Pulso de O2 (O2P), 39 animais foram monitorados para frequência cardíaca, que foi calibrada para consumo de O2 em 18 deles. A PC foi estimada multiplicando-se o total de batimentos cardíacos diários pelo volume de O2/batimento e pela constante 4,89 kcal/LO2. Foram estudados os coeficientes de inclinação das retas entre CAR e CGR e as variáveis estudadas. O CAR não foi associado com o peso vivo e ganho de peso (P>0,05), porém animais eficientes consumiram 16,1% menos alimento (P<0,0001). Animais eficientes para CGR apresentaram consumo 11,7% menor e ganharam mais peso (P<0,01). O CGR não foi associado ao peso vivo metabólico médio (P>0,05), contudo foi associado ao peso vivo final (P=0,06). A PC estimada pela diferença entre energia retida e consumo de energia metabolizável foi maior nos animais ineficientes (P<0,0001), porém não foi diferente quando estimada pela metodologia do O2P (P>0,05). A frequência cardíaca (FC) e consumo de O2 não foram associados ao CAR e CGR (P>0,05), contudo a FC foi menor nos animais eficientes durante a calibração do O2 (P<0,05). Ambos os índices foram associados com mudanças na composição corporal; animais eficientes para CAR apresentaram menor teor de gordura subcutânea avaliada por ultrassom (P=0,08), e os eficientes para CGR apresentaram maior AOL (P<0,05). As características de qualidade da carne não foram associadas ao CAR, mas animais eficientes para CGR apresentaram intensidade da cor vermelha na carne menor e na gordura maior (P<0,05). Animais eficientes quanto ao CAR apresentaram menor peso de fígado e de gordura interna (P<0,05) sendo este efeito não observado para CGR. Os animais eficientes em ambos, CAR e CGR, apresentaram menor custo de produção resultando em aumento no lucro (P<0,01). O lucro foi fortemente associado à conversão alimentar, CGR e ganho de peso (r=-0,812; 0,72 e 0,61; P<0,0001) enquanto sua associação com CAR foi menor (r=-0,46; P<0,0001). As correlações fenotípicas sugerem que seleção de animais eficientes para CAR ou CGR pode reduzir custos na produção de bovinos de corte, com alteração na coloração da carne. O lucro tem maior correlação com o CGR que com CAR. Porém o CGR tem a possível desvantagem de ser fenotipicamente associado ao maior peso final o que pode indicar uma correlação genética para peso adulto. / There is growing interest in the use of feed efficiency in beef cattle, due to its relationship to production costs and environmental impact. Identification of variation in energy losses can explain differences in efficiency. The objective of this study was to evaluate measures of feed efficiency (residual feed intake - RFI and residual intake and gain _ RIG) and their relationships with performance, carcass characteristics, meat quality, heart rate and oxygen use in Nellore bulls. A group of 84 animals were evaluated for performance, carcass characteristics (weight, yield, loin eye area, fat thickness, weight of visceral and internal fat) and meat quality in fresh and aged meat samples (pH, shear force, cooking loss, water retention capacity, myofibrilar fragmentation index and intramuscular fat). To estimate heat production (HP) by O2 pulse methodology (O2P), 39 animals were monitored for heart rate (HR). A subgroup of 18 animals which was calibrated for O2 consumption determined over in 18 of them. HP was estimated multiplying daily heart beats by O2 volume per beat, assuming 4.89 kcal/LO2 as constant. The slope coefficient for each variable against RFI and RIG was studied. There was no association of RFI with weight (P>0.05) and weight gain (P>0.05), but efficient animals consumed 16.1% less feed (P<0.0001). Efficient animals for RIG consumed 11.7% less food (P<0.0001), but gained more weight than inefficient animals (P<0.01). There was no association between RIG and average metabolic weight (P>0.05), however RIG was related to final weight (P=0.06). HP estimated by the difference between retained energy and metabolic energy intake was higher for inefficient animals (P<0.001), for both RFI and RIG. However there was no effect on HP estimated by the O2P methodology (P>0.05). Heart rate (HR) and O2 consumption were not associated with RFI and RIG (P>0.05), but HR was lower in efficient animals during O2 calibration (P<0.05). There was a positive association of efficiency with a leaner gain composition, where efficient animals for RFI had of lower ultrasound subcutaneous fat (P=0.08), while efficient animals for RIG had higher loin eye area (P<0.05). There was no effect on meat quality parameters for RFI but in efficient animals for RIG, there was an effect on meat and fat color (P<0.05) compared to inefficient animals. Internal fat and liver weights were decreased in efficient animals according to RFI (P<0.05), but unchanged according to RIG (P>0.05). Efficient animals for RFI and RIG had lower cost of production resulting in increased profit (P<0.01). Profit was strongly associated with feed intake, RIG and weight gain (r =-0.81, 0.72 and 0.61, P<0.0001), whereas its association with RFI was lower (r =-0.46, P<0.0001). Efficient animals for RFI and RIG are more profitable with small decreases in fat and small increases in muscle content. Profit is better related to RIG than RFI. However, RIG had the disadvantage of increasing final test weight which could be genetically associated with mature weight.

En aquesta tèsi s'ha avaluat l'ús de la teràpia fotodinàmica antimicrobiana (APDT) com a alternativa als antibiòtics. Inicialment, s'ha demostrat in vitro i en un model de cremades en ratolins el potencial de les fenotiazines, i més concretament del nou blau de metilè, per inactivar un bacteri resistent a antibiòtics com Acinetobacter baumanii. A més, també s'ha investigat el potencial dels porficens aril catiònics com a agents fotosensibilitzadors per a APDT in vitro i in vivo, inactivant exitosament diferents tipus de bacteris gram positius i negatius, així com fongs. Per altra banda, s'han estudiat les cinètiques de formació i decaïment d'oxigen singlet (1O2) en E. coli mitjançant un espectrofotòmetre ultrasensible a l'infraroig proper amb resolució temporal per sota del microsegon. Els resultats ens permeten profunditzar en el mecanisme de l'APDT, és a dir, en la localització del fotosensibilitzador (PS) en el bacteri i la reactivitat de l'1O2. Per un costat, l'entorn del PS canvia quan la distribució de les càrregues catiòniques varia. Per l'altre, en funció del lloc de formació, l'1O2 reacciona amb l'entorn proper o és capaç d'escapar fora de les cèl·lules. En tercer lloc, també s'ha estudiat, mitjançant sondes fluorescents i tècniques amb resolució temporal, l'habilitat d'una proteïna fluorescent per produir espècies reactives d'oxigen, actuant com a agents fotosensibilitzadors genèticament codificats. Així, s'ha calculat per primera vegada el rendiment quàntic de formació d'1O2 obtenint un valor similar al del cromòfor sintètic de les GFPs. Finalment, s'ha investigat mitjançant l'espectrofotòmetre en l'infraroig proper l'efecte plasmó produït per films d'illes de plata sobre l'1O2, demostrant un increment màxim en la luminescència d'1O2 a 1270 nm al voltant de 30 vegades en alguns casos. / En esta tesis se ha evaluado el uso la terapia fotodinámica antimicrobiana (APDT) como alternativa a los antibióticos. Inicialmente, se ha demostrado, in vitro y en un modelo de quemaduras en ratón, el potencial de las fenotiazinas, y más concretamente del nuevo azul de metileno, para inactivar una bacteria resistente a antibióticos como Acinetobacter baumanii. Además, también se ha investigado el potencial de los porficenos aril catiónicos como agentes fotosensibilizadores para APDT in vitro e in vivo, inactivando exitosamente distintos tipos de bacterias gram positivas y negativas, así como hongos. Por otro lado, se ha estudiado las cinéticas de formación y decaimiento de oxígeno singlete (1O2) en E. coli mediante un espectrofotómetro ultrasensible en el infrarrojo cercano con resolución temporal por debajo del microsegundo. Los resultados nos permiten profundizar en el mecanismo de la APDT, es decir, en la localización del fotosensibilizador (PS) en la bacteria y la reactividad del 1O2. Por un lado, el entorno del PS cambia cuando la distribución de las cargas catiónicas varía. Por otro lado, en función del lugar de formación, el 1O2 reacciona con el entorno cercano o es capaz de escapar fuera de las células. En tercer lugar, también se ha estudiado, mediante sondas fluorescentes y técnicas con resolución temporal, la habilidad de una proteína fluorescente para producir especies reactivas de oxígeno, actuando pues como agentes fotosensibilizadores genéticamente codificados. Así, se ha calculado por primera vez el rendimiento cuántico de formación de 1O2 mostrando un valor similar al del cromóforo sintético de las GFP. Finalmente, se ha investigado mediante el espectrofotómetro en el infrarojo cercano el efecto plasmon producido por films de islas de plata sobre 1O2, observando un incremento máximo de la luminiscencia de 1O2 a 1270 nm alrededor de 30 veces en algunos casos. / In this thesis, the use of antimicrobial photodynamic therapy as alternative to antibiotics has been assessed. First, the potential of phenothiazinium dyes, and specifically new methylene blue, to inactivate multidrug-resistant strains has been demonstrated against Acinetobacter baumanii in vitro and in a mouse burn model. In this regard, it also has been investigated the potential of aryl cationic porphycenes as photosensitizing drugs in APDT in vitro and in vivo, successfully inactivating different gram-positive and negative bacteria, and fungal cells.Second, the kinetics of singlet oxygen (1O2) production and fate in E. coli have been investigated by means of an ultrasensitive near-infrared spectrometer with submicrosecond time resolution. The results allowed us to gain insight into the mechanism of APDT, i.e., the localization of the photosensitiser (PS) in the bacteria and the reactivity of 1O2. On one hand, the microenvironment of the PS changes when the distribution of the cationic charges changes. On the other hand, depending on the site of production, 1O2 reacts with the nearest microenvironment or is able to escape out of the cells. Third, the ability of fluorescent proteins (GFPs), as genetically-encoded photosensitisers, to produce reactive oxygen species has been studied by means of fluorescent probes and time-resolved techniques. Thus, for the first time, the quantum yield of 1O2 production of some of the studied proteins has been calculated showing a value similar to that of the synthetic GFP chromophore.Finally, the plasmonic effect of silver island films on 1O2 has been investigated using the near-infrared spectrometer, demonstrating a maximum enhancement of the 1O2 luminescence signal at 1270 nm ca. 30-fold in some cases.

S'ha avaluat mitjançant estudis in vitro la viabilitat de la teràpia fotodinàmica antifúngica per al tractament clínic d'infeccions causades per les espècies fúngiques patògenes Candida albicans, Candida parapsilosis, Candida krusei i Trichophyton mentagrophytes. L'objectiu és optimitzar aquesta tècnica per proporcionar una alternativa als fàrmacs antifúngics utilitzats en els tractaments clàssics actuals i eradicar així les micosis superficials. S'ha avaluat la capacitat citotòxica de tres fotosensibilitzadors amb propietats fotoquímiques diferents, la hipericina, la 5,10,15,20-tetraquis(N-metil-4-piridil)-21H,23H-porfina i el clorur de 3,7-Bis(etilamino)-2,8-dimetilfenotiacina-5-io, induint tots la inactivació cel.lular sobre les diferents espècies fúngiques. Per avaluar si la la tècnica produeix danys significatius sobre les cèl.lules epidèrmiques humanes s'han realitzat estudis sobre queratinòcits i fibroblasts humans. S'han avaluat els mecanismes d'acció dels tres fotosensibilitzadors mitjançant estudis espectroscòpics i cinètics de formació i desaparició dels seus estats excitats i oxigen singlet. En el cas de l'hipericina també s'han descrit els intermedis que es formen en irradiar, caracteritzant l'accessibilitat dels triplets a l'oxigen. / Se ha evaluado mediante estudios in vitro la viabilidad de la terapia fotodinámica antifúngica para el tratamiento clínico de infecciones causadas por las especies fúngicas patógenas Candida albicans, Candida parapsilosis, Candida krusei y Trichophyton mentagrophytes. El objetivo es optimizar esta técnica para proporcionar una alternativa a los fármacos antifúngicos usados en los tratamientos clásicos actuales y erradicar así las micosis superficiales. Se ha evaluado la capacidad citotóxica de tres fotosensibilizadores con propiedades fotoquímicas distintas, la hipericina, la 5,10,15,20-tetraquis(N-metil-4-piridil)-21H,23H-porfina y el cloruro de 3,7-Bis(etilamino)-2,8-dimetilfenotiacina-5-io, induciendo todos la inactivación celular sobre las distintas especies fúngicas. Para evaluar si la la técnica produce daños significativos sobre las células epidérmicas humanas se han realizado estudios sobre queratinocitos y fibroblastos humanos. Se han evaluado los mecanismos de acción de los tres fotosensibilizadores mediante estudios espectroscópicos y cinéticos de formación y desaparición de sus estados excitados y oxígeno singlete. En el caso de la hipericina también se han descrito los intermedios que se forman al irradiar, caracterizándose la accesibilidad de los tripletes al oxígeno. / Has been evaluated by in vitro viability studies of photodynamic therapy for clinical fungal infections caused by pathogenic fungal species Candida albicans, Candida parapsilosis, Candida krusei and Trichophyton mentagrophytes. The goal is to optimize this technique to provide an alternative to the antifungal drugs used in current classical treatments and thus eliminate superficial mycoses. We assessed the cytotoxic capacity of three photosensitizers with different photochemical properties, the hypericin, 5,10,15,20-tetrakis(N-methyl-4-pyridyl)-21H,23H-porphine and 3,7-Bis(ethylamino)-2,8-dimethylphenothiazin-5-ium chloride, inducing all cell inactivation on different fungal species. To assess if the technique produces significant damage to human epidermal cells, studies with human fibroblasts and keratinocytes were carried. We evaluated the mechanisms of action of the three photosensitisers by spectroscopic and kinetic studies of formation and disappearance of excited states and singlet oxygen. In the case of hypericin have also been described intermediates formed by irradiating, characterized accessibility of triplet oxygen.