Submitted by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2015-04-22T19:57:28Z No. of bitstreams: 2 Tese - Mauro Roberto Biá da Silva - 2014.pdf: 1034991 bytes, checksum: 33b9d1a7520d55b9ed3fc8220c32caae (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2015-04-22T19:58:56Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Mauro Roberto Biá da Silva - 2014.pdf: 1034991 bytes, checksum: 33b9d1a7520d55b9ed3fc8220c32caae (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-22T19:58:56Z (GMT). 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The LV diagnosis is dificult, mainly for patients co infected with HIV, because LV paients present atipical clinic forms and the sorology is not trustfull Objectives: The aim of this thesis is to evaluate the accuracy of Immunochromatographic rK39 tests in the diagnosis of Visceral Leishmaniasis in serum and saliva of HIV-co-infected patients Methods: VL suspected patients were treated at the Institute of Tropical Diseases Natan Portela - IDTNP, Teresina, Piauí, Brazil, from March 2011 to October 2012. In addition to the clinical examination, it was performed the IC rK39 test in saliva and blood and also the bone marrow aspiration for parasitological and the PCR-RFLP tests. As routine in the institution, VL suggestive patients were also investigated for HIV. Bone marrow samples were collected for Leishmania research in smear, culture and PCR. For the research of Leishmania spp. in bone marrow aspirate, the Panoptic stain was used (RANYLAB Pharmaceutical Chemistry). The analyses of the stained slides were done in an optical microscope with immersion objective, magnification of 1000x. To perform the bone marrow aspirate culture, the aspirate was cultivated in 3 mL of NNN medium (McNeal, Novy & Nicolle) and 500 μL Schneider medium at 26°C. The search for promastigotes. was performed every seven days in blade - cover slip in an optical microscope. 5 mL were collected from peripheral blood in Vaccutainer® tubes without any anticoagulant in order to obtain the serum. Sera were then aliquoted in cryoassay tubes and kept in a freezer at -70°C. Saliva was collected in 50 mL polypropylene tubes and, in order to increase the amount of saliva, the patients received a piece of Parafilm® for chewing. Saliva was aliquoted in cryoessay tubes and kept in a freezer at -70°C. Results: VL patients who possessed the IC rK39 test with positive serum showed 58.6% of positivity (n = 17) in saliva (SalPos), while all of the healthy donors (CT) (n = 20) were negative in serum and saliva. The amount of total and specific IgG in the serum of patients with VL was significantly higher than that in the CT group. The specific IgG of the SalPos group was greater than in VL patients with negative saliva (SalNeg), but it was not statistically xv significant. The amount of total or specific IgA was similar in all groups. The amount of specific IgG for Leishmania found in saliva of both the SalPos and SalNeg groups was higher than in the control group, but the group with SalPos saliva presented more specific IgG to Leishmania than the SalNeg group. Among the 86 VL patients, 33 had positive serology for HIV and five tested negative serology, however, they were carriers of the virus and were being treated, totalizing 37 infected individuals. The sensitivity of VL in PCR was of 100%, since this test was considered gold standard in this study. The other tests had sensitivity of 57.14% (n = 49) (bone marrow aspiration culture), 48.71% (n = 78) (marrow aspirate smear analysis), 55.81% (n = 86) and 56 25% (n = 85) for the IC rK39 tests in Orangelife or Kalazar Detect serum, respectively. In the case of using the parasitological test as the gold standard, the sensitivity of serological tests was greater than 82%. It is not clear if HIV infection is able to interfere in the serological tests yet. Conclusions: The rK39 IC tests, with the utilization of serum, have a low sensitivity when applied to patients co-infected with HIV and VL, and the use of saliva for VL diagnosis is limited. / Introdução: A Leishmaniose Visceral (LV) é uma antropozoonose causada por protozoários do gênero Leishmania, especialmente Leishmania (Leishmania) infantum ou Leishmania (Leishmania) donovani. Está presente em regiões tropicais e subtropicais e é considerada uma doença negligenciada. O diagnóstico preciso da LV é geralmente difícil, principalmente em pacientes coinfectados pelo HIV, porque a LV apresenta formas clínicas atípicas e porque o diagnóstico sorológico se torna pouco confiável. Objetivo: Avaliar a acurácia de Testes Imunocromatográficos rK39 no diagnóstico da LV em soro e saliva de pacientes coinfectados com HIV. Métodos: Pacientes suspeitos de LV foram atendidos no Instituto de Doenças Tropicais Natan Portela - IDTNP, Teresina, Piauí, Brasil, no período de março de 2011 a outubro de 2012. Além do exame clínico, foi realizado o teste IC rK39 em saliva e sangue, aspiração de medula óssea para exames parasitológicos e PCR- RFLP. Como rotina na instituição, pacientes sugestivos de LV também foram investigados para HIV. Foram coletadas amostras de medula óssea para pesquisa de Leishmania em esfregaço, cultura e PCR. Para pesquisa de Leishmania spp. em aspirado de medula óssea, utilizou-se a coloração pelo Panótico (RANYLAB Química Farmacêutica). A leitura das lâminas coradas foi realizada em microscópio óptico com objetiva de imersão, aumento de 1000x. Para realização da cultura de aspirado de medula óssea, o aspirado foi cultivado em 3 mL de meio NNN (McNeal, Novy & Nicolle) e 500 μL de meio Schneider a 26ºC. A pesquisa de formas promastigotas de Leishmania spp. foi realizada a cada sete dias em lâmina – lamínula em microscópio óptico. Foram coletados 5 mL de sangue periférico em tubos Vaccutainer® sem anticoagulante para obtenção do soro. Em seguida, os soros foram aliquotados em tubos de crioensaio e mantidos em freezer a -70ºC. A saliva foi recolhida em tubos de polipropileno de 50 mL e para aumentar a quantidade de saliva, os pacientes receberam um pedaço de Parafilm® para mastigar. A saliva foi aliquotada em tubos de crioensaio e mantidas em freezer a -70ºC. Resultados: Pacientes com LV que possuiam o teste IC rK39 positivo no soro, apresentaram uma positividade de 58,6% (n = 17) na saliva (SalPos), enquanto todos os doadores saudáveis (CT) (n = 20) foram negativos no soro e na saliva. A quantidade de IgG total e específica no soro do paciente com LV foi significativamente mais elevada do que no grupo CT. A IgG xiii específica do grupo SalPos foi maior do que no grupo de pacientes com LV com saliva negativa (SalNeg), mas não foi estatisticamente significativa. A quantidade de IgA total ou específica foi semelhante em todos os grupos. A quantidade de IgG específica para Leishmania observada na saliva de ambos os grupos SalPos e SalNeg foi maior do que no grupo controle, mas o grupo com saliva SalPos apresentou mais IgG específico para Leishmania do que o grupo SalNeg. Dos 86 pacientes com LV, 33 possuíam sorologia positiva para HIV, cinco apresentaram sorologia negativa, porém, eram portadores do vírus e estavam em tratamento, totalizando 37 indivíduos infectados. A sensibilidade para LV na PCR foi de 100%, já que este foi o teste considerado ouro neste estudo. Os demais testes tiveram sensibilidade de 57,14% (n= 49) (cultura de aspirado medular), 48,71% (n = 78) (análise de esfregaço de aspirado medular), 55,81% (n = 86) e 56,25% (n = 85) para os testes IC rK39 no soro Orangelife ou Kalazar Detect respectivamente. No caso do uso do teste parasitológico como padrão ouro, a sensibilidade dos testes sorológicos foi superior a 82%. Ainda não está bem esclarecido se a infecção pelo HIV é capaz de interferir nos testes sorológicos. Conclusões: Os testes IC rK39, com utilização de soro, tem uma baixa sensibilidade quando aplicados a pacientes coinfectados com LV-HIV, e o uso da saliva para o diagnóstico da LV é limitado.

Na tentativa de reduzir o número de ocorrência de acidentes de trânsito, o Brasil adotou leis para restringir o consumo de álcool por motoristas e para garantir que as mesmas sejam cumpridas, o contingente policial conta com teste de etilômetro. Ao realizar o teste, se o resultado for positivo para o uso de etanol, o motorista pode ser encaminhado para uma unidade de saúde para que a coleta de sangue seja realizada, para confirmar a presença de etanol ou de outras drogas caso necessário. Porém, pode haver um longo tempo entre a abordagem do motorista e a realização da coleta de sangue, fazendo com que a concentração de etanol no organismo do motorista se altere, além disso, a coleta de sangue é um método invasivo e é necessária a presença de um profissional especializado para que seja realizada. O presente estudo propõe a utilização da saliva como matriz biológica alternativa para dosagem de etanol em motoristas, uma vez que essa matriz permite a dosagem de etanol e de outras drogas, além de permitir que a análise seja repetida, diferentemente do teste do etilômetro, desde que a cadeia de custódia for preservada. Além disso, a coleta dessa amostra não é invasiva, podendo ser realizada no local da abordagem e sob supervisão (coleta vigiada), sem necessitar de profissional especializado. Para verificar se a variação de etanol ao longo do tempo na saliva é semelhante à do ar exalado e da urina, matrizes já utilizadas na dosagem de etanol em motoristas, foi realizado um experimento de ingestão controlada de bebidas alcoólicas por voluntários sadios de maneira controlada, coletando-se amostras de saliva, urina e ar exalado nos tempos de 10, 30, 60 e 90 min após a ingestão. Na segunda etapa do estudo, foi verificado um possível interferente no teste de Etilômetro e na análise de saliva, uma vez que o limite de etanol permitido por lei atual é muito baixo, fazendo-nos questionar se o uso de produtos comuns ao dia a dia e que contém álcool em sua composição, como o enxaguatório bucal, seria capaz de gerar um resultado falso positivo para a ingestão de bebidas alcoólicas. No experimento de interferência, foram testados os seguintes enxaguatórios bucais: Anapyon®, Listerine Cool Mint®, Listerine Cuidado Total®, Cepacol®, Oral B®, Oral B complete®, e ar exalado e saliva foram coletados nos tempos de 5, 10, 15 e 20 minutos. O etanol em amostras de saliva e urina foi determinado por cromatografia em fase gasosa acoplada a detector de ionização por chama (GC-FID) e as amostras de ar exalado foram analisadas no Etilômetro Alcotest 7410 da Dräger. / In an attempt to reduce the number of traffic accidents, Brazil has adopted laws to restrict ethanol consumption among drivers, and to guarantee the effectiveness of this law, police officers make use of breathalyzers. When the breathalyzer test is performed, the results can indicate alcohol intake, in this case the driver can be routed to a health unit to collect blood, and then ethanol dosage can be made as well as other drugs if necessary. Therefore, a long time can occur between drivers approach and the blood collection, and the concentration of ethanol in blood can be altered. In addition this sample collection is invasive and needs an specialized personnel to be done. The present study proposes the use of saliva as an alternative biological matrix to ethanol dosage in drivers, once this matrix permits not only the dosage of alcohol but as well as other drugs, and this analysis can be repeated, if the chain of custody has been preserved. Besides, saliva has a non invasive way of collection and can be done under supervision and does require specialized personnel. To verify if the range of ethanol concentration in saliva is the same found in urine and breath, matrixes already used to monitor drivers in traffic, an experiment of alcohol intake in a controlled manner was performed, and urine, saliva and breath were collected in 10, 30, 60 and 90 minutes after alcohol intake. In a second stage of this study, a possible interfering in the breathalyzer test and in saliva analysis was investigated, since the limit if ethanol permitted for drivers in now very low, making us wonder whether the use of products like mouthwashes, that contain ethanol in its composition is capable of generate an false positive result for alcohol intake. It was tested the following mouthwashes: Anapyon, Listerine Cool Mint, Listerine Cuidado Total, Cepacol, Oral B , Oral B complete. Breath and saliva were collected in 5, 10, 15 and 20 minutes after the mouthwashes use. The ethanol in saliva and urine was determined using Gas Chromatography with Flame Ionization Detector (GC-FID), and the ethanol in breath was analyzed using Alcotest 7410 breathalyzer by Dräger.

Made available in DSpace on 2016-08-16T18:18:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TESE DE MONICA VIRGINIA VIEGAS LIMA.pdf: 3470227 bytes, checksum: 3f31c4cece76460417d5f04acc93728f (MD5) Previous issue date: 2012-12-18 / FUNDAÇÃO DE AMPARO À PESQUISA E AO DESENVOLVIMENTO CIENTIFICO E TECNOLÓGICO DO MARANHÃO / Saliva is a useful biological fluid with potential for diagnosis and monitoring of systemic disease because it reflects states of health and disease. Our objective was to evaluate the immunological and biochemical changes in saliva of pediatric patients with cancer, in diabetic patients and to investigate which plant species are most frequently used by diabetics as hypoglycemic. In immunological and biochemical evaluations Cancer patients consisted of 32 children with cancer and 115 children without cancer and the diabetic sample consisted 93 diabetic patients and 49 non diabetic. To assess the ethnopharmacological data 107 diabetics were interviewed using a standard questionnaire and semi-structured interview. The salivary biochemistry was determined by colorimetric assays and The IgA concentration was determined by Enzyme-Linked Immunosorbent Assay - ELISA. DMFT index was employed n dental evaluation. Children with cancer showed an increase in alkaline phosphatase, T4, TSH and glucose and decreased insulin and total IgA. Glucose, urea, calcium, total IgA, IgA anti-mutans IgA anti-insulin and DMFT index was higher in diabetic patients. 16 plant species have been reported for the treatment of diabetes, and pata de vaca , sweet olive, tamarind and insulin were the most used. We conclude the plant species most frequently mentioned have its efficacy as hypoglycemic scientifically attested and saliva can be used to monitor diabetics and cancer patients, which casts new perspectives in the monitoring and treatment of patients with hyperglycemic diseases. / A saliva é um fluido biológico que vem sendo utilizado na avaliação de doenças sistêmicas, pois reflete estados de saúde e doença. Investigamos as principais alterações imunológicas e bioquímicas na saliva em pediátricos com neoplasias, em pacientes diabéticos e ainda as espécies vegetais mais utilizadas pelos diabéticos como hipoglicemiantes. Foram avaliados 2 crianças com neoplasias e 115 crianças sem neoplasia e 93 pacientes diabéticos e 49 não diabéticos. Na avaliação etnofarmacológica foram entrevistados 107 diabéticos quanto ao uso de plantas no tratamento da diabetes e sintomas associados, utilizando-se questionário padrão e entrevista semi-estruturada. A bioquímica salivar foi determinada por método colorimétrico e a produção de anticorpos IgA foi determinada por ensaio imunoenzimático - ELISA. Na avaliação odontológica utilizou-se o índice CPO-D. Crianças com neoplasias apresentaram aumento na concentração de fosfatase alcalina, T4, TSH e glicose e uma diminuição de insulina e IgA total. Glicose, uréia, cálcio, IgA total, IgA anti-mutans, IgA anti-insulina e o índice CPO-D foram maiores em pacientes diabéticos. Foram relatadas 16 espécies vegetais para tratamento do diabetes, sendo que pata de vaca, azeitona doce, insulina e tamarindo foram as mais utilizadas. Concluímos que as espécies vegetais mais frequentemente mencionadas como coadjuvantes no tratamento da diabetes apresentam eficácia cientificamente comprovada como hipoglicemiantes, e ainda que a saliva pode ser utilizados no acompanhamento de diabéticos e crianças com neoplasias e o que lança novas perspectivas no acompanhamento e no tratamento de pacientes com doenças hiperglicemiantes.

Vários métodos de análise para o ensaio do quimioterápico 5-Fluorouracil (5-FU) em fluidos biológicos de humanos e animais, foram previamente relatados. Considerando que a administração do 5-FU altera de alguma maneira a morfologia e função das glândulas salivares, e que a presença do quimioterápico na mucosa oral pode levar a algumas complicações orais, este trabalho teve como objetivo de determinar a presença de 5-FU na saliva de hamsters que receberam o quimioterápico pela técnica de Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE), uma vez que este modelo animal é usado nos estudos com mucosite oral e hipofunção glandular, induzidas por 5-FU. Doze animais foram divididos em 4 grupos: CP e CPI, onde os animais receberam intraperitonealmente pilocarpina (CP) ou pilocarpina + isoproterenol (CPI) e o veículo do quimioterápico, e os grupos QP e QPI, onde os animais receberam, respectivamente, os mesmos secretagogos listados acima e o quimioterápico 5-FU. Após a administração do secretagogo, foi coletada a saliva de todos os animais, por um período de 60 min. Em seguida, a saliva foi congelada a -80 ?C para posterior determinação do quimioterápico por CLAE. Após análise dos cromatogramas, e com base nos resultados obtidos, foi possível identificar a presença do 5-FU nas amostras de saliva de hamsters que receberam o quimioterápico via intraperitoneal pela técnica da CLAE. / Various analytical methods for testing the chemotherapeutic agent 5-fluorouracil (5-FU) in biological fluids of humans and animals have been reported previously. Whereas the administration of 5-FU alter in any way the morphology and function of the salivary glands, and that the presence of chemotherapy in the oral mucosa can lead to some oral complications, this study aimed to determine the presence of 5-FU in chemotherapy treated hamsters saliva by Liquid Chromatography High Performance (HPLC), since this animal model is used in studies of oral mucositis and gland hypofunction induced by 5-FU. Twelve animals were divided into 4 groups: intraperitoneally pilocarpine (CP), pilocarpine + isoproterenol (CPI) and the chemotherapy of the vehicle, and the QP and QPI groups where the animals were, respectively, the same secretagogues listed above and 5-FU chemotherapy. After administration secretagogue, the saliva from all animals was collected for a period of 60 min. Then the saliva was frozen at -80 ºC for subsequent determination of chemotherapy by HPLC. After analysis of chromatograms, and based on the results obtained, it was possible to identify the presence of 5-FU in Hamsters saliva samples that received intraperitoneal chemotherapy via the technique of HPLC.

O objetivo do trabalho foi determinar o efeito do pH de armazenamento (pH 3,5; 7,0 e 10,0) nos parâmetros de crescimento subcrítico (n e ? f0) de duas porcelanas odontológicas com diferentes microestruturas (com e sem leucita). A hipótese testada foi a de que o pH do meio afeta os parâmetros de crescimento subcrítico dos dois materiais. Duas porcelanas feldspáticas foram avaliadas: 1) Ultropaline Dentina (UD), JenDental/Ucrânia; 2) Veneer Material 7 (VM7), Vita/Alemanha. A porcelana UD é composta de matriz vítrea com dispersão de partículas de segunda fase de leucita, enquanto a porcelana VM7 apresenta exclusivamente fase vítrea. Espécimes em forma de disco com características específicas (diâmetro e espessura) foram sinterizados com os dois materiais seguindo o ciclo proposto pelos fabricantes. Os espécimes foram armazenados em diferentes soluções com pH específico (3,5; 7,0 e 10,0) por 10 dias antes de serem testados. Os parâmetros de fadiga foram obtidos pelo método de fadiga dinâmica utilizando o ensaio de resistência à flexão biaxial (“piston on three balls”) com cinco taxas constantes de carregamento (0,01; 0,1; 1; 10 e 100 MPa/s). A tenacidade à fratura e a dureza foram avaliadas pelo método da fratura por indentação (IF). A microestrutura dos materiais foi analisada por meio de microscopia eletrônica de varredura, difração de raios X e análise química por fluorescência de raios X. O efeito do pH no coeficiente de susceptibilidade ao crescimento subcrítico (n) foi diferente para os dois materiais estudados. Os resultados mostraram que, para a porcelana vítrea (VM7), o valor de n não variou significativamente em função do pH. Para a porcelana com leucita (UD), houve uma diminuição do valor de n quando a armazenagem foi feita em pH 3,5. O efeito do pH no parâmetro escalar (? f0) também foi diferente para os dois materiais. Para a porcelana VM7, tanto o pH ácido como o básico resultaram em menores valores de resistência em relação ao pH neutro. Para a porcelana UD, somente a armazenagem em pH básico resultou em queda do valor de ? f0. Os valores de dureza dos dois materiais diminuíram conforme o pH foi aumentado, porém, somente a diferença entre o grupo armazenado a seco e o grupo armazenado em pH 10 foi estatisticamente significativa para as duas porcelanas. Com relação à tenacidade, o pH não influenciou significativamente nas médias obtidas para os dois materiais. Com base nos resultados foi possível concluir que o efeito pH do meio de armazenamento no crescimento subcrítico de porcelanas dontológicas varia de acordo com a microestrutura do material. / The objective of the study was to determine the effect of the pH of the storage medium (pH 3,5; 7,0 e 10,0) on the fatigue parameters (n and ? f0) of two dental porcelains with different microstructures (with and without leucite). The hypothesis tested was that the pH affects the fatigue parameters of both materials. The dental porcelains tested were: 1) Ultropaline Dentin (UD), JenDental/Ucraine; 2) Veneer Material 7 (VM7), Vita/Germany. UD contains leucite and VM7 is only vitreous. Disc specimens were produced with both materials following manufacturers’ firing cycles. The specimens were stored in water solutions with different pHs (3,5; 7,0 e 10,0) for 10 days and after that the fatigue parameters were obtained by means of the dynamic fatigue test. Hardness and fracture toughness were determined by means of the indentation fracture technique. Microstructural analysis of the materials was also carried out. The effect of the pH in the fatigue parameters was different for the two materials tested. The results showed that, for VM7, the n value did not vary as a function of the pH. For porcelain UD, the n value was lower when the specimens where stored in pH 3,5. The parameter ? f0 was also affected by the pH. For both materials, the storage in basic pH resulted in a decrease in the ? f0 value. The hardness of both materials decreased with the increase in the pH of the storage media, and fracture toughness was not affect by the pH. Based on the results, it was possible to conclude that the effect of the pH (of the storage media) on the fatigue parameters of the dental porcelains studied varied according to the porcelain’s microstructure.

Comparou-se a eficácia da baciloscopia in natura e pós concentração (Coloração Ziehl Neelsen) e cultura tradicional e automatizada MA de amostras de escarro ou saliva/muco para a detecção do Complexo M. tuberculosis (MTB) em Centro de Referencia Ambulatorial para Tuberculose na Cidade de São Paulo. A identificação do grupo MTB baseou-se no crescimento em meio com Ácido para nitrobenzóico, e visualização do fator corda. Do total de 374 amostras, 228 eram de pacientes sob diagnóstico inicial e 146 em tratamento. 83 amostras eram saliva/muco. Destas, sete foram positivas à baciloscopia, 03 (3,6%) no material concentrado e uma (1,2%) in natura (p=0.5 McNemar Test). Cinco amostras (6%) positivas na cultura pelo método tradicional e 07 (8,4%) p=0.5 pelo MA. As amostras de escarro eram 74 foram positivas na baciloscopia, sendo 34 (11,7%) in natura e 45 (15,5%) no material concentrado, p=0.001. No método tradicional 56 (19,2%) e 67 (23%) pelo MA p=0.001. Independente da característica da amostra a baciloscopia pós concentração e a cultura pelo MA foram mais sensíveis. / Effectiveness of bacilloscopy were compared in natura and pos-concentrated (Ziehl Neelsen staining), and tradicional and automated culture-AM of sputum or saliva/mucus samples for detection of M. tuberculosis complex (MTB) in Ambulatory Reference Center in the city of São Paulo. Identification of MTB group was based on growth in medium with para nitrobenzoic acid, and cord factor visualization. From the total 374 samples, 228 were from patients under initial diagnostic and 146 in treatment. 83 samples were saliva/mucus. Seven of these were bacilloscopy positive, 03 (3.6%) in concentrated material and one (1.2%) in natura (p=.500ª McNemar Test). Five samples (6%) positive for culture by traditional method and 07 (8.4%) p=0.5 for AM. For sputum 74 were bacilloscopy positive, being 34 (11.7%) in in natura and 45 in concentrated material, p=0.001. In traditional method, 56 (19.2%) and 67 (23%) for AM, p=0.001. Independently of sample characteristics, pos-concentrated bacilloscopy and culture by AM were more effectiveness.

A obesidade e a síndrome metabólica têm aumentado em proporções preocupantes em nível mundial. Além das consequências sistêmicas, a obesidade e suas comorbidades também têm sido relacionadas com a condição bucal. O objetivo deste estudo foi identificar a progressão de lesões cariosas, presença de biofilme dentário, fluxo salivar e presença de saburra lingual em indivíduos eutróficos, sendo avaliados em dois momentos e portadores de síndrome metabólica antes e após a cirurgia bariátrica. A amostra foi constituída por 150 indivíduos, divididos em dois grupos: grupo controle (GC: 75) e grupo obeso (GO: 75), ambos avaliados em T0 e T1, sendo GC 6 meses após a primeira avaliação e GO 6 meses após a cirurgia bariátrica. A avaliação antropométrica dos indivíduos foi realizada por meio do IMC e circunferência da cintura. Os índices ICDAS II e CPOD foram utilizados para avaliar a progressão da cárie dentária. O método de fluorescência verde (QLF- Quantitative Light-induced Fluorescence) avaliou a perda mineral nas superfícies lisas dos dentes e presença de biofilme dentário. O fluxo salivar estimulado foi avaliado em mL/min. O Índice de Saburra Lingual foi utilizado para a avaliação da presença de saburra na língua. Para análise estatística, utilizou-se os testes Qui Quadrado, Exato de Fisher, Mann-Whitney, Kruskal-Wallis e Regressão Logística Múltipla, adotando nível de significância de 5%. Os resultados mostraram que houve diferença significativas entre os grupos, GC apresentou maior número de dentes hígidos (p=0,038) e dentes sem alteração no esmalte (p=0,005) quando comparado ao GO. Ao comparar GC e GO no T1, verificou-se que houve diferença significativa em relação ao CPOD (p<0,0001), dentes restaurados (p<0,0001) e área da lesão (Ws) (p=0,045), sendo as piores condições encontradas encontradas em GO. Observou-se que houve diferença significativa entre a perda mineral e quantidade de biofilme dentário por fluorescência entre os grupos, mas não entre T0 e T1. Diante dos resultados, podese concluir que indivíduos portadores de síndrome metabólica, comparado com os eutróficos, apresentam maior número de lesões cariosas antes e após a cirurgia bariátrica. No presente estudo a cirurgia bariátrica não interferiu na progressão das lesões cariosas, todavia, destaca-se a necessidade de abordagem multiprofissional e contínua, atuando na prevenção de doenças e atenção odontológica. / Obesity and the metabolic syndrome have increased in alarming proportions at world level. Apart from systemic consequences, obesity and its comorbidities have also been related to the oral condition. The aim of this study was to identify the caries lesion progression, presence of dental biofilm, the salivary flow and tongue coating in eutrophic individuals, being evaluated in two moments and individuals with metabolic syndrome before and after undergoing bariatric surgery. The sample consisted of 150 individuals divided into two groups: Control Group (CG: 75) and Obese Group (OG): 75, both evaluated in T0 and T1; CG being evaluated six months after T0, and EG, 6 months after bariatric surgery. Anthropometric assessment of individuals was made by means of BMI and waist circumference measurement. The ICDAS II and DMFT indices were used for evaluating the progression of dental caries. The Quantitative Light-induced Fluorescence (QLF) method, for evaluating mineral loss on the smooth tooth surfaces and the presence for dental biofilm. The stimulated salivary flow was evaluated in mL/min. The Winkel tongue coating index (WTCI) was used to evaluate the presence of tongue coating. For statistical analysis, the Chi- Square, Fishers Exact, Kruskal-Wallis and Multiple Logistic Regression tests were used, adopting a significance level of 5%. The results showed statistical difference between the groups: CG presented a higher; number of healthy teeth (p=0.038) and teeth without changes in enamel (p=0.005) when compared to OG. When comparing CG and EG after the second evaluation (T1), statistically significant difference was verified in relation to DMFT (p<0.0001), restored teeth (p<0.0001) and lesion area (Ws) (p=0.045), being the worst conditions found in OG. It was observed that there was a significant difference between mineral loss and the quantity dental biofilm by fluorescence between groups, but not between T0 and T1. In view of the results, the authors concluded that patients with metabolic syndrome, compared to eutrophic, have a higher number of caries lesions before and after bariatric surgery. In the present study, bariatric surgery did not influence in caries lesion progression, however, highlights the necessity to a continuous multi professional approach to acting in the prevention of diseases and dental care.

Os peptídeos da estaterina (DR9) e da histatina 3 (RR14), que ocorrem naturalmente na película in vivo, amplificam o efeito inibitório do crescimento de cristais de hidroxiapatita, função relacionada à remineralizarão do esmalte e formação de cálculos dentários. A hipótese da duplicação/hibridação de domínios funcionais dos peptídeos DR9 da estaterina e RR14 da histatina 3 foi testada. Para isto, os peptídeos peptidomiméticos (DR9-DR9, DR9-RR14), além deles individualmente e suas proteínas intactas (DR9, RR14, estaterina e histatina 3) foram estudados em sete concentrações diferentes para avaliar o efeito da inibição do crescimento de cristais de hidroxiapatita. Foi utilizado um ensaio colorimétrico de microplaca para quantificar o crescimento de cristais de hidroxiapatita. As experiências foram feitas em triplicata e a concentração inibitória (IC50) foi estabelecida para cada grupo. A IC50 foi calculada para todos os peptídeos e proteínas testados. A histatina 3 e o RR14 não atingiram o valor de IC50. O DR9- RR14 atingiu o valor de IC50 a 3,80 M. Como esperado, DR9 e DR9-DR9 demonstraram um efeito inibitório significativo na atividade de crescimento de cristais, atingindo o valor de IC50 a 2,82 M e 1,07 M, respectivamente. A estaterina atingiu o valor de IC50 a 2,50 M. Na análise estatística, foram aplicados os testes ANOVA e Student-Newman-Keuls para comparações por pares, para comparar os valores entre os grupos. O DR9-DR9 amplificou o efeito inibitório do crescimento de cristais de hidroxiapatita quando comparado com DR9 único (p <0,05), demonstrando que a multiplicação do domínio funcional é uma forte tendência evolutiva da proteína. De forma interessante, o peptídeo híbrido DR9-RR14 demonstrou um efeito inibitório intermediário quando comparado com outros dois grupos: DR9 único e DR9-DR9. Este estudo utilizou a abordagem peptidomimética para investigar uma via potencial de evolução da proteína relacionada com a duplicação/hibridação dos constituintes peptídicos naturais da película adquirida de esmalte. O conhecimento obtido por meio dos resultados deste trabalho pode fornecer uma base para o desenvolvimento de peptídeos sintéticos para uso terapêutico, tanto contra cárie dentária, como para a doença periodontal. / The statherin and histatin 3 peptides (DR9 and RR14 respectively), which occur naturally in the film in vivo, amplify the inhibitory effect for the growth of hydroxyapatite crystals, a function related to remineralization of the enamel and formation of dental calculi. The hypothesis of duplication/hybridization of functional domains of the DR9 peptides of the statherin and RR14 of histatin 3 was tested. For this, the peptidomimetic peptides (DR9-DR9, DR9-RR14), in addition to them individually and their intact proteins (DR9, RR14, statherin and histatin 3) were studied at seven different concentrations to evaluate the effect of growth inhibition of hydroxyapatite crystals. A colorimetric assay of microplate was used to quantify the growth of hydroxyapatite crystals. The experiments were done in triplicate and the inhibitory concentration (IC50) was established for each group. The IC50 was calculated for all peptides and proteins tested. Histatin 3 and RR14 did not reach the IC50 value. DR9-RR14 reached the IC50 value at 3.80 M. As expected, DR9 and DR9-DR9 demonstrated a significant inhibitory effect on crystal growth activity, reaching the IC50 value at 2.82 M and 1.07 M, respectively. Statherin reached the IC50 value at 2.50 M. ANOVA and Student-Newman-Keuls tests for paired comparisons were applied to compare the values between the groups. DR9-DR9 amplified the inhibitory effect of hydroxyapatite crystal growth when compared to single DR9 (p <0.05), demonstrating that the multiplication of the functional domain is a strong protein evolution pathway. Interestingly, the hybrid peptide DR9-RR14 demonstrated an intermediate inhibitory effect when compared to other two groups: single DR9 and DR9-DR9. This study utilized the peptidomimetic approach to investigate a potential pathway of protein evolution related to duplication/hybridization of the natural peptidic constituents of the acquired enamel film. The knowledge obtained through the results of this work can provide a basis for the development of synthetic peptides for therapeutic use, both against dental caries and for periodontal disease.

INTRODUÇÃO: A maioria dos pacientes com CECP é diagnosticada em estágios avançados da doença, apresentando taxas de sobrevida insatisfatórias. Em carcinomas localmente avançados e irressecáveis, o tratamento padrão na rotina do ICESP é a QRT a base de cisplatina. Entretanto, cerca de dois terços desses pacientes apresentam recidiva local, à distância ou óbito em cinco anos. Entender os mecanismos de resistência a QRT e descobrir marcadores que possam indicar resposta ao tratamento continuam sendo um desafio. Os microRNAs possuem papel chave nos mecanismos de resistência a QRT, sendo possível quantificá-los em saliva. Neste estudo avaliamos a expressão de microRNAs na saliva de pacientes com CEC de cavidade oral e orofaringe e se esses microRNAs estão contidos dentro de microvesículas. MÉTODOS: Por meio de revisão da literatura e análises in sílico, selecionamos 8 microRNAs para serem avaliados: miR-15a-5p, 21-5p, 23a-3p, 125b-5p, 142-3p, 200b-3p, 296-5p e 503-5p. A expressão dos microRNAs foi determinada por PCR quantitativo na saliva livre de células de 70 pacientes portadores de CEC de cavidade oral e orofaringe localmente avançado e irressecável, em diferentes estágios da progressão da doença: antes de iniciar tratamento (G1), com falha do tratamento (G2) e livre da doença há 2 anos (G3) e em 28 voluntários sadios (G0). Microvesículas foram isolados por ultracentrifugação ou exoQuick, analisados por Microscopia Eletrônica de Transmissão (MET), Nanosight e para determinação da expressão do miR-21-5p. RESULTADOS: Os miRs-296-5p e 503-5p foram indetectáveis na maioria das amostras testadas. Quando comparamos os grupos em diferentes situações clínicas, encontramos diferença significativa na expressão do miR-21-5p (p=0.005), miR-23a-3p (p=0,026), miR-125-5p (p=0,013), miR-142-3p (p=0,033) e miR-200b-3p (p=0,031). Observou-se aumento na expressão dos miRs 21-5p (p=0,001), 23a-3p (p=0,004), 125b-5p (p=0,026) e 142-3p (p=0,005) na saliva dos pacientes em G1 em relação ao voluntários sadios (G0). O grupo G3 também apresentou maior expressão do mir-21-5p (p=0,018), 125b-5p (p=0,002) e 200b-3p (p=0,014) comparado ao G0, assim como o grupo G2 teve maior expressão do mir-15a-5p (p=0,023) e 23a-3p (p=0,017) comparado ao grupo G0. O grupo G2 apresentou menor expressão do miR-200b-3p (p= 0,019) e maior expressão do miR-15a-5p (p=0,057) em relação ao grupo G3. Além disso, os pacientes tabagistas e/ou etilistas apresentaram maior expressão relativa do miR-21-5p (p=0,001 e p=0,046, respectivamente) e os etilistas também tiveram maior expressão do miR-200b-3p (p=0,013). Com relação à resposta inicial do paciente ao tratamento avaliada pelo médico bem como, com a resposta a longo prazo (recidiva, status global e prognóstico), a expressão dos miR-15a-5p, miR-125b-5p, miR-23a-3p e miR-142-3p apresentaram associação com sobrevida livre de progressão e sobrevida global, porém não atingiram significância estatística. Microvesículas foram detectadas na saliva tanto na MET como na contagem no nanosight. A expressão do miR-21-5p foi predominantemente detectada dentro de microveículas em relação ao sobrenadante livre de vesículas. CONCLUSÕES: Alguns dos microRNAs analisados foram diferencialmente expressos entre os diferentes grupos estudados, a expressão do miR-21 foi associada ao tabagismo e etilismo e a do miR-200b com etilismo e a expressão de alguns microRNAs podem estar associadas à resposta ao tratamento e ao prognóstico dos pacientes / BACKGROUND: Most patients with HNSCC are diagnosed in advanced stages of the disease, with unsatisfactory survival rates. In locally advanced and unresectable carcinoma, the standard treatment in ICESP is cisplatin based QRT. However, about two-thirds of these patients have local recurrence, distance or death within five years. Understanding the QRT resistance mechanisms and discovery of markers that may indicate benefit of treatment is a great challenge. MicroRNAs have key role in the mechanisms of QRT resistance and are detectable in saliva. In the present study we analyzed the expression of microRNAs in the saliva from oral cavity/oropharynx squamous cell carcinoma (OSCC) patients and whether these microRNAs are contained within exosomes. METHODS: Through a review of studies in the literature and by in silico analysis, we choose 8 microRNAs to be evaluated: miR-15a-5p, 21-5p, 23a-3p, 125b-5p, 142-3p, 200b-3p, 296-5p and 503-5p. The expression of microRNAs was determined by quantitative PCR in the cell-free saliva from 70 locally advanced and unresectable OSCC patients at different stages of disease progression: treatment naive (G1), after treatment failure (G2) and disease free for at least 2 years (G3) and 28 healthy volunteers (G0). Exosomes were isolated by ultracentrifugation or exoQuick, analyzed by transmission electron microscopy (MET), Nanosight quantification and by determination of the miR-21-5p expression. RESULTS: The miRs-296-5p and 503-5p were undetectable in almost all saliva samples. Significant differences was observed in the expression of miR-21-5p (p=0.005), miR-23a-3p (p=0.026), miR-125-5p (p=0.013) miR-142-3p (p=0.033) and miR-200b-3p (p=0.031) among the groups analyzed. The expression of miRs 21-5p (p=0.001), 23a-3p (p=0.004), 125b-5p (p=0.026) and 142-3p (p=0.005) were high in saliva of G1 patients as compared to heath volunteers (G0). The G3 group also showed higher expression of mir-21-5p (p=0.018), 125b-5p (p=0.002) and 200b-3p (p=0.014) and G2 presented higher expression of miR-15a-5p (p=0.023) and 23a-3p (p=0.017) as both compared to the G0. The group G2 presented lower expression of the miR-200b-3p (p=0.019) and higher expression of the miR-15a-5p (p=0.057) as compared to the G3 group. In addition, saliva from the smokers and/or drinkers patients showed high relative expression of the miR-21-5p (p=0.001 e p=0.046; respectively) compared to former drinker/smokers and drinkers also showed high expression of the miR-200b-3p (p=0.013). In relation to the initial response to treatment assessed by the physician, as well the long-term response (relapse, global status and prognosis), the expression of the miR-15a-5p, miR-125b-5p, miR-23a-3p e miR-142-3p showed association with progression-free survival and overall survival, however did not reach statistical significance. Microvesicles were detected in saliva by both MET as the count in nanosight. The expression of the miR-21-5p was predominantly detected in microvesicles in relation to the supernatant. CONCLUSIONS: Some of the microRNAs analyzed were differentially expressed between the different groups, the expression of the miR-21 was associated with smoking and drinking habits and of the miR-200b with drinking habits and the expression of some microRNAs may be associated with the treatment response and prognosis of the patients

Orientadores: Carlos Emílio Levy, José Dirceu Ribeiro / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-23T21:33:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Goncalves_AlineCristina_M.pdf: 2485320 bytes, checksum: 5804a728c4482b025babf1bea314fbb3 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: Introdução: Fibrose cística (FC) é uma doença genética autossômica recessiva mais comum entre caucasianos. Caracterizam-se pelo defeito no transporte iônico através da membrana celular nas células epiteliais das vias aéreas, pâncreas, glândulas salivares, sudoríparas, intestino e aparelho reprodutor. As secreções mucosas ficam espessas e viscosas, causando obstrução ao nível de ductos e canalículos glandulares. Objetivo: Verificar os parâmetros bioquímicos da saliva, a saúde gengival e dental de pacientes com FC e analisar sua relação com a gravidade da doença e medicações. Casuística e método: Estudo prospectivo de pacientes atendidos no ambulatório de FC do HC Unicamp e indivíduos saudáveis. Destes pacientes foram comparados os parâmetros bioquímicos da saliva com os de indivíduos saudáveis, pela técnica de eletrodo íon seletiva, aparelho de gasometria ABL835®. Foi realizado um estudo descritivo de alguns indicadores da saúde bucal, microbiota salivar e do escarro de pacientes com FC e analisados com a gravidade da doença pelo escore de Shwachman. Resultados: Os íons cloro e sódio na saliva foram estatisticamente maiores, nos pacientes com fibrose cística que nos controles. Com aplicação da curva ROC determinamos, respectivamente para o sódio e cloro Cut-off de 13,5 mmol/L e 20 mmol/L; Sensibilidade:73,4% e 68,1% e Especificidade:70,6% e 72,9%. Com relação ao índice gengival (IG), observamos uma relação direta com o índice de placa (IP), contudo, não houve correlação entre o índice de placa ou índice gengival com o escore de Shwachman, uso crônico de antimicrobianos e de dornase alfa. Conclusões: Observou-se baixa prevalência de cárie nas crianças com FC e quantidade significativa de defeitos de esmalte, acúmulo de cálculo dental ou tártaro, que não há correlação entre IP e IG e escore de Shwachman, e entre IP e IG e uso de Dornase Alfa e uso crônico de antimicrobianos. Não houve correlação entre as concentrações de Cl- e Na+ na saliva com o escore clínico de Shwachman. No grupo FC os níveis de sódio, cloro, potássio e o pH encontraram-se aumentados e o volume de saliva foi menor que o observado no grupo controle. Novos estudos serão necessários para esclarecer a real utilidade da avaliação dos parâmetros bioquímicos na saliva para diagnóstico da FC. Na avaliação da microbiota da saliva com o material do trato respiratório, a saliva não apresenta boa relação com a presença de patógenos pulmonares crônicos e não deve ser utilizada para este fim / Abstract: Background: Cystic fibrosis (CF) is an autosomal recessive genetic disease most common among Caucasians. Characterized by a defect in ion transport across the cell membrane in airway epithelial cells, pancreas, salivary glands, sweat glands, intestine, and reproductive tract. Mucous secretions become thick and viscous, causing obstruction at the level of ducts and glandular tubules. Objective: To investigate the biochemical parameters of saliva, gingival health and dental patients with CF and analyze its relationship with disease severity and medications. Patients and methods: Prospective study of CF patients in attended of Hospital de Clínicas da Unicamp, and healthy subjects. These patients were compared biochemical parameters of saliva with healthy subjects, the technique of ionselective electrode, Radiometer blood gas analyzer ABL835®. We conducted a descriptive study of some indicators of oral health, salivary microbiota and sputum of CF patients and analyzed with the severity of the disease by the Shwachman score. Results: The chloride and sodium ions in saliva were significantly higher in patients with cystic fibrosis than in controls. With application of the ROC curve determined respectively for sodium and chlorine Cut-off 13.5 mmol/L and 20 mmol/L; Sensitivity 73.4% and 68.1% and Specificity 70.6% and 72 9%. With respect to gingival index, we observed a direct relationship with the index plaque, however, there was no correlation between plaque index and gingival index with Shwachman, chronic use of antibiotics and DNase. Conclusions: We found a low prevalence of caries in children with CF and significant amount of enamel defects, accumulation of dental calculus, no correlation between plaque index (PI) and gingival inflammation index (GI) and score Shwachman, and between PI and GI and use of dornase alpha and chronic use of antimicrobials. There was no correlation between the concentrations of Cl- and Na+ in saliva with Shwachman clinical score. In the CF group levels of sodium, chloride, potassium and pH were found increased and the volume of saliva was lower than that observed in the control group. Further studies are needed to clarify the usefulness of the assessment of biochemical parameters in saliva for diagnosis of CF. In assessing the salivary microflora with the material of the respiratory tract, saliva does not show good correlation with the presence of chronic lung pathogens and should not be used for this purpose / Mestrado / Saude da Criança e do Adolescente / Mestra em Ciências