A formação de complexos antígeno-anticorpo ou imunocomplexos (ICs) na circulação e sua eliminação faz parte dos mecanismos de defesa imune humoral do ser humano. Em algumas patologias, como lupus eritematoso sistêmico, artrite reumatóide e vasculite auto-imune, ocorre um desequilíbrio nesse processo, que leva à deposição dos ICs nos tecidos e ao desencadeamento de uma reação inflamatória. Esta, por sua vez, envolve o recrutamento e ativação de neutrófilos, que têm importante participação na patogênese dessas doenças. A ativação dos neutrófilos pelos ICs, via receptores para a porção Fc de IgG (FcR) e receptores de complemento (CR), desencadeia diversas funções efetoras, tais como fagocitose, desgranulação e o metabolismo oxidativo, com a produção de espécies reativas de oxigênio (EROs). Estas funções estão envolvidas na digestão dos ICs, na morte de microorganismos, e na regulação do processo inflamatório. Entretanto, nas doenças mediadas por ICs, os neutrófilos ativados liberam grandes quantidades de enzimas e EROs para o meio extracelular, contribuindo para a lesão dos tecidos do hospedeiro e a amplificação do processo inflamatório. Neste trabalho foi avaliado o efeito modulatório de vinte derivados de 3-fenilcumarina nas funções de neutrófilos estimulados por ICs de ovalbumina (OVA) e IgG anti-OVA. Além disso, foi feita a investigação mecanismos de ação dessas substâncias e a análise da relação estrutura-atividade. O metabolismo oxidativo dos neutrófilos ativados por ICs foi medido por ensaio de quimioluminescência dependente de lucigenina ou de luminol (QLlucPMN e QLlumPMN, respectivamente). Observou-se que as 3-fenilcumarinas contendo o grupo substituinte 3,4-metilenodioxi e o grupo substituinte 6,7-orto-diidroxi (C13) ou 6,7-orto-diacetoxi (C13a), bem como a 3-fenilcumarina 6,7,3,4-tetraacetoxilada (C24a), apresentaram atividade inibitória maior que a quercetina (QUER) sobre a QLlucPMN e a QLlumPMN. Para as demais substâncias avaliadas, que foram tão ou menos ativas que a QUER, as características estruturais relacionadas à inibição da QLlucPMN foram um pouco diferentes daquelas relacionadas à inibição da QLlumPMN. Além disso, as 3-fenilcumarinas estudadas e a QUER não apresentaram efeito tóxico sobre os neutrófilos, avaliado pela liberação de lactato desidrogenase e pelo ensaio de exclusão ao corante Azul de Tripan, nas condições empregadas. Para as três 3-fenilcumarinas que apresentaram maior efeito inibitório sobre o metabolismo oxidativo dos neutrófilos (C13, C13a e C24a), o aumento do tempo de pré-tratamento levou a uma tendência de redução do efeito inibitório da substância C24a, mas não influenciou na atividade biológica das substâncias C13 e C13a. Essas três substâncias não interferiram na capacidade fagocítica das células, avaliada por microscopia eletrônica de transmissão. Para todas as 3-fenilcumarinas foi avaliada também a capacidade antioxidante frente ao radical livre 2,2-difenil-1-picril-hidrazil e o efeito inibitório dessas substâncias sobre a quimioluminescência produzida pela reação horseradish peroxidase-H2O2-luminol (QLHRP). Foi observado que a QUER e as 3-fenilcumarinas contendo o grupo substituinte orto-diidroxi (C13, C23, C24) tiveram atividade antioxidante e inibiram a QLHRP, mas suas análogas acetoxiladas (C13a, C23a, C24a), bem como as demais substâncias avaliadas, foram significativamente menos ativas nesses modelos experimentais não celulares. O conjunto de resultados deste trabalho sugere que as atividades biológicas das 3-fenilcumarinas estudadas foram dependentes de suas estruturas químicas, e pequenas modificações nestas podem levar a alterações significativas na magnitude de seus efeitos biológicos. Além disso, tanto a lipofilicidade das substâncias quanto a sua capacidade antioxidante parecem ser relevantes para a modulação eficiente do metabolismo oxidativo dos neutrófilos e da conseqüente lesão tecidual. / Formation and clearance of circulating antigen-antibody complexes or immune complexes (ICs) take part in the humoral immune defense mechanisms. In some diseases, as systemic lupus erythematosus, rheumatoid arthritis and auto-immune vasculitis, an imbalance of this process occurs, leading to the ICs deposition within tissues and triggering an inflammatory reaction. The last one involves the recruitment and activation of neutrophils, which have an important role in the pathogenesis of such diseases. Neutrophil activation by ICs, via receptors for the Fc portion of IgG (FcgR) and complement receptors (CR), triggers a sort of effector functions, such phagocytosis, degranulation and the oxidative metabolism, which produces reactive oxygen species (ROS). These functions are involved in the ICs digestion, microbial killing and the inflammatory process regulation. However, the activated neutrophils release large amounts of enzymes and ROS to the extracellular milieu, contributing to the tissue damage and amplification of the inflammatory process in the IC-mediated diseases. In this work, we evaluated the modulatory effect of twenty 3-phenylcoumarin derivatives in the neutrophil functions stimulated by ICs of ovalbumin (OVA) and IgG anti-OVA. In addition, the mechanisms of action of these compounds were investigated, and the structure-activity relationship was analyzed. The IC-activated neutrophil oxidative metabolism was measured by lucigeninor luminol-dependent chemiluminescence assay (CLlucPMN and CLlumPMN, respectively).It was observed that the 3-phenylcoumarins bearing a 3,4-methylenodioxy and the 6,7-orto-dihydroxy (C13) or the 6,7-orto-diacetoxy (C13a) group, as well as the 6,7,3,4-tetraacetoxylated 3-phenylcoumarin (C24a), inhibited CLlucPMN and CLlumPMN more than quercetin (QUER). Regarding the other evaluated compounds, whose inhibitory effects were similar to or lower than QUER, the structural features related to the CLlucPMN inhibition were different from those related to the CLlumPMN inhibition. Moreover, the studied 3-phenylcoumarins and QUER had no toxic effects on neutrophils, as evaluated by lactate dehydrogenase release and Trypan Blue exclusion, under the assessed conditions. With respect to the three 3-phenylcoumarins that had the highest inhibitory effects on the neutrophil oxidative metabolism (C13, C13a and C24a), the increase of the cell pre-treatment period showed a tendency to decrease the inhibitory ability of compound C24a, but did not influence the biological activity of compounds C13 and C13a. These three compounds did not interfere in the neutrophil phagocytic ability, as evaluated by transmission electron microscopy. The antioxidant activity against the 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl free radical and the inhibitory effect in the chemiluminescence generated by the horseradish peroxidase-H2O2-luminol reaction (CLHRP) were evaluated for all 3-phenylcoumarins. It was found that QUER and those 3-phenylcoumarins bearing the orto-dihydroxy group (C13, C23, C24) had antioxidant activity and inhibited the CLHRP. However, their acetoxylated analogues (C13a, C23a, C24a) and the other evaluated compounds were significantly less active on these cell-free experimental models. Taken together, the results of the present work suggest that the biological activities of the 3-phenylcounarins here investigated were dependent on their chemical structures, and small changes on the molecule can lead to significant changes on the magnitude of their biological effects. Moreover, both lipophilicity and antioxidant capacity of these compounds seem to be relevant to an efficient modulation of the neutrophil functions and the consequent tissue damage.

Orientador: Vanderlan da Silva Bolzani / Coorientador: Ian Castro Gamboa / Banca: Cintia Duarte de Freitas Milagre / Banca: Adriano Defini Andricopulo / Banca: Fernando Antônio Santos Coelho / Banca: Alcindo Aparecido dos Santos / Resumo: As leishmanioses englobam um espectro de doenças que afetam o ser humano e outros mamíferos nas regiões tropicais e subtropicais do planeta. São causadas por pelo menos 20 tipos de parasitas pertencentes ao gênero Leishmania, e apresentam diversas e complexas manifestações clínicas. Podem ser encontradas em mais de 88 países, sendo que o Brasil é um dos países endêmicos onde a doença está mais disseminada. Em 2010 foram confirmados 21.981 casos de leishmaniose tegumen-tar e 3536 de leishmaniose visceral, com 219 mortes. No mundo cerca de 350 mi-lhões de pessoas estão expostas à infecção e acredita-se que cerca de 12 milhões estejam infectadas, com cerca de 1-2 milhões de novos casos por ano e 60 mil óbi-tos. Pensando nisso, o presente estudo visou obter novas substâncias candidatas a serem utilizadas no combate as chamadas "Doenças Tropicais Negligenciadas", mais especificamente a Leishmaniose. Neste trabalho foram sintetizados doze aná-logos de meroterpenos, sendo nove compostos inéditos e ainda os compostos natu-rais isolados de Psidium guajava (psidial A, guajadial e pisguadial B), utilizando uma rota curta e linear e com rendimento global em torno de 20%. Um estudo sobre o mecanismo da reação de cicloadição [4+2] possibilitou determinar as barreiras de energia envolvidas nas transformações e permitiu compreender algumas limitações da metodologia empregada. Nos testes biológicos, os análogos sintéticos se mostra-ram promissores para combater a forma promastigota de Leishma... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Leishmaniasis encompasses a spectrum of diseases that affect humans and other mammals in the tropical and subtropical regions of the planet. They are caused by at least 20 types of parasites belonging to the genus Leishmania, and present diverse and complex clinical manifestations. They can be found in more than 88 countries, and Brazil is one of the endemic countries where the disease is most widespread. In 2010, 21,981 cases of tegumentary leishmaniasis and 3536 cases of visceral leish-maniasis were confirmed, with 219 deaths. Around 350 million people worldwide are exposed to the infection and an estimated 12 million are believed to be infected, with about 1-2 million new cases per year and 60,000 deaths. With this in mind, the pre-sent study aimed to obtain new candidate substances to be used in the fight against "Neglected Tropical Diseases", more specifically Leishmaniasis. In this work, twelve meroterpene analogs were synthesized, with nine new compounds and the natural compounds isolated from Psidium guajava (psidial A, guajadial and pisguadial B) using a short and linear route with a global yield of around 20%. A study of the mechanism of the cycloaddition reaction [4 + 2] made it possible to determine the energy barriers involved in the transformations and allowed to understand some limitations of the methodology used. In biological tests, synthetic analogues were shown to be promising to combat the promastigote form of Leishmania infantum, with EC50 values between ... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciencias Fisicas e Matematicas / Made available in DSpace on 2012-10-16T09:52:17Z (GMT). No. of bitstreams: 0Bitstream added on 2016-01-08T20:07:00Z : No. of bitstreams: 1 104440.pdf: 7226273 bytes, checksum: b9a8f0f2ffb77396426f011b551ba536 (MD5) / O presente trabalho teve como finalidade obter compostos farmacologicamente ou biologicamente ativos a partir de substâncias isoladas de plantas medicinais. Assim, três compostos naturias (xantoxilina, astilbina e filantimida) foram usados como protótipos para a síntese de derivados ou análogos que foram posteriormente analisados em diversos modelos farmacológicos "in vitro" e "in vivo". Entre as várias modificações estruturais realizadas na xantoxilina, observou-se alguns resultados interessantes. A série de compostos benzilados, por exemplo, apresentou importantes ações antiespasmódicas no íleo isolado de cobaia contraído pela acetilcolina. O uso do Método de Topliss para correlacionar a estrutura com a atividade possibilitou a síntese de compostos antiespasmódicos mais potentes, sendo que alguns destes derivados foram cerca de 5 vezes mais efetivos do que a papaverina. Além disso, foi possível determinar que os efeitos eletrônicos assim como os efeitos hidrofóbicos dos grupos substituintes são fatores estruturais importantes relacionados com o efeito antiespasmódico. Por outro lado, outros derivados da xantoxilina, como o derivado monobromado, algumas chalconas e o derivado benzofurânico foram efetivos não só como analgésicos, mas também como antiinflamatórios em vários modelos de dor e de inflamação. O derivado benzofurânico, obtido a partir da reação entre a xantoxilina e brometo de p-bromo fenacila, foi o que apresentou resultados bastante promissores. No modelo de dor induzido pelo ácido acético, este composto foi cerca de 130 vezes mais potente do que a aspirina e acetaminofeno, drogas tradicionalmente usadas na clínica. No modelo de dor causado pela formalina, o referido composto foi cerca de 18 vezes mais potente em inibir a dor de origem inflamatória do que estas drogas. Inibiu também a primeira fase da dor causada pela formalina, fato que apenas alguns analgésicos disponíveis no mercado são capazes. Além disso, apresentou efeito prolongado e parece atuar por mecanismos diferentes da aspirina e da morfina, o qual é de extrema importância na procura de novos analgésicos. Quando testado no edema de pata causado pela carragenina, este e outros compostos derivados da xantoxilina foram equipotentes aos conhecidos ibuprofene e indometacina. Os derivados do flavonóide astilbina, como o taxifolin e taxifolin tetrametilado apresentaram não só pronunciado efeito analgésico e antiinflamatório, mas também potente efeito antialérgico. Interessante, estes compostos mostraram atividade analgésica quando administrados oralmente, ao contrário dos derivados da xantoxilina que foram ativos somente quando administrados intraperitonealmente. Os análogos do alcalóide filantimida, que foi usado como modelo, apresentaram importantes ações antiespasmódicas e antimicrobianas. Foi observado que em todos os modelos testados, as maleimidas foram mais efetivas do que as succinimidas, sugerindo que a dupla ligação imídica constitui-se num importante grupo farmacofórico.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciencias Fisicas e Matematicas / Made available in DSpace on 2012-10-16T11:23:29Z (GMT). No. of bitstreams: 0Bitstream added on 2016-01-08T20:39:33Z : No. of bitstreams: 1 105638.pdf: 2462681 bytes, checksum: a697c1f2ea461461986f329f34032081 (MD5) / Estudos anteriores realizados em nossos laboratórios com várias imidas cíclicas, análogas ao alcalóide natural Filantimida, o qual foi isolado de Phyllantus sellowianus apresentando atividade antiespasmódica e antibacteriana, permitiram a importante avaliação das atividades farmacológicas e biológicas deste tipo de substâncias. Neste trabalho descreve-se a síntese de compostos N-aril e N-alquilarilimídicos cíclicos, como: 3,4-dicloro-N-aril e N-alquilarilmaleimidas, 3-cloro-4-substituídas-N-aril e N-alquilarilmaleimidas, N-arilnaftalimidas, bis-N-aril e N-alquilarilnaftalimidas. As sínteses descritas levaram a compostos com bons rendimentos. Estes compostos foram identificados através de ressonância magnética nuclear de 1H, espectroscopia no infravermelho e espectrometria de massa. Os compostos obtidos demonstraram pronunciada atividade analgésica, sendo que todos os compostos testados no modelo de contorções abdominais causadas pelo ácido acético 0,6 % foram mais eficazes que a aspirina e o paracetamol. Algumas dicloromaleimidas e seus derivados apresentararn importante atividade antibacteriana. As várias modificações estruturais das dicloromaleimidas possibilitaram a aplicação do Método de Topliss, assim como, a determinação de fatores estruturais importantes relacionados com a atividade biológica dos mesmos.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciencias Fisicas e Matematicas / Made available in DSpace on 2012-10-16T23:22:40Z (GMT). No. of bitstreams: 0Bitstream added on 2016-01-08T20:14:53Z : No. of bitstreams: 1 103890.pdf: 2837071 bytes, checksum: f978949d1d41207e551ad3ceb948d28f (MD5) / Uma série de 11 b-alcoxifeniletilaminas, das quais 7 são compostos novos, foram sintetizadas e caracterizadas na forma de seus cloridratos. Ensaios farmacológicos in vitro destas substâncias permitirarn obter as afinidades aparentes desses compostos por receptores serotonérgicos 5-HT2A e adrenérgicos a1, a partir de medidas de sua capacidade de induzir a contração de aorta torácica de rato. Cálculos teóricos semi-empíricos baseados no método AM1 foram realizados para estes compostos. As conformações mais estáveis foram deduzidas a partir destes cálculos e de estimativas baseadas em espectros de ressonância magnética nuclear de hidrogênio. As conformações resultantes foram então usadas na determinação de propriedades eletrônicas dependentes da estrutura de todos os compostos preparados. Estimativas de suas lipofilicidades globais (log P) foram obtidas a partir de valores de lipofilicidades locais por métodos descritos na literatura para compostos análogos. No estudo da relação estrutura-atividade, a análise estatística dos dados revelou que o valor obtido de afinidade (pD2) mostrou uma significante correlação com a lipofilicidade total das moléculas e a carga calculada para o átomo de carbono em para à cadeia etilamina. As afinidades in vitro correlacionaram pobremente com as energias HOMO dos compostos estudados, questionando um eventual processo de transferência de carga entre o receptor e o anel aromático. Ainda, os valores de afinidade correlacionaram razoavelmente bem com as potências descritas para algumas dessas drogas em humanos.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Físicas e Matemáticas, Programa de Pós-Graduação em Química, Florianópolis, 2010 / Made available in DSpace on 2012-10-25T13:50:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 281332.pdf: 24121634 bytes, checksum: f53c5103f812e6225e52eec332393f80 (MD5) / Buscando fundamentalmente moléculas com potencial biológico, o interesse deste estudo foi sintetizar derivados heterocíclicos de estilbenóides, especialmente ftalidas e derivados isoindólicos, e uma biblioteca de chalconas, para estabelecimento das relações estrutura-atividade (REA). Foram obtidas e caracterizadas 121 chalconas, sendo 56 novos compostos, incluindo derivados com os substituintes da Árvore de Decisão de Topliss para anel aromático mono- ou di-substituído, e também variações estruturais. Obtiveram-se também novos derivados heterocíclicos de estilbenóides: 12 ftalidas (3 são novos compostos), 4 imidazo-isoindóis, 3 isoindolo-benzimidazóis e 4 benzilideno-isoindolinonas. As chalconas sintetizadas tiveram suas propriedades biológicas avaliadas em três doenças negligenciadas (tuberculose, doença de Chagas e leishmaniose), hiperglicemia e leucemia. Frente às células leucêmicas L1210, a chalcona R7 conferiu a melhor atividade citotóxica (IC50 = 13,3 M), provocando morte celular por apoptose. Sugere-se que, dentre os compostos que tem como anel A o grupo 2-naftil, a ação antileucêmica e apoptótica segue uma das linhas centrais da Árvore de Decisão de Topliss, a qual tem em sua extremidade o grupo 3-NO2. Nos modelos hiperglicêmicos in vivo, as nitrochalconas P4, P11, L6, C29, C30 e R7 apresentaram as melhores atividades hipoglicemiantes, com efeito rápido e prolongado. P4 e L6 estimularam a secreção de insulina em aproximadamente três vezes, sendo mais potentes que o fármaco glipizida. Seis chalconas (C37, R6, C33, C12, P11 e C31) foram identificadas como inibidores competitivos e seletivos da PtpA de Mycobacterium tuberculosis, e três (R32, C25 e P4) como inibidores competitivos da PtpB de M. tuberculosis, sendo R32 seletivo para PtpB. C37 e C31 reduziram a desfosforilação do alvo natural da PtpA, VPS33B, e diminuíram a carga bacteriana intracelular em macrófagos. Por sua pronunciada atividade inibitória enzimática, C37 (IC50 = 8,4 M para PtpA) e R32 (IC50 = 11,9 M para PtpB) aparecem como protótipos para o desenvolvimento de novos fármacos anti-tuberculose. A chalcona P4 apresentou importante atividade inibitória frente à enzima cruzaína de Trypanosoma cruzi (IC50 = 6,3 M), sendo considerada uma candidata a líder para a obtenção de fármacos anti-chagásicos. L3 e R32 mostraram excelente atividade anti-promastigota para Leishmania amazonensis (IC50 = 16,73 M e 13,31 M, respectivamente) e L. chagasi (IC50 = 13,57 M e 0,68 M, respectivamente), aparecendo como protótipos de novos fármacos para esta doença negligenciada. Alguns derivados heterocíclicos de estilbenóides sintetizados (I-300, I-310, I-340, I-380, I-0101, I-0102, I-0121 e I-0104) foram testados frente a uma cepa de Plasmodium falciparum sensível à cloroquina, porém, nenhum dos compostos melhorou a potência dos anteriormente ensaiados I-100 e I-120 (0,064 M).

Orientadores: Douglas Soares Galvão, Scheila Furtado Braga Llanes / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Fisica Gleb Wataghin / Made available in DSpace on 2018-08-10T15:39:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Marchiori_MarceloAmorim_M.pdf: 2387821 bytes, checksum: 159d3a99481a5ba6c6eb057065531e6e (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: A Combretastatina é um estilbeno isolado na década de 80, e vem sendo amplamente estudada pela indústria farmacêutica devido à sua promissora ação anticarcinogênica. Como fármaco anticarcinogênico, age interrompendo o ciclo de polimerização e despolimerização dos microtúbulos, componente celular extremamente importante para a motilidade, manutenção estrutural e mitose celular. Sua principal forma de atuação consiste em despolimerizar os microtúbulos estáveis das células endoteliais da vasculatura tumoral, levando ao bloqueio do fluxo sanguineo que alimenta os tumores cancerígenos. Uma das grandes vantagens da Combretastatina, em relação aos demais medicamentos antineoplásicos, é o fato de não levar à resistência medicamentosa no tratamento quimioterápico. Investigamos a estrutura da Combretastatina e 17 derivados por meio de métodos semiempíricos e estudamos a relação entre as propriedades teóricas e a atividade experimental destes compostos, utilizando três metodologias de reconhecimento de padrões: a Metodologia de Índices Eletrônicos (MIE), a Análise de Componentes Principais (PCA) e a Análise Hierárquica de Clusters (HCA). Para cada metodologia construímos regras e padrões, permitindo a classificação dos compostos em ativos e inativos, a partir das propriedades calculadas teoricamente. Os resultados das três metodologias confirmam a aplicabilidade da MIE e reforçam a importância das variáveis eletrônicas para a classificação da atividade biológica das Combretastatinas / Abstract: Combretastatin, a stilbene isolated in 80's, has been widely studied by the pharmaceutical industry due to its promising anticarcinogenic action. As an antineoplastic agent it acts interrupting the polymerization-depolymerization cycle of the microtubules, an important cellular component to motility, strutuctural maintenance and cellular mitosis. Its main feature consists in dissociate the microtubules in endothelial cells of the tumoral vascular system, leading to disruption of the blood ow that feeds the carcinomas. One of the great advantages of Combretastatin, when compared with others compounds, is the fact that it does not lead to drug resistance in chemotherapy treatments. We investigated the structure of Combretastatin and 17 derivatives using semiempirical methods. We performed the study of the relationship between theoretical properties and experimental activity of these molecules using three pattern recognition methodologies: Electronic Index Methodology (EIM), Principal Component Analysis (PCA) and Hierarchical Clusters Analysis (HCA). For each methodology we found rules and patterns capable of classifying our molecules into active or inactive, using the properties theoretically calculated. The results obtained from the three methodologies confirm the applicability of the EIM and reinforce the importance of the electronic variables for the classi cation of the biological activity of Combretastatins / Mestrado / Estrutura Eletrônica de Atomos e Moleculas / Mestre em Física

Submitted by Haroudo Xavier Filho (haroudo.xavierfo@ufpe.br) on 2016-01-19T17:57:46Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO CD.pdf: 1936828 bytes, checksum: e85b38a5c642269f2f8ca9447109ae2c (MD5) / Made available in DSpace on 2016-01-19T17:57:46Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO CD.pdf: 1936828 bytes, checksum: e85b38a5c642269f2f8ca9447109ae2c (MD5) Previous issue date: 2013-08-15 / CNPq / Previamente, foi mostrado por nossa equipe de pesquisa que o 1-nitro-2-feniletano (NF), o principal constituinte do óleo essencial de Aniba canellila, uma planta nativa da Amazônia, reduz a pressão arterial e possui efeitos vasorrelaxantes. Mais recentemente, foi observado que o 1-nitro-2-fenileteno (NFE), um derivado obtido de maneira sintética através de restrição conformacional da molécula do NF, possui uma potência 3 a 4 vezes maior para relaxar preparações isoladas de aorta torácica de rato em comparação ao NF (de origem natural). No presente estudo, visando melhorar a interação fármaco-receptor, nós investigamos os efeitos cardiovasculares de dois derivados do NFE, o 1-nitro-2-[(4'-metoxi)-fenil]-eteno (derivado I com grupamento metoxila) e 1-nitro-2-[(4'-dimetilamina)-fenil]-eteno (derivado II com grupamento dimetilamina) em ratos espontaneamente hipertensos. Sabe-se que os grupamentos metoxila e dimetilamina são elétron-doadores e podem alterar o aspecto eletrônico da molécula do NFE. Dados preliminares mostram que injeções intravenosas em bolus do NFE e dos derivados I e II induziram efeito hipotensor e bradicardizante bifásicos (fase 1 rápida e fase 2 mais tardia). A fase 1 da hipotensão e bradicardia tende a ser reduzida ou abolida após a bivagotomia e o tratamento perineural dos vagos com capsaicina (250 g/mL). A magnitude da segunda hipotensão (fase 2) tende a ser 3-4 vezes maior para os derivados I e II comparada ao NFE. Os dados dos experimentos in vitro mostram que derivados I e II induziram vasorrelaxamento em anéis de artéria mesentérica superior, pré-contraídas com fenilefrina (1 μM) com valores de CI50 [(média geométrica - intervalo de confiança de 95%)] de 22,41 [27,52-15,23] e 17,13 [31,29-11,82] μM, respectivamente. Estes efeitos vasorrelaxantes não foram influenciados pela remoção do endotélio vascular, portanto foram significativamente reduzidos pelo pré-tratamento com o ODQ (1H-[1,2,4]-oxadiazol-[4,3-a]-quinoxalin-1-ona, 10 μM), um inibidor da guanilato ciclase. Além disso, foi mostrado que a potência dos derivados I e II (avaliada através dos valores da CI50) em relaxar preparações de SMA de ratos SHR foi aumentada em comparação ao NFE (37,95 [95,83-17,74] μM). Apesar de que este aumento não atingiu nível de significância, é interessante correlacioná-lo com a aparente amplificação da resposta hipotensora da fase 2 induzida pelos os derivados I e II em relação ao NFE. Em conclusão, os derivados I e II, assim como o NFE, induziram um reflexo depressor e bradicardizante vago-vagal (fase 1). A hipotensão tardia (fase 2) parece ser resultante de um efeito vasodilatador por um mecanismo miogênico independente da integridade endotelial e parece envolver a participação da via guanilato ciclase/GMPc/PKG. / Previously, we showed that 1-nitro-2-pheyletane (NP), the main constituent of the essential oil of the Aniba canellila, a plant native to the Amazon, lowers blood pressure and induces vasorelaxant effects. Recently, it was reported that 1-nitro-2-phenyletene (NPE), a structural analogue of NP obtained synthetically, was more potent than NF to relax aortic ring preparations than NP (of natural origin). Here, in order to improve drug-receptor interaction, we intended to investigate the cardiovascular effects of two derivates of NPE, the 1-nitro-2-[(4'-methoxy)-phenyl]-ethene (derivate I) and 1-nitro-2-[(4'-dimethylamine)-phenyl]-ethene (derivate II) in spontaneously hypertensive rats. It is well-known that methoxy and dimethylamine groups are electron donors and can alter the electronic parameters of the molecule of NPE. The present preliminary results showed that intravenous injection of NPE induced two periods of hypotension and bradycardiac (phases 1 and 2). A phase 1 tended to be reduced or even abolished by bivagotomy and perineural treatment with capsaicin (250g/mL) and magnitude of hypotensive phase 2 induced by derivates I and II tended to be 3-4 times higher than that evoked by NPE. Derivates I and II relaxed endothelium-intact superior mesenteric artery (SMA) ring preparations pre-contracted with phenylephrine (1 M) with IC50 (geometric mean [95% confidence interval]) values of 22.41 [27.52-15.23] and 17.13 [31.29-11.82] μM, respectively). These vasorelaxant effects remained unchanged by removal of the vascular endothelium but were significantly reduced by pretreatment with ODQ (1H-[1,2,4] oxadiazol [4,3-a] quinoxalin-1-one, 10 μM), an inhibitor of guanylate cyclase. Furthermore, it was shown that potency of the derivatives I and II (as measured by IC50 values) in relaxing preparations SMA was increased when compared to that of NPE. Although this increase did not reach significance level, it is interesting to correlate it with the apparent amplification of the hypotensive phase 2 response induced by both derivatives I and II compared to that NPE. In conclusion, NPE and its two derivatives induced a vago-vagal bradycardiac and depressor reflex (phase 1). The delayed hypotension (phase 2) seems to result from a vasodilatory effect by a miogenic mechanism independent of endothelial integrity and appears to involve the participation of adenylate cyclase /cGMP/PKG pathway.

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A formação de complexos antígeno-anticorpo ou imunocomplexos (ICs) na circulação e sua eliminação faz parte dos mecanismos de defesa imune humoral do ser humano. Em algumas patologias, como lupus eritematoso sistêmico, artrite reumatóide e vasculite auto-imune, ocorre um desequilíbrio nesse processo, que leva à deposição dos ICs nos tecidos e ao desencadeamento de uma reação inflamatória. Esta, por sua vez, envolve o recrutamento e ativação de neutrófilos, que têm importante participação na patogênese dessas doenças. A ativação dos neutrófilos pelos ICs, via receptores para a porção Fc de IgG (FcR) e receptores de complemento (CR), desencadeia diversas funções efetoras, tais como fagocitose, desgranulação e o metabolismo oxidativo, com a produção de espécies reativas de oxigênio (EROs). Estas funções estão envolvidas na digestão dos ICs, na morte de microorganismos, e na regulação do processo inflamatório. Entretanto, nas doenças mediadas por ICs, os neutrófilos ativados liberam grandes quantidades de enzimas e EROs para o meio extracelular, contribuindo para a lesão dos tecidos do hospedeiro e a amplificação do processo inflamatório. Neste trabalho foi avaliado o efeito modulatório de vinte derivados de 3-fenilcumarina nas funções de neutrófilos estimulados por ICs de ovalbumina (OVA) e IgG anti-OVA. Além disso, foi feita a investigação mecanismos de ação dessas substâncias e a análise da relação estrutura-atividade. O metabolismo oxidativo dos neutrófilos ativados por ICs foi medido por ensaio de quimioluminescência dependente de lucigenina ou de luminol (QLlucPMN e QLlumPMN, respectivamente). Observou-se que as 3-fenilcumarinas contendo o grupo substituinte 3,4-metilenodioxi e o grupo substituinte 6,7-orto-diidroxi (C13) ou 6,7-orto-diacetoxi (C13a), bem como a 3-fenilcumarina 6,7,3,4-tetraacetoxilada (C24a), apresentaram atividade inibitória maior que a quercetina (QUER) sobre a QLlucPMN e a QLlumPMN. Para as demais substâncias avaliadas, que foram tão ou menos ativas que a QUER, as características estruturais relacionadas à inibição da QLlucPMN foram um pouco diferentes daquelas relacionadas à inibição da QLlumPMN. Além disso, as 3-fenilcumarinas estudadas e a QUER não apresentaram efeito tóxico sobre os neutrófilos, avaliado pela liberação de lactato desidrogenase e pelo ensaio de exclusão ao corante Azul de Tripan, nas condições empregadas. Para as três 3-fenilcumarinas que apresentaram maior efeito inibitório sobre o metabolismo oxidativo dos neutrófilos (C13, C13a e C24a), o aumento do tempo de pré-tratamento levou a uma tendência de redução do efeito inibitório da substância C24a, mas não influenciou na atividade biológica das substâncias C13 e C13a. Essas três substâncias não interferiram na capacidade fagocítica das células, avaliada por microscopia eletrônica de transmissão. Para todas as 3-fenilcumarinas foi avaliada também a capacidade antioxidante frente ao radical livre 2,2-difenil-1-picril-hidrazil e o efeito inibitório dessas substâncias sobre a quimioluminescência produzida pela reação horseradish peroxidase-H2O2-luminol (QLHRP). Foi observado que a QUER e as 3-fenilcumarinas contendo o grupo substituinte orto-diidroxi (C13, C23, C24) tiveram atividade antioxidante e inibiram a QLHRP, mas suas análogas acetoxiladas (C13a, C23a, C24a), bem como as demais substâncias avaliadas, foram significativamente menos ativas nesses modelos experimentais não celulares. O conjunto de resultados deste trabalho sugere que as atividades biológicas das 3-fenilcumarinas estudadas foram dependentes de suas estruturas químicas, e pequenas modificações nestas podem levar a alterações significativas na magnitude de seus efeitos biológicos. Além disso, tanto a lipofilicidade das substâncias quanto a sua capacidade antioxidante parecem ser relevantes para a modulação eficiente do metabolismo oxidativo dos neutrófilos e da conseqüente lesão tecidual. / Formation and clearance of circulating antigen-antibody complexes or immune complexes (ICs) take part in the humoral immune defense mechanisms. In some diseases, as systemic lupus erythematosus, rheumatoid arthritis and auto-immune vasculitis, an imbalance of this process occurs, leading to the ICs deposition within tissues and triggering an inflammatory reaction. The last one involves the recruitment and activation of neutrophils, which have an important role in the pathogenesis of such diseases. Neutrophil activation by ICs, via receptors for the Fc portion of IgG (FcgR) and complement receptors (CR), triggers a sort of effector functions, such phagocytosis, degranulation and the oxidative metabolism, which produces reactive oxygen species (ROS). These functions are involved in the ICs digestion, microbial killing and the inflammatory process regulation. However, the activated neutrophils release large amounts of enzymes and ROS to the extracellular milieu, contributing to the tissue damage and amplification of the inflammatory process in the IC-mediated diseases. In this work, we evaluated the modulatory effect of twenty 3-phenylcoumarin derivatives in the neutrophil functions stimulated by ICs of ovalbumin (OVA) and IgG anti-OVA. In addition, the mechanisms of action of these compounds were investigated, and the structure-activity relationship was analyzed. The IC-activated neutrophil oxidative metabolism was measured by lucigeninor luminol-dependent chemiluminescence assay (CLlucPMN and CLlumPMN, respectively).It was observed that the 3-phenylcoumarins bearing a 3,4-methylenodioxy and the 6,7-orto-dihydroxy (C13) or the 6,7-orto-diacetoxy (C13a) group, as well as the 6,7,3,4-tetraacetoxylated 3-phenylcoumarin (C24a), inhibited CLlucPMN and CLlumPMN more than quercetin (QUER). Regarding the other evaluated compounds, whose inhibitory effects were similar to or lower than QUER, the structural features related to the CLlucPMN inhibition were different from those related to the CLlumPMN inhibition. Moreover, the studied 3-phenylcoumarins and QUER had no toxic effects on neutrophils, as evaluated by lactate dehydrogenase release and Trypan Blue exclusion, under the assessed conditions. With respect to the three 3-phenylcoumarins that had the highest inhibitory effects on the neutrophil oxidative metabolism (C13, C13a and C24a), the increase of the cell pre-treatment period showed a tendency to decrease the inhibitory ability of compound C24a, but did not influence the biological activity of compounds C13 and C13a. These three compounds did not interfere in the neutrophil phagocytic ability, as evaluated by transmission electron microscopy. The antioxidant activity against the 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl free radical and the inhibitory effect in the chemiluminescence generated by the horseradish peroxidase-H2O2-luminol reaction (CLHRP) were evaluated for all 3-phenylcoumarins. It was found that QUER and those 3-phenylcoumarins bearing the orto-dihydroxy group (C13, C23, C24) had antioxidant activity and inhibited the CLHRP. However, their acetoxylated analogues (C13a, C23a, C24a) and the other evaluated compounds were significantly less active on these cell-free experimental models. Taken together, the results of the present work suggest that the biological activities of the 3-phenylcounarins here investigated were dependent on their chemical structures, and small changes on the molecule can lead to significant changes on the magnitude of their biological effects. Moreover, both lipophilicity and antioxidant capacity of these compounds seem to be relevant to an efficient modulation of the neutrophil functions and the consequent tissue damage.