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El país fértil. Notas para una pedagogia del proyecto

Contepomi, Gustavo Adolfo E. 01 December 2009 (has links)
El País Fértil es una investigación que aborda el significado del proceso creativo específico de la arquitectura mediante su comparación con otras disciplinas artísticas. Esta premisa metodológica implica el reconocimiento del carácter artístico de la arquitectura. Insistir en la pertenencia de la arquitectura al campo del arte, algo que nadie cuestionaba, se vuelve hoy imprescindible en un contexto social y universitario que potencia excesivamente el peso del factor tecnológico en detrimento del artístico/humanístico. La idea del medio expresivo -el que diferencia a las artes- permite acercarse de modo original al concepto de "proporción", el principio proyectual abstracto con que la arquitectura construye su arte. Enseñar a diseñar arquitectura significa transmitir los mecanismos de la práxis arquitectónica, la esencia misma del proceso creativo -que todas las artes comparten-. Enseñar a diseñar, enseñar a proyectar, o enseñar a crear son diferentes expresiones de la materia que está en el origen de esta investigación. El proceso de proyecto que es necesario transmitir a los estudiantes de arquitectura es el conjunto de estrategias que permiten trabajar la imaginación -como actividad no acotada y sin límites- para que se convierta en productiva. De esta forma se reivindica una vez más el rol del dibujo de arquitectura como uno de los hilos conductores que permiten desplegar las infinitas posibilidades de una imaginación así concebida.Siguiendo un proceso abierto, análogo al del proyecto arquitectónico, este trabajo descubre un campo fértil susceptible de evolucionar hacia nuevas y diferentes propuestas. Esa y no otra es su utilidad: sugerir otros paisajes para el área siempre experimental de la pedagogía de la arquitectura.La relación entre el dibujo y el proyecto en las escuelas de arquitectura, suele guardar importantes similitudes con el proceso real de diseño que desarrollan los arquitectos. Para explorar esa hipótesis se concertaron una serie de conversaciones con destacados arquitectos y diseñadores que reflexionan sobre la relación entre experiencia docente y actividad profesional. Una selección de esas conversaciones integra el anexo que acompaña la tesis. En ellas se habla esencialmente del proceso de diseño, del proceso creativo. Un proceso común a todas las disciplinas de las cuales se espera que resuelvan problemas o necesidades, inventando algo nuevo, apoyadas en la singular potencia constructiva de la imaginación.Cada capítulo va precedido por una "perspectiva", las reflexiones de un autor sobre su particular proceso creativo. Se trata de la recuperación de una serie de textos clásicos de la modernidad, algunos olvidados, pero todos completamente actuales, que ofrecen una visión particular sobre la relaciones entre diferentes artes y sus procesos de creación, en completa sintonía con las preocupaciones que dieron origen a esta investigación. / El País Fértil is an investigation focused in the specific meaning of the architectural creative process through comparison to other artistic disciplines. This research methodology is based on the premise that conceives architecture as an art. It is today essential to emphasize Architecture belonging to the realm of the fine arts, in a social context where technology has been converted in the main value against the artistic and humanities factors. The idea of the expressive medium -what differentiate arts- allows an original approach to the concept of "proportion", the abstract project principle architecture builds his art with. Teaching architectural design means transmitting the architectonic praxis, which is the essence of the creative progression shared by all arts. Teaching design, teaching project, or teaching to create are different expressions of the same subject which is on the root of this research. The project mechanism that needs to be transmitted to architecture students is the compendium of strategies that makes possible imagination works in the more productive way. Once again, architectural drawing is claimed the main driver to develop the unlimited possibilities of the power of imagination.Following an open evolution, like in the architectural project, this study finds a fertile ground to evolve into new and unexpected proposals. Nothing would be more useful to suggest other landscapes for the always experimental area of architecture pedagogy.The relationship between drawing and project has many affinities in architecture schools with the real design routines that architects use in their work. In order to explore this hypothesis a series of conversations with leading architects and designers were organized reflecting on both their teaching experience and professional activity. All of them talk mainly about the creative procedure, a common method to all disciplines expected to resolve problems or needs, inventing something new, supported by the unique imagination's constructive power.Every chapter is preceded by a "perspective": the thinking of an artist on his personal creative way. This is the recovery of a series of beautiful modern classical texts, some forgotten, but even at the forefront nowadays. These documents can help to illuminate the search for answers to the concerns that gave rise to this investigation.
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Amplification paramétrique, sans bruit, continue, d'images en cavité

Lopez, Laurent 20 October 2006 (has links) (PDF)
Ce mémoire présente une étude théorique et expérimentale de l'amplification continue d'images à l'aide d'un oscillateur paramétrique optique (OPO).<br />Une première partie est consacrée aux propriétés classiques de cavités nécessaires à l'imagerie, dites "dégénérées en modes transverses". On étudie tout d'abord théoriquement le problème général de la transmission d'une image à travers une cavité quelconque.<br />Ensuite, deux exemples de cavités dégénérées sont abordés: la cavité hémi-confocale puis la cavité autoimageante. Ensuite les propriétés quantiques spatiales du vide émis par un oscillateur paramétrique optique sous le seuil d'oscillation sont abordées. On traite tout d'abord l'effet de la taille finie du milieu non-linéaire sur la compression de bruit locale en sortie d'un OPO en cavité confocale. Cette étude est étendue au cas de la cavité auto-imageante où l'on montre la possibilité de générer des faisceaux EPR locaux.<br />Une troisième partie est consacrée à l'amplification optique au niveau quantique. On construit un modèle théorique d'OPO monomode aussi proche que possible de notre expérience. Nous étudions ensuite le problème de l'optimisation des caractéristiques de l'OPO pour l'amplification sans bruit.<br />Enfin une partie expérimentale étudie l'amplification d'images à l'aide d'un OPO dégénéré en modes transverses sous le seuil d'oscillation. Cette étude est réalisée tout d'abord en cavité semi-confocale avec un cristal de type II puis en cavité confocale avec un cristal de type I. Nous prouvons le caractère quantique des images amplifiées. Le facteur de bruit du système est caractérisé, prouvant un régime d'amplification "sans bruit".
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Gestion de contexte pour l'optimisation de l'accès et l'adaptation des services sur des environnements hétérogènes

Loukil, Mehdi 20 December 2012 (has links) (PDF)
Dans le domaine des TIC, les services de demain seront certainement basés sur des systèmes ubiquitaires, omniprésents et pervasifs. Ces systèmes devront prendre en considération différents paramètres provenant de l'environnement de l'utilisateur, c'est à dire son contexte. Le contexte de l'utilisateur peut être composé d'informations statiques ou dynamiques, objectives ou subjectives, quantitatives ou qualitatives. Il peut inclure des données telles que la localisation géographique, les caractéristiques du terminal utilisé, la température ambiante, l'humeur de l'utilisateur. Afin d'améliorer la QoS et la QoE, les services et les systèmes doivent être adaptés aux changements du contexte des utilisateurs. Le contexte doit donc être collecté et interprété et les règles d'adaptation du système doivent être définies. Sur les systèmes étendus, riches, dynamiques et hétérogènes, tels que ceux considéré dans le cadre de cette thèse, ces opérations doivent être automatisées. Vu la quantité et la complexité des données contextuelles à considérer, l'utilisation de la sémantique dans la gestion de contexte peut faciliter cette automatisation et ouvrir la porte au raisonnement et à l'adaptation automatiques. Aujourd'hui, peu de solutions viables existent pour cette problématique. Nous proposons alors d'utiliser et d'adapter des mécanismes et technologies provenant du web sémantique pour décrire et manipuler les informations de contexte. Dans un premier temps, nous avons proposé une méthodologie de conception qui nous permit de proposer " Ubiquity-Ont " : une ontologie générique au domaine des TIC, flexible et extensible. Les données de contexte ont alors été décrites sous forme de concepts et d'instances, reliés par des relations sémantiques. Nous avons ensuite proposé une architecture overlay, composée de deux niveaux de vitalisation et permettant d'intégrer un gestionnaire de contexte, basé sur la sémantique, sur des environnements réseaux et services. Cette solution overlay permet de (a) masquer l'hétérogénéité des composants du système et (b) d'augmenter virtuellement les entités du système existant par les capacités nécessaires à la manipulation et au raisonnement sur les données sémantiques du contexte. Nos propositions ont étés implémentées et testées sur une plateforme réelle et appliquées à deux cas d'études : Gestion de la mobilité sur des environnements de réseaux d'accès hétérogènes et Optimisation de la consommation d'énergie dans les terminaux mobiles
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Pratiques et politiques sportives dans les quartiers sensibles : une approche monographique aux 3Cités à Poitiers

Moussa, Kinda 29 January 2013 (has links) (PDF)
Notre travail constitue une clef possible de lecture des multiples formes et pratiques contemporaines des sports, des loisirs sportifs et culturels dans un quartier populaire : les 3Cités, ville de Poitiers. Nous posons la question locale du quartier comme élément déterminant d'identification, de redéfinition des pratiques sportives et de requalification de l'espace public. Les pratiques sportives, mais aussi sociales et culturelles semblent inhérentes à la politique locale (les structures), municipale (la ville) et publique (l'Etat). À travers le champ des pratiques sportives et de loisirs, notre objet socio-anthropologique nous permet de comprendre dans quelle mesure le réaménagement des quartiers populaires, autrement dit, l'urbanisation de l'espace périphérique dans une ville de taille moyenne, favorise ou non, les objectifs politiques de mixité sociale, de désenclavement de l'espace, de cohésion sociale, d'intégration, de lutte contre la ségrégation sociale et d'égalité des chances. Une analyse sociodémographique de la population résidant dans un espace singulier, où cohabitent une souche française, française d'origine étrangère et étrangère, nous amène à comprendre l'évolution des formes et les attentes de la pratique sportive, mais aussi, le frein et le désengagement de cette même pratique. Nous portons une attention particulière à la pratique sportive féminine car les femmes semblent éloignées du milieu sportif à la fois institutionnel et non-institutionnel. Il s'agit de montrer en quoi la pratique féminine dans ce quartier sensible est liée aux choix du sport proposé ainsi qu'aux facteurs sociaux tels que la culture d'origine, les conditions socio-économiques et l'implication des parents dans le milieu sportif.
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Le partage du paysage

Sgard, Anne 15 April 2011 (has links) (PDF)
Ce mémoire de HDR présente un parcours de recherche en géographie sur le paysage, mené comme un essai sur cet objet plutôt qu'un itinéraire personnel. Partant d'une réflexion sur les évolutions récentes du concept de paysage, il défend une conception se référant à la médiance, qui aborde le paysage comme une modalité de la relation individuelle et collective au territoire, fondée sur la reconnaissance du sensible et de l'attachement à des paysages ordinaires ou remarquables. Un ensemble de démarches méthodologiques est exposé pour centrer la recherche sur l'analyse de la mobilisation du paysage, comme argument dans les discours des habitants, des élus, des acteurs sur le territoire. L'essentiel du mémoire présente un ensemble de propositions pour penser le paysage à la croisée du sensible et du politique. Quand, pourquoi, selon quelle logique et quelles modalités, le paysage est-il mobilisé dans des situations de débat, de controverse, ou plus simplement pour justifier un choix de vie, une relation au territoire du quotidien? S'interrogeant sur les valeurs attribuées au paysage, l'analyse se fonde sur la dimension temporelle associée au paysage pour déconstruire les discours sur le patrimoine, la mémoire, l'anticipation ou le bien commun, et ouvrir des pistes de recherche sur le paysage dans le débat sur l'espace public et les démarches participatives.
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Variabilité des flux turbulents de surface au sein du bassin versant d'Ara au Bénin

Doukoure, Moussa 31 March 2011 (has links) (PDF)
La circulation atmosphérique en Afrique de l'Ouest est caractérisée par des vents de sud-ouest (mousson) pendant la saison humide et par des vents de nord-est (harmattan) pendant la saison sèche. Cette alternance des saisons est due aux variations de pression liée à l'état des surfaces (rugosité, albédo, végétation) en réaction au forçage solaire. Ces mêmes états de surface génèrent une variabilité de flux turbulents de surface et des circulations secondaires qui rendent complexes les analyses des mesures effectuées sur place en vue de documenter les interactions surface-atmosphère. La modélisation fine échelle (LES) couramment utilisée dans l'étude de la couche limite atmosphérique est requise pour pouvoir palier à ces difficultés en raison de sa capacité à prendre en compte les flux turbulents en 3D et sur topographie complexe. Notre site d'étude est le bassin versant d'ARA située au Nord du Bénin dans un contexte Soudanien avec des propriétés de surface variables. Une analyse climatique est effectuée sur la base des observations de radiosondage, de radar UHF et de stations au sol afin d'extraire des données composites représentatives des saisons sèche et humide. Ces données composites ont servi par la suite à forcer le modèle Méso-NH dans sa version LES. Pour pouvoir caractériser les échelles de longueur des flux turbulents de surface relatives aux saisons sèche et humide, les données standard de forçage de surface de Méso-NH que sont le relief GTOPO30 (1km de résolution) et la végétation ECOCLIMAP (1km de résolution) ont été respectivement remplacer par le SRTM (90m de résolution) et les données de SPOT/HRV (20m de résolution) reéchantillonné à 90m de résolution. A l'aide d'outils statistiques comme la variographie 2D et le suivi Lagrangien, il ressort que la variabilité spatiale de la chaleur sensible H est gouvernée par le couple vent-relief tandis que celle de la chaleur latente E est difficile à mettre en lien sur végétation hétérogène (SPOT/HRV) en saison sèche. En saison humide, la variabilité spatiale du champ H dépend du vent tandis que celle du champ E dépend de la végétation. Cette étude révèle dans tous les cas que les échelles caractéristiques de ces deux champs diffèrent dans les mêmes conditions de forçage de surface et atmosphérique.
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SENTIDOS E SIGNIFICADOS PARA O SE-MOVIMENTAR NA DANÇA EM CADEIRA DE RODAS / SENSES AND MEANINGS FOR THE "SELF-MOVE" ON WHEELCHAIR DANCE

Rigo, Laís Cavalheiro 21 March 2016 (has links)
Fundação de Amparo a Pesquisa no Estado do Rio Grande do Sul / We come upon critical about to dance and doing dance through techniques or "nontechnical" based in the repetition and copying movements, studies that warn us to the necessity of theoretical insights to legitimize dance and to dance as an expression and communication. Thinking about Wheelchair Dance (DCR) as a manifestation of increasing dance in search of spaces beyond the standardization of movements and gestures, we traced as the central objective of this study was to establish relationships between the Theory of "Self - Move Human" with the DCR teaching. To do this, we long constitute theorists deepening about the Dance that originated notes on aspects inherent the theme, as expressiveness, sensitivity, perception, body and creativity. From this we outline of intervention possibilities for DCR teaching. We understand that they ought not to study, research, write about Dance, one consisting phenomenon of imperceptible variables, by following a predefined method, based on certain assumptions. We commit to develop a theoretical research, a reflection on Dance, incited to argue and write about this phenomenon, enabling new syntheses go to meet the sense and meaning from our study, of our work. We find, in the dialogic relationship movement, possibilities for "doing dance" of expressive and communicative way, taking into account the senses and meanings intertwined in the movement of the subject danceable. / Deparamo-nos com as críticas acerca do dançar e do fazer dança por meio de técnicas ou não técnicas embasadas na repetição e cópia de movimentos, estudos que nos alertam à necessidade de aprofundamentos teóricos para legitimar a Dança e o dançar enquanto expressão e comunicação. Pensando na Dança em Cadeira de Rodas (DCR) enquanto uma manifestação de Dança crescente em busca de espaços para além da padronização de movimentos e gestos, traçamos como objetivo central deste estudo estabelecer relações entre a Teoria do Se-Movimentar Humano com o ensino da DCR. Para isso, ansiamos constituir aprofundamentos teóricos sobre a Dança que originaram apontamentos sobre aspectos inerentes ao tema, como expressividade, sensibilidade, percepção, corpo e criatividade. A partir disso, delineamos possibilidades de intervenção para o ensino da DCR. Compreendemos que não convém estudar, pesquisar, escrever sobre a Dança, um fenômeno constituído de variáveis imperceptíveis, seguindo um método predefinido, alicerçado em pressupostos determinados. Comprometemo-nos a desenvolver uma pesquisa teórica, uma reflexão sobre a Dança, incitados a argumentar e a escrever sobre esse fenômeno, possibilitando às novas sínteses ir ao encontro do sentido e do significado do nosso estudo, do nosso trabalho. Encontramos, na relação dialógica de movimento, possibilidades para um fazer dança de forma expressiva e comunicativa, levando-se em consideração os sentidos e os significados imbricados no movimento do sujeito dançante.
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Les règles de preuve et les évolutions du droit du travail / Rules of the proof and the evolutions of the labor law

Terroux-Sfar, Florence 27 January 2012 (has links)
Le droit du travail a connu au cours de ces trente dernières années des évolutions remarquables avec, d’une part, l’apparition de nouvelles technologies de l’information et de la communication au sein des entreprises et, d’autre part, l’émergence de l’exigence de justification. Alors que les employeurs sont désormais tenus d’énoncer leurs raisons d’agir et que les salariés travaillent sur des postes informatisés, se pose la question de savoir dans quelle mesure ces nouvelles caractéristiques du monde du travail ont modifié les règles de preuve applicables en la matière. Si la charge de la preuve ne paraît pas avoir été affectée par ces différentes évolutions, il en va différemment de l’objet de la preuve. En effet, l’apparition des toutes dernières technologies de l’information et de la communication participe, au-delà des apparences, à un déplacement de l’objet de la preuve, les salariés ayant désormais accès à de nouveaux éléments de preuve susceptibles d’emporter la conviction des juges. Par ailleurs, l’exigence de justification invite les juges à contrôler plus avant la décision des employeurs. Ces derniers doivent en effet désormais expliciter leurs raisons d’agir. Cela signifie concrètement qu’ils ne peuvent se contenter d’invoquer des faits objectifs, ils doivent encore convaincre les juges de la justesse de leurs décisions en détaillant les ressorts de ces dernières. Ainsi, alors que la doctrine classique avait pour habitude d’affirmer que l’offre de preuve attendue des plaideurs porte sur des faits pertinents, contestés et contestables, l’exigence de justification nous amène à ajouter des faits « contextués », c’est-à-dire des faits articulés au sein d’un discours cohérent et si nous avions pu penser dans un premier temps que l’émergence de l’exigence de justification se traduise par une part croissante de subjectivité dans les décisions de justice, force est de reconnaître au contraire que le contrôle des juges s’est renforcé / The labor law knew during these last thirty years remarkable evolutions with the appearance of new information technologies and communication in the companies and, the creation of “justification’s requirement”. In the mean time employers are now obliged to detail the motivations of their actions and the employees are working more and more on informatics work station. It’s important to understand how these new characteristics have modified the application of the rules of the proof. If the proof’s burden seems to not have been affected by these evolutions, it is not the same about the proof’s object. Indeed, beyond the appearances, the new information and communication technologies lead to a modification of the proof object by giving to the employees the access of new elements of proof susceptible to influence the judge’s conviction. Besides, the “justification’s requirement” invites the judges to better control the employer’s decision. They have now the obligation to clarify their reasons for action. Concretely it means that, to support their claims, they can’t just argue objective facts to convince the judge but they have to justify the logic of their decisions. So, while the classic doctrine had for practice to expect relevant, controversial and questionable facts as proof objects, the “justification’s requirement” brings us to add “sensible facts" (facts articulated within a coherent speech). If at the first time, we could think that the “justification’s requirement” emergence will lead to subjective decision, we are obliged to admit the reinforcement of the judge control.
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Um passeio enativo com Acidum: arte urbana em Fortaleza e a criação de ficções pela cidade / Un paseo enactivo con Acidum: arte urbano en Fortaleza y la creación de ficciones por la ciudad

Farias, Carla Galvão January 2015 (has links)
FARIAS, Carla Galvão. Um passeio enativo com Acidum: arte urbana em Fortaleza e a criação de ficções pela cidade. 2015. 135f. – Dissertação (Mestrado) – Universidade Federal do Ceará, Instituto de Cultura e Arte, Programa de Pós-graduação em Artes, Fortaleza (CE), 2015. / Submitted by Márcia Araújo (marcia_m_bezerra@yahoo.com.br) on 2015-12-22T14:17:11Z No. of bitstreams: 1 2015_dis_cgfarias.pdf: 4157009 bytes, checksum: e20fbf07871f936661ed3b1beffcf9a8 (MD5) / Approved for entry into archive by Márcia Araújo(marcia_m_bezerra@yahoo.com.br) on 2015-12-22T14:48:47Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_dis_cgfarias.pdf: 4157009 bytes, checksum: e20fbf07871f936661ed3b1beffcf9a8 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-12-22T14:48:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_dis_cgfarias.pdf: 4157009 bytes, checksum: e20fbf07871f936661ed3b1beffcf9a8 (MD5) Previous issue date: 2015 / Este estudo trata da relação da arte com a cidade, pensando a arte contemporânea como possibilidade de criação de outras cidades ao provocar diferentes modos de olhar, sentir, imaginar e inventar o espaço-tempo urbano. Interessa pesquisar as intervenções artísticas do coletivo Acidum, em Fortaleza, observando como a arte urbana pode interferir nos modos de ser, de pensar e de viver, criando ficções, modificando o espaço. A pesquisa acontece como um exercício, considerando as contribuições teórico-metodológicas dos estudos de Francisco Varela (1991,2001), em especial, a Abordagem Enativa, que compreende a cognição como a invenção de realidades, opondo-se à noção representativa de uma realidade pré-definida a ser revelada pelo pesquisador. O pesquisar emerge no observar, acompanhando algumas intervenções do coletivo, atualizadas nas anotações do diário de bordo, analisando vídeos e fotografias e realizando “entrevistas enativas”, proposição apresentada nos estudos de Letícia Maria Renault de Barros (2010). O que faz com que algumas imagens produzam inquietação e outras não? Como as intervenções do Acidum afetam os modos de transitar e de olhar a cidade? No percurso da pesquisa, alguns conceitos colaboraram com as análises, em especial, Partilha do Sensível e Ficções, apresentados por Jacques Rancière (2005; 2010). Nessa perspectiva, enfatizo a relação entre arte e política trazendo também contribuições dos estudos de Giorgio Agamben, Hannah Arendt, Chantal Mouffe, Didi-Huberman e Gilles Deleuze. A arte do Acidum pode afetar a cidade à medida que produz imagens que provocam deslocamentos nos modos de olhar daqueles que caminham e as observam. A arte urbana pode problematizar criativamente o cotidiano, abrindo caminhos para a invenção de outras realidades. Constituindo resistências moleculares que florescem em meio à solidez dos preconceitos e das concepções endurecidas. Não seria essa uma função da arte, mas uma potência. / Este estudio trata la relación del arte con la ciudad, pensando el arte contemporáneo como la posibilidad de crear otras ciudades por provocar diferentes maneras de ver, sentir, imaginar e inventar el espacio-tiempo urbano. Me interesa investigar las intervenciones artísticas del colectivo Acidum en Fortaleza, ver como el arte urbano puede interferir en las formas de ser, de pensar y de vivir, creando ficciones, modificando el espacio. La búsqueda se lleva a cabo como un ejercício, teniendo en cuenta los aportes teóricos y metodológicos de los estudios de Francisco Varela (1991.2001), en particular el enfoque enactivo, que comprende la cognición como la invención de realidades, oponiéndose a la idea representativa de una realidad predefinida para ser revelada por el investigador. La búsqueda surge com el observar, acompañando algunas intervenciones del colectivo, actualizadas a través de las notas en el diario de campo, analizando videos y fotos y haciendo "entrevistas enactivas" propuesta presentada en los estudios de Leticia Maria Renault de Barros (2010). ¿Qué hace que algunas imágenes produzcan inquietud y outras no? ¿Como las intervenciones de Acidum afectan los modos de transportar y de mirar la ciudad? En el curso de la investigación, algunos conceptos colaboraron con el análisis, en particular, División de lo sensible y Ficciones, presentados por Jacques Rancière (2005; 2010). En esta perspectiva, subrayo la relación entre el arte y política trayendo también las contribuciones de los estudios de Giorgio Agamben, Hannah Arendt, Chantal Mouffe, Didi-Huberman y Gilles Deleuze. El arte de Acidum puede afectar a la ciudad por producir imágenes que causan cambios en las formas de ver de aquellos que caminan y observan. El arte urbano puede discutir de manera creativa el cotidiano, abriendo el camino para la invención de otras realidades. Constituyendo resistencias moleculares que florecen en medio a la solidez de los prejuicios y concepciones endurecidos. No sería una función del arte, sino una potencia.
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Etude des propriétés photophysiques de dérivés de l’oxyluciférine et leurs applications à l’étude d’interactions entre biomolécules / Study of the photophysical properties of oxyluciferin derivatives and their applications to the characterization of interactions between biomolecules

Ghose, Avisek 17 February 2015 (has links)
Dans ce travail, nous avons étudié le mécanisme d'émission de la partie optiquement active du complexe luciférine-luciférase. Ce système bioluminescent est largement utilisé dans un très grand nombre d'approches bioanalytiques. Ce phénomène naturel résulte en l'émission de lumière visible (vert-jaune-rouge) à partir du photoproduit : l’oxyluciférine. Une des hypothèses couramment admise pour expliquer le mécanisme d’émission de l’oxyluciféreine fait intervenir un équilibre complexe entre six espèces chimiques, mais le détail exact du mécanisme reste à élucider. Les principales conclusions présentées ici repose sur l'identification des six formes chimiques de l’oxyluciférine impliquées dans le mécanisme d'émission de fluorescence et la caractérisation d’un point de vu dynamique du transfert de proton à l’état excité. Ces résultats ont été obtenus par l'étude des propriétés optiques de différents analogues structuraux de l’oxyluciférine dans un tampon aqueux. Différent techniques de spectroscopie (état stable et résolue en temps) et des approches chimiométriques ont été appliquées pour étudier ce mécanisme d'émission. En outre, les propriétés photophysiques de l’oxyluciférine en complexe avec l'enzyme luciférase (Luciola cruciata) ont été étudiées également en milieu aqueux. En parallèle, les dérivés présentant des propriétés d’émission sensibles à l’environnement ont été utilisés pour visualiser l'interaction entre biomolécules. En particulier, nous avons démontré que l’oxyluciférine peut être utilisée pour cartographier le pH intracellulaire à l'aide de la microscopie de fluorescence dans des cellules vivantes. Avec l'aide d'un autre dérivé de l'oxyluciférine nous avons été en mesure de caractériser l'interaction entre une protéine du VIH-1 et des séquences d'oligonucléotide au moyen de mesures ratiométriques. Enfin, nous avons développé une approche basée sur le marquage de résidus cystéine pour suivre, in vitro, l'interaction protéine-protéine. / In this work, we investigated the emission mechanism of the optically active part of the firefly luciferin-luciferase complex. This bioluminescent system is widely used in bioanalytical assay. This amazing natural phenomenon results in the emission of visible light (yellow-green-red) from the photoproduct Oxyluciferin. This color tuning mechanism involves six chemical species, but their active involvement in the excited state proton transfer (ESPT) mechanism was poorly understood so far. One of the main finding presented here relies on the identification of six chemical forms of Oxyluciferin involved in the color tuning fluorescence emission mechanism. This result was obtained by studying the optical properties of different structural analogues of firefly Oxyluciferin in aqueous buffer. Different spectroscopic (steady state and time-resolved) and chemometric approaches have been applied to reveal the emission mechanism. In addition, the photophysical properties of Oxyluciferin in complex with the Luciferase enzyme Luciola cruciata have been studied in aqueous buffer as well. In parallel, derivatives displaying environment sensitive emission were used to monitor biomolecular interactions. In particular, we demonstrated that Oxyluciferin can be employed to map intracellular pH by using fluorescence microscopy within living cells. With the help of another Oxyluciferin derivative we were able to monitor the interaction between a HIV-1 protein and different oligonucleotide sequences by means of ratiometric measurements. Finally we develop an approach based on cysteine labeling to monitor in vitro protein-protein interaction.

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