Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2017-02-16T14:35:21Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Tese Livia de Almeida Lira_ POSNEURO 2016.pdf: 2312565 bytes, checksum: 6dc0de86f266e98ad31d5c7c89d2219e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-16T14:35:22Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Tese Livia de Almeida Lira_ POSNEURO 2016.pdf: 2312565 bytes, checksum: 6dc0de86f266e98ad31d5c7c89d2219e (MD5) Previous issue date: 2016-02-26 / FACEPE / O controle do comportamento alimentar é um fenômeno complexo dependente da interação entre os sinais originados na periferia do corpo e em várias regiões do sistema nervoso central, incluindo o núcleo do trato solitário (NTS). Esse núcleo regula muitos aspectos do comportamento alimentar e expressa receptores para vários peptídeos e hormônios indutores de saciedade, incluindo a serotonina. Prejuízos na via de sinalização e no conteúdo encefálico deste neurotransmissor estão associadas à hiperfagia e obesidade. Algumas regiões encefálicas responsáveis pela regulação do comportamento alimentar são alvos de ajustes permanentes promovidos por eventos que ocorrem durante os estágios iniciais do desenvolvimento. Nessa fase, a influência de estímulos ambientais, particularmente os nutricionais, podem modular os eventos ontogenéticos e promover sérias consequências na vida adulta. Nesse estudo, o objetivo foi investigar os efeitos da desnutrição proteica perinatal sobre aspectos morfofuncionais do NTS relacionados ao controle do comportamento alimentar. Ratos da linhagem Wistar, mantidos em condições padrões de biotério foram distribuídos aleatoriamente em dois grupos de acordo com a dieta ofertada para mães durante a gestação e lactação: grupo controle (C, caseína 17% / n = 10) ou grupo desnutrido (D, caseína 8% / n =10). Foram avaliados aos 35 e 180 dias de vida: a) peso corporal; b) ingestão alimentar; c) expressão da proteína FOS nas regiões rostral e medial do NTS em resposta ao estímulo alimentar; d) sequência comportamental de saciedade e os parâmetros microestruturais da alimentação e apenas aos 35 dias de vida: e) densidade de terminais e distribuição de receptores serotoninérgicos 5-HT1B nos subnúcleos ventrolateral, intermediário, medial e comissural do NTS. As áreas estudadas foram identificadas e quantificadas com auxílio do atlas estereotáxico de Paxinos e Watson (1998). Com base nessas avaliações, o presente trabalho demonstrou que a desnutrição perinatal promove: 1) redução do peso corporal (35 dias: C=129.06±0.20; D=68.10±0.35; 180 dias: C = 435.70±0.70; D = 370.30±0.70); (2) hiperfagia (35 dias: C = 6.8±0.6; D = 11.9±0.9; 180 dias C = 6.6±0.4; D = 10±0.8); (3) retardo na saciedade, (4) aumento no tamanho (C= 5,5 ±0,43; D= 7,8± 0,57) e duração (C=14,3± 1.8; D= 20,4±1,7) das refeições; (5) aumento na ativação neuronal nas porções rostral (35 dias: C = 134.5±22.23; D= 366.8±58.02/ 180 dias = 240.6±38.10; D = 444.2±57.05) e medial do NTS (35 dias: C = 172.8±26.28; D= 435.2±72.69/180 dias: C= 224.4±33.10; D= 434.0±45.31); (6) aumento na densidade de terminais serotoninérgicos no NTS (C= 34,4 ± 1,5 n= 5; D= 48± 3,6) e no subnúcleo intermediário (C= 28,3 ± 2; D= 43± 1,5) e (7) maior quantidade de neurônios 5-HT1B-IR no NTS (C= 159,6± 18,2;D= 317,1± 18,6) e nos subnúcleos ventrolateral (C= 20,1± 2,7/N=5D= 34,4± 3,5), intermediário (C= 20,9± 2,8/N=5; D= 49,3± 3) e medial (C= 45,6 ± 6/N=5; D= 95,4± 6). Estes resultados indicam que o NTS é uma estrutura particularmente vulnerável às influências da manipulação nutricional nos estágios iniciais do desenvolvimento e pode ser alvo de processos adaptativos do controle comportamento alimentar observados nesses animais na vida adulta. / The control of feeding behavior is dependent on the interactions among a variety of signals originated from periphery and several brain areas, such as the nucleus of the solitary tract (NTS) in the caudal brainstem. This nucleus regulates many aspects of feeding behavior and expressed receptors for several satiety inducing peptides and hormones including serotonin. Losses in the signaling pathway and the brain content of this neurotransmitter are associated with hyperphagia and obesity. Some brain regions responsible for the regulation of feeding behavior are targets of permanent adjustments promoted by events that occur during the early stages of development. At that stage, the influence of environmental stimuli, particularly the nutritional, may modulate ontogenetic events and promote serious consequences in adult life. In this study, the main aim was to investigate the effects of perinatal protein malnutrition on morphological and functional aspects of the NTS related to control of feeding behavior. Male Wistar rats were divided into two groups according to the diet offered to the dams during gestation and lactation: control group (C, diet containing 17% casein/ n=10) or isocaloric lowprotein group (LP, diet containing 8% casein/ n=10). We evaluated: a) body weight; b) food intake; c) c-Fos protein expression in the rostral and medial NTS; d) behavioural sequence satiety and micro-structural parameters of feeding and e) density of serotoninergic terminals and distribution of 5-HT1B receptor in the ventro-lateral, intermediate, medial and commissural subnucleus of NTS. The areas studied were identified and quantified with Stereotactic atlas of Paxinos and Watson (2005). Based on these evaluations, the present study showed that the malnutrition: (1) promotes perinatal) reduced body weight (35 days: C = 129.06 ± 0.20; D = 68.10 ± 0.35; 180 days: C = 435.70 ± 0.70; D = 370.30 ± 0.70); (2) hyperphagia (35 days: C = 6.8 ± 0.6; D = 11.9 ± 0.9; 180 days C = 6.6 ± 0.4; D = 10 ± 0.8); (3) delay in satiety, (4) increase in size (C = 5.5 ± 0.43; D = 7.8 ± 0.57) and duration (C = 14.3 ± 1.8; D = 20.4 ± 1.7) meals; (5) increase in neuronal activation in the rostral portions (35 days: C = ± 134.5 22.23; D = ± 366.8/58.02 180 days = 240.6 ± 38.10; D = ± 444.2 57.05) and medial NTS (35 days: C = 172.8 ± 26.28; D = ± 72.69/180 days 435.2: C = ± 224.4 33.10; D = ± 45.31 434.0); (6) increase in density of serotonergic terminals in the NTS (C = 34.4 ± 1.5 n = 5; D = 48 ± 3.6) and the intermediate subnucleus (C = 28.3 ± 2; D = 43 ± 1.5) and (7) increased amount of 5-HT1B-IR neurons in the NTS (C = 159.6 ± 18.2; D = 317.1 ± 18.6) and ventro-lateral (C = 20.1 ± 2.7/N = 5 d = 34.4 ± 3.5), intermediate (C = 20.9 ± 2.8/N = 5; D = 49.3 ± 3) and medial subnucleus (C = 45.6 ± 6/N = 5; D = 95.4 ± 6). These results indicate that the NTS is a particularly vulnerable structure to the influences of nutritional manipulation in the early stages of development and may be adaptive processes of control feeding behavior observed in these animals into adulthood.

Submitted by Rafael Santana (rafael.silvasantana@ufpe.br) on 2017-05-12T18:27:18Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação.pdf: 1932966 bytes, checksum: e5c87665e0d22baf18bc136471875d00 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-12T18:27:18Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação.pdf: 1932966 bytes, checksum: e5c87665e0d22baf18bc136471875d00 (MD5) Previous issue date: 2016-03-04 / FACEPE / Diversos estudos evidenciaram os efeitos da desnutrição perinatal sobre alterações morfofisiológicas no organismo adulto. No presente estudo, foi verificado os efeitos da desnutrição proteica perinatal sobre a expressão de receptores 5-HT1B nos núcleos paraventricular (PVN) e arqueado do hipotálamo, e no Caudado-Putamem (CPu) e Amigdala Basolateral (ABL). Além disso, foi analisado ainda os efeitos que essa desnutrição promoveu sobre a ativação neural no CPu, ABL e na Amigdala Central (AC). Foram utilizados dois principais grupos de ratos da linhagem Wistar: um grupo submetido a desnutrição proteica (8% caseína) durante o período da gestação e lactação; e o outro com dieta padrão (17% caseína). No 35º dia de vida os animais foram subdivididos em quatro grupos: Desnutrido que recebeu solução salina (D), Desnutrido que recebeu d-fenfluramina (DF), Controle que recebeu solução salina (C) e Controle que recebeu d-fenfluramina (CF), nas proporções de 3mg/kg p.c para fenfluramina e 1ml/kg para solução salina. Observou-se maior número de células imunorreativas (p<0,01) ao 5-HT1B na ABL no grupo desnutrido (33,8 ± 10,05, n=4) comparado ao controle (5,3 ± 1,53, n=3), enquanto que no CPu não houve modificação. No hipotálamo, foi verificado aumento de células 5-HT1B no grupo desnutrido comparado ao controle nos núcleos ARC (C= 14,3 ± 6,66, n=3 versus D= 26,8± 4,19, n=4, p<0,01) e PVN (C= 30 ± 8,19, n=3 versus D= 58,3 ± 16,66, n=4, p<0,05). Após a administração de fenfluramina, houve aumento no número de neurônios imunorreativos a proteína FOS no grupo desnutrido fenfluramina comparado ao desnutrido salina no CPu (D= 26,5 ± 21,56, n=4 versus DF= 106,5 ± 40,45, n=4, p<0,05) e AC (D= 13,6 ± 8,17, n=5 versus DF= 64 ± 31,48, n=3, p<0,05). No grupo controle, a fenfluramina não alterou o número de células ativadas no CPu (C= 16,5 ± 7,78, n=2 versus CF= 63 ± 39,28, n=3, p>0,05) e AC (C= 6,3 ± 4,93, n=3 versus CF= 44 ± 26,33, n=5, p>0,05). Não houve alteração no número de células imunorreativas a proteína FOS na ABL no grupo controle (C= 5 ± 3,37, n=4 versus CF= 21,3 ± 11,35, n=4, p>0,05) ou desnutrido (D= 20 ± 13,64, n=4 versus DF= 14,4 ± 3,13, n=5, p>0,05) quando comparados aos seus respectivos grupos salina. Este estudo evidenciou que a desnutrição proteica no período perinatal acarreta aumento na expressão de células imunorreativas contra o receptores 5-HT1B nos núcleos ARC, PVN e ABL tal como aumenta a ativação de neurônios no CPu e na AC em resposta a fenfluramina. / Several studies have shown the effects of perinatal malnutrition on morphological and physiological changes in the adult organism. In the present study was investigated the effects of perinatal protein malnutrition on the expression of 5-HT1B receptors in the paraventricular nucleus (PVN) of the hypothalamus, arcuate, caudate-putamen (CPu) and basolateral amygdala (GLA). In addition, it was analyzed the effects that malnutrition promoted on the neural activation of the CPu, Central GLA and the amygdala (AC). Two main groups of rats Wistar were used: A group subjected to protein malnutrition (8% casein) during the period of pregnancy and lactation and the other with standard diet (17% casein). On the 35th day of life the animals were divided into four groups: Malnourished received saline (D) Malnourished that received dfenfluramine (DF), control which received saline (C) and control that received dfenfluramine (CF) in the proportions of 3 mg/kg of BW fenfluramine and 1 ml/kg for saline. There were a higher number of immunoreactive cells (p <0.01) to the 5-HT 1B in the ABL in the undernourished group (33.8 ± 10.05, n = 4) compared to the control (5.3 ± 1.53, n = 3), whereas in the CPu no change was observed. In the hypothalamus, it was observed increase of 5-HT 1B cells in the undernourished group compared to the control in ARC cores (C = 14.3 ± 6.66, n = 3 and D = 26.8 ± 4.19, n = 4, p <0.01) and the PVN (C = 30 ± 8.19, n = 3 and D = 58.3 ± 16.66 n = 4, p <0.05). After administration of fenfluramine, there was an increase in the number of immunoreactive neurons FOS protein in malnourished group fenfluramine compared to saline undernourished in CPu (D = 26.5 ± 21.56, n = 4 and DF = 106.5 ± 40.45 , n = 4, p <0.05) and AC (D = 13.6 ± 8.17, n = 5 and 31.48 ± DF = 64, n = 3, p <0.05). In the control group, fenfluramine did not change the number of activated cells in CPu (C = 16.5 ± 7.78, n = 2 and CF = 63 ± 39.28, n = 3, p> 0.05) and AC (C = 6.3 ± 4.93, n = 3 and CF = 44 ± 26.33, n = 5, p> 0.05). There was no change in the number of immunoreactive cells FOS protein in the ABL in the control group (C = 5 ± 3.37, n = 4 and CF = 21.3 ± 11.35, n = 4, p> 0.05) or malnourished (D = 20 ± 13.64, n = 4 versus DF = 14.4 ± 3.13, n = 5, p> 0.05) when compared to their saline groups. This study showed that the protein malnutrition in the perinatal period causes an increase in the expression of immunoreactive cells against the 5-HT 1B receptors in the ARC cores, PVN and ABL as well as increases the activation of neurons in the CPu and AC in response to fenfluramine.

A habenula lateral (LHb) inibe neurônios dopaminérgicos no mesencéfalo através de um nodo GABAérgico no tegmento mesopontino, o núcleo tegmental rostromedial (RMTg). Ambos a LHb e o RMTg também projetam para o núcleo dorsal da rafe (DR). A organização das projeções da LHb e do RMTg para o DR foi investigada através de injeções de um traçador anterógrado na LHb ou no RMTg e confirmada com injeções de traçadores retrógrados. Para identificar o fenótipo neuroquímico das projeções RMTg-DR, combinamos a hibridização in situ para mRNA de GAD67 com a detecção imunoistoquímica de traçadores retrógrados injetados no DR. Caracterizamos as subdivisões-alvo das projeções RMTg-DR através de dupla-imunofluorescência para o traçador anterógrado injetado no RMTg e serotonina ou o transportador vesicular de glutamato do tipo 3. Detectamos uma projeção focal direta da divisão medial da LHb para a parte caudal do DR. Em contraste, projeções GABAérgicas robustas do RMTg foram direcionadas para uma subdivisão central do DR enriquecida em neurônios presumidamente glutamatérgicos. / The lateral habenula (LHb) inhibits mesencephalic dopamine neurons through a mesopontine GABAergic node, the rostromedial tegmental nucleus (RMTg). Both LHb and RMTg also project to the dorsal raphe nucleus (DR). The organization of LHb and RMTg projections to the DR was investigated using anterograde tracer injections into the LHb or RMTg and confirmed with retrograde tracer injections. To identify the neurochemical phenotype of RMTg-DR projections, we associated in situ hybridization for GAD67 mRNA with immunohistochemical detection of retrograde tracers deposited in the DR. DR target regions of RMTg projections were characterized using double-imunofluorescence techniques for the anterograde tracer deposited into the RMTg and either serotonin or the type 3 vesicular glutamate transporter. We detected a focal direct projection from the medial LHb division to the caudal DR. In contrast the RMTg emits robust GABAergic projections to a central DR subdivision rich in presumptive glutamatergic neurons.

A serotonina (5-HT) é um neuro-hormônio com complexos efeitos em humanos e animais. Embora se acredite que a sinalização serotoninérgica promova o desenvolvimento de tumores de cólon, também tem sido observado que a redução dos níveis de 5-HT aumenta o risco de malignidades neste órgão. Assim, é necessário investigar como a síntese de 5-HT modula a carcinogênese de cólon. Esta hipótese será explorada em experimentos mecanísticos envolvendo a exposição ou não de camundongos a um agente carcinogênico (azoximetano). Estes experimentos revelaram que a exposição carcinogênica aumentou a síntese de 5-HT no cólon, uma vez que os processos de liberação e degradação de 5-HT foram reduzidos, enquanto que a sua síntese e recaptação aumentaram. Após 24 semanas da 1° exposição carcinogênica, a deleção da síntese de 5-HT promoveu a multiplicidade tumoral no cólon, enquanto que ao longo de 12 semanas ocorreu um aumento de lesões preneoplásicas e proliferação celular. É interessante que 72 hrs após a sexta e última exposição carcinogênica o número de criptas aberrantes foram detectadas reduzidas na ausência de 5-HT, o que ocorreu em conjunto com uma redução da atividade proliferativa, aumento de células apoptóticas, e maior dano de DNA. Finalmente, a 5-HT modulou mecanismos de reparo genômico. Concluímos que a síntese serotoninérgica parece ser um fator de proteção do cólon intestinal, que caso inibida facilitaria o desenvolvimento tumoral neste tecido. / Serotonin (5-HT) is a neurohormone with complex effects in humans and animals. Although serotonergic signaling has been suggested to promote the development of colon tumors, the reduction in 5-HT levels was reported to increase the risk of colon cancer. Here, we sought to investigate how 5-HT synthesis modulates colon carcinogenesis. This hypothesis was explored in mechanistic experiments that carcinogenically exposed or not mice to azoxymethane. It revealed that carcinogenic exposure increased the synthesis of 5-HT in the colon since 5-HT release and decay were inhibited, while its synthesis and reuptake are promoted. After 24 weeks from the first carcinogenic exposure, the deletion of 5-HT synthesis increased tumor multiplicity, while following 12 weeks it promoted the development of preneoplastic lesions, and cell proliferation in the colon. Interestingly, 72 hrs after the sixth and last carcinogenic exposures the number of aberrant crypts were detected reduced in the absence of 5-HT, which occurred together with a reduced proliferation, but increased apoptosis and DNA damage. Finally, 5-HT modulated genomic repair mechanisms. We conclude that serotonergic synthesis seems to be a protective factor of the intestinal colon, which inhibited case facilitates tumor development in this tissue.

Dadas a elevada prevalência e os grandes prejuízos sociais, familiares e pessoais que caracterizam o envolvimento patológico com jogos de azar, torna-se necessária a investigação sistemática de fatores de vulnerabilidade e de resistência que possam influir no desenvolvimento de tais condições. Uma das principais estratégias utilizadas para a profilaxia e tratamento dessas formas de envolvimento patológico tem sido a investigação dos componentes biológico-genéticos do Jogo Patológico (JP). O presente estudo objetivou investigar a associação de polimorfismos de genes candidatos do sistema serotonérgico e JP em pares de irmãos discordantes para este diagnóstico. Participaram do estudo 140 pares de irmãos discordantes para o diagnóstico de JP pelos critérios do Manual Diagnóstico e Estatístico da Associação Psiquiátrica Americana, DSM-IV. Foram genotipados os seguintes polimorfismos de genes que codificam: o transportador da serotonina (polimorfismo 5HTTLPR-l/s), o receptor serotoninérgico subtipo 1B (5HT1B G861C), e o receptor serotoninérgico subtipo 2A (polimorfismos 5HT2A T102C e C516T). Na análise estatística observou-se uma maior distribuição do alelo C do polimorfismo T102C do gene 5HT2A no grupo de irmãos com o diagnóstico de JP (p<0,01), sugerindo uma possível contribuição desse alelo na predisposição ao JP. Entretanto, faz-se necessária a investigação desses polimorfismos em amostras independentes envolvendo o fenótipo JP para a confirmação dos achados apresentados nesse trabalho. Uma análise preliminar dos haplótipos (102 e 516) apresentou resultados inconclusivos. É interessante notar que há associação entre esse polimorfismo e manifestações psiquiátricas outras que não o JP. / The high prevalence and the great social, familial and personal hazards that appear along with the occurrence of pathological involvement in gambling makes it necessary to systematically investigate vulnerability and resilience factors that may influence the development of such a condition. One of the main strategies in prevention and treatment of these pathological behaviors has been the investigation of the biological-genetic basis of pathological gambling (PG). The present study aimed to determine any association between candidate gene polymorphisms of the serotoninergic system and the occurrence of PG in sib-pairs discordant for this diagnosis. One hundred and forty (140) PG-discordant sib-pairs were evaluated by the Diagnostic and Statistical Manual from the American Psychiatric Association (DSM-IV), who had already been previously genotyped in other studies. We genotyped the polymorphisms which codified: the serotonin transporter (5HTTLPRl/ s polymorphism), the serotonergic receptor subtype 1B (5HT1B G861C polymorphism), and the serotonergic receptor subtype 2A (T102C and C516T polymorphisms). Statistical analysis revealed a greater distribution of the C allele of the T102C polymorphism of the 5HT2A gene in the gambling sib group (p<0,01), suggesting a possible contribution of this allele in the predisposition for PG. Nevertheless, it is necessary to further investigate these polymorphisms in independent samples involving PG phenotype for the adequate confirmation of such findings. A preliminary analysis of the haplotypes (102 and 516) show inconclusive results. It is noteworthy that there are previous associations between this polymorphism and psychiatric manifestations other than PG.

Foram estudados os efeitos de um estresse social, produzido pela introdução de um rato, na condição de \"intruso\", por uma hora, em uma comunidade formada por três elementos (macho dominante, macho submisso e fêmea), com relações sociais pré-estabelecidas, sobre o comportamento, a bioquímica e a atividade imune inata de neutrófilos. Os animais intrusos apresentaram, em relação ao grupo controle, tendência a serem mais ativos e menos ansiosos no Campo Aberto e no Labirinto em Cruz Elevado, níveis significantemente mais elevados de corticosterona sérica, burst oxidativo induzido por SAPI significantemente aumentado e, tanto no córtex frontal como no hipotálamo, sistemas serotonérgicos significantemente mais ativados. Os dados, foram interpretados como decorrentes de uma reação de estresse preparando o organismo dos animais intrusos para novo desafio: um eixo HPA mais ativado, com conseqüências favoráveis para uma ação rápida; uma resposta imune inata mais efetiva, para defesa contra possíveis injúrias e uma neuroquímica denotando um refreamento de comportamentos impulsivos, permitindo escolhas mais adequadas em contexto de confrontação social. Essa reação tornou os organismos mais ativos e eficazes, um exemplo do aspecto positivo do estresse. Demonstrou-se, também, a existência e importância das grandes diferenças individuais e necessidade de se tratar estatisticamente e interpretar com muito cuidado os efeitos de estímulos estressores mais sutis, onde essas diferenças despontam com menor clareza e podendo induzir a erro interpretativo. / The present works shows the effects of social stress, produced by introducing a rat, in the condition of \"intruder\", for one hour, in a community formed for three elements namely a dominant male , submissive male and a female, with preset social relations, concerning their behaviour, the biochemistry and the innate immune activity of neutrophils. The intruder animals displayed, in relationship to the control group, a tendency towards being more active and less anxious in the Open Field and the Plus Maze, as well as of serum corticosterone levels with higher values, as well as its oxidative burst being significantly increased. And, as in the frontal cortex as in hypothalamus is concerned, the author found significant activation of serotonergic systems. The data, had been indicative of the function of the reaction of stress in order to prepare the organism for a challenge: a activated HPA axis was increased, with favorable consequences for a fast action; an innate immune reply more effective and neurochemistry denoting cohibition of impulsive behaviours, allowing more adjusted choices in the context of social confrontation This reaction turned the organisms more active and efficient, in an example of the positive aspect of stress reaction. The data also demonstrated the existence and importance of the great individual differences and the need of keeping in mind the statistic approach and very careful interpretation of subtle stressors, whenever these differences appear clearly and may eventually induce to an interpretative error.

Introdução: O óxido nítrico (NO) tem sido relacionado como um importante neuromodulador envolvido com a neurobiologia da adaptação ao estresse e da depressão. De fato, a administração sistêmica ou intra-hipocampal de inibidores da NO sintase neuronial (nNOS) induz efeitos do tipo antidepressivo em modelos animais. Evidências recentes indicam que os efeitos sistêmicos dos inibidores da nNOS são dependentes dos níveis de serotonina no encéfalo. O sistema serotoninérgico do hipocampo dorsal, por ativação dos receptores serotoninérgicos do tipo 1A (5HT1A), facilita a adaptação ao estresse e contribui para os efeitos comportamentais de drogas antidepressivas. Portanto, o objetivo do presente estudo foi testar a hipótese de que o efeito do tipo antidepressivo induzido pela administração hipocampal de inibidores da nNOS seria mediado pela facilitação da neurotransmissão serotoninérgica local e subseqüente ativação de 5HT1A. Métodos: Após cirurgia estereotáxica, ratos Wistar com cânulas-guia direcionadas ao hipocampo dorsal foram submetidos a sessão de pré-teste (PT 15 minutos de nado) e receberam administrações locais das drogas: N-propil-L-arginina (NPA, inibidor seletivo da nNOS: 0,00001 - 1 nmol/0,5 µL), fluoxetina (SSRI: 1, 3 e 10 nmol/0,5 µL), WAY100635 (antagonista seletivo para 5HT1A: 1, 3 e 10 nmol/0,5 µL) ou veículo (0,5 µL). 24h depois, o tempo de imobilidade foi registrado em uma sessão de 5 minutos de nado. Todos os protocolos foram aprovados por um comitê de ética local (Proc. No 08.1.1133.53.4) Resultados: A administração intra hipocampal de NPA ou fluoxetina reduziu significativamente o tempo de imobilidade em animais submetidos ao teste do nado forçado, um efeito tipo antidepressivo. A administração de WAY100635 não induziu efeito por si, mas foi capaz de bloquear os efeitos induzidos por fluoxetina ou NPA. Conclusões: A inibição da nNOS, pelo NPA, ou a inibição da recaptação de serotonina, pela fluoxetina, no DH induziu efeito do tipo antidepressivo de similar magnitude. O fato de que o pré-tratamento com WAY100635 foi capaz de bloquear os efeitos induzidos por NPA e fluoxetina indica que ambos os efeitos são mediados por facilitação da neurotransmissão serotoninérgica local e subseqüente ativação de 5HT1A. Assim, esses resultados sugerem que níveis aumentados de NO no DH poderiam levar a um déficit na neurotransmissão serotoninérgica local e, portanto, predispor ao desenvolvimento das conseqüências comportamentais do estresse. / Introduction: Nitric oxide (NO) has been suggested to play an important role in the neurobiology of stress adaptation and depression. In fact, systemic or hippocampal administration of neuronal NO synthase (nNOS) inhibitors induces antidepressant-like effects in animal models. Recent evidence indicates that the systemic effects of nNOS inhibitors are dependent on serotonin levels in the brain. The serotonergic system of the dorsal hippocampus (DH), through the activation of serotonin 1A (5-HT1A) receptors, is proposed to mediate stress adaptation and the behavioral effects of antidepressant drugs. Therefore, the aim of the present study was to test the hypothesis that the antidepressant-like effects induced by nNOS inhibition into the hippocampus would be mediated by a facilitation of the local serotonergic neurotransmission and subsequent 5-HT1A receptor activation. Methods: Male Wistar rats with guide-cannulae aimed at the DH were submitted to the pretest session (PT - 15 minutes of swimming) and received local administrations of the drugs: n-propyl-L-arginine (NPA, selective nNOS inhibitor: 0.00001 - 1 nmol/0.5 µL), fluoxetine (SSRI: 1, 3 and 10 nmol/0.5 µL), WAY100635 (selective 5-HT1A antagonist: 1, 3 and 10 nmol/0.5 µL) or vehicle (0.5 µL). One day later, the immobility time was registered at a 5 minutes swimming test session. All protocols were approved by a local ethical committee (Proc. N. 08.1.1133.53.4.) Results: The intrahippocampal administration of NPA or fluoxetine reduced the immobility time in animals submitted to the forced swimming test, an antidepressant-like effect in this model. WAY100635 did not induce any effect per se, but it was able to block the effects induced by fluoxetine or NPA. Conclusions: Inhibition of nNOS, by NPA, or inhibition of serotonin reuptake, by fluoxetine, in the DH induced antidepressant-like effects of similar magnitude. The fact that pretreatment with WAY100635 was able to block NPA- and fluoxetine-induced effects indicates that both effects are mediated by a facilitation of the local serotonergic neurotransmission and subsequent activation of 5-HT1A receptors. Therefore, these results suggest that increased NO levels in the DH could impair local serotonergic neurotransmission and, thus, predisposes to the development of stress-induced behavioral consequences, such as depressive-like behaviors.

Componente essencial do sistema de temporização circadiano, o núcleo supraquiasmático (NSQ) possui três aferências principais: o trato retinohipotalâmico (TRH), o trato geniculohipotalâmico (TGH) e as terminações serotonérgicas da rafe. Suas células possuem oscilação circadiana autônoma que resultam na expressão rítmica dos chamados genes do relógio. O presente estudo analisa as concentrações de 5-HT nos núcleos da rafe e NSQ de ratos em livre-curso e mostra que somente os núcleos obscuro e linear apresentam ritmos endógenos com ação determinante do ciclo claro-escuro na no ritmo diário; compara a organização intrínseca do NSQ de primatas e roedores, mostrando organização diferenciada dos terminais serotonérgicos e do TGH em relação aos do TRH sugerindo funções diferentes dessas aferências no NSQ de primatas. Além disso, o padrão de expressão dos genes do relógio no NSQ do primata ao longo do período de atividade mostrou que os genes BMAL1 e Per1 apresentam pico de expressão ao redor do ZT2 e o gene Per2 no ZT7. Os dados demonstram diferenças interespecíficas importantes nas características neuroquímicas e moleculares do NSQ. / Essential component of the circadian timing system, the suprachiasmatic nucleus (SCN) receives dense retinohypothalamic RHT, geniculohypothalamic tract GHT and serotonergic innervation arriving from the raphe nuclei. SCN has pacemaker cells that produce rhythmic expression of clock genes. This study investigates the levels of 5-HT in the raphe nuclei and SCN in free running rats and shows endogenous rhythms in the obscurus and linear raphe nuclei, which is regulated by the daily light: dark cycle rhythms. The comparative analysis of the intrinsic structure of the SCN of primates and rodents shows a different organizational pattern of serotonergic and GHT terminals and the RHT terminals, suggesting different actions of serotonin and neuropeptide Y in the control of circadian rhythmicity in primates. Moreover, the pattern of the clock genes SCN expression along the awaken period in the primates show that BMAL1 and Per1 RNAm peaks of expression occur around ZT2 and Per2 around ZT7. These data suggest that the neural organization of the circadian timing system in the studied primate differ from those of the most commonly studied rodents.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2017-06-14T12:41:46Z No. of bitstreams: 1 renataromanholipinhati.pdf: 1636769 bytes, checksum: 2040ff1c86aef423fdd77a3ebd21b33d (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2017-06-29T12:10:19Z (GMT) No. of bitstreams: 1 renataromanholipinhati.pdf: 1636769 bytes, checksum: 2040ff1c86aef423fdd77a3ebd21b33d (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-29T12:10:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 renataromanholipinhati.pdf: 1636769 bytes, checksum: 2040ff1c86aef423fdd77a3ebd21b33d (MD5) Previous issue date: 2011-08-16 / FAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / O triptofano é um aminoácido essencial e precursor da síntese de serotonina (5-HT). Variações nos níveis plasmáticos de 5-HT estão relacionadas com alterações de humor, ansiedade, depressão, sono, fadiga e supressão de apetite. Neste estudo foi desenvolvido um método simples, rápido e sensível para a quantificação de triptofano em plasma e que emprega a cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) com detector diode array (DAD) no comprimento de onda fixo de 267 nm. A separação foi realizada em coluna analítica ACE 5 C18 (150 mm x 4,6 mm de diâmetro interno e tamanho da partícula de 5 µm), o tempo de corrida foi de 10 min. A fase móvel foi constituída por solução de acetato de sódio 5 mM e acetonitrila (92:8, v/v) e modo de eluição isocrática (1 mL min-1). A preparação da amostra consistiu na desproteinização do plasma utilizando ácido perclórico 8%. O triptofano foi caracterizado no tempo de retenção de 5 min. A especificidade foi monitorada utilizando matrizes normais, lipêmicas e hemolizadas, não sendo observado nenhum pico interferente no tempo de retenção do triptofano. A linearidade do método foi detectada entre 0,5 a 30,0 µg mL-1 e os coeficientes de variação do teste de precisão foram calculados intra e inter-dia para três concentrações (2,5; 5,0 e 15,0 µg mL-1) apresentando variações de 0,26 a 1,30% (intra-dia) e 3,07 a 3,97% (inter-dia) respectivamente. Exatidão e recuperação satisfatórias foram obtidas por este método, além de utilizar pequenas quantidades de solvente orgânico, caracterizando a técnica como eficiente e ecologicamente amigável. / Trytophan is an essential amino acid and a serotonin (5-HT) synthesis precursor. Altered plasma levels of 5-HT are related to humor and behavioral alterations, anxiety, depression, sleep, fatigue and appetite suppression. In this study, a simple, fast, sensitive and specific high-performance liquid chromatography (HPLC) method was developed for determination of tryptophan with diode array detection (DAD) setting at programmed wavelength (λ = 267 nm). The separation was carried out on an analytical column ACE 5 C18 (150 mm x 4.6 mm internal diameter, 5 μm particle size) in less than 10 min. Mobile phase consisted of 5 mM sodium acetate and acetonitrile (92:8, v/v), isocratically eluted (1 mL min-1). Sample preparation consisted of plasma deproteinization with 8% perchloric acid solution. Tryptophan was characterized by a retention time of 5 min. Specificity was monitored using lipemic and hemolysate plasma samples and any peak was observed at the same retention time of tryptophan. A linear range was detected from 0.5 to 30.0 µg mL-1 and coefficients of variation calculated from intra and inter-day from 3 concentration (2.5; 5.0 e 15.0 µg mL-1) assays precision were 0.26 – 1.30% and 3.07 – 3.97% respectively. Satisfactory accuracy and recovery were obtained by this method, and use small amounts of organic solvent, characterizing the technique as an efficient and eco-friendly.

Made available in DSpace on 2014-06-12T22:59:25Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4213_1.pdf: 810879 bytes, checksum: 494f37cacbca1065f735ae6b9f17c745 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2009 / A locomoção é uma importante função para os seres vivos. Alterações ambientais que ocorram durante o período crítico do desenvolvimento podem promover mudanças no desenvolvimento da atividade locomotora, trazendo prejuízos para o indivíduo. Trabalhos que utilizam a análise automática de comportamentos são de grande importância para o estudo da locomoção. Dentre os sistemas que podem influenciar o desenvolvimento da atividade locomotora, encontra-se o sistema serotoninérgico. Sugere-se que sua atuação seja intermediada via receptores 5-HT1A. Esta dissertação teve como objetivo estudar as repercussões da manipulação farmacológica, crônica ou aguda, com agonista parcial 5-HT1A, sobre a atividade locomotora em ratos. No primeiro estudo, foi desenvolvido um sistema automático de análise da atividade locomotora de pequenos animais, avaliados em um campo aberto. Este sistema permite estudar a atividade locomotora e evidenciar se estimulações ambientais adversas podem promover alterações no padrão de locomoção. Deste sistema, são extraídos parâmetros de distância percorrida, velocidade média, potência média, tempo de imobilidade, número de paradas, tempo de permanência nas áreas do campo e relação tempo de imobilidade/número de parada. Sua validação ocorreu a partir a análise do desenvolvimento da locomoção em ratos normais. Foram utilizados 19 ratos Wistar machos, avaliados no 8º, 14º, 17º, 21º, 30º e 60º dia pós-natal, durante 2 minutos. O sistema mostrouse capaz de extrair eficazmente os parâmetros desejados. Dessa forma, foi possível observar modificações no padrão de locomoção dos animais, devido ao seu desenvolvimento. No segundo estudo, buspirona foi administrada cronicamente, 1º ao 21º dia de vida pós-natal, via subcutânea, nas doses de 2,5 (n=13), 5 (n=13) e 10 (n=13) mg/Kg, em ratos. Nos animais controle, foi administrada salina (n=14). Foram utilizados 53 ratos Wistar machos. O sistema utilizado, as idades e parâmetros avaliados foram os mesmos do primeiro estudo. O tratamento neonatal reduziu a potência média, aos 60 dias, em todas as doses utilizadas. Também alterou a evolução da característica de número de paradas e relação tempo de imobilidade/número de parada, nas doses mais baixas, durante o desenvolvimento. Nos mesmos animais, submetidos à manipulação neonatal, foi realizada aplicação aguda de buspirona (5mg/Kg), aos 70 dias, e, 30 minutos após a administração, a locomoção avaliada durante 10 minutos. Em todos os animais, ocorreu diminuição da atividade locomotora, indicando um possível efeito sedativo da droga. Notavelmente, observou-se redução da distância percorrida e do número de paradas, e aumento no tempo de imobilidade. Entretanto, o grupo que recebeu a dose mais alta de buspirona durante o aleitamento, a redução da distância percorrida foi menor. Em resumo, a manipulação neonatal com buspirona altera alguns parâmetros da atividade locomotora. A administração aguda de buspirona ocasiona redução da locomoção. Porém, em menor intensidade nos animais tratados com a maior dose do fármaco, durante o aleitamento, sugerindo ocorrência do fenômeno da programação