Orientador: Flávia Karina Delella / Resumo: O câncer de próstata (CaP) continua a ser uma das principais causas de morte entre os homens. Mesmo com suas altas taxas de mortalidade e incidência, pouco ainda se sabe sobre os aspectos moleculares desta doença. Entre os diversos fatores envolvidos na carcinogênese prostática, elementos da matriz extracelular (MEC) desempenham papel fundamental. Na próstata, a fibronectina (FN), proteína multimodular que tem sido relacionada ao desenvolvimento de múltiplos tipos de câncer, a migração e invasão celular, tem sua expressão restrita ao compartimento estromal. Contudo, no desenvolvimento tumoral, o padrão de expressão da FN é alterado, com secreção desregulada e falta de organização da matriz. Desta forma, para investigar o impacto da FN no CaP, as células neoplásicas LNCaP foram expostas somente à FN solúvel (25μg/mL) e em combinação com uma membrana basal. Nossos resultados demonstraram que quando a FN é o elemento predominante, as células tumorais desenvolvem um comportamento invasivo e resistência à apoptose. No entanto, na presença de uma membrana basal, a FN diminuiu o potencial maligno e metastático destas células, que neste novo ambiente exibiam perfil de expressão gênica mais semelhante às células RWPE-1, linhagem celular que ilustra as características do epitélio prostático normal. Consequentemente, sabendo que a relação entre as células tumorais e a MEC é regulada em múltiplos níveis, os microRNAs emergiram como importantes moléculas reguladoras. Portanto, também inve... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Prostate cancer (PCa) continues to be a leading cause of death among men. Even with its high mortality and incidence rates, little is known about the molecular aspects of this disease. Among the various factors involved in the carcinogenesis of the prostate, components of the extracellular matrix (ECM) play key roles. In the prostate, fibronectin (FN), a multimodular protein that has been linked to the development of multiple cancers and involved with cell migration and invasion, has its expression restricted to the stromal compartment. However, in tumor development, the pattern of expression of FN becomes altered, with deregulated secretion and a lack of matrix organization. Thus, in order to investigate the impact of FN on PCa, the neoplastic cells LNCaP were exposed only to soluble FN (25μg/mL) or in combination with a basement membrane. Our results demonstrated that when FN is the predominant element, tumor cells develop an invasive behavior and become resistant to apoptosis. However, in the presence of a basement membrane, FN decreases the malignant and metastatic potential of these cells, which in this new environment displayed a gene expression profile more similar to the RWPE- 1 cells, a cell line that illustrates the characteristics of the normal prostate epithelium. Consequently, knowing that the relationship between tumor cells and the ECM is regulated at multiple levels, microRNAs have emerged as important regulatory molecules. Therefore, we also investigated the ... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Os genes de choque térmico groES e groEL de Caulobacter crescentus foram isolados utilizando-se os genes homólogos de E.coli como sonda e por sequenciamento demonstrou-se que estes genes estão organizados na forma de um operon em um fragmento de DNA de aproximadamente 2,5 kb, contendo também sua região regulatória. \"Northern blots\" de RNA total de células crescidas a 300C ou submetidas a choque térmico mostraram a presença de um único RNA de tamanho aproximado de 2,3kb, altamente induzido por choque térmico, permanecendo em altos níveis mesmo após longos períodos de choque térmico. Amostras de RNA total de células sincronizadas, de diferentes estágios do ciclo celular de Caulobacter, foram também analisadas mostrando que os níveis do mRNA groESL variam durante o ciclo, apresentando um máximo na célula prédivisional. Análises através de \"Western blot\" mostraram uma pequena variação nos níveis da proteína GroEL ao longo do ciclo celular, sendo os tempos 60 e 120 minutos, respectivamente, os pontos de mínimo e máximo acúmulo da proteína concordando com os resultados obtidos em \"N orthern blots\". O mesmo tipo de análise foi feito com extratos totais obtidos a partir uma população mista de células crescidas a 300C e submetidas a choque térmico, observando-se o acúmulo da proteína até 60 minutos depois do choque térmico, com aumento da ordem de 5 vezes nos níveis de GroEL, níveis estes que diminuem lentamente a partir deste ponto. Os inícios de transcrição foram determinados em experimentos de \"primer extension\" utilizando-se RNA total de células incubadas 300C e de células submetidas a diferentes condições de choque térmico. Dois possíveis sítios de início de transcrição foram determinados nas posições -119 e -88 do ATG da metionina iniciadora de groES, sendo as regiões -10 e -35 dos promotores correspondentes (P 1 e P2) identificadas. Somente a transcrição iniciando a partir de P2, que apresenta características de um promotor transcrito pelo σ32, aumenta durante o choque térmico. Fusões de transcrição com o vetor repórte placZ/290 e a região 5\' regulatória do operon groESL foram construídas para identificar as sequências responsáveis pelo controle por choque térmico e pelo controle temporal. Fusões de transcrição contendo deleções na região 5\' do operon mostraram que sequências a montante do promotor P2 não são necessárias para a indução por choque térmico ou para o controle temporal. Fusões de transcrição contendo mutações sítio-dirigidas na repetição invertida, encontrada a 3\' do promotor P2, antes do gene groES, revelaram que este elemento, conhecido como CIRCE, regula negativamente a expressão de groESL a 300C e mutações neste elemento levam à perda do controle temporal deste operon. / The heat shock genes groES and groEL of Caulobacter crescentus were isolated using the homologous genes of E.colí as a probe. DNA sequence analysis has shown that these genes are organized as an operan in a fragment of about 2.5kb, which includes the 5\' regulatory region. Northern blot analysis of total RNA from cells grown at 300C or heat shocked treated has shown the presence of a single mRNA species for groESL, of approximately 2.3kb in size, which presented increased leveis even after long periods of heat shock. Samples of total RNA from synchronized cells, corresponding to different stages of the Caulobaaer cell cycle, were also analysed, showing that the amount of groESL mRNA varies during the cycle, with maximum leveis in predivisional cells. Western blot analysis of GroEL leveis in Caulobaaer has shown that the amount of the protein decreases during the first 60 minutes of C.crescentus cell cycle and then starts to increase again. These results corroborate the data obtained with Northern blot analysis. A similar experiment was performed after exposing a mixed population of C.crescentus cells to different times of heat shock at 400C. Western blot of extracts of these cells showed a fivefold increase in the leveis of GroEL after 60 minutes of heat shock, which then begins to decrease. Primer extension experiments were performed using total RNA from cells incubated at normal growth temperature or after heat shock treatment. Two possible transcription start sites were determined at positions -119 and -88 from the ATG of the groES initiator methionine and the -10 and -35 regions of the corresponding promoters (P 1 and P2) were identified. Only trancription initiating from the P2 promoter, which has caracteristics of a σ32 promoter, I ncreases during heat shock .Transcription fusions with the reporter vector placZ/290 and the 5\' regulatory region of the groESL operan were contructed in order to identify the sequences responsible for heat shock and cell cycle contral. Deletion analysis in the 5\' region of the operon showed that no sequences upstream of the P2 promoter are necessary for heat shock induction or for temporal contral. Site-directed mutagenesis in the inverted repeat found 3\' of the P2 promoter, in front of the groES gene, revealed that this element, also known as CIRCE, negatively regulates groESL expression at 300C and mutations in it lead to loss of temporal control of this heat shock operon.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:20Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-02-29Bitstream added on 2014-06-13T18:32:41Z : No. of bitstreams: 1 moyses_am_me_botfm.pdf: 269523 bytes, checksum: 3d9ad3ef9b24efec08c580d656c6efdc (MD5) / Comparar a eficiência dos dispositivos manta e colchão térmicos na manutenção da normotermia em pacientes nos períodos intra e pósoperatório; Analisar o período de tempo da recuperação pós-anestésica, com o uso dos dispositivos manta e colchão térmicos; relacionar a utilização dos dispositivos manta e colchão térmicos às variáveis: idade, índice de massa corpórea (IMC) e porte cirúrgico. Trata-se de estudo transversal, prospectivo, randomizado, de delineamento quantitativo, realizado na unidade de Centro Cirúrgico do Hospital das Clínicas de Botucatu, de janeiro a outubro de 2011. Participaram da pesquisa 38 pacientes que foram divididos em 2 grupos (G1 e G2), sendo ambos compostos por 19 pacientes. G1 utilizou a manta térmica com sistema de aquecimento Bair Hugger® modelo 750, sendo esta posicionada nos membros inferiores. G2 utilizou o colchão térmico com circulação de ar quente KanMedo WarmCloudTM. Inicialmente o colchão foi posicionado sobre a mesa cirúrgica a uma temperatura 37oC e insuflado, em seguida os pacientes foram posicionados em decúbito dorsal horizontal, em contato direto com o colchão. Para a coleta dos dados utilizou-se instrumento confeccionado pelo pesquisador, composto por 4 itens: caracterização do paciente, fatores relacionados ao procedimento cirúrgico, aspectos relacionados à recuperação pós-anestésica e tempo de internação. O tempo cirúrgico foi maior no grupo G2 (p=0,03), porém, não se observou aumento na incidência de hipotermia neste grupo; no G2 evidenciou-se uma tendência a menor tempo de recuperação pós-anestésica (p=0,06). A infusão de amido no intraoperatório do G2 foi maior (p=0,03), porém, não influenciou na ocorrência de hipotermia. No G2 a temperatura axilar foi maior aos 120 minutos do inicio do procedimento anestésico cirúrgico... / surgical outcomes, and increased patient satisfaction. The use of perioperative forced-air warming devices is one way of preventing inadvertent hypothermia. There is scant evidence, however, on the best warming method or the acceptability of these methods to patients. The present study aimed to compare two forced-air warming devices to maintain perioperative normothermia: blanket versus mattress. Information was obtained from 38 patients underwent gastrointestinal surgical procedures. Skin and esophageal temperatures were compared for patients who were warmed with a warming blanket (Bair Hugger®), placed over the lower extremities (G1), versus patients who were warmed with a warming mattress (KanMedo WarmCloudTM) placed under the patient’s body (G2). In addition to the temperature evaluation, length of the surgical procedure, total volume of intraoperative fluid replacement, and length of stay in the Post Anesthetic Care Unit (PACU) were also recorded. Although the length of surgery was longer in G2 (291.6±115.2 versus 214.6±91.1 minutes; p=0.03), there was no increase in the hypothermia incidence in this group. Skin temperature was higher at 120 minutes after anesthesia induction in G2 (35.3±0.9 versus 34.8±0.8; p=0.04). Esophageal temperature was also higher in G2 at 120 and at 180 minutes after anesthesia induction, as well as, at the end of the surgery (36.1±0.7 versus 35.4±0.6, p <0.001; 35.9±0.7 versus 35.3±0.7, p=0.03; and 36.1±0.7 versus 35.2±0.9, p<0.001 respectively). Although the patients in G2 had 30 minutes shorter length of stay in the PACU, there was no statistically significant difference between the two groups (115.4±47.3 versus 82.5±53.1 minutes; p=0.06). The infused volume of Hetarstarch was higher in G2 when compared with G1 (730.8±259.4 versus 541.7±144.3; p=0.03)... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:05Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-11-16Bitstream added on 2014-06-13T19:28:59Z : No. of bitstreams: 1 ucci_ap_me_araiq.pdf: 1107212 bytes, checksum: d5908c197d6d3cb915d0549cd1755e02 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Xanthomonas citri subsp. citri (Xcc) é uma bactéria Gram-negativa responsável pelo o cancro cítrico. A doença causada por este fitopatógeno constitui numa das mais graves doenças da citricultura brasileira, cujas medidas de controle capazes de eliminar completamente a doença são ineficientes até o momento. O sequenciamento e anotação do genoma de Xcc juntamente com estudos relacionados à genômica funcional nesta bactéria realizados em nosso laboratório mostraram a existência, na bactéria, de alguns genes (copA e copB) que codificam proteínas envolvidas com o mecanismo de resistência a cobre (CopA e CopB). Os genes que codificam ambas proteínas estão organizados em um operon, cuja transcrição é induzida por cobre e é específica ao metal. Componentes a base de cobre são comumente usados na agricultura como agentes microbicidas a fim de reduzir a severidade desta e também de outras doenças nas plantas. Contudo, a eficácia do cobre está sendo reduzida pelo aparecimento de linhagens de bactérias resistentes a este metal, portanto, estudos visando a compreensão dos mecanismos moleculares envolvidos na resistência a cobre em Xcc são de grande importância. Uma pequena ORF (XAC3629) que codifica uma proteína hipotética de 152 aminoácidos e que se localiza upstream aos genes copAB foi identificada. Neste trabalho foi estudado o papel da ORF na regulação do operon copAB. Linhagens mutantes contendo a ORF XAC3629 interrompida por um transposon (XAC3629 / Xanthomonas citri subsp. citri (Xcc) is a Gram-negative bacterium that causes citrus canker, one of the most serious diseases in Brazilian crops, and the ways to eliminate it are not efficient. After sequencing and annotation of the Xcc genome our laboratory started to perform functional genomic studies in Xcc. Previous studies identified two genes (copA and copB) that encode proteins involved in the copper resistance mechanism (CopA and CopB). The genes are organized in an operon whose transcription is induced and specific to copper. Copper compounds are commonly used in agriculture in order to control plant diseases, however the copper effectiveness is being reduced due to the emergence of copper resistant bacteria strains. Therefore, studies related to copper resistance mechanism in Xcc are very relevant. A short ORF (XAC3629) which encodes an 152 amino acids hypothetical protein was identified upstream the operon copAB. In this work the role of the ORF in the operon regulation was studied. Mutant strains containing the ORF XAC3629 interrupetd by a transposon (XAC3629

Made available in DSpace on 2016-06-02T19:22:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 1743.pdf: 1535167 bytes, checksum: f2fa659f205f718a56c18adc1d9e0d4e (MD5) Previous issue date: 2008-04-08 / Universidade Federal de Minas Gerais / The study of sialagog drugs has a relevant clinical interest for its use in patients with reduced salivatory secretion. Cholinergic agonists are a type of sialagog drug and pilocarpine is the most important cholinergic agonist drug. It is known that pilocarpine-direct action in salivatory glands muscarinic cholinergic receptors stimulate salivatory secretion. However, recent studies from our laboratory have shown that salivation induced by periferic pilocarpine seems to be dependent from central muscarinic activation. The pilocarpine-intense salivation is the well known main effect of this drug but side effects as cardiovasculars alterations and dipsogenesis are observed. Periferic injection of muscarinic agonists usually decreases periferic resistence and arterial pressure but pilocarpine-intraperitoneal (ip) injection induces an inesperate long-term pressor response associated with enhancement in mesenteric vascular resistence and salivatory glands vasodilatation, without changes in esqueletic musculature vascular resistence or heart rate. The ip pilocarpine-pressor response is atributed to an central action of this sialagog drug. The aim of the present study was to investigate central muscarinic cholinergic receptors subtype involved in salivation, water intake and pressor response induced by ip or intravenous (iv) pilocarpine injection. In addiction, the central activation induced by ip injection of pilocarpine and muscarinic receptors subtype antagonist were investigated by Fos-immunoreactivity (Fos-ir). Adult male Holtzman rats (250-300 g) with stainless steel cannulas implanted in the lateral ventricle (LV) were used. Intracerebroventricular (icv) injection of pirenzepine (M1 subtype muscarinic receptor), methoctramine (M2/M4 subtype muscarinic receptor), 4-DAMP (M1/M3 subtype muscarinic receptor) or tropicamide (M4 subtype muscarinic receptor) was performed to investigate its effect on salivation, water intake and pressor response-induced pilocarpine ip injection (4 µmol/kg of body weight (bw)). The salivation was determined in ketamine- (100 mg/kg bw) anesthetized rats using previous weighted cotton balls into oral cavity for 7 minutes. Arterial pressure and heart rate were recorded in non-anesthetized rats submitted to previous femoral artery cannulation. Fos-ir was investigated after ip injection of only pilocarpine or pilocarpine combined with pre-treatment of 4-DAMP, M1/M3 subtype muscarinic antagonist which was more efficient to block salivatory, dipsogenic and cardiovascular responses induced by ip pilocarpine. Salivatory response due to ip pilocarpine varied between 476 ± 54 to 718 ± 61 mg/7 min and was reduced by icv injection of 25, 50, 100 and 250 nmol 4-DAMP, respectively: 425.13 ± 89.73, 376.76 ± 28.01, 261.00 ± 38.28, 230.85 ± 68.61 mg/7 min. Icv injection of 0.1 and 1.0 nmol pirenzepine (0.77 ± 0.30 and 1.05 ± 0.54 ml/60 min, respectively), 50 nmol methoctramine (0.89 ± 0.30 ml/60 min) or 5 and 10 nmol 4- DAMP (1.43 ± 0.57 and 2.19 ± 0.66 ml/60 min, respectively) reduced dipsogenic effect-induced ip pilocarpine, which ranged between 3.20 ± 0.70 to 5.90 ± 1.30 ml/60 min. The pressor response-induced by ip pilocarpine varied between 40 ± 5 to 53 ± 4 mmHg and was decreased by icv injection of 100 nmol pirenzepine (9.00 ± 7.00 mmHg) or 25 and 50 nmol 4-DAMP (14.00 ± 7.00 and 3.00 ± 6.00 mmHg, respectively). Pilocarpine increased Fos-ir only in the supra-optic nuclei (SON), but not in other encephalic areas such as septal or medial lateral areas, paraventricular nuclei, subfornical nuclei, organnum vasculosum of lamina terminalis, median pre-optic nuclei had not alter its activation. The enhancement on Fos-ir in the SON induced by pilocarpine (12.8 ± 2.4 positive cell nuclei/10-2 mm2) was reduced by pre-treatment with 25 nmol 4-DAMP (3.26 ± 1.62 positive cell nuclei/10-2 mm2). Taken all together, M3 subtype central muscarinic receptor plays a role in salivation, M1 and M2 subtype central are involved in dipsogenic and M1 subtype central is involved in pressor response induced by pilocarpine. The role of central muscarinic receptor M3 subtype on dipsogenic and pressor response is not clear due to the fact 4-DAMP is not a specific antagonist, that binds M1 and M3 subtype muscarinic receptors. In addiction, these results suggest that responses evoked by periferic injection of 4 µmol/kg bw of pilocarpine could occur due to its activation through SON. / O estudo de substâncias sialagogas tem interesse clínico pela utilidade que elas têm em pacientes com reduzida secreção salivar. Entre essas substâncias destacam-se os agonistas colinérgicos e entre esses, um dos mais importantes é a pilocarpina. Embora uma ação direta da pilocarpina em receptores colinérgicos muscarínicos das glândulas salivares estimulando a secreção salivar seja um mecanismo bastante aceitável e que parece adequado, estudos mais recentes de nosso laboratório têm demonstrado que grande parte da salivação induzida pela injeção mesmo periférica de pilocarpina parece depender da ativação de receptores muscarínicos cerebrais. Embora um dos efeitos mais conhecidos da pilocarpina seja a intensa salivação, injetada perifericamente em doses baixas ela também produz efeitos cardiovasculares e induz ingestão de água. Apesar dos agonistas muscarínicos injetados perifericamente usualmente reduzirem a resistência periférica e a pressão arterial, a injeção intraperitoneal (ip) de pilocarpina induz uma inesperada resposta pressora de longa duração, que está associada a um aumento da resistência vascular mesentérica, vasodilatação nas glândulas salivares, mas sem mudanças na resistência vascular da musculatura esquelética ou na freqüência cardíaca. Essa resposta pressora da pilocarpina injetada ip também é atribuída a uma ação central. A proposta do presente estudo foi investigar os subtipos de receptores colinérgicos muscarínicos centrais envolvidos na salivação, ingestão de água e nas respostas pressoras induzidas pela injeção ip ou intravenosa (iv) de pilocarpina em ratos. Adicionalmente, as áreas cerebrais ativadas pela pilocarpina injetada ip, assim como os subtipos de receptores muscarínicos centrais envolvidos na ativação das áreas cerebrais foram investigados utilizando-se a expressão da proteína c-fos. Para tal estudo foram utilizados ratos Holtzman (250 - 350 gramas) com cânulas de aço inoxidável implantadas no ventrículo lateral (VL) nos quais foram investigados os efeitos da injeção prévia no VL de pirenzepina (antagonista muscarínico M1), metoctramina (antagonista muscarínico M2 e M4), 4-DAMP (antagonista muscarínico M1 e M3) e tropicamide (antagonista muscarínico M4) sobre a salivação, ingestão de água e respostas pressoras induzidas pela injeção ip ou iv de pilocarpina (4 µmol/kg de peso corporal). A salivação foi determinada em ratos anestesiados com ketamina (100 mg/kg de peso corporal) utilizando-se bolas de algodão previamente pesadas colocadas na cavidade oral durante 7 minutos. A pressão arterial e freqüência cardíaca foram registradas em ratos não anestesiados submetidos a canulação prévia da artéria femoral. A expressão de c-fos nas áreas centrais foi investigada após a injeção ip de pilocarpina sozinha ou combinada com o pré-tratamento com o antagonista 4-DAMP que se mostrou mais eficiente em bloquear os efeitos da pilocarpina na salivação, ingestão de água e respostas cardiovasculares. A salivação induzida pela pilocarpina ip variou de 476 ± 54 a 718 ± 61 mg/7 min e foi reduzida apenas pelo prétratamento icv com 4-DAMP (25, 50, 100 e 250 nmol) com variações de 425,13 ± 89,73; 376,76 ± 28,01; 261,00 ± 38,28 e 230,85 ± 68,61 mg/7 min, respectivamente. A resposta dipsogênica induzida pela injeção ip pilocarpina que variou de 3,2 ± 0,74 a 5,93 ± 1,34 ml/60 min foi reduzida pela injeção icv de 0,1 e 1,0 nmol de pirenzepina (0,77 ± 0,30 and 1,05 ± 0,54 ml/60 min, respectivamente), 50 nmol de metoctramina (0,89 ± 0,30 ml/60 min) ou 5 e 10 nmol de 4-DAMP (1,43 ± 0,57 e 2,19 ± 0,66 ml/60 min, respectivamente). A resposta pressora induzida pela pilocarpina iv teve uma variação de 40 ± 5 a 53 ± 4 mmHg e foi reduzida pelo pré-tratamento de 100 nmol de pirenzepina (9,00±7,00 mmHg) ou 25 e 50 nmol de 4-DAMP (14,00 ± 7,00 e 3,00 ± 6,00 mmHg, respectivamente) injetados no VL. Após a injeção ip de pilocarpina ocorreu aumento da expressão da proteína fos no núcleo supra-óptico, mas não em outras áreas prosencefálicas como área septal lateral (ASL), área septal medial (ASM), núcleo paraventricular (PVN), núcleo subfornicial (SFO), órgão vasculoso da lamina terminal (OVLT), núcleo pré-óptico mediano (MnPO). O aumento da expressão de c-fos no núcleo supra-óptico produzida pela injeção ip de pilocarpina foi de 12,8 ± 2,4 células cfos positivas/10-2 mm2 e este aumento foi reduzido pelo prévio tratamento com 25 nmol de 4-DAMP (3,26 ± 1,62 células c-fos positivas/10-2 mm2). Os resultados sugerem que ocorre o envolvimento de receptores muscarínicos centrais M3 na salivação induzida pela pilocarpina. Os receptores muscarínicos centrais M1 e M2 estariam envolvidos na ingestão de água e os receptores centrais M1 estariam envolvidos na resposta pressora. O envolvimento dos recepores muscarinicos M3 nas respostas dipsogênica e pressora não é claro devido ao 4-DAMP ser um antagonista para receptores M1 e M3. Sugere-se também que as respostas apresentadas pela injeção de pilocarpina periférica (4 µmol/kg de peso corporal) seriam decorrência da ativação do núcleo supra-óptico (SON).

Submitted by Amauri Alves (amauri.alves@ufv.br) on 2015-10-16T15:05:51Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 939004 bytes, checksum: 91690f8ed614b34a151ed34ced32bb7e (MD5) / Made available in DSpace on 2015-10-16T15:05:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 939004 bytes, checksum: 91690f8ed614b34a151ed34ced32bb7e (MD5) Previous issue date: 2011-03-29 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / O presente trabalho teve por objetivo estudar as respostas fisiológicas e morfológicas de células de Lactobacillus delbrueckii UFV H2b20 aos estresses ácido e por sais biliares, alem de identificar e realizar análises filogenética e de expressão de genes possivelmente relacionados a esses estresses. Lactobacillus delbrueckii UFV H2b20 não cresce em caldo MRS pH 3,5 entretanto, células mantidas neste meio por quatro horas toleram o estresse ácido, como demonstrado por curvas de sobrevivência. A maior tolerância da bactéria aos sais biliares mistos e a menor ao ácido glicodeoxicólico são características de L. delbrueckii UFV H2b20 submetida a estes estresses, em estudo in vitro. A análise da morfologia das células por Microscopia de Força Atômica (MFA) mostrou que os estresses ácido e por sais biliares provocaram alterações na morfologia da célula - a superficie da parede se apresentou rugosa com acentuada redução na dimensão correspondente à altura, em todas as condições de estresse testadas. Em conjunto, os resultados demonstram caracteristicas de respostas fisiológicas de L. delbrueckii UFV H2b20 aos estresses ácido e por sais biliares desejáveis e necessárias em bactéria probiótica, ou seja, resistir e sobreviver em condições similares às prevalecentes no trato gastrointestinal (TGI) de humanos. Os genes clpP, clpE, clpL e cle de L. delbrueckii UFV H2b20, cujos produtos pertencem ao complexo proteolítico Clp apresentaram alta identidade de sequência, variando de 96 a 97 % com as de Lactobacillus delbreuckii subsp. bulgaricus ATCC 11842. As árvores filogenéticas reconstruídas por Inferência Bayesiana mostraram os genes clpP, clpL e clpE agrupados com os de L. delbreuckii subsp. bulgaricus ATCC 11842. As exposições das células aos meios MRS pH 3,5, MRS contendo O,l % de sais biliares mistos e a MRS contendo O,l % de ácido glicodeoxicólico por 30 e 60 minutos aumentaram a expressão dos quatro genes, enquanto a exposição a ácido taurodeoxicólico aumentou apenas a do gene clpL. Considerando o envolvimento dos genes clpP, clpL, clpE e cle nas respostas aos estresses ácido e por sais biliares infere-se que a atividade do complexo proteolítico Clp pode representar mecanismo de reparo e/ou degradação de proteínas danificadas pelas condições de estresse analisadas neste estudo. Os genes codificadores de ornitina descarboxilase e de permease de aminoácido identificados em L. delbrueckii UFV H2b20 agruparam na reconstrução filogenética com os de L. delbreuckii subsp. bulgaricus ATCC 11842, sendo de 96 a 98 % a identidade das sequências. O aumento da expressão do gene que codifica a ornitina descarboxilase após a exposição das células por 30 e 60 minutos em MRS pH 3,5, meio rico, mostra o envolvimento deste gene na resposta ao estresse ácidoem L. delbrueckii UFV H2b20 e evidencia que a proteína codificada por esse gene é a envolvida na regulação do pH intracelular. Sugere- se a descarboxilação de aminoácidos como mecanismo de adaptação à condição de acidez do meio. Com o estudo da expressão dos genes spx, dps e pax, todos envolvidos no estresse oxidativo em L. delbrueckii H2b20, caracterizou-se base molecular envolvida no fenômeno de proteção cruzada in vitro ao constatar-se a sobreposição e a inespecificidade de genes aos estresses investigados. Particularmente, o aumento da expressão do gene dps após exposição das células aos meios MRS pH 3,5 e MRS contendo 0,1 % de ácido glicodeoxicólico foi interpretado como mecanismo de proteção do DNA a acidez interna das células. No presente estudo, bases fisiológicas e moleculares que possibilitam a probiose por L. delbrueckii UFV H2b20 ficam esclarecidas no que tange à existência de mecanismos para sobrevivência e persistência em condições presentes no TGI de humanos. / The objective of this work was to study the physiological and morphological responses of Lactobacillus delbrueckiz' UFV H2b20 to acid and bile salts stress and to identify and accomplish phylogenetic and expression analysis of genes related to these stress. Lactobacz'llus delbrueckiz' UFV H2b20 does not grown MRS broth pH 3.5, however, cells treated in this medium for four hours tolerate acid stress, as demonstrated bysurvivalcurves. This bacterium is more tolerant to mixed bile salts and less tolerant to glycodeoxycolic. Analysis of cell morphology by atomic force microscopy (AFM) showed that acid stress and bile salts caused changes in cell morphology - the wall surface became rough and reducted in height, in all stress conditions tested. The results demonstrate that L. delbrueckz'z' UFV H2b20 may resist similar conditions prevailing in the gastrointestinal tract of humans. The genes clpP, clpE, clpL and cle of L. delbrueckz'z' UFV H2b20, whose products belong to the Clpproteolytic complex showed high sequence identity, ranging from 96 to 97% with those of Lactobacillus delbreuckiz' subsp.bulgaricus ATCC 11842. Phylogenetic treesreconstructedbyBayesian inferenceshowedthegenes clpP, clpE and clpL grouped with the genes of L.delbrueckii subsp. bulgaricus ATCC 11842. The expression increase of the clpP, clpE, clpL and clegenesin L. delbrueckz'z' UFV H2b20 in response to acid and bile salts stress was observed after 30 and 60 minutes. The exposure of cells to MRS pH 3,5, MRS containing 0,1 % mixed mixed bile salts and MRS containing 0,1 % glycodeoxycolic acid for 30 and 60 minutes increased the expression of four genes, while exposure to taurodexycolic acid increased the expression of clpL alone. The involvement of clpP, clpE, clpL and cle in the responses to acid stress and bile salts showed that the activity of the Clp proteolytic complex may represent the mechanism of repair and/or degradation of proteins damaged by the stress conditions analyzed in this study. The genes encoding ornithine decarboxylase and amino acid permease identified in L. delbrueckz'z' UFV H2b20 grouped in phylogenetic reconstruction with those of L. delbreuckiz' subsp. bulgarz'cus ATCC 11842, with 96 to 98% identity of sequences. The expression of the gene encoding omithine decarboxylase increased after exposing the cells for 30 and 60 minutes in MRS pH 3.5, a rich medium, an evidence of the involvement of this gene in acid stress response in L. delbrueckiz' UFV H2b20 and also that the protein encoded by this gene is involved in the regulation of intracellular pH. It is suggested that the decarboxylation of amino acids as a mechanism for adaptation to acid stress. The molecular basis of the cross protection phenomenon was characterized by the expression of pr, dps and pox, all involved in oxidative stress response. There are overlaps and inespecifity in the expression of those genes to stress investigated. The increased in dps expression following exposure to pH 3.5 to 0,1 % glycodexycolic acid was interpreted as a DNA protective mechanism to low internal cell acidity. In this study, physiological and molecular basis that enable probiose in L. delbrueckz'z' UFV H2b20 are clarified with regard to the existence of mechanisms for survival and persistence under conditions present in the human gut.

Orientador: Sheila Canevese Rahal / Banca: Alessandra Melchert / Banca: Fernando de Biasi / Resumo: O trabalho teve por objetivo avaliar parâmetros cinéticos e têmporo-espaciais de cães com fratura do coxal tratados de forma conservativa, locomovendo-se em plataforma de pressão em velocidade constante. A hipótese foi que os cães podem apresentar alterações cinéticas e têmporo-espaciais decorrentes da lesão, as quais podem interferir no índice de simetria. Para tanto foram estabelecidos dois grupos experimentais, a saber: Grupo 1 - cães clinicamente sadios (n=15); Grupo 2 - cães com fraturas do coxal tratadas conservativamente (n=15). O Grupo 1 foi constituído por animais de porte similar aos do Grupo 2. Foram avaliadas a porcentagem de distribuição de peso e os índices de simetria do pico de força vertical, impulso vertical, tempo e porcentagem de apoio e tempo e porcentagem de balanço dos membros pélvicos. Quatro cães apresentaram menor distribuição de peso para um dos membros pélvicos e três mostraram maior distribuição de peso em membros pélvicos. Em cinco cães foram detectadas alterações dos índices de simetria dos parâmetros têmporo-espaciais, sendo três apenas no tempo de apoio ou porcentagem de apoio, e dois no tempo e porcentagem de apoio bem como tempo e porcentagem de balanço. Foi possível concluir que cães com fratura do coxal tratadas conservativamente apresentaram alterações na distribuição de peso e nos índices de simetria dos parâmetros cinéticos e têmporoespaciais, sendo essas associadas à gravidade das fraturas observadas pelo exame radiográfico / Abstract: This study aimed to evaluate kinetic and temporospatial parameters in dogs with pelvic fractures, treated conservatively, during the locomotion on a pressure-sensing walkway at a constant velocity. The hypothesis was that the dogs may present changes in kinetic and temporospatial parameters because of the fractures, which may interfere with the symmetry index. Two experimental groups were established as follows: Group 1 - clinically healthy dogs (n=15), Group 2 - dogs with pelvic fractures treated conservatively. Group 1 was composed of dogs with similar body size to Group 2. The body-weightdistribution percentages and symmetry indices of the peak vertical force, vertical impulse, stance time, swing time, percentage of stance time, and percentage of swing time of the hindlimbs were evaluated. Four dogs had lower body weight distribution on one of the hind limbs while three dogs had greater weight distributed toward hind limbs. Five dogs showed alterations in the temporospatial symmetry indices, three only in stance time or percentage of stance time and two in stance time or percentage of stance time with swing time and percentage of swing time. In conclusion, dogs with pelvic fractures treated conservatively present changes in kinetic and temporospatial parameters associated with fracture severity detected by radiographic examination / Mestre

Orientador: Alex Sandro Campos Maia / Banca: Márcia Helena Machado da Rocha Fernandes / Banca: Marcos Chiquitelli Neto / Resumo: O presente trabalho objetivou o estudo de variáveis fisiológicas e a emissão de metano entérico em bovinos de leite da raça Jersey, relacionando com as variáveis ambientais. Para entender essa dinâmica do equilíbrio térmico foi conduzido um experimento onde foram utilizados doze animais da raça Jersey lactantes com produção média diária de 17,7 L/dia, pertencentes ao rebanho da APTA de Ribeirão Preto, o médio de 362,3±31,0, não prenhes e com média de dois meses de lactação. O arranjo experimental adotado foi em quadrado latino sendo avaliados 12 animais durante 12 dias de coleta e observados durante 12 horas. A temperatura superfície da epiderme foi fortemente correlacionada com as variáveis meteorológicas do ambiente (temperatura e umidade relativa do ar), sendo seu coeficiente de correlação igual a 0,69, -0,50 e fracamente correlacionada com a radiação -0,11. A temperatura retal apresentou a menor média diária de 38,5±0,33 °C e a maior média de 40,3±0,05 °C. A temperatura da superfície do pelame aumentou até por volta das 16:00 horas, sendo que após esse horário passou a ocorrer um decréscimo, enquanto a da epiderme tem um decréscimo a partir das 18:00 horas. A temperatura da epiderme apresentou uma correlação positiva de 0,83 com a temperatura do pelame e com a temperatura retal de 0,55. A frequência respiratória apresentou uma correlação positiva com a temperatura do ar, 0,35. A perda de calor via evaporação respiratória apresentou uma correlação positiva com a temperatura do ar, 0,71. De forma que, a maior média, às 13:00 horas, 30,4±0,33, W m-2 e a menor, em torno das 8:00 horas, com média de 12,6±0,29 W m-2 enquanto sua correlação com a umidade relativa foi -0,51. O efeito da hora do dia foi significativo (P < 0,01) para produção de calor metabólico e emissão de CH4 entérico. A correlação entre a emissão de CH4 e a produção de calor metabólico foi de 0,23. A análise... / Abstract: The present work aimed to study the physiological variables and enteric methane emission in Jersey breed dairy cow, relating with environmental variables. To understand the dynamics of thermal equilibrium was conducted an experiment where we used twelve animals of Jersey breed lactating cow with average daily production of 17.7 L/day, by the herd of APTA of Ribeirão Preto, the average of 362.3 ± 31.0, not pregnant and with an average of two months of lactation. An experiment was conducted adopting an experimental Latin square design where 12 animals were evaluated during 12 days of data collection and being observed for 12 hours long. The skin surface temperature was strongly correlated with the environmental meteorological variables (temperature and relative humidity), and its coefficient of correlation was equal to 0.69, -0.50 and weakly correlated to the solar radiation -0.11. The lowest average of rectal temperature was 38.5 ± 0.33 ° C and the highest was 40.3 ± 0.05 ° C. The coat surface temperature increased until around 16:00 hours, and after that it began to decrease, while the epidermis had a decrease starting from 18:00 hours. The temperature of the epidermis showed a positive correlation with the hair coat temperature of 0.83 and with the rectal temperature of 0.55.The respiratory frequency showed a positive correlation with the air temperature, 0.35. The heat loss by respiratory evaporation showed a positive correlation with the air temperature, 0.71. So that, the high average, was at 13 hours 30.4±0.33, W m-2 and the low, around at 8 hours, with average of 12.6 ± 0.29 W m-2 while their correlation with relative humidity was -0,51. The hour and day effects was significant (P <0.01) for metabolic heat production and enteric methane emission. The correlation among methane emission and metabolic heat production was of 0.23. The analysis of variance showed that collet day, hour of class and animal were significant ... / Mestre

O presente estudo teve como objetivo verificar a existência da melhoria de aderência no modelo normalizado de conforto térmico (PMV), utilizando as taxas metabólicas a partir das sensações térmicas reais de usuários em ambientes industriais. Assim, o estudo determinou a taxa metabólica através de análise de regressão múltipla e pela substituição dos valores de PMV pelas sensações térmicas reais através do software específico de conforto térmico em concordância com a norma ISO 7730 de 2005 obtendo assim a taxa metabólica calculada. Com isso foram calculados novos valores de PMV utilizando os valores das taxas metabólicas, resultando em PMVtab, PMV1 e PMV2. Para verificar qual dos valores de taxa metabólica aproximou-se ao modelo PMV com sensação térmica real, foi realizada uma análise de regressão simples, obtendo-se duas equações para correção da taxa metabólica tabelada. Para verificar a validade das equações da taxa metabólica corrigida, foi procedido o cálculo do PMV em um conjunto de 30 medições. O resultado obtido para o PMV tabelado foi de R2=0,25; para o PMV corrigido, 1, R2=0,26; para o PMV corrigido 2, de R2=0,11. Isso demonstra que não houve correlação entre as sensações térmicas relatas pelos trabalhadores e os valores de PMV tabelados e corrigidos. O percentual de diferença entre o Mtabelado e o Mcorrigido 1 e Mcorrigido 2 foi na ordem de 1,66% e -0,40% respectivamente. Considera-se que para este estudo, em um conjunto de 30 medições, levando em consideração a sensação térmica real dos trabalhadores, os valores da taxa metabólica tabelada não apresentaram boa precisão, quando comparados aos valores do PMV e à sensação térmica real. Porém, pode-se considerar que se o objetivo for promover uma correção na taxa metabólica tabelada, deve-se aplicar sobre a mesma um percentual de acréscimo de 1,66%. / This research aimed to verify the presence of adhesion increase in the normalized standard of thermal comfort (PMV) by using metabolic rates from users’ actual thermal sensations in industrial environments. So, this research defined the metabolic rate by multiple regression analysis, and by substituting the values of PMV by actual thermal sensations through the specific software of thermal comfort according to ISO 7730, 2005, thus getting the metabolic estimated rate. With that, new PMV values were calculated by using the values of metabolic rates, resulting in PMVtab, and PMV1 PMV2. To check which of the values of metabolic rate approached the PMV model with actual thermal sensation, an analysis of simple regression was performed, obtaining two equations for the correction of the metabolic rate table. To check the equation validity of the corrected metabolic rate, the calculation of PMV in a set of 30 measurements was carried on. The obtained result for the tabulated PMV was of R2 = 0.25; for the PMV corrected 1, of R2 = 0.26; for the PMV corrected 2, of R2 = 0.11. It demonstrates that there was no correlation between the thermal sensations which had been reported by the workers and the tabulated and corrected values of PMV. The percentage difference between Mtabulated and Mcorrected 1 and Mcorrected 2 was of 1.66% and -0.40% respectively. It is considered that for this study, in a set of 30 measurements, taking into account the workers’ actual thermal sensation, the values of the tabulated metabolic rate are not well accurate when compared to the values of PMV and to the actual thermal sensation. However, it may be considered that if the aim is to promote a small correction in the tabulated metabolic rate, one should apply on it an increasing percentage of 1.66 %.

Orientador: Jairo Aparecido Ayres / Coorientador: Lais Helena Camacho Navarro / Banca: Maria Belén Salazar Posso / Banca: Silmara Meneguin / Resumo: Comparar a eficiência dos dispositivos manta e colchão térmicos na manutenção da normotermia em pacientes nos períodos intra e pósoperatório; Analisar o período de tempo da recuperação pós-anestésica, com o uso dos dispositivos manta e colchão térmicos; relacionar a utilização dos dispositivos manta e colchão térmicos às variáveis: idade, índice de massa corpórea (IMC) e porte cirúrgico. Trata-se de estudo transversal, prospectivo, randomizado, de delineamento quantitativo, realizado na unidade de Centro Cirúrgico do Hospital das Clínicas de Botucatu, de janeiro a outubro de 2011. Participaram da pesquisa 38 pacientes que foram divididos em 2 grupos (G1 e G2), sendo ambos compostos por 19 pacientes. G1 utilizou a manta térmica com sistema de aquecimento Bair Hugger® modelo 750, sendo esta posicionada nos membros inferiores. G2 utilizou o colchão térmico com circulação de ar quente KanMedo WarmCloudTM. Inicialmente o colchão foi posicionado sobre a mesa cirúrgica a uma temperatura 37oC e insuflado, em seguida os pacientes foram posicionados em decúbito dorsal horizontal, em contato direto com o colchão. Para a coleta dos dados utilizou-se instrumento confeccionado pelo pesquisador, composto por 4 itens: caracterização do paciente, fatores relacionados ao procedimento cirúrgico, aspectos relacionados à recuperação pós-anestésica e tempo de internação. O tempo cirúrgico foi maior no grupo G2 (p=0,03), porém, não se observou aumento na incidência de hipotermia neste grupo; no G2 evidenciou-se uma tendência a menor tempo de recuperação pós-anestésica (p=0,06). A infusão de amido no intraoperatório do G2 foi maior (p=0,03), porém, não influenciou na ocorrência de hipotermia. No G2 a temperatura axilar foi maior aos 120 minutos do inicio do procedimento anestésico cirúrgico... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: surgical outcomes, and increased patient satisfaction. The use of perioperative forced-air warming devices is one way of preventing inadvertent hypothermia. There is scant evidence, however, on the best warming method or the acceptability of these methods to patients. The present study aimed to compare two forced-air warming devices to maintain perioperative normothermia: blanket versus mattress. Information was obtained from 38 patients underwent gastrointestinal surgical procedures. Skin and esophageal temperatures were compared for patients who were warmed with a warming blanket (Bair Hugger®), placed over the lower extremities (G1), versus patients who were warmed with a warming mattress (KanMedo WarmCloudTM) placed under the patient's body (G2). In addition to the temperature evaluation, length of the surgical procedure, total volume of intraoperative fluid replacement, and length of stay in the Post Anesthetic Care Unit (PACU) were also recorded. Although the length of surgery was longer in G2 (291.6±115.2 versus 214.6±91.1 minutes; p=0.03), there was no increase in the hypothermia incidence in this group. Skin temperature was higher at 120 minutes after anesthesia induction in G2 (35.3±0.9 versus 34.8±0.8; p=0.04). Esophageal temperature was also higher in G2 at 120 and at 180 minutes after anesthesia induction, as well as, at the end of the surgery (36.1±0.7 versus 35.4±0.6, p <0.001; 35.9±0.7 versus 35.3±0.7, p=0.03; and 36.1±0.7 versus 35.2±0.9, p<0.001 respectively). Although the patients in G2 had 30 minutes shorter length of stay in the PACU, there was no statistically significant difference between the two groups (115.4±47.3 versus 82.5±53.1 minutes; p=0.06). The infused volume of Hetarstarch was higher in G2 when compared with G1 (730.8±259.4 versus 541.7±144.3; p=0.03)... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre