Orientador: Eliana Maria Zanotti-Magalhaes / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-09T03:44:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Guerino_LauraRocha_M.pdf: 645841 bytes, checksum: c75feb38c5a946cf3347791584c0e3e8 (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: Moluscos terrestres de várias espécies têm sido relatados como hospedeiros naturais do Angiostrongylus costaricensis. Experimentalmente, Biomphalaria glabrata pode ser utilizada como hospedeira intermediária deste nematódeo, responsável pela angiostrongilíase abdominal. Os moluscos se infectam pela ingestão ou penetração ativa das larvas L1 de A. costaricensis. O objetivo deste trabalho foi verificar a capacidade de atração exercida por B. glabrata infectada com A. costaricensis sobre miracídios de Schistosoma mansoni da linhagem BH e verificar a suscetibilidade de B. glabrata submetida à infecção concomitante com A. costaricensis e S. mansoni. Para o estudo da atração miraxonal utilizamos B. glabrata infectada com 120 larvas L1 de A. costaricensis e após 20 dias de infecção os moluscos foram utilizados nos experimentos. Nesses experimentos foi utilizado um artefato de vidro composto por duas câmaras unidas por um canal e preenchido com água declorada. Os moluscos ou sua água de condicionamento (SCW) foram colocados aleatoriamente em uma das câmaras e dez miracídios foram colocados no centro do canal e seu comportamento foi observado por 15 minutos. De acordo com os resultados obtidos, pudemos observar que B. glabrata infectada ou não com A. costaricensis ou sua SCW atraíram miracídios de S. mansoni. Verificamos ainda, haver maior atração miraxonal frente à SCW de B. glabrata infectada com A. costaricensis (89%) do que o próprio molusco infectado com A. costaricensis (71%). No estudo da suscetibilidade exemplares de B. glabrata foram expostos a 10 miracídios de S. mansoni BH e a 120 larvas L1 de A. costaricensis. Após 30 dias de infecção os moluscos foram examinados para a verificação de eliminação de cercárias. Após 60 dias de infecção os moluscos sobreviventes tiveram seu corpo digerido por pepsina e ácido clorídrico para a recuperação de larvas L3 de A. costaricensis. A infecção prévia de B. glabrata com A. costaricensis (com intervalo de 48 horas), facilitou a infecção pelo S. mansoni. Foi constatada maior taxa de infecção por S. mansoni (96,7%), maior número de cercárias liberadas (4955 cercárias/molusco) e baixa mortalidade dos moluscos (20%). A exposição prévia de B. glabrata ao A. costaricensis e posteriormente ao S mansoni, também facilitou o desenvolvimento do A. costaricensis, uma vez que na nona semana de infecção foi recuperada maior quantidade de larvas L3 (12 larvas/molusco), se comparado com moluscos expostos somente ao A. costaricensis (8 larvas/molusco). Entretanto a pré-infecção de B. glabrata com S. mansoni (com intervalo de 24 horas) e posteriormente com A. costaricensis mostrou-se muito prejudicial à B. glabrata provocando grande mortalidade dos moluscos (83%). A maior mortalidade dos moluscos provocou menor taxa de infecção pelo S. mansoni (63,3%), menor recuperação de larvas L3 de A. costaricensis (10 larvas/molusco) e menor número de cercárias liberadas (2722 cercárias/molusco) / Abstract: Several species of land mollusks are natural hosts of the Angiostrongylus costaricensis. Experimentally, Biomphalaria glabrata can be used as an intermediate host for this nematode, responsible for the abdominal angiostrongyliasis. The mollusks are infected through the ingestion or activate penetration by the first-stage larvae (L1) of A. costaricensis. The objective of this work was to verify the ability of B. glabrata, infected with A. costaricensis, to attract miracidia of the BH strain of Schistosoma mansoni and to verify the susceptibility of B. glabrata infected concomitantly with A. costaricensis and S. mansoni. For the study of the miraxonal attraction we used B. glabrata infected with 120 first-stage larvae of A. costaricensis and the mollusks were used in the experiments after twenty days of infection. In these experiments we used a glass apparatus consisting of two circular chambers connected by a channel and filled with chlorine free water. Aleatorily, the snails or their conditioning water (SCW) were placed in one chamber and ten miracidia were placed in the center of the channel and their behavior was observed for 15 minutes. According to the results obtained, we could observe that B. glabrata infected or not infected with A. costaricensis and their SCW attracted S. mansoni miracidia. We also verified, a larger miraxonal attraction to the SCW of B. glabrata infected with A. costaricensis (89%) than to the actual mollusk infected with A. costaricensis (71%). In the study of the susceptibility samples of B. glabrata were exposed to 10 miracidia of the BH strain of S. mansoni and to 120 first-stage larvae of A. costaricensis. After thirty days of infection the mollusks were examined for the cercariae elimination. After sixty days of infection the surviving mollusks had their bodies digested by pepsin and hydrochloric acid for the recovery of third-stage larvae of A. costaricensis. The prior infection of B. glabrata with A. costaricensis (with an interval of 48 hours), facilitated the infection with S. mansoni. A larger infection rate to S. mansoni was verified (96.7%), a larger number of liberated cercariae (4955 cercariae/mollusk) and a lower mortality of the mollusks (20%). The prior infection of B. glabrata with A. costaricensis and posteriorly to S. mansoni, also facilitated the development of the A. costaricensis, because in the ninth week of infection a larger amount of third-stage larva was recovered (12 larvae/mollusk), if compared with mollusks exposed only to the A. costaricensis (8 larvae/mollusk). However the prior infection of B. glabrata with S. mansoni (with an interval of 24 hours) and posteriorly with A. costaricensis it was shown to be very harmful to B. Glabrata causing a great mortality of the mollusks (83%). The larger mortality of the mollusks caused a smaller infection rate for the S. mansoni (63.3%), a smaller recovery of thirdstage larvae of A. costaricensis (10 larvae/mollusk) and a smaller number of liberated cercariae (2722 cercariae/mollusk) / Mestrado / Parasitologia / Mestre em Parasitologia

A urbanização e a ocupação de espaços de uma forma desordenada podem contribuir para mudanças importantes no ambiente, favorecendo a poluição e o uso de recursos naturais e contribuindo para a proliferação de algumas doenças parasitárias, em especial doenças transmitidas por água e vetores. A esquistossomose é uma dessas doenças, causada por um parasito trematódeo, Schistosoma mansoni, que requer um caramujo de água doce para servir como hospedeiro intermediário. Esta é uma doença de larga distribuição e representa um importante problema de saúde pública no Brasil. Este estudo foi realizado em Pindamonhangaba, cidade situada no Vale do Paraíba, onde os primeiros casos de esquistossomose foram notificados em 1955; com grandes campos de arroz e diferentes tipos de atividades agrícolas, fazendo uso de riachos e canais de irrigação, a região apresentava alguns aspectos ambientais que favoreciam a proliferação de caramujos, que costumavam lançar no ambiente aquático grande número de cercárias, tendo em vista as precárias condições sanitárias da população e a contaminação ambiental. O objetivo do presente estudo foi verificar a ocorrência e a distribuição dos casos de esquistossomose nas diferentes localidades da cidade, relacionando os dados colhidos nos últimos 15 anos (1992 a 2006) com as transformações ambientais observadas. Um total de 275 casos foram notificados no período estudado, e as localidades com maior número de casos foram Colméia e Mombaça, respectivamente com 144 e 29 casos. Os índices de prevalência, em 100.000 habitantes, variaram de 57,24 a 3,58, respectivamente em 1992 e 2005. Uma baixa prevalência também foi observada no inquérito soro-epidemiológico realizado com crianças de 2 a 4 série do ensino fundamental, nas escolas situadas em localidades que historicamente representavam áreas de risco para a doença; do total de 544 amostras de sangue submetidas ao teste sorológico para detecção de anticorpos anti-Schistosoma, apenas uma foi reagente. A redução do número de casos de esquistossomose pode estar relacionada às mudanças nos hábitos da população e aos processos de urbanização, com a substituição de atividades agrícolas para as relacionadas com o comércio e a indústria; foi observada a mecanização dos arrozais e substituição do cultivo por áreas de pastagens. Melhorias nas condições de saneamento básico, associada ao aumento do índice escolar também contribuíram para o controle da esquistossomose. / The urbanization and the occupation of spaces in a disordered way can contribute for important changes in the environment, favoring the pollution and the use of natural resources, and contributing for the proliferation of some parasitic diseases, in special waterborne and vector-borne diseases. Schistosomiasis, one of these diseases, is caused by a trematode parasite, Schistosoma mansoni, which requires a freshwater snail to serve as intermediate host. This is an illness of large distribution and represents an important problem of public health in Brazil. This study was carried out in Pindamonhangaba, city located in the Valley of the Paraíba river, where the first cases of schistosomiasis were reported in 1955; with great irrigated rice fields and different types of agricultural activities, requiring streams and irrigation channels, the region showed some environmental aspects that favored the proliferation of snails, which used to shed high number of cercariae, due to the poor sanitation conditions of the population and contamination of the environment. The objective of the present study was to verify the occurrence and distribution of schistosomiasis cases in the different localities of the city, by relating the data collected in the last 15 years (1992 to 2006) with the observed environmental transformations. A total of 275 cases were notified in the studied period, and the localities with higher number of cases were Colméia and Mombaça, respectively with 144 and 29 cases. The prevalence indices, in 100.000 inhabitants, varied from 57.24 to 3.58, respectively in 1992 and 2005. A low prevalence was also observed in a sero-epidemiological survey conducted with children from 2nd to 4th elementary school levels, living in localities historically considered as areas of risk for the disease; from the total of 544 blood samples submitted to detection of anti-Schistosoma antibodies, only one showed to be positive. The reduction in the number of schistosomiasis cases can be related to the changes in the habits of the population and the urbanization processes, with substitution of the agricultural activities for those related to the business and the industry; it was observed the mechanization of the rice fields and substitution of the farming for pastures areas. Improvements in the basic sanitation conditions, associated to the increasing of the scholar index can also be contributed for the control of the schistosomiasis.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / O envolvimento renal na esquistossomose mansoni à raramente descrito e pode ser caracterizada principalmente por alteraÃÃes glomerulares, podendo permanecer assintomÃtica, daà a importÃncia de biomarcadores que possam detectar precocemente alteraÃÃes da funÃÃo renal. O objetivo foi caracterizar as alteraÃÃes renais em pacientes portadores de esquistossomose mansoni, antes e apÃs tratamento na fase intestinal, procedentes de uma Ãrea de baixa endemicidade no Estado do CearÃ. Trata-se de um estudo transversal, de carÃter avaliativo e de natureza quantitativa e intervencionista, incluindo 85 pacientes com diagnÃstico parasitolÃgico (Kato-Katz) confirmado de esquistossomose mansoni. Os pacientes foram divididos em trÃs grupos: Grupo I (G-I) - grupo controle com 24 indivÃduos nÃo infectados; Grupo II (G-II) - grupo com 30 indivÃduos infectados por S. mansoni e Grupo III (G-III) - grupo com 31 indivÃduos infectados por S. mansoni, tratados e avaliados apÃs o tratamento. A funÃÃo renal foi avaliada atravÃs de marcadores renais tubular e glomerular, incluindo dosagem do pH urinÃrio, estimativa da fraÃÃo de excreÃÃo dos eletrÃlitos (FE), estimativa do ritmo de filtraÃÃo glomerular (eRFG), albumina urinÃria e MCP-1/CCL2 urinÃrio (proteÃna quimiotÃtica de monÃcitos-1). Dados do presente estudo mostram que a maioria dos indivÃduos estavam dentro da faixa etÃria em torno de 23,2  13 anos, sendo 39 (45,88%) homens e 46 (54,11%) mulheres. Quando os marcadores renais tubulares foram analisados verificou-se que nÃo houve diferenÃa entre os grupos. Com relaÃÃo aos marcadores renais glomerulares foi observado que MCP-1 foi o Ãnico que apresentou diferenÃa, sendo maior no G-II (178  97pg/mcg-Cr) e no G-III (175  87pg/mcg-Cr), quando comparado com o G-I (123  48pg/mcg-Cr), p=0,009 e p=0,007, respectivamente. NÃo houve diferenÃa quando os grupos G-II e G-III (p=0,892) foram comparados. Apesar da albumina urinÃria nÃo ter apresentado diferenÃa entre os trÃs grupos, ela correlacionou-se com MCP-1 (r=0,463; p=0,01). Em suma foi observado um aumento significativo dos nÃveis urinÃrios de MCP-1 nos pacientes com esquistossomose mansoni. Como esta proteÃna desempenha um importante papel no recrutamento de monÃcitos para os sÃtios de lesÃes e infecÃÃes, o seu aumento na urina sugere que hà uma inflamaÃÃo renal e isso nÃo se reverteu apÃs o tratamento desta doenÃa. / Renal involvement in schistosomiasis is rarely reported and can be characterized mainly by glomerular and may remain asymptomatic, hence the importance of biomarkers that can detect early changes in renal function. The objective was to characterize renal changes in patients with schistosomiasis mansoni before and after treatment in the intestinal phase, coming from an area of low endemicity in the state of CearÃ. This is a cross-sectional study of character evaluation, quantitative and interventionist, including 85 patients with parasitological (Kato-Katz) confirmed schistosomiasis. Patients were divided into three groups: Group I (GI) - control group of 24 uninfected individuals, Group II (G-II) - a group of 30 individuals infected with S. mansoni and Group III (G-III) - group with 31 individuals infected with S. mansoni, processed and evaluated after treatment. Renal function was assessed by renal tubular and glomerular markers, including measurement of urinary pH, estimation of fractional excretion of electrolytes (FE), estimated glomerular filtration rate (eGFR), urinary albumin and urinary MCP-1/CCL2 ( Monocyte chemoattractant protein-1). Data from this study show that most subjects were within the age range around 23,2 Â13 years, 39 (45,88%) men and 46 (54,11%) women. When the renal tubular markers were analyzed it was found that there was no difference between groups. With respect to renal glomerular markers was observed that MCP-1 was the only one that was different, being higher in G-II (178  97pg/mcg-Cr) and G-III (175  87pg/mcg-Cr) when compared with the GI (123  48pg/mcg-Cr), p = 0,009 and p = 0,007, respectively. There was no difference among the groups G-G-II and III (p = 0,892) were compared. Although the albumin excretion did not provide a difference between the three groups, it was correlated with MCP-1 (r= 0,463, p= 0.01). In short there was a significant increase in urinary levels of MCP-1 in patients with schistosomiasis. As this protein plays an important role in the recruitment of monocytes to sites of injury and infection, its increase in urine suggests that there is an inflammation of the kidneys and this is not reversed after treatment of this disease.

Submitted by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2016-08-23T18:34:08Z No. of bitstreams: 2 Dissertação_José Teófilo Moreira Filho.pdf: 3739532 bytes, checksum: 781ef593c7c871e1b885d3e654832a3c (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2016-08-23T18:34:31Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação_José Teófilo Moreira Filho.pdf: 3739532 bytes, checksum: 781ef593c7c871e1b885d3e654832a3c (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-23T18:34:31Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação_José Teófilo Moreira Filho.pdf: 3739532 bytes, checksum: 781ef593c7c871e1b885d3e654832a3c (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2016-07-29 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Schistosomiasis is a neglected tropical disease caused by parasites of the genus Schistosoma. Worldwide, there are about 240 million people infected and have more than 700 million people at risk of infection in 78 countries. Biomphalaria glabrata is the main intermediate host of Schistosoma mansoni in Brazil. Niclosamide is the molluscicide recommended by the WHO. However, this molluscicide is toxic to other species of aquatic animals and plants, has difficult solubilization both in organic solvents and in water and also high cost. The utilization of in silico methods for virtual screening of new compounds rationalizes costs, reduces the time and also the number of animals in the early stages of research and development. The work’s purpose was plan and identify new molluscicidal compounds potentially active against B. glabrata through in silico methods. Known active and inactive molluscicidal compounds against B. glabrata were selected from literature. Decoys were generated to validate the shape-based models and QSAR models. First, the top 10,000 compounds from Chembridge and ZINC "DrugsNow" databases were screened with the best shape-based model, selected using TanimotoCombo socre function. Later, the activity of the compounds was predicted using consensus QSAR models. Finally, the water solubility of the compounds was calculated for the best molluscicidal candidates, leading to the identification of 20 potentially active compounds as molluscicides against B. glabrata. / A esquistossomose é uma doença tropical negligenciada causada por parasitos do gênero Schistosoma. No mundo, existem cerca de 240 milhões de pessoas infectadas e mais de 700 milhões de pessoas em 78 países sob risco de infecção. Biomphalaria glabrata é o principal hospedeiro intermediário de Schistosoma mansoni no Brasil. A niclosamida é o moluscicida recomendado pela Organização Mundial de Saúde. No entanto, este moluscicida é tóxico a outras espécies de animais aquáticos e plantas, possui difícil solubilização tanto em solventes orgânicos quanto em água e, também, possui alto custo. A utilização de métodos in silico para triagem virtual de novos compostos racionaliza os custos, diminui o tempo e reduz número de animais nas fases iniciais de pesquisas e desenvolvimento. O objetivo deste trabalho foi planejar e identificar novos compostos moluscicidas potencialmente ativos contra B. glabrata através de métodos in silico. Compostos ativos e inativos como moluscicidas contra B. glabrata foram selecionados na literatura. Decoys foram gerados para a validação dos modelos de similaridade pela forma 3D e modelos de QSAR. Primeiramente, os melhores 10.000 compostos das bases de dados Chembridge e ZINC "DrugsNow" foram triados com o melhor modelo de similaridade pela forma 3D, utilizando a função de score TanimotoCombo. Posteriormente, a atividade dos compostos foi predita utilizando os modelos de QSAR gerados. Ao final, a solubilidade em água dos compostos com melhor atividade predita foi calculada, levando à identificação de 20 compostos potencialmente moluscicidas contra B. glabrata.

Solanum lycocarpum A. St.- Hil. (Solanaceae) é uma espécie nativa do Brasil distribuída nas regiões sudeste e centro-oeste do país. O fruto desta planta é popularmente conhecido por fruta do lobo\". O consumo destes frutos impede o desenvolvimento de uma parasitose renal (Dioctophyna renale) que afeta lobos (Chrysocyon brachyurus). Estes frutos contêm dois principais heterosídeos alcaloídicos: solamargina (SM) e solasonina (SS), sendo ambos derivados da aglicona solasodina (SD). Doenças parasitárias, como leishmaniose, esquistossomose e estrongiloidíase estão diretamente ligadas a questões socioeconômicas representando um grande problema de saúde pública principalmente em regiões tropicais e subtropicais. Portanto, é extremamente importante a busca de novos fármacos para estas e outras doenças negligenciadas. O presente trabalho descreve a obtenção do extrato alcaloídico (EA) a partir dos frutos da lobeira, o isolamento dos heterosídeos alcaloídicos majoritários e da aglicona SD, bem como a avaliação de suas atividades in vitro leishmanicida, estrongiloicida e esquistossomicida. Além disso, a atividade esquistossomicida do EA também foi avaliada em modelo animal. O EA foi obtido a partir de frutos secos e triturado por meio de extração ácido-base. SM e SS foram isolados por cromatografia em camada delgada preparativa ou por cromatografia flash. SD foi obtida a partir da hidrólise ácida do EA, e purificada por cromatografia em coluna clássica utilizando eluição por gradiente. As estruturas dos compostos isolados foram confirmadas por análises de RMN e espectrometria de massas. Nas avaliações biológicas observaram-se atividade leishmanicida, estrongiloicida e esquistossomicida do EA. Os compostos isolados, SM, SS e a mistura equimolar foram ativos contra L. amazonensis. Além disso, esses compostos foram capazes de reduzir a atividade motora de vermes adultos de S. mansoni, separar os pares de verme adulto em macho e fêmea, causar a morte dos vermes, alterar o tegumento e reduzir o desenvolvimento dos ovos in vitro. A SD foi inativa contra L. amazonensis e vermes adultos de S. mansoni. O EA avaliado in vivo mostrou atividade esquistossomicida, diminuindo o número de ovos e granulomas no fígado dos animais tratados. / The Brazilian Solanaceae plant, Solanum lycocarpum A. St.-Hil. is distributed in the Southeast and Middle West of the country. The fruit of this plant is popularly known as fruta do lobo (wolf-fruit). The intake of these fruits prevents renal parasitism (Dioctophyna renale) which affects wolves (Chrysocyon brachyurus). These fruits contain two major alkaloid heterosides (solamargine (SM) and solasonine (SS)) bearing both the same aglycone, solasodine (SD). Among the parasitic diseases, such as leishmaniasis, strongyloidiasis and schistosomiasis stand out in terms of socioeconomic and public health importance in tropical and subtropical areas. Its extremely important to search for new drugs to treat these and other neglected diseases. The present work reports the obtainment of the alkaloidic extract (AE) of the S. lycocarpum fruit, the isolation of the major alkaloid heterosides and to obtain the aglycone. The obtained samples were evaluated for the in vitro leishmanicidal, strongyloicidal and schistosomicidal activities. Also, the schistosomicidal activity of the AE was evaluated in an animal model. The AE was obtained from dried and grounded fruits by using acid-base extraction. SM and SS were isolated either by preparative thin layer chromatography or by flash chromatography. SD was obtained by acid hydrolyses of the AE, and it was purified by silica gel column chromatography using gradient elution. The structures of the isolated compounds were confirmed by analysis of NMR and mass spectrometry. The analysis of the obtained results for the biological evaluation showed that the AE displays leishmanicidal, strongyloicidal and schistosomicidal activities. The isolated compounds, SM, SS and their equimolar mix were actived against L. amazonensis. These compounds also were able to reduce the mobility, to separate the worm into male and female, to modify the tegumental and to cause the death of the adults worms besides reducing the development of eggs. The SD was inactive against L. amazonensis and S. mansoni adult worms. When AE was evaluated in vivo showed activity as schistosomicidal, decreasing the number of eggs and granulomas in the liver of the treated mice.

Submitted by isabela.moljf@hotmail.com (isabela.moljf@hotmail.com) on 2017-05-18T15:08:24Z No. of bitstreams: 1 sandrahelenacerratotibiriça.pdf: 1652171 bytes, checksum: 70c53fdf10ce2e1aabc9b49f47b6fd54 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2017-05-18T15:43:13Z (GMT) No. of bitstreams: 1 sandrahelenacerratotibiriça.pdf: 1652171 bytes, checksum: 70c53fdf10ce2e1aabc9b49f47b6fd54 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-18T15:43:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 sandrahelenacerratotibiriça.pdf: 1652171 bytes, checksum: 70c53fdf10ce2e1aabc9b49f47b6fd54 (MD5) Previous issue date: 2008-09-26 / FAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / A epidemiologia da esquistossomose apresentou transformações significativas nas últimas décadas no Brasil. No Estado de Minas Gerais, a redução da morbi-mortalidade e o desenvolvimento tecnológico dos meios diagnósticos e terapêuticos foram evidentes, mas não suficientes para impedir a expansão geográfica da endemia. Clinicamente, a esquistossomose pode se manifestar com as formas agudas e as crônicas hepatoesplênicas, estas mais freqüentes nas áreas de altas endemicidades. Outra forma incapacitante e subnotificada é a mielorradiculopatia esquistossomótica, que ocupa papel de destaque pela gravidade potencial e possibilidade de ocorrer também em áreas de baixas endemicidades, já que não depende da intensidade da infecção. Considerando a população residente, foi realizado um levantamento seccional objetivando determinar a prevalência, a intensidade da esquistossomose e a distribuição dos hospedeiros intermediários em três municípios da microrregião de Juiz de Fora. Utilizou-se estudo amostral baseado no cadastro das famílias no SIAB, com investigação de 850 famílias por meio de exames coproparasitológicos pelo método Kato-Katz e aplicação de questionário estruturado. Este estudo validou a utilização do cadastro das famílias no SIAB como base populacional para cálculo amostral na realização de pesquisas de campo. Foi pioneiro na verificação da prevalência média de 2,4% da esquistossomose mansoni nos municípios de Piau (2%), Goianá (2,1%) e Coronel Pacheco (3,1%). As características da transmissibilidade na região foram avaliadas e descritas. Os infectados predominaram na população adulta jovem, somente 10% dos escolares foram positivos e não constituíram indicadores dos domicílios com adultos doentes. Os resultados obtidos permitiram identificar o padrão de agregação, revelando os indivíduos com as maiores cargas parasitárias. As três espécies de moluscos de importância epidemiológica foram identificadas nas áreas estudadas: B. glabrata, B. straminea, e B. tenagophila. Constatou-se que, nas situações de baixa endemicidade, em municípios com população inferior a 5.000 habitantes e cobertos pela estratégia de saúde da família, a pesquisa da prevalência da esquistossomose v com base no estudo amostral a partir do cadastro das famílias no SIAB é apropriada para identificar os grupos de maior transmissão. Os indivíduos infectados foram espacialmente referenciados com os moluscos potenciais hospedeiros e indicaram os focos de maior transmissibilidade da esquistossomose nos municípios estudados. / The epidemiology of schistosomiasis has undergone significant transformation in recent decades in Brazil. In the state of Minas Gerais there has been a decline in morbi-mortality, along with advances in diagnosis and treatment, but these have not been sufficient to prevent the geographic spread of the endemic. Clinically, schistosomiasis can appear in acute and chronic hepatosplenic forms, the latter more frequent in areas of high endemicity. Another incapacitating and underreported form, schistosomotic myeloradiculopathy, deserves attention because of its potential severity and the fact it can also occur in areas with low endemicity, since it does not depend on the infection’s intensity. A cross-sectional study was carried out to determine the prevalence and intensity of schistosomiasis in the resident population and the distribution of intermediate hosts in three municipalities in the Juiz de Fora micro-region. The sample was drawn from families listed in the Basic Health Service Information System (SIAB), from which 850 families were investigated through coproparasitological tests by the Kato-Katz technique and the application of a structured questionnaire. This study was groundbreaking in verifying an average schistosomiasis mansoni prevalence of 2.4% in the municipalities of Piau (2%), Goianá (2.1%) and Coronel Pacheco (3.1%). The transmissibility characteristics in the region were evaluated and described. The infected individuals were predominantly young adults. Only 10% of the school-age subjects were positive and there were no indicators of households with sick adults. The results permitted identifying the pattern of aggregation, revealing the individuals with greater parasite loads. The three species of snail carriers were identified in the areas studied: B. glabrata, B. straminea, and B. tenagophila. Therefore, in situations of low endemicity, in regions with population under 5,000 people and covered by family preventive health programs, the study of the prevalence of schistosomiasis based on sample data from households listed in the SIAB is appropriate to identify the groups of greater transmission. The infected individuals were spatially referenced together with the host snails, indicating the probable foci of greatest transmission in the municipalities studied.

Submitted by isabela.moljf@hotmail.com (isabela.moljf@hotmail.com) on 2017-06-21T15:37:43Z No. of bitstreams: 1 daniellegomesmarconato.pdf: 2747967 bytes, checksum: 9b5932356e36c2997fb2e0f9fb1227b9 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2017-08-07T19:11:05Z (GMT) No. of bitstreams: 1 daniellegomesmarconato.pdf: 2747967 bytes, checksum: 9b5932356e36c2997fb2e0f9fb1227b9 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-07T19:11:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 daniellegomesmarconato.pdf: 2747967 bytes, checksum: 9b5932356e36c2997fb2e0f9fb1227b9 (MD5) Previous issue date: 2016-03-04 / Nucleotídeos e nucleosídeos extracelulares podem funcionar como moléculas de sinalização dos processos inflamatórios e da resposta imune. Nesse contexto, as NTPDases representam uma importante família de enzimas capazes de hidrolisar nucleosídeos di e tri-fosfatados, responsáveis por regular a sinalização purinérgica na maioria dos seres vivos. A homologia entre diferentes enzimas dessa família estimula investigações das interações dos anticorpos direcionados contra as isoformas destas enzimas presentes em parasitos e sua conexão com as isoformas expressas em seus hospedeiros mamíferos. As isoformas de NTPDases do helminto Schistosoma mansoni, denominadas SmATPDases 1 e 2 são antigênicas e exibem uma homologia significativa com as isoformas de NTPDases presentes em células de mamíferos. O objetivo do trabalho foi verificar se anticorpos anti-SmATPDase 1 presentes no soro de animal infectado com S. mansoni podem ter imunorreatividade cruzada com isoforma NTPDase 1 das células do sistema imune de mamíferos. Essa imunorreatividade pode afetar a proliferação e sinalização celular, justificando uma modulação direta da sinalização purinérgica desenvolvida durante a progressão da esquistossomose. Na primeira etapa, foi detectado que os anticorpos contra a isoforma de SmATPDase 1 presente no “pool” de soros de animais infectados foram capazes de reconhecer a isoforma NTPDase 1 em preparações de macrófagos e esplenócitos, resultando na visualização de bandas nítidas com peso molecular de aproximadamente 53 e 58 kDa. A isoforma NTPDase 1 também foi identificada na superfície destas células por imunofluorescência. A reatividade entre preparações de células e anticorpos anti-IgG presentes no soro de animais com esquistossomosse (diluições 1:50 e 1:100) também sugeriu a existência de proteínas homólogas entre o parasito e as células imunes, podendo estar relacionadas às NTPDases. Estes anticorpos utilizados foram capazes de reduzir a atividade fosfohidrolítica nas preparações de macrófagos (22%) e esplenócitos (58%), assim como os anticorpos anti-CD39 promoveram decréscimo nessa atividade em 40% e 83%, respectivamente. Em ensaios de proliferação celular, houve redução na proliferação de macrófagos em 24 h (14%), 48 h (14%) e 72 h (11%) em células incubadas com “pool” soros de animais infectados e com anti-CD39 29%, 12% e 90%, respectivamente. A atividade proliferativa de esplenócitos incubadas com anti-CD39 aumentou nos tempos de 48h (45%) e 72h (70%) e nas células mantidas com soro imune de animal infectado não foi observada nenhuma diferença significativa. Em ensaio de proliferação de linfócitos por citometria de fluxo houve um aumento significativo do número de linfócitos T nos grupos incubados com soro imune (36%) e anti-CD39 (>100%). Por sua vez, houve um decréscimo de 44% na proliferação de linfócitos B tratados previamente com soro de animal infectado e de 34% no grupo tratado com anti-CD39. Com esses resultados sugerimos que a inibição da NTPDase 1 de células imunes por anticorpos produzidos contra a isoforma da enzima do S. mansoni pode ser responsável pela modulação da resposta imune que ocorre na esquistossomose, contribuindo para um perfil Th2. Porém, outros testes são necessários para corroborar essa hipótese. A inibição das NTPDases pode contribuir para o estudo dos mecanismos envolvidos em diversas disfunções relacionadas a defeitos na sinalização purinérgica. / Extracellular nucleotides and nucleosides may act as signaling molecules that control inflammation and immune response. In this context, NTPDases represent an important family of enzymes capable of hydrolyzing di- and tri-phosphate nucleosides which regulate purinergic signaling in most living beings. The homology between different enzymes from the NTPDase family supports new investigations about the interactions of antibodies directed against isoforms of these enzymes in parasites and the connection to their isoforms expressed in mammalian hosts. The NTPDase isoforms in Schistosoma mansoni, called SmATPDases 1 and 2 are antigenic and display a significant homology with the NTPDases isoforms found in mammalian cells. The aim of this work was to verify if anti-SmATPDase 1 antibodies from serum of animals infected with S. mansoni show cross-immunoreactivity with the NTPDase 1 isoform from immune system cells of mammalians. This cross-immunoreactivity could affect cell proliferation and cell signalization, justifying a direct modulation of the purinergic signaling developed during the progression of schistosomiasis. Through western blotting technique we verified that antibodies against SmATPDase isoforms from serum of infected animals were able to recognize NTPDase isoform 1 from homogenized splenocytes and macrophages, resulting in clear display of bands with molecular weights of approximately 53 and 58 kDa. Additionally, NTPDase 1 was identified and localized in these cells by immunofluorescence. The reactivity between preparations of cells and anti-IgG antibodies present in the serum of animals with schistosomiasis (dilutions 1:50 and 1: 100) also suggested the existence of homologous proteins between the parasite and the immune cells that could be related to NTPDases. Antibodies were also able to reduce activity enzyme in preparations of macrophages (22%) and splenocytes (58%). Anti-CD39 promoted decrease in this activity by 40% and 83%, respectively. In cell proliferation assays, there was a reduction in the proliferation of macrophages in 24 h (14%), 48 h (14%) and 72 h (11%) in cells incubated with pool infected animal sera and with anti-CD39 29%, 12% and 90%, respectively. When the splenocytes culture was incubated with anti-CD39, proliferative activity increased in 48h (45%) and 72 h (70%) and in cells maintained with immune serum of the infected animal, it observed no significant difference. The lymphocyte proliferation assay by flow cytometry there is a significant increase in the number of T lymphocytes incubated with immune serum (36%) and anti-CD39 (> 100%). In turn, there was a 44% decrease in proliferation of B cells previously treated with infected animal serum and 34% in the group treated with anti-CD39. These results suggest that inhibition of NTPDase 1 of immune cells by antibodies produced against the isoforms of the S. mansoni could be responsible for modulation of the immune response during the schistosomiasis, conducting to a Th2 response. However, more tests should be carried out to confirm this hypothesis. The NTPDases inhibition may contribute for studies of the mechanisms involved in various disorders related to defects in purinergic signaling.

Submitted by Geandra Rodrigues (geandrar@gmail.com) on 2018-07-12T15:38:23Z No. of bitstreams: 0 / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2018-07-16T17:43:46Z (GMT) No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2018-07-16T17:43:46Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2016-01-15 / A esquistossomose é uma doença parasitária causada por vermes do gênero Schistosoma e afeta principalmente comunidades sem acesso adequado a água potável e condições de saneamento adequadas. O praziquantel é o fármaco indicado para o tratamento desta parasitose e não há vacina disponível. As NTPDases são uma família de proteínas que catalisam a hidrólise de nucleosídeos di e tri fosfatados, sendo amplamente distribuídas nos organismos. Duas isoformas de NTPDases (SmATPDase1 e SmATPDase2) foram descritas em Schistosoma mansoni. Sugerese que a SmATPDase1 regule a concentração extracelular de nucleosídeos di e tri fosfatados, influenciando diretamente em eventos trombóticos e ativação de células do sistema imune. Dessa maneira, a inibição da ATP-difosfohidrolase por fármacos ou anticorpos torna-se uma estratégia interessante no combate a esquistossomose. Intensa resposta do tipo Th2, elevação dos níveis de IgE e das citocinas IL-4, IL-5 e IL-13 são características marcantes em infecções helmínticas e alergias. Acredita-se que esta semelhança se deve ao fato que a resposta alérgica tenha surgido inicialmente para conter parasitos, hipótese reforçada pela imunoreatividade cruzada descrita entre proteínas presentes em parasitos e alérgenos. Acreditamos que a isoforma SmATPDAse1 seja um dos principais antígenos indutores de anticorpos IgE (imunoglobulinas com função protetora) durante a esquistossomose mansônica. Neste trabalho, por análise in silico identificamos potenciais epitopos de IgE na estrutura linear da SmATPDase1. Destas sequências, três peptídeos foram sintetizados por fase sólida e utilizados em ensaios de ELISA e de imunização. Em ensaios de ELISA, observou-se a capacidade destes peptídeos ligarem anticorpos IgE e IgG4 em soros de pacientes com esquistossomose, assim como IgE e IgG1 nos soros de animais experimentalmente infectados. Por ELISA, não foi possível observar diferença significativa na produção de anticorpos IgE e IgG1 após a imunização de camundongos com os peptídeos. No entanto, os soros imunes foram capazes de identificar a isoforma 1 da NTPDase de S. mansoni em ensaios de western blots. A identidade da proteína reconhecida foi confirmada por espectrometria de massas. Os resultados dão suporte a hipótese de que estes peptídeos sintetizados correspondam a epitopos ligadores e indutores de IgE presentes na SmATPDase1. Dessa maneira, tais peptídeos podem ser explorados como ferramentas de estudos das NTPDases, por meio da produção de anticorpos contra eles, ou até mesmo no desenvolvimento de imunoterapias em doenças alérgicas, auto-imunes e na própria esquistossomose. / Schistosomiasis is a neglected disease caused by blood flukes (trematode worms) of the genus Schistosoma. This disease affects mostly communities without proper access to safe drinking water and adequate sanitation. Praziquantel is the only drug available for this infection and vaccines are currently unavailable at the market. The NTPDases are a family of proteins that catalyze the hydrolysis of nucleoside di and tri phosphates and are widely distributed in the organisms. In Schistosoma mansoni, two isoforms of NTPDases (SmATPDase1 and SmATPDase2) were described and might play important role in the parasite physiology. The SmATPase1 controls extracellular concentration of nucleoside di and tri phosphates, regulating blood clotting and immune system cells activation. In addition, this isoform might be one of the major IgE (a protective immunoglobulin) inducing antigen in the course of schistosomiasis infection. Thus, the inhibition of ATP-diphosphohydrolase by drugs or antibodies is an interesting strategy to target schistosomiasis. Intense Th2 response and high levels of IgE and cytokines IL-4, IL-5 and IL-13 are characteristic of helminth infections and allergies. It is suggested that this similarity is not only by chance, but it is due the fact that the allergic response started as a form of counter parasites - hypothesis supported by cross reactivity between proteins from parasites and allergens. In this work, we identified potential IgE epitopes in the linear structure of SmATPDase1 by in silico analysis. Three peptides were synthesized by solid phase and used in ELISA and immunization assays. The ELISA assays showed the capacity of these peptides to bind IgE and IgG4 antibodies in human serum and IgE and IgG1 in infected animals. However, no significant difference was found in the production of IgE and IgG1 after animal immunization with these molecules. Nevertheless, these immune sera were capable of identifying the SmATPDase1 in western blot assays and the identity of the enzyme was confirmed by mass spectrometry. These findings support the hypothesis that these peptides correspond to IgE epitopes. Furthermore, some results also suggest that these peptides are capable of binding natural antibodies that target self-proteins and are homologues to the investigated peptides. Thus, these peptides might be explored as tools for the study of NTPDases, through the production of antibodies against these epitopes, or as immunotherapeutics for treatment of allergies, auto-immune diseases and schistosomiasis.

Orientador: Eliana Maria Zanotti Magalhães / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-25T23:25:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Simoes_LucianaFranceschi_D.pdf: 13158668 bytes, checksum: 8fb7b4a656ae812560a18a5466806eea (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: A busca de novos tratamentos para a esquistossomose é relevante devido a constatação de linhagens do Schistosoma mansoni com perda de sensibilidade aos fármacos atuais. A interferência por RNA (RNAi) é uma técnica que pode ser usada no silenciamento de um gene especifico, através de um RNA dupla fita (dsRNA). Essa ferramenta se mostra eficaz em aplicações terapêuticas em vírus, príons e patógenos intracelulares. Estudos mostram que a técnica do RNAi é bastante eficiente no verme Caenorhabditis elegans. Até o momento poucos trabalhos analisaram a técnica de RNAi no combate a esquistossomose. Este trabalho teve como objetivo aplicar a técnica da interferência por RNA em S. mansoni e avaliar sua eficiência em testes in vitro e in vivo, tendo como alvo o gene fucosiltransferase, enzima envolvida no processo de fucosilação de lipídios e proteínas essenciais ao parasita e o gene glicosilfosfatidilinositol, que atua como ancora de superfície, na qual se ligam antígenos protéicos e glicoprotéicos. A supressão gênica foi estudada em testes in vitro e in vivo, com observações da atuação na biologia, morfologia e mortalidade dos vermes. Como resultados nos testes in vitro, obtiveram-se alterações tegumentares nos adultos, extravasamento do conteúdo interno de fêmeas e alterações na oviposição, apresentando os grupos tratados maior quantidade de ovos mortos e malformados quando comparados com os grupos controles. Nos experimentos in vivo verificou-se diminuição no numero de vermes recuperados, mortalidade de vermes em alguns grupos tratados, e alteração na oviposição, quando examinados pelas técnicas de Kato e oograma. Análise histológica do fígado mostrou diferenças no número, na área e na conformação dos granulomas dos grupos tratados quando comparados com os grupos controles. A mortalidade de ovos eliminados nas fezes de camundongos após dois dias de tratamento também se mostrou significativamente maior nos grupos tratados com moléculas para silenciamento. Esses resultados sugerem o potencial uso da técnica de RNAi no estudo da esquistossomose / Abstract: The search for new schistosomiasis treatments is relevant due to the observation of resistant Schistosoma mansoni strains for current drugs. The interference by RNA (RNAi) is a technique which can be used for silencing a specific gene using a double strain RNA (dsRNA). This methodology presents efficacy in therapeutic use in virus, prions, and intracellular pathogens. Studies demonstrate that RNAi technique is very efficient in Caenorhabditis elegans worm. Up to the moment, a few studies have analyzed the RNAi technique against schistosomiasis. Thus, the aims of this study were apply the interference by RNA in S. mansoni and evaluate its efficiency in in vitro and in vivo tests, having the fucosyltransferase gene, an enzyme involved in parasite essential lipids and proteins fucosilation process, and the glicosylfosfatidilinositol gene, which acts as anchor-surface where proteic and glicoproteic antigens are bonded, as targets. The genic suppression was studied in in vitro and in vivo tests, with observation of its action in the biology, morphology, and mortality of the worms. The results for in vitro testswere integumentary alteration in adults, internal content extravasation in females, and oviposition alteration, with higher amount of dead eggs and not well formed eggs in the treated groups in comparison with the control groups. The in vivo tests presented a decrease in the number of recovered worms, worm mortality in some groups, and oviposition alteration when analyzed under the Kato and oogram techniques. Histological analysis of the liver presented differences in the number, area, and conformation of the granulomas of the treated groups in comparison with the control groups. The mortality of the eggs eliminated on the mice feces after two days of treatment were also significantly higher in the groups treated with the silencing molecules. These results suggest the potential use of the RNAi technique in the schistosomiasis treatment / Doutorado / Relações Antrópicas, Meio Ambiente e Parasitologia / Doutora em Biologia Animal

Orientador: Silmara Marques Allegretti / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-21T03:28:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_RosimeireNunesde_M.pdf: 4423999 bytes, checksum: 542cece7996940fc60f363ac08f6b4f6 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: A esquistossomose mansônica é uma doença crônica e está incluída na lista das doenças negligenciadas pela Organização Mundial de Saúde (OMS). A quimioterapia representa hoje, o principal recurso para minimizar a prevalência e incidência desta doença no mundo. Atualmente, no Brasil, o tratamento clínico da esquistossomose mansônica é baseado, principalmente, no uso do praziquantel (PZQ). No entanto, o emprego deste fármaco em larga escala, nas principais áreas endêmicas da doença, resultou no desenvolvimento de resistência a diferentes cepas de S. mansoni. Desta forma, faz-se necessária à busca de novos princípios ativos explorando as fontes de compostos sintéticos, semi-sintéticos, além das fontes naturais, para se obter alternativas terapêuticas contra a esquistossomose. No presente estudo, avaliou-se o efeito de Baccharis trimera (Less) DC. por meio de ensaios in vitro e in vivo, sobre vermes adultos de S. mansoni, linhagem BH. Esse estudo avaliou a motilidade dos vermes, machos e fêmeas, oviposição, alterações morfológicas, mortalidade dos parasitas, avaliação da carga parasitária, quantidade de ovos eliminados nas fezes, distribuição dos ovos nos tecidos intestinais e avaliação das reações granulomatosas no tecido hepático. Os resultados mostraram que os tratamentos in vitro, realizados com o óleo essencial e com os extratos orgânicos e frações de diferentes polaridades, nas concentrações de 130 e 91 ?g/mL, reduziram a motilidade e causaram a mortalidade dos parasitas com alterações morfológicas no tegumento e nas ventosas, oral e acetabular. Os tratamentos in vivo alteraram a proporção dos vermes, machos e fêmeas, evidenciando que as fêmeas foram mais sensíveis a B. trimera do que os vermes machos. Também observou-se que os tratamentos realizados com o óleo essencial e com o extrato diclorometânico reduziram significativamente a quantidade de ovos eliminado nas fezes, além de provocarem alterações no oograma, reduzindo a distribuição dos ovos nos tecidos intestinais, quando comparados com o grupo controle. Além disso, esses mesmos tratamentos demonstraram uma redução do número de granulomas hepáticos e a diminuição do diâmetro médio, evidenciando uma redução da reação granulomatosa. De modo geral, observou-se que para cada parâmetro analisado, tanto nos ensaios in vitro quanto nos ensaios in vivo, houve uma variação de resultados de acordo com cada amostra de B. trimera avaliada e as concentrações testadas. O estudo indica o potencial terapêutico da B. trimera no tratamento da esquistossomose mansônica / Abstract: Schistosomiasis mansoni is a chronic disease included in the list of Neglected Diseases by the World Health Organization (WHO). Chemotherapy is now the main resource to minimize the prevalence and incidence of this disease worldwide. Currently in Brazil, the clinical treatment of schistosomiasis is based primarily on the use of praziquantel (PZQ). However, the large scale use of PZQ in endemic areas resulted in the development of resistance to different strains of Schistosoma mansoni. Thus, it is necessary to search for new active principle exploring the sources of synthetic compounds, semi-synthetic, and natural sources to obtain therapeutic alternatives against schistosomiasis. In this study, we evaluated the effect of Baccharis trimera (Less) DC. on adult worms of S. mansoni BH strain in vitro and in vivo. This study evaluated the motility of the worms, males and females, oviposition, morphological abnormalities, parasite mortality, assessment of parasite load, number of eggs in the feces, distribution of eggs in the intestinal tissues and evaluation of granulomatous reactions in liver tissue. The results showed that in vitro treatments made with the essential oil and the organic extracts and fractions of different polarities at concentrations of 130 and 91 ?g/mL, reduced motility, and caused the death of the parasites with morphological changes in tegument and the suckers, oral and acetabular. The treatments in vivo shifted the proportion of worms, males and females, indicating that females were more sensitive to B. trimera than male worms. It was also noted that the treatments performed with the essential oil and the dichloromethane extract significantly reduced the number of eggs eliminated in feces as well as cause changes in oogram, reducing the distribution of eggs in the intestinal tissues, compared with the control group. In addition, these same treatments showed a reduction in the number of hepatic granulomas and a decrease in diameter, showing a reduction of granulomatous reaction. Overall, it was observed that for each parameter analyzed in both, in vitro and in vivo assays, there was a difference in results according to each sample B. trimera evaluated and the concentrations tested. The study indicates the therapeutic potential of B. trimera in the treatment of schistosomiasis / Mestrado / Parasitologia / Mestre em Parasitologia