Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Leptospirosis is a zoonosis of global public health importance and can affect all groups of vertebrates, including reptiles. These animals can play a role in the epidemiological cycle of the disease spreading and keeping the causative agent in the environment. Leptospirosis is little known in snakes and this study was designed to cover the gaps in the occurrence of the disease in these animals. The occurrence of anti-Leptospira spp. antibodies in rattlesnakes Crotalus durissus collilineatus kept in captivity was evaluated and the most common serotypes in these animals were determined using the Microscopic Agglutination Test (MAT). Changes in concentrations of plasma biochemical constituents in positive snakes were also evaluated, depending on the antibody titre presented at MAT. Almost 90% of the rattlesnakes used in this study were positive to the serological test and the most common serotypes were Javanica, Andamana and Patoc. The most common titres were 25 and 50, but there were titres as high as 1600. Captive snakes can act as important sources of leptospira infection for humans and so it is critical that the disease is recognized and controlled. Although apparently healthy, alterations in biochemical parameters indicated inflammation and infection in animals with low antibody titres. Rattlesnakes with high titres showed signs of severe kidney damage and liver disease, which are common in leptospirosis. The biochemical assessment of positive MAT reptiles may be important to diagnose the infection in these animals. / A leptospirose é uma zoonose de importância em saúde pública global e pode acometer praticamente todos os grupos de vertebrados, inclusive répteis. Esses animais podem atuar no ciclo epidemiológico da doença mantendo e disseminando o agente causador no ambiente. A leptospirose é pouco conhecida em serpentes e, por isso, objetivou-se estudar a ocorrência da doença nesses animais. Para isso, foi avaliada a ocorrência de anticorpos anti-Leptospira spp. em Crotalus durissus collilineatus mantidas em cativeiro e as sorovariedades mais frequentes nesses animais, utilizando o teste de Soroaglutinação Microscópica (SAM). Também foram avaliadas as alterações nas concentrações de constituintes bioquímicos plasmáticos nas serpentes reagentes, relacionadas com o título de anticorpos apresentado na SAM. Quase 90% das cascavéis utilizadas nesse estudo foram reagentes no teste sorológico com triagem de 1:25 e os sorovares mais frequentes foram Javanica, Andamana e Patoc. Os títulos mais frequentes foram 25 e 50, mas houve títulos de até 1600. Apesar de aparentemente saudáveis, a avaliação dos parâmetros bioquímicos indicou inflamação e infecção mesmo nos animais com títulos de anticorpos considerados baixos para mamíferos (≤50). As cascavéis com títulos altos apresentaram quadros mais graves que aquelas com títulos menores, sugestivos de lesão renal grave e indícios de doença hepática, que são lesões características da leptospirose. Serpentes de cativeiro podem atuar como fontes de infecção de leptospiras para humanos e outros animais e por isso, é fundamental que a doença seja conhecida e controlada em criadouros. A avaliação bioquímica de répteis reagentes no teste sorológico pode ser importante para o diagnóstico da infecção por Leptospira spp. nesses animais. / Mestre em Ciências Veterinárias

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / A insuficiÃncia renal aguda à uma das complicaÃÃes mais freqÃentes nos envenenamentos ofÃdicos. Contudo, a sua patogÃnese permanece obscura. Em nossos estudos foram avaliados os efeitos renais causados pelas miotoxinas purificadas dos venenos das serpentes Bothrops jararacussu (Bthtx I, Lys 49 e Bthtx II, Asp 49) e Bothrops moojeni (BmTx I, Lys 49), assim como pelas lectinas dos venenos de Bothrops moojeni (BmLec) e Bothrops jararacussu (BJcuL). Tentando avaliar o mecanismo envolvido nos efeitos renais das substÃncias acima mencionadas, foram testados os efeitos da indometacina, um bloqueador inespecÃfico de ciclooxigenase. Adicionalmente, foram avaliados os efeitos inibitÃrios do Tezosentan, um bloqueador de receptor de endotelina, nos efeitos renais causados pela miotoxina I da serpente Bothrops moojeni. Para tanto, as miotoxinas, na dosagem de 5Âg/mL, ou as lectinas, na dosagem de 10Âg/mL foram adicionadas 30 minutos depois do inÃcio dos experimentos. Contudo, a indometacina e o tezosentan foram adicionados no sistema de perfusÃo sempre no inÃcio de cada experimento na dosagem de 10Âg/mL. Os efeitos renais foram comparados com um grupo controle, onde os rins foram perfundidos somente com a soluÃÃo de Krebs-Henseleit modificada. Bthtx I, BthtxII e BmLec aumentaram a pressÃo de perfusÃo (C120= 110,28  3,09, Bthtx I120 = 171,20  6,3 *, Bthtx II120 = 175,50  7,20 * e BmLec120 = 152,50  2,10 *), a resistÃncia vascular renal (C120= 5,46  0,54, Bthtx I120= 8,62  0,37 *, Bthtx II120= 8,90  0,36 * e BmLec120= 7,77  0,30*), o fluxo urinÃrio (C120= 0,143  0,008, Bthtx I120= 0,326  0,048*, e Bthtx II120= 0,373  0,085*, BmLec120= 0,085  0,007* ), o ritmo de filtraÃÃo glomerular (C120= 0,678  0,065, Bthtx I120= 0,855  0,133 *, Bthtx II120= 1,224  0,282*, BmLec120=1,037  0,055*) e a excreÃÃo de sÃdio potÃssio e cloreto (ENa+, EK+, ECl-). PorÃm, diminuÃram os percentuais dos transportes tubulares de sÃdio (C120= 79,76  0,56, Bthtx I120= 62,23  4,12*, Bthtx II120= 70,96  2,93* e BmLec60= 77,25  1,36*) e potÃssio (C60= 66,38  3,31, Bthtx I60= 55,79  5,57 *, Bthtx II60= 50,86  6,16* e BmLec60= 59,78  3,49). A indometacina foi capaz de bloquear os efeitos causados pela miotoxina I da B. jararacussu e lectina da B. moojeni, mas reverteu parcialmente os efeitos causados pelas miotoxinas II e lectina da B. jararacussu e miotoxina I da B. moojeni. O tezosentan, por sua vez, bloqueou os efeitos causados pela miotoxina I da B. moojeni. Foi concluÃdo que prostaglandinas estÃo envolvidas nas alteraÃÃes renais promovidas pelas substÃncias isoladas das serpentes B. jararacussu e B. moojeni, enquanto que endotelina seria o principal mediador nas alteraÃÃes renais causadas pela miotoxina I da B. moojeni. / Acute renal failure is one of the most common systemic complications after snakebite. However, its pathogenesis remains obscure. In this study, we evaluated the renal effects of Bothrops jararacussu myotoxins I and II (Bthtx-I Lys 49 and BthtxII, Asp 49), Bothrops moojeni myotoxin I and the lectins from Bothrops moojeni and Bothrops jararacussu. Attempting to investigate the mechanisms involved in the renal effects of the mentioned toxins, we tested indomethacin, an unespecific cyclooxigenase inhibitor. Additionally, tezosentan, an endothelin receptor blocker, was used to evaluate the role of endothelin in the renal effects of Bothrops moojeni myotoxin I. All myotoxins (5 Âg/mL) and lectins (10Âg /mL) were added to the perfusion system 30 min after the beginning of each perfusion. Indomethacin (10Âg/mL) and tezosentan (10 Âg /mL) were always added 30 minutes before the tested substances. The renal effects were compared against a control group, where kidneys were perfused only with the modified Krebs-Henseleit solution. Myotoxins from Bothrops jararacussu and the lectin from Bothrops moojeni increased the perfusion pressure (C120= 110.28  3.09, Bthtx I120= 171.20  6.3 * ,Bthtx II120= 175.50  7.20 * and BmLec120= 152.50  2.10 *), the renal vascular resistance (C120= 5.46  0.54, Bthtx I120= 8.62  0.37 *, Bthtx II120= 8.90  0.36 * and BmLec120= 7.77  0.30*), the urinary flow (C120= 0.143  0.008, Bthtx I120= 0.326  0.048*, and Bthtx II120= 0.373  0.085* ), the glomerular filtration rate (C120= 0.678  0.065, Bthtx I120= 0.855  0.133 *, Bthtx II120= 1.224  0.282* and BmLec120= 1.037  0.055*) and the sodium, potassium and chloride excretion. On the other hand, the same substances decreased the percent of renal tubular transport of sodium (C120= 79.76  0.56, Bthtx I120= 62.23  4.12*, Bthtx II120= 70.96  2.93* and BmLec60= 77.25  1.36*), potassium (C60= 66.38  3.31, Bthtx I60= 55.79  5.57 *, Bthtx II60= 50.86  6.16* and BmLec60= 59.78  3.49*). Indomethacin inhibited the renal effects induced by Bothrops jararacussu myotoxin I and Bothrops moojeni lectin, but partially blocked the effects promoted by myotoxin II and the lectin of Bothrops jararacussu, and the effects of myotoxin I of Bothrops moojeni. Tezosentan inhibited the renal effects induced by B. moojeni myotoxin I. In conclusion, prostaglandins are involved in the renal alterations induced by myotoxins and lectins purified from the snake venoms of Bothrops jararacussu and Bothrops moojeni. In addition, endothelin is the main mediator of the renal alterations promoted by Bothrops moojeni myotoxin I

Os colubrídeos tem sido responsáveis por diversos acidentes graves, inclusive fatais, em seres humanos por todo o mundo. No Hospital Vital Brazil do Instituto Butantan, em São Paulo, 40% dos acidentes ofídicos registrados são causados por serpentes consideradas não-peçonhentas. Dentre estas, 97,3% pertencem à família Colubridae, onde 54,5% apresentam dentição áglifa e 42,8% dentição opistóglifa. Contudo, alguns acidentes envolvendo os colubrídeos opistóglifos podem desencadear manifestações clínicas semelhante ao acidente botrópico. Este fato tem causado muitas discussões, pois devido a um diagnóstico errôneo ou pela gravidade do acidente, muitas vezes é administrado o soro anti-botrópico, que em muitos casos pode ser ineficaz ou até prejudicial ao paciente. Vale ressaltar que raros são os estudos relacionados ao aparelho de \"veneno\" dos colubrídeos. Deste modo, tivemos como objetivo estudar as características anatômicas, morfológicas e ultra-estruturais da glândula de Duvernoy de seis espécies de colubrídeos opistóglifos. São eles, Philodryas olfersii e Philodryas patagoniensis da Tribo Philodryadini, Oxyrhopus guibei e Phimophis guerrini da Tribo Pseudoboini e Thamnodynastes strigatus e Tomodon dorsatus da Tribo Tachymenini. As glândulas de Duvernoy das espécies em questão foram analisadas macroscopicamente para descrição das características anatômicas. Foram então, fixadas em líquido de Bouin para posterior processamento histológico para análise morfológica e histoquímica. Para o estudo ultra-estrutural, as glândulas de Duvernoy foram fixadas em glutaraldeído 2,0% em tampão cacodilato 1,0M (pH 7,3) para posterior preparação de acordo com o protocolo pré-estabelecido. Os resultados obtidos mostraram que a referida glândula apresenta duas porções bem distintas, sendo a glândula supra-labial e a glândula de Duvernoy propriamente dita, as quais variam de forma e tamanho segundo a espécie. A glândula de Duvernoy é constituída basicamente por túbulos secretores e ductos excretores. As células dos túbulos secretores podem produzir substâncias de diferentes composições químicas, dependendo da espécie. Os resultados histoquímicos mostraram que a maioria das espécies analisadas apresenta uma glândula de natureza seromucosa, e apenas uma espécie teve a glândula de Duvernoy classificada como mucoserosa. Os grânulos de secreção presentes no citoplasma das células secretoras, observados nas eletromicrografias, corroboram os resultados histoquímicos, já que a eletrondensidade dos mesmos caracteriza a natureza das células. A função da glândula de Duvernoy está diretamente relacionada ao hábito alimentar destas serpentes e ao modo pelo qual subjugam as suas presas. As serpentes que apresentam a glândula de Duvernoy com características mucoserosas subjugam as suas presas por constricção. Já as espécies que possuem a glândula de Duvernoy com natureza seromucosa utilizam o processo de envenenamento das presas para se alimentarem. Deste modo, as serpentes garantem o sucesso na imobilização das presas, impedindo que estas utilizem táticas defensivas perigosas à serpente, independente do uso da constricção. / The colubrids have often been responsible for severe accidents, sometimes fatal for humans, all over the world. In the Hospital Vital Brazil of the Institute Butantan, in São Paulo, 40% of the snakebite registered is caused by serpents that are considered no poisonous. Among these, 97.3% belong to Colubridae family with 54.5% presenting aglyphous dentition and 42.8%, opisthoglyphous dentition. However, some accidents that involve the opisthoglyphous colubrids can break out clinic manifestation similar to the botropic accident. This fact has caused many debates, because due to an erroneous diagnosis or to the gravity of the accident, very often it is administered the anti-botropic serum, which in many cases may be ineffective or even harmful for the patient. It is important to mention that rare are the studies related to the venon-delivery-system of the colubrids. Thus, we propose to study the anatomical, morphological, histochemical and ultra structural characteristics of the Duvernoy´s gland of six species of opisthoglyphous colubrids. They are Philodryas olfersii and Philodryas patagoniensis of Tribe Philodryadini, Oxyrhopus guibei and Phimophis guerrini of Tribe Pseudoboini and Thamnodynastes strigatus and Tomodon dorsatus of Tribe Tachymenini. The Duvernoy´s glands of the species in question were analyzed macroscopically for description of the anatomical characteristics. They were then fixed in Bouin´s liquid for posterior histological procedures for morphologic and histochemical analysis. For the ultra structural study, the Duvernoy´s glands were fixed in glutaraldehyde 2.0% in buffer cacodylate 1.0 M (pH 7.3) for further preparation according to the established protocol. The results showed that the above-mentioned gland presents two well distinct portions, the salivary supralabial gland and the Duvernoy´s gland itself, with diversified form and size according to the species. The Duvernoy´s gland is formed by secretory tubules and excretory ducts. The secretory tubules cells may produce substances of different chemical compositions according to the specie. The histochemical results showed that the majority of the analyzed species present a gland of seromucous type, and only one species has the Duvernoy´s gland classified as mucoserous. The secretion granules present in the cytoplasm of the secretory cells observed in the eletronmicrographics corroborate the histochemical results, since the electron density itself characterizes the cells. The function of the Duvernoy´s gland is directly related to the feeding habit of these serpents and to the way they subjugate preys. The serpents that present the Duvernoy´s gland with mucoserous characteristics subjugate their preys by constriction. On the other hand, the species that have the Duvernoy´s gland of seromucous type use the prey poisoning for feeding. Therefore, the serpents guarantee the success of the immobilization of preys, impeding them to use dangerous defensive tactics against the snake, independently of the use of the constriction.

O estudo das temperaturas preferenciais e comportamento termofílico é essencial na compreensão da termobiologia das serpentes, todavia, a maioria dos trabalhos tem focado somente os animais diurnos e de clima temperado e pouco se sabe a respeito das serpentes noturnas tropicais e sub-tropicais. O presente estudo utilizou uma arena com gradiente térmico monitorada por vídeo para mensurar o intervalo térmico preferencial procurado durante os períodos de atividade e inatividade (Tset) e a resposta termofílica pós-prandial frente a diferentes quantidades de ingesta em 29 serpentes Bothrops moojeni . Os resultados obtidos mostraram que o intervalo térmico preferencial de B.moojeni diferiu conforme o fotoperíodo (20,93°C a 22,20°C durante o dia e 22,81°C a 24,42°C durante a noite) e foi similar a outros intervalos encontrados para outras serpentes crotalinae. Os dados mostraram que há uma correlação inversa entre intensidade da resposta termofílica pós-prandial e quantidade de alimento ingerido, uma vez que os animais alimentados com uma porção correspondente a 10% de seu peso corporal apresentaram maior resposta termofílica pós-prandial quando comparados àqueles que foram alimentados com porções maiores (20 e 40% do peso corporal). Esta diferença parece estar relacionada com a diminuição de mobilidade e a maior SDA (Specific Dynamic Action) nos animais que ingeriram a maior quantidade de alimento. As serpentes crotalinae são tidas como animais preponderantemente noturnos sendo que a maioria dos dados a respeito dessas atividades foram obtidos em pesquisas de campo. A detecção do período de atividade, assim como o conhecimento de como o estado nutricional influencia a taxa de trânsito, são extremamente importantes na compreensão da ecofisiologia destes animais. No estudo foram utilizadas 29 exemplares de Bothrops moojeni, monitoradas quanto ao horário e o tempo de deslocamento durante o jejum e nos 5 dias subseqüentes a alimentação. A alimentação das serpentes variou entre 10, 20 e 40% do peso da própria serpente. Os resultados confirmaram Bothrops moojeni como espécie essencialmente noturna, sendo que a atividade foi aumentada em mais de 45 vezes durante o período. O pico de atividade ocorreu entre as 19:00 e 20:00 horas, não havendo diferença estatística entre machos e fêmeas. Com relação à atividade pós-prandial foi notada diferença estatística nas taxas de deslocamento dos animais que comeram as maiores proporções (20-40%). Os resultados obtidos corroboram com os dados prévios obtidos em estudos de campo que pontuam Bothrops moojeni como um animal noturno e de baixo grau de mobilidade. A interação entre a quantidade de alimento ingerido pela serpente, o balanço energético e o grau de mobilidade dos animais é bastante complexa e discutível. As serpentes foram consideradas por muito tempo como incapazes de gerar calor através de seu metabolismo aeróbico, à exceção das pythons no choco. Entretanto, estudos recentes mostraram que algumas espécies são capazes de aumentar a temperatura corporal sem recorrer a fontes externas de calor ou contrações musculares. Esta termogênese ocorre devido aos enormes níveis metabólicos atingidos durante a digestão (Specific Dynamic Action - SDA). Em geral as serpentes têm um baixo custo energético de manutenção e a maioria das espécies é capaz de permanecer longo período em jejum e depois se alimentar de uma grande ingesta. A energia produzida durante a digestão destas grandes refeições pode gerar um significativo aumento na temperatura corpórea dos animais. O presente estudo investigou a termogênese pós-prandial em Bothrops moojeni, através de imagens térmicas tomadas em um ambiente termoestável a 30°C. As 12 serpentes foram divididas em 2 grupos e acompanhadas pelas 72 horas após ingerirem refeições equivalentes a 10-60 20% e 30-40% de seu próprio peso, respectivamente. Os resultados mostraram que a resposta termogênica pós-prandial levou a um aumento de 1,6°C da temperatura da pele das serpentes. O pico térmico ocorreu entre 33 e 36 horas após a alimentação em ambos os grupos e a duração da termogênese variou conforme o tamanho da ingesta. Os resultados mostraram uma alta correlação entre a termogênese pós-prandial e a SDA das serpentes. O aumento significativo da temperatura corporal e a sua manutenção por certo tempo sugerem que estes animais são capazes de manter altas taxas metabólica durante a digestão independente da temperatura do ambiente. / The study of the preferred temperatures and thermophilic behavior is essential to understand the snakes thermal biology. Although some studies have been reported, most of them are focused in temperate and diurnal species. Thus, little is known about the tropical and sub-tropical nocturnal species. In the present study , a video-monitored arena with a thermal gradient was used to investigate the preferred thermal range during activity and inactivity (Tset) and the post-prandial thermophilic response after different levels of food intake in 29 Brazilian lanceheads (Bothrops moojeni). The results showed that the preferred thermal range of B.moojeni changes depending on the photoperiod (20.93°C to 22.20°C in daytime and 22.81°C to 24.42°C in night time), being similar to other crotalinae snakes. Our data suggests that there is an inverse correlation between the post-prandial thermophilic response intensity and food intake, as animals fed with a portion corresponding to 10% of its bodyweight presented a higher thermophilic response in comparison to those who were fed with larger portions (20 and 40% of bodyweight). This difference may be related to the decreased mobility and increased SDA (Specific Dynamic Action) in animals that consumed the largest amount of food. Crotalinae are considered to be mainly nocturnal and most of the gathered data on these snakes came from field work. The knowledge of activity pattern and how nutritional status affect wandering rate are determinant to understand the ecophysiology of the snakes. In this study the daily activity pattern was followed in 29 subjects of the lancehead Bothrops moojeni in order to record displacement rate in fasting and feed snakes for five days after feeding meal of 10, 20 and 40% of their own body weight. The results show that B.moojeni is prevalently nocturnal, and activity increased 45 times at night, peaking between 19 to 20 h, in both males and females. Activity level changed significantly after feeding in snakes which ate a larger meal (20-40%). The results confirm previous field data for B.moojeni as a nocturnal species with low mobility. The complex interactions between the amount of food taken by the snake, energetic balance and mobility are discussed. Snakes were for long considered incapable to generate heat fueled by aerobic metabolism, except for brooding pythons. However, recent studies proved that some species are able to elevate their body temperature without muscle contraction or external heat source. Such thermogenic capacity is supported by high metabolic rate that follows digestion and assimilation of food (Specific Dynamic Action - SDA). Snakes have a low maintenance cost and most species can stand for long fasting time, particularly after ingesting a great meal. The energy produced during digestion of such meal can generate significant increase in body temperature. The present study investigated thermogenic response after feeding in the Brazilian lancehead, Bothrops moojeni, using thermal images taken in temperature controlled environment at 30°C. The 12 snakes were divided into two groups and followed for 72 hours after fed a meal representing 10-20% and 30-40% of their body weight, respectively. The results showed thermogenic digestive response with an increase up to 1.6 °C of skin temperature. Thermal heat production peak occurred between 33 to 36 hours after feeding in both groups, and the duration of thermogeny varied with the meal size. The result showed high correlation between thermogenic data and SDA in snakes. The significant increase of body temperature after feeding and its maintenance for extended time suggest a physiological advantage to keep high metabolic rate despite of environmental temperature.

Mudanças ontogenéticas na dieta e na composição do veneno são características freqüentemente observadas em espécies do gênero Bothrops. A serpente Bothrops insularis é endêmica da Ilha da Queimada Grande, litoral Sul de São Paulo, cuja separação do continente ocorreu há aproximadamente 11 000 anos, após a última glaciação ao final do Pleistoceno. Não existem mamíferos na ilha e esta espécie alimenta-se, na fase juvenil, de animais ectotérmicos (artrópodes e anfíbios) e de endotérmicos (aves migratórias) na fase adulta. A população apresenta anormalidades sexuais evidenciadas por machos, fêmeas e intersexos (fêmeas que apresentam hemipênis rudimentares, porém não funcionais). Três filhotes de B. insularis (1 macho e 2 intersexos) nascidos em cativeiro, de uma fêmea intersexo, foram mantidos no Laboratório de Herpetologia do Instituto Butantan, seus venenos extraídos (idades de 10, 15, 20, 24,33 e 41 meses) e liofilizados para utilização em ensaios subseqüentes. Utilizou-se também o veneno da mãe da ninhada e um pool de venenos de exemplares adultos. A análise eletroforética (SDS-PAGE 7,5- 17,5%) evidenciou similaridades entre as amostras de venenos nas diferentes fases de vida dos animais. A análise densitométrica revelou um aumento pronunciado da expressão de uma banda protéica na faixa de massa molecular de 24kDa. O teor protéico dos venenos variou de 618 a 1189 g de proteína por mg de veneno. Os resultados experimentais sugerem que fosfolipases A2 e hialuronidases não têm expressão pronunciada na fase adulta dos animais (41 meses). Os venenos foram capazes de hidrolisar as cadeias A e B do fibrinogênio e promover áreas de lise em placa de fibrina, independentemente da idade analisada. O progressivo aumento de intensidade da atividade hemorrágica e proteólise em zimografia sugere uma regulação da expressão de proteases, sobretudo de metaloproteases (uma característica importante, uma vez que esta espécie apresenta uma alteração ontogenética de dieta, alimentando-se de presas maiores quando os animais se tornam adultos). Por outro lado, a atividade proteolítica sobre a caseína não apresentou um aumento ontogenético significativo. Ensaios com inibidores de proteases, mostraram que EDTA e ortofenantrolina (10 mM) diminuíram expressivamente a atividade gelatinolítica em zimografia, reduziram a área de lise em placa de fibrina e inibiram a clivagem das cadeias A e Bdo fibrinogênio. Os venenos dos animais jovens (15 meses) mostraram-se mais ativos nos ensaios de coagulação sanguínea (Dose Mínima Coagulante sobre o Plasma e ativação dos fatores X e II da cascata de coagulação sanguínea) em relação ao dos adultos (41 meses). Observou-se uma maior toxicidade dos venenos para abelhas e aves, contudo não foi possível estabelecer diretamente uma relação ontogenética. Para mamíferos (camundongos) os venenos do Intersexo 1 e do Macho (41 meses) apresentaram menores valores de DL50 em relação aos demais. A miotoxicidade das amostras dos venenos mostrou-se acentuada na fase inicial de vida dos animais (15 meses). Foram evidenciadas variações individuais ao longo das análises efetuadas neste trabalho, contudo a variabilidade ontogenética mostrou-se presente na maioria dos ensaios realizados. A seletividade do veneno para presas locais foi demonstrada pela eficácia do veneno para artrópodes e aves, em detrimento a mamíferos. Desta forma, conclui-se que o veneno possui peculiaridades na sua composição que favorecem a alimentação desta serpente em seu habitat insular e, embora haja uma marcante alteração de dieta durante a ontogênese desta espécie, a toxicidade do veneno para os itens alimentares locais é uma característica presente durante toda a vida dos animais. / Ontogenetic changes on diet and venom composition are a common feature among Bothrops species. Bothrops insularis is an endemic snake of Queimada Grande Island, South coast of são Paulo State, which mainland separation has ocurred for about 11 000 years ago, after the last glaciation, at late Pleistocene. There are no mammals on the Island and B .insularis feed on ectothermic preys when young (arthropods and amphibians) and endothermic (migratory birds) when becomes adult. Sexual abnormalities are often verified on B. insularis population with males, females and intersexes existence (females with non-functional rudimentary hemypenis). Three B. insularis siblings (1 male and 2 intersexes) borned on captivity, from an Intersex female, were kept in Herpetology Laboratory on Instituto Butantan. Venoms were extracted (10, 15, 20, 24, 33 and 41 months of animal’s age) and lyophilized for subsequent assays. Offspring’s mother venom and a pool of B. insularis adult venoms were also analyzed as a comparison parameter. Electrophoretic profiles (SDS-PAGE 7,5- 17,5%) showed similar patterns among samples at distinct animal’s ages. Densitometric analysis showed increase of expression of proteic band at 24 kDa of molecular mass range. Protein content varies of 618 up to 1189 g of protein per mg of venom. Experimental results suggests that phosfolipases A2 and hyaluronidases do not have an increase on its expression on adult phase (41 months) of B .insularis. Venoms were able to hydrolyze A and B fibrinogen chains and to promote lysis on fibrin plate, regardless of animal’s age. The increase of haemorrhagic activity and proteolysis on zimography profiles, suggests a regulation of protease expression, mainly of metaloproteases (an important characteristic, since this species has an ontogenetic shift on its diet, feeding on larger preys when becomes adult). On the other hand, proteolytic activity upon casein did not show significative ontogenetic variability. Protease inhibithors assays showed that EDTA and orthophenantrolin (10 mM) expressively reduced gelatinolytic activity on zimography, fibrin plate lysis area, and were able to prevent A and B fibrinogen chains cleavage. Venoms from young animals (15 months) had higher coagulant activity than adult ones (Minimum Coagulant Dose upon human Plasma and activation of blood coagulation cascade factors X and II). Venom toxicity was higher for bees (just-emerged Apis mellifera) and chicks (one day age Bovans white chicks), although a direct relation with ontogeny was not established. Intersex 1 and male venoms (41 months) showed the lower LD50 values for mammals (mice). Prominent myotoxicity was found for young venoms (15 months). Experimental results showed individual variability, and, mainly, a conspicuous ontogenetic variability. Venom selectivity towards local preys was demonstrated by the expressive toxicity upon arthropods and chicks, in comparison to mammals. Our results show that Bothrops insularis venom had peculiarities on its composition that support snake’s diet on its insular habitat and, although a clearly ontogenetic diet change occurs on this species, venom toxicity towards local preys is a characteristic present during all lifetime of this species.

Made available in DSpace on 2016-08-10T10:55:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Nicole Cristina Lopes Dutra.pdf: 1587085 bytes, checksum: 7c8f39f69da6456b027da52bf00a0794 (MD5) Previous issue date: 2006-11-29 / Studies that concern Cerrado (Brazilian s Savannah) fauna are important as we consider the elevated rate of destruction of its landscapes in the last decades. Bothrops moojeni is one of the species of vipers that occur on the Cerrado area and its venom has shown great applicability in health. In the last years, molecular markers have helped in researches that aim to assess the genetic variability. In the present work, we perform the characterization of 5 populations of Caiçaca (Bothrops moojeni) using RAPD (Random Amplified Polimorphyc DNA) markers and also used a scienciometric approach to highlight the importance of this species in health in the site Institute for Scientific Information (ISI), using the method General Search with the key words: serpente , Bothrops and Bothrops moojeni . The obtained Data were used to estimate the magnitude and distribution of variability within and among the groups using AMOVA. Aiming to analyze the patterns of spatial variation patterns, Pearson relation coefficient (r) was estimated between the matrixes of genetic distances and geographic among the populations. With the 5 primers were obtained 59 loci, from which 81 porcent (48) were polymorphic, ranging between 35% and 69% in the groups. The value of f ST obtained with AMOVA was equal to 0,13 (P smaller 0,0001 - 10000 permutations). Thus, it was possible to observe that Caiçaca populations studied presented a low level of genetic variability (He = 0,19) and most of the genetic variation is within the populations, what might indicate that is already occurring a reduction of the rate of gene flow between the populations. Considering the geographic area studied (lager distance was equal to 851,83 km), populations that are geographically near presented a high level of genetic diversity and the genetic variability is not spatially structured. The populations of Bothrops moojeni studied presented low levels of Genetic diversity for the RAPD loci evaluated. Genetic variability is not spatially structured. Concerning scienciometry analyses, the following key-words: serpente , Bothrops and Bothrops moojeni most of the studies concerning zoology (51 porcent), Pharmacology and Pharmacy (32 porcent) and Biochemistry and Molecular Biology (23 porcent), there was no paper published till the present date, that aimed to evaluate genetic variability in this species, as well as in the genus Bothrops. We recommend a wide-ranging study to evaluate genetic variability in this species due to its importance to conservation of the ecosystem from which it belong as well due to the great interest in health. / Estudos sobre a fauna do Cerrado são importantes considerando a alta taxa de destruição das suas paisagens naturais durante as últimas décadas. Estudos com marcadores moleculares se fazem importantes, pois auxiliam nas pesquisas que pretendem acessar a variabilidade genética para fins de conservação. Entre as espécies do Cerrado, Bothrops moojeni é uma serpente que vem demonstrando grande aplicabilidade na saúde. Neste sentido, o objetivo deste trabalho foi caracterizar a variabilidade genética de cinco populações de Caiçaca (Bothrops moojeni Hoge, 1966) a partir de marcadores RAPD (Random Amplified Polimorphyc DNA), bem como realizar um levantamento cienciométrico da importância da espécie para a área da saúde no sítio Institute for Scientific Information (ISI), utilizando o método GeneralSearch com a palavras chaves: serpentes, Bothrops e Bothrops moojeni. Os dados gerados com marcadores RAPD foram utilizados para avaliar a magnitude e a distribuição da variabilidade entre e dentro das populações por meio da Análise de Variância Molecular (AMOVA). A fim de se avaliar os padrões de variação espacial, foi estimado o coeficiente de correlação de Pearson (r) entre a matriz de distâncias genéticas e geográficas entre as populações. Com base nos cinco primers foram obtidos 59 locos, dos quais 81 por cento (48) foram polimórficos, variando entre 35 por cento e 69 por cento nas populações. O valor do Fí ST obtido pela AMOVA foi igual a 0,13 (P menor 0,0001 - 10000 permutações). Foi possível observar que as populações de Caiçaca estudadas apresentam baixos níveis de variabilidade genética (He = 0,19) para os locos RAPD estudados, sendo que a maior parte da variação encontra-se dentro das populações, o que poderia indicar que já está ocorrendo uma redução na taxa de fluxo gênico entre as populações. Considerando a escala geográfica em estudo (maior distância igual a 851,83 km), populações que estão próximas geograficamente apresentam uma considerável divergência genética e a variabilidade genética não se encontra estruturada espacialmente. No que diz respeito a cienciometria, nas palavras-chave serpente , Bothrops e Bothrops moojeni a maioria dos estudos foi sobre zoologia (51 por cento), Farmacologia e Farmácia (32 por cento) e Bioquímica e Biologia Molecular (23 por cento), não existindo nenhum trabalho publicado, até a presente data, que avalie a variabilidade genética desta espécie. Deve-se proceder com uma análise mais sistemática e de maior magnitude para avaliar a variabilidade genética desta espécie que além de sua importância para a conservação é uma espécie de muito interesse para a área de saúde.

Submitted by admin tede (tede@pucgoias.edu.br) on 2016-08-17T14:16:30Z No. of bitstreams: 1 SILVIO JOSE DE QUEIROZ.pdf: 8869081 bytes, checksum: 28d26b617f56db3485bb151beb37b8ad (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-17T14:16:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 SILVIO JOSE DE QUEIROZ.pdf: 8869081 bytes, checksum: 28d26b617f56db3485bb151beb37b8ad (MD5) Previous issue date: 2010-08-09 / Infections caused by multiresistant microorganisms are associated with bacteria acquired in the hospital environment. The selective pressure of antimicrobials is an important factor in the selection and spread of resistance genes in the environment. The use of different molecules produced by living organisms has demonstrated activity against microorganisms. OBJECTIVES: To assess the activity of the crude venom of Bothrops moojeni on gram-negative bacteria producing and non producing metallo- -lactamase and -lactamases with wide spectrum, to identify component (s) of the poison with activity against gram-negative bacteria producing and non producing metallo- -lactamase and -lactamases with wide spectrum and to identify the antibacterial activity of crude venom of the snake B. moojeni in gram negative non-fermentative and fermentative glucose producing different enzymes to degrade -lactams. METHODOLOGY: The poison used was extracted from snake B. moojeni kept on the collection of the Center for Biological Studies and Research (CEPB) Catholic University of Goias Micro-organisms used in this study were obtained from the American Type Culture Collection and Bank of Microorganisms, Laboratory of Clinical Microbiology and MSc in Environmental and Health Sciences at the Catholic University of Goias, including Acinetobacter baumannii (blaIMP2), Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853), Pseudomonas aeruginosa blaIMP1, blaVIM1, blaVIM2, blaSPM1 and producing carbapenemase No. 278 bank) Escherichia coli (ATCC 25922 and ATCC 35 218), Klebisiella pneumoniae (ATCC 700603). The test was conducted with the crude venom applied on disk diffusion in different dilutions. Protein concetration was determined for each venon sample, buy using the Bradford. RESULTS: The microbiological test showed that the venom demonstrated antimicrobial activity, both for producing bacteria and non-producing -lactamase and -lactamases bactérias with wide spectrum and that this activity is probably due to the action of L-amino acid oxidase. CONCLUSIONS: Different concentrations of crude venom of the snake B. moojeni inhibited growth of gram-negative bactéria producing ond non producing metallobeta- lactamase and extende spectrum beta-lactamese ond the size of the allo of growth inhibited diminished when decreased concentration of the crud venon and consequentley the decrese of concentration of protein, demonstrating that the effect of crude venom was dose dependent. / As infecções causadas por microrganismos multirresistentes estão associadas com bactérias adquiridas no meio ambiente hospitalar. A pressão seletiva dos antimicrobianos é um importante fator de seleção e disseminação dos genes de resistência no meio ambiente. O uso de moléculas produzidas por diferentes seres vivos tem demonstrado atividade contra microrganismos. OBJETIVOS: Avaliar a atividade do veneno bruto da Bothrps moojeni sobre bactérias gram-negativas produtoras e não produtoras de metalo- -lactamase e de -lactamases de espectro ampliado, identificar o(s) componente(s) do veneno com atividade contra bactérias gram-negativas produtoras e não produtoras de metalo- -lactamase e -lactamases de espectro ampliado e identificar a atividade antibacteriana do veneno bruto da serpente B. moojeni em bactérias gram negativas fermentadoras e não fermentadoras de glicose produtoras de diferentes enzimas degradadoras de -lactâmicos. METODOLOGIA: O veneno utilizado foi extraído das serpentes B. moojeni, mantidas no serpentário do Centro de Estudos e Pesquisas Biológicas (CEPB) da Pontifícia Universidade Católica de Goiás. Os microrganismos utilizados neste estudo foram obtidos da “American Type Culture Collection” e do Banco de Microrganismos do Laboratório de Microbiologia Clínica e do Mestrado em Ciências Ambientais e Saúde da Pontifícia Universidade Católica de Goiás, sendo Acinetobacter baumannii (blaIMP2), Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853), Pseudomonas aeruginosa blaIMP1, blaVIM1, blaVIM2, blaSPM1 e produtora de carbapenemase banco n° 278) Escherichia. coli (ATCC 25922 e ATCC 35218), Klebisiella pneumoniae (ATCC 700603). O ensaio foi realizado com o veneno bruto aplicado sobre disco de difusão em diferentes diluições. A partir das amostras obtidas, foi realizada a dosagem de proteínas utilizando o método descrito por Bradford. RESULTADOS: O teste microbiológico mostrou que o veneno bruto possui atividade antimicrobiana, tanto para bactérias produtoras como para as não produtoras de metalo- -lactamase e -lactamases de espectro ampliado e que esta atividade se deve possivelmente pela ação da L-aminoácido oxidase. CONCLUSÕES: Diferentes concetrações diluições do veneno bruto da serpente B. moojeni inibiram o crescimento de bactérias gram-negativas produtoras e não produtoras de metalo- -lactamases e -lactamases de espectro ampliado e que o tamanho do alo de inibição do crescimento bacteriano diminuiu na medida em que diminui a concentração do veneno bruto e consequentemente à quantidade de proteínas, demonstrando que o veneno bruto foi dose dependente.

A reprodução é custosa para ambos os sexos, mas a magnitude dos gastos e sua relação com o sucesso reprodutivo diferem entre os gêneros. Os custos reprodutivos são divididos em duas categorias: custos de sobrevivência e custos energéticos. Crotalus durissus possui um ciclo reprodutivo sazonal com cópula ocorrendo no outono e a parturição no final no verão. Os machos competem por fêmeas receptivas. A inferência de custos reprodutivos associados à sobrevivência foi realizada por meio de levantamentos das taxas de atividade entre machos e fêmeas. A variação da quantidade de gordura abdominal e dos substratos energéticos do fígado e dos rins foi avaliada para mensurar o custo energético. Os resultados sugerem que para fêmeas a reprodução exige um alto investimento energético evidenciado pelos maiores níveis de gordura abdominal e de lipídios no fígado durante a fase vitelogênica e o padrão de atividade diferenciada entre machos e fêmeas sugere que a estação reprodutiva embute um custo de sobrevivência maior para os machos. / Reproduction is costly for both sexes, but the magnitude of spending and its relation to reproductive success differ between genders. Reproductive costs are divided into two categories: survival costs and energy costs. Crotalus durissus has a seasonal reproductive cycle with mating occurring in the fall and parturition in late summer. The males compete for receptive females. The inference of survival costs was accomplished through surveys of activity rates between males and females. The variation of the amount of abdominal fat and energy substrates in liver and kidneys was evaluated to measure the energy cost. The results suggest that for females reproduction requires a high energy investment - evidenced by the higher levels of abdominal fat and lipids in the liver during vitellogenic phase and activity patterns differentiated between males and females suggests that the reproductive season embeds a higher cost of survival for males.

As serpentes do gênero Crotalus contribuem com 7,7% dos acidentes ofídicos anuais no Brasil e apresentam a letalidade mais elevada. O veneno crotálico apresenta como componente majoritário a crotoxina, formada pelas sub-unidades fosfolipase A2 (PLA2) e crotapotina, responsável pelos efeitos neurotóxicos e miotóxicos observados nas vítimas de acidente. Nós resolvemos investigar novas estratégias de imunização no sentido de direcionar a produção de anticorpos contra as frações de maior toxicidade do veneno. Utilizamos cavalos como animais soroprodutores, divididos em três grupos experimentais, Animais foram imunizados com veneno de C. d. terrificus, crotoxina, ou PLA2. Os plasmas obtidos foram analisados por testes padrões contra diferentes antígenos crotálicos e comparados com antivenenos produzidos pelo Instituto Butantan. Os resultados obtidos mostram o reconhecimento cruzado do veneno das diferentes Crotalus por todos os antivenenos utilizados, e uma maior especificidade dos plasmas produzidos contra crotoxina e PLA2 pelos componentes de maior toxicidade. / The serpents from Crotalus genus contribute with 7.7% of the annual ophidic accidents in Brazil, and have the highest lethality. The crotalic venom shows crotoxin, formed by the sub-units phospholipase A2 (PLA2) and crotapotin, as a major component and responsible for the neurotoxic and myotoxic effects shown by the snakebite victims. We decided to investigate new immunizations strategies focusing in orientating the immune response against the most toxic fractions of the venom. We used horses as serum producers, divided in three groups. Animals were immunized with either C. d. terrificus venom, crotoxin or PLA2. The plasmas obtained were analyzed by standart immunochemical tests against different crotalic antigens and compared with antivenoms produced by Instituto Butantan. The results show cross-recognition of all Crotalus venoms by the antivenoms, and a higher specificity from the plasmas produced against crotoxin and PLA2 for the most toxic components.

A despeito da elevada diversidade de serpentes na região da Serra do Mar, o estado de conservação dessa fauna permanece praticamente desconhecido. A escassez de conhecimento sobre as populações dessas serpentes torna difícil avaliar sua vulnerabilidade à extinção de acordo com os critérios da IUCN. Neste estudo, avaliamos a vulnerabilidade à extinção de 76 serpentes que ocorrem na Serra do Mar produzindo índices de vulnerabilidade natural (IVN) a partir de oito fatores intrínsecos que supostamente afetam sua sobrevivência (tamanho do corpo, tamanho da ninhada, grau de especialização alimentar, grau de especialização em hábitat, área da distribuição geográfica, amplitude climática da distribuição, amplitude altitudinal da distribuição e capacidade de colonizar áreas alteradas). O IVN variou de 0,5 para Philodryas patagoniensis e Thamnodynastes strigatus até 2,9 para Corallus cropanii. Dentre as 76 espécies estudadas, 13 (17,1%) apresentaram IVN entre 0 e 1, 48 (63,2%) apresentaram IVN entre 1,1 e 2 e 15 (19,7%) espécies apresentaram IVN entre 2,1 e 3. As espécies pertencentes ao primeiro grupo apresentam distribuição bastante ampla e quase todas ocorrem em mais de nove ecorregiões e apresentam amplitude latitudinal superior a 20º. Todas as espécies pertencentes ao último grupo apresentam distribuição restrita, nenhuma delas ocorre em mais de três ecorregiões diferentes e quase todas estão restritas a menos de 5º de latutide. Os fatores relacionados à distribuição geográfica e à capacidade de persistir em áreas alteradas parecem ser os mais importantes na determinação da vulnerabilidade à extinção das serpentes da Serra do Mar. Encontramos resultados satisfatórios ao comparar nosso ranqueamento com as listas vermelhas globais e regionais pré-existentes. Os escores das espécies para os fatores considerados mostraram sinal filogenético, provavelmente porque os fatores biológicos tendem a ser conservados. Comparando as diferentes linhagens filogenéticas, Viperidae, Dipsadinae, Echinantherini e Pseudoboini parecem ser as mais vulneráveis à extinção, e especial atenção deve ser dada a essas linhagens em futuros programas de conservação. / Despite the high diversity of snakes in the Serra do Mar region of southeastern Brazil, the conservation status of this fauna is virtually unknown. The scarcity of information on their populations makes it difficult to evaluate their vulnerability to extinction using the IUCN categories and criteria. We evaluated the vulnerability to extinction of 76 species that occur in the Serra do Mar region by producing indices of natural vulnerability (INV) based on eight intrinsic factors which supposedly affect the survival of snakes (body size, litter size, degree of food specialization, degree of habitat specialization, distribution area, climatic range of distribution, altitudinal range, and capacity to persist in human disturbed areas). The INV varied from 0.5 for Philodryas patagoniensis and Thamnodynastes strigatus to 2.9 for Corallus cropanii. Among the 76 species studied, 13 (17.1%) showed INV from 0 and 1, 48 (63.2%) showed INV from 1.1 to 2, and 15 (19.7%) species showed INV from 2.1 to 3. Species in the first group showed large distribution ranges and almost all occurred in more than nine WWF ecoregions and showed latitudinal ranges (= climatic ranges) above 20º. Among the species in the third group (higher INV) all showed small distribution ranges, all occur in less than four WWF ecoregions, and almost all are restricted to less than 5º of latutide. Factors related to geographic distribution and capacity to persist in human disturbed areas seem to be more important in determining vulnerability of extinction in the snakes of Serra do Mar. Our vulnerability ranking compared reasonably well with the global and regional red lists. The scores of species for the factors used showed phylogenetic signal, probably because biological factors tend to be conserved. Comparing INV among the lineages which compose the Serra do Mar snake fauna, we found that Viperidae, Dipsadinae, Echinantherini, and Pseudoboini tended to be more vulnerable than the remaining lineages; thus, especial attention should be devoted to these groups in future conservation programs.